由大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb）引起的棉花黄萎病是棉花的主要病害。该病于1914年在美国弗吉尼亚州首次发现，以后随着棉种的调运传播到世界各个棉花主产国[1，2]。我国每年棉花黄萎病发病面积达2×106hm2，重病田病株率高达95%以上，造成极大的经济损失。棉花黄萎病的防治已成为世界棉花生产中的难题。国内外在抗病育种、农业措施和化学防治等方面做了大量工作，对控制此病的危害起到重要作用[3，4]。但目前生产上高抗丰产品种少、有效化学药剂匮缺、农药残留和抗药性问题突出。由于生物防治能克服上述弊病，被认为是一种有效且具有发展潜力的重要防治方法，而获得高效拮抗菌是生物防治的基础。关于棉花黄萎病拮抗菌的筛选，国内外已做了不少研究工作。有报道指出，芽孢菌、荧光假单孢菌、葡柄霉、链霉菌、黄色蠕形菌对大丽轮枝菌都有拮抗作用；Bacillus和Pseudomonas属的某些细菌能有效抑制大丽轮枝菌的生长和使部分分生孢子死亡；木素木霉（Trichoderma ligmerum）的某些菌系有明显的防病增产作用；植物内生菌及根际土壤细菌诱导棉花对大丽轮枝菌抗性[5～9]。由于棉花黄萎病菌存在生理分化现象，不同地区的温度、湿度、光照、植被等生态条件有异，因而不同地区筛选出的棉花黄萎病拮抗菌菌种的适应性和对棉花黄萎病菌的拮抗作用存在显著差异[10]。安徽目前尚未见关于棉花黄萎病拮抗菌筛选鉴定的研究鲜有报道[11，12]。因此，有必要在安徽地区开展对棉花黄萎病的生防研究。作者从安徽主要棉区广泛采集棉花根围土样，经室内分离获得细菌菌株120株，真菌菌株97株，经拮抗活性筛选，发现ZXC-9等7个菌株对棉花黄萎病菌具有较好的拮抗作用，可望应用于棉花黄萎病的生防。现将研究结果报道如下。供试病原菌棉花黄萎病菌（Verticillium dahliae Kleb） 菌株HF和WW3，供试生防菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株BS，均由安徽农业大学植物病原真菌研究室提供。真菌分离采用查氏酵母浸膏培养基和PDA培养基，细菌分离采用营养琼脂培养基（NA）和NB培养液，配制方法均参照文献[13]。1.3.1 土样的采集 在棉花黄萎病害发病田块采样，采用五点取样方法。取健康的棉花植株根土，取样时拨开土表（约5cm深），每样取50g（同地区取样至少相距100m以上），晾干后4℃保存待用。1.3.2 微生物的分离 取10g的土样放在量筒中，加入内装100ml无菌水的三角瓶中，于摇床上振荡2h。取1ml的悬浮液，加入9ml的灭菌水中，依次稀释到10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，各浓度取上悬浊液0.1ml涂于选择性培养基平板上，每浓度设3个重复。置于28℃±1℃恒温箱中培养24h后进行细菌检查，真菌和放线菌培养72h后调查，分别记录其菌落数。1.4.1 真菌对棉花黄萎病菌的拮抗作用测定 将分离菌与棉花黄萎病菌HF菌株对峙接种于PDA平板上（φ=9cm），菌丝块直径0.7cm，两菌块接种点相距4cm，并以单独接种棉花黄萎病菌的处理为CK，每处理重复3次，25℃恒温培养，连续7天观察菌落的相互影响，并在两菌株接种点连线上测定接种点到菌落前缘的距离，按下式计算抑菌率。抑菌率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径×1001.4.2 棉花黄萎病菌拮抗真菌的鉴定 在PDA平板上对拮抗真菌菌株进行培养，观察、记载菌落、菌丝、产孢结构和孢子形态特征，参照真菌字典[14]，对菌株种类做出鉴定。1.5.1 棉花黄萎病菌拮抗细菌的初步筛选 先将培养48h的病原菌（HF菌株）打成直径0.7cm的菌碟，移植在平板中央，同时将分离到的细菌培养24h后，接种在平板周围，每皿6点，待测菌与病原菌距离为3.5cm，置于28℃培养48h后，检查抑菌圈有无并测量其大小。抑菌带（D-D0）=细菌抑菌圈直径-细菌菌落直径拮抗细菌的分级[15]：0级（-）：D-D0=0（无透明带产生），无拮抗性；1级（+）：0mm＜D-D0＜3.9mm，弱拮抗性；2级（++）：4mm＜D-D0＜7.9mm，中等拮抗性；3 级（+++）：D-D0＞8.0mm，强拮抗性。1.5.2 拮抗细菌对棉花黄萎病菌的拮抗作用测定1.5.2.1 划线法测定结果 初步筛选出的4种细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9也通过连续10代转移培养，再进行复筛试验。复筛试验并以生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株作为防效对照。具体操作方法如下：用接种环取1环分离出的细菌在含有PDA培养基的培养皿中间划一直线，在距直线两侧2cm处分别接种直径为0.7cm的病原菌菌碟，并以单独接种棉花黄萎病病原菌的处理为对照1（CK1），以接种枯草芽孢杆菌BS菌株的处理为对照2（CK2）。每处理重复3次，在25℃下恒温培养，测定其抑菌效果。测量病原菌向拮抗菌方向生长的长度和对照中病原菌菌落的半径（cm），以R值表示拮抗作用的大小[16，17]。1.5.2.2 杯碟法测定结果 在划线法后选取4种细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9中抑制效果最为明显的XSZ-5菌株进行杯碟法实验。将活化好的XSZ-5菌株用3ml无菌水洗下，接入100ml的NB培养液中，并置于28℃，转速为100r/min的恒温摇床振荡培养。48h后得到菌量为1010～ 1011cfu/ml的活菌液。然后分别向18ml的PDA培养基中加入2000μl、500μl、100μl和10μl的BS活菌液，混合均匀后倒平板，并在平板上接种直径为0.7cm的病原菌菌碟，同时设置对照（即不加入XSZ-5菌的活菌液），各处理重复3次，25℃下恒温培养7天后测量菌落直径，计算抑菌率[16，17]。对自安徽各主要棉区采集土样进行室内分离，共获得真菌菌株97株。以棉花黄萎病菌HF、WW3为目标菌株，采用平皿对峙试验测定各真菌菌株对棉花黄萎病菌的拮抗作用，结果见表1。从表1可见，通过连续7天的测量观察，发现其中有3种菌株ZXC-9、ZZY-3和ZGC1-1对棉花黄萎病菌具有很明显的抑制效果，7天后抑制率分别达到了69.39%、67.52%和74.30%。