1.利用柑橘溃疡病菌细胞悬浮液免疫BALB/c小鼠，免疫后小鼠抗血清效价为2500倍左右。提取小鼠脾细胞mRNA，构建的单链抗体文库重链DNA大小为350bp左右，轻链为650bp左右，经linker（Gly3Ser）4连接后单链抗体DNA大小为1.2kb左右。将单链抗体文库DNA克隆到大肠杆菌JM109中，随机挑选了9个克隆子测序表明，9条单链抗体序列都是开放阅读框，其重链分别属于VH1、VH2、VH3基因家簇，轻链属于VKⅠ、VKⅢ、VKⅣ亚基因家簇。每个单链抗体的互补决定区（CDRs）都为不同的CDR，其中氨基酸序列变化多样，说明构建的单链抗体文库多样性好，适合于进一步进行单链抗体的筛选。2.采用核糖体展示技术对构建单链抗体文库进行了进化和富集。结果显示第一轮核糖体展示后回收的mRNA量非常少，分光光度计已测不出其浓度，反转录RCR后，扩增得到的条带非常弱，说明在原始未筛选的抗体文库中，能与柑橘溃疡病菌O-特异性脂多糖作用的单链抗体数量较少。经过三轮筛选后，得到的mRNA量逐渐增多，经RT-PCR后，产生了比较亮的扩增条带。说明在核糖体展示过程中，抗原阳性的单链抗体得到了富集。3.将未经过核糖体展示的原始单链抗体文库DNA和经过三轮展示的单链抗体文库DNA与噬菌体表达载体pCANTAB5E相连接后，转入大肠杆菌TG1中小量表达，表达后用间接ELISA测定单链抗体与抗原的结合活性。结果表明：从未经过筛选的原始单链抗体文库中随机挑取的60个克隆子表达产物与柑橘溃疡病菌O-特异性脂多糖几乎没有结合能力；而从经过三轮展示后的单链抗体文库中挑取的60个克隆子中有30%与柑橘溃疡病菌O-特异性脂多糖有较好的结合能力。从三轮展示后的单链抗体文库中共挑取了180个克隆子，用间接ELISA法初筛到60株抗原阳性的单链抗体；然后用生物分子相互作用技术（biosensor，biacore）对筛选的抗原阳性的单链抗体进行了复筛，筛选了3株高亲和力的单链抗体（GX13、GX44和GX95）以用于下一步的表达鉴定。4.将筛选的高亲和力抗原阳性的克隆子从大肠杆菌TG1中转入高表达菌株HB2151中进行可溶性表达。单链抗体表达后，其表达产物主要集中于细胞周质提取物中，具有抗体活性。将浓缩的周质提取物进行SDS-PAGE电泳，显示在32 kDa处有一蛋白条带产生。将表达产物纯化后进行SDS-PAGE电泳显示，在32 kDa处有单一蛋白条带产生。为了进一步验证表达的蛋白即目的蛋白，将表达产物进行了Western blot 杂交，结果显示，与纯化后的电泳结果一致，在32 kDa处有单一的条带产生，说明表达纯化的蛋白即目的蛋白。5.将筛选的抗原阳性单链抗体进行了特性研究。单链抗体（GX95、GX44、GX13）特异性强、亲和力高。其与柑橘溃疡病菌近源种Xanthomonas oryzae pv.oryzae（Xooc）；Xanthomonas campestris pv.campestri（Xcc）；Xanthomonas oryzae pv.oryzicola（Xoc）；及从柑橘叶片上分离的10种腐生黄单孢菌及Bacillus subtilis；E.coli 都没有交叉反应。Biacore 分析其亲和力表明，单链抗体GX95、GX44和GX13的亲和常数分别为1.98×1010 M-1、1.89×1010 M-1、3.43×1010 M-1。6.对筛选的单链抗体进行了测序。用DNAplot 软件分析单链抗体序列。结果表明：单链抗体 GX44 和GX13重链分别属于VH1基因家簇，GX95 重链属于VH3基因家簇；GX44和GX13轻链属于Vk IV亚基因家簇，GX95轻链属于Vk III亚基因家簇。用Vector NTI软件对筛选的单链抗体的序列同源性进行了分析，表明GX44 和GX13重链有89.67%的同源性，GX95和GX13具有92.53%的同源性。

