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报告附录 微生物
肥料 和生物农药的主要技术指标出版时间:2012;108杂菌率(%)≤5.015.02.0有效期(月)≥3612表6 固氮菌成品技术指标(NY 411—2000)项目指标外观、气味浅黄或灰白色混浊液体,稍有沉淀,微臭或无臭味有效活菌数(ml)有机磷细菌肥料 ≥2.0无机磷细菌肥料 ≥1.5杂菌率(%)≤5pH值4.5~8.0有效期(月)≥6表7 液体磷细菌肥料 技术指标(NY 412—2000)项目指标外观、气味粉末状、松散、湿润、无霉菌块、无霉味、微臭水分(%)25~50有效活菌数(亿个/g)有机磷细菌肥料 ≥1.5无机磷细菌肥料 ≥1.0细度(粒径)通过孔径0.20mm标准筛的筛余物≤10%pH值6.0~7.5杂菌率(%)≤10有效期(月)≥6表8 固体磷细菌(粉状)肥料技术指标(NY 412—2000)项目指标外观、气味松散、黑色或灰色颗粒,微臭水分(%)≤10有效活菌数(亿个/g)有机磷细菌肥料 ≥0.5无机磷细菌肥料 ≥0.5表9 固体磷细菌(颗粒状)肥料技术指标8.5细度筛余物(%)孔径0.18mm—≤20—孔径5.0~2.5mm——≤10有效期内有效活菌数[108/ml(g)]51.21.0杂菌率(%)≤5.015.015.0有效期(月)≥366表10 硅酸盐细菌肥料 成品技术指标 -
报告筛选拮抗性酵母防治哈密瓜
细菌 性果斑病的研究出版时间:2007哈密瓜细菌性果斑病(Bacterial Fruit Blotch,BFB)是由Acidovorax avenae subsp.citrullii,(Aac)引起的一种毁灭性的瓜类病害,该病菌已经成为了全球瓜类生产中巨大的威胁。中国至今已有12个省相继有该病的报道。目前,该病因其无免疫品种和特效的化学农药,轮作倒茬存在局限性等原因,有效防治该病仍然是一个难题。近几年已有人报道利用生物防治BFB来改变目前防治现状,但多以生防细菌为主(卢云等,2007;Fessehaie和 Walcott,2004),利用拮抗酵母防治瓜类细菌性果斑病国内外未见有报道。2006~2007年,本实验组从湖北武汉、新疆石河子、河南信阳等地采集不同植物叶片、土壤样品进行了酵母菌的分离,获得了463菌株。通过含菌平板测定拮抗性,表明有29个酵母菌菌株对Aac有拮抗作用,占总分离酵母菌株的6.3%,抑菌圈半径大于5mm的有13个。在温室盆栽试验中,将其中的13个酵母菌菌株的菌体悬浮液(1.2×108菌体/ml)分别喷雾接种于哈密瓜苗四叶期的植株上,24h后接种Aac菌体悬浮液(1.0×108cfu/ml),处理后的瓜苗放入温棚内,棚内温度为(32±2)℃,相对湿度大于90%。接种5天后调查各处理哈密瓜苗的发病情况。试验结果表明:菌株Y06109、Y07039和Y0709在哈密瓜子叶或第一片真叶上对BFB具有显著的防治效果。3株酵母菌处理的哈密瓜子叶发病率分别为33%、33%和76%,对照为96%,防效分别为65%、65%和21%。第一真叶发病率分别为14%、17%和10%,对照为96%,防效分别为80%、84%和90%。这些研究结果表明,拮抗酵母的一些种类或菌株对BFB具有一定的生防潜力。对于筛选出的具有抑菌作用的酵母菌株,将进一步测定其田间防病效果,并对其显著防效的拮抗酵母进行种类鉴定。 -
报告杨树内生
细菌 的分离鉴定及对杨树水泡溃疡病菌的抑制作用出版时间:2007杨树水泡溃疡病(Botryosphaeria dothidea)是为害杨树的重要病害,影响植株生长甚至导致死亡,近年来随着杨树栽植面积的快速增大,杨树水泡溃疡病发病益显严重。目前对该病的防治对策以壮树防病结合化学药剂防治为主,鉴于人类对环境质量要求的提高,生物防治日益受到人们关注。植物内生细菌是一种重要的生物农药来源,其不仅可以抑制病原微生物的生长,还可以促进寄主的生长。因此,越来越受到植物病理学家的重视。目前国内外已有从不同植物中获得内生菌的报道,但杨树内生菌尚未见报道。我们尝试从杨树上获得内生细菌,为用于杨树病害的生物防治奠定基础。杨树水泡溃疡病( Botryosphaeria dothidea)害标本由本实验室保存。分离材料取自山东省泰安市区和市郊绿化或用材杨树,将带杨树水泡溃疡病病斑的组织用常规稀释方法[1],分离内生细菌。对分离得到的内生细菌进行划线培养,挑取单菌落纯化保存。将分离获得内生菌PE0704进行菌落形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色[2],并对PE0704的16SrDNA序列进行扩增、测序和序列分析。取PE0704菌体,以对峙培养法测定其对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长的抑制作用,采用凹穴法测定其对病原菌孢子萌发的抑制作用。