Study on Interspecial Transmission of Sclerotinia sclerotiorum Debilitation hyphen Associated RNA virus (SsDRV) to S. nivalis

Study on Interspecial Transmission of Sclerotinia sclerotiorum Debilitation hyphen Associated RNA virus (SsDRV) to S. nivalis

真菌病毒缺乏体外传播途径，其传播仅能依赖寄主的繁殖进行垂直传播或通过菌株间菌丝融合（hyphal anastomosis）进行水平传播；多数感染子囊菌的真菌病毒不能通过有性繁殖传播，受菌丝不融合的限制，真菌病毒不能在与寄主菌株处于不同营养体亲和型的菌株间扩散。近年来，有些研究论文报道，感染不同种属，甚至不同纲真菌的病毒具有高度的等同性（identity），表明真菌病毒可能存在一种潜在的有别于菌丝融合的传播途径。

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）弱毒株EP-1PN分离自黑龙江佳木斯茄子病残体上，较正常菌株生长速度慢，菌落异常扩展，菌核产量低，致病性弱。前期研究表明EP-1PN菌株中含有3条dsRNA片段，大小分别为7.4kb、6.4kb和1.0kb，证实6.4 kb dsRNA片段与核盘菌Ep-1PN菌株毒力衰退紧密相关；对该dsRNA片段进行了cDNA克隆和序列分析，证明其可能为真菌病毒SsDRV（核盘菌致病力衰退相关RNA病毒）的复制体形式。雪腐核盘菌（S.nivalis）是核盘菌的近缘种，其Let-19菌株分离自湖北省神农架发病莴苣。在PDA培养皿中，将核盘菌与雪腐核盘菌对峙培养，两菌落接触后，形成典型的坏死带（菌丝不融合所致）。我们将Ep-1PN菌株与Let-19菌株于20℃对峙培养，当两菌落接触后，自Let-19菌株的菌落边缘挑取菌丝尖端移至新的PDA平皿中培养，发现Let-19菌株继代培养物的菌落形态发生了显著的变化，它们较正常的Let-19菌株生长慢，菌落异常扩展、致病力较弱，这些继代培养物的表型与Ep-1PN菌株的类似。将这些继代培养物与Let-19菌株对峙培养，同样可以促使Let-19菌株的表型发生显著变化。表明与Ep-1PN菌株接触后，Let-19菌株获得了具传染性的衰退因子。采用纤维素粉CF-11吸附的方法自Let-19菌株的继代培养物的菌丝中提取获得了大小为7.6kb和6.4kb的dsRNA片段。经过Northern杂交验证，证实其中6.4kb的片段为SsDRV的dsRNA。表明核盘菌Ep-1PN菌株中的SsDRV已经传染至雪腐核盘菌Let-19菌株。为了检测真菌病毒在跨种间传播的频率，我们将核盘菌Ep-1PN菌株与雪腐核盘菌Let-19菌株于PDA平皿上对峙培养，12天后在Let-19菌株的菌落边缘挑取4个菌丝块移至新的PDA平皿中培养，观察继代培养物的表型变化，若出现类似衰退症状的培养物，将用提取dsRNA的方法进一步鉴定和确认，只要4个继代培养物中出现1个感染SsDRV的培养物，即计算为传播成功。试验重复100次，共获得400个Let-19菌株的继代分离物。研究证实，在100个对峙培养的培养皿中，有29个培养皿发生了SsDRV成功传播的事件，即传播频率为29%。