拮抗真菌菌株Isolatesofantagonisticfungi项目Item不同处理时间的测定结果Testresultsatdifferenttimeaftertreatment3天4天5天6天7天ZXC-12-1菌落直径（cm）2.012.462.632.853.01抑制率（%）—6.8119.5322.6629.59ZXC-9菌落直径（cm）0.971.131.231.311.31抑制率（%）46.9957.1962.3964.4969.39ZGC1-1菌落直径（cm）0.820.951.001.031.10抑制率（%）55.1964.0269.4272.0974.30ZXC-12-2菌落直径（cm）1.721.932.022.092.18抑制率（%）6.0126.5237.9543.2848.99ZXC-2菌落直径（cm）1.311.721.922.002.12抑制率（%）28.4934.8741.2445.7950.28ZXC-15菌落直径（cm）2.332.672.863.073.08抑制率（%）——12.4716.5528.01ZHS-1菌落直径（cm）2.242.382.762.802.89抑制率（%）—9.8115.6124.0932.54ZXC-14菌落直径（cm）1.321.781.982.072.19抑制率（%）27.6632.5239.5443.7848.89ZZY-3菌落直径（cm）0.961.211.351.361.39抑制率（%）47.5454.1758.7263.1467.52CK菌落直径（cm）1.832.643.273.694.28表1 拮抗真菌菌株对棉花黄萎病菌的抑制作用测定Table 1 Inhibition of isolates of antagonistic fungi against V. dahliae2.2.1 棉花黄萎病菌拮抗细菌初筛结果 经过营养琼脂培养基（NA）分离，筛选得到12株拮抗细菌菌株。抑菌圈试验结果（表2）表明，这12株拮抗细菌菌株对棉花黄萎病菌HF菌株和WW3菌株都有一定的拮抗性，其中XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9这4个菌株对棉花黄萎病菌的拮抗作用较强，对两种目标菌株的作用效果相似，无明显差异。拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3XZY-1--XXX-9++++XZY-6+++++XXX-17+++XSZ-5+++++XZY-5++++XSZ-2+++XXC-3-+表2 12个细菌菌株对棉花黄萎病菌的抑菌试验结果Table 2 Inhibitory tests of 12 strains of bacteria against V. dahliae拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3XXX-1+++XXC-5--XZY-8++++XXC-9++XZY-13++XXX-4++++++XGC2-9++++++续表22.2.2 拮抗细菌对棉花黄萎病菌的拮抗作用2.2.2.1 划线法测定结果 测定结果（表3）表明，处理5天后，病原菌菌株向各拮抗细菌方向生长缓慢，各菌株均有明显的抑菌带出现。6天后，各拮抗菌对病原菌菌株的抑制作用R值分别为0.571、0.571、0.563、0.571，均表现出较好的抑制效果，而对照生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株R值则为0.579。各拮抗菌对病原菌菌株的抑制效果与生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株的防治效果相比无显著差异。拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria项目Item不同处理时间的测定结果Testresultsatdifferenttimeaftertreatment2天3天4天5天6天XZY-6处理0.650.680.720.750.75R值0.7360.7010.6610.6360.595XSZ-5处理0.640.670.700.740.74R值0.7270.6910.6420.6270.587XXX-4处理0.660.710.740.750.76R值0.7500.7320.6790.6360.603XGC2-9处理0.650.690.710.740.75R值0.7390.7110.6510.6270.595CK2处理0.630.670.710.720.73R值0.7160.6910.6510.6100.579CKI对照0.880.971.091.181.26表3 拮抗细菌对棉花黄萎病的抑制作用（划线法）Table 3 Inhibition of 4 strains of antagonistic bacteria against V. dahliae by drawing-line method2.2.2.2 杯碟法测定结果 测定结果（表4）表明，XSZ-5菌株培养液对各菌株均有较好的抑制效果，抑制率均在70%左右。各供试菌株在含有XSZ-5活菌液的PDA培养基上均生长极为缓慢，表现出明显的拮抗作用。根据统计软件进行方差分析及差异显著性比较，XSZ-5菌株在不同菌量处理间菌丝生长差异显著，抑制率随菌量的增加而提高。WW3菌株在含有2000μl和10μl的XSZ-5活菌液的处理对菌丝生长的抑制率分别为78.33%和68.44%，且差异不显著。XSZ-5菌株对HF菌株的抑制率高于对WW3的抑制率，但各浓度间差异不显著。处理TreatmentsWW3HF菌落直径Diameter（cm）抑制率Inhibitionrate（%）菌落直径Diameter（cm）抑制率Inhibitionrate（%）CK3.33Aa—3.83Aa—2000μl1.27Bb78.331.17Cc84.98500μl1.30Bb77.191.23BCc83.07100μl1.37Bb74.521.47BCb75.4010μl1.53Bb68.441.67Bb69.01表4 不同浓度XSZ-5培养液对黄萎病菌生长的影响Table 4 Inhibitory effects of different concentration of XSZ-5 strain cultural liquid against V. dahliae对以上3种拮抗真菌菌株进行了培养观察。在PDA平板上，ZGC1-1菌落生长呈放射状，浅褐色，孢子生长迅速，覆盖整个平板底部；显微镜下观察发现，菌丝有隔膜，分生孢子梗顶部膨大形成顶囊，顶囊表面生出小梗，自小梗顶端形成具有串珠状的分生孢子（图1）；ZZY-3菌落质地为气生菌丝发达，菌丝致密菌落底部有辐射状皱褶条纹，孢子产生多，菌落颜色为黄色，分生孢子梗顶部膨大形成顶囊，顶囊表面生出小梗，自小梗顶端形成串珠状的分生孢子，分生孢子串生；ZXC-9菌落气生菌丝发达，菌丝亦生长致密，产孢多，底部有辐射状皱褶条纹，菌落颜色为深绿色。