设置不同的发酵条件,对PE0704进行发酵培养,测定发酵液对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。不同的分离方法对杨树内生细菌的分离效果不同。尤其是组织块的破碎程度以及经消毒、破碎后的组织块是否振荡处理,对内生细菌的分离影响很大。改进的分离方法如下:首先将组织块用75%的酒精、5%的NaClO进行表面消毒,研碎,然后在25℃下振荡培养2h,取培养液,按常规稀释法稀释、涂板,置28℃下培养。利用该方法,从杨树中获得37个内生细菌菌株。经初步筛选得到了对杨树水泡溃疡病菌抑菌活性较好的内生细菌菌株,其中菌株PE0704抑菌效果表现最好。将PE0704在NB平板培养基上划线培养,培养24h时菌落表现为白色、椭圆形、边缘整齐、中央凹陷、表面干燥、粗糙、不透明。该菌体短棒形,两端钝圆,产芽孢、中生、周生鞭毛、革兰氏染色为阳性。对PE0704的16SrDNA进行扩增、测序,共获得该菌16SrDNA的全长为1500bp的部分序列,该序列通过NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)进行BLAST比对,与已报道的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的16SrDNA序列相似度高,其中与枯草芽孢杆菌(B.subtilis)(AB016721.1)等的相似度高达97%以上。结合该菌的菌体形态和染色反应结果,参照《常见细菌系统手册》(第1版)[3],基本确定该菌株为B.subtilis。PE0704的菌体对杨树水泡溃疡病菌的菌丝生长有较强的抑制作用,能够明显抑制菌落生长直径,并导致菌丝形态发生了显著变化。镜检发现,其菌丝细胞粗短,扭曲;菌丝顶端和中部细胞膨大成球形或椭圆形;随着时间的延长畸变程度加重,菌丝出现断裂、变成空泡。PE0704的菌体能够抑制杨树水泡溃疡病病菌的孢子萌发,并引起萌发孢子的芽管畸变、其菌丝畸形。对PE0704进行不同条件的发酵培养,结果发现,PE0704的发酵液能够抑制杨树水泡溃疡病菌的菌丝生长和孢子萌发,并引起菌丝形态异常。在几种供试培养基中,在BPY中培养获得的发酵液的抑制作用最强,振荡培养72h的发酵液开始表现明显抑菌作用,96h的抑菌作用最强。杨树中存在着对杨树水泡溃疡病菌具有抑制作用的内生细菌,本试验从杨树中获得了37个内生细菌菌株,部分具有抑菌活性。通过菌落形态观察,革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色,并经16SrDNA序列分析,确定获得的内生菌株PE0704为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。PE0704菌的菌体和发酵滤液对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长和孢子萌发都有较好的抑制效果,能够抑制其菌落生长,并引起菌丝形态产生畸形,能够抑制病原菌孢子萌发,并引起其芽管畸形。鉴于PE0704对杨树水泡溃疡病菌的良好作用效果,可进一步开展菌株拮抗作用机理和发酵条件的研究,为生物农药的研发提供重要依据。 -
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报告黄瓜内生
细菌 对黄瓜灰霉病的生物防治研究?? 基金项目:教育部长江学者和创新团队发展计划资助项目(No.200558);杨凌农业科技开发基金项目(2004JA08)。出版时间:2007灰霉病是保护地蔬菜栽培中危害十分严重的病害,传统的化学防治造成了严重的农药残留和环境污染。应用微生物进行生物防治能够克服上述缺点,是一种安全、有效和环保的方法。本研究旨在从黄瓜植株内分离、筛选能够抑制灰霉病的拮抗细菌,并测定拮抗菌株在不同处理下对灰霉病的防治作用。主要结果如下:通过平板对峙培养筛选出8株对黄瓜灰霉病菌具有较强拮抗作用的细菌,再对这8株菌发酵滤液的抑菌活性进行测定,选出抑制效果最好的两个菌株B12和B13,抑制率分别为84.0%和81.8%。在离体叶片上,B12、B13发酵滤液对灰霉病菌的扩展均有较强的抑制作用,抑制率分别为83.2%和81.4%。两菌株活性产物可引起病原菌菌丝扭曲,菌丝膨大成串珠状分枝,顶端膨胀后细胞壁破裂,原生质外溢,产生溶菌作用。B12、B13发酵液对于灰霉病菌孢子的萌发具有强烈的抑制作用。在孢子萌发试验中,经B12、B13发酵液处理的孢子萌发率仅分别为5.5%和8.6%,滤液对孢子萌发的抑制效果与发酵液相近。将两菌的发酵滤液置于不同的温度和pH环境下处理,当温度在100℃以下、pH值在6~9时,滤液的抑菌效果表现出较强的稳定性。在温室试验中,两菌发酵液对灰霉病有较好的预防效果,B12、B13的保护防效分别为70.5% 和68.7%,治疗防效分别为51.2%和47.8%。