培育抗病品种是一种经济有效的手段，成为解决苹果炭疽菌叶枯病的首选。引物序列如表3-1中所示，因为这两个标记已被报道位于苹果15号连锁群上 （Liebhard et al.，2002），所以将苹果炭疽菌叶枯病抗性基因 （命名为Rgls） 位点定位于15号连锁群上。在本研究中，576 个 SSR 标记，包括300对以前发表的标记和276 对新开发的标记被首次应用于抗炭疽菌叶枯病基因位点的定位。这两个标记可以应用于抗炭疽菌叶枯病分子标记辅助育种，在定植前对幼苗进行抗性筛选。这将会显著的降低苹果抗炭疽菌叶枯病育种的成本，缩短育种时间。本研究结果对深入开展抗炭疽菌叶枯病的遗传机理和分子机制研究有重要的意义，并为进一步的抗性基因的图位克隆和基因功能验证奠定基础。

研究苹果对炭疽菌叶枯病的抗性遗传规律，对筛选与炭疽菌叶枯病抗性基因连锁的分子标记，利用分子标记辅助育种有着极其重要的意义。4个杂交组合的F1 单株进行了苹果炭疽菌叶枯病的抗性鉴定，以期揭示苹果炭疽菌叶枯病的抗性遗传规律，为发掘与抗性基因紧密连锁的分子标记，开展苹果抗炭疽菌叶枯病分子育种奠定基础。将收集到的 ‘嘎拉’ 苹果炭疽菌叶枯病病叶在25℃室内保湿培养3 d，从病叶上产生的分生孢子中，挑取单孢，在PDA培养基中培养，获得纯培养菌株，并在5℃冰箱中保存。这充分显示不同品种 （系） 对苹果炭疽菌叶枯病的抗性差异明显，遗传性对苹果炭疽菌叶枯病的抗性起着主导作用，同时也证实了上述品种 （系） 可以作为苹果炭疽叶枯病遗传规律研究的典型材料。综合不同杂交组合的亲本及后代对苹果炭疽菌叶枯病抗性的表型性状分析结果，可以假设本试验群体中，对苹果炭疽菌叶枯病表现为抗病的植株基因型为rr，感病植株为 RR或 Rr，并由此推测出供试亲本品种 （系） ‘

近几年来，苹果腐烂病在我国尤其是冀北地区，连续多年中偏重到大发生，已成为对苹果生产影响最大的病害，严重制约着我国苹果产业的健康发展。苹果腐烂病又称串皮湿、臭皮病、烂皮病，是一种发生范围广、为害程度重、损失极大的苹果树病害，全国各苹果产地均有发生，尤其是近10多年来在全国各地蔓延较迅速。苹果腐烂病的病原物是苹果黑腐皮壳，属子囊菌亚门真菌。苹果腐烂病菌是一种寄生性很弱的兼性寄生菌，具杀生寄生性。3.1.1 加强水肥管理，提高树势 在秋季落叶后至早春萌芽前，增施以有机肥为主，N、P、K、微肥配合的基肥，适时追肥，叶面喷施氨基酸叶肥、沼渣沼液等，要根据不同树龄、不同土壤条件、不同时期采取平衡施肥措施，通过增施有机肥和磷钾肥、补充叶肥等手段，增强树体对腐烂病的抵抗能力；萌芽前、春梢生长期、果实膨大期、采果后和封冻前要及时根据灌水指标灌水，保证土壤的田间持水量，尤其要防止春旱，但也要注意雨季及时排水，

并利用实时荧光定量 PCR （qRT-PCR） 技术对候选基因经过炭疽叶枯病病原菌侵染后的不同时间段基因表达量的变化进行分析，寻找响应炭疽叶枯病病原菌侵染的抗病相关基因并对其进行详细的功能分析，以期揭示苹果抗炭疽菌叶枯病的分子机制用于全基因组重测序的材料为 ‘金冠’ ‘富士’ 及第三章中经过抗病鉴定的 ‘金冠’ב富士’ 的 F1 代群体中极端抗炭疽菌叶枯病的20个单株和极端感炭疽菌叶枯病的20 个单株。以上结果说明，5个候选基因均受炭疽菌叶枯病病菌的诱导，是苹果炭疽菌叶枯病抗病相关基因。SNP 标记的开发主要依赖于含有大量测序序列的数据库。这一结果与SSR标记所定位的抗炭疽菌叶枯病基因位点位置相吻合。SNP 广泛分布于基因组DNA中，且数量巨大。基因的相对表达量分析也表明，五个基因都不同程度的响应了病菌的诱导，是与抗炭疽菌叶枯病相关的候选基因。但是其参与抗病的机理和途径仍不清楚，深入的研究将继续展开。

上年苹果棉蚜、苹果瘤蚜和白粉病发生严重的果园，喷一次吡虫啉加硫磺悬浮剂。(4)随时刮除大枝、树干上的轮纹病瘤、病斑及腐烂病和干腐病病皮，并涂腐植酸铜水剂(或腐必清、农抗120、843康复剂)杀菌消毒。防治轮纹病、炭疽病，每隔15d左右喷药1次，重点在雨后喷药。斑点落叶病病叶率30%～50%时，喷布多抗菌素或异菌脲。做好叶螨预测预报，每片叶有7～8头活动螨时，喷三唑锡或四螨嗪。腐烂病较重的果园，做好检查刮治及涂药工作。(2)春梢停长后，全园追施磷钾肥，施肥后浇水，以后视降水情况进行灌水。同时采前20d全园喷布生物源制剂或低毒残留农药，如1%中生菌素或百菌清或27%铜高尚悬浮剂，用于防治苹果轮纹病和炭疽病。树干绑草把诱集叶螨。果实除袋后在树冠下铺设反光膜，同时进行摘叶、转果。检查并处理苹果小吉丁虫及天牛。拣拾苹果轮纹病和炭疽病的病果。(4)落叶后，清理果园落叶、枯枝、病果。土壤封冻前全园灌防冻水。(1)根据生产任务及天气条件进行全园冬季修剪。

采集接穗应选择健壮、无病虫害，特别是无病毒病的正常结果期树作为采穗母树，最好以无毒树作为母树。在母树上采取生长健壮、芽子充实饱满的1年生枝条，一般不宜采用幼树的枝条或徒长枝。图2-21 按小冠纺锤形高接已初步查明高接病主要有两种：一种是生理性原因，即嫁接所用砧木与接穗品种不亲和或亲和力差。图2-22 大抹头蹲接+靠接患潜隐性病毒病的高接树地上部一般表现两种症状：一是急性症状，即“苹果衰退病”。为预防高接病的发生和发展，在高接时和高接后应采取以下预防措施。其一，避免高接不亲和或亲和力差的品种。其二，杜绝对带毒砧树和用带毒接穗高接。应用无毒接穗高接。发现高接树新枝生长变弱，细根有枯死时，在树下根周栽植3～5株健壮的无病毒圆叶海棠或金冠、国光等品种的实生苗，等成活后采用脚接法嫁接于原来的树干上，这样可保持树体在接后的几年里正常生长结果。