分生孢子梗顶端不膨大，经多次分枝，产生几轮对称或不对称小梗，小梗顶端产生成串的青色分生孢子，有些孢子梗形如扫帚（图2）。根据以上特征，参照真菌分类手册，将菌株ZGC1-1和ZZY-3初步鉴定为曲霉属真菌（Aspergillus sp.）；菌株ZXC-9初步鉴定为青霉属（Penicillium sp.）。图1 两种棉花黄萎病菌拮抗真菌的形态特征Figure 1 Morphology of two species of antagonistic fungi against V. dahliae通过室内平板对峙复筛试验表明，3株真菌菌株ZXC-9、ZZY-3、ZGC1-1和4株细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4、XGC2-9对于棉花黄萎病菌均具有很强的抑制作用。经连续10代的转移培养，3种拮抗真菌菌株对棉花黄萎病菌的抑制效果仍保持稳定，其中以第7天的抑制作用最为明显，抑制率分别为66.58%、68.30%和76.90%。而4种拮抗细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9，与生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株的防治效果相比也无显著差异。处理5天后，病原菌菌株向各拮抗细菌方向生长缓慢，各菌株均有明显的抑菌带出现。杯碟法测定结果表明，其中的XSZ-5菌株培养液对两种病原菌菌株均有较好的抑制效果，抑制率均在70%左右，是筛选出的各拮抗细菌中效果最好的一种。目前生产上对于棉花黄萎病的防治，由于缺乏高抗丰产品种和有效化学药剂，生物防治被认为是一种具有发展潜力的重要防治途径[18]。本研究从安徽主要棉区棉花根围土样中筛选出了对棉花黄萎病菌具有较好拮抗效果拮抗微生物，为研制开发防治棉花黄萎病的新型生防制剂提供了基础和试验依据，对于棉花黄萎病的综合防治以及减少环境污染，减轻棉花黄萎菌的抗药性，促进可持续治理都具有重要意义。关于这些生防菌的鉴定、抗菌活性成分测定、盆钵试验、根际定殖力以及田间试验还需要进一步的试验研究。

21世纪是环保的世纪。随着环境保护呼声的日益高涨，高毒农药的大量使用对农业生态及生态环境造成的负面影响已引起世界范围的广泛关注，以高效，低毒农药逐步替代传统的高毒农药是农药发展的必然趋势。植物源农药可在环境中迅速分解，对环境无任何影响，是符合环境保护，农业持续发展方向的[1]。藜芦（Veratrum nigrum L.），问荆（Equisetum arvense）多年生草本植物，据《神农本草经》和《本草纲目》记载，全草入药，具有清热，止咳，祛痰等功效，在中药学上有广泛的用途[2～3]。黄瓜枯萎病（Fusarium oxysporan）又叫萎蔫病，属世界性病害，在黄瓜的整个生长期都可发病，轻者减产10%～20%，重者达30%以上，是保护地和黄瓜生产的重要病害之一[4]。本实验就问荆和藜芦的甲醇提取物对黄瓜枯萎病的病原菌抑制作用进行了室内测定，旨在为开发出一种经济、安全、有效的新型杀菌剂提供理论依据。1.1.1 供试样品 试验所用问荆、藜芦采自山西省庞泉沟自然保护区，将采集的植物材料洗净后在室内阴干（约25℃），放入恒温箱内（40～45℃）烘干，磨碎，过60目筛，备用。1.1.2 供试菌种 黄瓜枯萎病菌，由山西农业大学农学院植物病理实验室提供。1.2.1 问荆、藜芦提取物的制备 分别准确称取问荆、藜芦全株干粉50g，装入500ml小烧杯内，加入干粉5倍量的有机溶剂甲醇，室温下（30±2）℃浸泡3～5天后，过滤并浓缩至稠膏状，称取一定的量，并依次配成实验所需的浓度。1.2.2 抑菌活性测定 生长速率测定法[5]，用打孔器取6mm菌落边缘生长旺盛的菌种，放在加药的PDA平板上培养，以培养基内加等量无菌水作对照，每次重复3次，置25℃下培养。用十字交叉法测每个菌落的直径，以其平均值代表菌落的直径，以下式求出抑制菌丝生长率：抑制菌丝生长率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.6）×100%将问荆、藜芦甲醇提取物配制成浓度为2mg/kg的溶液进行生物活性测定（所有生物活性测定对照均为1%吐温80溶液）。由表1可以看出，两种植物的甲醇提取物对黄瓜枯萎病的病原菌均有明显的抑制作用，问荆的抑制率达到57.8%，藜芦为59.1%。同时与对照相比，处理的菌丝在培养皿中出现消减，变粗等现象。植物提取物菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate72h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate120h抑制率Inhabitingrate问荆Equisetumarvense2.4756.503.6057.804.2754.00CK4.90—7.70—8.80—藜芦VeratrumnigrumL.1.9859.102.8154.003.8151.00CK3.82—5.4—7.15—表1 问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhabiting of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporum由表1可以看出问荆、藜芦甲醇提取物对病原菌都有明显的抑制作用，为了进一步确定其生物活性，将两种植物甲醇提取物稀释成5个不同浓度（4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.25mg/kg），对黄瓜枯萎病的病原菌进行测定，分别求出毒力回归方程及抑制中浓度（EC50），结果见表2、表3。两种植物提取物对黄瓜枯萎病菌的抑制作用都是随着浓度的增大，抑菌活性逐渐增强。且浓度为4mg/kg时问荆和藜芦的抑制率分别达到74.0%和79.2%，具有很强的抑菌作用。同时，随着时间的推移，抑菌效果逐渐降低。