Shepherd（1986）报道，棉花枯萎病的发病率与根结线虫的产卵量呈高度正相关（r=0.73**），并指出，具有抗根结线虫基因的棉株，其根际或根部所渗出的物质，可特意地诱导对枯萎病菌有抑制作用的微生物图5-2 MAR体系中抗病基因与其他性状基因之间的遗传关系从图5-2中可得知：①抗细菌性角斑病与枯萎病（根结线虫病复合体）之间有很强的相关关系；②抗细菌性角斑病与黄萎病、根腐病以及种皮抗霉菌之间的相关关系较小，但显著；③抗枯萎病（根结线虫病复合体）与黄萎病、根腐病之间也存在一定的相关性；④在低温（13～18℃）条件下，降低发芽速度与抗黄萎病、苗期病害有关；⑤种皮抗霉菌的特性与产量、早熟性之间有高度相关；⑥小种子与在低温下发芽快

本文以甘蓝型油菜一个抗病毒品种和一个感病毒品种为试材，利用转基因手段进行了油菜抗病毒病相关研究。利用乙烯、甲基茉莉酸、水杨酸类似物苯丙噻重氮3种化学物质诱导处理油菜叶片，提取处理前后各材料的RNA，标记探针后与拟南芥芯片进行杂交，通过对基因表达谱的分析，获得与抗病性相关的基因，从中选择3个与病毒抗性相关的基因BNP5、BNP7和BNP10。其中BNP7和BNP10为全长序列，BNP5 5'端部分序列缺失，通过5'-RACE的方法获得该基因全长序列，分别构建3个植物过表达载体pGA5、pGA7和pGA10和3个RNAi载体pGR5、pGR7和pGR10（过表达和RNAi载体均带有除草剂抗性基因bar）。采用本实验室发明的高通量花蕾原位转化法分别对所选材料进行转化。转基因当代植株收获的种子播种以后，幼苗期喷施除草剂进行筛选，并经PCR鉴定，存活幼苗80%以上为阳性植株。目前正在进行阳性植株T1代幼苗病毒抗性鉴定及相关的后续实验。

1.苹果小叶病（1）症状 叶片狭小，叶缘上卷，病枝节间缩短，细叶簇生或丛状，病枝上的花芽减少，花小且不易座果。（2）病因 缺锌所致。● 土壤瘠薄；● 土壤板结；● 使用氮肥过多。（3）防治措施● 增施有机肥，改良土壤，结合秋施基肥，加施硫酸锌。● 发芽前全树喷施3%～5%硫酸锌。● 花后保护剂选用代森锌或丙森锌。2.苹果花脸病（1）症状 果实着色前无明显变化，着色后果面散生许多近圆形不着色的黄绿斑块，不着色的地方果面凹陷。（2）病因 是一种病毒病，即苹果褪绿叶班病毒。（3）防治措施 目前无有效防治措施，下列措施可减轻症状的出现及病害传播。● 增施有机肥，结合秋施基肥，加施硼砂或硼酸。● 用氨基酸原液涂干，加强树体营养。● 不用修剪过病树的锯、剪修剪健壮树。● 严格选用无病的接穗种砧木。3.苹果白粉病（1）症状 主要为害嫩枝、叶片、新梢，也可为害芽、花及幼果，病梢节间缩短，叶片细长，病芽瘦长尖细，鳞片松散。（2）病因 真菌病害，病菌以菌丝在芽的鳞片间或鳞片内越冬，在1年中4～9月为病菌侵染期5～6月为侵染盛期。（3）防治措施● 施足基肥，控制氮肥。● 结合冬剪，剪除病梢，病芽。● 发芽前喷氟硅吐、丙环吐、福星、金力土等清园。● 花序分育期喷剑力通、晴菌吐等。● 落花后根据病情喷施世高、特普吐、戊吐醇、福星、剑力通等。1.苹果桑天牛（1）危害 专门蛀食枝干，严重地破坏了输导系统而导致树势衰弱或死亡。（2）发生规律 2～3年发生一代，以幼虫在树干蛀道中越冬，7～8月成虫羽化，8月上旬产卵，产卵期30～40天。（3）防治措施● 结合冬剪，剪除被害新梢，集中处理。● 利用成虫产卵前取食嫩叶的习性，可在成虫期于树冠上喷乐斯本、安民乐等。● 11月份前用注射器将药液注人蛀孔内，注后用泥堵严孔口，药剂可用敌敌畏20 倍、安民乐20 倍或乐斯本20 倍等，也可在蛀孔内填人磷化铝片剂1/4～1/6片，然后用湿泥塞紧孔口。2.苹果绵蚜（1）危害 国内外重要的检疫对象，早期群集于苹果的枝干，枝条及根部，吸取汁液，被害部膨大或瘤，阻碍水分、养分的输导，严重时树体逐渐枯死，为害果实的萼洼及梗洼，影响果品质量。（2）发生规律 年发生15～20 代，以1～2 龄若虫在枝干、病虫疤边缘缝隙、剪锯口、根蘖基部或残留的蜡质绵毛下越冬。3月中旬开始活动，6月中旬左右为第一个为害高峰期，9月下旬出现第二次盛发期。（3）防治措施● 树上用药的关键时期：5月中旬及9月上旬选用药剂安发乐、乐斯本或安民乐+吡虫林。● 药剂灌根：4月中旬左右用安发乐或乐斯本400～500 倍对有绵蚜的树灌根。● 点治：小喷雾器用安民乐或乐斯本800 倍专喷有绵蚜的部位。相关链接梨病虫害的防治1.黑星病可以为害梨的所有组织。（1）症状 受害处先生出黄色斑，渐渐扩大后在病斑叶背面生出黑色霉层，从正面看仍为黄色，不长黑霉。果实受害处出现黄色圆斑并稍下陷，后期长出黑色霉层。（2）防治方法 在病害发病初期，用80%代森锰锌可湿粉剂600倍液、40%杜邦福星乳油8 000～10 000倍液、80%必备可湿性粉剂500～600 倍液喷雾，每隔7～10 天喷1 次，连续喷4～6次，也可与波尔多液交替使用。2.黄粉蚜为害梨果实、枝干种果台枝。（1）危害 以成虫、若虫为害，梨果实受害处产生黄斑稍下陷，黄斑周缘产生褐色晕圈，最后变成褐色斑，造成果实腐烂。（2）防治方法● 农业防治：刮树皮种翘皮以杀死越冬卵。● 药剂防治：在7～8月份喷10%吡虫啉2 000倍液；对于采用套袋栽培的梨园，应在5月底套袋前喷10%吡虫啉2 000倍液。3.康氏粉蚧主要人袋害虫之一。（1）危害 萼洼、梗洼处受害最重。被害处产生紫红色晕斑，停止生长，形成畸形果，严重时果面龟裂、干枯。（2）防治方法● 农业防治：刮树皮种翘皮以杀死越冬卵。● 药剂防治：喷蚧螨灵400倍液效果明显。荔枝病虫害有多种，以蝽象、蛀蒂虫、尺蠖、霜霉病、毛毡病等七种为主。1.蝽象（1）危害 为害嫩梢、花穗种果实，引起严重落果。（2）防治方法● 捕捉成虫。冬天低温时期（最好10℃以下），利用蝽象的假死性，摇动树枝，使成虫掉落地面而后捕杀。● 摘除卵块。3～5月成虫产卵期，采集卵块，集中消灭。● 药剂喷杀。3月中旬在成虫活动初期及4月中下旬至5月上旬若虫活动期，喷一次800～1 000倍敌百虫。2.蛀蒂虫（1）危害 蛀蒂虫幼果期蛀食果实、种核，结果后期为害果蒂处的幼嫩组织，果蒂处充满虫粪，造成落果。三月红、白糖罂、白腊受害较重，黑叶次之，晚熟种较少受害。为害叶片时，主脉被蛀空，叶片前半截枯黄。（2）防治方法● 做好果园冬季清园工作，扫除枯枝落叶烧毁。● 花穗期及果熟前20～25 天，喷药防治，用杀虫双500 倍或乐期本1 000倍液、兴棉宝1 500倍液、万灵2 500倍液喷杀成虫及叶脉内幼虫。成虫多在树冠内膛活动，喷药时注意树冠内膛的喷布。3.尺蠖（1）危害 以幼虫咬食嫩梢、嫩叶、花穗、幼果，春季荔枝开花期为害最严重。（2）防治方法 在荔枝抽穗后未开花前种谢花后用90%敌百虫800～1 000倍喷杀幼虫。4.卷叶蛾（1）危害 卷叶蛾也有很多种，以幼虫咬食荔枝嫩梢、嫩叶、及蛀食幼果，夏、秋、冬季为害新稍嫩叶。（2）防治方法● 做好果园冬季清园工作，扫除枯枝落叶烧毁，消灭越冬虫源。● 花开花前、谢花后，用敌百虫或敌敌畏喷杀幼虫。5.金龟子常见有铜绿金龟子种食花金龟子两种。（1）危害 以成虫取食叶、花、果为主。铜绿金龟子幼虫取食地下根部，为害幼树引起树势衰退。（2）防治方法● 人工捕捉成虫。在早上及傍晚飞集为害时用手捕捉、或利用金龟子的假死性，摇动树枝惊动跌落地面随即杀死。● 在傍晚时分成虫飞集为害时用敌百虫1 000倍或敌杀死3 000倍喷布树冠。● 于成虫出土前在施肥沟中淋施呋喃丹或辛硫磷毒杀出土成虫。6.霜霉病（1）危害 主要为害荔枝花穗种果实。花穗受害，病斑褐色严重时整个花穗枯萎。果实受害，果皮出现不规则褐色病斑，病斑无明显边缘，严重时全果发黑，连绵阴雨时果面上长出白色霉层。（2）防治方法● 夏季清园。果实采收后，结合修剪把病穗、病枝、病果、落地果等集中烧毁。● 荔枝抽穗前，地面喷射0.5%波尔多液或600 倍杀毒矾1～2次。在抽穗、嫩芽、幼叶受害最严重，被害叶的叶背毛毡状一面向内凹，绿色的叶面外凸卷曲如“狗耳”，每次新梢均可发生，削弱树势。被害花穗，极易脱落，影响座果，造成减产。7.毛毡病（又称荔枝锈蜱或肿叶病）（1）危害 发生十余世代以上，为害嫩叶，偶而亦可为害花穗、幼果、嫩枝。一片被害叶上之锈蜱有多至100 只。3～5月为害最为严重。被害幼叶初绿色加深并有针头状凸出，继之被害部扩大加厚，叶背产生白色茸毛，叶表肿胀凸出，光滑如瘿瘤状，弯曲，叶背茸毛由白色变成褐色。（2）防治方法● 采果后修剪清园，剪去被害枝叶。清除地上部残枝落叶，减少虫源。● 药剂防治：春秋梢萌发期，喷1 000倍三氯杀螨醇等药液。

