木霉菌（Trichoderma spp.）广泛存在于土壤及其他基物中，作为生防菌以其生长速度快，产孢量大、作用谱广、作用机制多样、能在植株、土壤中增殖并形成有效群体等诸多优势而备受关注。我们针对蔬菜上常见病害，从土壤中分离、筛选获得对蔬菜病原菌具有较强抑菌活性的绿色木霉菌株Tr9701，通过对其产几丁质酶活性等对其抗病机理进行了初探，同时试验了其在黄瓜叶片、根部的定殖能力，为今后开发可替代某些化学农药的微生物杀菌剂做了基础性工作，现将初步研究结果记述如下。1.1.1 供试菌株 绿色木霉Tr9701（Trichderma viride），由天津市植物保护研究所生防室筛选、鉴定。供试病原菌立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、番茄灰葡萄孢霉（Botrytis cinerea），由天津市植物保护研究所病害室分离、鉴定。1.2.1 绿色木霉菌制剂几丁质酶检测据Harman等的方法[1]，在胶体几丁质培养基中培养绿色木霉菌，进行产几丁质酶预试验，然后将绿色木霉菌分生孢子液接种到合成诱导液体培养基中诱发几丁质酶产生，以不加胶体几丁质为阳性对照，在28℃，150r/min振荡培养，连续提取培养液制备几丁质酶粗提液。检测采用还原糖法[2]处理，在试管中加入几丁质酶粗提液、10g/L胶态几丁质各1ml，37℃恒温水浴30min，加入DNS10ml，混匀后沸水浴10min，用水冷却至室温，观察颜色变化，以100℃高温灭活处理15min几丁质酶粗提液为对照，试验重复3次。1.2.2 绿色木霉几丁质酶粗提液对病菌的抑菌活性测定 将黄瓜立枯丝核菌、番茄灰葡萄孢霉菌菌丝块转移到平板上，每平皿接种4块，分布于4角，平皿中心放滤纸片并加入100μl几丁质酶粗提液或阳性对照液，重复3次，空白加入等量无菌水，定期观察抑菌圈大小。1.2.3 绿色木霉菌对立枯丝核菌重寄生作用的显微观察 将灭菌赛璐玢膜置于直径90mm的水琼脂培养皿上，在平板两侧各植入经活化培养的绿色木霉和立枯丝核菌菌丝块，25℃下对峙培养，待菌丝接触后置于光学显微镜下观察。1.2.4 绿色木霉菌在黄瓜叶片和根部的定殖 取菜田表层10cm深处土壤，混腐熟的猪粪和蛭石（按3：1：1比例），过筛后，用150倍甲醛液消毒，边喷边混，喷匀后堆起，盖塑料布闷5天，然后晾晒14天，待残药挥发后铺于苗床待用。同时将冰箱保存的绿色木霉菌活化，转接到小麦粉培养基上，在25℃温度下培养7天，培养基上长满菌丝和孢子后，在组织捣碎机中捣碎、过滤，配成绿色木霉菌孢子悬浮液（5×106个孢子/ml）备用。木霉菌叶面定殖：将培养制成的孢子悬浮液用消过毒的手持喷雾器喷雾，均匀喷至黄瓜叶面正反两面，直到叶面上均匀布满一层细微水珠而不流淌为止。喷雾后1h取第一次样，以后每隔一周取一次样，共4次。每次每处理取的叶片剪成0.5cm见方小片，称量取样叶片加入10倍无菌水中振荡（120r/分）15min。取稀释液0.1ml涂布于木霉选择性培养基上，25℃下培养3～4天，5皿重复，计菌落数。以第一次取样所检测到的菌量为接种量，菌量以cfu/g叶表示。木霉菌根际定殖：将培养制成的孢子悬浮液，均匀浇灌至黄瓜根部，直至黄瓜苗根部土壤全部浸润为止。浇灌后1h取第一次样（地下1～2cm处根围土壤），以后每隔3天取一次样，共4次。检查时，分别称取根围土壤1g，加入无菌水20ml中振荡（120rpm）15min。