进入知识经济时代，智力资本成为企业的第一竞争要素，人力资源管理的重要性愈加凸显。当前，企业人事部门已逐渐从简单的人事管理转变为人力资源管理与开发的战略性角色。企业应把人力资源管理作为支持公司长远发展的战略性力量，在企业远景、企业使命、经营战略、核心价值观的指导下，使它与企业组织结构、企业文化紧密结合，以达到短期内促进企业业绩提升，长期内推动企业战略实现的目标。与中小企业相比，大企业有比较明显的优势，其实力雄厚，人才基础较好，职工素质较高，有规范的运作机制；而中小企业亦有其自身优势，具有体制灵活、时效性高、对环境反应灵敏、发展潜力大等优点。为保障企业良性发展，实现企业发展核心战略，中小企业应结合自身特点，借鉴国内外大企业的先进人力资源管理经验和理念，形成满足企业发展需求的人力资源管理体制。由于自身的特点和各种原因，中小企业人力资源管理体制均有其固有的弱点，而这些特性大多是由于中小企业自身的特点所决定的。创立伊始，部分中小企业往往将企业的管理核心战略仅置于实现企业经营目标上，除去财务和销售管理机制外，其他管理机制多为粗放型，甚至没有书面文件，以领导指令代替管理机制，在发展到一定的阶段和规模后，方才开始人力资源等管理机制的建立、完善和实施。而很多时候，为时已晚，原有的管理模式已经对发展、完善公司的人力资源管理机制造成不良影响，甚至形成“旧习”阻碍发展。一因规模小。不管是生产规模、企业稳定性，还是人员、资产拥有量以及影响力都要小于大企业。这导致大部分中小企业难以提供高薪、高福利、高发展预期来吸引和留住人才。二因行业分布广，但地域性强。中小企业分布在各行各业中，对人才的需求更具多样性和复杂性。但企业往往活动范围不广、地域性强，甚至位于中小城市、乡镇等偏僻的地方，不利于企业引进新的人才，也很难吸引和留住人才。三因个体对企业的贡献度、影响偏大。企业生产经营活动的稳定性及发展更多地依靠每个人的能动性，没有系统、完整的人力资源管理体系对现有人才进行管理和激励，加大了吸引和留住人才的困难。四因缺乏良好的企业文化。大多数中小企业不注重企业文化的建设，员工缺乏对企业的认同感和共同的价值观念，易造成个人价值观念与企业理念的错位，这也是中小企业难以吸引和留住人才的一个重要原因。第一，家长式管理。中小企业往往采取集权式管理，万事老板点头方可执行，搞“一言堂”，最终公司面临：“老板忙碌、员工躲闲”，工作效率严重低下，缺乏创新性的局面。第二，家族式管理。当今，确实存在家族式经营管理的优质百年老店，但这些老店均以现代企业管理方式进行管理。而相当一部分的家族式中小企业，总害怕肥水流到外人田，在工资、福利、待遇等方面，家族成员总比外人要高，尽管这些人的管理、生产、销售等一系列业绩都不如“外人”，从而制约了“外人”的工作积极性，影响工作效率。第三，管理机制不科学。缺乏科学管理机制，在选择和使用人才时，不能把人才放到适当的地方，会出现“大材小用”、“小材大用”的局面，导致员工情绪化，影响工作效率。第四，员工培训意识不足。大多数中小企业很少注意对员工的知识技能培训，这是当今我国中小企业的通病，在前期，很多企业都是作坊性质的生产，大多是凭借感性管理，从业人员的素质低、技能差，而企业经营者总想降低成本，很少把钱投到员工的培训上来，这样，一旦企业做大做强以后，一些员工就会不适应现有工作，工作效率也就无从谈起。未来中小企业的人力资源管理机制应该是：发扬创新精神，有效激励员工的潜能，实现员工自身“管”理的长久行为取代领导之“管”的暂时行为的高效管理机制。一要培育创新文化观念。创新是企业发展的永恒课题，是企业发展的重要因素，中小企业本身就是中国经济发展创新的产物。在强手如林的竞争时代，企业要想保持持续、健康的发展态势，取决于企业是否建立有创新文化，具有与对手相抗衡的实力。创新要体现在管理上、技术上和机制上等方面，同时，企业应保持通畅的交流渠道，经常与员工沟通，了解他们的愿望和思想，保证创新的可行性、科学性和时效性。二要管理创新。对于任何企业来讲，都没有一个固定不变的模式，当今企业正处于科技产业和信息产业迅猛发展的时代，这就要求企业管理工作也要相应跟着发生根本的变化，企业经营决策、人力资源管理、生产管理、质量管理、财务管理、销售管理、技术管理等都要跟着发生相应的变革和创新。三要技术创新。技术创新是企业形成竞争优势的关键，是否拥有领先的行业核心技术，是任何企业生存发展的命脉，也是保持企业创新精神的根基。四要制度创新。制度创新是企业文化的重要内容，培育创新的企业文化，同样需要制度的不断创新。中小企业大多是家族企业，为了适应现代企业管理的需要，都应从自身实际出发，从壮大自身力量、强化竞争力着手，走公司制度化管理的道路，这是中小企业制度创新的方向所在。五要人才观念创新。随时调整员工招聘标准，也就是在招聘过程中，把员工的素质同企业的发展战略结合起来。将狭隘的人才观调整到全面的人才观，即从单纯的技术人才观到多样性、多层次性的全面人才观。同时，消除人才完美的错觉，避免把企业的发展寄托于个别“完人”或“能人”身上，而陷入一种对人才的依赖心理。鉴于社会观念的偏见和企业财力有限，中小企业应正确认识人才的需要，制定正确的人才引进战略和政策，以吸引适用人才。走出“任人唯亲”、“亲者不任”误区，企业和人才之间应相互了解，容易形成一种信任机制，有利于企业的经营管理，减少不必要的阻力和管理成本。面临全球经济的走低，大部分企业准备缩减规模，就连一向以“员工雇用终身制”为特点的日本企业也开始了裁员。面临捉摸不定的未来，企业不可能再确保员工的“终身饭碗”，但是可以对于企业来说，通过帮助员工进行职业规划管理，使员工体会到企业的关心，建立起另一种意义上的“忠诚度”，员工会更尽心尽力地工作。首先，相互沟通、坦诚相见。公司要及时让其员工了解企业经营发展情况，防止闲言碎语和谣言传闻盛行，并对未来发展有一个令人信服的描绘，让员工明白他们能够从未来的变化中获得什么好处，以利于鼓舞士气和提高生产率。其次，关心、支持员工。公司可以通过各种各样的方式显示对员工的关心、支持，从简单的表示（如对工作干得好的员工说声感谢）到复杂的系统，例如人文关怀、兑现奖惩、自我评估和职业生涯规划（从在职辅导培训、委托培训、职业规划专题研讨会到一对一的咨询等）等。最后，提升信心、赢得忠诚。没有任何公司能够保证为其员工提供终身就业保障，但是公司能够给其员工提供自我评估、职业生涯规划的有效支持和援助，以提升其员工对自己市场竞争力的信心。即使在公司困难时期（甚至已经开始裁员），有效的职业规划管理仍可以增强员工的灵活性、适应性，使士气和责任感得到恢复，而更重要的是表明：公司的确关心员工在困难时期的遭遇，并竭尽所能给予足够的重视和妥善解决，而公司最终获得的是员工的高效工作。当忠诚不再能够通过承诺提供保障而收买时，却可以通过给员工以尊重和尊严而获得。相比较大企业而言，在薪资、福利、工作条件方面，中小企业不具有整体优势，这就要求中小企业建立行之有效的激励机制，以弥补不足、发挥优势，推进人力资源管理工作效率，促进公司良性发展。中小企业应结合企业实力和实际情况，充分发挥激励作用，建立有企业特色的高效激励机制。比如，赞赏平凡成就。大多数员工的工作少有辉煌成就，恰当、及时地赞赏员工成就，可以放大员工成就感，起到事半功倍的效果。“在恰当的时间从恰当的人口中道出一声真诚的谢意，对员工而言比加薪、正式奖励或众多的资格证书及勋章更有意义。这样的奖赏之所以有力，部分是因为经理人在第一时间注意到相关员工取得了成就，并及时地亲自表示嘉奖。”再比如，表彰和奖励努力。员工往往喜欢因为自己的努力受到奖励，单纯强调表彰和奖励结果往往束缚员工，严格按照经理们的想法做事，缺少创新性。相反，对努力和积极性进行表彰和奖励，直接肯定了员工工作态度，而态度决定了工作的努力程度，也就决定了工作效率。员工都有自我激励的本能，即每个人都对归属感、成就感及驾驭工作的权力感充满渴望。企业应采取多种方式充分调动员工的本能实现自我激励，促使他们实现最大的激励度和生产率：在公司里提倡并鼓励责任感和带头精神；为所有员工建立目标和挑战；适度授权，让部属有适当的自由度；提高员工工作中的自主权；对于如何做工作，只给出一些提议，由员工自己选择去做；如果员工的工作单调，尝试给工作添加些乐趣和花样；鼓励员工之间的互动与协作；允许在学习中犯错，避免粗暴批评；树立榜样是最好的激励；激励处于低潮状态的员工；日常闲谈中多表示赞赏，让员工看到，每个人的工作都很重要，大家都能实现自己的目标；多加鼓励：一张手写的便条、一张问候卡片、会议上的一次点名表扬、一次面对面的称赞等；设立衡量标准，以反映出绩效和效率的提高。在员工激励机制中，应以朔造人、培养人为本，既为人提供进步、发展的机遇和平台，又为社会培育有用之才；不是短期重视人为本，而是长期实施尊重人为本。以人为本的管理思想具体包括：提供职业指导，为员工制定满意的个人职业发展计划，让员工看到自己光明的前景；关注个人抱负，鼓励员工自我发展的愿望；尊重、关怀每位员工，鼓励每个人都成为明星；提供全面在职技能培训，鼓励外出培训进修、提高业务水平；管理者与员工交流在过去的一年里最好的工作体验；建立合理提升机制，尽量选拔内部人才；给优秀员工获得荣誉、提升地位机会，使其受到充分尊重；搭建平台，使全员有机会参与公司管理，分享决策权、管理权。在许多中小企业员工管理过程中，常存在一种通病，即采用“自上而下”、“一刀切”的“管”理模式，致使所有员工仿佛变成一个员工，所有工作则变成一种单调、机械的工作，员工就像一个个毫无生气的“工作桶”，使公司失去了发展的原动力。基于目前现状，中小企业应把建立高效人力资源管理机制作为企业发展的核心战略，摒弃旧机制、扬长避短、发挥企业的创新精神，建立、完善人力资源管理机制并积极组织实施，以提升企业发展的原动力，同时为完善其他管理机制搭建平台，促进企业良性发展，这也是实施高效人力资源管理机制的现实意义和最终目标。