苹果霉心病是近年来苹果果实上发生的一种重要病害。苹果霉心病又称苹果霉腐病、苹果心腐病，是苹果果实生长前期、采收前、贮藏期的主要病害之一，该病一般发生在果心部位，严重时可造成心室周围果肉腐烂，甚至烂到果皮下，严重影响了果农的经济收入。苹果霉心病主要是花期侵染。病菌在苹果枝干、芽体等多个部位存活，也可在树体上及土壤等处的病僵果或坏组织上存活，第二年春季开始传染。病菌随着花朵开放，首先在柱头上定殖，落花后，病菌从花柱开始向萼心间组织扩展，然后进入心室，导致果实发病。果实一般在贮藏期表现出来。在苹果霉心病防治上因群众不能够掌握住关键的防治适期，即花前、谢花后半月内的药剂防治，造成病菌的大量传播侵染，造成苹果霉心病发生重。为了更好地掌握苹果霉心病防治技术，从2005年开始，本站对苹果霉心病防治进行了系统的研究，具体研究如下：2005年，在陈村乡鱼池村进行了花期喷药防治红富士品种苹果试验。药剂主要有70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%多菌灵300倍液、50%甲霜铝铜300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液、70%百菌清300倍液，对照喷清水，共9个处理，每个处理喷5株树。喷药日期为花期4月20日和4月25日2次。仔细喷洒花朵，尽可能不漏喷。果实9月10日采收，土窑洞贮藏95天，2005年12月15日各处理剖果600个，调查各处理心腐果率。试验设在陈村乡南庄村，共设6个试验处理，即70%甲基托布津、大生M-45、菌毒清、扑海因、特谱唑及喷清水对照药液浓度同花期用药，品种为红富士。2006年为5月3日终花期喷药，9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。共设6个试验处理，即70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液及喷清水对照，品种为红富士。喷药时间为4月22日花期和5月5日终药期共两次喷药。9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。2005年花期喷甲基托布津为1.5%，大生为0.33%，菌毒清为1.83%，多菌灵为1.5%，甲霜铝铜为1.33%，扑海因为0.83%，特谱唑为0.5%，百菌清为0.67%，清水对照为6.83%。表明花期喷上述药液2次，对防治果实心腐烂果均有较好效果，以80%大生300倍液防效最好。2006年终花期喷药甲基托布津500倍液为3.17%，大生300倍液为2.17%，百菌毒清300倍液为1.67%，扑海因1000倍液为1.83%，特谱唑1000 倍液为1.5%，喷清水对照为7.17%。试验与2005年花期防效相比，终花期防效稍低于花期防效。在6种试验药剂中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。2006年花期加终花期两次喷药，甲基托布津500倍液为0.83%，大生300倍液为0.0%，百菌毒清300倍液为0.33%，扑海因1000倍液为0.5%，特谱唑1000 倍液为0.5%，喷清水对照为6.33%。在6种试验药中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）备注170%甲基托布津500倍液60091.5280%大生300倍液60020.33350%菌毒清300倍液600111.83450%多菌灵300倍液60091.5550%甲霜铝铜300倍液60081.33650%扑海因1000倍液60050.83712.5%特谱唑1000倍液60030.5870%百菌清300倍液60040.679喷清水对照（CK）600416.83表1 2005年花期喷药防治苹果霉心病效果序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）花期+终花期终花期花期+终花期终花期1甲基托布津300倍液6005190.833.172大生300倍液60001302.173百菌清300倍液6002100.331.674扑海因1000倍液6003110.51.835特谱唑1000倍液600390.51.56清水对照（CK）60038436.337.17表2 2006年花期+终花期和终花期喷药防治苹果霉心病效果通过多年的防治试验示范，我们认为采用以下的综合防治措施，可收到较好的防治效果。3.1.1 清除病原 苹果采摘后清除果园内的病果、病叶、病枝、丛生的杂草，刮除树体病皮，并带出果园集中处理。3.1.2 科学管理 增施有机肥料，增强树势，提高植株抗病性；合理灌水，及时排涝，保持适宜的土壤含量，防止地面长期潮湿；科学修剪，建造合理的树体结构，保持果园通风透光良好，可有效地控制或减少霉心病的发生。采收时对田间发病较重的果实，应单存单贮。采收后24h内放入贮藏窖中，窖温最好保持在1～2℃。一般10℃以下，发病明显减轻。花前和谢花后7～10天是防治苹果霉心病的两个关键时期，有效药剂为80%大生、扑海因、多抗霉素等。3.2.1 芽前用药 苹果发芽前或花芽萌动期用3～5波美度石硫合剂+0.3%五氯酚钠，40%福美砷100倍防治。3.2.2 花前加谢花后7～10天用药，提高防治效果 药剂为：80%大生、70%甲基托布津300倍液、50%扑海因可湿性粉剂1500倍、50%退菌特可湿性粉剂600倍、70%代森锰锌可湿性粉剂500倍，可以有效防治霉心病，还能兼治轮纹斑、斑点落叶病。苹果霉心病是由霉心和心腐2种症状构成，其中霉心症状为果心发霉，但果肉不腐烂，不影响果实食用价值和商品价值，心腐症状不仅果心发霉，靠近果心的果肉也由里向外腐烂，影响食用甚至无食用价值，这种症状严重影响果品的经济效益。通过以上试验，可以看出，以花期加终花期喷药防治苹果霉心病效果最好，其次为花期两次喷药，终花期喷药防效相对差一些。但是3种防治方法对苹果霉心病均有较好防效。

经营是指果树育苗基地的经济运营，是为实现既定的发展目标而进行的运筹、谋划、决策。其解决的是苗圃的战略问题，包括苗圃的发展方向、苗木生产计划、市场营销策略等。经营的目标是效益，经营状况好坏直接影响着苗圃效益的高低。经营者要对果树苗木市场需求及其变化有客观了解，能够充分认识到自身苗圃的优势和不足，做到扬长避短和优势互补，将自身优势与市场较好地协调和发展，使其生产的苗木产品符合市场需求，做到适销对路，取得良好的经济效益。管理即是管辖治理的意思，是对苗圃经营过程中的人、财、物、产、供、销，进行计划、组织、协调、指挥、监督等各项工作。管理者要在现有的资源条件下，合理组织和安排生产，合理配置和使用各种生产要素，提高产品质量和劳动效率，降低生产成本。1.调查内容（1）市场环境调查。主要是对国家和当地果树苗木市场的政策、标准、体制、经济发展状况以及社会发展需求等方面的调查。（2）市场需求调查。主要调查各地市场对果树树种、品种或各种规格苗木的供求状况、需求量、不同地区的发展情况和销售潜力等。（3）购买者的调查。主要包括经济水平、文化水平、发展规模等。（4）苗木产品调查。主要包括不同地区购买者对各种果树苗木的品种、质量和规格等的要求，以及各种果树苗木的市场供求情况、生产技术等方面的情况调查。（5）价格调查。主要包括消费者对苗木价格的反应，苗木品种价格的调整，新品种苗木的价格如何定价等。关键是要掌握价格动向，把握自身苗木市场竞争的主动权。