植物提取物浓度（mg/kg）Concentration菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate72h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate120h抑制率Inhabitingrate问荆Equisetumarvense藜芦VeratrumnigrumL.4.0001.0274.001.9572.202.6570.12.0001.6257.702.9857.103.8056.81.0002.1244.203.8045.104.8344.90.5002.5732.004.7031.205.6335.70.2502.8324.904.8529.706.5525.1CK3.75—6.87—8.72—4.0001.7279.201.8873.502.4769.702.0001.9059.702.7555.503.4553.901.0002.3246.603.3543.104.3539.300.5002.4343.203.6037.904.7233.300.2502.6037.903.9530.605.0827.50CK3.82—5.43—6.78—表2 不同浓度问荆、藜芦甲醇提取物对枯萎病菌菌丝生长的抑制作用Table 2 Inhabiting of the different concentration of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporan处理Treatment毒力方程RegressiveequationEC??50相关系数r问荆EquisetumarvenseY=1.6167+1.0975X1.2100.9918藜芦VeratrumnigrumL.Y=2.0920+0.9915X0.8750.9644表3 问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌的毒力Table 3 Virulence of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporan抑菌剂主要是通过抑制微生物细胞膜的膜透性或某些酶作用从而抑制代谢过程发挥作用的。具体来说，是抑制新陈代谢中某些酶或蛋白质的合成或活性发挥，或者抑制核酸的合成，也有的是通过改变细胞透性，如干扰细胞壁的组成物质合成等，也有许多抑菌剂则是作为代谢拮抗物影响代谢的进行而发挥抑菌作用的，一般说来抑菌剂的分子结构特征与生物膜脂分子结构特征愈相似，则愈易进入菌体从而更易发挥抑菌作用[6～7]。许多植物组织具杀菌或抑菌作用的可挥发性物质，如单萜、倍半萜、醛类、酯类、酸类、醇类和一些芳香类物质。它们几种或多种共同作用使得植物组织具有较强抵御病菌侵入能力[8]。本实验研究表明问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌确实有较好的抑制作用，其抑制中浓度EC50分别为1.21mg/ml，0.857mg/ml。从保护环境的角度出发，问荆、藜芦作为一种生物农药，具有良好的开发前景和应用价值。至于问荆、藜芦粗提物对其他病菌的活性，及其对病原菌的作用方式和作用机制均有待于进一步的探讨。

玉米丝黑穗病、瘤黑粉病和玉米小斑病是玉米生产中的重要病害，广泛分布各玉米产区。在我国，自20世纪70、80年代采用种植抗病品种和药剂处理种子的方法后，丝黑穗病和瘤黑粉病得到了控制，但是近些年，由于杂交品种的推广，感病品种的大面积种植和频繁交流，病害又从零星发生恢复到大面积发生的情况，对玉米的田间生产造成了严重的威胁。玉米小斑病在夏玉米产区发生为害也逐年加重，因此筛选有效的杀菌剂，对于防控病菌的传播、为害在生产中有着重要的意义。本研究分别采用3种不同的测定方法，进行了杀菌剂对3种病原菌的室内毒力测定，筛选出对病原菌生长具有明显抑制作用的杀菌剂，为构建用于以上3种病害防治的种衣剂奠定了基础。结果如下：采用菌丝生长速率法测定了7种杀菌剂对玉米小斑病菌的室内毒力测定。结果表明，阿米西达、杀毒矾对小斑病菌的抑制作用比较强，EC50分别为5.09μg/ml和1.72μg/ml；采用孢子萌发法测定了11种药剂对瘤黑粉病菌的室内毒力。试验结果表明，福美双和苯醚甲环唑对病原菌孢子的萌发具有明显的抑制作用，EC50分别为1.69μg/ml和3.97μg/ml；采用酶联板—浑浊度法进行10种药剂对玉米丝黑穗病的室内毒力。戊唑醇和福美双的抑制作用最强，EC50分别为0.038μg/ml和0.15μg/ml。根据室内毒力测定的结果，可以选择这几种对病原菌有良好抑制作用的药剂进行相互配伍，扩大其防治谱，构建出新型种衣剂用以3种病害的田间防治。

内生真菌是指那些生活在植物组织内的真菌，用以区分生活在植物表面的真菌。对植物内生真菌的研究可追溯至19世纪末，在100多年的研究中取得了丰硕的成果[1～3，7～9]。内生真菌与植物之间存在密切的互利共生关系，对植物的生理代谢调控和生长发育有较大的影响，目前还未发现不存在内生真菌的植物种类。我国也从大量的植物中报道了内生真菌的存在，寄主种类涉及林木、蔬菜及花卉植物[10～16]，但还有相当数量的植物内生菌没有被研究过，进一步深入开展植物内生菌的研究，对于丰富各类菌物的生物多样性知识和植物内生菌资源的应用开发具有十分重大意义。辣椒是国民经济中重要的蔬菜作物，但发生在辣椒上的病害较多，对辣椒的生产带来了不利的影响，在内生真菌表现巨大生防潜力的前提下，未见到辣椒内生真菌的报道，因而开展辣椒内生真菌的研究，以期从中筛选出有生防价值的内生真菌，必将会促进辣椒的生产并带来不可估量的经济和生态效益。山东省莱阳市莱阳农学院园艺系蔬菜大棚种植干制椒型辣椒。选择生长性良好、无病虫害症状的健康辣椒植株的叶片、茎秆及果实，分别于发芽期、幼苗期、开花坐果期和结果期采样。植株采下后装入无菌塑料袋中，带回实验室立即进行分离。1.2.1 内生真菌的组织分离法 所有的叶片和茎秆样品在蒸馏水冲洗2次，然后浸没在70%酒精1min，3%次氯酸钠4min，然后再在70%酒精中浸没30s，灭菌水中洗3次，每次洗1min。经过表面消毒的组织，切成5～7mm的组织块，无菌操作下转移至PDA培养基（pH值6.8，马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂15g；121℃灭菌15min）上，倒平板前加入100μg/ml的土霉素以抑制细菌的生长，取最后一次冲洗组织的灭菌水倒于平板上，以检查表面消毒是否彻底。1.2.2 内生真菌的稀释分离法 组织表面消毒的方法同1.2.1，将经过表面消毒的叶片和茎秆在灭菌的研钵中研碎，加入等体积的灭菌水稀释，然后用移液器吸取1ml组织悬浮液转于PDA培养基（加入100mg/ml的土霉素）上，然后用灭菌玻棒涂平。1.2.3 种子内部真菌的分离 将种子用70%酒精浸泡30s，很快放入无菌水中冲洗3次，然后置于铺有灭菌滤纸的培养皿内，并加入少量灭菌水，加入的量以润湿滤纸为佳，每皿中放入5粒种子。1.2.4 内生真菌的培养、纯化、保藏及计数 为了便于分离生长缓慢的真菌和产孢能力低的真菌的生长，将一半平板放入26℃培养箱中培养，另一半平板放入37℃中培养。每天进行检查，一直到30天后，将长出的真菌及时进行分离、纯化及保藏（4℃，PDA斜面）以便进一步进行鉴定，并记录不同部位分离出的菌株数。