2008年3月，石家庄三鹿集团股份有限公司接到消费者投诉，有多例婴幼儿食用三鹿牌婴幼儿配方奶粉后出现泌尿系统结石病例，三鹿集团回复称送检未发现问题；6月，国家质检总局接到问题奶粉投诉；8月初，三鹿基本查明污染成分三聚氰胺，但始终对外界完全沉默；9月8日，《东方早报》和《南方日报》的两篇报道引爆了本次事件，从此一发不可收拾；9月11日，三鹿集团首先声称“三鹿集团是国内最大的奶粉生产企业，公司的产品经国家有关部门检测，均符合国家标准，目前尚没有证据表明食用奶粉与患肾结石有必然联系”，然后又在同一天承认“部分批次三鹿婴幼儿奶粉受三聚氰胺污染”。三鹿“结石奶粉”事件的曝光，迅速引起了卫生部、质检局等政府部门、以及各方媒体和消费者的高度关注。消息随后广泛扩散，影响持续恶化。而事件主角——三鹿集团，在事态演进前后本有三次求生机会，可惜却一错再错，不仅未能化解危机，而且反让企业形象遭受毁灭性打击。第一个关键点，出现在从三鹿接到第一例消费者投诉开始到6月质检局网站发布消费者投诉之间这三个月，在这期间，如果三鹿主动发表公开声明，以对消费者完全负责的姿态，召回疑似问题奶粉，便很有可能化危为机，把一个诚实可靠的品牌形象展现在消费者面前。而且，三鹿完全可以在查明污染成分之前同国家相关部门一道，主动展开调查和清理，并实时向媒体和消费者公布进展情况，将主动权牢牢控制在自己手中。然而，事实发展并不是这样，三鹿将企业利益放到消费者利益之前，导致最初的危机处理方式完全错误，它试图用沉默隐瞒真相，无视消费者遭受的生理、心理和经济损失，让问题奶粉继续危害婴儿。第二个关键点，是从8月初三鹿通过前期调查和进口检测仪器发现污染成分到9月初事件被媒体曝光前的一个月。如果此时三鹿主动向外界公布在采购环节其产品被人为污染，并紧急召回所有问题奶粉并展开司法调查，那么消费者对三鹿之隐瞒问题的方式尚不会太多追究。错过了这个节点，可以说三鹿企业的失败命运基本已经注定。第三个关键点，是三鹿官方发表首次响应。这个节点只能在一定程度上降低损失，而已无法扭转大局走势。比之前的沉默更加失败的是，在8月初就已查明真相的前提下，这次三鹿选择了说谎。在发给媒体的书面声明中，三鹿坚持称其产品“严格按国家要求生产”、“有质量保证”，三鹿奶粉致病“无证据”，保证“所有产品没有问题”，最后还呼吁媒体“多报道科普教育方面的亮点工作”、“做好宣传工作”。如果这份声明以尊重事实的态度，承认失误，承诺给予消费者补偿并立即配合国家相关部门开展行动，或许今日三鹿品牌还有一息尚存。透过“三鹿奶粉事件”，各企业应当开始重视“大公关”（Mega-Public Relations）概念，这一概念最初由西方注意力专家提出，是指从企业战略和营销战略的高度，重新审视公共关系，将公共关系的理论视野和实践背景，指向企业的整个经营过程。该理论核心与华中科技大学陈先红教授提出的“关系生态说”可以说是不谋而合的。实际上，三鹿“结石奶粉”事件是一个非常典型的危机公关案例，有一条明显的压力曲线和事件发展轨迹。结合美国公共关系研究者Hainsworth和Meng绘制的问题（issue）生命周期表，我们可以了解“结石奶粉”事件从问题到危机的四个过程（图1）。图1 问题的生命周期表在前两个发展阶段，重点是问题的识别、发现和发展监控。发达国家的食品、能源以及对环境有破环的行业的企业，非常重视问题管理工作，一般会由专人牵头建立完善的问题管理与危机预警机制。评估一些确定的情形和事实的发展潜力和趋势，给予对策。对照本案例而言，三鹿放弃了事态还处于问题阶段主动控制的权利，选择了沉默，导致问题恶化为危机（图2）。图2 三鹿“问题奶粉”事件发展曲线图成为危机后，三鹿又基本上违背了危机管理的所有原则，以相当不诚恳的态度在3天后发表了一纸声明，其中谎言随后立即被拆穿。企业老总、品牌中心负责人、传媒部部长及一般职员、公关部负责人、普通员工发出各种未经统一的言论……种种行为致使自己陷入被动。其实除了谎言欺骗公众外，三鹿还做过一些自救努力，包括试图借助质检部门、卫生部门的权威力量，给产品无害证明等。但事实铁证如山，所有努力最后都统统失败。很多企业的管理者都认为危机公关是在企业遇到危机时的临时公关策略，相等于心脏病人的“速效救心丸”。危机公关其实应该划为“常态公关”中一个有机的环节，所谓的“常态公关”就是我们日常所说的公关，比如维护媒体关系、维护公众关系、塑造品牌美誉度、建立和谐社区生态等，其中还有一个重要的职能，即危机预防，公关绝非企业可有可无的可选项，一个成熟、规范、健全的企业，公关是贯穿企业生产经营的每一个环节的，从原材料采购（良好的公共关系可以保障低价或佘款进货）、生产加工（良好的公关关系可以渗透其中，及时发现潜在危机）到经营管理（良好的公共关系能营造一个非常好的营商环境），这样，不仅能够使得一些潜在危机在爆发之前便已经被有效化解，更重要的是，当危机真正来临的时候，企业能够迅速发现问题的症结所在，以便快速、准确地制定危机公关策略，避免贻误危机公关的最佳时机。在危机中，如企业能正确面对，妥善处理，不仅能化解危机，甚至还能将其转化成商机。危机公关本身就是一把双刃剑，用得好可以博来壮士断腕的豪情，反之则会使企业陷入雪上加霜的困境。尤其在如今这个互联网发达，互动性双向传播逐渐取代单向线性传播的时代，加之职能部门的工作态度与效率，消费者此刻怀疑一切的消费心理，销售终端重利轻义的本性，都构成了复杂的市场环境，这种复杂性在中国尤其突出。此时，传统的危机公关开发布会、澄清事实、公开举措的三段式做法正面临着越来越艰巨的挑战。事到如今，三鹿是否有得救？抛开道德伦理和法律、经济方面的问题，单纯从公关角度而言，这里还有一些补救手段。首先，要求三鹿企业和负责人从态度上的根本转变，优秀的危机公关不论在什么时代，都显示出其真诚的品格和对责任的担当。不逃避、不推卸、认真、负责才是危机公关的核心所在，从诚信出发，对消费者负责，才是能取信于人的态度，也才是真正解决问题的方法。将消费者的利益和人生安全放在第一位，以诚恳的态度，承担事件的全部责任。可采用的公关行动如：召开新闻发布会、发表致歉函、企业最高负责人出面道歉等。其次，迅速、全面补偿消费者损失，包括免费为食用三鹿奶粉的婴儿诊断，支付确诊婴儿的全部治疗费用，给予受伤害的家庭经济和精神补偿等。在此方面，可以采用的公关行动如：企业总裁前往医院看望患儿慰问家庭、设立专门的三鹿结石奶粉赔偿基金，交由政府或名誉良好的NGO托管。再次，要加强双向、及时沟通以及信息的透明度，在企业、受害消费者、大众以及媒体间建立无障碍沟通渠道。在传统媒体环境下，危机公关之后企业种种补救性措施很难产生大的影响，但由于很难接触到大众，所以其反省态度与补救行为虽然持续不断却很难为大众认可。企业在WEB2.0下可以采取更多的措施使自己无论是忏悔的、或者是诚意的种种补救方式不断呈现在社会大众的面前，通过跟踪式的记录及传播，向大众表示企业整改的决心与行动，最大可能地获得大众的重新认可。可采取的行动如：在企业网站和门户网站开设专题，通过MINISITE、BBS、网络视频或者帖子等多种的形式，实时报道事态进展，传递官方声音、开通全国24小时800救助热线、统一指定新闻发言人等。最后，在媒介议题管理上，三鹿可以采取发散策略，将焦点多元化，让媒体和大众对乳制品行业、奶粉产业链以及食品质量监管制度等话题加以关注。具体可以设置三个核心议题：第一个核心议题，可以将问题方向转移到整个乳制品行业，围绕着奶源污染是所有乳制品企业面临的考验这一核心展开。在此次的检查中，除三鹿外，还有一些品牌奶粉被污染。卫生部发表声明，初步认定不法分子为牟利在源奶中添加有害物质，公安机关已传讯多人，而且现有标准的源奶检测程序和手段无法检测出这种污染物质。这些都可以作为本议题支撑事实。第二个核心议题，可以将问题方向转移到产业链利益协调，围绕着“三聚氰胺事件”凸显乳品产业链利益冲突加剧这一核心展开。上游原料供应商为赚取更多利益，向下游成品厂家提供掺药奶。本议题的支撑事实可以选择三鹿员工的一个言论，三鹿员工称“这是全行业的一个‘脓包’，这次很不幸，被我们三鹿给挤破了”。第三个核心议题，可以将问题方向转移到食品监管与公共卫生安全，围绕着食品质量监管漏洞暴露，公共卫生安全亟待捍卫这一核心展开。目前，国家需要加强对食品卫生安全的统一管理，加强对免检产品的检查力度，国家免检产品已多次出现质量问题，需要采取合理检测方式控制。还有一点，就此次奶粉事件而言，当前奶粉监管环节分为三段：原料奶归农业部、生产加工环节归质检部门、商场销售归工商部门，多段监管导致监管空白。这些都是管家食品质量监管的漏洞，可以作为本议题的支撑事实。在事件影响进入消退期后，三鹿还要展开一场艰巨的品牌形象恢复战役。投放大量公益和企业形象广告，并展开持续的品牌性公关活动。不论怎样，因为错过最佳的拯救时机，三鹿这家60年历史、连续15年全国销量名列前茅的大型合资奶粉企业，经此战役，品牌价值已尽然透支，要恢复昔日元气，恐怕不易。可持续发展是企业追求的目标，也是企业价值创造的关键，而风险与危机则是企业可持续发展战略的大敌。战场上没有常胜的将军，商场中也没有永远一帆风顺的企业，任何一个企业都有遭遇危机的可能。当危机出现时，企业应运用有效的危机管理体系，使企业顺利度过危机并得以持续、稳定发展甚至反败为胜。

在网络时代，随着市场竞争的全球化，集团企业由于跨地域、跨行业、经营多元化的特点，对采取集中式管理，优化内外部资源以增强综合竞争实力提出了更高的要求。众所周知，采购职能在企业管理的各项职能中占据着非常重要的位置，采购成本的高低直接影响企业的利润，这使得更多的企业关注采购管理，关注如何降低企业的采购成本。本文下面对化工行业集团的战略采购实践中采取的步骤与方法进行讨论。一般的分类方法可以按照采购原材料和物资的属性（名称）、规格、供应商、或数量来建立不同的采购类别，同一采购类别内的各种物资应具有类似的供应商、类似的生产流程、类似的内部使用、类似的规格等。通过采购类别分析可以发现价值实现的机会，例如，同一类别的物资供应商是否过于分散，是否存在集中采购的机会。某大型化工行业集团业务范围涉及石化、农化、精细化工等行业，根据化工行业特点，采购原料依据特性及用途可划分为油气能源、矿产资源、化工基础原料、金属及制品、备品备件、服务类等大类，然后对每个大类划分其中子类别，比如能源类中包含原油、燃料油、石脑油等。划分类别之后，根据所采购产品的重要程度划分为战略物料与一般物料。战略物料，是对企业发展有着至关重要影响的物料，此类物料占支出比例较大，企业需要对其进行重点分析研究从而制定战略采购措施，一旦采购策略成功实施会给企业带来明显的收益，从而实现集团综合成本节省的目标。战略物料一般可以依据以下条件来界定：采购金额达到一定的额度；集团内不同企业之间的同类物料有集中整合采购的机会；集团内不同企业间有原料互供的机会。一般物料，由于其所占总采购支出的比例相对较小，采购地区分散，对总成本利润的影响表现不会非常突出，因此在可以将其列为次一级集中管控物资，暂且维持原有各企业分散采购的模式。此类物料的管理可以从采购流程上使其规范优化来实现管控。正确的运用分类，可以有助于区分有限级顺序，用更有效和更有条理的方法接近市场。通过实施面向市场的类别管理结构，使企业有针对性地从供应市场获取最佳价值。在采购类别划分完毕后，需要针对不同的采购类别产品进行深入的内外分析。这一阶段，要求类别经理对所管理的产品类别相关产业链，从上游供应市场、供应商，到自身企业状况以及下游产品市场有一个清晰的了解，从而做到知己知彼，制定出适应现实要求又能顺应市场趋势变化的战略采购实施策略。内部分析是通过历史采购清单，对采购类别进行点、量、价分析，以发现改进空间。外部分析是运用产业集中度、产品—供应商矩阵、波特五力模型等分析方法评估外部市场，以开发潜在供应商库。在内外分析的基础上，针对不同采购类别制定不同的采购策略。茫茫信息的海洋，需要有一个明确的目标范围与工作方法，对所需要的信息内容事前计划，才不会花费了大量的时间精力，却迷失在信息的海洋里。收集信息阶段主要包括以下工作内容：①鉴别目前和潜在的供应商：列出类别采购市场中的主要供应商，这些供应商采用的策略。了解供应商的业务概况，衡量供应商能力的诸多信息，这些分析能帮助我们对供应商的评估与选择提供许多启示。②了解供应市场的情况：信息包括历史、规模、动态因素（政治、经济、社会、技术、环境、法律等因素）、推动因素、潜在市场机会、主要参与者、供应链、财务状况等。③成本分析：这是对采购物料的综合成本进行分解，其各个组成部分如原料、人力、物流、部件、税费、管理费、利润等在价格中所占比例，以便对不同方案中的潜在收益进行评估，提供预期成果来支持决策的制定，也能为采购假设提供证据，证明其是否可行。④明确业务需求：就是使用QCLDM方法明确自身业务需求。