1.苹果小叶病（1）症状 叶片狭小，叶缘上卷，病枝节间缩短，细叶簇生或丛状，病枝上的花芽减少，花小且不易座果。（2）病因 缺锌所致。● 土壤瘠薄；● 土壤板结；● 使用氮肥过多。（3）防治措施● 增施有机肥，改良土壤，结合秋施基肥，加施硫酸锌。● 发芽前全树喷施3%～5%硫酸锌。● 花后保护剂选用代森锌或丙森锌。2.苹果花脸病（1）症状 果实着色前无明显变化，着色后果面散生许多近圆形不着色的黄绿斑块，不着色的地方果面凹陷。（2）病因 是一种病毒病，即苹果褪绿叶班病毒。（3）防治措施 目前无有效防治措施，下列措施可减轻症状的出现及病害传播。● 增施有机肥，结合秋施基肥，加施硼砂或硼酸。● 用氨基酸原液涂干，加强树体营养。● 不用修剪过病树的锯、剪修剪健壮树。● 严格选用无病的接穗种砧木。3.苹果白粉病（1）症状 主要为害嫩枝、叶片、新梢，也可为害芽、花及幼果，病梢节间缩短，叶片细长，病芽瘦长尖细，鳞片松散。（2）病因 真菌病害，病菌以菌丝在芽的鳞片间或鳞片内越冬，在1年中4～9月为病菌侵染期5～6月为侵染盛期。（3）防治措施● 施足基肥，控制氮肥。● 结合冬剪，剪除病梢，病芽。● 发芽前喷氟硅吐、丙环吐、福星、金力土等清园。● 花序分育期喷剑力通、晴菌吐等。● 落花后根据病情喷施世高、特普吐、戊吐醇、福星、剑力通等。1.苹果桑天牛（1）危害 专门蛀食枝干，严重地破坏了输导系统而导致树势衰弱或死亡。（2）发生规律 2～3年发生一代，以幼虫在树干蛀道中越冬，7～8月成虫羽化，8月上旬产卵，产卵期30～40天。（3）防治措施● 结合冬剪，剪除被害新梢，集中处理。● 利用成虫产卵前取食嫩叶的习性，可在成虫期于树冠上喷乐斯本、安民乐等。● 11月份前用注射器将药液注人蛀孔内，注后用泥堵严孔口，药剂可用敌敌畏20 倍、安民乐20 倍或乐斯本20 倍等，也可在蛀孔内填人磷化铝片剂1/4～1/6片，然后用湿泥塞紧孔口。2.苹果绵蚜（1）危害 国内外重要的检疫对象，早期群集于苹果的枝干，枝条及根部，吸取汁液，被害部膨大或瘤，阻碍水分、养分的输导，严重时树体逐渐枯死，为害果实的萼洼及梗洼，影响果品质量。（2）发生规律 年发生15～20 代，以1～2 龄若虫在枝干、病虫疤边缘缝隙、剪锯口、根蘖基部或残留的蜡质绵毛下越冬。3月中旬开始活动，6月中旬左右为第一个为害高峰期，9月下旬出现第二次盛发期。（3）防治措施● 树上用药的关键时期：5月中旬及9月上旬选用药剂安发乐、乐斯本或安民乐+吡虫林。● 药剂灌根：4月中旬左右用安发乐或乐斯本400～500 倍对有绵蚜的树灌根。● 点治：小喷雾器用安民乐或乐斯本800 倍专喷有绵蚜的部位。相关链接梨病虫害的防治1.黑星病可以为害梨的所有组织。（1）症状 受害处先生出黄色斑，渐渐扩大后在病斑叶背面生出黑色霉层，从正面看仍为黄色，不长黑霉。果实受害处出现黄色圆斑并稍下陷，后期长出黑色霉层。（2）防治方法 在病害发病初期，用80%代森锰锌可湿粉剂600倍液、40%杜邦福星乳油8 000～10 000倍液、80%必备可湿性粉剂500～600 倍液喷雾，每隔7～10 天喷1 次，连续喷4～6次，也可与波尔多液交替使用。2.黄粉蚜为害梨果实、枝干种果台枝。（1）危害 以成虫、若虫为害，梨果实受害处产生黄斑稍下陷，黄斑周缘产生褐色晕圈，最后变成褐色斑，造成果实腐烂。（2）防治方法● 农业防治：刮树皮种翘皮以杀死越冬卵。● 药剂防治：在7～8月份喷10%吡虫啉2 000倍液；对于采用套袋栽培的梨园，应在5月底套袋前喷10%吡虫啉2 000倍液。3.康氏粉蚧主要人袋害虫之一。（1）危害 萼洼、梗洼处受害最重。被害处产生紫红色晕斑，停止生长，形成畸形果，严重时果面龟裂、干枯。（2）防治方法● 农业防治：刮树皮种翘皮以杀死越冬卵。● 药剂防治：喷蚧螨灵400倍液效果明显。荔枝病虫害有多种，以蝽象、蛀蒂虫、尺蠖、霜霉病、毛毡病等七种为主。1.蝽象（1）危害 为害嫩梢、花穗种果实，引起严重落果。（2）防治方法● 捕捉成虫。冬天低温时期（最好10℃以下），利用蝽象的假死性，摇动树枝，使成虫掉落地面而后捕杀。● 摘除卵块。3～5月成虫产卵期，采集卵块，集中消灭。● 药剂喷杀。3月中旬在成虫活动初期及4月中下旬至5月上旬若虫活动期，喷一次800～1 000倍敌百虫。2.蛀蒂虫（1）危害 蛀蒂虫幼果期蛀食果实、种核，结果后期为害果蒂处的幼嫩组织，果蒂处充满虫粪，造成落果。三月红、白糖罂、白腊受害较重，黑叶次之，晚熟种较少受害。为害叶片时，主脉被蛀空，叶片前半截枯黄。（2）防治方法● 做好果园冬季清园工作，扫除枯枝落叶烧毁。● 花穗期及果熟前20～25 天，喷药防治，用杀虫双500 倍或乐期本1 000倍液、兴棉宝1 500倍液、万灵2 500倍液喷杀成虫及叶脉内幼虫。成虫多在树冠内膛活动，喷药时注意树冠内膛的喷布。3.尺蠖（1）危害 以幼虫咬食嫩梢、嫩叶、花穗、幼果，春季荔枝开花期为害最严重。（2）防治方法 在荔枝抽穗后未开花前种谢花后用90%敌百虫800～1 000倍喷杀幼虫。4.卷叶蛾（1）危害 卷叶蛾也有很多种，以幼虫咬食荔枝嫩梢、嫩叶、及蛀食幼果，夏、秋、冬季为害新稍嫩叶。（2）防治方法● 做好果园冬季清园工作，扫除枯枝落叶烧毁，消灭越冬虫源。● 花开花前、谢花后，用敌百虫或敌敌畏喷杀幼虫。5.金龟子常见有铜绿金龟子种食花金龟子两种。（1）危害 以成虫取食叶、花、果为主。铜绿金龟子幼虫取食地下根部，为害幼树引起树势衰退。（2）防治方法● 人工捕捉成虫。在早上及傍晚飞集为害时用手捕捉、或利用金龟子的假死性，摇动树枝惊动跌落地面随即杀死。● 在傍晚时分成虫飞集为害时用敌百虫1 000倍或敌杀死3 000倍喷布树冠。● 于成虫出土前在施肥沟中淋施呋喃丹或辛硫磷毒杀出土成虫。6.霜霉病（1）危害 主要为害荔枝花穗种果实。花穗受害，病斑褐色严重时整个花穗枯萎。果实受害，果皮出现不规则褐色病斑，病斑无明显边缘，严重时全果发黑，连绵阴雨时果面上长出白色霉层。（2）防治方法● 夏季清园。果实采收后，结合修剪把病穗、病枝、病果、落地果等集中烧毁。● 荔枝抽穗前，地面喷射0.5%波尔多液或600 倍杀毒矾1～2次。在抽穗、嫩芽、幼叶受害最严重，被害叶的叶背毛毡状一面向内凹，绿色的叶面外凸卷曲如“狗耳”，每次新梢均可发生，削弱树势。被害花穗，极易脱落，影响座果，造成减产。7.毛毡病（又称荔枝锈蜱或肿叶病）（1）危害 发生十余世代以上，为害嫩叶，偶而亦可为害花穗、幼果、嫩枝。一片被害叶上之锈蜱有多至100 只。3～5月为害最为严重。被害幼叶初绿色加深并有针头状凸出，继之被害部扩大加厚，叶背产生白色茸毛，叶表肿胀凸出，光滑如瘿瘤状，弯曲，叶背茸毛由白色变成褐色。（2）防治方法● 采果后修剪清园，剪去被害枝叶。清除地上部残枝落叶，减少虫源。● 药剂防治：春秋梢萌发期，喷1 000倍三氯杀螨醇等药液。

苹果霉心病是近年来苹果果实上发生的一种重要病害。苹果霉心病又称苹果霉腐病、苹果心腐病，是苹果果实生长前期、采收前、贮藏期的主要病害之一，该病一般发生在果心部位，严重时可造成心室周围果肉腐烂，甚至烂到果皮下，严重影响了果农的经济收入。苹果霉心病主要是花期侵染。病菌在苹果枝干、芽体等多个部位存活，也可在树体上及土壤等处的病僵果或坏组织上存活，第二年春季开始传染。病菌随着花朵开放，首先在柱头上定殖，落花后，病菌从花柱开始向萼心间组织扩展，然后进入心室，导致果实发病。果实一般在贮藏期表现出来。在苹果霉心病防治上因群众不能够掌握住关键的防治适期，即花前、谢花后半月内的药剂防治，造成病菌的大量传播侵染，造成苹果霉心病发生重。为了更好地掌握苹果霉心病防治技术，从2005年开始，本站对苹果霉心病防治进行了系统的研究，具体研究如下：2005年，在陈村乡鱼池村进行了花期喷药防治红富士品种苹果试验。药剂主要有70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%多菌灵300倍液、50%甲霜铝铜300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液、70%百菌清300倍液，对照喷清水，共9个处理，每个处理喷5株树。喷药日期为花期4月20日和4月25日2次。仔细喷洒花朵，尽可能不漏喷。果实9月10日采收，土窑洞贮藏95天，2005年12月15日各处理剖果600个，调查各处理心腐果率。试验设在陈村乡南庄村，共设6个试验处理，即70%甲基托布津、大生M-45、菌毒清、扑海因、特谱唑及喷清水对照药液浓度同花期用药，品种为红富士。2006年为5月3日终花期喷药，9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。共设6个试验处理，即70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液及喷清水对照，品种为红富士。喷药时间为4月22日花期和5月5日终药期共两次喷药。9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。2005年花期喷甲基托布津为1.5%，大生为0.33%，菌毒清为1.83%，多菌灵为1.5%，甲霜铝铜为1.33%，扑海因为0.83%，特谱唑为0.5%，百菌清为0.67%，清水对照为6.83%。表明花期喷上述药液2次，对防治果实心腐烂果均有较好效果，以80%大生300倍液防效最好。2006年终花期喷药甲基托布津500倍液为3.17%，大生300倍液为2.17%，百菌毒清300倍液为1.67%，扑海因1000倍液为1.83%，特谱唑1000 倍液为1.5%，喷清水对照为7.17%。试验与2005年花期防效相比，终花期防效稍低于花期防效。在6种试验药剂中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。2006年花期加终花期两次喷药，甲基托布津500倍液为0.83%，大生300倍液为0.0%，百菌毒清300倍液为0.33%，扑海因1000倍液为0.5%，特谱唑1000 倍液为0.5%，喷清水对照为6.33%。在6种试验药中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）备注170%甲基托布津500倍液60091.5280%大生300倍液60020.33350%菌毒清300倍液600111.83450%多菌灵300倍液60091.5550%甲霜铝铜300倍液60081.33650%扑海因1000倍液60050.83712.5%特谱唑1000倍液60030.5870%百菌清300倍液60040.679喷清水对照（CK）600416.83表1 2005年花期喷药防治苹果霉心病效果序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）花期+终花期终花期花期+终花期终花期1甲基托布津300倍液6005190.833.172大生300倍液60001302.173百菌清300倍液6002100.331.674扑海因1000倍液6003110.51.835特谱唑1000倍液600390.51.56清水对照（CK）60038436.337.17表2 2006年花期+终花期和终花期喷药防治苹果霉心病效果通过多年的防治试验示范，我们认为采用以下的综合防治措施，可收到较好的防治效果。3.1.1 清除病原 苹果采摘后清除果园内的病果、病叶、病枝、丛生的杂草，刮除树体病皮，并带出果园集中处理。3.1.2 科学管理 增施有机肥料，增强树势，提高植株抗病性；合理灌水，及时排涝，保持适宜的土壤含量，防止地面长期潮湿；科学修剪，建造合理的树体结构，保持果园通风透光良好，可有效地控制或减少霉心病的发生。采收时对田间发病较重的果实，应单存单贮。采收后24h内放入贮藏窖中，窖温最好保持在1～2℃。一般10℃以下，发病明显减轻。花前和谢花后7～10天是防治苹果霉心病的两个关键时期，有效药剂为80%大生、扑海因、多抗霉素等。3.2.1 芽前用药 苹果发芽前或花芽萌动期用3～5波美度石硫合剂+0.3%五氯酚钠，40%福美砷100倍防治。3.2.2 花前加谢花后7～10天用药，提高防治效果 药剂为：80%大生、70%甲基托布津300倍液、50%扑海因可湿性粉剂1500倍、50%退菌特可湿性粉剂600倍、70%代森锰锌可湿性粉剂500倍，可以有效防治霉心病，还能兼治轮纹斑、斑点落叶病。苹果霉心病是由霉心和心腐2种症状构成，其中霉心症状为果心发霉，但果肉不腐烂，不影响果实食用价值和商品价值，心腐症状不仅果心发霉，靠近果心的果肉也由里向外腐烂，影响食用甚至无食用价值，这种症状严重影响果品的经济效益。通过以上试验，可以看出，以花期加终花期喷药防治苹果霉心病效果最好，其次为花期两次喷药，终花期喷药防效相对差一些。但是3种防治方法对苹果霉心病均有较好防效。

经营是指果树育苗基地的经济运营，是为实现既定的发展目标而进行的运筹、谋划、决策。其解决的是苗圃的战略问题，包括苗圃的发展方向、苗木生产计划、市场营销策略等。经营的目标是效益，经营状况好坏直接影响着苗圃效益的高低。经营者要对果树苗木市场需求及其变化有客观了解，能够充分认识到自身苗圃的优势和不足，做到扬长避短和优势互补，将自身优势与市场较好地协调和发展，使其生产的苗木产品符合市场需求，做到适销对路，取得良好的经济效益。管理即是管辖治理的意思，是对苗圃经营过程中的人、财、物、产、供、销，进行计划、组织、协调、指挥、监督等各项工作。管理者要在现有的资源条件下，合理组织和安排生产，合理配置和使用各种生产要素，提高产品质量和劳动效率，降低生产成本。1.调查内容（1）市场环境调查。主要是对国家和当地果树苗木市场的政策、标准、体制、经济发展状况以及社会发展需求等方面的调查。（2）市场需求调查。主要调查各地市场对果树树种、品种或各种规格苗木的供求状况、需求量、不同地区的发展情况和销售潜力等。（3）购买者的调查。主要包括经济水平、文化水平、发展规模等。（4）苗木产品调查。主要包括不同地区购买者对各种果树苗木的品种、质量和规格等的要求，以及各种果树苗木的市场供求情况、生产技术等方面的情况调查。（5）价格调查。主要包括消费者对苗木价格的反应，苗木品种价格的调整，新品种苗木的价格如何定价等。关键是要掌握价格动向，把握自身苗木市场竞争的主动权。（6）同行调查。主要调查同行生产者的数量、分布及基本情况；对同行生产者的实力和所生产的果树苗木的种类、特点及优势等进行全面综合分析。2.调查方法（1）电话或网络访问法。根据调查事项，采用座谈、走访、电话、网络等手段与购买者进行交流、沟通，获取相关的信息。（2）实地观察法。调查者依据调查事项，直接到苗木生产基地或果树苗木市场进行现场观察，最好要进行拍摄记录，以搜集所需资料的方法。（3）产前试验法。就是向市场投入少量本基地所产的果树苗木的新品种，进行试销，根据销售情况来分析决定生产数量和市场前景。通过典型调查、抽样调查、专题调查、市场试销等综合调查方法，集中购买者意向、销售人员意见、专家意见、市场试销情况等信息，结合人们的经验加以综合分析，对果苗及其产品市场作出判断和预测，可有效地规避可能存在的经济风险。对苗木生产基地进行功能分区，其目的在于合理利用圃地面积，便于生产管理和作业实施，提高生产效益。首先要进行实地测量，将生产用地和辅助用地按一定比例描绘在图纸上，要标明各育苗区的所用设施的平面轮廓。同时要注明生产用地中各种植区的面积、培育的果树苗木种类及数量等，同时要考虑苗木的移栽、检验、假植、包装、贮藏和运输等相关环节的安排。首先要做好调研工作，准确把握苗木生产基地自身的栽培技术水平、种源、设备、人力、物力、财力、自身的产品质量、在市场中的地位等背景资料；要依据当地的土壤状况、气候变化规律和农业经济发展水平等条件，因地制宜地发展适销对路的果树苗木，并确定适宜的生产方式。其次要根据资金周转、土地状况及当地果树发展需求、种类、数量等进行统筹规划，合理安排。1.制订合理的生产计划包括生产进度安排、时间安排以及一系列技术规范与要求等，并要考虑主要的生产程序和生产过程中可能存在的不利因素等。2.生产计划的执行和实施生产计划制订后，关键是执行和组织实施。要把计划和任务层层落实，同时要求苗木生产基地各基层单位要做好各个环节的作业计划，并要掌握计划执行的进度，确保苗木生产的各个环节的顺利进行，按时、按质、按量完成苗木生产任务，提高苗圃的生产经营水平和经济效益。3.作好生产记录苗木生产过程中应有专人负责作生产记录，要及时准确记录各个环节和主要生产过程，有助于积累经验，为下周期生产奠定良好基础。技术管理是指对苗木生产、包装、贮存等各项技术的科学组织与管理。加强技术管理有利于建立良好的生产秩序，提高本单位或行业的技术水平，扩大苗木种类和品种，提高苗木产量和品质，节约能耗，降低产品成本等。1.建立健全技术管理体系技术管理体系包括技术规范和技术规程，这是进行技术管理、安全管理和质量管理的依据和基础，是标准化生产的重要内容。（1）技术规范。是对各类苗木的质量、规格及其检验方法等作出的技术规定，是企业单位和个人在生产经营活动中行动统一的技术准则，可分为国家标准、地区标准、部门标准及企业标准。（2）制定技术规程的目的。技术规程是为了保证达到技术规范，对生产过程、操作方法以及工具设备的使用、维修、技术安全等方面所作的技术规定，苗圃可以根据自身的具体条件，自行制定和执行。2.注意事项制定技术规范和技术规程应注意以下三方面。（1）要以国家对果树苗木生产的规定和政策、技术标准为依据，同时要因地制宜地结合当地特点和地区操作方法、操作习惯等。（2）要对国内外先进技术的成就和经验结合自身和现有条件加以合理利用，防止盲目拔高或降低标准。（3）要广泛征求多方意见，并结合生产实践多次试行、总结修改后方可批准执行。在执行过程中应随着技术经济的发展及时进行修订，使之不断完善，确保技术规范、规程既严格又可操作性强。生产实践中果树苗木行业的质量管理主要有以下方面。（1）要依据国家标准和行业标准执行果树苗木产品质量检验，进行质量调查分析评价，建立质量保证体系。其次要建立并执行各项质量管理制度。企业或生产单位要实行质量责任制，要设专人负责质量管理工作。（2）要进行全面质量教育，帮助企业领导、技术人员和员工树立质量意识，要开展技术培训、技术考核、技术竞赛等各种有利于提高企业效益和长久发展的活动，鼓励职工钻研技术，提高技术水平。（3）要实行综合质量管理，把好各个生产阶段和每一个环节的技术质量关。做好质量信息反馈工作，积极听取消费者意见，及时反馈市场信息，改进和完善企业质量管理制度。果树生产提倡就地育苗、就地栽植的原则。但是因苗木生产需要的周期长，技术含量高或是品种、规格等不能满足当地果树生产发展需要时，就需要从外地购进苗木。首先要考查树种、品种是否具有发展前景和符合当地的适应性，要选择农业科研、推广机构的技术人员、市场销售人员、果树种植户，向他们咨询当前果树的主要栽培品种、市场销路情况，分析当前和今后一定时期内市场的需求。1.看苗木新鲜度新鲜苗木，出圃周期短，叶片、根系新鲜有光泽，没有变色、皱缩、萎蔫、干枯、腐烂现象。如果叶片失绿出现皱缩，枝条产生皱皮，根系失水干枯，多为苗木出土时间长，植株失水多，根系已死亡，栽后很难恢复生长。2.看苗木质量选优质果苗除品种纯正外，还要求枝干粗壮，多分枝，枝叶无病虫损伤，根系发达，主、侧根完整，损伤少，须根多。3.看芽的发育情况不同温度带地区的果树苗木，发芽早晚不同，要根据当地种植时间选购苗木。一般春季仍在休眠的苗木，栽后成活率较高，已萌芽长叶的苗木，栽后根系恢复生长慢，水分营养代谢失调，一般成活率较低。所以，购苗要选择时间，春季已发芽抽梢的苗木不要购买。