1.2.5 内生真菌的鉴定 从培养的菌落上挑取菌丝制成临时玻片进行观察，如果观察的菌丝及分生孢子梗大量聚集在一起，不易看清结构，则应先将菌丝置于滴有1滴70%酒精的载玻片上10s，然后将玻片倾斜倒去酒精，并用吸水纸将酒精彻底吸净后，再在菌丝及分生孢子梗上滴1滴水制成临时玻片放在光学显微镜下观察，拍照，测量孢子大小，并记录形态特征，所有鉴定的菌种均以在PDA培养基上生长的特性为标准，参考有关书籍进行鉴定[4～6]。采用不同的分离方法得到的菌株数不同，稀释分离法得到的菌株数较多，而经组织分离法得到的菌株数少（表1），但稀释分离法得到的菌株不易纯化，而组织分离法得到的菌株易纯化。从种子中分离得到的内生真菌数量较少，仅占到总分离菌株数的7.8%；叶片和茎秆上分离到的菌株数无多大差别。tissuedilutedisolationmethodtissueisolationmethodnumberofisolatesfrequenceofisolationnumberofisolatesfrequenceofisolationleaf4730.03219.1stem4023.83621.4seed——137.8Table 1 The comparison of endophytic fungi isolated by different methods经过对辣椒叶片、茎及种子823份材料中内生真菌的分离，共得到168株菌株，定殖率为20.4%，图1表明了暗色丝孢菌是最常见的分离菌。经鉴定属于14属20种真菌（表2）。其中，弯孢属Curvularia、链格孢属Alternaria、平脐蠕孢属Bipolaris、芽枝孢属Cladosporium、黑附球属Epicoccum、细基格孢属Ulocladium、皮司霉属Pithomyces、拟青霉属Paecilomyces、青霉属Penicillium、曲霉属Aspergillus、枝顶孢属Acremonium、镰刀菌属Fusarium是常见的内生真菌，而黑团孢属Periconia和矛束霉属Doratomyces是首次分离到的内生真菌，从种子中分离获得，对其形态学特征描述见2.3。大多数的菌株在28℃分离培养获得，而在37℃得到的是一些不孕性菌丝。2.3.1 小孢矛束霉（图1～图2）Doratomyces microsporus(Sacc.)F.J.Morton&G.Smith,Mycol.Pap.86:77,1963.KindsSpeciesKindsSpeciesNondemati-aceousgen-eraPaecilomycessinensisQ.D.ChenPenicilliumdigitatum(Pers.)Sacc.PenicilliumexpansumLinkAspergillusnigerTieghAspergillusochraceusG.WilhAspergillusversicolor(Vuill.)TirabAcremoniumroseogriseum(S.B.Saksena)W.GamsFusariumoxysporumvar.liniSnyder&H.N.HansenDematia-ceousgeneraCurvularialunatusR.R.Nelson&HaasisCurvulariaintermediaBoedijnUlocladiumconsortiale(Thüm.)E.G.SimmonsPithomycessacchari(Speg.)M.B.EllisAlternariaalternata(Fr.)KeisslAlternariabrassicicola(Schwein.)WiltshireAlternariatenuissima(Kunze)WiltshireBipolarisaustraliensis(Ellis)Tsuda&UeyamaCladosporiumherbarum(Pers.)LinkPericoniabyssoidesPers.SterilehyphaeEpicoccumnigrumLinkDoratomycesmicrosporus(Sacc.)F.J.MortonTable 2 Kinds of endophytic fungi from hot pepper菌落在CMA上平展，粉状，灰绿色或灰褐色，背面褐色，培养后期明显可见直立的孢梗束。菌丝体表生或大部分埋生，淡褐色或褐色，常形成菌丝束。孢梗束高100～800μm，柄部暗褐色，由紧密压在一起的分生孢子梗组成，头部圆柱形。产孢小梗多个簇生在分生孢子梗中上部。分生孢子卵形，端部多数尖，基部平钝，无色至淡棕色，聚集在一起呈暗褐色，光滑，3.5～5.5μm×2.5～4μm。2.3.2 黑团孢（图7～图8）Periconia byssoides Pers.ex Schweinitz,Persoon,syn.Meth.Fung.(G?ttingen):686,1801.Figure 1～2 Doratomyces microsporus 1.Conidiophore 2.Conidia; Figure 3 Conidia of Fusarium oxysporum var. lini; Figure 4～5 Cuvurlaria lunatus 4.Conidia; 5.Conidiophores and conidia;Figure 6 Conidiophore of Bipolaris australiensis; Figure 7～8 Periconia byssoides 7.Conidiophores; 8.Conidia; Figure 9～10 Epiccocum nigrum 9.Conidia; 10.Conidiomata菌落在CMA上絮状，稀薄，白色。菌丝体表生或埋生，无色。26℃培养1周左右，单根或2～5个簇生、直立、黑色的分生孢子梗从菌落中长出，基部暗橄榄褐色或褐色，光滑或粗糙，不分枝，梗长1.0～1.5mm，宽10～15μm，3～6隔膜，顶端为分生孢子和产孢细胞聚集形成的头部结构。产孢细胞近无色，椭圆形，产生单生或链生的分生孢子。分生孢子球形，初淡黄色，后暗褐色，粗糙，壁厚，直径15～17.5μm。本文首次研究了辣椒内生真菌的种类，共得到15属20种真菌，均属于无性态真菌。其中暗色丝孢菌数量及种类居多，与已报道的植物内生真菌种类及数量较一致[10，13～16]，但又具有一定的差异性，首次报道了黑团孢（P.byssoides）和小孢矛束霉（D.microsporus）是内生真菌，均由种子内分离得到。总结有关内生真菌的文献，发现内生真菌多数为无性态真菌，其次为子囊菌，接合菌居第三，担子菌及鞭毛菌极少存在[10，13～16]，而本次试验分离出的全部是无性态真菌，未见其他类群的真菌，这并不说明辣椒内生真菌中就不存在其他种类的真菌，下一步应改进分离培养方法并采集不同生长时期的组织和部位进行大量分离，以期全面准确地了解辣椒内生真菌的种类，并对内生真菌进行抗活性的筛选工作。组织分离是目前内生真菌分离的主要方法，简单易行，但由于有些真菌在人工基质上不能生长，因而不能得到全部的内生真菌，有很大的局限性。本文首次将组织研碎，采用稀释分离的方法分离内生真菌，获得的菌株种类上与组织分离法无多大差异，但较组织分离法获得的菌株数量多，在没有更好的内生真菌分离方法的情况下，应尝试采用多种分离方法和多种培养基进行分离，掌握合适的分离培养条件，尽可能多的得到内生真菌。