QCLDM是指质量（Quality）、成本（Cost）、物流（Logistics）、开发（Development）和管理（Management）五方面。Q（Quality）指质量的规格、绩效水平、适宜性、服务间隔等。C（Cost）指成本的目前支付价格、建议成本降低、发票准确性等。L（Logistics）指物流的交付绩效、准时性、完整性、准确性等。D（Development）指开发的新想法、创新层次、技术进步、根据未来需求变化的适应性等。M（Management）指管理方面的汇报机制、有效订货流程、客户服务级别、文化和沟通等。QCLDM的方法要求根据不同时间计划如短期（0.5～1年）、中期（1～3年）、长期（3～5年）列出相关的需求，并对其跟踪管理，用以对客户进行沟通配合。QCLDM要求其供应商和客户有很强的，实实在在的承诺，从而确保工作有效完成。基于已经收集到的信息，我们可以借助系统的分析工具将信息归类整理从而研究出最佳的战略采购策略。这些工具主要有：波特五力分析——针对行业环境的分析。基于物料和所处行业从波特五力的角度进行分析，即供应商的讨价还价能力、购买者的讨价还价能力、潜在竞争者进入的能力、替代品的替代能力、行业内竞争者五个角度来而分析行业的基本竞争态势。PESTEL分析——针对供应市场外部因素的分析。即影响供应市场的政治因素、经济因素、社会因素、环境因素、法律因素。通过对这些外部因素的掌握，能够对供应市场现状及趋势有一个比较清晰敏锐的认识。SWOT分析——针对采购企业的内外部优劣势的分析。采购企业从SWOT角度进行分析，即优势、劣势、机遇和挑战，从而对企业内外部条件各方面内容进行综合和概括，分析组织的优劣势、面临的机会和威胁。组合分析——就是从述某种产品获取的难易程度和支出金额大小两个维度进行对比的简单工具。它能够表示出企业与供应商的关系，也使企业更清楚在供应商眼中的位置，能够帮助企业根据产品所在象限采取相应的策略制定采购战略。制定采购方案的目的是为了实现采购收益，具体的方法有：在对信息的收集整理过程中可以发现及开发集团内部上下游产业链中的互供机会，加强内部互供有利于降低集团综合采购总成本。主要方式包括多业务单元的采购量整合、减少供应商数量、重新分配向各供应商采购的数量、联合同类企业的采购数量、将原材料或零部件的规格标准化等。单纯的采购量集中未必能实现采购价值，关键是寻求双方的利益共同点。例如集团内某进口材料的采购由各下属单位分别进行，供应商分布全国各地达10家之多，即使是同一个时间段的成交价格也相差很大。虽然将采购量集中起来，并与国外厂家直接协商，但厂家以各种理由拒绝达成期望的协议。经过研究发现，该供应商在国内的主要目标是拓展市场份额，并雇佣大批销售人员进行点对点销售，销售成本居高不下。因此在新一轮谈判中，强调达成长期合作对其拓展同行业市场的示范作用，并承诺简化交易和结算流程，展示的测算结果显示，这样的合作为其带来的收益和成本节约远远超出其付出的代价，最终一举达成降价20%的采购目标，并获得厂家提供技术解决方案的承诺。在将“采购量”和“供应商”数量这两个硬的客观影响采购成本因素进行优化之后，进一步成本降低空间转向软的管理优化方面。例如：通过招投标方式引入竞争，充分发挥公开招标中供应商之间的博弈机制，科学公正的选择最符合自身成本和利益需求的供应商；通过电子化采购方式降低采购处理费用；通过科学的经济批量计算合理安排采购频率和批量降低采购费用和仓储直接和间接成本；以及对供应商提供的服务和原料进行有选择的购买。充分考虑采购、制造、储运等环节的运作成本，提高原料、工艺和服务的标准化程度，减少差异性带来的后续成本。这是技术含量更高的一种战略采购，是整体供应链优化的充分体现，技术可行性是成功的关键。主要手段包括全球采购、寻找并尝试新型供应商、利用汇率波动、利用贸易政策优惠研究互补贸易等。可能的手段包括重新定位采用自主生产或采购的战略决策、前向一体化整合、与领先的专业供应商建立合资企业、运用战略联盟/伙伴关系等。首先，建立供应商评估体系。筛选与评定供应商级别的指标体系包含以下要素：质量水平、交货能力、价格水平、技术能力、售后服务、人力资源、现有合作状况等。具体筛选与评价供应商时，应根据形成的指标体系，给出各指标的权重和打分标准。其次，实施供应商关系管理。采购问题的产生很多情况下与供应商基础有关，没有供应商的合作也无法实现战略采购的目标，可以说战略采购的核心是企业和供应商之间的双赢。企业与供应商之间的关系一般可分为三种：第一种是竞争关系，供需双方随市场变化进行博弈，你输我赢。实行分散采购策略的产品往往处于这种关系状态。企业与供应商的关系好坏常常取决于双方相关人员的个人交情，因此较易产生暗箱操作。第二种是长期合作关系，双方基于信任签订长期合同，并在技术、服务等方面进行比较深入的合作。这种关系使供需双方的交易成本降低，并减少了经营风险，因此很多企业将长期合作关系作为采购管理工作的重心，并取得一定的成效。第三种是双赢关系，企业能够充分利用供应商的能力，双方在合作中都能得到不断的改进，竞争力获得共同发展，从而结成战略联盟的稳定关系。例如汽车制造商与零部件供应商的战略联盟，以及优秀咨询公司与客户的合作关系。战略采购的实现途径就是通过供应商选择与评估手段，与供应商建立稳固的长期合作关系，并不断深化，向双赢发展。在采购策略实施过程中，以上的步骤是一个不断改进的过程，在以上所有工作有效开展的基础上，根据供应市场的变化不断改进评估标准，持续改进采购流程、改善采购质量、降低采购成本，建立企业强大的成本控制能力。

目前的机制解析工作集中在对QS转录调控的研究。利用pcoI：：lacZ的染色体融合报告菌株，通过转座子Tn5随机插入突变，获得了一系列QS系统的上游调控因子。GacS/GacA双因子调控系统正调控QS系统的表达，同时正调控抗生素2，4-DAPG、氢氰酸和蛋白酶等的产生。该系统位于生防相关性状表达的信号传递链上游（图1），对生防功能起到重要的调控作用。通过转座子随机突变，还得到rpoS基因等一系列QS系统的负调控基因，其调控机制及与生防能力的关系正在研究中。图1 Pseudomonas fluorescens 2P24中与生防性状相关调控因子作用模式图

The small brown planthoppers(Laodelphax striatellus)is an important pest in single late rice seedling stage in Zhejiang province and also the vector of the rice stripe virus,threatened paddy rice production.Through the investigation of transplanting time of rice seeding,occurrence quantity and carriage rate of overwinter and the first generation of the small brown planthoppers in wheat field and weed at the beginning of 2007,the small brown planthoppers mainly immigrated Early Sowing single late rice seedling from wheat field and weeds.The generation of the small brown planthoppers is the most serious in sowing single late rice seedling,and easily arouse the outbreak of the rice stripe virus.Currently,control strategy of the rice stripe virus is"cut off a poisonous chain,cure insect to control the disease".During the last years,by investigating the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and adopting chemistry prevention at different number of times to control it,we research the relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and the incidence of the rice stripe virus for explicating the affection of insect quantity in rice seedling stage and chemistry prevention to incidence of the rice stripe virus.Now we report the result as follows.Agent:40%Chlorpyrifos(zhejiang xinnong chemical company limited).Experimental field is in the experimental area of Shuangqiao academy of agricultural science in Xiuzhou district of Jiaxing City;rice variety is Jia 991 and is offered by Jiaxing academy of agricultural science.1.2.1 Seed treatment May 10 in 2007,rice seed is immersed in 2000 times'402 liquid over72h.May 13,we took it out and flushed with the clear water,then put it in the thermostat in 37℃ in order to pregerminate and seeded on May 15.1.2.2 Experimental design The rice seedling bed is divided into 15 small areas that is 2m2 and each small area stays the partition of 30cm.Each small area is sowed seeds quantity homology.15 small areas are divided into 5 processing and the everywhere manages 3 small areas.5 processing differences expect:no application,once application,2 times