RNA介导的病毒抗性主要是基于转录后基因沉默（Post-transcriptional gene silencing，PTGS）作用，在真菌、植物和动物中有PTGS相关的基因存在，这些基因沉默现象可统称为RNA干扰现象（RNA interference，RNAi）。许多证据表明，RNA沉默是由双链RNA（dsRNA）所引发的，且需要细胞内的多种酶参与。基于dsRNA在RNA沉默中的诱导作用，构建能转录后形成dsRNA的载体，转化植物后可有效诱发基因沉默。苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）是苹果、梨和多种核果类果树上发生普遍的一种病毒，可降低树势和影响果实品质。本研究根据GeneBank上已登陆的ACLSV序列设计合成了一对引物，根据载体pDS1301的限制性内切酶图谱，在引物的两端分别引入了两个不同的限制性内切酶识别位点。以总RNA或dsRNA为模板，通过RT-PCR扩增获得来源于砂梨的2个ACLSV分离物的大小为358bp的片段，该片段位于ACLSV cp基因高度变异区。将扩增片段克隆到载体pMD18-T，筛选阳性克隆后提取质粒，经Kpn I/Bgl II和Spe I/Sac I分别对目标片段及载体pDS1301酶切后，在T4连接酶作用下，将克隆片段以正向和反向方式分别插入植物表达载体pDS1301一内含子两端的多克隆位点，构建了可转录后形成dsRNA的载体pDR358-SMJ和pDR358-HH。将重组质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞后，采用叶盘共培养的方法转化5～6叶期的健康西方烟叶片，经潮霉素抗性筛选获得转基因西方烟植株。从获得的转基因西方烟植株提取总DNA，根据载体pDS1301多克隆位点两侧的序列合成特异引物，采用 PCR方法对这些植株进行了鉴定，已得到了转R358-SMJ的西方烟49株、转R358-HH的西方烟12株（图1）。图1 部分转基因西方烟的PCR鉴定

用24%腈苯唑悬浮剂、5%烯唑醇微乳剂、250g/L吡唑醚菌酯乳油、22.5%啶氧菌酯悬浮剂4种药剂进行香蕉叶斑病防治试验，以常用杀菌药剂30%苯醚甲环唑悬浮剂和250g/L丙环唑乳油作为比较，进行田间试验防效对比。结果表明，4种处理药剂对香蕉叶斑病具有良好防治效果，最高防效达到74.03%，药后21d防效最高仍达69.94%，其中22.5%啶氧菌酯SC和250g/L吡唑醚菌酯EC的药剂防效速效性和持效性均好；24%腈苯唑SC药剂防效速效性好，持效性次之；5%烯唑醇ME速效性好，但持效性稍差。4种药剂对作物发育无不良影响，可以在香蕉种植上作为轮换药剂推广使用。

哈密瓜细菌性果斑病（Bacterial Fruit Blotch，BFB）是由Acidovorax avenae subsp.citrullii，（Aac）引起的一种毁灭性的瓜类病害，该病菌已经成为了全球瓜类生产中巨大的威胁。中国至今已有12个省相继有该病的报道。目前，该病因其无免疫品种和特效的化学农药，轮作倒茬存在局限性等原因，有效防治该病仍然是一个难题。近几年已有人报道利用生物防治BFB来改变目前防治现状，但多以生防细菌为主（卢云等，2007；Fessehaie和 Walcott，2004），利用拮抗酵母防治瓜类细菌性果斑病国内外未见有报道。2006～2007年，本实验组从湖北武汉、新疆石河子、河南信阳等地采集不同植物叶片、土壤样品进行了酵母菌的分离，获得了463菌株。通过含菌平板测定拮抗性，表明有29个酵母菌菌株对Aac有拮抗作用，占总分离酵母菌株的6.3%，抑菌圈半径大于5mm的有13个。在温室盆栽试验中，将其中的13个酵母菌菌株的菌体悬浮液（1.2×108菌体/ml）分别喷雾接种于哈密瓜苗四叶期的植株上，24h后接种Aac菌体悬浮液（1.0×108cfu/ml），处理后的瓜苗放入温棚内，棚内温度为（32±2）℃，相对湿度大于90%。接种5天后调查各处理哈密瓜苗的发病情况。试验结果表明：菌株Y06109、Y07039和Y0709在哈密瓜子叶或第一片真叶上对BFB具有显著的防治效果。3株酵母菌处理的哈密瓜子叶发病率分别为33%、33%和76%，对照为96%，防效分别为65%、65%和21%。第一真叶发病率分别为14%、17%和10%，对照为96%，防效分别为80%、84%和90%。这些研究结果表明，拮抗酵母的一些种类或菌株对BFB具有一定的生防潜力。对于筛选出的具有抑菌作用的酵母菌株，将进一步测定其田间防病效果，并对其显著防效的拮抗酵母进行种类鉴定。