1.症状识别发病初期，幼苗茎基部产生椭圆形，暗褐色病斑，病株停止生长，叶片失水，萎蔫下垂。以后病斑绕茎一周扩展，缢缩、干枯，根部变黑直立枯死。潮湿条件下，病部有褐色菌丝体和土粒状菌核。2.病原幼苗立枯病立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn，属半知菌亚门、丝核菌属真菌。3.发病特点以菌核在土壤中和病残体上越冬。病菌在土壤中能够长期存活，在适宜的环境条件下，从伤口或表皮直接侵入为害。病菌可借雨水、农具等传播。苗床高湿，播种过密，光照不足，通风条件差，均有利于发病。4.防控技术（1） 选择土质疏松、排水良好的地段种植。（2） 实行轮作，合理密植。（3） 盆栽植株，雨后要排出盆中积水。（4） 定植后每隔10d喷施1次50%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液，或用50%福美双可湿性粉剂500倍液，或用70%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液防控。1.症状识别幼苗猝倒病发病初期幼苗茎基部呈水渍状斑，后逐渐变为淡褐色，并凹陷缢缩。病斑迅速绕茎基部一周，幼苗倒伏，幼叶依然保持绿色。最后病苗腐烂或干枯。当土壤湿度较高时，病苗及附近土表常有白色絮状物出现，即菌丝体。2.病原由多种真菌引起，其中最主要的是瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum （Eds.） Fitzp.，属鞭毛菌亚门、腐霉属。病菌腐生性较强，能在土壤中长期存活。3.发病特点病菌以卵孢子在土壤或病残体上越冬。在适宜的环境条件下，卵孢子萌发，产生孢子囊或游动孢子，借气流、灌溉水和雨水传播，也可由带菌的播种土和种子传播，引起幼苗发病和蔓延。育苗土湿度大、播种过密，有利于猝倒病的发生。连作或重复使用病土，发病严重。4.防控技术（1） 选择排水较好、通风透光的地段育苗。（2） 苗期要控制浇水量，土壤不宜过湿，播种不宜过密。（3） 病害严重的地区，避免连作，或播种前对土壤进行消毒，使用50%多菌灵可湿性粉剂，或用50%福美双可湿性粉剂600～1000倍喷施，用塑料布覆盖7d左右，1周后方可播种。（4） 发病初期，使用25%甲霜灵可湿性粉剂800倍液，或用40%乙磷可湿性粉剂200～400倍液，或用75%百菌清可湿性粉剂600倍液喷雾。1.症状识别主要发生于植株主干基部，有时也发生于根颈或侧根上。发病初期病部产生乳白色或肉色肿瘤，逐渐变成褐色或深褐色，圆球形，表面粗糙，凹凸不平，有龟裂。根系发育不良，细根极少，地上部生长缓慢，树势衰弱，严重时叶片黄化、早落，甚至全株枯死。根癌病2.病原根癌土壤杆菌 Agrobacterium tumefacins（Smith et Towns） Conn.，属细菌界，薄壁菌门、土壤杆菌属细菌。3.发病特点病菌在寄主癌瘤组织皮层内和土壤中越冬。病菌可随癌瘤组织在土壤中存活几个月到1年左右。病菌通过伤口侵入寄主，侵入后刺激细胞加速分裂，产生大量分生组织，从而形成癌瘤。苗木带菌是病害远距离传播的重要途径。呈碱性而潮湿的土壤，伤口多的寄主，发病严重。4.防控技术（1） 严格检疫，有肿瘤的苗木必须集中销毁。（2） 苗木栽种前用1%硫酸铜液浸5min，用水洗净后栽植。（3） 挖除病根后，周围的土壤用硫磺粉50～100g/m2消毒。（4） 苗圃应设在无根癌病的地区，如病区可实行2年以上轮作。果树根结线虫病种类很多，常危害果树根部及球茎等，导致地上部生长发育不良，叶片发黄，严重时可造成全株萎蔫枯死。1.症状识别根结线虫病线虫为害根部，在幼根上产生许多小根结，长大后似绿豆大小，近圆形，上生有细根毛。地上部长势衰弱，新生叶片尖、缘皱缩，呈黄白色，后渐变枯黄，提早落叶，严重者全株死亡。2.病原有北方根结线虫Meloidogyne hapla Chitwood、南方根结线虫Meloidogyne incognita （Kofoid et White） Chitwood等。属动物界，线虫门，根结线虫属。可为害多种蔬菜、果树及观赏果树。3.发病特点以卵和幼虫在根结和土壤中越冬。翌年春天，土壤中幼虫开始侵染新的须根，并借土壤、灌溉水等不断传播、繁殖、危害。4.防控技术（1） 加强检疫，勿栽植带线虫的苗木。（2） 发现病根及时处理，在病株周围穴施或沟施98%棉隆微粒剂30～40g/m2 ，或施用10%福气多颗粒剂2kg/667m2 ，或用1.8%阿维菌素乳油2500倍液灌根，用药后盖土。（3） 实行轮作，及时清除紫花地丁等野生寄主，减少病源。（三） 白纹羽病1.症状识别主要为害果树根部和根颈部。发病初期，病部皮层组织松软，出现近圆形褐色病斑。以后病部呈水渍状腐烂，深达木质部，并有黄褐色汁液渗出。后期病部组织干缩纵裂，木质部枯朽，表面有白色柔嫩的根状菌索缠绕，后转变为灰褐色或棕褐色。树势衰弱，叶片自上而下变黄凋萎，枝条干枯，最后全株枯死。2.病原树木白纹羽病褐座坚壳菌 Rosellinia necatrix （Hart.） Berl.，属子囊菌亚门、褐座坚壳属。可为害多种果树及观赏果树。3.发病特点病菌以菌核和菌索在土壤或病残体上越冬。当菌丝体接触到寄主果树时，菌丝体即从根部表面皮孔侵入。根部死亡后，菌丝穿出皮层，在表面缠结成白色或灰褐色菌索。菌索可以蔓延到根际土壤中，或铺展在树干基部土表。一般从3月中、下旬开始发生，6—8月为发病盛期，10月以后停止发生。4.防控技术（1） 严格实行苗木检疫制度，对可疑苗木用1∶1∶100倍波尔多液浸根1 h，或用1%硫酸铜液浸根3 h，或用2%石灰水浸根0.5 h，浸后用清水洗净栽植。（2） 选用无菌土壤和肥料栽培。（3） 重病区应实行轮作。（4） 加强栽培管理，促使植株根系发达，生长旺盛，提高植株抗病力。（5） 轻病株应刮去病部腐烂变色的组织或切除腐朽的根并销毁，对伤面可用70%酒精消毒，然后再涂以5%硫酸铜。亦可在病穴内灌70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液或用50%代森铵水剂400倍液防控。对重病株应及时挖除，集中销毁，并用20%石灰水进行土壤消毒处理。果树根部害虫又称地下害虫，是指生活于土壤中，主要以成、幼 （若） 虫为害果树的地下部分 （如种子、地下茎、根等） 和近地面部分的一类害虫，造成死株缺苗，是果树害虫中的一个特殊生态类群。我国已知地下害虫320多种，主要包括地老虎类、蝼蛄类、蛴螬类、金针虫类、蟋蟀类、地蛆类。地老虎属鱗翅目，夜蛾科，是重要的地下害虫。地老虎的种类很多，为害果树严重的有小地老虎 Agrotis ypsilonRottemberg、大地老虎A. tokionis和黄地老虎A. segetum等。其中小地老虎分布于全国各地，为害茄科、豆科、十字花科、葫芦科、百合科蔬菜、果树、花卉、苗木等100 多种果树。地老虎低龄幼虫昼夜活动，取食子叶、嫩叶和嫩茎，3龄后昼伏夜出，可咬断近地面的嫩茎，造成缺苗断垄甚至毁种。1.形态识别小地老虎大地老虎成虫黄地老虎成虫2.防控技术（1） 设置灭虫灯，或糖酒醋毒液诱杀成虫。（2） 清除苗圃杂草，减少着卵量及恶化低龄幼虫食料条件。（3） 泡桐树叶诱集，或清晨于断苗周围人工捕杀幼虫。（4） 在低龄幼虫期，叶面喷施50%辛硫磷乳油1000倍液，或用2.5%溴氰菊酯乳油3000倍液。防控3龄后的幼虫用青草拌90%晶体敌百虫毒饵诱杀，或用50%辛硫磷乳油1000倍液灌根。蝼蛄，俗称土狗、地狗、拉拉蛄等，属直翅目，蝼蛄科。常见的有东方蝼蛄 Gryllotalpa orientalis Burmeister、华北蝼蛄G. unispina Saussure两种。东方嵝蛄几乎遍及全国，但以南方为多。华北蝼蛄主要分布于北方。蝼蛄食性很杂，为害菊花、一串红、翠菊等多种花卉和草坪草。以成虫、若虫在土中为害多种果树种子、幼根、幼苗、茎、块根，块茎，被害处呈乱麻状。此外，蝼蛄在表土层活动时，造成纵横隧道，拱倒幼苗，使幼苗根部与土壤分离，因失水而枯萎，造成缺苗断垄。1.形态识别东方蝼蛄成虫华北蝼蛄成虫2.防控技术（1） 施用厩肥、堆肥等有机肥料要充分腐熟，减少蝼蛄产卵机会。（2） 灯光诱杀成虫。在闷热天气或雨前的夜晚在19：00—22：00时开灯诱杀。（3） 鲜草或鲜马粪诱杀。在苗床的步道上每隔20 m左右挖一小土坑，将鲜草、马粪放入坑内，次日清晨捕杀，或施药毒杀。（4） 毒饵诱杀。用炒香的麦麸、豆饼等加90%晶体敌百虫30倍液拌匀，于傍晚撒施，诱杀成虫及若虫。（5） 在蝼蛄产卵盛期，挖产卵洞 （洞口下5～10 cm） 捕杀卵及成虫。（6） 灌药毒杀。在受害植株根际或苗床浇灌50%辛硫磷乳油1000倍液毒杀成虫和若虫。金龟甲类害虫的幼虫统称蛴螬，属鞘翅目，鳃金龟科。为害果树严重的有铜绿丽金龟Anomala corpulenta Motschulsky、黑绒鳃金龟Serica orientalis Motschulsky等。金龟甲类害虫广泛分布于全国各地。成虫咬食樱花、梅花、桃花、海棠、月季、木槿、金橘、榆、刺槐、唐菖蒲、大丽花、杨、柳、柿、葡萄、桑等果树叶片，造成不规则缺刻，严重时，食尽叶片，仅剩叶柄。或将花瓣、雄蕊、雌蕊吃光。幼虫咬食果树根部，影响果树正常生长，甚至枯萎。1.形态识别铜绿丽金龟黑绒鳃金龟2.防控技术（1） 人工捕杀，或设置灭虫灯诱杀成虫。（2） 深耕土壤，促进幼虫、蛹、成虫死亡。（3） 成虫为害期喷施90%晶体敌百虫800倍液，或用40%乐斯本乳油1000倍液杀成虫。在幼苗生长期用90%晶体敌百虫30倍液拌于豆饼、油饼上，撒施于土穴 （沟） 中，诱杀幼虫。是用3%辛硫磷颗粒剂施于土中，也可用50%辛硫磷乳油1000倍液灌根杀幼虫。叩头甲类害虫的幼虫统称金针虫，俗名铁丝虫。在我国为害果树的主要有沟金针虫和细胸金针虫两种。细胸金针虫分布广泛，主要是幼虫咬食果树的种子和幼芽，也能咬食幼茎，受害部分不完全被咬断，切口不整齐。幼苗长大后，便蛀入根茎内取食，也能蛀入大粒种子及薯块内为害，被害严重时，果树逐渐枯黄而死。1.形态识别沟叩头甲细胸叩头甲2.防控技术（1） 成虫盛发期，在田埂上堆青草，诱集成虫，清晨捕杀。（2） 冬季翻地灭幼虫。（3） 用3%辛硫磷颗粒剂施于土中，或用40%辛硫磷乳油对水灌根杀灭幼虫。（4） 毒饵诱杀。用90%晶体敌百虫1 份，拌和豆饼碎渣、麦麸等16份，制成毒饵，用量为15～25 kg/hm2。蟋蟀类属直翅目，蟋蟀科。以大蟋蟀分布较广，为害严重。成虫和若虫均可为害多种果树幼苗，是重要的苗圃害虫。1.形态识别成虫体长40～50mm，黄褐色或暗褐色，头较前胸宽。前胸背板中央有1纵线，其两侧各有1个颜色较浅的楔形斑块。后足胫节具2列4～5个刺状突起。若虫外形与成虫相似。大蟋蟀2.发生特点1年1代，以3～5龄若虫在洞内越冬。翌年3—4月开始活动，6—7月成虫盛发，9月开始出现若虫，12月初若虫开始越冬。大蟋蟀为穴居昆虫，昼伏夜出，常在洞口附近觅食，除就地取食外，常将嫩茎切断拖回洞中。通常5～7d才出穴1次，但在交尾盛期外出较频繁，晴天闷热无风或久雨初晴的夜晚，出穴最多。此虫多发生于沙壤土，沙土，植被稀疏或裸露、阳光充足的休闲地，荒芜地或全垦林地等，潮湿壤土或黏土很少发生。3.防控技术（1） 毒饵诱杀。用敌百虫、辛硫磷等拌炒过的米糠、麦麸或炒后捣碎的花生壳，或切碎的蔬菜叶，施于其洞口附近，或直接放在苗圃的株行间，诱杀成虫或若虫。用毒饵诱杀，在播种前或者苗木出土前进行，效果较好。（2） 白天寻找大蟋蟀洞穴，拨开洞口封土，用80%敌敌畏乳油1000倍液或1%灭虫灵乳油2000～3000倍液灌入洞内，使其爬出或死于洞中。地蛆又名根蛆，是对为害果树地下部分蝇类幼虫的统称。国内分布广泛，为害严重的有种蝇和韭蛆等。种蝇属双翅目，花蝇科，分布于全国各地，为害白菜、甘蓝、萝卜、瓜类、豆类、葱蒜类等多种果树。1.形态识别种蝇2.防控技术（1） 合理施用充分腐熟的有机肥。（2） 冬灌或春灌可消灭部分幼虫，减轻为害。（3） 成虫发生期，用糖醋毒液诱杀。（4） 及时清除受害植株，集中处理。（5） 成虫羽化盛期，用 10%菊马乳油 3000 倍液，或用2.5%溴氰菊酯、20%氰戊菊酯乳油3000倍液，或用50%辛硫磷乳油1000倍液等喷雾防成虫；在幼虫危害盛期，用50%辛硫磷乳油1000倍液，或用2.5%功夫乳油1500～2000倍液灌根。

防治棉花枯萎病的农药包括除草剂类、化学类和生物类。除草剂类农药主要是氟乐灵；化学类农药是指杀菌剂和特殊的化学物质；生物类农药是具有防病作用的生物制剂。大量研究结果表明，除草剂可以影响由真菌、细菌、线虫或病毒等引起的植物病害。除草剂对植物病害的影响存在着正负两种截然不同的作用。即使同一种除草剂对同一种植物病害的影响也有差异。氟乐灵等二硝基苯胺类除草剂减轻植物病害的发生，已有许多报道（Buczacki，1973；Grau等，1997；Teasdale等，1979）；而且有研究证明，属于二硝基苯胺类的胺氟灵和胺硝草能减轻棉花枯萎病的发生（Youssef等，1985）。Grinstein等（1984）报道了氟乐灵能抑制棉花枯萎病的发生。但也有报告说，在温室试验中，土壤经氟乐灵处理后增加了感病品种棉花枯萎病的发病率（Youssef等，1982）。这种在同一除草剂与植物病害系统中结果的差异可能是由于所采用的技术、除草剂的剂量与质量、病原菌，土壤类型及作物品种等多种因子对除草剂与植物病害之间相互作用的影响而造成的（Papavizas等，1979）。宋凤鸣等（1990、1992、1993、1994、1995）和张元恩等（1994）就氟乐灵防治棉花枯萎病的效果及其机制做了较系统的研究，取得了具有理论意义和应用价值的研究成果。从枯萎病发病的时间动态看，氟乐灵处理组棉苗枯萎病的株发病率和病指显著低于对照。在接种后的第6天，处理组和对照组棉苗均开始表现枯萎病症状，且株发病率无明显的差异，此后，氟乐灵处理组枯萎病的株发病率增加较缓慢，接种12天后，株发病率增加趋于稳定，而对照组株发病率增加很快，接种后第18天达最高（图7-1）。图7-1 氟乐灵处理后棉苗枯萎病发病的时间动态（宋凤鸣等，1995）从病指看，氟乐灵处理显著降低轮作地苗床和连作地苗床上棉苗枯萎病的发病率及病指，其差异均达到显著或极显著水平（表7-1）。5月10日处理组病害发病率及病指比对照降低80%以上，均高于5月21日的下降率（在40%～60%），可见，氟乐灵处理减轻枯萎病发病的作用随时间推移而下降。连作地苗床和轮作地苗床上枯萎病发生和病指相差不大。来自氟乐灵处理苗床的棉苗移栽到大田后，在现蕾初期枯萎病的发病率和病指均明显低于对照棉苗（表7-2）。处理棉苗枯萎病发病率一般降低65%左右，病指降低65%～75%。从大田枯萎病发病率及病指来看，以连作地苗床棉苗移栽到连作棉田为最重，轮作地苗床棉苗移栽到连作棉田次之，轮作地苗床棉苗移栽到轮作棉田为最低。这也证明了轮作可以减轻棉花枯萎病的发生。苗床类型处理5月10日5月21日发病率（%）病指发病率（%）病指连作地苗床对照7.78±0.803.50±0.5114.67±1.357.45±0.24氟乐灵1.22±0.68**（84.53%）0.45±0.33**（87.14%）8.22±1.78*（43.97%）3.33±0.87**（55.30%）轮作地苗床对照7.33±0.843.14±0.2314.45±1.137.25±0.30氟乐灵1.31±0.29**（83.36%）0.42±0.14（86.62%）6.44±0.68**（55.43%）3.81±0.20**（61.24%）表7-1 氟乐灵处理后对苗床上棉苗枯萎病的抑制作用（宋凤鸣等，1995）苗床类型大田类型处理发病率（%）病指轮作地苗床连作棉田对照6.37±0.593.02±0.71氟乐灵2.15±0.12**（66.25%）1.07±0.16**（64.57%）轮作地苗床轮作棉田对照4.98±0.352.68±0.16氟乐灵1.76±0.35**（64.66%）0.69±0.14**（74.25%）连作地苗床连作棉田对照9.19±4.183.95±0.91氟乐灵3.22±0.61**（64.98%）1.17±0.35**（70.38%）表7-2 氟乐灵播前土壤处理对棉花现蕾期枯萎病发生的影响（宋凤鸣等，1995）张元恩等（1994）也报道了相类似的研究结果（表7-3）。处理病指生长箱中田间小区30天40天50天30天70天对照4954654095氟乐灵处理1520241145除草通1925371043表7-3 二硝基苯胺类除草剂对棉花抗枯萎病的抑制作用由氟乐灵诱导的棉花抗病性增加，不是氟乐灵对枯萎病菌抑制的结果，不是根部分泌物变化的结果，也不是促进益菌生长，拮抗病原菌的结果。因为氟乐灵对菌丝生长、孢子萌发的抑制作用十分有限（表7-4），也不影响枯萎病菌对棉花根部的侵入，而棉花抗枯萎性的提高，是棉花本身抗性机理变化的结果。处理萌发率菌落半径（cm）3h后6h后3天6天9天12天15天菌丝重（g）对照13.7741.893.105.506.727.338.000.63620.64100.6305氟乐灵20.6860.643.405.797.207.968.700.74120.72310.6954表7-4 氟乐灵对枯萎病菌孢子萌发和菌丝生长的影响（张元恩等，1994）氟乐灵对棉花本身抗枯萎病性的机理变化体现在以下7方面（宋凤鸣等，1933，1995）。出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12氟乐灵（μg/g）11.151.41**2.05**1.73**3.08**3.67**51.21*1.45**2.07**1.78**2.82**3.53**101.24*1.49**2.27**1.91**3.08**3.72**对照丙酮0.941.031.241.181.641.75灭菌水0.830.971.031.191.461.70表7-5 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内木质素含量的变化经氟乐灵播前土壤处理出苗后1～3周，2个供试品种棉苗植株内木质素含量均高于对照，这表明氟乐灵促进了木质素的合成与积累。但在5～10μg/g的氟乐灵处理浓度范围内，木质素含量没有差异。出苗后1～5周内，处理植株与对照植株内木质素含量的差异逐渐增大表明，氟乐灵处理对木质素合成与积累的诱导作用在这一期间是持续的。氟乐灵对抗病品种中棉所12木质素合成与积累的促进作用强于对感病品种浙肖棉1号的作用。出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12氟乐灵处理（μg/g）132*3351**68**82**93**533*3248**74**80**106**1036*3755**76**88**109**对照丙酮223030435460灭菌水212527415061表7-6 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内苯丙氨酸解氨酶活性的变化氟乐灵处理后，增加了2个供试品种棉苗植株内PAL的活性，说明氟乐灵对棉苗PAL活性具诱导作用，但在不同浓度处理之间，PAL活性差异不明显。在处理出苗后第二周内，2个供试品种棉苗植株内PAL活性的增加大于处理后第三周内的增加，表明氟乐灵对PAL活性的诱导作用发生较早；随着时间的推移，这种诱导作用逐渐减弱。氟乐灵对抗病品种中棉所12 PAL活性的诱导作用大于对感病品种浙肖棉1号PAL活性的诱导作用。但在中棉所12出苗后1周时，处理植株中，PAL活性与对照中的PAL活性没有显著性差异，可能与氟乐灵对中棉所12棉花的诱发作用较迟有关。氟乐灵处理后，2个供试品种棉苗植株内过氧化物酶活性高于对照，表明氟乐灵对过氧化物酶活性具有促进作用，且这种促进作用具有持续性。对抗病品种中棉所12过氧化物酶活性的促进作用，强于对感病品种浙肖棉1号的作用。但在不同浓度处理之间，酶活性的差异不显著。