application,3 times application and 4 times application in the rice seedling stage.Application of time is such as the table 1.The agent of prevention chooses to 40%Chlorpyrifos that diluted to 500 times liquids to spray.ApplicationtimeApplicationnumberoftimes0times1times2times3times4times5/24√√√√6/1√√√6/8√√6/15√Table 1 Different application number of times and time1.2.3 Investigation of the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and incidence of the rice stripe virus We have investigated the small brown planthoppers quantity of every small area in rice seedling bed before application since May 24.The small area is investigated in 3 point and everywhere is 0.11m2,and we statistics the average of insect quantity in each point and compare with the quantity in different processing.We statistics the amount of rice seedling and the number of infected plants in every small area on June 20 when the rice seedling transplanted to the field,and computed the incidence of the rice stripe virus in each area.1.2.4 Incidence of the rice stripe virus in the field After investigating incidence of the rice stripe virus in rice seedling stage,we transplanted the rice seedling from 5 processing area including no preventing,preventing once,2 times,3 times,4 times into the field,and periodical investigated the incidence of the rice stripe virus in the field.Each small area is chose 5 points while investigating,and investigated 250 stubs on each point and computed incidence in every small area.2.1.1 The small brown planthoppers quantity in rice seedling stage Investigate a result on May 24,The small brown planthoppers all is longwing adults in each small rice seedling area,and the insect quantity is 138 in each 0.11m2;amount of insect in the field has a little bit decrease on June 1;on June 8 it obviously reduces and the number of egg and low instar nymphst increases gradually;until June 15 it has been basically low instar nymphst.The result of investigation indicates,from June 1 to May 24,the insect quantity of every processing area presents to a descend trend,but the decrease range of the insect quantity in applicationarea is higher than in no application;From June 1 to June 15,the insect quantity of no and once application area increases gradually,which are higher than the cardinal number of ex-experiment,but the amount of insect in the other application areas have gradually decrease,see table 2,figure 1.Date(month/day)0time1time2times3times4times5/241381451621431526/11191121251161206/8211175142122986/152471991398465Rateofincreasesordecrease(%)78.9937.24-14.20-41.26-57.24Table 2 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing areas of rice seedlingFigure 1 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing aras of rice seeldingWith the insect quantity of ex-application in each small area for cardinal number,compared with the amount of the last investigation,the insect quantity in no and once application area increased by 78.99%and 37.24%respectively,but it in 2 times,3 times and 4 times application area reduced by 14.20%,41.26%and 57.24%respectively.Experiment indicates,application inrice seedling bed can effectively repress the small brown planthoppers quantity in the field,and with application number of times increasing,which restraint effect is strengthen and amount of insect in small area reduces 57.24%with 4 times application.2.1.2 Investigation of the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed The investigation of incidence of the rice stripe virus on that day when the rice seedling was transplanted to the field,there is all discovered diseased plants in each small areas,but which number in the small area of no application is obviously more than the application area.The incidence of no,once,2 times,3 times and 4 times application areas respectively is 5.53%,3.90%,2.27%,1.50%and 1.36%,see table 3.Experiment enunciation,application in the rice seedling bed is not only lower amount of the small brown planthoppers in the field,but also ease occurrence of rice stripe in rice seedling bed.ApplicationtimesInriceseedlingbedDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofriceseedling(%)InthefieldDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofthefield(%)0time993179655.530237129618.2901time719184293.9029.48170113814.9418.322times404178302.2758.95116102011.3737.833times270180211.5072.887311016.6363.754times247181541.3675.416114234.2976.54Table 3 The investigation of incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed(Jiaxing,2006)Seen from the investigation of the incidence of rice stripe virus with the different processing,the incidence in rice seedling bed of no application is lowered by 29.48%compared with once time application;compared