（6）同行调查。主要调查同行生产者的数量、分布及基本情况；对同行生产者的实力和所生产的果树苗木的种类、特点及优势等进行全面综合分析。2.调查方法（1）电话或网络访问法。根据调查事项，采用座谈、走访、电话、网络等手段与购买者进行交流、沟通，获取相关的信息。（2）实地观察法。调查者依据调查事项，直接到苗木生产基地或果树苗木市场进行现场观察，最好要进行拍摄记录，以搜集所需资料的方法。（3）产前试验法。就是向市场投入少量本基地所产的果树苗木的新品种，进行试销，根据销售情况来分析决定生产数量和市场前景。通过典型调查、抽样调查、专题调查、市场试销等综合调查方法，集中购买者意向、销售人员意见、专家意见、市场试销情况等信息，结合人们的经验加以综合分析，对果苗及其产品市场作出判断和预测，可有效地规避可能存在的经济风险。对苗木生产基地进行功能分区，其目的在于合理利用圃地面积，便于生产管理和作业实施，提高生产效益。首先要进行实地测量，将生产用地和辅助用地按一定比例描绘在图纸上，要标明各育苗区的所用设施的平面轮廓。同时要注明生产用地中各种植区的面积、培育的果树苗木种类及数量等，同时要考虑苗木的移栽、检验、假植、包装、贮藏和运输等相关环节的安排。首先要做好调研工作，准确把握苗木生产基地自身的栽培技术水平、种源、设备、人力、物力、财力、自身的产品质量、在市场中的地位等背景资料；要依据当地的土壤状况、气候变化规律和农业经济发展水平等条件，因地制宜地发展适销对路的果树苗木，并确定适宜的生产方式。其次要根据资金周转、土地状况及当地果树发展需求、种类、数量等进行统筹规划，合理安排。1.制订合理的生产计划包括生产进度安排、时间安排以及一系列技术规范与要求等，并要考虑主要的生产程序和生产过程中可能存在的不利因素等。2.生产计划的执行和实施生产计划制订后，关键是执行和组织实施。要把计划和任务层层落实，同时要求苗木生产基地各基层单位要做好各个环节的作业计划，并要掌握计划执行的进度，确保苗木生产的各个环节的顺利进行，按时、按质、按量完成苗木生产任务，提高苗圃的生产经营水平和经济效益。3.作好生产记录苗木生产过程中应有专人负责作生产记录，要及时准确记录各个环节和主要生产过程，有助于积累经验，为下周期生产奠定良好基础。技术管理是指对苗木生产、包装、贮存等各项技术的科学组织与管理。加强技术管理有利于建立良好的生产秩序，提高本单位或行业的技术水平，扩大苗木种类和品种，提高苗木产量和品质，节约能耗，降低产品成本等。1.建立健全技术管理体系技术管理体系包括技术规范和技术规程，这是进行技术管理、安全管理和质量管理的依据和基础，是标准化生产的重要内容。（1）技术规范。是对各类苗木的质量、规格及其检验方法等作出的技术规定，是企业单位和个人在生产经营活动中行动统一的技术准则，可分为国家标准、地区标准、部门标准及企业标准。（2）制定技术规程的目的。技术规程是为了保证达到技术规范，对生产过程、操作方法以及工具设备的使用、维修、技术安全等方面所作的技术规定，苗圃可以根据自身的具体条件，自行制定和执行。2.注意事项制定技术规范和技术规程应注意以下三方面。（1）要以国家对果树苗木生产的规定和政策、技术标准为依据，同时要因地制宜地结合当地特点和地区操作方法、操作习惯等。（2）要对国内外先进技术的成就和经验结合自身和现有条件加以合理利用，防止盲目拔高或降低标准。（3）要广泛征求多方意见，并结合生产实践多次试行、总结修改后方可批准执行。在执行过程中应随着技术经济的发展及时进行修订，使之不断完善，确保技术规范、规程既严格又可操作性强。生产实践中果树苗木行业的质量管理主要有以下方面。（1）要依据国家标准和行业标准执行果树苗木产品质量检验，进行质量调查分析评价，建立质量保证体系。其次要建立并执行各项质量管理制度。企业或生产单位要实行质量责任制，要设专人负责质量管理工作。（2）要进行全面质量教育，帮助企业领导、技术人员和员工树立质量意识，要开展技术培训、技术考核、技术竞赛等各种有利于提高企业效益和长久发展的活动，鼓励职工钻研技术，提高技术水平。（3）要实行综合质量管理，把好各个生产阶段和每一个环节的技术质量关。做好质量信息反馈工作，积极听取消费者意见，及时反馈市场信息，改进和完善企业质量管理制度。果树生产提倡就地育苗、就地栽植的原则。但是因苗木生产需要的周期长，技术含量高或是品种、规格等不能满足当地果树生产发展需要时，就需要从外地购进苗木。首先要考查树种、品种是否具有发展前景和符合当地的适应性，要选择农业科研、推广机构的技术人员、市场销售人员、果树种植户，向他们咨询当前果树的主要栽培品种、市场销路情况，分析当前和今后一定时期内市场的需求。1.看苗木新鲜度新鲜苗木，出圃周期短，叶片、根系新鲜有光泽，没有变色、皱缩、萎蔫、干枯、腐烂现象。如果叶片失绿出现皱缩，枝条产生皱皮，根系失水干枯，多为苗木出土时间长，植株失水多，根系已死亡，栽后很难恢复生长。2.看苗木质量选优质果苗除品种纯正外，还要求枝干粗壮，多分枝，枝叶无病虫损伤，根系发达，主、侧根完整，损伤少，须根多。3.看芽的发育情况不同温度带地区的果树苗木，发芽早晚不同，要根据当地种植时间选购苗木。一般春季仍在休眠的苗木，栽后成活率较高，已萌芽长叶的苗木，栽后根系恢复生长慢，水分营养代谢失调，一般成活率较低。所以，购苗要选择时间，春季已发芽抽梢的苗木不要购买。

防治棉花枯萎病的农药包括除草剂类、化学类和生物类。除草剂类农药主要是氟乐灵；化学类农药是指杀菌剂和特殊的化学物质；生物类农药是具有防病作用的生物制剂。大量研究结果表明，除草剂可以影响由真菌、细菌、线虫或病毒等引起的植物病害。除草剂对植物病害的影响存在着正负两种截然不同的作用。即使同一种除草剂对同一种植物病害的影响也有差异。氟乐灵等二硝基苯胺类除草剂减轻植物病害的发生，已有许多报道（Buczacki，1973；Grau等，1997；Teasdale等，1979）；而且有研究证明，属于二硝基苯胺类的胺氟灵和胺硝草能减轻棉花枯萎病的发生（Youssef等，1985）。Grinstein等（1984）报道了氟乐灵能抑制棉花枯萎病的发生。但也有报告说，在温室试验中，土壤经氟乐灵处理后增加了感病品种棉花枯萎病的发病率（Youssef等，1982）。这种在同一除草剂与植物病害系统中结果的差异可能是由于所采用的技术、除草剂的剂量与质量、病原菌，土壤类型及作物品种等多种因子对除草剂与植物病害之间相互作用的影响而造成的（Papavizas等，1979）。宋凤鸣等（1990、1992、1993、1994、1995）和张元恩等（1994）就氟乐灵防治棉花枯萎病的效果及其机制做了较系统的研究，取得了具有理论意义和应用价值的研究成果。从枯萎病发病的时间动态看，氟乐灵处理组棉苗枯萎病的株发病率和病指显著低于对照。在接种后的第6天，处理组和对照组棉苗均开始表现枯萎病症状，且株发病率无明显的差异，此后，氟乐灵处理组枯萎病的株发病率增加较缓慢，接种12天后，株发病率增加趋于稳定，而对照组株发病率增加很快，接种后第18天达最高（图7-1）。图7-1 氟乐灵处理后棉苗枯萎病发病的时间动态（宋凤鸣等，1995）从病指看，氟乐灵处理显著降低轮作地苗床和连作地苗床上棉苗枯萎病的发病率及病指，其差异均达到显著或极显著水平（表7-1）。5月10日处理组病害发病率及病指比对照降低80%以上，均高于5月21日的下降率（在40%～60%），可见，氟乐灵处理减轻枯萎病发病的作用随时间推移而下降。连作地苗床和轮作地苗床上枯萎病发生和病指相差不大。来自氟乐灵处理苗床的棉苗移栽到大田后，在现蕾初期枯萎病的发病率和病指均明显低于对照棉苗（表7-2）。处理棉苗枯萎病发病率一般降低65%左右，病指降低65%～75%。从大田枯萎病发病率及病指来看，以连作地苗床棉苗移栽到连作棉田为最重，轮作地苗床棉苗移栽到连作棉田次之，轮作地苗床棉苗移栽到轮作棉田为最低。这也证明了轮作可以减轻棉花枯萎病的发生。