出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12氟乐灵处理（μg/g）160.2**68.563.4*77.4**77.8**90.3**564.9**70.0*68.8**76.8**79.5**93.9**1071.0**69.2*73.6**78.8**92.5**表7-7 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内过氧化物酶活性的变化出苗后周数1周2周3周浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12浙肖棉1号中棉所12对照丙酮52.861.254.663.457.065.8灭菌水53.282.455.064.657.867.0表7-7 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内过氧化物酶活性的变化（续）-1图7-2显示出，浙肖棉1号过氧化物酶同工酶有5条共同谱带[A（Rf=0.53）、B（0.47）、C（0.40）、D（0.32）和E（0.25）]；中棉所12则有4条共同谱带[A’（0.46）、B’（0.41）、C’（0.35）和D’（0.28）]。氟乐灵处理后，过氧化物酶同工酶组成发生了变化，增加了一些新谱带；且氟乐灵对过氧化物酶同工酶的影响随着处理后时间的推移而不同。在出苗后第一周和第二周，浙肖棉1号增加了F（0.17）、G（0.13）和H（0.05）3条新谱带；在出苗后第三周时又增加了I（0.21）、J（0.07）和K（0.11）3条新谱带。在出苗后第一周，中棉所12增加了E’（0.19）带；第二周又增加了G’（0.15）带；第三周则又增加了F’（0.30）谱带。在不同浓度处理之间，2个供试品种的过氧化物酶同工酶没有差异。图7-2 氟乐灵播前土壤处理后棉苗植株内过氧化物酶同工酶图谱经氟乐灵诱发处理再接种病菌后，棉苗体内维管束组织中类萜烯醛的积累水平明显大于对照组。虽然对照组棉苗在接种后18天时，也有较高水平的类萜烯醛积累量，但在接种后的15天内，其积累水平很低。相反，处理组棉苗在接种后第9天时，就有较高水平的类萜烯醛积累量，而且其积累量呈直线增加，可达到很高的水平，如在18天时类萜烯醛的量占中柱组织的85%（平均4.2级）以上。图7-3 发病棉苗体内类萜烯醛的积累动态棉枯萎病菌侵入棉花植株后，由于棉花自身及外界环境条件的影响，受侵染植株可能不表现症状。因此，外观发病率及严重度可能不完全反映枯萎病菌的实际侵染及在植株内的扩展情况，为此，在棉花收获后进行了剖秆检查，以了解枯萎病菌的实际侵染率及茎秆木质部病变程度。由表7-8可知，氟乐灵处理组中棉株枯萎病发病株率降低，茎秆木质部的病变程度减轻。这可能说明，氟乐灵处理后使棉花植株增强了抵抗枯萎病菌侵入的能力（表现为侵染率的下降），同时，抑制了侵入枯萎病菌在木质部内的生长与扩展（表现为木质部病变程度的下降），从而阻止了病害的进一步发展。此外，氟乐灵处理后对枯萎病发病株率的减少要低于对木质部病变程度的降低，这表明，氟乐灵减轻枯萎病发病主要是通过抑制侵入枯萎病菌在棉株内的生长与扩展而起作用的。品种处理侵染率（%）病指沪棉2011对照75.24±0.9140.69±2.38处理63.19±3.86（16.02）31.73±1.65（22.02）中棉所12对照62.82±0.8326.70±0.62处理45.97±2.27（26.82）17.00±1.10（36.33）表7-8 氟乐灵处理后剖秆检查结果氟乐灵处理组棉苗根部和茎部组织中，枯萎病菌的菌量显著低于对照组相应部位的菌量（图7-4）。接种后第9天起，处理组与对照组之间的菌量差异加大；同时，茎部组织的菌量差异大于根部。从菌量增加的时间动态来看，接种后12天内，根部组织中菌量增加缓慢，但在接种后12～15天增长加快。对照组棉苗茎部组织中，菌量的增加动态与根部相似，在接种后的12～15天增加较快，而处理组棉苗茎部组织中的菌量在接种后的15～18天才有较大的增加。说明处理组茎部菌量增长滞后于对照。综上所述，播前氟乐灵施用后能减轻枯萎病的发生，主要是氟乐灵诱发棉花产生了诱导抗性，这种诱导抗性的机制，主要表观在抵抗病原菌的侵入和对入侵病原菌在棉株体内生长的抑制。氟乐灵是旱地作物棉花的除草剂，主要采用播前混土法施药。宋凤鸣等（1995）推荐施药量每亩用48%乳油65～175ml，视土壤质地和有机质含量而定。氟乐灵处理组在轮作地苗床和连作地苗床的出苗率均高于对照组，其原因是处理组苗前死亡率降低。处理组在连作地苗床上的苗前死苗率比对照组减少79.80%；在轮作地苗床上比对照组减少52.91%（表7-9）。播前施用按推荐氟乐灵施药量对棉花出苗是安全的。图7-4 氟乐灵处理后棉苗体内枯萎病菌菌量的变化动态苗床类型处理出苗率（%）苗前死苗率（%）连作地苗床对照77.90±2.6711.93±2.67氟乐灵84.81±2.632.41±0.11**轮作地苗床对照82.88±1.147.73±1.26氟乐灵86.56±0.45*3.64±0.50**表7-9 氟乐灵播前土壤处理对棉花出苗及苗前死苗的影响（宋凤鸣等，1995）棉花枯萎病系种子与土壤传播的维管束病害，从子叶期至成株期整个生育阶段皆可侵染发病。其化学防治的关键在于药剂的速效与长效。速效即药剂施用后能迅速被吸收，运转至维管束中，并累积达到能抑制、杀死病原菌的有效浓度；长效即药剂具有缓释作用及不易受环境影响而分解、变性的性质。多菌灵等苯并咪唑系列是一类具广谱杀菌活性的内吸杀菌剂，目前已被广泛用于防治多种作物病害，并且已知它们在土壤中不易被分解，存留期至少达数月之久。鉴于此类药剂用于大田治疗，因棉株对多菌灵等内吸利用率低，而导致防效较差的问题，郭敦成等（1993）依据农药对生物体表穿透的相近相通规律，着意提高多菌灵极性，以增加其对棉根的穿透能力，同时，亦注重新配方的土壤稳定性研究，使新配方对棉花枯萎病的控制既具有速效又具有长效。经几年试验研究，研制出以多菌灵为主体，以调整其油水分配系数为目的，添加水杨酸、冰醋酸等助剂复混而成的新型杀菌剂治萎灵，除了具有原多菌灵的广谱杀菌特性外，还具有速效、高效、长效和促进棉花生长的特点。对棉花枯萎病菌的毒力是多菌灵的16.5倍（表7-10），施药后10天即可见效。治疗效果为82.3%（对照多菌灵的治疗效果为56.2%），有效控制期可达60～80天（表7-11，表7-12）。药剂菌丝生长抑制率（%）5.0002.50012500.6250.313（mg/kg）EC50（mg/kg）增效倍数多菌灵60.6243.2242.4942.0029.671.6810—多菌灵+助剂Ⅰ100.00100.0056.7248.3647.010.64531.91多菌灵+助剂Ⅱ100.0065.1861.1946.2710.510.78391.39多菌灵+助剂Ⅰ+助剂Ⅱ82.0576.9275.2767.0358.610.107316.53表7-10 助剂对多菌灵的增效作用试验地点稀释倍数调查天数（天）（距离药期）用药前/后病指对照区用药区治疗效果（%）备注湖北石首230250.00/7.620.00/0.6092.1350.00/14.880.00/2.2684.8无病土育苗移栽棉湖北石首250105.15/25.399.12/16.1081.4205.15/31.999.12/14.5690.7305.15/38.949.12/19.6883.1直播棉湖北鄂州2002037.5/41.6737.5/12.9286.38537.5/28.7537.5/1.6794.2直播棉湖北鄂州200200.00/11.000.00/4.3860.6850.00/2.670.00/0.1694.0直播棉湖北枝江300100.00/5.580.00/0.5073.1300.00/4.080.00/0.1589.0450.00/2.570.00/0.0697.5移栽棉湖北松滋300203.50/8.751.25/1.5086.7直播棉山东聊城3001065.5/68.0061.5/32.5051.54562.5/48.0061.5/3.0095.8直播棉安徽望江300208.44/30.303.20/9.7068.0408.44/39.403.20/4.7075.8678.44/12.503.20/2.0084.0直播棉安徽怀宁3002030.0/55.0040.0/18.5074.73030.0/64.0040.0/10.0088.3直播棉表7-11 各试验点治萎灵对棉枯萎病的治疗效果总汇病株级别用药后第35天用药后第63天处理区病情对照区病情治疗效果处理区病情对照区病情治疗效果Ⅰ级病株11.2521.2547.061.256.2580.00Ⅱ级病株31.2540.0021.888.7517.5050.00Ⅲ级病株59.2068.7513.8934.2150.0031.58表7-12 治萎灵对不同级别病株的治疗效果（%）治萎灵商品制剂为12.5%液剂，属低毒（由同济医科大学测定，1989）、高效、内吸性农药，具有保护与治疗作用，使用方便，可用作拌种、苗床泼浇和大田灌根及药钵育苗。以灌根对枯萎病的防治效果最好。但为节约成本、稳定效果，似宜采用环环把关的系统施药法：即对移栽棉采用药钵法育苗或拌种加苗床法泼浇（或定根水施药）再加大田挑治或普治；对直播棉采用拌种（定苗施药）加挑治或普治。为省药与安全起见，拌种浓度宜为0.8%（占用种量），灌根与泼浇以200～300倍稀释液为宜。在发病率不超过5%、病株级别不超过Ⅰ级时用药为宜。市场上用于防治枯萎病的商品农药品种较多，不同农药品种防治效果不尽相同（表7-13、表7-14），此外，不同用药方法，防治效果也不一样，因此，对不同农药防治效果的鉴别与方法值得研究。潘劲松等（2000）在实验室对市场上12个防治枯萎病的杀菌剂进行毒力测定，以EC50值作为抑制枯萎病菌生长的指标，值越小，抑菌效果越好，反之，则差。结果是多菌灵（沪产）0.77、多菌灵（杜邦产）0.96、恶霉灵1.14、甲基托布津6.28、喷克7.16、稳长一号11.62、代森锰锌16.65、腈菌唑18.28、菌毒清19.34、敌克松23.58、五氯硝基苯32.13、络氨铜52.20。这表明，在常规杀菌剂中，以多菌灵对棉花枯萎病病原菌毒力作用最强。处理施药前病指药后7天药后14天病指病指减退率（%）防效（%）病指病指减退率（%）防效（%）91%克萎星SP700倍液6.336.67-5.3713.415.3914.8551.0832%克菌EC2000倍液11.1712.00-7.4311.7312.28-9.9436.8330%菌无菌EC2000倍液13.5011.6713.5628.9712.666.2246.1250%枯黄萎灵WP800倍液11.8312.17-2.8715.477.1536.5665.2725%使百克EC1500倍液9.008.5024.6322.406.5527.2258.181.5%菌立灭EW1200倍液12.839.677.8338.0711.2412.3949.6650%枯萎绝WP600倍液8.507.83-21.7024.315.3337.2964.02清水（CK）9.1711.1615.96-74.05表7-13 7种农药对棉花枯萎病的防治效果（黄学军等，2002）处理（g/667m2）施药前病指第一次施药后7天调查第二次施药后7天调查病指防效（%）病指防效（%）32%乙蒜酮乳油13.312.17.1291.493.332%乙蒜酮乳油17.38.94.5550.199.532%乙蒜酮乳油20.07.34.6540.199.520%粉锈宁乳油13.35.74.8523.284.5清水（CK）5.010.0—21.0—表7-14 32%乙蒜酮乳油防治棉花枯萎病试验结果（李凤瑞等，2005）在对商品农药防治效果筛选方法方面，单文荣等（2001）通过滤纸条的抑菌法和离体组织抑菌法有机结合对市售农药及有选择性的组织进行药性测定和预选，找出了一些对棉花枯萎病菌防治有效的药剂和组配。试验除了注重筛选对病菌杀抑作用好的药剂，还注重筛选对病菌并无明显的杀抑作用，但通过寄主组织后却能较好地抑制病菌扩展的药剂，同时，也注重筛选有上下传导作用的药剂，并认为药剂复配后对棉花枯萎病杀抑效果更佳。具体方法如下。①针对市售药剂单筛时，方法如下：将配制的孢子悬浮液（10/10显微镜下观察约有50个孢子）均匀滴入改良PDA平板培养基上，使用经不同药剂不同剂量处理后的滤纸条（长约2.5cm，宽约0.4cm）分别进行抑菌测定，将各培养皿置28℃恒温箱培养3～5天后，与对照相比，判断各不同药剂不同剂量下的抑菌效果。②针对市售药剂有选择性两两组配筛选时，方法如下：将孢子悬浮液均匀滴入改良PDA平板培养基上，各药剂按不同剂量配制成药液，分别用滤纸条浸过不同药液，按一定组配分别十字交叉放入培养基上，置28℃恒温箱培养，根据滤纸条交叉处产生的抑菌状况进行定性分析，判断出增效、相加、拮抗、独立、相互拮抗、拮增作用的组配。①针对市售药剂单筛时，方法如下：将配制的孢子悬液（10/10显微镜下观察有50个左右孢子）倒入改良PDA平板培养基上，使用经不同药剂不同剂量处理后的离体组织分别进行抑菌，置28℃恒温箱培养3～5天后，与对照相比，判断各不同药剂不同剂量下的抑菌效果。②针对市售药剂有选择性两两组配筛选时，方法如下：将孢子悬液均匀倒入改良PDA平板培养基上，各药剂按一定剂量和组配两两配制成药液，分别处理离体组织，将药剂处理过的离体组织分别放入培养基上，设清水（对照），待7～10天后，观察各两两组配通过离体组织对枯萎病的抑制等情况。选择几种抑制效果较优良的组配，对水培离体组织进行先接菌后施药，与对照相比，观察效果。①滤纸条抑菌试验。药剂学单筛记载方法：5级：抑菌半径大于0.5cm；4级：抑菌半径在0.3～0.5cm；3级：抑菌半径在0.1～0.3cm；2级：抑菌半径在0.1cm以下；1级：几乎无抑菌现象，但在滤纸条周围菌落有减菌等现象；0级：同于对照。②离体组织抑菌试验记载方法：5级：抑菌圈半径0.5cm以上，离体组织上不着菌；4级：抑菌圈半径0.1～0.5cm，离体组织上不着菌；3级：抑菌圈半径0.1cm以内，离体组织上没有明显可见的菌丝；2级：离体组织上微见菌丝，不见抑菌圈；1级：离体组织上长满菌丝，但不如对照发达；0级：同于对照，布满菌丝且发达。一般说来，防治棉花枯萎病的用药方法有浸种法、浇灌法（浇根）、茎叶喷雾法和茎部注射法（待棉苗一片真叶完全展开时，用微量注射器每株注射20μl，注射部位为茎近地面1cm处）。目前，生产上以茎叶喷雾法为主要方法。刘峰等（2005）比较了这4种方法后指出，注射法防效最高，喷雾法、药液浇灌法、浸种法防效较差。注射法对棉苗产生一定伤害，但根据诱导抗病理论，伤害本身也是一种诱导方式，因此，诱导抗病和药剂的联合作用可能是该法防效较高的原因。多菌灵水杨酸浸种、浇灌和注射对枯萎病防治均有一定防效，而喷雾防效较低，表明该药剂可以由根吸收和向上输导。氟硅唑注射和喷雾防效高于多菌灵水杨酸，浇灌和浸种则均没有明显效果，可能是由于其向下输导作用强于向上输导作用所致。而敌菌丹尽管没有内吸活性，但其注射和喷雾防效也高于具有内吸活性多菌灵水杨酸，其作用机制有待明确（表7-15）。处理浓度（μg/ml）注射茎叶喷雾病株率（%）病指防效（%）病株率（%）病指防效（%）敌菌丹10009.763.0572.2712.03.3357.36菌毒清150025.717.1435.0925.48.33-6.66氟硅唑100013.794.3160.8214.464.2245.97多菌灵水杨酸100019.355.6548.6421.056.5815.75清水对照—36.011.0—18.757.81—表7-15 药剂注射和喷雾防治棉花枯萎病效果二氧化氯ClO2是目前国际上公认的第四代氧化型杀菌消毒剂，具有高效、广谱、快速、安全、无毒副作用等突出优点，被世界卫生组织（WHO）和世界粮农组织（FAO）列为A1级产品，其杀菌消毒原理是凭自身强氧化性，对微生物（如真菌、细菌、病毒等）的细胞壁有很好的吸附性和透过性、可有效地氧化细胞内的酶，迅速控制微生物蛋白质的合成，达到杀菌消毒的目的，而动植物的酶系统主要存在于细胞的细胞器中，加上动植物自身保护系统，从而可基本保证不会受ClO2的伤害。但由于ClO2在国内应用研究起步较晚，目前，国内外其应用范围大多都局限于医疗、水质处理、漂白、食品工业、防腐保鲜等领域，而在农业应用方面，国外的报道很少，在我国农业种植方面的应用基本处于空白阶段。王化明等（2003）根据二氧化氯本身具有高效、广谱、无毒、无有害残留等特点，凭自身的强氧化性，通过破坏病原菌蛋白质结构而起到杀灭菌毒作用，结合棉花枯萎病的发病情况，经田间试验表明，其防治枯萎病效果好于多菌灵和甲基托布津（表7-16）。从表7-16中可以看出，在所有试验药剂中，以80mg/kg的ClO2溶液防治棉花枯萎效果最佳，其应用后调查统计其平均发病株率只有2.7%，其次是40mg/kg和120mg/kg的ClO2溶液，其平均发病株率分别为8.2%和10.3%，而200mg/kg和10mg/kg的ClO2溶液防效较差，且200mg/kg处理已出现叶子烧焦等药害，多菌灵、甲基托布津的平均发病株率明显高于80mg/kg的ClO2溶液处理。由此可见，用1%～2%棉花专用添加剂的80mg/kg的ClO2溶液比多菌灵、甲基托布津对棉花枯萎病的病原菌有更强的杀灭及更好的对病害起到防治作用。在随后的追踪调查中还发现，和清水（对照）试验相比，40mg/kg、80mg/kg、120mg/kg ClO2等处理后，棉花的黄萎病也大大减少，棉花成铃多，且纤维质量都比没用的有所提高，说明对棉花品质有所改善，对黄萎病防治也有很好的作用。处理（mg/kg）清水（对照）ClO2104080120200600倍液多菌灵750倍液甲基托布津3次重复的平均发病株率（%）51.342.78.22.710.117.619.316.2表7-16 几种药剂防治棉花枯萎病田间试验结果由于棉花枯萎病的病原菌为害棉株的维管束，目前，世界各国防治棉花枯萎病的主要措施是选育和推广抗病品种以及采取一些农业措施，至今尚缺乏高效的防治药剂。农抗120是一种广谱内吸型抗真菌病害的农用抗生素生物杀菌剂，对白粉病、枯萎病、炭疽病等多种作物病害具有较好防效。它与多种化学杀菌剂混配具有增效作用，但存在着施药量大，成本偏高的不足。农抗120与多菌灵均为内吸性杀菌剂，开发两者混配的新型农药，在生产上防治棉花枯萎病，不仅具有生物农药的环保无公害特点，而且能延缓化学农药多菌灵的抗性发展，显著提高防效。韩新才等（2008）在室内进行农抗120与多菌灵不同的配比混剂对棉花枯萎病菌联合毒力测定和增效作用研究。结果表明（表7-17），农抗120对棉花枯萎病菌的抑菌浓度区间为285.7～666.7 mg/L。多菌灵对棉花枯萎病菌的抑菌浓度区间为333.3～1000mg/L。农抗120 EC50值为407.4mg/L，小于多菌灵EC50值574.5mg/L表明，农抗120对棉花枯萎病菌的毒力大于多菌灵。农抗120与多菌灵不同配比混剂，其EC50值为223.5～230.9mg/L，小于农抗120单剂EC50值407.4mg/L和多菌灵单剂EC50值574.5mg/L表明，两者混配其联合毒力远大于两个单剂。农抗120与多菌灵1∶1、1∶2、2∶1比例混配其增效系数（SR）分别为2.13，2.19，1.99，均大于1.5，表现为显著的增效作用。其中，配比为1∶2时，SR值最大，为2.19，而配比增加为2∶1时，SR值下降为1.99，说明农抗120与多菌灵以1∶2比例混配，为具有最佳增效作用的混配比例。农抗120对植物病原菌的作用机理是抑制孢子萌发，导致菌丝畸变和原生质体凝聚等（朱薇玲等，2006），具有保护和治疗作用。多菌灵的作用方式是干扰菌丝体有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂（黄伯俊等，2004）。两者混配对棉花枯萎病菌具有显著的增效作用，其增效机理及田间试验需进一步研究。