研究苹果对炭疽菌叶枯病的抗性遗传规律，对筛选与炭疽菌叶枯病抗性基因连锁的分子标记，利用分子标记辅助育种有着极其重要的意义。4个杂交组合的F1 单株进行了苹果炭疽菌叶枯病的抗性鉴定，以期揭示苹果炭疽菌叶枯病的抗性遗传规律，为发掘与抗性基因紧密连锁的分子标记，开展苹果抗炭疽菌叶枯病分子育种奠定基础。这充分显示不同品种 （系） 对苹果炭疽菌叶枯病的抗性差异明显，遗传性对苹果炭疽菌叶枯病的抗性起着主导作用，同时也证实了上述品种 （系） 可以作为苹果炭疽叶枯病遗传规律研究的典型材料。综合上述研究结果，可以确定苹果对炭疽菌叶枯病的抗性由隐性单基因控制。综合不同杂交组合的亲本及后代对苹果炭疽菌叶枯病抗性的表型性状分析结果，可以假设本试验群体中，对苹果炭疽菌叶枯病表现为抗病的植株基因型为rr，感病植株为 RR或 Rr，并由此推测出供试亲本品种 （系） ‘

1.苹果(1)海棠果。抗旱、抗寒、抗涝，耐盐碱，嫁接亲和力强。（2）山丁子。抗寒、抗旱，耐瘠薄，但不耐盐碱，抗旱力不如海棠果。（3）楸子。抗旱、抗寒、抗涝，耐盐碱，对苹果绵蚜和根头癌病有抵抗能力。（4）新疆野苹果。抗旱、抗寒，耐盐碱，生长迅速，树体高大。2.常用矮化砧木（1）红花（沙果）。类型较多，结果早。（2）GM256。矮化中间砧木，抗寒，结果早。（3）M26。普通干藏法是指将经过干燥处理的种子，如苹果、梨、桃、山楂、枣、柿等装入麻袋、布袋等，然后放入通风、干燥、经过消毒的室内储藏。此方法适用于苹果、梨、桃、山楂等树种。2.嵌芽接嵌芽接(图2-3)是果树育苗中普遍采用的方法，特别是对皮层较薄的树种较为适用。葡萄、苹果矮化砧、紫藤、蔓越橘、蔓性蔷薇等常用此法繁殖。

严重时，被害的叶片只存叶脉，嫩枝光秃，伤口易感染溃疡病。【形态特征】 柑橘凤蝶幼虫体长4～5cm，黄绿色，后胸背两侧有眼斑；1龄幼虫黑色，刺毛多；2～4龄幼虫黑褐色，有白色斜带纹，虫体似鸟粪。主要为害桃、樱桃、李、杏、苹果、梨等果树，主要以幼虫为害叶片，可将叶片吃成孔洞或缺刻，甚至吃光，仅剩下叶柄，严重影响果树树势和果实产量。

苹果至今已有2000多年的栽培历史。苹果外观艳丽，营养丰富、供应期长、耐储藏，又有较广泛的加工用途，能满足人们对果品的多种需求。根系分布受砧木和土壤理化性状的影响。苹果根系一年有3次生长高峰。土壤含水量达到田间持水量的60%～80%最适合苹果根系生长。苹果的芽按性质分为叶芽、花芽两种。苹果的花芽为混合芽。叶芽萌发要求的平均温度为10℃左右。苹果是异花授粉植物，大部分品种自花不能结实。苹果一般有4次落花落果。第一次在末花期，称为落花。原因是未能受精的花。适宜的温度范围是年平均气温9～14℃,年平均温度在7.5～14℃的地区，都可以栽培苹果。苹果需要土壤深厚，排水良好，含丰富有机质，微酸性到微碱。适宜的pH值为5.7～7.5。苹果对土壤适应性较强，要求土层深厚、肥沃、富含有机质、排水良好的微酸性至中性地块建园。苹果植地选好后，在建园时，要重视修建排灌水沟，使到旱天有水可灌，雨季涝能排。