苗床类型处理5月10日5月21日发病率（%）病指发病率（%）病指连作地苗床对照7.78±0.803.50±0.5114.67±1.357.45±0.24氟乐灵1.22±0.68**（84.53%）0.45±0.33**（87.14%）8.22±1.78*（43.97%）3.33±0.87**（55.30%）轮作地苗床对照7.33±0.843.14±0.2314.45±1.137.25±0.30氟乐灵1.31±0.29**（83.36%）0.42±0.14（86.62%）6.44±0.68**（55.43%）3.81±0.20**（61.24%）表7-1 氟乐灵处理后对苗床上棉苗枯萎病的抑制作用（宋凤鸣等，1995）苗床类型大田类型处理发病率（%）病指轮作地苗床连作棉田对照6.37±0.593.02±0.71氟乐灵2.15±0.12**（66.25%）1.07±0.16**（64.57%）轮作地苗床轮作棉田对照4.98±0.352.68±0.16氟乐灵1.76±0.35**（64.66%）0.69±0.14**（74.25%）连作地苗床连作棉田对照9.19±4.183.95±0.91氟乐灵3.22±0.61**（64.98%）1.17±0.35**（70.38%）表7-2 氟乐灵播前土壤处理对棉花现蕾期枯萎病发生的影响（宋凤鸣等，1995）张元恩等（1994）也报道了相类似的研究结果（表7-3）。处理病指生长箱中田间小区30天40天50天30天70天对照4954654095氟乐灵处理1520241145除草通1925371043表7-3 二硝基苯胺类除草剂对棉花抗枯萎病的抑制作用由氟乐灵诱导的棉花抗病性增加，不是氟乐灵对枯萎病菌抑制的结果，不是根部分泌物变化的结果，也不是促进益菌生长，拮抗病原菌的结果。因为氟乐灵对菌丝生长、孢子萌发的抑制作用十分有限（表7-4），也不影响枯萎病菌对棉花根部的侵入，而棉花抗枯萎性的提高，是棉花本身抗性机理变化的结果。处理萌发率菌落半径（cm）3h后6h后3天6天9天12天15天菌丝重（g）对照13.7741.893.105.506.727.338.000.63620.64100.6305氟乐灵20.6860.643.405.797.207.968.700.74120.72310.6954表7-4 氟乐灵对枯萎病菌孢子萌发和菌丝生长的影响（张元恩等，1994）氟乐灵对棉花本身抗枯萎病性的机理变化体现在以下7方面（宋凤鸣等，1933，1995）。出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12氟乐灵（μg/g）11.151.41**2.05**1.73**3.08**3.67**51.21*1.45**2.07**1.78**2.82**3.53**101.24*1.49**2.27**1.91**3.08**3.72**对照丙酮0.941.031.241.181.641.75灭菌水0.830.971.031.191.461.70表7-5 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内木质素含量的变化经氟乐灵播前土壤处理出苗后1～3周，2个供试品种棉苗植株内木质素含量均高于对照，这表明氟乐灵促进了木质素的合成与积累。但在5～10μg/g的氟乐灵处理浓度范围内，木质素含量没有差异。出苗后1～5周内，处理植株与对照植株内木质素含量的差异逐渐增大表明，氟乐灵处理对木质素合成与积累的诱导作用在这一期间是持续的。氟乐灵对抗病品种中棉所12木质素合成与积累的促进作用强于对感病品种浙肖棉1号的作用。出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12氟乐灵处理（μg/g）132*3351**68**82**93**533*3248**74**80**106**1036*3755**76**88**109**对照丙酮223030435460灭菌水212527415061表7-6 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内苯丙氨酸解氨酶活性的变化氟乐灵处理后，增加了2个供试品种棉苗植株内PAL的活性，说明氟乐灵对棉苗PAL活性具诱导作用，但在不同浓度处理之间，PAL活性差异不明显。在处理出苗后第二周内，2个供试品种棉苗植株内PAL活性的增加大于处理后第三周内的增加，表明氟乐灵对PAL活性的诱导作用发生较早；随着时间的推移，这种诱导作用逐渐减弱。氟乐灵对抗病品种中棉所12 PAL活性的诱导作用大于对感病品种浙肖棉1号PAL活性的诱导作用。但在中棉所12出苗后1周时，处理植株中，PAL活性与对照中的PAL活性没有显著性差异，可能与氟乐灵对中棉所12棉花的诱发作用较迟有关。氟乐灵处理后，2个供试品种棉苗植株内过氧化物酶活性高于对照，表明氟乐灵对过氧化物酶活性具有促进作用，且这种促进作用具有持续性。对抗病品种中棉所12过氧化物酶活性的促进作用，强于对感病品种浙肖棉1号的作用。但在不同浓度处理之间，酶活性的差异不显著。出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12氟乐灵处理（μg/g）160.2**68.563.4*77.4**77.8**90.3**564.9**70.0*68.8**76.8**79.5**93.9**1071.0**69.2*73.6**78.8**92.5**表7-7 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内过氧化物酶活性的变化出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12对照丙酮52.861.254.663.457.065.8灭菌水53.282.455.064.657.867.0表7-7 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内过氧化物酶活性的变化（续）-1图7-2显示出，浙肖棉1号过氧化物酶同工酶有5条共同谱带[A（Rf=0.53）、B（0.47）、C（0.40）、D（0.32）和E（0.25）]；中棉所12则有4条共同谱带[A’（0.46）、B’（0.41）、C’（0.35）和D’（0.28）]。氟乐灵处理后，过氧化物酶同工酶组成发生了变化，增加了一些新谱带；且氟乐灵对过氧化物酶同工酶的影响随着处理后时间的推移而不同。在出苗后第一周和第二周，浙肖棉1号增加了F（0.17）、G（0.13）和H（0.05）3条新谱带；在出苗后第三周时又增加了I（0.21）、J（0.07）和K（0.11）3条新谱带。在出苗后第一周，中棉所12增加了E’（0.19）带；第二周又增加了G’（0.15）带；第三周则又增加了F’（0.30）谱带。在不同浓度处理之间，2个供试品种的过氧化物酶同工酶没有差异。图7-2 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内过氧化物酶同工酶图谱经氟乐灵诱发处理再接种病菌后，棉苗体内维管束组织中类萜烯醛的积累水平明显大于对照组。虽然对照组棉苗在接种后18天时，也有较高水平的类萜烯醛积累量，但在接种后的15天内，其积累水平很低。相反，处理组棉苗在接种后第9天时，就有较高水平的类萜烯醛积累量，而且其积累量呈直线增加，可达到很高的水平，如在18天时类萜烯醛的量占中柱组织的85%（平均4.2级）以上。图7-3 发病棉苗体内类萜烯醛的积累动态棉枯萎病菌侵入棉花植株后，由于棉花自身及外界环境条件的影响，受侵染植株可能不表现症状。因此，外观发病率及严重度可能不完全反映枯萎病菌的实际侵染及在植株内的扩展情况，为此，在棉花收获后进行了剖秆检查，以了解枯萎病菌的实际侵染率及茎秆木质部病变程度。由表7-8可知，氟乐灵处理组中棉株枯萎病发病株率降低，茎秆木质部的病变程度减轻。这可能说明，氟乐灵处理后使棉花植株增强了抵抗枯萎病菌侵入的能力（表现为侵染率的下降），同时，抑制了侵入枯萎病菌在木质部内的生长与扩展（表现为木质部病变程度的下降），从而阻止了病害的进一步发展。