处理毒力回归方程rEC50（mg/L）EC（th）50（mg/L）SR农抗120y=-14.1326+7.3331x0.9789407.4——多菌灵y=-3.3149+3.0133x0.9839574.5——农+多（1∶1）y=-8.8202+5.8892x0.9890223.5476.12.13农+多（1∶2）y=-12.5832+7.4457x0.9893230.9505.72.19农+多（2∶1）y=-9.1611+6.0229x0.9813226.5450.71.99表7-17 不同配比农抗120与多菌灵混剂对棉花枯萎病菌的抑制毒力及增效作用农抗（SO24）是由链霉菌YBO24（StreptomycesYBO24）产生的、对多种植物病原菌，如棉花黄萎病菌（Verticillium dahliae）、禾谷丝核菌（Rhizoctonia cerealis）、苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、小麦赤霉病菌（Fusarium grimiaearum）、棉花枯萎病菌（Fusarium turcicum）等有较强抑制作用的一种新型生物农药。现在已经完成其产生菌的选育、发酵工艺和分离纯化工艺等方面的基础研究工作。为加快该农抗的研制和推广应用，文才艺等（2007）研究以禾谷丝核菌和棉花枯萎病菌为指示菌，对农抗SO24的作用机理进行了初步探索。研究结果指出，SO24对禾谷丝核菌和棉花枯萎病菌菌丝生长有抑制作用。处理2天后，菌丝体逐渐皱缩，菌丝变得稀疏易分开；8天后，处理菌丝均全部溶解，而对照组菌丝生长正常。SO24对禾谷丝核菌和棉花枯萎病菌菌丝形态结构的影响（图7-5、图7-6），处理24h后，菌丝形态无明显变化；处理2～7天后，部分菌丝细胞内含物减少，液泡变大，形成大小不等的空泡，透光度降低，且空泡越来越多，越来越大；处理8天后，菌丝体溶解、断裂，液泡消失，原生质外渗明显；对照菌丝体则粗细均匀且表面光滑，原生质正常，液泡清晰可见。由此可见，SO24对禾谷丝核病菌和棉花枯萎病菌菌丝有明显的破坏作用。不同浓度SO24对禾谷丝核菌生长的抑制强度不同，用20%的SO24处理时，禾谷丝核菌菌丝全部溶解，培养8天后未见生长；用10%的SO24处理时，仅部分溶解，而未处理对照组的菌丝生长良好。进一步用生物测定法研究其抑菌能力的结果表明，在PDA平板上各浓度间的抑制率差异明显（表7-18），随浓度的增大，SO24对禾谷丝核菌的抑制作用增强，当浓度为20%时，抑制率可达81%说明，SO24对禾谷丝核菌有较强的抑制作用，但作为生物农药开发和应用，还有待于进一步提高发酵效价和优化分离纯化工艺。为了进一步明确其抑制作用机理，分别将10%和20%SO24处理8天后的禾谷丝核菌丝在无菌条件下用无菌水冲洗后接种于PDA平板上，28℃条件下培养，结果发现，表观上已经溶解的菌丝在解除SO24的作用后仍能正常生长。由此可见，SO24对禾谷丝核菌菌丝生长的作用表现为抑制，而不是杀死。这一结果与目前已报道农用抗生素如井冈霉素对病原菌的作用方式类似。项目CKSO24浓度（%）51020直径（mm）4836239抑制率（%）0255281表7-18 不同浓度的SO24发酵液对禾谷丝核菌菌丝生长的抑制率试验结果还表明，SO24对棉花枯萎病菌孢子萌发有明显的抑制作用。对照组棉花枯萎病菌孢子萌发正常，48h后萌发率达到97.5%；而SO24处理后，孢子萌发率显著降低，并且处理时间越长、SO24浓度越高，孢子萌发率的降低越显著。20%的SO24处理48h后，孢子萌发率为零，即20%发酵液能完全抑制孢子的萌发。由此可见，SO24对病原菌孢子萌发具有持续的抑制作用。图7-5 SO24对棉花枯萎病菌菌丝形态结构的影响图7-6 SO24对禾谷丝核菌菌丝形态结构的影响随着化学农药在使用中产生的一系列公害问题被发现，如环境污染、杀伤天敌、破坏生态平衡、3R（Residue，Resistance，Resurgence）等问题，已引起人们的普遍关注。因此，开发高效、低毒、低残留的新型无公害农药，逐渐成为植物病害防治的重要途径。昆虫、病原菌与植物经过几亿年的共同进化，植物体内形成了多种能有效抗御有害生物侵袭的机制，包括植物的形态、行为以及体内产生的次生代谢物质。植物是生物活性化合物的天然宝库，其产生的次生代谢产物超过40万种，其中，大多数化学物质如萜烯类、生物碱、类黄酮、甾体、酚类、独特的氨基酸和多糖等均具有杀虫或抗菌活性。从植物体内的次生物质中寻找能抑制有害生物的有效成分，人工直接提取应用或明确有效成分结构后人工合成制作农药，已成为无公害农药的开发热点之一。苍耳（Xanthium sibiricumPart）系菊科苍耳属植物，在山东省分布很广泛，是一种常见的田间杂草。果实苍耳子是常用中药，是中医临床上散热、解疮毒、通鼻窍、痹症的要药。苍耳子还有消炎、镇痛、抗病毒、抗细菌的药理作用。苍耳叶提取的挥发油对某些真菌具有抑制作用。在农业上可用来防治菜青虫等农业害虫。苍耳对一些植物病原真菌有较强的抑制作用。而苍耳虽有抑菌活性，但未见对苍耳的抑菌作用详细、深入的报道。为此，刘林等（2003）对苍耳中抑菌物质的提取溶剂及活性部位进行了初步筛选。结果表明，苍耳中含有较强的抑菌活性成分，具有明显的开发研究价值。其中，苍耳全株和苍耳叶的乙醚、丙酮提取液抑菌作用较强（表7-19）。乙醚和丙酮是比较适合的提取溶剂，可以从苍耳中较有效地提取抑菌活性成分；苍耳中抑菌活性最高的部位是苍耳叶，苍耳根的抑菌活性也较好。苍耳提取液是一种混合物，其中，某些成分可能会对某些病菌具有促进生长作用。若对提取液进一步分离纯化，可能会得到只对病菌具有抑制作用的化学物质，且抑菌作用会在很大程度上提高。供试菌种乙醚丙酮石油醚全株根果实茎叶全株根果实茎叶全株根果实茎叶棉花枯萎病菌抑制率（%）79.243.236.236.083.676.858.927.939.688.458.032.441.019.042.3苹果腐烂病菌抑制率（%）100.089.347.561.9100100.079.714.091.310090.583.036.820.241.1葡萄白腐病菌抑制率（%）100.075.320.842.0100100.085.426.016.710090.869.814.619.465.4构巢曲霉抑制率（%）—59.041.113.175.3—64.029.833.286.9—59.021.57.251.8表7-19 苍耳根、茎、叶提取液对4种病菌的抑制作用芹菜（ApiumL.）为伞形花科（Umbeliferae）一年生或多年生草本植物。它约有20个种，分布于全世界温带地区，而中国仅有2个种，分别为旱芹（Apium graveilensL.又叫药芹或香芹）和细叶旱芹（Apium leptophyllum），其中，旱芹为模式种。芹菜含有丰富的胡萝卜素、维生素及挥发性芳香成分，并具有极好的药用功能，还有一定的抑菌杀虫活性。Sipaiiiene等（2003）发现，芹菜叶提取物对大肠杆菌（E.coli）等6种菌具有高度的抑制作用。Afek等（1995）亦曾发现，旱芹的诱导产物对灰葡萄孢（Botrytis cingrea）、链格孢（Alternaria alternate）有较高活性。Oussalah等（2006）研究报道，旱芹精油能抑制引起肉类腐烂的Pseudomonas putida菌株。刘福光等（2009）对11种伞形科植物粗提物进行了农用抑菌活性的初步筛选试验，结果发现，旱芹粗提物有很好的抑菌活性。Monir等（2001）研究发现，旱芹种子中的3-正丁基4，5-二氢内酯（3-N-butyl-4，5-dihydrophthalide）在12.5μg/ml和5μg/ml浓度下，对线虫P.redivivus和C.elegans杀灭率可达100%；研究中还发现，此化合物对埃及伊蚊（ Aedesaegypt）也有较好的杀灭作用。金阳等（2006、2008）研究发现，芹菜中莰酮类化合物对小菜蛾等害虫有很好的防治作用，并对此类物质进行了合成。魏立强等（2001）在前人研究的基础上，进一步进行盆栽活体试验，研究旱芹粗提物对棉花枯萎病的抑制作用。结果表明，旱芹粗提物灌根对棉花枯萎病的抑制作用，在一定浓度下随浓度的增加而增加，病指随浓度的增加而减小。在浓度为10μg/ml时，病指为11.07，防治效果达到77.71%，明显高于对照药剂的相对防效27.77%（表7-20）。处理浓度（μg/ml）病指防治效果（%）旱芹粗提物2011.1877.491011.0777.71517.7564.262.521.6254.461.2525.00CK49.66—表7-20 旱芹粗提物灌根对盆栽棉花枯萎病的防效蒿属植物含有许多单萜及倍半萜化合物，生理活性成分种类较多，经常被应用于传统医学实践，加之植物原料来源丰富，所以，蒿属植物正受到越来越多的注意。郭艳等（2009）在试验条件下，采用菌丝生长速率测定法，以棉花枯萎病菌为供试菌，对茵陈、黄蒿、艾蒿3种蒿属植物提取物的抗菌活性进行了研究。结果表明，供试3种蒿属植物提取物对棉花枯萎病菌具有较好的抗菌活性，其中，尤以艾蒿提取物的抗菌活性强而稳定，48～96h对上述枯萎病菌的菌丝抑制率均达80%以上（表7-21）；丙酮提取物的抗菌活性强于乙醇提取物，前者的EC50为1.4785mg/L，后者的为3.2090mg/L。间歇振荡法、超声波法、冷浸法提取物对供试菌的72h菌丝抑制率分别为84.34%、84.56%和88.70%，可见，同种溶剂不同提取方法所得提取物抗菌活性基本一致。供试植物对棉花枯萎病菌的抑制率（%）48h72h96h茵陈（Artemisiacapilaris）71.0863.1151.81黄蒿（A.annual.）77.1161.7224.7艾蒿（A.argyi）83.7388.780.19表7-21 不同蒿属植物提取物对枯萎病菌的抗菌活性植物精油作为易挥发的小分子物质，结构简单且生物活性多样，在有害生物控制的应用方面，具有低毒、高效、环保、选择性高等优点，吸引了研究人员的广泛关注。八角茴香（Illicillm verumHook.f.）是木兰科八角属植物，对八角茴香精油的研究主要集中在化学成分及其在医药及食品等方面的应用，在农业病虫害防治方面的研究尚未见文献报道。刘志希等（2010）以棉花枯萎病菌为靶标菌，用八角茴香精油为植物材料，通过水蒸气蒸馏法制备精油，在利用GC-MS分析其化学组成的基础上，柱层析分离纯化了精油的主要化学成分——反式茴香醚，最后通过比较八角茴香精油与反式茴香醚对棉花枯萎病菌菌丝生长抑制作用。由图7-7可知，棉花枯萎病菌菌丝在带药培养基中的生长受八角茴香精油及其主要成分的抑制，并表现出明显的量效关系。在供试浓度高于1.00μl/ml时，菌丝生长抑制率大于93.3%；在浓度低于0.50μl/ml时，菌丝生长抑制率小于30.0%；抑制中浓度（EC50）为0.50～1.00μl/ml。在相同测试浓度下，该精油与其主成分反式茴香醚的抑制活性接近，精油的活性略高，这表明反式茴香醚是八角茴香精油中的主要抗真菌活性成分（含量高达94.57%），其他组分可能起协同增效作用。从已知抗菌活性成分反式茴香醚的结构看，丙烯基苯的结构单元可能是抗菌活性的毒性基团，Moliszewska等（2003）的研究证实，具有丙烯基苯结构单元的天然产物，如α-细辛醚，β-细辛醚，丁香酚，3，4-二甲氧基-丙稀苯等对水稻纹枯病菌、灰葡萄孢菌、小麦镰刀菌等植物病原真菌在一定浓度下表现出较强的抑菌活性。因此，对丙烯基苯类衍生物的合成、抗植物病原真菌活性及其构效关系的研究，意义重大。图7-7 八角茴香精油及反式茴香醚对棉花枯萎病菌的抗菌活性辣椒为茄科植物辣椒（Capsicum frultescenceL.）的果实。辣椒果实中的主要药用成分是辣椒碱，它是一种极度辛辣的香草酰胺类生物碱，为辣椒果实中辛辣的主要化学成分，具有抗菌杀虫的药理作用，主要分布在辣椒籽及果皮内表细胞之中。研究表明，辣椒粗提液有较好的杀菌效果。茶皂素是从茶子饼中提取的一种皂苷类物质，在茶子饼中的含量为10%～14%。具有皂苷的一般通性，味苦，辛辣。茶皂素在农药上可用作杀虫剂、杀菌剂和农药助剂。一是利用茶皂素本身杀虫、灭菌功能产生农药作用；二是利用茶皂素良好乳化、扩散、湿润等性能作农药助剂。因此，可用其配制成生物农药，此生物农药对人畜、农作物无害，且耐雨水冲刷。关于辣椒碱对病原菌的抑菌活性所见报道不多。李芳等（2011）用该实验室研制的植物源农药5%辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉花枯萎病防治进行了初步的研究。结果指出，5%辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉花枯萎病菌菌丝生长有显著的抑制作用，并且随着质量浓度的增加抑制作用增强（表7-22）。当其质量浓度低于5mg/ml时，抑菌圈直径与对照间无显著差异；当其质量浓度达12.5mg/ml时，抑菌圈直径与对照间有显著差异。将高浓度试剂处理后完全不生长的菌饼转移到PDA培养基平板上培养后，菌体能够生长表明，5%辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉花枯萎病菌起抑制菌丝生长的作用，但并未将菌丝杀死。对培养后的菌丝悬浮液镜检，与空白对照相比，药剂处理后的菌丝出现以下变化：①菌丝短，分枝较少，粗细不均。②菌丝形成膈膜明显弯曲、多、长短不一、分布不规则。③菌丝内含物变稀、变少、分布不均匀。茶皂素作为一种优良的表面活性剂，与辣椒碱混用后，对抑制棉花枯萎病菌丝的生长有增效作用。辣椒碱和茶皂素及两者的混剂对菌丝有明显的抑制作用，但只是抑制生长，而不是杀死，这与辣椒碱是内吸性杀菌剂的性质是一致的。至于辣椒碱与茶皂素的混剂对抗性菌株的作用特性和活体作用效果如何，尚待进一步研究。质量浓度（mg/L）5%辣椒碱·茶皂素微乳剂抑菌率（%）5%辣椒碱抑菌率（%）茶皂素抑菌率（%）5.031.5061.653.986.2538.0264.5610.0712.561.3767.2010.0325.067.2469.489.4750.080.6772.289.42表7-22 5%辣椒碱·茶皂素微乳剂抑菌试验结果

担孢子不能侵染桧柏，而是随气流传到苹果树上，致使苹果树发病，开始在叶片正面出现性孢子器，以后在叶背面出现锈孢子器，产生的锈孢子再随气流传到桧柏上为害、越冬，从而完成一个侵染循环。从表1可以看出，与桧柏距离50m以内的苹果树，全部感染苹果锈病，病叶达到90%以上，每个病叶上平均有病斑3.7个；与桧柏距离80～120m的苹果树，全部感染苹果锈病，病叶率略有下降，但仍达到70%左右，每个病叶上平均有病斑2.3个；与桧柏距离180～230m的苹果树，全部感染苹果锈病，病叶率为20%左右，每个病叶上平均有病斑1.6个；与桧柏距离500～630m的苹果树，病株率为58.5%，病叶率10%左右，每个病叶上平均有病斑1.15个；与桧柏距离2100～2250m的苹果树，感染率为20%左右，病叶率仅为1.2%，每个病叶上仅有1个病斑；与桧柏距离5100～5200m的苹果树，感染率急剧下降，仅为距离转主寄主5km以上的苹果树虽然也可以发病，但发病率较低，对产量一般不会造成严重损失。

生产实践业已证明，应用抗病品种是枯萎病综合防治技术体系中的核心技术，也是防治枯萎病最经济、有效的技术途径。据1984年的全国棉花枯、黄萎病综合防治研究协作组的统计，全国种植棉花面积约8800余万亩，而黄、枯萎病的发病面积近2200万亩，占调查面积的31.3%，年损失皮棉75万～100万t，折合人民币2亿～3亿元。可是推广了以种植抗病品种为中心的综合防治技术以后，枯萎病的发病率压低到5%以下，挽回了皮棉损失。同时，由于节省了农药等开支，极大地降低防治费用，杜绝了人畜中毒事故和环境污染，保护了棉田生态环境，取得了显著的经济、生态、社会效益。而抗枯萎病育种的成效取决于对病原菌与寄主（棉花）的互作关系和枯萎病抗性遗传规律的认识，抗源的获取以及科学的育种方法。了解病原菌与寄主（棉花）之间的交互作用，是选育抗棉花枯萎病品种的重要理论依据之一。这里包括两方面内容：一是垂直抗性与水平抗性；二是基因对基因假说。这一理论观点由Van Der Plank（1963）提出。寄主对某些病原生理小种具有免疫或高抗性，可是对另一些生理小种则是高度感染的。表明了同一寄主品种对同一病原菌的不同生理小种具有“专化”反应，寄主品种的抗病力与病原菌小种致病力间有特异的相互作用。它通常受单基因或几个主效基因所控制。杂交后代一般按孟德尔定律分离。这类抗性的遗传行为简单，抗、感差别明显。在一般情况下，抗病对感病为显性，易于识别，常被育种家所重视。垂直抗性多表现为过敏性反应。它能把病原菌局限在侵染点和具有抗定殖的作用；同时，由于它能抵抗某些对它不能致病的小种，因而在发病初期，它有减少接种体数量的作用。但这类抗病性常会随病原菌生理小种的变化而丧失。如果在大面积生产上，单一地推广具有该类抗性的品种时，容易导致侵染它的生理小种上升为优势小种而被感染淘汰。这在小麦条锈病和稻瘟病抗病品种大面积连年推广种植上已有惨重教训。要保持其抗性的稳定，必须是寄主为异质群体，或寄主群体在时、空分布上呈不连续性，否则，抗性难以持久稳定。在遗传上，小种专一化抗病性通常表现为单基因性状，这种抗病性对感病性往往是显性的。一个单基因能抵抗病原的一个小种或多个小种。在垂直抗病性中，寄主是垂直抗性的差别，而病原菌致病性的差别则是毒性差异。亦可称为非专化抗病性（non-specific resistance）。水平抗性指寄主品种对各个病原生理小种的抗病反应，大体上接近于同一水平，它对病原菌的不同小种没有“特异”反应或“专化”反应，几乎在同一水平线上。它的作用主要表现在能阻止病原菌侵入寄主后的进一步扩展和定植，表现为潜育期较长，病斑小而少，病原菌繁殖体的数量相对较少。因而病害发展的速度较缓慢，程度较轻。在农业生产中，人们长期利用水平抗性，但因其抗、感症状表现不如垂直抗性明显，鉴别较难，过去在抗病育种中往往忽视了具有水平抗性的品种。由于它对病原菌生理小种不形成定向选择的压力，因而不致引起生理小种的变化，也不会导致品种抗性的丧失。所以，在抗病育种中，人们越来越重视具有一定水平抗性品种的选育。现阶段，我国已经推广种植的抗枯萎病品种，几乎多属于此类型，故能比较长期地、并在不同生态地域均保持着较高的抗病性，如川52-128。自Van Der Plank（1963）提出垂直抗性与水平抗性概念以后，也存在着不同看法。如Wolfe（1972）认为寄主的抗病性从感病到免疫是一个连续的统一体，病原菌的致病性，从无致病力到强致病力，也是一个连续的统一体。寄主和病原物的相互作用，可有各种各样的表现形式。Arnold等（1968）认为垂直抗性和水平抗性并没有根本的区别，只不过是总抗病性系统中的特殊情况。Zadoks等（1977）则认为，在垂直抗性和水平抗性的情况下，寄主的抗病力和病原菌的致病力间都有相互的特异作用。在与农作物病害的斗争中，有80%以上是靠抗病品种来防治或减轻其为害的。但实践表明，抗病品种在生产上应用若干年后，常会丧失抗病性。为了克服品种抗病性过早丧失，有些学者提出持久抗病性（durable resistance）或稳定抗病性（stable resistance）的概念。这是指适于某种病害发生流行的环境条件下，某一个抗病品种在大面积生产上推广多年后，抗病性仍较长期保持而不丧失，当然不意味着永久不变异。这一理论观点由Flor（1974）提出。病原物与寄主植物的关系，即现在所提的互作关系，就是在一定条件下，植物发病过程中寄主和病原物相互作用，由一系列的生理、生化和遗传调控过程而决定病症表现的类型。Flor（1947）曾以亚麻锈病（Melampsora lini）为代表进行研究寄主和病原物之间的相互关系认为，寄主中有一个调节抗病性的基因，而病菌中也有一个相应的基因调节病菌的致病性。如寄主有2个或3个基因决定抗病性，于是病菌中也有2个或3个相应的决定无毒性的基因。