with 2 times,the incidence is lowered by 29.47%with once application,and it is descended by 13.19%compared 2 times with 3 times;but compared 4 times application with 3 times,the incidence in rice seedling bed is only lowered 2.53%.This is because of the rice stripe virus has an incubation stage in rice plant after infection,and there is 12 days at least from infecting to outbreak;than the outbreak of rice stripe virus in rice seedling bed is on June 20.So that ex-3 times application depressed the cardinal number of the small brown planthoppers,and reduced the infection and the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed.But it is not obviously influencing for the incidence in rice seedling bed with the 4th time application on June 15.The result that we periodic investigate the rice stripe virus in the field,the incidence in the field is basically stability after transplanting 40 days,and no longer appear a new disable plant.Because on the rice seedling stage we adopted the chemistry prevention with different number of times,the incidence of the rice stripe virus exists difference after the rice seedling transplanted to the field.The incidence is the tallest in no application small area and lowest in 4 times application small area.Along with the increment of application number of times,the incidence presents to obviously descend trend.With no,once,2 times,3 times,4 times application the incidence is in order to 18.29%,14.94%,11.37%,6.63%and 4.29%in the field.It is shown that application in the rice seedling bed depressed the small brown planthoppers quantity,and the function is very obviously for ease the occurrence of the rice stripe virus.Analyzed the incidence of the rice stripe virus in various processing,it in the field with once and two times application distinctly descend 18.23%and 37.83%compared with no application;but when with the application number of times increase to 3 times,the descends range of the incidence is 63.75%and prevent effect is obviously higher than that with 2 times application,than after 4 times application the incidence descend to come to 76.54%.The relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling bed and incidence of rice stripe in rice seedling bed and field analytical,such as table 4,figure 2 shown.The relativity analyzes indicated,the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in rice seedling bed(y)relation type is y=0.03 x+2.89,related coefficient r=0.99**;the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in the field(y)relation type is y=0.10x+11.03,related coefficient r=0.98**.The relationship between the small brown planthoppers quantity and incidence of rice stripe virus in rice seedling bed and field present positive correlation.ApplicationtimesChangerateofthequantity(%)Incidenceinriceseedlingbed(%)Incidenceinthefield(%)0time78.995.5618.292times37.243.8914.943times-14.202.2711.375times-41.261.506.636times-57.241.364.29Table 4 The investigation of the small brown planthoppers quantity and incidence of the rice stripe virus(Jiaxing,2006)It is very obvious that preventing the small brown planthoppers in rice seedling bed for controlling the occurrence of the rice stripe virus.The result of adopting the different application times indicates,that is repressed growth of the small brown planthoppers quantity,and also eased the occurrence of the rice stripe virus with increasing the application number of times.As the result of the test shows,there is the forward relationship between the range of incidence and application times;through investigating the incidence in the field,we can confirm that reasonable application is effectively to controlling the occurrence of the rice stripe virus.Moreover analysis of the relationship between the small brown planthoppers quantity,incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed and it in the flied,there have a positive correlation.Experiment shows,the reasonable and multiple application in rice seedling bed is the effective means to reduce the small brown planthoppers quantity and controlling the rice stripe virus.The controlling effect of the rice stripe virus is reached 70%with application 3 or 4 times on rice seedling stage.Therefore we suggest that we should pay attention to controlling the small brown planthoppers of the rice seedling bed at the rice stripe virus heavier region or age,especially in the rice seedling bed where sow seeds early and easily cause the small brown planthoppers centralize immigration.In order to prevent effectively,we should increase the number of application times to lower the small brown planthoppers quantity in the field,and control the harm of the rice stripe virus.Figure 2 Relationship between the small brown planthoppers quantity andin cidence of rice stripe virus in different prevention of rice seedling bed