此外，氟乐灵处理后对枯萎病发病株率的减少要低于对木质部病变程度的降低，这表明，氟乐灵减轻枯萎病发病主要是通过抑制侵入枯萎病菌在棉株内的生长与扩展而起作用的。品种处理侵染率（%）病指沪棉2011对照75.24±0.9140.69±2.38处理63.19±3.86（16.02）31.73±1.65（22.02）中棉所12对照62.82±0.8326.70±0.62处理45.97±2.27（26.82）17.00±1.10（36.33）表7-8 氟乐灵处理后剖秆检查结果氟乐灵处理组棉苗根部和茎部组织中，枯萎病菌的菌量显著低于对照组相应部位的菌量（图7-4）。接种后第9天起，处理组与对照组之间的菌量差异加大；同时，茎部组织的菌量差异大于根部。从菌量增加的时间动态来看，接种后12天内，根部组织中菌量增加缓慢，但在接种后12～15天增长加快。对照组棉苗茎部组织中，菌量的增加动态与根部相似，在接种后的12～15天增加较快，而处理组棉苗茎部组织中的菌量在接种后的15～18天才有较大的增加。说明处理组茎部菌量增长滞后于对照。综上所述，播前氟乐灵施用后能减轻枯萎病的发生，主要是氟乐灵诱发棉花产生了诱导抗性，这种诱导抗性的机制，主要表观在抵抗病原菌的侵入和对入侵病原菌在棉株体内生长的抑制。氟乐灵是旱地作物棉花的除草剂，主要采用播前混土法施药。宋凤鸣等（1995）推荐施药量每亩用48%乳油65～175ml，视土壤质地和有机质含量而定。氟乐灵处理组在轮作地苗床和连作地苗床的出苗率均高于对照组，其原因是处理组苗前死亡率降低。处理组在连作地苗床上的苗前死苗率比对照组减少79.80%；在轮作地苗床上比对照组减少52.91%（表7-9）。播前施用按推荐氟乐灵施药量对棉花出苗是安全的。图7-4 氟乐灵处理后棉苗体内枯萎病菌菌量的变化动态苗床类型处理出苗率（%）苗前死苗率（%）连作地苗床对照77.90±2.6711.93±2.67氟乐灵84.81±2.632.41±0.11**轮作地苗床对照82.88±1.147.73±1.26氟乐灵86.56±0.45*3.64±0.50**表7-9 氟乐灵播前土壤处理对棉花出苗及苗前死苗的影响（宋凤鸣等，1995）棉花枯萎病系种子与土壤传播的维管束病害，从子叶期至成株期整个生育阶段皆可侵染发病。其化学防治的关键在于药剂的速效与长效。速效即药剂施用后能迅速被吸收，运转至维管束中，并累积达到能抑制、杀死病原菌的有效浓度；长效即药剂具有缓释作用及不易受环境影响而分解、变性的性质。多菌灵等苯并咪唑系列是一类具广谱杀菌活性的内吸杀菌剂，目前已被广泛用于防治多种作物病害，并且已知它们在土壤中不易被分解，存留期至少达数月之久。鉴于此类药剂用于大田治疗，因棉株对多菌灵等内吸利用率低，而导致防效较差的问题，郭敦成等（1993）依据农药对生物体表穿透的相近相通规律，着意提高多菌灵极性，以增加其对棉根的穿透能力，同时，亦注重新配方的土壤稳定性研究，使新配方对棉花枯萎病的控制既具有速效又具有长效。经几年试验研究，研制出以多菌灵为主体，以调整其油水分配系数为目的，添加水杨酸、冰醋酸等助剂复混而成的新型杀菌剂治萎灵，除了具有原多菌灵的广谱杀菌特性外，还具有速效、高效、长效和促进棉花生长的特点。对棉花枯萎病菌的毒力是多菌灵的16.5倍（表7-10），施药后10天即可见效。治疗效果为82.3%（对照多菌灵的治疗效果为56.2%），有效控制期可达60～80天（表7-11，表7-12）。药剂菌丝生长抑制率（%）5.0002.50012500.6250.313（mg/kg）EC50（mg/kg）增效倍数多菌灵60.6243.2242.4942.0029.671.6810—多菌灵+助剂Ⅰ100.00100.0056.7248.3647.010.64531.91多菌灵+助剂Ⅱ100.0065.1861.1946.2710.510.78391.39多菌灵+助剂Ⅰ+助剂Ⅱ82.0576.9275.2767.0358.610.107316.53表7-10 助剂对多菌灵的增效作用试验地点稀释倍数调查天数（天）（距离药期）用药前/后病指对照区用药区治疗效果（%）备注湖北石首230250.00/7.620.00/0.6092.1350.00/14.880.00/2.2684.8无病土育苗移栽棉湖北石首250105.15/25.399.12/16.1081.4205.15/31.999.12/14.5690.7305.15/38.949.12/19.6883.1直播棉湖北鄂州2002037.5/41.6737.5/12.9286.38537.5/28.7537.5/1.6794.2直播棉湖北鄂州200200.00/11.000.00/4.3860.6850.00/2.670.00/0.1694.0直播棉湖北枝江300100.00/5.580.00/0.5073.1300.00/4.080.00/0.1589.0450.00/2.570.00/0.0697.5移栽棉湖北松滋300203.50/8.751.25/1.5086.7直播棉山东聊城3001065.5/68.0061.5/32.5051.54562.5/48.0061.5/3.0095.8直播棉安徽望江300208.44/30.303.20/9.7068.0408.44/39.403.20/4.7075.8678.44/12.503.20/2.0084.0直播棉安徽怀宁3002030.0/55.0040.0/18.5074.73030.0/64.0040.0/10.0088.3直播棉表7-11 各试验点治萎灵对棉枯萎病的治疗效果总汇病株级别用药后第35天用药后第63天处理区病情对照区病情治疗效果处理区病情对照区病情治疗效果Ⅰ级病株11.2521.2547.061.256.2580.00Ⅱ级病株31.2540.0021.888.7517.5050.00Ⅲ级病株59.2068.7513.8934.2150.0031.58表7-12 治萎灵对不同级别病株的治疗效果（%）治萎灵商品制剂为12.5%液剂，属低毒（由同济医科大学测定，1989）、高效、内吸性农药，具有保护与治疗作用，使用方便，可用作拌种、苗床泼浇和大田灌根及药钵育苗。以灌根对枯萎病的防治效果最好。但为节约成本、稳定效果，似宜采用环环把关的系统施药法：即对移栽棉采用药钵法育苗或拌种加苗床法泼浇（或定根水施药）再加大田挑治或普治；对直播棉采用拌种（定苗施药）加挑治或普治。为省药与安全起见，拌种浓度宜为0.8%（占用种量），灌根与泼浇以200～300倍稀释液为宜。在发病率不超过5%、病株级别不超过Ⅰ级时用药为宜。市场上用于防治枯萎病的商品农药品种较多，不同农药品种防治效果不尽相同（表7-13、表7-14），此外，不同用药方法，防治效果也不一样，因此，对不同农药防治效果的鉴别与方法值得研究。潘劲松等（2000）在实验室对市场上12个防治枯萎病的杀菌剂进行毒力测定，以EC50值作为抑制枯萎病菌生长的指标，值越小，抑菌效果越好，反之，则差。结果是多菌灵（沪产）0.77、多菌灵（杜邦产）0.96、恶霉灵1.14、甲基托布津6.28、喷克7.16、稳长一号11.62、代森锰锌16.65、腈菌唑18.28、菌毒清19.34、敌克松23.58、五氯硝基苯32.13、络氨铜52.20。这表明，在常规杀菌剂中，以多菌灵对棉花枯萎病病原菌毒力作用最强。