基因组合表示寄主的抗病性表达需要寄主中决定抗病性的基因和病菌中决定无毒性的基因互作，即寄主的抗病性不亲和性是病菌和寄主特异性互作的结果。由此抗病性被认为是主动过程，而寄主的感病性则是由于缺乏抗病基因或病菌缺乏无毒基因而表现出的被动显症。此论点认为，寄主与病原菌长期共存于自然界，实际上正因为寄主存在着抗性基因，才能使其世代延续，而不被病原菌所毁灭。所以，物种间的抗性或不同程度的抗性，是长期自然选择和人工选择的结果。棉花抗枯萎病育种的基本程序包括4个环节：①发现和创造变异；②稳定和选择变异；③鉴定和比较变异；④保持变异。所有环节都是围绕着变异进行的。棉花的性状变异可分为两种：一种是可遗传变异，即这种变异性状可以传递给以后的世代；另一种是不可遗传变异，即这种变异性状只在当代表现，不能传递给以后的世代。可遗传变异又可区分成两种类型：一类是有益性状变异，即符合育种目标的遗传性状变异，也叫符合人类栽培利用目标，能够提高经济利用价值的变异；另一类是有害性状变异，即不符合育种目标的遗传性状变异，是同人类经济利用的目标方向相反的变异。育种所需要的仅仅是可遗传的有益的性状变异。棉花育种的任务是将现有推广品种还不具有的而生产上又迫切需要的一些新的经济或农艺性状引入新品种中，或将尽可能多的有益的经济或农艺性状集中到一个新品种中。育种的创新意义即在此。这些有益的经济或农艺性状，须是可遗传的有益的性状变异，这是育种的前提。如果没有这些变异，就不会有育种。这些有益的变异可能存在于现有品种或过时品种群体中，但更多地存在于极为丰富的种质资源中，拥有大量丰富的种质资源材料是棉花育种的基础。因此，卓有成效的育种一般需要形成一个丰富的种质资源库，育种家们深入细致地研究这些种质资源，从中寻找、发现和发掘与育种目标相符的新的性状变异。如局限在已有材料中，则很难发现符合育种目标的性状变异。棉花育种可利用的变异主要来自两种途径：一是自然变异；二是人为变异。自然变异的引发，大多数是由于天然杂交，但也有少数来自偶然的某种外力或个别棉株自身某些不明原因诱发的自然突变。人为变异主要是通过有目的的人工杂交，但也可利用物理化学等手段，或自然界其他条件进行人工诱变。从广义上讲，将非棉花及其近缘植物或其他生物的某些性状，运用特殊技术手段引入棉花中，也属于人为变异的范畴。棉花是常异花授粉作物，存在一定的异交率。异交率的高低取决于传粉媒介——昆虫的种类和种群的大小。田间的传粉媒介多，棉花的天然异交率就高，容易引发较多具有变异性状的变异株，就提供了育成具有优良性状新品种的机会。这是棉花系统选择取得成功的原因。但随着棉花生产的发展，棉花害虫种类日趋繁多，为害程度日益严重，种植棉花不得不频繁地采用杀虫药剂。在防治害虫的同时，也杀死了棉田传粉媒介，大大减少了棉花异交的机会，从而降低了性状变异几率、包括优异性状变异和优异株出现的频率。这也许是多年来单纯依靠系统选择难以育成有突破性新品种的主要原因。棉花群体中也常会出现个别的自然突变体。这主要是由于染色体畸变或某些基因位点突变而产生的变异性状。其中，有有利的，也伴有不利的经济性状变异。但发生这类突变的几率一般很低，且以质量性状为多。人为变异主要是通过人工杂交，引起基因交换、重组而发生新的性状变异。从本质上讲，这是天然异交的延伸和扩大，弥补了自然杂交几率日益低下的现状。它比之自然杂交的优点是：一能有目的地选择性状变异的方向；二能主动掌握性状变异的频率。但它的不足之处：一是不能确保有较高的成功率；二是仅限于在现有种质基因库范围内引发变异。所以，必须加强种质资源的收集、扩大和研究等基础工作，并进行较大量的杂交。人为变异的另一途径是通过物理或化学等手段诱发新的性状变异。其优点可超越现有的棉花种质基因库，创造出新的性状变异；但缺点是：①难于诱发有利经济性状的变异，而更多的属于不利经济性状；②诱变的频率低。因此，棉花育种利用这类性状变异的难度较大。应用生物技术，导入外源DNA，是定向诱发棉花产生新的性状变异的现代高新技术。优点是使常规人工杂交所不能跨越的亲缘障碍成为可能，在棉花染色体上不仅可导入与棉花非一个属、科、目的植物DNA，甚至可导入节肢动物等其他动物的基因。如报道的培育手感柔软胜似棉花的转兔角蛋白基因棉花。外源DNA导入，是创造变异的一种技术手段，是育种过程中的一个环节，在创造变异后的大量工作，仍需按常规育种环节进行。随着中国宇航技术的发展，已多次运用太空卫星，搭载棉花种子，通过太空失重、宇宙线照射、温度和时律的变化等因素引发基因变异。但其变异方向与遗传性正在进一步研究中。不管是自然变异或人为变异，其中，有符合育种目标需要的变异，也有不符合育种目标的变异。一般是在发现有利变异的同时，也可能相伴产生一些不利变异。这种变异，有的只是表现型的，其遗传性尚未稳定，还不能作为育种目标性状固定下来。所以，在发现或创造变异之后，育种的第二个环节就是稳定和选择变异。稳定变异是为了保证变异的有效选择，是选择变异的前提。稳定变异的主要手段是加代。随着世代的增加，杂合体变异性状得到分离和表现型变异性状得到纯合，使所有的变异，不管是有利的还是不利的，其遗传性相对稳定下来。棉花经济性状的遗传率高低不一。一般地，遗传率高的性状，如单基因控制的质量性状，低世代时就能达到相对稳定；遗传率低的性状，如多基因控制的数量性状，只有在较高世代时才能达到相对稳定。变异性状只有达到相对稳定，不再出现明显分离时，选择才有效。不同变异性状选择的最适宜世代并不一样。为了增进加代速度，缩短育种年限，在我国，利用18°N上下的海南岛南端冬季气温较高，又是旱季的有利条件，进行秋播、冬长、春收。这样，棉花就能在一年内完成两个世代周期。但海南岛与大陆棉区的气候、生态等条件差别很大，一般在海南加代期间不进行选择，但也有加代选择成功的例证。有条件的也可在当地，冬季利用大型可控温室进行少量材料的加代。随着生物技术的发展，可利用单倍体培养技术，将变异性状的染色体加倍，或克隆复制变异株的体细胞，经组织培养，形成再生植株，获得较为稳定的变异材料。选择变异是贯穿新品种选育始终的重要环节。棉花育种的创造性，主要是通过选择来实现。对已相对稳定的性状变异材料，紧接着就是一系列的选择过程。选择变异，既是技术，也是艺术。要紧紧瞄准育种目标，运用科学的试验方法和测试手段，层层筛选，尤其要依赖于育种家的丰富经验和高超的业务素质。要重视田间选择、室内选择和生长前期选择，更要重视生长后期和多方位的反复选择。要自始至终贯彻精益求精、优中选优的原则，在众多的个体中，不遗漏一株优异的变异株，也不滥竽充数多留一株劣变株，以保证育成高质量的新品种。根据确定的育种目标，选择已经相对稳定的变异后，需根据留优汰劣的原则，通过科学的鉴定和比较，才能确认某些优异变异性状成为育成新品种的属性，这是选择的继续。鉴定是在特定条件下，对某一变异性状进行有效性的直接鉴别和确认。例如，抗枯萎病性、抗黄萎病性、抗棉铃虫性、抗棉蚜性、抗旱性等。抗枯、黄萎病性鉴定，原则上是在人工接种、发病均匀的病圃中进行，也可在重发病区选择发病均匀的自然病圃中进行。抗虫性鉴定需在人工隔离环境中接种一定量的害虫数。抗旱性鉴定需设置遮雨和防止地下水浸入等设施。有些性状也可利用生物、理化反应法进行间接鉴定，但最后仍需进行直接鉴定。鉴定时要求设置抗性和感性两个对照，还需要多点、多年或多次重复，尽量减少误差，以避免年份和环境引发的影响干扰。纤维品质测定，是确保棉花新品种纤维品质必不可少的鉴定内容。利用HVI系列测试仪器，由于每份测试样本量小，要求用随机法抽取皮棉样本，以增加样本的代表性。育种材料的比较这一程序既重要，也繁复。随着育种进程，对照育种目标，全面考虑丰产性和有关经济、农艺性状的要求，从初级到高级，进行比较试验和鉴定，并根据结果进行逐级淘汰。对保留的材料要求要高，必须重视性状的综合表现；淘汰材料要慎重。过去的育种实践中，从原来因疏忽被淘汰的材料中，后来又选育出较突出的新品种的育种事例也有。棉花育种材料的比较，一般从株行试验，到株系试验、品系试验、区域试验和生产试验，逐级进行。从株系试验开始进行有重复的比较试验；从区域试验开始进行多点、多年有重复的比较试验。优良变异性状的稳定是相对的，而得到的稳定性状发生再变异则是绝对的。再变异的方向不能确定，往往是优变的几率较少，而劣变的几率更多。这就是品种的退化。棉花良种退化是困扰棉花生产的一大难题。常常是一个良种推广不久就发生退化，削弱了良种的作用。所以，重视和切实采取有效技术，保持育种目标所要求的变异性状，就显得十分重要。这就是良种繁育。良种繁育的任务是保持住优良品种的种性、纯度，即保证良种的品种品质。纯度是指品种纯度，并非遗传纯度。从农业生产的实际需要出发，并不要求品种在遗传上的纯化。品种本来就是一个遗传复合体，诸多性状不需要、也不可能达到遗传上100%的纯度。但必须保证主要经济性状表现型的相对一致性和稳定性。要达到这一目的，在技术上必须最大限度地避免育成的新品种发生生物学混杂和机械混杂。因为混杂的发生，必然会导致主要经济性状的退化。棉花品种的退化，往往会出现绒长变短、衣分下降、纤维变粗、铃重变轻、营养生长过旺等非人们植棉所企求的性状。在棉花进化过程中，存在着两种选择的激烈竞争。一是自然选择，另一是人为选择。自然选择的方向是按照有利于棉花物种自身的生存和繁衍更多的后代进行的。人为选择的方向是按照人们植棉所企求的经济性状进行的。两者虽有共同点，而在经济性状方面多数是反方向的。若竞争结果是前者超过后者，即出现“退化”现象。所以，“退化”是人们从植棉目的的角度给予的评价。但从棉花物种发展的角度评价，这种“退化”恰恰正是棉种自身需要的“进化”。生物学混杂和机械混杂给人们认为的“退化”创造了条件。所以，只有一方面尽量限制生物学混杂和机械混杂的机会，另一方面当人为的选择压超过自然选择压时，才能保持种性，即保持住育种目标所企求的变异性状相对稳定，不发生劣变，不发生“退化”。这就是良种繁育的功能。棉花对枯萎病抗性的遗传，国内外的研究报道较多，但结论不完全一致，多数认为，抗枯萎病性是由多基因控制的。Fahmy（1927）用免疫品种与感病品种杂交，F1是免疫的，F2分离出75%的免疫株、15%的耐病株和 10%的感病株。免疫株可固定不再分离，说明它是纯合的；耐病类型可再分离出免疫株、耐病株和感病株3种类型都有；而感病株一般在苗期便死去。他在以后的试验中，Fl、F2也出现类似情况。而在海岛棉中，他认为，是由一个显性基因和几个微效基因所决定的。Kelkar等（1947）也指出，海岛棉的抗枯萎病性是由1个显性基因和1个到多个修饰基因所控制的。在亚洲棉中，他发现了2个互补显性抗病基因和第三个具有抑制作用的基因。Jones等（1957）在用具有半半棉血统的珂字棉100GA与德字棉425的研究表明，在枯萎病和肾形线虫并存的情况下，其抗性由2～3个基因控制。Smith等（1960）认为，陆地棉对枯萎病的抗性是受一个主效显性基因和一些修饰基因所控制；而海岛棉的抗性是受2个具有加性效应的显性基因控制。Jobes（1961）以抗病的德字棉425、珂字棉100GA与感病的半半棉杂交，F2、F3群体中，抗、耐、感病植株数量呈连续变异，故认为是数量性状遗传，其抗病性是由2～3个基因所控制。Kappelman （1971）用P1、P2、F1、F2、BC1F1、BC2F2 6个世代在6种不同条件进行试验后指出，在42个试验中，有34个的抗枯萎病性的加性效应是显著的，有2个的显性效应是显著的，有8个的上位性效应是显著的。在这10个非加性效应为显著的实例中，除1个外，加性效应也是显著的。所以，他认为，对他所研究的材料而言，加性基因效应最能说明棉花枯萎病抗性的遗传。Aibeles（1978）也认为，棉花对枯萎病抗性遗传的基因作用，加性效应大于显性效应。Singh等（1988）在亚洲棉的完全双列杂交后代研究中认为，抗病性是显性，而且一般配合力方差大于特殊配合力方差，说明对抗性遗传的基因作用，也是以加性效应为主。但Rird （1973）认为，棉花对枯萎病的抗性属于显性基因效应。Megahed等（1984）在不同类型海岛棉的双列杂交中发现，对枯萎病抗性表现明显的杂种优势，说明基因效应是非加性的。在F1和F2中，一般配合力和特殊配合力都显著，但特殊配合力比一般配合力更强，说明其遗传的基因效应是非加性的显性效应，抗性受微效多基因所制约。Campagnaco（1971）认为，大多数杂交组合的抗枯萎病性是单基因的不完全显性遗传，F2可分离出抗病和感病类型。但是，有的研究结果认为，棉枯萎病抗性是显性单基因遗传的。Netzer （1985）用陆地棉与海岛棉杂交也认为，棉花枯萎病抗性是一个显性基因控制的。冯纯大等（1996）报道，16个抗×感组合的F2代抗、感植株出现3∶1分离比例，亦证实抗枯萎病性受一对基因控制。20世纪70年代，陕西省棉花研究所、原北京农业大学（现中国农业大学）、江苏南通地区农业科学研究所等从大量杂交后代的分析中认为，杂种后代对枯萎病的抗性，与亲本的抗性水平密切相关。在感×感组合中，后代的抗性差；双亲抗性中等或在抗×感组合中，后代多为耐病；在抗×耐或抗×抗组合中，后代的抗性强等。并从育种实践中，总结出一些抗枯萎病性遗传的趋势。据王远等（1980）研究，陆地棉抗枯萎病受显性基因控制，双亲之一具有抗枯萎病性，其后代则表现抗病，因此，采用耐病、丰产、优质品种作母本，高抗枯萎病品种作父本，以培育优质、丰产、抗病品种。校百才（1985、1988、1992）多年采用不同组合的试验表明，抗枯萎病性的一般配合力方差大于特殊配合力方差，说明抗枯萎病性的遗传中，加性效应是主要的。其狭义遗传率分别为42.6%、19.5%和46.5%；广义遗传率127121分别为72.5%、35.2%和76.98%。李俊兰（1987）用4个抗病×感病的陆地棉组合后代分析后表明，各组合抗病性遗传中的加性成分达到了极显著水平；有一个组合的显性效应及加性×加性、显性×显性上位效应和另一组合的加性×加性上位效应也达到了显著水平。各组合的广义遗传率127121平均为66.32%。王振山等（1989）在抗×感、抗×耐和抗×抗等类型组合的P1、P2、F1、F2、B1和B2各世代的平均数分析中指出，所有组合的抗枯萎病性的加性效应均达显著水平；但也还存在显性和上位效应，如在抗×感组合中，抗病性的加性效应、显性效应、加性×显性上位效应都有作用；而在抗×耐组合中，主要是加性和显性效应。并认为抗枯萎病性是受多基因控制的。张凤鑫等（1990）用44个品种做试验的结果表明，陆地棉抗枯萎病的广义遗传率为86.7%，属遗传率高的性状。张金发等（1994）在发病严重而均匀的田间病圃中，对4个抗病品种和4个感病品种的8个亲本及其28个Fl（无反交）进行抗枯萎病性鉴定发现，亲本的抗性水平与其配合力效应、显性作用大小是基本一致的，以苏棉3号、中棉所12和鄂62-1的抗性最高，配合力最好，显性作用最大，是较好的抗病亲本。Hayman-Jinks法分析表明，抗病性为部分显性，以加性效应占优势，显性效应较小，无上位性。广义和狭义遗传率均很高，分别为91%和83%，至少有一组显性抗病基因控制棉花枯萎病抗性的遗传。校百才（1985、1988、1992）多年采用不同组合的试验表明，抗枯萎病性的一般配合力方差大于特殊配合力方差，说明抗枯萎病性的遗传中，加性效应是主要的。其狭义遗传率分别为42.6%、19.5%和46.5%；广义遗传率127121分别为72.5%、35.2%和76.98%。李俊兰（1987）用4个抗病×感病的陆地棉组合后代分析后表明，各组合抗病性遗传中的加性成分达到了极显著水平；有一个组合的显性效应及加性×加性、显性×显性上位效应和另一组合的加性×加性上位效应也达到了显著水平。各组合的广义遗传率127121平均为66.32%。王振山等（1989）在抗×感、抗×耐和抗×抗等类型组合的P1、P2、F1、F2、B1和B2各世代的平均数分析中指出，所有组合的抗枯萎病性的加性效应均达显著水平；但也还存在显性和上位效应，如在抗×感组合中，抗病性的加性效应、显性效应、加性×显性上位效应都有作用；而在抗×耐组合中，主要是加性和显性效应。并认为抗枯萎病性是受多基因控制的。张凤鑫等（1990）用44个品种做试验的结果表明，陆地棉抗枯萎病的广义遗传率为86.7%，属遗传率高的性状。张金发等（1994）在发病严重而均匀的田间病圃中，对4个抗病品种和4个感病品种的8个亲本及其28个Fl（无反交）进行抗枯萎病性鉴定发现，亲本的抗性水平与其配合力效应、显性作用大小是基本一致的，以苏棉3号、中棉所12和鄂62-1的抗性最高，配合力最好，显性作用最大，是较好的抗病亲本。Hayman-Jinks法分析表明，抗病性为部分显性，以加性效应占优势，显性效应较小，无上位性。广义和狭义遗传率均很高，分别为91%和83%，至少有一组显性抗病基因控制棉花枯萎病抗性的遗传。校百才（1985、1988、1992）多年采用不同组合的试验表明，抗枯萎病性的一般配合力方差大于特殊配合力方差，说明抗枯萎病性的遗传中，加性效应是主要的。其狭义遗传率分别为42.6%、19.5%和46.5%；广义遗传率127121分别为72.5%、35.2%和76.98%。李俊兰（1987）用4个抗病×感病的陆地棉组合后代分析后表明，各组合抗病性遗传中的加性成分达到了极显著水平；有一个组合的显性效应及加性×加性、显性×显性上位效应和另一组合的加性×加性上位效应也达到了显著水平。各组合的广义遗传率127121平均为66.32%。王振山等（1989）在抗×感、抗×耐和抗×抗等类型组合的P1、P2、F1、F2、B1和B2各世代的平均数分析中指出，所有组合的抗枯萎病性的加性效应均达显著水平；但也还存在显性和上位效应，如在抗×感组合中，抗病性的加性效应、显性效应、加性×显性上位效应都有作用；而在抗×耐组合中，主要是加性和显性效应。并认为抗枯萎病性是受多基因控制的。张凤鑫等（1990）用44个品种做试验的结果表明，陆地棉抗枯萎病的广义遗传率为86.7%，属遗传率高的性状。张金发等（1994）在发病严重而均匀的田间病圃中，对4个抗病品种和4个感病品种的8个亲本及其28个Fl（无反交）进行抗枯萎病性鉴定发现，亲本的抗性水平与其配合力效应、显性作用大小是基本一致的，以苏棉3号、中棉所12和鄂62-1的抗性最高，配合力最好，显性作用最大，是较好的抗病亲本。Hayman-Jinks法分析表明，抗病性为部分显性，以加性效应占优势，显性效应较小，无上位性。广义和狭义遗传率均很高，分别为91%和83%，至少有一组显性抗病基因控制棉花枯萎病抗性的遗传。对棉花枯萎病抗性的遗传研究，以前多采用Griffing的配合力模型及其分析方法估算配合力效应，再用Hayman（1954）的双列分析方法估算遗传方差分量和遗传率。由于这是两个不同的遗传模型和分析方法，对一组资料分析的结果可能不尽相同，对多世代材料也不能同时进行综合分析。为此，韩祥铭等（2001）采用朱军（1997）提出的混合线性模型ADM遗传模型和ADAA遗传模型估算遗传方差和遗传率并对估算的参数进行显著性检验，从而可对亲本和组合的遗传表现进行评估。结果表明，棉花枯萎病抗性遗传，加性方差占表现型方差的49.9%，显性方差占表现型方差的13.1%，母体方差占表现型方差的0.8%，母体效应很小，主要是加性效应和显性效应，显性和环境的互作效应占表现型方差的27.0%，差异极显著，表明显性效应易受环境因素影响。广义遗传率为63.0%，狭义遗传率为49.9%，棉花枯萎病抗性遗传以加性效应为主，遗传率较高，在重病地连续选择抗病株，有利于提高枯萎病抗性。由于不同试验所用材料、鉴定方法和技术的不同，加之棉花受多种枯萎病菌生理小种侵染，抗病基因对病菌不同生理小种的抗性不同，不同的生理小种要有不同的抗病基因，不同的生态环境，有不同的生理小种。在自然生态条件下，枯萎病菌多种生理小种可能同时存在，这样就造成了棉花枯萎病抗性遗传研究结果的多样性。但多数研究结果表明，枯萎病抗性遗传以加性效应为主。育种实践也证明，在发病均匀的重病地，连续选抗病株能选育成抗病品种。因此，进行枯萎病抗性遗传研究，对棉花育种工作有指导意义。