植原体（Phytoplasma），原称 Mycoplasma-like Organism（MLO），是一类无细胞壁、不能人工培养、存在于植物筛管内的专性寄生菌。植原体主要依靠叶蝉等从韧皮部取食的半翅目昆虫传播，也可由菟丝子和嫁接等传播，能够引起植物丛枝、黄化、簇生、矮化、顶枯等症状[1]。我国已报道的植原体病害约有70多种，造成了巨大的经济损失[2]。传统上，主要是根据寄主的种类及其症状等生物学性状和介体昆虫的特性对植原体进行鉴定和命名。但该方法非常复杂和费力，难以鉴定多种植原体复合侵染引起的病害，经常导致片面甚至错误的结论[3]。近年来，随着分子生物学的迅速发展，核酸杂交、RFLP、PCR等技术的广泛应用极大推动了植原体分子鉴定等方面的研究。Lee等[4]根据植原体的16S rRNA基因的RFLP分析将植原体34个典型的株系划分为14个组32个亚组，其中翠菊黄化组（16SrⅠ）变异最大、分布最广。Schneider等[5]对翠菊黄化组、stolbur组和X-disease组的tuf基因进行RFLP分析，认为tuf基因可以作为划分植原体的依据，并且对植原体的检测可以达到单拷贝基因的水平。Marcone等[6]将翠菊黄化组划分为6个亚组。2004年，国际比较菌原体学研究计划署（IRPCM）将植原体划分为17个组，24个种，至少40个亚组，并制定了相应的分类标准[7]。本研究利用巢式PCR对表现丛枝症状的绣线菊和玫瑰进行植原体分子检测，并将克隆到的16S rRNA基因、延伸因子tuf基因及核糖体蛋白基因序列与已知植原体16Sr各组中植原体序列进行同源性比较分析，初步明确了两分离物的分类地位。表现丛枝、黄化、小叶和顶枯症状的绣线菊样品采自山东省青州市；表现叶片畸形、丛枝、顶枯症状的玫瑰样品采自山东省平阴县玫瑰研究所；克隆载体pMD18-T、PCR产物回收试剂盒、限制性内切酶及其他酶类等分子生物学试剂产品均购自TaKaRa公司。以有病害症状的玫瑰为接穗，通过芽接的方法嫁接到5株无症状的玫瑰上。嫁接后放置于无虫温室中，5～7周后观察症状。取表现典型症状的玫瑰韧皮部组织（2mm×2mm），放入3%戊二醛、1%四氧化锇中双重固定，乙醇（10%～70%）、丙酮（0～100%）系列脱水，Epon 812包埋，超薄切片后醋酸铀和柠檬酸铝双染色，在JEM-1200 X型透射电镜下观察。提取方法按参照文献[8]的方法进行，总DNA于-20℃保存备用。参照文献[9，10]所报道的植原体16S rRNA基因通用引物R16mF2/R16mR1进行PCR扩增，然后以此扩增产物为模板用R16F2/R16R1进行巢式PCR（表1）。以提取的玫瑰丛枝植原体的总DNA为模板，参照Schneider等[11]和Lim等[12]报道的延伸因子tuf基因、核糖体蛋白基因的引物对进行PCR扩增（表1）。引物名称Primername引物序列Primersequence退火温度TmR16mF25′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′60R16mR15′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′60R16F25′-ACGACTGCTAAGACTGG-3′55R16R15′-TGACGGGCGGTGTGTACAAACCCCG-3′55fTufu5′-CCTGAAGAAAGAGAACGTGG-3′50rTufu5′-CGGAAATAGAATTGAGGACG-3′50rpF15′-GGACATAAGTTAGGTGAATTT-3′55rpR15′-ACGATATTTAGTTCTTTTTGG-3′55Table 1 Primers used in this research to amplify 16S rRNA gene tuf gene and rp genePCR产物回收后与pMD18-T连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取筛选平板上的白色菌落培养，提取质粒，经PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒送上海英骏生物技术有限公司测序。将所得DNA 序列输入GenBank进行Blast检索，采用DNASTAR和MEGA3.1软件对所得到的核苷酸序列与GenBank中收录的相应基因的核苷酸序列进行比较和分析，并构建系统进化树。感病绣线菊植株表现为节间短缩，部分枝条丛生，叶片黄化、变小畸形、顶部嫩梢枯死，植株矮化。感病玫瑰植株表现典型丛枝症状，叶片变小畸形、顶部嫩梢枯死（图1）Figure 1 Symptoms of spiraea witches' broom and rose witches' broom将健康玫瑰嫁接到表现病害症状的玫瑰上，5～7周后，接穗新长出的嫩枝表现黄化、丛枝、畸形等症状。对玫瑰丛枝植原体进行电镜超微结构观察，在嫩茎韧皮部筛管中观察到典型的植原体。其主要形态为圆形和椭圆形，有明显的单位膜结构，直径为300～600nm，胞内可见核糖体蛋白体颗粒和DNA细链。以表现丛枝、叶片黄化等症状的绣线菊总DNA为模板，用巢式PCR扩增其16S rRNA基因，得到长度约为1.2kb的片段。以玫瑰丛枝植原体的总DNA为模板，用PCR扩增16S rRNA基因、tuf基因和核糖体蛋白基因，分别得到了约1.5kb、830bp和1.3kb的目的片断，与预期大小一致，表明植株中存在植原体。将此植原体分离物分别暂命名为绣线菊丛枝植原体（spiraea witches'broom，SWB）、玫瑰丛枝植原体（rose witches'broom，RWB）。通过测定2个PCR克隆到的片段的序列，确定了SWB的16S rRNA基因含有1236个核苷酸，G+C的含量为47.09%；RWB的16S rRNA基因含有1432个核苷酸。GenBank登录号分别为EF176608、EF199938。将两分离物与GenBank中17个植原体分离物的核苷酸序列进行比对和系统进化分析。从系统进化树中可以看出，两个分离物全部聚类到16SrⅠ组中，与16SrⅠ-B亚组的西方翠菊黄化植原体、马里兰翠菊黄化植原体及16SrⅠ-D亚组的泡桐丛枝植原体聚集为一簇。两个分离物与植原体16SrⅠ组中各亚组的分离物核苷酸同源性均达到99%以上，其中SWB与16SrⅠ-B亚组中的西方翠菊黄化植原体（SAY）同源性高达99.6%，与本研究的另外两个分离物RWB、PaWB的同源性为99.7%和99.8%。而RWB分离物与PaWB的同源性最高为99.9%，与植原体僵顶病组（Stolbur group）（16Sr Ⅻ）的草莓花瓣变绿症（Strawberry virescence，AY377868）植原体核苷酸的同源性为95.8%，与其他各组的核苷酸同源性为89.5%～92.8%。说明SWB、RWB分离物属于西方翠菊黄化植原体（图2）。Figure 2 Phylogenetic tree based on 16S rRNA nucleotide sequence with maximum-likelihood method in MEGA3.1 software package经序列测定，确定玫瑰丛枝植原体的延伸因子（EF-Tu）tuf基因序列长度为810个核苷酸，G+C的含量为37.5%，核糖体蛋白基因含有1174个核苷酸，G+C的含量为35.4%。将玫瑰丛枝植原体分离物与GenBank中17个植原体分离物的延伸因子（EF-Tu）tuf基因进行比对，结果表明：玫瑰丛枝植原体与植原体各个组的核苷酸同源性为70.4%～99.6%，该分离物与16SrⅠ组中各亚组的分离物核苷酸同源性为96.3%～99.6%，其中与16SrⅠ-D亚组中的泡桐丛枝（PaWB）同源性高达99.6%，该分离物与植原体其他组中的僵顶病组（Stolbur group）（16Sr Ⅻ）核苷酸同源性最高为88.6%，与其他各组的核苷酸同源性为70.4%～88.6%。将玫瑰丛枝植原体分离物与GenBank中21个植原体分离物的rp基因进行比对，结果表明：玫瑰丛枝植原体与植原体16SrⅠ组中各亚组的核苷酸同源性为96.7%～99.4%，其中与16SrⅠ-D亚组中的泡桐丛枝（PaWB）同源性最高为99.4%，从而表明该分离物属于Candidatus Phytoplasma asteris。本研究利用巢式PCR从表现丛枝症状的绣线菊中扩增到了1236bp的片段。序列测定和比较的结果表明，与这两种病害相关的植原体均为西方翠菊黄化植原体。前人对植原体侵染绣线菊研究较少，国外仅报道由植原体‘Ca.Phytoplasma pruni'引起的绣线菊矮化病[13]。我们采集了表现丛枝、顶枯症状的玫瑰和表现丛枝症状的泡桐，经PCR检测表明其病原为植原体。序列分析表明，两分离物的16S rRNA基因、延伸因子（EF-Tu）tuf基因和核糖体蛋白基因核苷酸同源性都在99.9%以上，从而确定玫瑰丛枝植原体与泡桐丛枝植原体属同一病原物，属于西方翠菊黄化植原体。尽管翠菊黄化组植原体的报道多在欧洲和美国，但本文是第一次中国关于植原体侵染玫瑰的报道。与2001年和2003年Kaminska M等[14，15]感病玫瑰表现畸形和顶枯不同的是，在本研究中的感病玫瑰表现出丛枝和顶枯的症状。有趣的是，在本研究中的玫瑰、泡桐分离物是在同一玫瑰园内得到，两者之间仅相隔数米，而在同一玫瑰园的其他地方也发现植原体侵染的玫瑰。在调查中发现感病植株多出现在新嫁接的玫瑰上，长势强的玫瑰发病较少，与表现丛枝症状泡桐较近的地块发病严重，其他地块发病较轻。在根据16S rRNA基因进行序列比对及构建系统进化树时发现，两个分离物与16SrⅠ-B亚组的西方翠菊黄化植原体、马里兰翠菊黄化植原体及16SrⅠ-D亚组的泡桐丛枝植原体在构建的系统进化树中聚集成一簇。Lee等[16]认为在基于16S rRNA基因进行序列比对时，16SrⅠ-D亚组的泡桐丛枝植原体会聚集到16SrⅠ-B亚组中，本研究结果与此相符。根据国际比较菌原体学研究计划署（2004）的建议，泡桐丛枝植原体、SAY植原体等都属于同一个种，‘Candidatus Phytoplasma asteris'。