适用于枝梢具有棱角或沟纹的树种，如栗、枣等，桃、苹果、柑橘等果树也可用此法。国内果树病虫检疫对象有：柑橘黄龙病、葡萄根瘤蚜、苹果绵蚜和柑橘大实蝇等。苗木要进行消毒，以控制一般性病虫害。树种每公顷株数树种每公顷株数苹果（乔化砧）210～405柿210～660苹果（半矮化砧）660～1665苹果（矮化砧）1245～2250柑橘495～1110梨405～660荔枝180～330桃405～840如苹果、梨的枝果比一般为（3～4）∶1，弱树为（4～5）∶1。2.叶果比果树上叶片的总数（或总叶面积）与果实总个数的比值称叶果比。苹果矮化密植2～3年就开花结果，6～7年即可达到高产。

苹果腐烂病是我国北方苹果树的主要病害，除为害苹果及其苹果属植物外，也为害梨、桃、樱桃和梅等多种落叶果树。图22-1 苹果腐烂病为害枝及果实(1)田间诊断。苹果白粉病在我国苹果产区发生普遍，除了为害苹果外，还为害沙果、海棠、槟子和山定子等。图22-3 苹果白粉病为害叶片、嫩梢及果实(1)田间诊断。苹果白粉病为害苹果树的幼苗、嫩梢、叶片、芽、花及幼果。苹果红蜘蛛又名苹果全爪螨，分布全国，尤以北方发生普遍，为害苹果、月季、海棠、榆、梨、樱花等。(1)田间诊断。苹果红蜘蛛主要为害叶片。叶片受害初期出现白色小斑点，后期叶片苍白，光合作用减弱。图22-9 苹果绵蚜(2)防治方法。①冬季修剪。彻底刮除老树皮，修剪虫害枝条、树干，及时清除杂草和干枯树枝，破坏和消灭苹果绵蚜栖居、繁衍的场所。②人工繁殖释放或吸引苹果蚜小蜂、瓢虫、草蛉等天敌。埋土防寒是防止树枝抽条最可靠的保护措施。在土壤结冻前，在树干基部有害风向(一般是西北方向)处先垫好枕土，将幼树主干适当软化后使其缓慢弯曲，压倒在枕土上，然后培土压实，枝条应全部盖严不外露、不透风。

2.苹果花脸病（1）症状 果实着色前无明显变化，着色后果面散生许多近圆形不着色的黄绿斑块，不着色的地方果面凹陷。（2）病因 是一种病毒病，即苹果褪绿叶班病毒。3.苹果白粉病（1）症状 主要为害嫩枝、叶片、新梢，也可为害芽、花及幼果，病梢节间缩短，叶片细长，病芽瘦长尖细，鳞片松散。2.苹果绵蚜（1）危害 国内外重要的检疫对象，早期群集于苹果的枝干，枝条及根部，吸取汁液，被害部膨大或瘤，阻碍水分、养分的输导，严重时树体逐渐枯死，为害果实的萼洼及梗洼，影响果品质量。冬天低温时期（最好10℃以下），利用蝽象的假死性，摇动树枝，使成虫掉落地面而后捕杀。● 摘除卵块。3～5月成虫产卵期，采集卵块，集中消灭。● 药剂喷杀。在早上及傍晚飞集为害时用手捕捉、或利用金龟子的假死性，摇动树枝惊动跌落地面随即杀死。● 在傍晚时分成虫飞集为害时用敌百虫1 000倍或敌杀死3 000倍喷布树冠。