棉花对枯萎病抗性与对其他病害抗性的关系，赵俊兴等（1991）对多个品种，通过线性相关分析指出，棉花品种对枯萎病和黄萎病的抗性为高度正相关，也说明品种对两种病害的抗性间有显著的相关关系，这证实选育兼抗枯、黄萎病品种的可能性。马存等（1992）的鉴定指出，抗枯萎病的陆地棉品种，也能抗苗病。Shepherd（1986）报道，棉花枯萎病的发病率与根结线虫的产卵量呈高度正相关（r=0.73**），并指出，具有抗根结线虫基因的棉株，其根际或根部所渗出的物质，可特意地诱导对枯萎病菌有抑制作用的微生物，因而表现出抗病性。关于抗枯萎病性与其他农艺性状间的相关关系，也有不同的试验结果。Patel等（1950）认为，新百万棉（NewMillion Dollar）品种的抗枯萎病性，似与不利的农艺性状相连锁，Sappenfield （1963）报道，棉花品种对枯萎病的抗性与皮棉产量呈负相关等。由此认为，抗病品种的农艺性状较差。中国在选育、推广抗枯萎病品种的初期，也有类似的观点，但后来的试验和实践证明，这种现象不是普遍规律。马存（1985）的研究指出，无论在中水肥或高水肥条件下，枯萎病越重，对皮棉产量和多数纤维品质的损失越大。在中水肥条件下，枯萎病病指每增加1，皮棉产量的损失0.94%。李俊蓝（1987）的试验也指出，枯萎病的病级与籽棉产量、皮棉产量、单株结铃数、铃重、纤维断裂长度间的r依次为-0.3285，-0.2990，-0.2991，-0.2441和-0.046，即发病越重，产量和纤维强度越低。周雁声等（1985）用参加全国抗病区试的品种资料进行分析，研究结果显示，枯萎病的病株率与铃重、衣指、籽棉产量、皮棉产量、纤维强力呈极显著的负相关，病指与单株结铃数、衣指、籽棉产量、皮棉产量、纤维强力也呈显著的负相关，说明品种的抗病性越差，对产量和纤维品质的损失越大。另外，从20世纪80年代以来在黄河流域进行生产试验的品种进行分析表明，抗病的中棉所12比感病的鲁棉1号、冀棉8号的产量和品质都要好，证明抗枯萎病性和农艺性状间并不存在遗传上的负相关。高永成等（1985）用感病的原徐州142（病株率44.0%，病指35.9）和经过4年在病地连续选择的抗病徐州142（病株率3.9%，病指2.9）于1979年在无病地上进行了农艺性状的比较，抗病的徐州142比感病的徐州142农艺性状略有提高，如皮棉每亩增产2.75kg，衣分提高0.5个百分点，纤维强力提高0.09g，主体长度增加0.19mm。因而他们也认为，抗枯萎病性与农艺性状间并不存在遗传上的负相关。种质资源或称遗传资源，是指决定各种遗传性状的基因资源。棉花种质资源包括推广品种、过时品种、引进品种、突变体材料、野生种和陆地棉种系，以及棉属近缘植物。是进行棉花品种遗传改良的物质基础，也是研究棉属遗传、起源、进化和分类的基本材料。因此，广泛、持续收集、保存、研究和利用种质资源，是棉花遗传育种研究领域中的一项基础性工作。抗原是抗病育种的决定因素，而种质资源则是棉花抗枯萎病育种中抗原的来源地。我国在20世纪50年代就开始收集棉花品种和种质，并进行抗枯萎病性鉴定。1952～1953年四川省棉花枯萎病防治研究工作组收集了珂字棉8个品系及福字棉6号、鸡脚德字棉、狄胜棉、赖德福阿金等陆地棉品种（系）共33个，海岛棉品种C3173、苏-2198 两个，中棉种质有遂宁土棉、威远土棉等21个，进行抗枯萎病性鉴定。海岛棉中，苏-2198表现耐病、C3173高度感病，发病率为100%，病指79.5；中棉中，抗性最好的是仁寿紫花、盐亭小白花、三台子花、仪陇小白花、余姚小树花、彰德土棉、遂宁28-507-47、威远土棉、宾川土棉，而玉溪中棉在田间未受棉枯萎病感染，表现高度抗枯萎病性；陆地棉发病高，但发病程度差异大，发病率为90%～100%，病情指数为59.3～71.5。20世纪70年代，我国的抗病育种发展较快，对棉花品种资源的收集、抗性鉴定更加重视。1976年，陕西省农业科学院植物保护研究所采用陕西泾阳菌系，第一次对中国2238个棉花品种资源进行了苗期抗枯萎病性鉴定，结果是，无症状免疫类型22个，占总数的0.98%；高抗类型137个，占6.12%；感病类型1724个，占77.03%；其余为耐病类型355个，占15.96%。陆地棉中，表现抗性强的品种有川52-128、川57-681、陕棉4号、陕棉401、陕棉9号、川62-200、川抗病洞庭棉、晋68-389、晋68-400、云112-3、86-1号、陕棉8号、陕棉10号、咸73-74和咸73-145。中棉的抗枯萎病性强、抗源丰富，经反复试验证明，赤木黑种、赤木白种、法库白子、中棉所6号的抗枯萎病性强而稳定。1975～1979年连续8批鉴定了中国棉花品种资源共3710个。根据病指划分为不同抗病性反应型，属免疫类型（无症状）的23个，占总数的0.62%；属高抗类型的164个，占4.42%；属抗病类型的187个，占5.04%；属耐病类型的351个，占9.46%，属感病类型的2385个，占80.46%。从不同棉种相比较，其中，以中棉抗病性较强，陆地棉次之，海岛棉、木棉抗病性最弱（表5-1）。中棉、陆地棉、木棉和海岛棉的平均病指分别为5.34、34.29、76.4和76.85。棉种名称供试品种（系）免疫高抗抗病耐病感病病指0病指0.1～10病指10.1～25病指25.1～50病指50.1～100个数%个数%个数%个数%个数%陆地棉3102130.42993.191374.422608.38259383.58海岛棉27841.4427498.57中棉308103.256521.104715.268627.9210032.47木棉1715.881694.11草棉5360.00240.00合计3710230.621644.421875.043519.46298580.41表5-1 不同棉种对枯萎病苗期抗性鉴定1993年，陕西省农业科学院植物保护研究所又对348个亚洲棉（即中棉）品种进行抗枯萎病苗期抗性鉴定，病指为1～25的有288个，占82.8%；病指为25.1～50.0的有34个，占9.8%；病指为50.1～100.0的为26个，占7.4%。其中，简中1号、浙江余姚黄蒂大部等抗性强。52-128和57-681是中国育成的第一批高抗枯萎病抗原种质。四川省棉枯萎病工作组自1952年在发病90%以上的大榆区紫云乡105亩（667m2）左右的德字531棉田中，初选抗病单株916株，1953年经病圃鉴定筛选出抗病性强的11个系，经反复比较鉴定筛选，1956年培育出高抗枯萎病品种52-128。1957年全省换种岱字棉15后，利用新品种农艺经济性状好的优点，又在三台、射洪县种植的岱字棉15号重病田中，选取剖秆未见病状的单株1015株；仍采用病圃筛选的方法，于1963年再次选育出高抗枯萎病的品种57-681。这两个抗源品种经试验鉴定，具有抗病性强、抗病力稳定、抗性适应广的特点。20世纪60年代中期至90年代中期，在四川省棉枯萎病协作组人工病圃中，52-128病指稳定在3.6～22.6，平均11.2，比感病对照种减轻77.8%；57-681病指2.0～3.1，平均2.3，比感病对照种减轻91.2%。1970～1982年，以52-128、57-681多代自交材料种植于人工接菌病圃和零星病地，连续3年自交仍种植于同一条件下的抗性鉴定表明，虽经长期种植，两个抗源品种的抗性一直保持很强，未出现衰退现象，即使在零星病地种植3年，抗性与人工病圃无明显差异。1981年选用有代表性的生理型Ⅰ号川F5（四川射洪县）、陕F9（陕西高陵县）、生理型Ⅱ号浙F2（浙江慈溪县）、冀F8（河北峦城县）、生理型Ⅲ号新Fl（新疆吐鲁番县）等不同生理型菌系对52-128、37-681及抗、感杂交组合后代作病菌与寄主互作关系的抗性鉴定表明，52-128、57-681对我国棉枯萎病菌3大生理型中的5个菌系间致病力分化性互作不显著。1972～1973年和1979～1980年，全国棉枯萎病生理型试验结果表明，52-128对18个省、市、自治区不同地区的129个棉枯萎病菌系中，属高抗类型的有12个，抗病类型72个，耐偏抗类型36个，合计120个，占参试菌系的93%，只有9个强致病菌系对52-128呈感病类型。这两个抗源品种育成后，于60年代初被陕西、山西等省引进试种，表现出抗性强、稳定性好，从而用作抗原进行杂交转育或取材，育出陕4号、陕401、晋68-420、运安1号等，分别在四川、陕西、河南等棉病区种植，防病增产效果良好。1972年后是我国抗病育种取得较大发展的时期，河南、江苏、云南、陕西、山东、浙江、河北、山西、湖南和江西等省先后引进52-128、57-681用作抗原进行杂交转育或系统选择，培育出21个抗枯萎病品种（系），分别在全国10个省推广种植，防病增产效果显著。据《全国农作物审定品种名录》（2005）、《中国棉花品种及其系谱》（1996）、《中国棉花品种系谱图》（2000）资料分析，以及中国农业科学院棉花研究所等50余家育种单位利用这两个抗原的应用证明统计，全国利用抗原52-128、57-681育成棉花抗病品种128个。在不同转育代次育成的抗病品种中，集中来源于第二代至第五代的有121个，占94.5%；被利用作母本、父本育成的品种分别各占有54.7%和31.3%（表5-2、表5-3）。利用52-128抗原品种作抗原，通过杂交或系统选育的抗病品种，在各地方推广应用都表现抗性良好（表5-4）。省份育种单位（个）80年代90年代2000～2004年总计河北765112山西33429辽宁244江苏9112720浙江111安徽1516江西111山东31427河南9812222湖北49211湖南21124四川5511319陕西29211新疆111合计503569128表5-2 不同时期不同地区利用抗原52-128、57-681育成的审定品种数抗原用途一代二代三代四代五代六代总计母本（♀）11029191170父本（♂）46917440系统选育15542118合计6214340171128表5-3 抗原种质52-128、57-681不同转育代次育成的品种数项目四川湖北新疆江苏云南山西陕西辽宁上海山东河南河北北京浙江甘肃安徽湖南江西合计供试菌系179985111466777552911129抗性反应高抗01600000020100020012抗病861327114546422151072耐病71043432110232110136感病2121000000100101009表5-4 52-128对不同地区菌系的抗性反应抗原种质在育种上应用成败的关键，一是抗原抗性稳定性。抗性稳定而持久的抗原，转育利用的抗性不易衰失，能持久保持利用；二是抗原种质的遗传效应，这是转育利用的基础；三是抗原种质经济性状的遗传效应，这对利用价值影响极大。针对这三个关键问题，叶鹏盛等（2007）对52-128和57-681的抗性遗传做了研究。结果证明，这两个抗原的抗性长期稳定（表5-5，表5-6），且抗性遗传效应好、遗传率高（表5-7），其他不良性状在杂种后代中的遗传不显著（表5-8），为我国利用两个抗原的抗性，选育抗病品种奠定了良好的基础。供试品种种植1年种植2年种植3年种植4年病圃无病地病圃无病地病圃无病地病圃无病地521284.504.504.503.502.752.750.752.75576816.003.507.254.502.252.251.253.25川73274.008.009.008.003.503.502.507.25川4149.005.755.758.001.001.001.250.75达棉1号30.7556.7523.556.7535.0035.0017.2536.50显著性（t值）0.53240.62710.06431.1214表5-5 在病圃和无病地筛选后抗原的病情指数世代52128×达棉1号57681×达棉1号达棉1号×52128达棉1号×57681病圃无病地病圃无病地病圃无病地病圃无病地显著性（t）F135.0019.2541.0024.5018.5023.7521.7524.502.5687F231.2519.2519.2524.5012.7517.2518.7516.252.3072F310.2519.7515.5025.507.7520.258.0025.508.6017**F42.0013.751.2524.508.7521.759.7520.509.0275**表5-6 在病圃和无病地筛选后抗原不同杂交后代的病指抗源及组合平均病指F1F2中亲值相对优势（%）广义遗传率（%）狭义遗传率（%）52128×达棉1号29.5039.2539.75-25.7968.952.157681×达棉1号25.5034.0040.50-37.0473.156.77329×达棉1号29.0037.2541.25-29.7070.548.2川414×达棉1号29.7539.7542.00-29.1767.443.6达棉1号×5212835.2535.0039.75-11.3272.953.7达棉1号×5768134.5034.5040.50-14.8175.452.4达棉1号×732737.0038.2541.25-10.3072.353.4达棉1号×川41437.2541.7542.00-11.3169.246.5521284.00576815.50川73277.00川4148.50达棉1号75.50表5-7 抗原种质52-128、57-681的抗性遗传效应抗源及组合株高（cm）单株铃（个）衣分（%）F1F2中亲值F1F2F1相对优势（%）F1F2中亲值F1F2F1相对优势（%）F1F2中亲值F1F2F1相对优势（%）52128×达棉1号99.3100.188.491.012.319.717.317.017.915.836.137.236.737.8-1.6表5-8 抗原种质52-128、57-681的主要经济性状的遗传表现抗源及组合株高（cm）单株铃（个）衣分（%）F1F2中亲值F1F2F1相对优势（%）F1F2中亲值F1F2F1相对优势（%）F1F2中亲值F1F2F1相对优势（%）57681×达棉1号93.897.685.186.010.221.018.916.118.930.438.438.337.538.8-2.4川7329×达棉1号86.790.083.483.83.823.220.320.119.715.440.340.239.840.31.3川414×达棉1号85.189.782.784.82.919.418.919.818.8-2.039.840.140.340.3-1.2达棉1号×5212898.996.388.491.011.923.218.817.217.952.837.839.636.737.8-3.0达棉1号×5768187.188.885.186.09.424.621.216.118.934.938.938.337.538.83.7达棉1号×732785.287.683.483.82.323.722.620.119.717.940.941.239.840.32.8达棉1号×川41490.385.182.784.89.221.719.819.818.89.640.140.040.340.3-0.4表5-8 抗原种质52-128、57-681的主要经济性状的遗传表现（续）-1磷作为植物生长发育的必需营养元素之一，不仅是植物体内许多重要化合物的组分，而且还以多种途径参与植物体内各种代谢过程，在人类赖以生存的生态系统中，起着不可替代的作用。植物吸收磷的主要形式是，它们在土壤溶液中的浓度很低，一般只有1.5μmol/L。因此，磷容易被土壤固定，在土壤溶液中的移动性很差。大多农业土壤因长期施用磷肥已成为潜在的磷库，磷肥效应与土壤有效磷含量呈负相关，磷酸盐的化学性质使其成为作物难以利用的固定态磷，造成土壤磷的“遗传学缺乏”而非“土种类之间和同一植物的不同品种之间的磷素营养利用效率存在差异”。陆文龙等（1999）研究表明，营养高效基因型是指在缺磷条件下，能够利用自身根系分泌的有机酸活化土壤中难溶性磷，协调生长代谢，维持正常的生长发育过程，最终形成较高产量的基因型。由于植物对磷素的利用能力具有模糊性，耐低磷基因型和非耐低磷基因型的表现特征是连续的，没有明显的界限，磷素的影响不仅表现在相对干物重上，而且与植株的地上部鲜重、叶绿素含量、总叶面积等性状也相关。王士杰等（2009）首次在确立的筛选指标基础上，从88个棉花抗枯、黄萎病品种中筛选出25个耐低磷基因型品种（包括中棉所9号、中棉所15、中棉所21、中6331、86-1、豫棉1号、豫棉8号、豫棉22、冀棉7号、冀棉20、冀合3028、鲁无401、鲁棉14号、陕棉11、苏棉12、徐261、泗棉3号、川棉109、绵阳83-21、辽棉12、皖棉11、GK1、Stoneville 603、Deltapine 61和渤棉抗4）和3个耐低磷极端基因型品种（中棉所21、中99和陕棉11）。这些品种可以作为培育耐低磷胁迫的棉花抗病品种以及开展棉花耐低磷QTL定位与克隆等研究的重要资源。鉴于新疆长绒棉枯萎病迅速蔓延，给长绒棉生产带来巨大威胁，生产上迫切需要长绒棉抗病品种来减轻枯萎病的为害。在长绒棉现有的品种和品系中很难找到抗源。为此，武刚等（2006）利用抗枯萎病的陆地棉品种作种间杂交选育，经病圃多年筛选、鉴定出4个高抗枯萎病，而纤维品质达到长绒棉标准的新种质。生育期143天，绒长36.5mm，比强度31.8cN/tex，马克隆值3.7，单铃重2.4g，衣分31.8%，皮棉产量85.7 kg/667m2，病指6.38，表现为高抗。生育期146天，绒长36.5 mm，比强度37.0cN/tex，马克隆值3.3，单铃重2.5g，衣分32.8%，皮棉产量90.6 kg/667m2，病指3.87，表现为高抗。生育期148天，绒长36.6 mm，比强度30.4cN/tex，马克隆值3.7，单铃重2.5g，衣分32.3%，皮棉产量82.3 kg/667m2，病指3.18，表现为高抗。生育期147天，绒长37.3 mm，比强度33.0cN/tex，马克隆值3.7，单铃重2.3g，衣分29.4%，皮棉产量78.6 kg/667m2，病指1.36，表现为高抗。刘泽辉等（2008）对上述4份新种质在进一步杂交转育研究后认为，所选育的新品系同抗病新种质的抗病性没有明显差异，年度间抗病性差异小，说明抗病性呈显性性状、能稳定遗传。这为今后长绒棉抗枯萎病育种提供了很好的抗源材料，为棉花产业发展奠定了基础。但同时也指出，长绒棉抗枯萎病新种质在田间长势旺、抗病性强，但铃重偏低，产量不太理想。此外，这些高抗枯萎病新品系种植在多年陆地棉黄萎病很重的棉田，偶尔发现一两株有黄萎病病症的棉株，也许是杂交后代具有一定的陆地棉基因。因此，新种质抗性基因遗传特性、抗性生理生化方面的研究以及产量的提高等还有待进一步加强。在制定抗病品种育种目标时，既要求选育的品种具有抗病性，同时又要丰产和纤维品质优良，即除抗病性外，其他性状应与当地推广的非抗病丰产品种要求相似。事实上，一个耐病而丰产优质的品种往往比高抗而低产劣质的品种更有实用价值。进行抗病育种时，要注意不仅培育只对某一种病害的某一生理小种具有特异性抗性的品种，而且要培育多抗（水平抗性）品种，因为具有特异性抗性品种在出现新的菌株和生理小种时，抗性即消失。棉田单一的枯、黄萎病区较少，多为混生病区，因此，培育具有兼抗特性的品种，在制定抗病育种目标时也应加以考虑。在自然界棉花群体中，个体间总是存在着微小或明显的性状差异，包括株形结构、结铃性状、抗逆性差异等。由于棉花的遗传背景比较复杂，在外界环境条件影响下，常表现出多样的变异。这些变异既有遗传性状决定的变异，也有受环境影响产生的差异。系统育种的关键，即是发现变异，如在感病株的群体中选择抗病变异株，继而优中选优，严格鉴定。系统选育方法能在抗病育种中取得一定效果的原因在于：①棉花是常异花授粉作物，由于经常的天然杂交，增加了遗传基础的复杂性。一个棉花品种，一般人们较重视的一些农艺性状和经济性状是相对一致的，而人们没有注意的或缺少一定条件暂时未表现的性状（如在无病地的棉花抗性），个体间存在差异，有时差异可能很大。