开封市为河南省重要的沿黄稻区，由于品质优经济效益高，种植面积逐年扩大。近年来，由于多种因素的影响，水稻条纹叶枯病在沿黄稻区发生普遍，为害逐年加重。一般发生田，病丛率在10%～30%，严重地块高达80%以上，造成水稻秧苗的“假枯心”或大片的“黄化枯死”，发生后期的“假白穗”，严重挫伤了稻农的种植积极性。为了从根本上探明水稻条纹叶枯病连年偏重发生的原因，确定最佳的防治时机及防治方法，有效指导群众开展科学防治，近年来，我们从水稻的苗床期开始开展了系统观察和防治对比试验，收到了显著的防治效果。据调查，近年来，开封市麦田一代灰飞虱发生数量较往年有明显上升，且带毒率高，是造成苗床秧苗“假枯心”主要根源，而大田分蘖期的感病以灰飞虱第1代成虫第2代若虫传毒为主，表现症状为“黄化枯死”。而穗期出现的“假白穗”是本地第3、第4代灰飞虱传毒所致，但以秧苗期、分蘖期发病最重，产量损失大。一般说来，第一代灰飞虱发生数量越大，传毒率高，条纹叶枯病的发病范围越广，发病程度越重，发病一定重，否则，较轻。从近几年开封市几种主要水稻品种发病情况调查对比看，不同的种植品种间病情有明显差异。主栽品种豫粳6号系列为高感病品种，其次为黄金晴。津稻1007、豫粳7号、郑稻18、原稻1号较抗条纹叶枯病。糯稻系列特别是米粒较长的糯稻品种一般不发病或很少发病。发病初期特别是秧苗期的发病没有引起群众的重视，即使个别群众及早用药，由于大面积用药偏晚而造成相互传毒危害，防治效果差。据系统观察，水稻从发芽到分蘖均为条纹叶枯病的易感病期。一般苗龄越小越易感病。近年来由于种种原因开封市黄河放水拖后，造成群众抢水播种，导致大部分地块的易感期与灰飞虱成虫转移高峰期相遇，大大增加了传毒感病的机会。从以上影响水稻条纹叶枯病的发生因素综合分析，制定了开封市的最佳防治时机：一是秧苗期即开封市的5月底至6月上旬，二是移栽后1周，即开封市的7月上中旬。防治水稻条纹叶枯病应采取“治虫防病”的防治策略，防治方法以农业防治为基础，以化学防治为主的“一看，二早，三连片”的防治方法，即系统观察、早防治、组织群众开展大面积连片统防，把灰飞虱消灭在产卵、传毒之前。3.1.1 种植抗（耐）病品种，以降低为害程度。3.1.2 由于稻飞虱有趋向狗尾草等杂草上取食产卵的习性。因此，及时铲除路边、田间杂草，可有效减少虫源，降低传毒机会。同时大田底肥要充足，特别是要增施磷钾肥，水要能灌能排，秧苗要合理密植，每墩最多3～4株，以确保秧苗的健壮生长，增强抗病能力。3.2.1 秧苗田 以治虫为主，选择用药为25%扑虱灵60g/667m2（噻嗪酮）或40%毒死蜱100ml/667m2或5%的锐劲特30～40ml/667m2，加入2%宁南霉素（菌克毒克）50～100g/667m2，分别在5月底至6月初、移栽前2～3天，各喷打一次，有显著的治秧苗、保本田的防治效果。3.2.2 大田防治 水稻移栽后7～10天，即水稻进入返苗后的分蘖期，一旦发现病叶要立即用上述药剂，同时加入促根、壮苗的植物生长调节剂如用天丰素、复硝酚钠等，以增强水稻的抗病虫能力。要每隔5～7天连防2～3次，可达到理想的防治效果。2006～2007年调查，系统防治田比群众自防田防效提高87.3%，病株率下降94.8%。