取稀释液0.1ml涂布于木霉选择性培养基上，25℃下培养3～4天，5皿重复，计菌落数。以第一次取样所检测到的菌量为接种量，菌量以cfu/g叶表示。通过预试验，绿色木霉菌Tr9701在胶体几丁质培养基上生长可以形成显著几丁质酶解透明圈，因此进行了绿色木霉菌几丁质酶的诱导试验。诱导条件下几丁质酶粗酶液加入DNS后变为深棕红色，与阳性对照相比有显著差异，说明绿色木霉菌菌株产生几丁质酶，且经诱导处理的绿色木霉菌几丁质酶产生量明显提高，经检测，在培养第5d时达到最大值。绿色木霉菌Tr9701几丁质酶粗提液对立枯丝核菌、灰葡萄孢霉的抑菌活性在平皿接种后2天内，立枯丝核菌、灰葡萄孢霉菌丝生长迅速，但菌丝接近木霉几丁质酶粗提液接种点周围时，生长缓慢，最后停止，从而形成明显抑菌圈。空白对照无抑菌圈，立枯丝核菌菌丝长满平皿，灰葡萄孢霉菌丝长满平皿并形成大量菌核。试验表明，绿色木霉Tr9701的几丁质酶粗提液对立枯丝核菌、灰葡萄孢霉的抑菌圈直径分别为28mm和15mm，比阳性对照的抑菌圈直径大，其差异达到了显著水平。显微观察显示绿色木霉菌对立枯丝核菌具有较强的寄生能力，绿色木霉菌丝与立枯丝核菌菌丝接触后并列生长或缠绕，有时以钩状结构入侵立枯丝核菌菌丝。在接触后期则观察到被寄生的立枯丝核菌菌丝断裂和消解的现象。2.4.1 绿色木霉菌在黄瓜叶面的定殖 绿色木霉菌在叶面上的定殖动态见表1。由结果可知，绿色木霉菌在叶面环境中由于各种条件的影响，第一周内的菌量比初始菌量降低。此后绿色木霉菌适应了叶面环境，菌量逐渐回升，第14天检测菌量为1.02×104cfu/g叶片。21天后菌量持续下降，尤其是第28天菌量降至0.12×104cfu/g叶片。镜检观察绿色木霉菌Tr9701在叶面喷雾后，主要定殖于叶面气孔周围、腺毛基部及叶面凹陷处。这些位点或是分泌物产生处，或是叶面水分分布较多处，能为绿色木霉菌的生长繁殖提供适宜的条件。同时，这些位点也是其他病原菌的竞争位点，通过绿色木霉菌的人工接种，相比病原菌具有种群数量大，出现早的特点。因此，绿色木霉菌对这些位点的抢先占领，不仅有利于本身的生存，而且使黄瓜叶面受到保护，免于病原菌的侵染。重复调查时间1h3天7天14天21天28天11.241.210.941.150.830.1820.960.950.810.920.660.0831.151.080.860.980.790.1441.371.400.951.030.720.10平均1.181.160.891.020.750.12表1 绿色木霉菌孢子在黄瓜叶片上定殖情况（孢子着生量×104个孢子/g）2.4.2 绿色木霉菌在黄瓜根际的定殖 绿色木霉菌在黄瓜根际土壤中定殖结果见表2。由结果可知，第一周内土壤的菌量比初始菌量降低，可能是在根际土壤环境中，由于各种因素的影响，木霉菌受到一定抑制，此后绿色木霉菌适应了土壤环境，菌量逐渐回升，第14天检测菌量为2.64×104cfu/g叶片。21天后菌量持续下降，尤其是第28天菌量降至0.68×104cfu/g叶片。在调查中发现，绿色木霉菌定殖黄瓜根部能力受水分含量和pH值影响明显，水分偏高或偏低都影响绿色木霉菌菌株在黄瓜根部的定殖，pH偏酸性条件下的定殖量明显高于偏碱性条件下的定殖。