如能为棉花创造一定的条件（如发病条件），就可使个体间抗病性差异表现出来。重病地提供了筛选的条件，因此，一次选择可能选出抗病的个体。②棉花对枯萎病的抗性遗传是由基因所控制，当一个品种处于一种复杂群体状态时，这些抗病基因可能分别存在于不同个体上。在经过一次抗性选择的基础上，由于天然杂交，杂合体抗性基因分离重组，必然会产生抗性基因积累，连续选择便有可能把具有多个抗性基因累加效应的个体选择出来，从而进一步提高了抗性。③根据Vidhyasekaran（1988）“几乎所有植物都存有抵御微生物入侵的防卫机制”的论断，寓意着植物的抗性是固有存在着的。从抗性的性质来看，植物的抗病机制包括预存性被动机制，以及被病菌侵染后激发产生的主动防卫机制。在主动抗病性中，有两套基因先后起作用，即抗病基因和防卫反应基因。抗病基因产物对病菌无毒基因产物有识别作用，从而可诱导防卫基因表达，产生一系列防卫机制，所以，抗病基因产物有识别作用。抗病基因是一种效应分子（抗病蛋白），本身无杀菌作用，真正起作用的是通过防卫机制产生的物质，在形态和生理生化上的许多改变，这些抗病变化包括，植物保护素的合成、细胞壁修饰（愈伤组织、木质素和酚类化合物在壁上沉积）、富含羟脯氨酸糖蛋白的积累、蛋白酶抑制剂和能抵御病原物细胞壁的水解酶（角质酶和葡萄糖酶）的产生。所以，在植物抗病性反应中包括两个阶段。第一阶段为决定阶段，通过病菌无毒基因产物和寄主抗病基因产物相互识别决定寄主抗病性表达；第二阶段是表达阶段，即上述一系列的防卫反应。在病菌的激发下，寄主内的抗病物质得到启动，表现出病株率显著下降，抗病性明显上升。而抗病性的识别机制与病原菌的无毒基因产物识别有一个过程，因而抗病性在连续选择中得以表现与提高。在中国棉花抗病育种史上，系统育种是20世纪80年代前所采用的主要育种方法。据1974年统计，全国育成的148个品种中，67.6%的品种是采用系统育种法育成的。70年代所育成的48个品种中，也有26个是采用系统育种法育成的。川52-128和川57-681是我国棉枯萎病的主要抗原，两者都是在重病田上经连续选择而育成的。川52-128选自古老的栽培品种德字531，川57-681选自岱字棉15，86-1来自陕65-141，陕3563、川73-27、鲁抗一号均选自陕4。中棉所3号选自乌干达3号。系谱选择法是系统育种中最常用的方法，它不仅用于从自然变异选择的系统育种，也应用于杂交、化学和物理方法诱变等人工方法产生的变异群体。在自然变异和人工创造的变异群体中选择单株或单铃种成株行或铃行，每株行或铃行为一个家系或“系统”，由于“系统”间差异比个体间差异大，故先选择优良系统，而后在当选系统内继续选株或选铃，种成下一代株行或铃行。选择连续进行数代，等系统内植株性状已趋一致时，选留符合育种目标的系统，按系统收获。翌年升入设有重复的鉴定圃比较产量，通过一年或多年、一地点或多地点产量比较，鉴定出产量高并具有育种目标要求的品质和抗性的系统繁殖成为品种。系统育种方法简便，收效快，是棉花育种的主要方法之一。但该法也有一定的局限性，表现在：①系统育种的效果主要决定于某品种群体的遗传变异性；而其遗传变异性，表现在天然杂交，基因突变及剩余变异等天然变异。一般地说，这种天然变异几率不会太高，而符合育种目标所要求的有利变异率更低，因而选择效率不高。②应用连续单株选择育成为品种是由一个单株繁衍而成的群体，其遗传基础较窄；对环境条件的适应力差，改进提高的潜力有限。前苏联育种家1978年的试验指出，由21个优良株系组成的品种C-4539群体，经一次选择后，其产量比未经选择的原始群体提高10.5%；而经4次选择的后代产量，虽比未经选择的原始群体提高了4.2%，但比一次选择的后代，降低了6.7%。用8个株系试验的结果表明，经一次选择的后代，其产量仅为未经选择的原始群体的96.7%～99.2%；经4次选择的后代，其产量比原始群体降低17.5%～2.1%。浙江省农业科学院（1974）从岱字棉15号选出浙棉1号，从浙棉1号中又选出协作2号，在协作2号中选出10个株系，其中，只有1个株系的产量超过了对照，增产的幅度较小，抗逆性也差。20世纪60～70年代江苏省徐州地区农业科学研究所在斯字棉2B中，实行优中选优，连续选出了4个丰产性较好的新品种，但这些品种的纤维品质都没有获得明显改进，如徐州1818和徐州142的纤维品质均不理想。为了提高系统育种的效果，可采用下述方法加以改进。①有重复的株行（系）试验。现代的育种方法应能保持和控制遗传变异，即能使育种家容易判明育种材料的遗传变异和由环境条件引起的非遗传变异；而且一个群体对选择的潜在反应的利用决定于所应用的技术方法的有效性。假如所应用的方法不是很敏感的，那么，大多数的遗传变异不仅不能被发现，而且会由于同质性的增加而丧失。由于一个单株后代的种子数量少，故对其后代进行试验鉴定时，增加重复次数比扩大小区面积更能充分利用有限的种子和提高选择的可靠性。②混系法。在改良品种时，为了保持其遗传可塑性，可按一定标准将若干个在形态上基本相似而又不完全相同的家系，合并成为混系品种，其效果比单一家系品种较好。用系统育种方法选育抗病品种，须注意以下一些问题：①整个试验从选择单株到品比试验，自始至终都应在发病均匀的重病地上或人工病圃上进行。以便在表现抗性程度的基础上比较株系间的丰产性和纤维品质。②以当地推广的品种作对照。③除进行一般生育期调查外，应在苗期、现蕾后、结铃盛期以及收获前（劈秆）等不同时期进行发病情况调查。④株行试验可侧重观察抗性，参考结铃性和其他农艺性状的表现。品系预备试验和品种比较试验，则应在表现抗性的基础上注意丰产性和纤维品质。表现较突出的材料可提前进行多点试验，同时进行纤维品质的鉴定，以加速育种进程。⑤已育成的品种在推广和良种繁育过程中，需要继续对抗性进行鉴定和提高。否则一个品种，在同一病区长期种植，由于品种本身抗性组成的变异，以及病原菌的适应性，这一品种的抗性将会有逐渐减弱的趋势。这一方法由高永成等（1995，1996）提出。应用这一方法，徐州地区农业科学研究所、中国农业科学院棉花研究所等单位，从国外新引进的原来感病品种，于5年时间内，改造成抗病品种获得成功。如从1979年开始试验，徐州地区农业科学研究所培育的徐州142、中国农业科学院棉花研究所培育的中棉所7号及西北农业大学培育的西农3195等原来都是高产感病品种，经过5年左右的病床病圃连续群体选择法，徐州142病床枯萎病病株率由原来的97.4%降低为8.5%，岱字棉16病床枯萎病病株率由原来的91.6%降低为8.5%，中棉所7号由原来的99.9%降低为11.3%，西农3195由原来的95.9%降低为7.5%。当选材料，不但由原来感病的转变为抗病的，并且由于连续群体选择，不仅仅着眼于抗性，同时兼顾产量、产量因素及品质性状的同步提高，因而，能将原来的感病品种有效地转变为抗病而综合优良性状的新品种。高永成等（1995）和张云青等（1997）对这一方法作了理论上的分析，认为：①棉花作为枯萎病病原菌的寄主确有在变异的生存条件下，即病茵连续侵入并增大压力条件下，逐渐而又明显地改变自身遗传性以适应新的环境能力。生物的适应变异现象确实存在。同时，棉花寄主确有通过后天获得性遗传累加作用，逐年逐代增强抗性。最终由原感病品种经强化成为高抗品种。没有适应性的变异和后天获得性遗传的累加相互作用，抗性增进不可能，这是抗性提高和定向培育的根本认识之所在。②原感病品种对毒素处理反应迟钝，出现萎蔫现象时间晚，但萎蔫指数高。抗性转化年代愈久、抗性愈高的品种对毒素处理反应愈敏感，出现萎蔫时间也愈早，但萎蔫指数愈低，甚至出现恢复现象。电镜解剖观察到原感病品种导管褐变时间晚，对毒素处理反应迟钝。导管褐变后出现保护性物质——侵填体少，比率小。增进抗性后，导管的褐变现象出现时间，随强化年限增加愈来愈早，褐变后保护性侵填物愈多，比率也愈高。病理学研究结果表明，抗性转化过程即寄主对病菌入侵的反应敏感度和迅速产生保护物质能力，即免疫功能逐年逐代加强的过程。③原感病品种过氧化物酶活性与多酚氧化酶活性高，而抗坏血酸氧化酶活性极低（0值）。定向培育年限愈长，抗性愈高的品种过氧化物酶活性和多酚氧化酶活性愈低，而抗坏血酸氧化酶活性愈高，表明感病品种和抗病品种的生化代谢型确有差别。前两种酶及活性与感病性有关，后一种酶及活性与抗病性有关。抗性转化的实质即代谢型的转化。④育成的抗病品种与感病品种棉籽粉用SDS电泳法进行蛋白质分析表明，感病型品种β组分色谱带量少色淡，抗病品种β组分带量多色深。β组分蛋白质估计为球蛋白。说明抗性转化过程中棉株生化代谢型转化，会影响到种子生化代谢型的变异，这是棉花抗性品种与感病品种生化物质成分的差异。种子球蛋白用SDS-PAGE法分析发现感病的岱字棉16种子球蛋白由10种分子量不等的蛋白质组成，而岱字棉16则由8种蛋白质组成，前者含有较多高分子量蛋白，后者含较多低分子量蛋白，表明抗性增进过程中，种子形成高分子量球蛋白质合成减少、低分子量球蛋白合成增多。抗性定向培育法的关键技术为：①培育的对象应是需要注入和强化抗性的农艺性状优良品种；②注重培育病床、病圃，强化菌种分离与培养；③病床、病圃发病高峰期，强化对棉苗（株）的选择、严格淘汰；④纤维品质测定、淘汰与选择；⑤经3～5年严格筛选，同时，择优进入继续强化抗性的良繁体制。为探讨定向培育法通过病圃加压筛选获得的抗病品种（系）提高抗枯萎病性的病理学机制，吕学莲等（2008）以病圃定向筛选抗枯萎病大幅度提高的棉花材料和原感病品种为对象，研究接种枯萎病菌后抗、感材料的病理学变化。结果表明，两者在宏观病理学方面存在差异，感病品种接种7天开始显症，25天严重发病，整株维管束变色；抗病材料生长健康或只有轻微症状，维管束变色部位仅局限在子叶节以下。在细胞和组织病理学方面，两者也存在差异，侵入前期，抗病材料被侵入细胞中，有细胞壁加厚现象；侵入中期，病菌可通过表皮层侵入感病品种的薄壁组织，但只能到达抗病材料的皮层组织中；侵入后期，抗病材料中，出现大量寄主细胞的降解物质或分泌物将菌丝包围，阻止病菌进一步扩展。抗病材料的抗侵入和抗扩展能力均较感病品种大幅度增强。杂交育种是指用基因型不同的品种（系）作亲本，通过有性杂交获得杂种，继而在杂种后代中进行选择，培育成符合生产发展需要的新品种的方法。在杂交育种中，通过人工有性杂交，可将不同亲本的优良基因组合在Fl的杂种个体中，由于这时的基因型是杂合体，Fl个体自交所形成的F2及其后代因基因分离重组而产生各种变异类型，即出现具有不同性状组合的变异个体，再经选择，自交纯化，就有可能获得综合性状优良一致的新品种（系）或超越双亲的新类型。经此法培育的品种属纯系品种类型。杂交育种是当前国内外作物育种中，应用最广、成效最大的育种方法，是现代作物育种最基本的方法。作物产量、品质、抗性等性状之间，常有负相关现象，已有许多研究者讨论过这一问题，并提出打破或缓解这种负相关的方法。Weikaivan等（1995）提出关于作物性状负相关的见解认为，这是育种上一个极为复杂的问题，比以往人们所提到的应给予更多的重视。据Donald等（1996）认为，许多与生长发育有关的性状都是相互联系的，稳定地保持正或负的相关关系。由于相互联系的性状之间的负相关，阻碍了育种的进展。认为不利性状的联系有3个主要来源，遗传连锁、一因多效，以及一定环境影响下的性状间的相互联系和补偿作用。由于遗传连锁的负相关势必延缓育种进程，但是，只要有充分大的杂交分离群体，并确切地鉴定重组型，遗传连锁是可以打破的。遗传连锁一旦打破，重组型将成为既持久又有利的遗传连锁了。与此相反，由于一因多效的负相关，既不受遗传也不受环境因子改变的影响，比较难以打破。由于环境导致互补而产生的性状间的负相关也难以打破。主要是与产量有关的性状，相互联系形成一个体系。在这个系统内，一个或多个性状必须在表现程度上有所递减，另一性状的表现程度才能有所提高。相互联系的性状应该看成一个有常数容量的生物学体系，选择的目的应该达到一个协调式的理想型，要达到这一体系中多数性状的每一个都能达到理想的水平。使这一体系能作为一个整体达到最大限度的功能，而不是去追逐极端的看起来似乎是最理想的每一个单一性状的水平。在理想的但负联系的性状之间的选择必须进行调和，使这一生物学体系的功能作为一个整体达到最大限度的作用，而不是选择个别性的极端水平。根据这一概念，不顾其他性状只选择单一性状是不合适的。一个符合育种目标的栽培品种应具有这样的基因型，即其体系成员（相互联系的性状）的比例能最好地适应于该品种所生长的环境。另外，必须具有有些独立性状，如对某种特殊病虫害的抗性，因为这种性状的基因较少牵涉到产量因素的负联系中去。通过何种育种方法才能有效地打破这种遗传上负的关联性，获得理想的重组体，育成符合育种目标要求的综合性状优良的新品种，这是国内外棉花遗传育种家一直在努力研究的课题。棉花育种大多采用杂交育种法，显然已取得了显著的成效，但这种方法存在显而易见的缺陷。首先是杂交次数少，不利于有利基因通过交换达到重组，不利于基因加性效应的积累，极大地限制了理想个体出现的几率；其次是难以打破皮棉产量与纤维品质、产量与抗病性性状遗传上的负相关性，难以选择出综合性状优良的个体。针对这些突出问题，国内外棉花育种家试验过多种育种方法。主要有：这个体系是张凤鑫（1987）等研制成功的。育种上不能把各种有益性状集合在一个基因型中，这是由于存在性状间的不利关系，这种关系来自连锁，或“多因一效”，或“一因多效”，但主要是连锁的作用。要从根本上解决这一问题，只有通过遗传信息序列的广泛重组才能改变其连锁状态。把育种群体作为一个动态基因库来处理，通过多个亲本多次的相互交配（含分裂交配）及随时根据需要输入新种质，通过遗传的高度杂合化，打破原有亲本的遗传系统，促成遗传信息序列的广泛重组；打破遗传连锁，释放出潜在有益变异，再按育种目标施以相应的（病、虫、逆境、产量、品质）选择压力，干涉遗传信息序列的分支方向，并通过不断的轮回选择，聚合大量有利基因及其重组体。如此，不但可在一个育种周期内基本实现其综合育种目标，而且，随其杂种库的丰富、改进、演化，可不断创造出新品种。张凤鑫等应用该体系进行育种验证，结果表明，该体系是行之有效的，一是抗性进展快，枯萎病病指较亲本均值降低90%左右，黄萎病病指降低59%，苗病死苗率降低80%，一部分材料还兼抗棉蚜、棉红铃虫、棉铃虫，如杂种优势利用新材料高柱头系102-1，高抗枯萎病，抗黄萎病、抗棉蚜、棉铃虫，高抗红铃虫。二是铃重、单铃子数、衣指、籽指、衣分、单铃皮棉重、2.5%跨距长度、比强度、马克隆值的遗传变异分别扩大2～3倍。抗性与皮棉产量的遗传关系得到改善，产量与苗病死苗率、枯萎病、黄萎病的病指遗传相关系数分别为rg=-0.5，-0.54，-0.13。纤维比强度与苗病死苗率、枯萎病、黄萎病病指的遗传相关系数分别为rg=-0.49、-0.29、-0.28；皮棉产量与纤维2.5%跨距长度、比强度、马克隆值的遗传相关系数分别为rg=+0.45、+0.36、+0.02。高衣分与高比强度的重组率提高到20%以上。皮棉产量与比强度的遗传相关系数由亲本间rg=-0.8变为-0.12。与杂交系谱法比较，相同亲本的入选后代，新体系入选后代的皮棉产量较常规法高12%，比强度高0.6%；第二轮选择则比常规法皮棉增产率达53.7%，比强度高11.3%。研究者利用该体系已育成一批优良新品种，其中，川碚2号曾推广75万亩，创造了166kg/亩的皮棉高产纪录。利用这些新品种还育成了洞A×B023-11、473A×川碚2号、101-l×川碚2号等杂优势新组合，创造了175.4kg/亩的高产纪录。育成的杂种优势利用新材料高柱头系101-1、102-1，同时抗耐枯萎病、黄萎病、棉蚜、棉红铃虫、棉铃虫，育种成效显著。该体系由马家璋等（1987）建立。其指导思想是，通过混交，打破育种性状间的不利遗传负相关；通过混选获得优良基因的重组体。其主要步骤是，以育成的遗传基础丰富的选系为共同亲本，同时与几个各具特色的目标性状亲本杂交。Fl代海南省异地加代。F2代种植在育种基地枯、黄萎病的重病土上；淘汰抗性差的不良组合；保留组合进一步淘汰劣变个体后混收其种子。F3代海南异地种植，进行不去雄的群内混交。每株收摘1～2个混交铃，混合留种，完成一轮混交——混选。按同样方法去完成第二、第三轮的混交—混选。各轮混交群体开放授粉1～2代，然后从群体中选拔优良个体，系统地进行家系鉴定和选择，决选出新品种。该体系的遗传改良效果也是比较好的，表现在：①显著提高产量、早熟性、2.5%跨距长度的平均数。枯、黄萎病的病指保持在高抗和抗的水平；②扩大遗传变异幅度；③改善性状间关系，加强了产量与铃数、铃重间正相关，降低株铃数与铃重、籽指与衣分率之间负相关，皮棉产量与纤维比强度的遗传相关系数由-0.397变为+0.494，株铃数与比强度相关系数由-0.901变为+0.71，衣分与马克隆值相关系数由+0.34变为-0.411，早熟性与皮棉产量相关系数由-0.282变为+0.797。马家璋等采用该体系育成兼抗品种中棉所23。山西省农业科学院棉花研究所采用这一方法也育成了晋棉11。该体系由潘家驹等（1990）建立。修饰回交（modificd backcross）就是回交后代选系间的彼此再杂交，可以培育棉花多系品种。在棉花抗病育种中，通过回交产生若干同质系，然后将各同质系按一定要求混合组成多系品种。通过修饰回交研究，将杂种品系间杂交与回交结合，综合两者特点，回交纯合快，缩短育种年限，后代只聚合回交亲本基因型，选择容易成功。其程序是：选用一个丰产品种作为轮回亲本（A），以优质品种（B）、抗病品种（C）为授予亲本，以品种A分别与品种B、C杂交，其后代分别以A作为轮回亲本回交，分别从回交后代中选拔优系，然后进行不同回交选系的杂交。其程序模式如图5-1所示。通过1980～1990年两轮试验结果表明，修饰回交法对削弱丰产与抗病、抗病与纤维比强度之间的负相关程度有一定效果。第一轮试验中，皮棉产量和病指的相关系数由原来的-0.51转变为-0.21。在第二轮试验中，无论抗病株率与皮棉产量或病指与皮棉产量的直线回归分析，4个修饰回交系均表现出以正效应方向偏离回归线。通过修饰回交使抗病株率与纤维比强度之间的相关系数由-0.4779变为-0.1183，病指与纤维比强度之间的相关系数由-0.5185变为-0.1933。图5-1 修饰回交体系MAR（Multi Adversity Resistance，多抗逆性）体系是Bird等（1980）通过研究种子状况、抗细菌性角斑病和抗性基因之间的遗传关系（图5-2）后提出来的。图5-2 MAR体系中抗病基因与其他性状基因之间的遗传关系从图5-2中可得知：①抗细菌性角斑病与枯萎病（根结线虫病复合体）之间有很强的相关关系；②抗细菌性角斑病与黄萎病、根腐病以及种皮抗霉菌之间的相关关系较小，但显著；③抗枯萎病（根结线虫病复合体）与黄萎病、根腐病之间也存在一定的相关性；④在低温（13～18℃）条件下，降低发芽速度与抗黄萎病、苗期病害有关；⑤种皮抗霉菌的特性与产量、早熟性之间有高度相关；⑥小种子与在低温下发芽快、易感黄萎病密切有关。根据以上研究结果，MAR体系育种方法的关键是：种皮抗霉菌，种子在13.3℃下处理8天后的发芽状况，以及子叶期对多种不同角斑病生理小种的抗性性状的选择。通过对这3种性状的选择，达到改良抗病性、提高产量和提早成熟的目的。具体的技术要点如下。①根据育种目标，选用具有抗性、高产和纤维品质好以及成熟早的材料用作杂交亲本，配制复式杂交组合。例如，品种SP21S是选自杂交组合（SP21F×SP33F）F1×（SP21V×SP37V）F1。②单株选择开始于复式杂交组合的F1代。当选单株的种子经硫酸脱绒，洗净，再用10%氢氧化钠溶液浸数秒钟，洗净后在41℃温度下烘干，以后置于常温下2周时间。③脱绒后的种子放入盛有1.5%洋菜培养基的培养皿内，每皿25粒。培养皿不加盖，让种子与培养基暴露在空气中，以自然的方式感染真菌孢子，主要是镰刀霉和交链孢霉。最后用带有小孔的塑料纸把培养皿封上，放进13.3℃的人工生长箱内历时8天。8天后检查种皮表面抗霉菌和发芽情况。当选种子的标准是：种子表面不带霉菌，且刚露白（胚根仅伸出种皮1mm左右）。