The small brown planthoppers(Laodelphax striatellus)is an important pest in single late rice seedling stage in Zhejiang province and also the vector of the rice stripe virus,threatened paddy rice production.Through the investigation of transplanting time of rice seeding,occurrence quantity and carriage rate of overwinter and the first generation of the small brown planthoppers in wheat field and weed at the beginning of 2007,the small brown planthoppers mainly immigrated Early Sowing single late rice seedling from wheat field and weeds.The generation of the small brown planthoppers is the most serious in sowing single late rice seedling,and easily arouse the outbreak of the rice stripe virus.Currently,control strategy of the rice stripe virus is"cut off a poisonous chain,cure insect to control the disease".During the last years,by investigating the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and adopting chemistry prevention at different number of times to control it,we research the relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and the incidence of the rice stripe virus for explicating the affection of insect quantity in rice seedling stage and chemistry prevention to incidence of the rice stripe virus.Now we report the result as follows.Agent:40%Chlorpyrifos(zhejiang xinnong chemical company limited).Experimental field is in the experimental area of Shuangqiao academy of agricultural science in Xiuzhou district of Jiaxing City;rice variety is Jia 991 and is offered by Jiaxing academy of agricultural science.1.2.1 Seed treatment May 10 in 2007,rice seed is immersed in 2000 times'402 liquid over72h.May 13,we took it out and flushed with the clear water,then put it in the thermostat in 37℃ in order to pregerminate and seeded on May 15.1.2.2 Experimental design The rice seedling bed is divided into 15 small areas that is 2m2 and each small area stays the partition of 30cm.Each small area is sowed seeds quantity homology.15 small areas are divided into 5 processing and the everywhere manages 3 small areas.5 processing differences expect:no application,once application,2 times application,3 times application and 4 times application in the rice seedling stage.Application of time is such as the table 1.The agent of prevention chooses to 40%Chlorpyrifos that diluted to 500 times liquids to spray.ApplicationtimeApplicationnumberoftimes0times1times2times3times4times5/24√√√√6/1√√√6/8√√6/15√Table 1 Different application number of times and time1.2.3 Investigation of the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and incidence of the rice stripe virus We have investigated