重复调查时间1h3天7天14天21天28天12.432.371.852.521.090.6422.692.592.032.731.240.7232.362.321.892.611.080.6542.842.561.942.701.110.71平均2.582.461.922.641.130.68表2 绿色木霉菌孢子在黄瓜根部定殖情况（孢子着生量×104个孢子/g）木霉菌腐生性强，适应性广，生长和繁殖快，可迅速利用营养和占据空间，是当前微生物菌剂控制病害的研究热点[3]。本试验结果表明，我们所筛选的绿色木霉菌Tr9701有较强的产几丁质酶活性，且经诱导处理酶产量明显提高，其酶粗提液经试验对立枯丝核菌、灰葡萄孢霉有显著抑制作用，通过诱导产生的木霉几丁质酶在对于抑制病原菌的生长具有重要意义。经显微观察发现，绿色木霉Tr9701对于立枯丝核菌是通过趋向生长、识别、接触缠绕和穿透，寄生于病原真菌之上，对立枯丝核菌具有较强的寄生能力。此现象证明，当绿色木霉菌遇到立枯丝核菌等病原菌时，受到刺激和诱导，产生溶菌酶，抑制立枯丝核菌等的生长，并可降解菌丝。生防菌在植物表面的定殖能力反映了生防菌在植物表面与病原菌竞争空间和营养的能力。本研究表明，绿色木霉菌可以在黄瓜叶面和根部定殖。据Darah（1991）报道，根圈微生物的分布与沿根的可溶性碳的分布距离有关，微生物量的积累有赖于根分泌物的释放，因此添加一定的营养可以促进绿色木霉Tr9701的定殖。本研究进一步证明，绿色木霉Tr9701产几丁质酶、寄生、定殖能力强，是较好的生防材料。当前由于生防微生物控制植物病害具无污染、价格低廉的优点，具有广阔的应用前景。因此对绿色木霉菌Tr9701的发酵工艺、田间应用范围等有待进一步研究。

2009—2011年对海滨风景区鲁迅公园1 500株黑松进行综合防治，挖复壮沟，施有机复合肥12 t，微生物菌肥1.5 t，施叶面肥0.6 t，喷药防治14次，修剪病枯枝6 000株次，陡坡建鱼鳞坑120个，有效地控制了黑松枝枯病的发生。2012年4月调查防治区1 500株的发病率为4.3%，没有死树。对照区2009—2011年没有采取任何防治措施，发病率为100%，死树6株，胸径分别为16.4～21cm。图83 伐除死亡的黑松2012年4月雇佣人员清理对照区黑松枯枝3次，伐死树6株（图83 伐除死亡的黑松），共用120工时，每工时120元；为了保持黑松林的林相，避免造成“天窗”，对照区死亡的6株黑松补植了2株，胸径均15cm，栽植一株胸径15cm黑松综合单价为5 024元；喷药3遍，防治费用每车2 000元，防治1遍，需要喷洒2车次。而采取综合防治技术的黑松，生长健康，仅有少量小枯枝，只需在黑松休眠期3月喷保护性药剂1遍，2012年4月仅对零星出现的枯枝进行了清理，所需雇佣人工较少，仅用20工时（表10）。表10 黑松枝枯病防治费用表10说明采取综合防治技术的黑松年防治费用要比没有采取措施的对照区至少节省3万元/（hm2?年）（每公顷按464株黑松计算）。

苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）是苹果、梨和多种核果类果树上发生普遍的一种病毒，可降低树势和影响果实品质。

苹果茎痘病毒（Apple stem pitting virus，ASPV）主要侵染苹果和梨，且分布范围十分广泛，可导致其产量明显下降和品质改变。本研究从湖北省农业科学院果茶蚕桑研究所国家砂梨资源圃采集砂梨样品52份，采用试管捕捉反转录-聚合酶链式反应（TC-RT-PCR）对这些样品中的苹果茎痘病毒进行了检测，其中33份样品的ASPV检测结果为阳性

