Study on Inhabiting of Methanol Extracts from Stellera chamaejasme L.Against Botrytis cinerea Pers*

Study on Inhabiting of Methanol Extracts from Stellera chamaejasme L.Against Botrytis cinerea Pers*

番茄灰霉病（Botrytis cinerea Pers）是保护地番茄的重要病害之一，主要为害花和果实，尤以青果受害最重，大幅度降低番茄的产量和品质。近几年来，番茄灰霉病为害越来越严重，轻者减产10%～20%，重者达30%以上[1]，而病原物极易对化学农药产生抗药性，因此化学防治用药量大、防效差、污染重，严重威胁着人们的身体健康。植物源农药可在环境中迅速分解，在植物体内也几乎没有残留，是符合人们对绿色农产品要求的。

瑞香狼毒（Stellera chamejasme L.），又名断肠草、红狼毒，为瑞香科，狼毒属植物，是当前中国草地上危害较严重的毒草之一，但是瑞香狼毒又具有可利用的一面，其根是传统中药狼毒的基质，有逐水、祛痰、破积、杀虫之功效[2]。目前国内外对其化学成分、杀虫活性、抗癌活性都有了深入的研究和报道。有文献表明瑞香狼毒对于植物病原菌也有较好的抑制作用[3]。本试验就瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病抑制作用进行了室内测定，旨在为开发出一种经济，安全，有效的新型杀菌剂提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试样品 试验所用瑞香狼毒采自山西怀仁金沙滩，将采集的植物材料洗净后充分阴干，放入恒温箱内（40～45℃）烘干，粉碎后过60目筛备用。

1.1.2 供试菌种 番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers）均由山西农业大学农学院植物病理实验室提供。

1.2 试验方法

1.2.1 瑞香狼毒提取液的制备 称取瑞香狼毒根部粉末50g，装入500ml广口瓶内，加入干粉5倍量的有机溶剂甲醇浸泡3～5天后，过滤并浓缩至稠膏状。取适量瑞香狼毒甲醇提取物，加入少量甲醇溶解并配成60mg/ml溶液，备用。

1.2.2 抑菌活性测定 采用生长速率测定法[4～6]测定瑞香狼毒提取液对黄瓜枯萎病菌菌丝生长抑制作用，具体操作如下：取60mg/ml瑞香狼毒提取物溶液配制成60mg/ml，30mg/ml，15mg/ml，7.5mg/ml，3.75mg/ml的溶液，制作平板时，在一个培养皿中加入2ml，再加入13ml培养基，摇匀，凝固后即为全药平板培养基。每一处理做5个重复并标记；另取3个培养皿分别加入2ml蒸馏水、13ml PDA培养基作为对照。将供试菌种用6mm打孔器打出菌饼，用接种针小心地将供试菌饼置于平板培养基上（菌丝面朝下，每皿一块，放于中央），置光照培养箱中培养（上述一系列操作必须在严格无菌条件下进行）。48h后，用十字交叉法测每个菌落的直径（每一天测一次，连测两次），以下式求菌丝生长抑制率：

2 结果与分析

瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌作用结果如表1和表2。

浓度（mg/ml）72h96h菌落直径（cm）ColonyRadius抑制率（%）Inhabitingrate菌落直径（cm）ColonyRadius抑制率（%）Inhabitingrate81.8078.181.9579.4542.0374.002.2175.4923.0256.003.4756.3214.0337.644.5739.570.55.3713.276.3812.02CK6.107.17

表1 不同浓度瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用

Table 1 Inhabiting of the different concentration of the extracts of Stellera chamaejasme against Botrytis cinerea Pers

时间Time毒力方程RegressiveequationEC50?相关系数r95%置信限Confidencelevel72hY=4.5546+1.5754x1.920.97251.61～2.6896hY=4.5519+1.6433x1.870.96741.58～2.22

表2 瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌的毒力

Table 2 Virulence of the extracts of Stellera chamaejasme against Botrytis cinerea Pers

从表1可以看出，瑞香狼毒甲醇提取液对番茄灰霉病菌菌丝生长有一定的抑制作用，并且提取液浓度越大，抑菌作用越明显，即在5个不同浓度稀释液中，8mg/ml的效果最好，接近80%。从表1的数据可以看出：8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml的提取液对番茄灰霉病菌的抑菌率都在50%以上，1mg/ml、0.5mg/ml的提取液对番茄灰霉病菌的抑菌率在50%以下，这说明瑞香狼毒中含有的一些活性物质能够很好地抑制黄瓜枯萎病菌菌丝的生长。

从表2可以看出瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌的毒力EC50在72h、96h分别为1.92mg/ml、1.87mg/ml。

3 结论与讨论

本试验表明，瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病有一定程度的抑制作用，而且瑞香狼毒在我国资源丰富，有望开发成一种生物农药，具有良好的前景。

虽然本试验做出一定的结果，但是也有一些不足之处：（1）试验中只是做了室内测定，没有做室外试验，在室外是否也有如此好的效果不能确定；（2）试验中只做了生长速率法像其他方法，如孢子萌发法没有做，它对孢子有什么样的效果也不知道；（3）试验只对瑞香狼毒植株进行粗提取并不确定其有效的活性成分为什么物质。以上问题需在以后的实验中着手解决。

目前国内青海省天然草地上生长的瑞香狼毒面积达73.3万hm2，密度为每百平方米350株丛，最多可过1998～5000株丛[7]。海北洲海晏县青海湖乡每百平方米有狼毒400～1400株丛，盖度为20%～40%。另据不完全统计，内蒙古泽里木盟阿鲁旗已经形成了以瑞香狼毒为主要植物群落的草场约4万hm2，有瑞香狼毒生长的草场约13.3万hm2以上，占全旗104万hm2草场面积的28%。在内蒙古乌兰察布干草原，狼毒已成为退化草地的景观植物[8]。因此，在山坡或沟谷，劳力充足的地区，春秋季可进行人工采挖，收集瑞香狼毒的根，既可作到清除狼毒，保护草原，又可“化害为利”，获得经济效益和社会效益的双赢。