番茄营养丰富、酸甜可口、人们喜食、用途多、产量高，已成为蔬菜的主要品种。它的丰产与歉收，直接影响着市场的供需。近10年来由于保护地栽培，发展很快，引进番茄品种种类繁多，种植技术不断改进，生态环境也随之发生变化，促使新的病虫害种类不断出现，给番茄生产带来了新的问题。在2002～2003年，在北京的密云、延庆和大兴县大棚种植的番茄上发生了一种新的病害，受害番茄植株呈现失水萎蔫，后期植株干枯死亡，纵剖受害植株主茎，髓部呈现褐色腐烂坏死，导致全株凋萎干枯死亡。该病2002～2003年冬季在密云县发生，有212个大棚发病，品种为加西亚，平均受害株率达到100%，造成拔园毁种、绝产无收，给生产带来了惨重的损失。该病已经成为番茄生产上的一种潜在危险性病害。按Koch法则，从接种病株上，分离到原始接种细菌菌株。依此确认，该病是一种细菌性病害，暂称为番茄茎髓黑腐病。该病害与国内已知有发生记载的6种番茄细菌性病害：番茄青枯病[7]（Pseudomonas solamaearum）、番茄溃疡病[7]（Clavibacter michigabensis subsp.michigabensis）、番茄疮痂病[7，8]（Xanthomonas campestris pv.vesicatoria）、番茄斑点病[9]（Pseudomonas syrimgae pv.tomato）、番茄软腐病[7]（Erwinia carotovora subsp.carotovora）和番茄髓部坏死病[10]（Pseudomonas corruga）的受害症状和菌落形态特征不同。故认为该病是一种新的细菌性病害，本文对获得的22个菌株进行了病原菌的鉴定，结果报道如下：1.1.1 供试菌株 供试的22个菌株是2002～2003年从北京市的密云、延庆、大兴等地番茄上分离并纯化后获得的（表1），对照菌株为绿黄假单胞菌典型菌株PDDCC2848[Pseudomonas viridiflava（Burkholder；1930；Dowson 1939）]和边缘假单胞菌边缘致病变种典型菌株PDDCC3553[P.marginalis pv.marginalis（Brown）Stevens 1925]。1.1.2 供试植物 番茄品种加西亚和中蔬四号、烟草、马铃薯。1.1.3 培养基制备 KB固体培养基[1]、牛肉汁固体培养基[1]。1.2.1 病原菌的分离[4] 用灭菌解剖刀切取病株茎部，用75%酒精消毒2min，经无菌水冲洗后取髓部病组织置于小瓷皿中研磨，加无菌水浸泡10min，然后用接种环蘸取该组织液在KB培养基上划线。长出单菌落后用该培养基再划一次线使细菌纯化。纯化后用于致病性测定和病原菌的鉴定。1.2.2 烟草过敏反应[11，12] 将从各地分离获得的22个菌株和对照菌株（表1）在KB培养基上培养24h，以无菌水配制成细菌悬浮液，浓度为1×108cfu/ml，用注射针将细菌液从烟草下表皮注入叶肉细胞间[2]。选用未开花的烟草植株，用灭菌水作阴性对照。接种后，保持在25～28℃，相对湿度85%，日照16h条件下。24h后，调查过敏性反应。菌株号No.strain致病性Pathogenicity采集地点Location分离时间Timeisolated烟草过敏TobaccohypersensitivityPnt1+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt2+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt3+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt4+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt6+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt8+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt9+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt10+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt11+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt12+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt13+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt14+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt15+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt18+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt19+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt23+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt24+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt27+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt20+北京大兴（Daxing）2003-5-20+Pnt21+北京大兴（Daxing）2003-5-20-Pnt30+北京延庆（Yanqing）2003-9-2+Pnt31+北京延庆（Yanqing）2003-9-2-表1 番茄茎髓黑腐病菌株及致病性和烟草过敏1.2.3 马铃薯腐败[1] 选取新鲜无病而且较大的马铃薯块茎，将其表面洗净，在无菌条件下，用75%酒精表面消毒，超净工作台上风干。在无菌条件下，用灭菌牙签蘸取适量在KB培养基上培养24h的细菌，插入马铃薯中，随后将其放在24℃培养箱内，并且用不接菌的马铃薯作对照，调查马铃薯腐败情况。1.2.4 番茄上致病性测定 在温室培养的加西亚和中蔬四号上接种。用灭菌牙签蘸取适量在KB培养基上培养24h的供试细菌，包括对照菌株，插入枝条和茎的交界处，置于自然条件下，调查发病情况。1.2.5 鉴定方法 细菌的形态特性、培养特性、生理生化反应及碳源利用等项实验方法，主要参照《一般细菌常用鉴定方法》[1]、《植物病害研究方法》[2]、N.W.Schaad编著的《植物病原细菌鉴定实验指南》[3]、《植物病原细菌的分类与鉴定》[4]等书中的方法进行。2.1.1 病原菌分离 共获得了22株细菌（表1），纯化后用于致病性测定和病原菌的鉴定。2.1.2 烟草过敏反应 pnt21，pnt30和对照菌株3553注射部位表现过敏性枯斑反应（HR），这证明了其对植物有致病作用。试验结果见表1。2.1.3 马铃薯腐败 供试菌株均对接种马铃薯产生不同程度的症状。其中供试菌株pnt1、pnt2、pnt13、pnt14、pnt15、pnt21、pnt30、pnt31和对照菌株2848、3553均表现出明显的腐烂症状，其余菌株所接种马铃薯都出现水浸状。2.1.4 番茄上致病性测定 致病性测定试验结果见表1。2.2.1 病原细菌革兰氏染色 所有供试菌株革兰氏染色阴性。2.2.2 培养性状 供试的菌株在KB培养基上28℃培养箱里培养48h，形成圆形菌落，全缘，不透明，表面光滑，均能产生荧光。其中菌株pnt1～pnt19的菌落绿黄色，直径1～3mm；菌株pnt20、pnt21、pnt30和pnt31产生黄色菌落，黏稠状，微隆，直径3～5mm；pnt23、pnt24和pnt27为乳黄色菌落，黏稠状，隆起，直径1～2mm。2.2.3 生理生化性状 生理生化性状试验结果见表2～表4。2.2.4 碳源利用 碳源生长利用结果见表2～表4。项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt1～pnt19对照菌株（CKstrains）28483553P.f.biovarⅠKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Starchhydrolysis-（2、8、10、12）---[5]配糖体的分解EsculinHydrolysis-（11）+-耐盐性试验Salttolerance3%（1∶5%）3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity水渍状（1、2、13、14、15：+）++表2 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt1～Pnt19）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt1～pnt19对照菌株（CKstrains）28483553P.f.biovarⅠ酪氨酸酶测定Tyrosinasetest+（6、12、18、19）+-氧化酶Oxidase+-++[5]冰核测定Icenucleationactivity-（8、12-18未做）--3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（2-11、15、19）--烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity--+苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer---甲基红测定Methylred-+-过氧化氢酶Catalase+++硝酸盐的还原Nitrateredution-（2）---[5]3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction---+[5]蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose+（6、11-14、18、19）-+果聚糖的产生Levanformation++++[5]41℃生长Growthat41℃----[5]果胶溶解Pectinaseactivity+-+H2S的产生H2Sproduction---卵磷酸酶Lecithinasetest+（1-3、12、13）+++[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（1、2、4、19）++吲哚的产生Indoleproduction---吐温80的测定Tween80hydrolysis+（6、9、10、18）+++[5]明胶液化Gelatinliquefaction++++[5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose++++[5]蔗糖Sucrose++++[5]乳糖Lactose-（2、4、11）---[5]麦芽糖Maltose-（3、11-14）---[5]鼠李糖Rhamnose+（6、12、13、19）--山梨醇Sorbitol++++[5]肌醇Insoitol+++d[5]赤藓醇Erythritol+++d[5]丙酸Propionate-（1、11）--+[5]组氨酸Histidine++++[5]L-半乳糖L-Galactose++++[5]葡萄糖Gluconate++++[4，5]甘露醇Mannit++++[5]抗坏血酸Ascorbate---柠檬酸Citricacid+++续表2项