处理施药前病指药后7天药后14天病指病指减退率（%）防效（%）病指病指减退率（%）防效（%）91%克萎星SP700倍液6.336.67-5.3713.415.3914.8551.0832%克菌EC2000倍液11.1712.00-7.4311.7312.28-9.9436.8330%菌无菌EC2000倍液13.5011.6713.5628.9712.666.2246.1250%枯黄萎灵WP800倍液11.8312.17-2.8715.477.1536.5665.2725%使百克EC1500倍液9.008.5024.6322.406.5527.2258.181.5%菌立灭EW1200倍液12.839.677.8338.0711.2412.3949.6650%枯萎绝WP600倍液8.507.83-21.7024.315.3337.2964.02清水（CK）9.1711.1615.96-74.05表7-13 7种农药对棉花枯萎病的防治效果（黄学军等，2002）处理（g/667m2）施药前病指第一次施药后7天调查第二次施药后7天调查病指防效（%）病指防效（%）32%乙蒜酮乳油13.312.17.1291.493.332%乙蒜酮乳油17.38.94.5550.199.532%乙蒜酮乳油20.07.34.6540.199.520%粉锈宁乳油13.35.74.8523.284.5清水（CK）5.010.0—21.0—表7-14 32%乙蒜酮乳油防治棉花枯萎病试验结果（李凤瑞等，2005）在对商品农药防治效果筛选方法方面，单文荣等（2001）通过滤纸条的抑菌法和离体组织抑菌法有机结合对市售农药及有选择性的组织进行药性测定和预选，找出了一些对棉花枯萎病菌防治有效的药剂和组配。试验除了注重筛选对病菌杀抑作用好的药剂，还注重筛选对病菌并无明显的杀抑作用，但通过寄主组织后却能较好地抑制病菌扩展的药剂，同时，也注重筛选有上下传导作用的药剂，并认为药剂复配后对棉花枯萎病杀抑效果更佳。具体方法如下。①针对市售药剂单筛时，方法如下：将配制的孢子悬浮液（10/10显微镜下观察约有50个孢子）均匀滴入改良PDA平板培养基上，使用经不同药剂不同剂量处理后的滤纸条（长约2.5cm，宽约0.4cm）分别进行抑菌测定，将各培养皿置28℃恒温箱培养3～5天后，与对照相比，判断各不同药剂不同剂量下的抑菌效果。②针对市售药剂有选择性两两组配筛选时，方法如下：将孢子悬浮液均匀滴入改良PDA平板培养基上，各药剂按不同剂量配制成药液，分别用滤纸条浸过不同药液，按一定组配分别十字交叉放入培养基上，置28℃恒温箱培养，根据滤纸条交叉处产生的抑菌状况进行定性分析，判断出增效、相加、拮抗、独立、相互拮抗、拮增作用的组配。①针对市售药剂单筛时，方法如下：将配制的孢子悬液（10/10显微镜下观察有50个左右孢子）倒入改良PDA平板培养基上，使用经不同药剂不同剂量处理后的离体组织分别进行抑菌，置28℃恒温箱培养3～5天后，与对照相比，判断各不同药剂不同剂量下的抑菌效果。②针对市售药剂有选择性两两组配筛选时，方法如下：将孢子悬液均匀倒入改良PDA平板培养基上，各药剂按一定剂量和组配两两配制成药液，分别处理离体组织，将药剂处理过的离体组织分别放入培养基上，设清水（对照），待7～10天后，观察各两两组配通过离体组织对枯萎病的抑制等情况。选择几种抑制效果较优良的组配，对水培离体组织进行先接菌后施药，与对照相比，观察效果。①滤纸条抑菌试验。药剂学单筛记载方法：5级：抑菌半径大于0.5cm；4级：抑菌半径在0.3～0.5cm；3级：抑菌半径在0.1～0.3cm；2级：抑菌半径在0.1cm以下；1级：几乎无抑菌现象，但在滤纸条周围菌落有减菌等现象；0级：同于对照。②离体组织抑菌试验记载方法：5级：抑菌圈半径0.5cm以上，离体组织上不着菌；4级：抑菌圈半径0.1～0.5cm，离体组织上不着菌；3级：抑菌圈半径0.1cm以内，离体组织上没有明显可见的菌丝；2级：离体组织上微见菌丝，不见抑菌圈；1级：离体组织上长满菌丝，但不如对照发达；0级：同于对照，布满菌丝且发达。一般说来，防治棉花枯萎病的用药方法有浸种法、浇灌法（浇根）、茎叶喷雾法和茎部注射法（待棉苗一片真叶完全展开时，用微量注射器每株注射20μl，注射部位为茎近地面1cm处）。目前，生产上以茎叶喷雾法为主要方法。刘峰等（2005）比较了这4种方法后指出，注射法防效最高，喷雾法、药液浇灌法、浸种法防效较差。注射法对棉苗产生一定伤害，但根据诱导抗病理论，伤害本身也是一种诱导方式，因此，诱导抗病和药剂的联合作用可能是该法防效较高的原因。多菌灵水杨酸浸种、浇灌和注射对枯萎病防治均有一定防效，而喷雾防效较低，表明该药剂可以由根吸收和向上输导。氟硅唑注射和喷雾防效高于多菌灵水杨酸，浇灌和浸种则均没有明显效果，可能是由于其向下输导作用强于向上输导作用所致。而敌菌丹尽管没有内吸活性，但其注射和喷雾防效也高于具有内吸活性多菌灵水杨酸，其作用机制有待明确（表7-15）。处理浓度（μg/ml）注射茎叶喷雾病株率（%）病指防效（%）病株率（%）病指防效（%）敌菌丹10009.763.0572.2712.03.3357.36菌毒清150025.717.1435.0925.48.33-6.66氟硅唑100013.794.3160.8214.464.2245.97多菌灵水杨酸100019.355.6548.6421.056.5815.75清水对照—36.011.0—18.757.81—表7-15 药剂注射和喷雾防治棉花枯萎病效果二氧化氯ClO2是目前国际上公认的第四代氧化型杀菌消毒剂，具有高效、广谱、快速、安全、无毒副作用等突出优点，被世界卫生组织（WHO）和世界粮农组织（FAO）列为A1级产品，其杀菌消毒原理是凭自身强氧化性，对微生物（如真菌、细菌、病毒等）的细胞壁有很好的吸附性和透过性、可有效地氧化细胞内的酶，迅速控制微生物蛋白质的合成，达到杀菌消毒的目的，而动植物的酶系统主要存在于细胞的细胞器中，加上动植物自身保护系统，从而可基本保证不会受ClO2的伤害。但由于ClO2在国内应用研究起步较晚，目前，国内外其应用范围大多都局限于医疗、水质处理、漂白、食品工业、防腐保鲜等领域，而在农业应用方面，国外的报道很少，在我国农业种植方面的应用基本处于空白阶段。王化明等（2003）根据二氧化氯本身具有高效、广谱、无毒、无有害残留等特点，凭自身的强氧化性，通过破坏病原菌蛋白质结构而起到杀灭菌毒作用，结合棉花枯萎病的发病情况，经田间试验表明，其防治枯萎病效果好于多菌灵和甲基托布津（表7-16）。从表7-16中可以看出，在所有试验药剂中，以80mg/kg的ClO2溶液防治棉花枯萎效果最佳，其应用后调查统计其平均发病株率只有2.7%，其次是40mg/kg和120mg/kg的ClO2溶液，其平均发病株率分别为8.2%和10.3%，而200mg/kg和10mg/kg的ClO2溶液防效较差，且200mg/kg处理已出现叶子烧焦等药害，多菌灵、甲基托布津的平均发病株率明显高于80mg/kg的ClO2溶液处理。由此可见，用1%～2%棉花专用添加剂的80mg/kg的ClO2溶液比多菌灵、甲基托布津对棉花枯萎病的病原菌有更强的杀灭及更好的对病害起到防治作用。在随后的追踪调查中还发现，和清水（对照）试验相比，40mg/kg、80mg/kg、120mg/kg ClO2等处理后，棉花的黄萎病也大大减少，棉花成铃多，且纤维质量都比没用的有所提高，说明对棉花品质有所改善，对黄萎病防治也有很好的作用。处理（mg/kg）清水（对照）ClO2104080120200600倍液多菌灵750倍液甲基托布津3次重复的平均发病株率（%）51.342.78.22.710.117.619.316.2表7-16 几种药剂防治棉花枯萎病田间试验结果由于棉花枯萎病的病原菌为害棉株的维管束，目前，世界各国防治棉花枯萎病的主要措施是选育和推广抗病品种以及采取一些农业措施，至今尚缺乏高效的防治药剂。农抗120是一种广谱内吸型抗真菌病害的农用抗生素生物杀菌剂，对白粉病、枯萎病、炭疽病等多种作物病害具有较好防效。它与多种化学杀菌剂混配具有增效作用，但存在着施药量大，成本偏高的不足。农抗120与多菌灵均为内吸性杀菌剂，开发两者混配的新型农药，在生产上防治棉花枯萎病，不仅具有生物农药的环保无公害特点，而且能延缓化学农药多菌灵的抗性发展，显著提高防效。韩新才等（2008）在室内进行农抗120与多菌灵不同的配比混剂对棉花枯萎病菌联合毒力测定和增效作用研究。结果表明（表7-17），农抗120对棉花枯萎病菌的抑菌浓度区间为285.7～666.7 mg/L。多菌灵对棉花枯萎病菌的抑菌浓度区间为333.3～1000mg/L。农抗120 EC50值为407.4mg/L，小于多菌灵EC50值574.5mg/L表明，农抗120对棉花枯萎病菌的毒力大于多菌灵。