Toxicity Bioassay and Control Effects of Several Fungicides against Tomato Late Blight Caused by Phytophthora Infestans（Mont）De Bary

Toxicity Bioassay and Control Effects of Several Fungicides against Tomato Late Blight Caused by Phytophthora Infestans（Mont）De Bary

晚疫病是露地、保护地及南方山区蔬菜基地番茄的重要病害，由致病疫霉[Phytophthora infestans（Mont）De Bary]侵染所致，是一种毁灭性的世界性蔬菜病害[1]。南方4～5月，北方6～7月，南方山区7月前后的阴天多雨天气及保护地秋末和早春棚室温度达16℃时均易发生。病害流行性强，年度间病情差异大，一些地方称为“疫病”、“怪病”、“过火风”[2]。晚疫病在番茄的整个生育期均可发生，主要为害茎、叶和果实，发生普遍，蔓延速度快，严重田块可减产70%以上，甚至绝收，严重制约了番茄生产的进一步发展[3]。目前生产中存在的主要问题是选药不当、错过防治适期，致使该病蔓延成灾。鉴此，笔者征集了部分国内外杀菌剂品种，试图通过室内毒力测定和田间药效试验，筛选出对番茄晚疫病菌抑菌效果显著的杀菌剂，为田间防治番茄晚疫病提供参考。

1 材料和方法

1.1 供试材料

1.1.1 培养基和菌株 黑麦蔗糖琼脂培养基（Rye sucrose agar）用于番茄晚疫病菌的分离、培养及测定对杀菌剂的敏感性。配备抗菌素母液，称取2.0g氨比西林（氨苄青霉素ampicillin），1.0g制霉菌素（Nystatin）和0.2g利福霉素（利福平Rifamycin）加入到100ml二甲基亚砜中[DMSO，（CH3）2SO]；待基础培养基冷却至大约50℃，立即在每100ml培养基中加入1ml抗菌素母液。混匀，倒平皿。本研究是采用番茄晚疫病菌的菌株为F1。真菌菌株在PDA培养皿培养，在PDA试管斜面上保存。

1.1.2 杀菌剂 50%烯酰吗啉（dimethomorph）可湿性粉剂（德国巴斯夫股份有限公司生产）、25%甲霜灵（metalaxyl）可湿性粉剂（江苏宝灵化工股份有限公司生产）、64%杀毒矾（oxadixyl mancozeb）可湿性粉剂（瑞士先正达作物保护有限公司生产）和75%百菌清（chlorothalonil）可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司生产），72%霜脲·锰锌（mancozeb+cymoxanil）可湿性粉剂（北京华戎生物激素厂生产）。

1.1.3 供试作物和品种 番茄，品种为“合作903”。

1.2 供试方法

1.2.1 室内毒力测定 采用生长速率法[6]，将供试杀菌剂稀释成不同浓度梯度，浓度梯度由试验测定。最后计算抑制生长率，求出毒力回归方程，计算EC50和EC95。

根据预备试验结果，确定各个供试杀菌剂的系列剂量分别为：50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂和64%杀毒矾可湿性粉剂的浓度梯度均为10μg/ml，5μg/ml，2.5μg/ml，1.25μg/ml，0.63 μg/ml；75%百菌清可湿性粉剂100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml，72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的浓度梯度为25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、1.5625μg/ml。

各个杀菌剂的最高浓度配制方法分别为：50%烯酰吗啉可湿性粉剂称取1.0g溶于50ml水中，然后稀释100倍；25%甲霜灵可湿性粉剂称取1.0g溶于25ml水中，然后稀释100倍；64%杀毒矾可湿性粉剂称取1.0g溶于64ml水中，然后稀释100倍；75%百菌清可湿性粉剂称取1.0g溶于75ml水中，然后稀释10倍；72%霜脲·锰锌可湿性粉剂称取1.0g溶于72ml水中，然后稀释40倍。再倍半稀释至所需浓度。

用取液器量取上述配好的溶液（每个剂量）3ml，加入事先溶化好的27ml黑麦培养基，充分混匀后倒在3个直径为9cm的灭过菌的培养皿中，凝固后在培养皿正中间接入直径6mm的番茄晚疫病菌饼。以上操作均在无菌操作台进行。置（18±0.5）℃、光照14h和黑暗10h的培养箱培养。当空白对照菌落扩展到整个培养皿时，测量各皿的菌落直径，取平均值后计算抑制率（%）。生长抑制率（%）=[（A-B）-（C-B）]/（A-B）×100%，其中A为对照菌落直径，B为菌饼直径，C为处理菌落直径。将抑制率转化为几率值，将剂量取对数，算出剂量—反应曲线方程，进一步算出EC50值和EC95值。

1.2.2 田间药效试验 经室内毒力测定结果表明，25%甲霜灵WP，64%杀毒矾WP，50%烯酰吗啉WP室内测定的毒力均较高，为在田间进一步验证其防效，特进行田间药效试验。