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31对照菌株（CKstrains）28483553Pv.syringaeKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Hydrolysisofstarch-（21、31）---[5]配糖体的分解Esculinhydrolysis+（20、31）+-耐盐性试验Salttolerance3%（31：5%）3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity+（20：水渍状）++-[4]酪氨酸酶测定Tyrosinasetest++-氧化酶Oxidase-（20）-+-[4，5]冰核测定Icenucleationactivity+（20未做）--+[4]3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（31）---[6]烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity+（20、31）-++[4]苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer----[6]甲基红测定Methylred++--[6]过氧化氢酶Catalase++++[6]硝酸盐的还原Nitrateredution----[4]3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction---蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose-（21、30）-+果聚糖的产生Levanformation++++[3～5]41℃生长Growthat41℃----[4，5]果胶溶解Pectinaseactivity+-++[3，4]H2S的产生H2Sproduction----[6]卵磷酸酶Lecithinasetest-++d[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（20）++吲哚的产生Indoleproduction----[6]吐温80的测定Tween80hydrolysis++++[5]明胶液化Gelatinliquefaction++++[4，5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose+++d[5]蔗糖Sucrose++++[4，5]乳糖Lactose---+[3～5]麦芽糖Maltose---表3 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31对照菌株（CKstrains）28483553Pv.syringae鼠李糖Rhamnose-（31）--山梨醇Sorbitol++++[3，4，5]肌醇Insoitol++++[3，4，5]赤藓醇Erythritol+（20）+++[3，4，5]丙酸Propionate---d[4，5]组氨酸Histidine+++d[4，5]L-半乳糖L-Galactose+++葡萄糖Gluconate+++d[4，5]甘露醇Mannit++++[3，4，5]抗坏血酸Ascorbate----[5]柠檬酸Citricacid+++续表3项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt23、pnt24、pnt27对照菌株（CKstrains）28483553P.viridiflavaKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Hydrolysisofstarch+（24）---[5]配糖体的分解Esculinhydrolysis-+-耐盐性试验Salttolerance3%3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity水渍状+++[4]酪氨酸酶测定Tyrosinasetest++-氧化酶Oxidase+（24）-+-[3，4，5]冰核测定Icenucleationactivity-（24未做）--3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（27）---[6]烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity--++[4]苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer----[6]甲基红测定Methylred-（24）+--[6]过氧化氢酶Catalase++++[6]硝酸盐的还原Nitrateredution---3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction----[3～5]蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose+（24）-+果聚糖的产生Levanformation+++-[4，5]表4 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt23、pnt24、pnt27）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt23、Pnt24、Pnt27对照菌株（CKstrains）28483553P.viridiflava41℃生长Growthat41℃----[3～5]果胶溶解Pectinaseactivity+-+H2S的产生H2Sproduction----[6]卵磷酸酶Lecithinasetest-+++[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（24）++吲哚的产生Indoleproduction----[6]吐温80的测定Tween80hydrolysis+++-[5，6]明胶液化Gelatinliquefaction++++[4，5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose+++d[5]蔗糖Sucrose++++[4，5]乳糖Lactose---麦芽糖Maltose---鼠李糖Rhamnose-（27）---[3，5]山梨醇Sorbitol++++[3～5]肌醇Insoitol++++[5]赤藓醇Erythritol+（23）+++[5]丙酸Propionate---d[5]组氨酸Histidine++++[5]L-半乳糖L-Galactose+++葡萄糖Gluconate+++d[5]甘露醇Mannit++++[3，5]抗坏血酸Ascorbate---柠檬酸Citricacid+++续表4从表2～表4可以看出，供试菌株和对照菌株的试验结果存在不一致性。但在如下的试验中表现出相同的结果，超过41℃不能生长，严格好氧，对葡萄糖能氧化（OF试验）不能发酵，3%KOH拉丝，不产生吲哚，不产生硫化氢，在pH值5.0和pH值7.0下果胶凹陷，明胶液化、过氧化氢酶（接触酶）和葡萄糖酸氧化均为阳性；乙酰甲基甲醇测定（V.P.试验）、3-酮基乳糖的产生、苯丙氨酸脱氨酶和脱氮反应均为阴性。在淀粉水解、配糖体的分解、酪氨酸酶测定、耐盐性测验、甲基红测定、氨气的产生、尿素的测定、生长因素要求性的测定、氧化酶反应、冰核测定、卵磷酸酶测定等生理生化试验项目中结果不同。由表2～表4可知，各菌株均能利用木糖、葡萄糖、山梨醇、肌醇、甘露醇、组氨酸、柠檬酸、L-半乳糖、蔗糖；不能利用抗坏血酸。只有pnt1和pnt11能利用丙酸，试验各菌株对乳糖、麦芽糖、鼠李糖和赤藓醇利用结果不一致。根据上述致病性试验结果，供试的22个菌株和对照菌株PDDCC2848，PDDCC3553分别接种番茄品种中蔬四号和加西亚后，均表现发病症状。细菌学特性鉴定结果表明，供试番茄菌株为革兰氏阴性，接触酶（过氧化氢酶）阳性，对葡萄糖不能厌气发酵产酸，不产生吲哚，不产生硫化氢，乙酰甲基甲醇测定为阴性，据此可确定该病属于假单胞属（Pseudomonas）[5]。供试的22个菌株在各试验项目上表现出不同的结果，综合各个试验结果，可大致将供试菌株分为三类，其中pnt1、pnt2、pnt3、pnt4、pnt6、pnt8、pnt9、pnt10、pnt11、pnt12、pnt13、pnt14、pnt15、pnt18和pnt19可归为一类，记为A类；pnt23、pnt24和pnt27可归为一类，记为B类；pnt20、pnt21、pnt30和pnt31可归为一类，记为C类。A类菌株在KB培养基上产生绿色荧光素，可确定为腐生荧光假单胞类群[4，5]。氧化酶测定、明胶液化、过氧化氢酶试验结果均为阳性；甲基红测定、吲哚的产生、硫化氢的产生等试验结果均为阴性；能利用葡萄糖、蔗糖、肌醇、山梨醇、甘露醇、组氨酸、赤藓醇、L-半乳糖、木糖，据此可初步确定A类菌株属于荧光假单胞生物变种Ⅰ（Pseudomonas fluorescens biovarⅠ），但在鼠李糖和麦芽糖的利用、淀粉水解、生长素要求性的测定、吐温80的测定、卵磷酸酶测定等试验上存在差异。Saygili H[11]报道该病菌可以侵染番茄。B类菌株能利用组氨酸、肌醇、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、木糖，不能利用蔗糖、抗坏血酸和鼠李糖；耐盐性测验3%、无冰核活性，在吐温80的分解、酪氨酸酶测定的试验结果中呈阳性，与对照菌株2848完全相同；在氧化酶测定、淀粉水解、卵磷酸酶测定、配糖体的分解、尿素测定、生长素要求性的测定等试验上略有差异，据此初步确定该菌类属于绿黄假单胞菌（Pseudomonas viridiflava）。Alippi A.M.（2003）[12]报道该病菌可以侵染番茄。对于C类，在卵磷酸酶测定、氨气的产生试验结果中呈阴性；在吐温80的分解、酪氨酸酶测定、甲基红测定的试验结果中呈阳性；根据LOPAT试验，从蔗糖形成果聚糖（Levan formation），氧化酶反应（Oxidase），马铃薯软腐试验（Potato decay capacity），精氨酸双水解酶（Arginine reaction），烟草过敏反应（Tobacco hypersensitivity）的结果；不能利用鼠李糖，能利用木糖、葡萄糖、山梨醇、肌醇、甘露醇、组氨酸、赤藓醇；葡萄糖酸氧化呈阴性反应，可以初步确定属于丁香致病变种（P.syringae pv.syringae）。近年来番茄发生茎髓黑腐病，分析其原因，一是可能与品种有关，即引进的番茄品种不抗细菌病害；二是与栽培有关，发病的番茄大棚前茬栽培过芦荟，有线虫为害，可能是线虫为害番茄造成了伤口使得细菌侵入，鉴定出的3种细菌均是弱寄生菌，也正说明了这一点，它们可以侵染生长势弱的番茄。