由于不同材料抗种皮霉菌和种子发芽的能力有差异，因而在实际掌握这两个标准时，应尽可能选择种皮表面不带霉菌或少带霉菌，胚根伸出种皮尽可能短的种子。④当选种子在温室中播于用立枯病和猝倒病原菌接种过的土壤中，5天后检查发病情况。正常苗保留，感病苗淘汰。⑤当选的正常苗再用4种不同生理小种的细菌角斑病菌混合液在子叶背面中部接种，10天后检查发病情况。免疫的苗（接种伤口处不发黑或没有向附近健康组织蔓延）保留，其余的淘汰。同时，检查每个幼苗的下胚轴部分（茎与土面交界处），感病发黑的淘汰。⑥当选的幼苗即为MAR选系，把它移入较大的盆中，直至每株最后能结2～3个棉铃。这样产生的种子，供大田鉴定和选择之用。以上程序从F1代开始一直使用到F5或F6代产生品系为止。这一育种方法把作物品种、微生物群体、生态环境、病原物四者之间相互联系起来，这较只考虑作物、病原、环境三者的关系有了很大提高。有关主要病害的抗性遗传趋势研究已经肯定，对枯萎病，其F1代的抗性均倾向于抗性亲本。因此，抗感亲本的杂交，F1代至少可达到耐病水平；抗×抗的杂交，F1代的抗性将不存在任何问题。因此，生产抗性杂交种不存在技术上的障碍，利用杂种优势同样是一条抗枯萎病育种的有效途径。棉花杂种优势早在1894年，Mell首次描述了陆地棉与海岛棉种间杂交的杂种优势表现。1907年，Balls也报道了陆地棉与埃及棉种间杂种一代，在株高、早熟性、绒长和籽指等性状的优势现象。此后，世界各产棉国对棉花杂种优势利用进行了大量的试验研究。我国棉花杂种优势研究始于20世纪20年代。冯泽芳等（1923）研究并发现了亚洲棉品种间的杂种优势。奚元龄（1936）研究证明，亚洲棉不同生态型的品种间杂种一代的植株高度、衣指、单铃籽棉重、单铃种子重及纤维长度等性状都表现有显著或微弱的杂种优势。1947年，杜春培等以鸿系265-5与斯字棉2B杂交，开创我国陆地棉品种间杂种优势利用研究之先河。研究结果认为，杂种一代的多数性状有明显的优势，绒长、衣分和单铃重介于双亲之间，生育期偏向早熟亲本。50～60年代的研究工作以陆地棉与海岛棉种间杂种优势利用为主。70年代以后转入陆地棉品种间的杂种优势利用研究，直到20世纪90年代，棉花杂种优势利用才得到迅速发展。1990年中国杂交棉占全国棉田面积的0.3%，而后，基本呈直线上升趋势，到1999年全国杂交棉占全国棉田面积的10.8%。目前，我国杂交棉的面积仅次于印度，居世界第二位；从国内主要农作物杂交种的种植面积看，棉花仅次于玉米、水稻和油菜，列居第四位。大量的研究结果业已表明，不同亲本之间杂交，其F1所表现的优势有很大差异，就竞争优势的变幅而言，从强优势、无显著优势到负向优势。因此，有了优良的亲本，并不等于就有了优良的F1，双亲性状的搭配、互补以及性状的显隐性和遗传传递力等都影响F1的表现，因而，有必要研究亲本选配规律，以便有效地利用杂种优势。（1）研究亲子关系对于利用F1杂种优势的育种工作，由于双亲杂交直接决定了F1表现的好坏，没有后代的分离选择过程。所以，亲子相关研究至关重要。亲子关系的分析方法，一般是利用亲子数据进行相关分析，通过相关系数的大小及其显著性程度来判断亲子关系的密切程度，进而指导亲本选配。（2）研究亲本间遗传差异亲本选配是否合理与杂交亲本间的遗传差异有着密切的关系。如何衡量亲本间的遗传差异，通常认为，地理来源差异大的品种反映在形态、生态、生理和发育性状上的差异也大，也许可以用亲本地理上距离的远近代表它们的遗传差异的大小。但进一步研究表明，亲本的地理分布与其遗传差异并无直接联系。由于一个符合育种目标要求的组合（F1）往往是许多优良性状的综合结果。因此，在亲本选配时必须考虑多个性状，不能只局限于单一性状。而采用多元统计方法获得的遗传距离就可衡量亲本多个数量性状的综合遗传差异。（3）配合力分析配合力是在选育玉米自交系的工作中引出的概念，是指一个自交系与另外的自交系或品种杂交后，杂种一代的产量表现。表现高产的为高配合力，表现低产的为低配合力。目前，配合力的概念已引伸到其他作物的杂种优势利用和杂交育种中。配合力和杂种优势有密切联系，但两者含意并不完全相同。配合力专指杂种一代的经济性状，主要是指产量高低和品质优劣；杂种优势系指杂种在经济性状、生物学性状等方面超越其亲本的现象。因此，利用杂种优势时，既要注意亲本配合力的高低，又要注意它们的杂种在有利性状方面优势的强弱。配合力有一般配合力（GCA）和特殊配合力（SCA）两种。一般配合力是指一个被测系（自交系、不育系、恢复系等）与一个遗传基础复杂的群体品种（系）杂交后，产量与品质等经济性状表现的能力，或这个被测系与许多其他系杂交后，F1的产量与品质等经济性状的平均值；特殊配合力是指一个被测系与另一个特定的系杂交后，产量与品质等经济性状的表现的能力。因此，可以说，被测系的许多特殊配合力的平均值，就是一般配合力。在杂种优势利用的实践中，选配一般配合力高的品种（系）作杂交亲本，有可能获得高产与优质杂种，减少选配杂交组合的盲目性。所以，一般配合力高的品种（系）是选育高产优质杂种的基础。在棉花上，测定配合力用得最多的方法是双列杂交法，这一方法不仅有理论基础，而且，可同时测定一般配合力和特殊配合力。（4）外源基因及异常种质的利用所谓外源基因，指人工构建的或非棉属的其他物种的基因，目前主要是指转Bt等抗虫基因；所谓异常种质是指一般陆地棉品种不存在的一些质量性状种质，目前所涉及的主要是无腺体（即低酚棉）、无蜜腺、鸡脚叶、超鸡脚叶、芽黄及黄花粉等性状的种质。实际上，Bt等抗虫基因表达的也是一种异常质量性状。在20世纪90年代以前的20多年中，中国育成的陆地棉品种间杂交棉共13个，当时不存在外源基因参与的可能，也没有异常种质的亲本组成的杂交棉，杂交棉的杂种优势并不十分显著。在20世纪90年代的10年中，育成了23个杂交棉，其中，有转Bt基因抗虫棉为亲本的杂交棉15个，有异常种质即无腺体、鸡脚叶、芽黄、黄花粉等异常性状的种质参与的杂交棉5个（其中，3个同时具有Bt基因）。这些杂交棉优势明显，生产应用效果良好。据此，汪若海、李秀兰（2001）提出，Bt等外源基因及某些异常种质，很可能对杂交棉的杂种优势形成有着特殊的作用。鉴于外源基因及异常种质形成超常优势的现状，他们就杂交棉亲本选配原则提出了双亲遗传差异要“大同小异”的新观点。大同指双亲遗传基础基本相近，综合性状都较优良。小异指某项性状、某些遗传物质或某个遗传位点上确有明显差异。由此会形成显著的杂种优势；如果双亲间遗传基础“雷同无异”，相当于亲缘相近的品种（系）间杂交，常无优势可言；反之，双亲间的遗传是“大异小同”，则相似于种间杂交，变异大而很难获得可利用的优势。棉花杂种优势利用途径，实际上就是指杂交制种的方法。尽管杂交制种的方法各不相同，但去雄和授粉是任何杂交制种方法所共有的环节。根据去雄方式的不同，目前，杂种优势利用的途径主要分为人工去雄授粉法、雄性不育系（包括核雄性不育，即一系两用法和核质互作雄性不育，即三系法）、标记性状利用和花器官变异体利用。目前，生产上应用的杂交棉以人工去雄授粉法为主，占95%以上的杂交棉面积，其次是核雄性不育系的利用。（1）人工去雄授粉法人工去雄授粉法制种的最大优点就是父母本选配不受限制，配制组合自由，它的缺点是制种全部需要人工操作，工作强度大，种子生产成本高。为了提高制种效率，有关单位做了大量的制种方法研究。湖南澧县研究了冷藏花粉不去雄授粉法，原北京农业大学（现中国农业大学）研究了不去雄强制授粉法，江西省棉花所研究了麦秸套管授粉法，湖北南梓县研究了花冠直套法，河南研究了全株去雄法等，在一定程度上提高了制种效率。但降低制种成本问题仍然没有完全解决。（2）核雄性不育材料的一系两用法这种方法又称稳定系自交繁殖制种法。四川省农业科学院经济作物研究所采用这一方法先后选育出的组合有川杂1号、川杂3号、川杂4号、川杂6号等。采用一系两用法，需拔除50%以上的可育株，制种成本仍然较高，其不育系的不育性逐步失去稳定性，达不到1∶1的分离比率；加上不育材料的综合性状已大大落后于现有生产品种，在抗性上难以达到抗病水平；不育基因对杂种生产能力有负效作用等原因，该途径的利用已受到限制。国内外棉花杂种优势利用均存在制种成本高、优势不很强的共同困难，制种成本居高不下的原因除人工去雄外，各种雄性不育材料的制种环节多也是一个重要原因。核不育材料由于未能解决保持问题，制种过程中必须拔除可育株。核不育两用系仍然要通过系内可育与不育株的授粉来保存。利用核质互作不育材料时，转育恢复基因和育性强化基因周期长，使选拔优势组合大受限制，加大了研制成本。因此，在杂种优势利用上，研究新的技术途径，尤其是生物技术的应用，势在必行。随着分子生物学、植物病理学及基因工程技术的迅猛发展，运用基因工程手段提高植物的抗病性，为抗病育种开辟了一条崭新途径。分子育种目前主要包括分子标记辅助育种、转抗病基因育种和分子设计育种3部分内容。分子标记辅助选择（molecular marker-assisted selection，MAS）主要是指基于分子标记和作图技术，利用与目标性状紧密连锁的DNA分子标记对目标性状进行间接选择，以在更短代数内就能够对目标基因的转移进行准确而稳定的选择，聚合多种目标性状特别是对选择隐性基因控制的优良农艺性状十分有利，结合加代技术就可以大大缩短育种年限，缩小育种群体，提高育种效率，聚合选育出抗病、优质、高产的品种。目前，通常采用的分子标记技术主要有RFLP、RAPD、AFLP、SSR等。国内外一些学者正致力于棉花抗性基因分子标记的研究。一方面通过寻找与抗病基因紧密连锁的分子标记，能够直接或间接地定位抗病基因；另一方面用与抗病基因紧密连锁的分子标记，能够把多个基因聚合在同一个品种中，从而实现抗原积累，提高抗病品种的使用年限，并能把抗性与棉花的其他重要农艺性状结合起来，为分子标记辅助育种提供有力的工具，从而大大缩短育种年限。陈勋基等（2008）以高抗枯萎病的陆地棉品系（Gossypium hirsutumL.）98134和海岛棉（Gossypitum barbadenceL.）感病品种新海14号为亲本，构建98134×新海14的F2和F2∶3分离群体。运用SSR标记构建连锁图谱，用复合区间作图法对F2∶3家系的病指进行基因组QTL扫描，共检测到4个与棉花枯萎病相关QTL效应，分别位于3、15、23和26连锁群上。经标记值分析，该QTL能解释高值亲本的增效作用，分别解释F2∶3家系变异的12.4%、20.96%、4.7%和11.9%。虽然研究中的遗传图谱位点较少，密度不大，但是由于其作图群体是陆海杂交群体，所筛选出来的标记均在两个亲本间差异较大。构建群体所用的亲本为新疆棉区主栽品种，它们除了在抗病性状方面有差异外，其纤维品质性状具有互补性，试验所用作图群体的F2∶3株行，在均匀的枯萎病重病试验田种植，整个生育期内，进行了多次的病指统计鉴定，试验数据可靠，重复性好，对枯萎病QTL的定位比较可靠。研究结果为分子标记辅助选择抗枯萎病棉花育种提供了重要的理论依据。目前，国内外用于棉花转抗病基因育种的基因主要有两类：一类为病程相关蛋白（PR protein）基因，包括各种来源的几丁质酶基因（Chi）等；另一类为各种植物源的抗菌蛋白基因，已报道和利用的有萝卜抗真菌蛋白（AFP）、天麻抗菌蛋白（Afp-1）、商陆抗菌蛋白基因（Afp-2）等。在方法上，主要采用农杆菌介导法和花粉管通道法来获得转基因抗病的优良植株即育种材料，然后经过常规的杂交育种或者系统选育，最终培育出优良的棉花新品种。天麻抗真菌蛋白（gastrodia antifungal pratein，简称GAFP）是从我国传统中药天麻（Gastrodia elataBl.）中分离得到的一种具有广谱抗真菌活性的蛋白质，它对许多植物真菌病的致病菌离体具有很强的抑制作用。危晓薇等（2007）报道，将所获得的转gafp基因的陆地棉经Southern点杂交，证实得到了2株高抗枯萎病的转基因植株。其后代经过进一步的抗病性筛选、PCR鉴定、选育和扩繁，发现转基因陆地棉后代具有稳定的、较强抗枯萎病能力。从7月20日枯萎病发病高峰期调查枯萎病圃抗病性鉴定结果看（表5-9），对照军棉1号的枯萎病发病程度重，枯萎病病指54.59，受体对照新B-1的枯萎病病指为42.87。同时，对鉴定结果进行了校正并计算了各个株系的抗效来客观评价各株系的抗枯萎病水平，T3代5个转基因株系中，3个株系HB0204、HB0240和HB0254的枯萎病相对病指分别为8.14、9.03和5.18，均在5.1～10.0，抗效在80.1～90.0，为抗枯萎病类型，其余2个HB0208和HB0260相对病指均在10.1～20.0，抗效在60.1～80.0，为耐枯萎病类型。而陆地棉对照新B-1为感枯萎病类型。从转基因陆地棉后代株系与受体品种的抗效比较结果来看（表5-10），转基因陆地棉株系枯萎病抗效比受体品种的提高均在27.94%以上，其中，HB0254枯萎病抗效提高最为明显，为46.66%，说明转天麻抗真菌蛋白基因（gafp）的陆地棉后代具有较强的抗枯萎病能力。2003年，在库车试验站继续进行抗枯萎病鉴定试验，有8份转基因后代株系材料抗病性达到“抗”以上（当年10月28日进行的剖秆病指小于10）（表5-11）。株系发病率（%）病指相对病指抗效抗病类型HB020427.088.858.1483.79RHB020845.4513.6412.5575.01THB024032.919.819.0382.03RHB025412.505.635.1889.69RHB026018.7513.2812.2275.67T军棉1号（CK）86.9954.5950.000.00S新B1（CK）67.9742.8739.4421.47S表5-9 转基因陆地棉后代株系抗枯萎病鉴定结果株系HB0204HB0208HB0240HB0254HB0260枯萎病抗效提高（%）43.0831.9839.0046.6632.64表5-10 转基因陆地棉后代株系与受体品种的抗效比较编号总株数发病株数（剖秆10月28日）0级1级2级3级4级发病株率（%）病指0305421410400028.67.1030546139400030.87.70305521411300021.45.4030556149500035.78.90305571612400025.06.30305621210200016.74.20306011511400026.76.70306432200000.00.1表5-11 2003年枯萎病圃转基因抗病材料发病情况调查（10月28日）目前，研究较多的是以拟南芥为模式植物的系统获得抗性SAR（system acquired resistance），当植物受到病原菌侵染后局部的HR（hypersensitive resistance）会产生一类信号分子，这种信号分子能诱发整个植株的防卫基因表达，从而使植物对更多的病原菌产生抵制作用（王忠华等，2004）。而SNCl（suppressor of nprl-1，constitution 1）基因在植物的系统获得性抗性（SAR）发生中，起着重要的作用，它是从拟南芥中克隆出的，以水杨酸为信号传导的负调控子，有着组成型的高水平PR基因表达，具有广谱抗病性，此基因编码NB-LRR（nucletide-binding-leucine-rich repeats）蛋白（Li等，2001；Zhang等，2003）。将SNCI序列在NCBI上Blast，极少部分序列与已知的棉花序列相似，但功能不同。由于该基因尚未在其他植物中进行遗传转化。因此，雷江荣等（2010）以陆地棉中棉所35和军棉1号的茎尖为外植体，利用农杆菌介导法将含有拟南芥抗病基因SNCl（suppressor ofnprl-1，constitutive 1）转入棉花。对外植体培养时期、农杆菌侵染时间和共培养时间进行改良，试验结果表明，在外植体培养1天，菌液侵染20min，并且共培养保持在2天能够获得较高的遗传转化效率。PCR以及RT-PCR对再生植株T0代和T1代棉花的检测结果表明，SNC1基因已经整合到棉花的基因组中并得到表达。利用浸根法，对T1代转基因棉花接种棉花枯萎病菌强致病力菌株（Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum），与对照比较，T1代转基因棉花的枯萎病抗性明显提高（表5-12）。该项试验所选择的新疆棉花枯萎病菌是致病力较强的菌株，它对感病品种“军棉1号”的致病率为66.7%。采用培养钵伤根法，接种到转SNC1基因的T1代植株，转SNC1基因的棉花品种发病率较非转基因品种均有明显的降低。说明转化外源SNC1基因的棉株对棉花枯萎病具有一定的抗病性。但这仅是对T1代植株的室内接菌结果，仍须种植于大田病圃中，继续进行剖根鉴定。品种总株数第1天第6天第11天第16天第21天病株数发病率（%）病株数发病率（%）病株数发病率（%）病株数发病率（%）病株数发病率（%）转基因军棉1号128001612.52821.93225.04837.5转基因中棉所35153001711.12315.03422.23422.2军棉1号对照150003322.08456.010066.710066.7中棉所35对照150001510.04530.06040.07550.0表5-12 接菌后棉株培养钵伤根法接菌发病率统计利用分子生物学技术揭示抗性提高材料中相对于原感病品种中差异表达的基因，为后续克隆这些抗病相关基因和研究定向筛选抗病性提高的分子机制奠定了良好基础。Liang等（1995）发明的mRNA差异显示（mRNA differential display）技术是一种快速、简便、灵敏的能直接鉴定和克隆差异表达基因的方法。近年来，此方法已被广泛地运用到真核生物基因差异表达的研究中。吕学莲等（2008）以天九63棉花品种和其经过病圃定向筛选2年、3年分别对枯萎病菌7号生理小种表现高感、耐病和抗病的材料为研究对象，利用差异显示PCR技术对接种枯萎病菌前后的抗、感材料中差异表达的基因进行了初步研究，结果共得到62个差异条带。进一步通过反向Northern杂交验证，发现其中有8个是抗病诱导增强的阳性条带。经克隆、测序和同源性比对分析，结果表明，除14-3片段没有找到同源性外，其余的差异条带都可以找到同源性较高的序列。其中，10-5和22-11与盐胁迫下松科植物的抗菌素cDNA同源性达到100%，22-6达到96%，22-2与缺氮条件下松科植物cDNA的同源性为100%，推断其与植保素类物质的调控和生成相关；13-10与陆地棉纤维的cDNA同源性为100%，蛋白质序列比对发现它编码磷酸氧化酶相关的维生素类物质，推断其参与抗病相关酶类的合成途径；差异条带6-3与棉花根茎部幼嫩组织和纤维的cDNA同源性为99%，与陆地棉胚珠cDNA同源性为98%；10-7与假定的衰老相关蛋白mRNS同源性为98%。作物分子设计育种最初由荷兰科学家Peleman（2003）提出，其目的是通过各种技术的集成与整合，在育种家的田间试验之前，对育种程序中的各种因素进行模拟、筛选和优化，确立目标基因型、提出最佳的亲本选配和后代选择策略、提高育种过程中的预见性。分子设计育种一般包括以下步骤：①找到育种目标性状的基因/QTL或其紧密连锁标记；②利用QTL位置、遗传效应、QTL之间的互作、QTL与环境之间的互作等信息，模拟和预测各种可能基因型组合的表现型，从中选择符合特定育种目标的基因型；③进行目标基因型的途径分析，制定育种方案；④根据制定的育种方案进行育种，在此过程中，合理应用分子标记育种、转基因育种和传统育种技术，实现预期目标。由此看来，可把分子设计育种看成分子育种的高级形式。全基因组选择技术，也可认为是分子设计育种的组成部分。近20年来，随着分子生物学和基因组学等新兴学科的飞速发展，使育种家对基因型进行直接选择成为可能，作物分子育种因此应运而生。分子育种就是把表现型和基因型选择结合起来的一种作物遗传改良理论和方法体系，可实现基因的直接选择和有效聚合，大幅度提高育种效率，缩短育种年限，在提高产量、改善品质、增强抗性等方面已显示出巨大潜力，成为现代作物育种的主要方向。