试验地位于武汉市洪山区青菱乡长江村，近几年每年都有番茄晚疫病发生，所有试验小区的栽培条件均匀一致。于2006年5月13日、19日晚疫病发生初期喷雾施药，试验期间共施药两次，此时为番茄结果期。通过预备试验，设置杀菌剂浓度25%甲霜灵WP稀释800倍（每亩制剂量93.75g），64%杀毒矾WP稀释800倍（每亩制剂量93.75g），50%烯酰吗啉WP稀释3000倍（每亩制剂量25g），以75%百菌清WP稀释600倍（每亩制剂量125g）作为对照药剂，另设清水对照。小区面积15m2，4次重复，随机区组排列，用水量75kg/667m2。试验期间气温21.93～33.86℃。第2次施药后7天调查各处理发病情况，每小区按对角线5点取样，每点2株，每株分上、中、下共调查10片叶，以每株每一叶片上的病斑面积占整个叶面积的百分率来分级，计算病指与防效。分级标准：0级，无病斑；1级，病斑面积在5%以下；3级，病斑面积占整个叶面积的6%～10%；5级，病斑面积占整个叶面积11%～20%；7级，病斑面积占整个叶面积21%～50%；9级，病斑面积占整个叶面积50%以上[8]。

2 结果与分析

2.1 室内毒力测定

试验结果见表1。5种杀菌剂50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的EC50值分别为2.24μg/ml、1.83μg/ml、2.05μg/ml、21.33μg/ml和5.33μg/ml，EC95值分别为9.76μg/ml、7.76μg/ml、8.71μg/ml、85.60μg/ml和27.77μg/ml。按毒力高低排列分别为25%甲霜灵可湿性粉剂＞64%杀毒矾可湿性粉剂＞50%烯酰吗啉可湿性粉剂＞72%霜脲·锰锌可湿性粉剂＞75%百菌清可湿性粉剂。

25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、50%烯酰吗啉可湿性粉剂室内测定的毒力显著高于75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂，可以为田间防治番茄晚疫病提供一定依据。

杀菌剂剂量-反应曲线概率P值EC50（置信限）（μg/ml）EC95（置信限）（μg/ml）50%烯酰吗啉WPY=2.57x-0.900.242.24（1.99，2.53）9.76（7.87，12.91）25%甲霜灵WPY=2.62x-0.690.471.83（1.62，2.06）7.76（6.31，10.15）64%杀毒矾WPY=2.63x-0.820.312.05（1.82，2.32）8.71（7.06，11.41）75%百菌清WPY=2.72x-3.620.2221.33（19.05，23.94）85.60（69.82，111.11）72%霜脲·锰锌WPY=2.29x-1.670.205.33（4.67，6.07）27.77（21.77，38.20）

表1 5种杀菌剂对番茄晚疫病室内毒力测定结果

2.2 田间药效试验

试验结果见表2，两次施药后的病指和防效，64%杀毒矾WP 800倍液为8.9和75.1%，25%甲霜灵WP 800倍液为9.9和72.5%，50%烯酰吗啉WP 3000倍液为10.6和70.4%，3种杀菌剂对番茄晚疫病有较好的控制作用，均显著高于对照农药75%百菌清WP 600倍液的防效，其差异均达极显著水平，是防治番茄晚疫病的有效杀菌剂。

处理重复与防效ⅠⅡⅢⅣ平均防效（%）平均病指差异显著性5%1%64%杀毒矾WP800倍75.474.574.775.675.18.9aA25%甲霜灵WP800倍75.171.969.673.372.59.9ab50%烯酰吗啉WP3000倍70.870.669.670.870.410.6bA75百菌清WP600倍49.254.655.960.755.116.0cB

表2 几种杀菌剂对番茄晚疫病的防治效果

3 结论与讨论

室内毒力测定结果仅说明该杀菌剂对番茄晚疫病菌在离体条件下的直接活性，田间的防治效果受到的影响因素很多，因此，室内的毒力测定结果需要在田间做进一步验证。田间试验结果表明，64%杀毒矾WP 800倍液，25%甲霜灵WP 800倍液，50%烯酰吗啉WP 3000倍液3种杀菌剂田间防治番茄晚疫病均有较好的防治效果。这几种杀菌剂对番茄无不良反应，不产生药害，建议在田间推广使用，推荐剂量64%杀毒矾WP 62.5～75ml/667m2，25%甲霜灵WP 62.5～75ml/667m2，50%烯酰吗啉WP 16.7～20ml/667m2。

在实际应用中，应在病害流行之前，即发病初期开始用药，当气候条件有利于病害发生流行时，每隔7～10天后进行下一次施药，连续喷药2～3次，使用浓度以推荐浓度为宜，并注意不同杀菌剂的交替使用，以达到更好的防治效果。