辣椒病毒病又名辣椒花叶病，是辣椒生产的主要病害之一，近年来在三门峡地区发生日趋严重。发病田块一般减产10%～30%。花叶型初现明脉轻微褪绿或现浓、淡绿相间的斑驳，全株叶片褪绿，继续发展则叶面皱缩畸形，或形成线形叶，果实变小，植株严重矮化；黄化症状呈上升趋势，表现为叶色均匀黄化或黄色斑驳，植株矮化或矮化不明显；坏死型主要表现为枯顶症状，病株部分组织变褐坏死，植株生长点呈水渍状枯死，叶片黄化，随后叶片逐渐脱落，在叶片上，产生黄绿相间的斑驳或大型黄褐色环斑；畸形丛枝型的植株节间缩短，幼叶狭窄或呈线状，叶面皱缩，植株上部叶丛生，呈丛簇状，重病果面有深绿、浅绿相间的花斑和疣状凸起，果面凸凹不平，病果易脱落；易导致落叶、落花、落果，病株严重矮化，叶小而少，株小。果实常出现黄绿相间的花斑或黄色环斑、畸形，易腐生其他杂菌而烂果，严重影响辣椒的产量和品质。主要为前两种。在辣椒上，烟草花叶病毒和马铃薯X病毒引起系统花叶症状，烟草花叶病毒的不同株系分别引起系统花叶、系统环斑和条斑症状。黄瓜花叶病毒寄主范围非常广泛，毒源植物十分普遍。在田间主要靠蚜虫飞迁传毒，主要种类有桃蚜、萝卜蚜和瓜蚜等。种子和土壤中的病残体不能传播，摩擦传毒也不重要。烟草花叶病毒的主要初侵染源是土壤中的病残体，而带毒种子和卷烟或旱烟不是主要的初侵染源。在田间主要通过田间操作接触传播。马铃薯X病毒主要毒源是马铃薯，主要靠摩擦传播，不能通过蚜虫传毒，种子和土壤中的病残体也不能传播。辣椒病毒病发生及轻重与病毒类型、环境条件、栽培技术、品种抗病性有密切关系。栽植适龄壮苗，合理密植，早期防蚜等综合防治措施可以有效地减轻辣椒病毒病。在早春采用薄膜覆盖等提高地温和保湿防风的措施，秧苗健壮，抗病力增强，可使辣椒不发病或发病轻。而不覆盖的辣椒病毒病较重。定植健壮、适龄的幼苗比弱苗、老龄苗生长好，病毒病轻。重茬地发病重，轮作发病轻。辣椒病毒病的发生还与邻茬有关，辣椒地块的邻茬为番茄则发病重。植株生长茂密、徒长、通风不良的田块发病亦重；辣椒与茄科作物连作、移栽偏晚、地势低洼、土壤贫瘠、缺肥的田块，均可加重病毒病的发生。肥水充足，管理水平高，辣椒生长旺盛，病毒病发生较轻；反之发生较重。黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒与蚜虫的发生情况关系密切，冬季高温干旱时，蚜虫等传毒介体发生多，扩展速度快，花叶和畸形等类型辣椒病毒病发生早，病害扩展速度快，为害严重。但枯顶型病毒病往往在田间湿度大时发生较多，传播较快；烟草花叶病毒和其他多种植物病毒可以经接触及伤口传播，通过整枝打杈等农事操作传染。新育成的品种如农大21号、农大22号、中椒5号、津椒3号均是抗病的优良品种。3.2.1 种子消毒 用10%硫酸三钠溶液浸种20～30min，洗净后催芽，可防治烟草花叶病毒感染。3.2.2 从无病株上采种，携带烟草花叶病毒的种子可用10%磷酸三钠溶液浸种30min，清水洗净后播种 育苗地要疏松肥沃，清除病残体，并适当早播和适当稀播。在满足幼苗对营养和水分等要求的前提下，实行昼促夜控的苗床温度管理，培育茎秆粗壮，具12～14片叶和50%以上植株现蕾的壮苗，并注意及时防治蚜虫。这样的适龄壮苗定植后一周即可转青，而且封垄早，生长健壮，抗病力强。3.2.3 营养钵育苗在育苗期间，采用塑料钵育苗 把调配好的营养土装入钵内，每钵播种3粒种子。