农抗120与多菌灵不同配比混剂，其EC50值为223.5～230.9mg/L，小于农抗120单剂EC50值407.4mg/L和多菌灵单剂EC50值574.5mg/L表明，两者混配其联合毒力远大于两个单剂。农抗120与多菌灵1∶1、1∶2、2∶1比例混配其增效系数（SR）分别为2.13，2.19，1.99，均大于1.5，表现为显著的增效作用。其中，配比为1∶2时，SR值最大，为2.19，而配比增加为2∶1时，SR值下降为1.99，说明农抗120与多菌灵以1∶2比例混配，为具有最佳增效作用的混配比例。农抗120对植物病原菌的作用机理是抑制孢子萌发，导致菌丝畸变和原生质体凝聚等（朱薇玲等，2006），具有保护和治疗作用。多菌灵的作用方式是干扰菌丝体有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂（黄伯俊等，2004）。两者混配对棉花枯萎病菌具有显著的增效作用，其增效机理及田间试验需进一步研究。处理毒力回归方程rEC50（mg/L）EC（th）50（mg/L）SR农抗120y=-14.1326+7.3331x0.9789407.4——多菌灵y=-3.3149+3.0133x0.9839574.5——农+多（1∶1）y=-8.8202+5.8892x0.9890223.5476.12.13农+多（1∶2）y=-12.5832+7.4457x0.9893230.9505.72.19农+多（2∶1）y=-9.1611+6.0229x0.9813226.5450.71.99表7-17 不同配比农抗120与多菌灵混剂对棉花枯萎病菌的抑制毒力及增效作用农抗（SO24）是由链霉菌YBO24（StreptomycesYBO24）产生的、对多种植物病原菌，如棉花黄萎病菌（Verticillium dahliae）、禾谷丝核菌（Rhizoctonia cerealis）、苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、小麦赤霉病菌（Fusarium grimiaearum）、棉花枯萎病菌（Fusarium turcicum）等有较强抑制作用的一种新型生物农药。现在已经完成其产生菌的选育、发酵工艺和分离纯化工艺等方面的基础研究工作。为加快该农抗的研制和推广应用，文才艺等（2007）研究以禾谷丝核菌和棉花枯萎病菌为指示菌，对农抗SO24的作用机理进行了初步探索。研究结果指出，SO24对禾谷丝核菌和棉花枯萎病菌菌丝生长有抑制作用。处理2天后，菌丝体逐渐皱缩，菌丝变得稀疏易分开；8天后，处理菌丝均全部溶解，而对照组菌丝生长正常。SO24对禾谷丝核菌和棉花枯萎病菌菌丝形态结构的影响（图7-5、图7-6），处理24h后，菌丝形态无明显变化；处理2～7天后，部分菌丝细胞内含物减少，液泡变大，形成大小不等的空泡，透光度降低，且空泡越来越多，越来越大；处理8天后，菌丝体溶解、断裂，液泡消失，原生质外渗明显；对照菌丝体则粗细均匀且表面光滑，原生质正常，液泡清晰可见。由此可见，SO24对禾谷丝核病菌和棉花枯萎病菌菌丝有明显的破坏作用。不同浓度SO24对禾谷丝核菌生长的抑制强度不同，用20%的SO24处理时，禾谷丝核菌菌丝全部溶解，培养8天后未见生长；用10%的SO24处理时，仅部分溶解，而未处理对照组的菌丝生长良好。进一步用生物测定法研究其抑菌能力的结果表明，在PDA平板上各浓度间的抑制率差异明显（表7-18），随浓度的增大，SO24对禾谷丝核菌的抑制作用增强，当浓度为20%时，抑制率可达81%说明，SO24对禾谷丝核菌有较强的抑制作用，但作为生物农药开发和应用，还有待于进一步提高发酵效价和优化分离纯化工艺。为了进一步明确其抑制作用机理，分别将10%和20%SO24处理8天后的禾谷丝核菌丝在无菌条件下用无菌水冲洗后接种于PDA平板上，28℃条件下培养，结果发现，表观上已经溶解的菌丝在解除SO24的作用后仍能正常生长。由此可见，SO24对禾谷丝核菌菌丝生长的作用表现为抑制，而不是杀死。这一结果与目前已报道农用抗生素如井冈霉素对病原菌的作用方式类似。项目CKSO24浓度（%）51020直径（mm）4836239抑制率（%）0255281表7-18 不同浓度的SO24发酵液对禾谷丝核菌菌丝生长的抑制率试验结果还表明，SO24对棉花枯萎病菌孢子萌发有明显的抑制作用。对照组棉花枯萎病菌孢子萌发正常，48h后萌发率达到97.5%；而SO24处理后，孢子萌发率显著降低，并且处理时间越长、SO24浓度越高，孢子萌发率的降低越显著。20%的SO24处理48h后，孢子萌发率为零，即20%发酵液能完全抑制孢子的萌发。由此可见，SO24对病原菌孢子萌发具有持续的抑制作用。图7-5 SO24对棉花枯萎病菌菌丝形态结构的影响图7-6 SO24对禾谷丝核菌菌丝形态结构的影响随着化学农药在使用中产生的一系列公害问题被发现，如环境污染、杀伤天敌、破坏生态平衡、3R（Residue，Resistance，Resurgence）等问题，已引起人们的普遍关注。因此，开发高效、低毒、低残留的新型无公害农药，逐渐成为植物病害防治的重要途径。昆虫、病原菌与植物经过几亿年的共同进化，植物体内形成了多种能有效抗御有害生物侵袭的机制，包括植物的形态、行为以及体内产生的次生代谢物质。植物是生物活性化合物的天然宝库，其产生的次生代谢产物超过40万种，其中，大多数化学物质如萜烯类、生物碱、类黄酮、甾体、酚类、独特的氨基酸和多糖等均具有杀虫或抗菌活性。从植物体内的次生物质中寻找能抑制有害生物的有效成分，人工直接提取应用或明确有效成分结构后人工合成制作农药，已成为无公害农药的开发热点之一。苍耳（Xanthium sibiricumPart）系菊科苍耳属植物，在山东省分布很广泛，是一种常见的田间杂草。果实苍耳子是常用中药，是中医临床上散热、解疮毒、通鼻窍、痹症的要药。苍耳子还有消炎、镇痛、抗病毒、抗细菌的药理作用。苍耳叶提取的挥发油对某些真菌具有抑制作用。在农业上可用来防治菜青虫等农业害虫。苍耳对一些植物病原真菌有较强的抑制作用。而苍耳虽有抑菌活性，但未见对苍耳的抑菌作用详细、深入的报道。为此，刘林等（2003）对苍耳中抑菌物质的提取溶剂及活性部位进行了初步筛选。结果表明，苍耳中含有较强的抑菌活性成分，具有明显的开发研究价值。其中，苍耳全株和苍耳叶的乙醚、丙酮提取液抑菌作用较强（表7-19）。乙醚和丙酮是比较适合的提取溶剂，可以从苍耳中较有效地提取抑菌活性成分；苍耳中抑菌活性最高的部位是苍耳叶，苍耳根的抑菌活性也较好。苍耳提取液是一种混合物，其中，某些成分可能会对某些病菌具有促进生长作用。若对提取液进一步分离纯化，可能会得到只对病菌具有抑制作用的化学物质，且抑菌作用会在很大程度上提高。供试菌种乙醚丙酮石油醚全株根果实茎叶全株根果实茎叶全株根果实茎叶棉花枯萎病菌抑制率（%）79.243.236.236.083.676.858.927.939.688.458.032.441.019.042.3苹果腐烂病菌抑制率（%）100.089.347.561.9100100.079.714.091.310090.583.036.820.241.1葡萄白腐病菌抑制率（%）100.075.320.842.0100100.085.426.016.710090.869.814.619.465.4构巢曲霉抑制率（%）—59.041.113.175.3—64.029.833.286.9—59.021.57.251.8表7-19 苍耳根、茎、叶提取液对4种病菌的抑制作用芹菜（ApiumL.）为伞形花科（Umbeliferae）一年生或多年生草本植物。它约有20个种，分布于全世界温带地区，而中国仅有2个种，分别为旱芹（Apium graveilensL.又叫药芹或香芹）和细叶旱芹（Apium leptophyllum），其中，旱芹为模式种。芹菜含有丰富的胡萝卜素、维生素及挥发性芳香成分，并具有极好的药用功能，还有一定的抑菌杀虫活性。