the small brown planthoppers quantity of every small area in rice seedling bed before application since May 24.The small area is investigated in 3 point and everywhere is 0.11m2,and we statistics the average of insect quantity in each point and compare with the quantity in different processing.We statistics the amount of rice seedling and the number of infected plants in every small area on June 20 when the rice seedling transplanted to the field,and computed the incidence of the rice stripe virus in each area.1.2.4 Incidence of the rice stripe virus in the field After investigating incidence of the rice stripe virus in rice seedling stage,we transplanted the rice seedling from 5 processing area including no preventing,preventing once,2 times,3 times,4 times into the field,and periodical investigated the incidence of the rice stripe virus in the field.Each small area is chose 5 points while investigating,and investigated 250 stubs on each point and computed incidence in every small area.2.1.1 The small brown planthoppers quantity in rice seedling stage Investigate a result on May 24,The small brown planthoppers all is longwing adults in each small rice seedling area,and the insect quantity is 138 in each 0.11m2;amount of insect in the field has a little bit decrease on June 1;on June 8 it obviously reduces and the number of egg and low instar nymphst increases gradually;until June 15 it has been basically low instar nymphst.The result of investigation indicates,from June 1 to May 24,the insect quantity of every processing area presents to a descend trend,but the decrease range of the insect quantity in applicationarea is higher than in no application;From June 1 to June 15,the insect quantity of no and once application area increases gradually,which are higher than the cardinal number of ex-experiment,but the amount of insect in the other application areas have gradually decrease,see table 2,figure 1.Date(month/day)0time1time2times3times4times5/241381451621431526/11191121251161206/8211175142122986/152471991398465Rateofincreasesordecrease(%)78.9937.24-14.20-41.26-57.24Table 2 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing areas of rice seedlingFigure 1 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing aras of rice seeldingWith the insect quantity of ex-application in each small area for cardinal number,compared with the amount of the last investigation,the insect quantity in no and once application area increased by 78.99%and 37.24%respectively,but it in 2 times,3 times and 4 times application area reduced by 14.20%,41.26%and 57.24%respectively.Experiment indicates,application inrice seedling bed can effectively repress the small brown planthoppers quantity in the field,and with application number of times increasing,which restraint effect is strengthen and amount of insect in small area reduces 57.24%with 4 times application.2.1.2 