保证成活两株幼苗，然后带钵土定植。这种方法一可减少分苗假植程序，节省用工；二可自种子出土后，就有充足的营养面积，保证幼苗粗壮；三可防止造成根部伤口，减少病毒入侵机会。3.2.4 苗龄不宜过长，应控制在70～80天。定植苗株高与植株横径相近，控制在10～15cm，具5～6片真叶。株高10～15cm时，茎基部直径应达0.5～0.6cm。叶片宽、厚、平、绿，茎尖嫩壮。幼小根系发达白嫩。为防止病毒病或减轻病毒病发生，将单株栽培习惯改为在分苗时就进行双株分苗假植，尔后双株定植，每亩栽种3000～3500墩。双株法是减轻病毒病的有效措施。采用大小垄密植栽培，一般大垄宽为50～53cm，小垄宽22～33cm，每亩4500～5000穴，每穴栽2株。春季气温低，垄作和小水灌溉比平畦和大水漫灌地温高，并且土壤疏松利于发根，提早封垄，雨季利于排水。夏季高温炎热，密植能够较早地遮严地面，降低地温和保持土壤水分，有利于植株生长，不利于病毒病发展。3.4.1 采用配方施肥技术，施足基肥。3.4.2 覆盖地膜，适当提早定植 要求秧苗株型矮而壮实，在第一分杈具有花蕾时定植为宜。3.4.3 与玉米、菜豆等高秆作物间作，避免强光高温，可有效防止病毒病。注意轮作换茬，精细整地，施足基肥，增施磷、钾肥。露地栽培可在定植时铺地膜或加盖小拱棚，并适度蹲苗，促进发根。生长前期避免大水漫灌，浇水后及时中耕，力争做到早定植，早生根，早结果，在发病盛期到来之前已花果满枝。结果期不能缺水缺肥，以防早衰。搞好田园卫生，及时清除田间路边杂草，如酸浆、反枝苋、刺儿菜及藜等，以减少病毒来源。3.5.1 苗期及生长期要及时喷药治蚜 可用2.5%溴氰菊酯乳剂2000～3000倍液，或20%速灭杀丁乳剂2000～3000倍液，或2.5%天王星乳油3000倍液，喷洒注意喷嘴对准叶背，将药液尽可能喷射到蚜虫体上。药剂有50%辟蚜雾可湿性粉剂或2.5%溴氰菊酯乳油2000～3000倍液等。3.5.2 应用弱毒性病毒进行人工免疫可减轻病毒病害，如烟草花叶病毒弱株系N14防烟草花叶病毒，烟草花叶病毒卫星核糖核酸制剂S52和S54防烟草花叶病毒，但必须在辣椒感染自然界强株系之前接种上弱毒性病毒。接种方法主要有两种：一种是人工摩擦或高压喷枪接种，苗龄在1～3叶期为宜；另一种是浸根接种，当幼苗2叶期进行第一次假植时，将幼苗拔出洗净根部后立即浸入疫苗液中5～10min。疫苗液的浓度一般为100倍液（S52和S54）和1000倍液（N14），详见产品说明。另外，也可喷洒NS-83增抗剂100倍液，定植前后各喷1次，还可在定植前、缓苗后及盛果期各喷1次0.1%硫酸锌溶液，都有一定的防病作用。3.5.3 发病始期喷施病毒A800倍液+高锰酸钾1000倍液+0.3%硫酸锌，或用叶康或小叶敌300倍液。注意用药时每隔7天喷1次，连喷3次，才能收到良好效果。3.5.4 设置生物屏障在进行定植的时候，有计划地栽种4行辣椒间种1行玉米，使玉米成为高温季节对辣椒进行遮光降温的生物屏障，降低病毒病的发生，并从栽培玉米中得到一定效益。3.5.5 钝化剂和微肥的应用 用500倍的AV-2或100倍的豆浆释液或100倍的豆制品浆水，从4叶期开始每隔10～15天叶面喷布1次，共喷3～5次，可有效的减轻病毒病的为害。锌对控制TMV侵染有明显效果，常规用量为1‰的硫酸锌水溶液，每亩用75～100kg稀释液喷布叶面，喷2～3次。