Sipaiiiene等（2003）发现，芹菜叶提取物对大肠杆菌（E.coli）等6种菌具有高度的抑制作用。Afek等（1995）亦曾发现，旱芹的诱导产物对灰葡萄孢（Botrytis cingrea）、链格孢（Alternaria alternate）有较高活性。Oussalah等（2006）研究报道，旱芹精油能抑制引起肉类腐烂的Pseudomonas putida菌株。刘福光等（2009）对11种伞形科植物粗提物进行了农用抑菌活性的初步筛选试验，结果发现，旱芹粗提物有很好的抑菌活性。Monir等（2001）研究发现，旱芹种子中的3-正丁基4，5-二氢内酯（3-N-butyl-4，5-dihydrophthalide）在12.5μg/ml和5μg/ml浓度下，对线虫P.redivivus和C.elegans杀灭率可达100%；研究中还发现，此化合物对埃及伊蚊（ Aedesaegypt）也有较好的杀灭作用。金阳等（2006、2008）研究发现，芹菜中莰酮类化合物对小菜蛾等害虫有很好的防治作用，并对此类物质进行了合成。魏立强等（2001）在前人研究的基础上，进一步进行盆栽活体试验，研究旱芹粗提物对棉花枯萎病的抑制作用。结果表明，旱芹粗提物灌根对棉花枯萎病的抑制作用，在一定浓度下随浓度的增加而增加，病指随浓度的增加而减小。在浓度为10μg/ml时，病指为11.07，防治效果达到77.71%，明显高于对照药剂的相对防效27.77%（表7-20）。处理浓度（μg/ml）病指防治效果（%）旱芹粗提物2011.1877.491011.0777.71517.7564.262.521.6254.461.2525.00CK49.66—表7-20 旱芹粗提物灌根对盆栽棉花枯萎病的防效蒿属植物含有许多单萜及倍半萜化合物，生理活性成分种类较多，经常被应用于传统医学实践，加之植物原料来源丰富，所以，蒿属植物正受到越来越多的注意。郭艳等（2009）在试验条件下，采用菌丝生长速率测定法，以棉花枯萎病菌为供试菌，对茵陈、黄蒿、艾蒿3种蒿属植物提取物的抗菌活性进行了研究。结果表明，供试3种蒿属植物提取物对棉花枯萎病菌具有较好的抗菌活性，其中，尤以艾蒿提取物的抗菌活性强而稳定，48～96h对上述枯萎病菌的菌丝抑制率均达80%以上（表7-21）；丙酮提取物的抗菌活性强于乙醇提取物，前者的EC50为1.4785mg/L，后者的为3.2090mg/L。间歇振荡法、超声波法、冷浸法提取物对供试菌的72h菌丝抑制率分别为84.34%、84.56%和88.70%，可见，同种溶剂不同提取方法所得提取物抗菌活性基本一致。供试植物对棉花枯萎病菌的抑制率（%）48h72h96h茵陈（Artemisiacapilaris）71.0863.1151.81黄蒿（A.annual.）77.1161.7224.7艾蒿（A.argyi）83.7388.780.19表7-21 不同蒿属植物提取物对枯萎病菌的抗菌活性植物精油作为易挥发的小分子物质，结构简单且生物活性多样，在有害生物控制的应用方面，具有低毒、高效、环保、选择性高等优点，吸引了研究人员的广泛关注。八角茴香（Illicillm verumHook.f.）是木兰科八角属植物，对八角茴香精油的研究主要集中在化学成分及其在医药及食品等方面的应用，在农业病虫害防治方面的研究尚未见文献报道。刘志希等（2010）以棉花枯萎病菌为靶标菌，用八角茴香精油为植物材料，通过水蒸气蒸馏法制备精油，在利用GC-MS分析其化学组成的基础上，柱层析分离纯化了精油的主要化学成分——反式茴香醚，最后通过比较八角茴香精油与反式茴香醚对棉花枯萎病菌菌丝生长抑制作用。由图7-7可知，棉花枯萎病菌菌丝在带药培养基中的生长受八角茴香精油及其主要成分的抑制，并表现出明显的量效关系。在供试浓度高于1.00μl/ml时，菌丝生长抑制率大于93.3%；在浓度低于0.50μl/ml时，菌丝生长抑制率小于30.0%；抑制中浓度（EC50）为0.50～1.00μl/ml。在相同测试浓度下，该精油与其主成分反式茴香醚的抑制活性接近，精油的活性略高，这表明反式茴香醚是八角茴香精油中的主要抗真菌活性成分（含量高达94.57%），其他组分可能起协同增效作用。从已知抗菌活性成分反式茴香醚的结构看，丙烯基苯的结构单元可能是抗菌活性的毒性基团，Moliszewska等（2003）的研究证实，具有丙烯基苯结构单元的天然产物，如α-细辛醚，β-细辛醚，丁香酚，3，4-二甲氧基-丙稀苯等对水稻纹枯病菌、灰葡萄孢菌、小麦镰刀菌等植物病原真菌在一定浓度下表现出较强的抑菌活性。因此，对丙烯基苯类衍生物的合成、抗植物病原真菌活性及其构效关系的研究，意义重大。图7-7 八角茴香精油及反式茴香醚对棉花枯萎病菌的抗菌活性辣椒为茄科植物辣椒（Capsicum frultescenceL.）的果实。辣椒果实中的主要药用成分是辣椒碱，它是一种极度辛辣的香草酰胺类生物碱，为辣椒果实中辛辣的主要化学成分，具有抗菌杀虫的药理作用，主要分布在辣椒籽及果皮内表细胞之中。研究表明，辣椒粗提液有较好的杀菌效果。茶皂素是从茶子饼中提取的一种皂苷类物质，在茶子饼中的含量为10%～14%。具有皂苷的一般通性，味苦，辛辣。茶皂素在农药上可用作杀虫剂、杀菌剂和农药助剂。一是利用茶皂素本身杀虫、灭菌功能产生农药作用；二是利用茶皂素良好乳化、扩散、湿润等性能作农药助剂。因此，可用其配制成生物农药，此生物农药对人畜、农作物无害，且耐雨水冲刷。关于辣椒碱对病原菌的抑菌活性所见报道不多。李芳等（2011）用该实验室研制的植物源农药5%辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉花枯萎病防治进行了初步的研究。结果指出，5%辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉花枯萎病菌菌丝生长有显著的抑制作用，并且随着质量浓度的增加抑制作用增强（表7-22）。当其质量浓度低于5mg/ml时，抑菌圈直径与对照间无显著差异；当其质量浓度达12.5mg/ml时，抑菌圈直径与对照间有显著差异。将高浓度试剂处理后完全不生长的菌饼转移到PDA培养基平板上培养后，菌体能够生长表明，5%辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉花枯萎病菌起抑制菌丝生长的作用，但并未将菌丝杀死。对培养后的菌丝悬浮液镜检，与空白对照相比，药剂处理后的菌丝出现以下变化：①菌丝短，分枝较少，粗细不均。②菌丝形成膈膜明显弯曲、多、长短不一、分布不规则。③菌丝内含物变稀、变少、分布不均匀。茶皂素作为一种优良的表面活性剂，与辣椒碱混用后，对抑制棉花枯萎病菌丝的生长有增效作用。辣椒碱和茶皂素及两者的混剂对菌丝有明显的抑制作用，但只是抑制生长，而不是杀死，这与辣椒碱是内吸性杀菌剂的性质是一致的。至于辣椒碱与茶皂素的混剂对抗性菌株的作用特性和活体作用效果如何，尚待进一步研究。质量浓度（mg/L）5%辣椒碱·茶皂素微乳剂抑菌率（%）5%辣椒碱抑菌率（%）茶皂素抑菌率（%）5.031.5061.653.986.2538.0264.5610.0712.561.3767.2010.0325.067.2469.489.4750.080.6772.289.42表7-22 5%辣椒碱·茶皂素微乳剂抑菌试验结果

据国内外研究报道，已知为害棉花的植物线虫属和种主要有根结线虫（Meloidogynespp.）、肾形线虫（Rotylenchulusspp.）、纽带线虫（Hoplolaimusspp.）Orlon（1910）指出，根结线虫的严重侵染，必然会破坏棉花对枯萎病的抗性。Martin等（1956）用南方根结线虫和枯萎菌联合接种，枯萎病发病率显著提高。线虫在病害复合症中，作为致病诱因，常使棉品种对枯萎病的感病性提高，线虫和病菌并存而协同发生，棉花枯萎病发生更加严重，Carber等（1953）指出，在有根结线虫存在时，棉花表现为高度感染枯萎病，但在没有根结线虫存在时，棉花则高抗枯萎病，表现了根结线虫对棉花感枯萎病的诱因作用。