Investigation of the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed The investigation of incidence of the rice stripe virus on that day when the rice seedling was transplanted to the field,there is all discovered diseased plants in each small areas,but which number in the small area of no application is obviously more than the application area.The incidence of no,once,2 times,3 times and 4 times application areas respectively is 5.53%,3.90%,2.27%,1.50%and 1.36%,see table 3.Experiment enunciation,application in the rice seedling bed is not only lower amount of the small brown planthoppers in the field,but also ease occurrence of rice stripe in rice seedling bed.ApplicationtimesInriceseedlingbedDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofriceseedling(%)InthefieldDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofthefield(%)0time993179655.530237129618.2901time719184293.9029.48170113814.9418.322times404178302.2758.95116102011.3737.833times270180211.5072.887311016.6363.754times247181541.3675.416114234.2976.54Table 3 The investigation of incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed(Jiaxing,2006)Seen from the investigation of the incidence of rice stripe virus with the different processing,the incidence in rice seedling bed of no application is lowered by 29.48%compared with once time application;compared with 2 times,the incidence is lowered by 29.47%with once application,and it is descended by 13.19%compared 2 times with 3 times;but compared 4 times application with 3 times,the incidence in rice seedling bed is only lowered 2.53%.This is because of the rice stripe virus has an incubation stage in rice plant after infection,and there is 12 days at least from infecting to outbreak;than the outbreak of rice stripe virus in rice seedling bed is on June 20.So that ex-3 times application depressed the cardinal number of the small brown planthoppers,and reduced the infection and the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed.But it is not obviously influencing for the incidence in rice seedling bed with the 4th time application on June 15.The result that we periodic investigate the rice stripe virus in the field,the incidence in the field is basically stability after transplanting 40 days,and no longer appear a new disable plant.Because on the rice seedling stage we adopted the chemistry prevention with different number of times,the incidence of the rice stripe virus exists difference after the rice seedling transplanted to the field.The incidence is the tallest in no application small area and lowest in 4 times application small area.Along with the increment of application number of times,the incidence presents to obviously descend trend.With no,once,2 times,3 times,4 times application the incidence is in order to 18.29%,14.94%,11.37%,6.63%and 4.29%in the field.It is shown that application in the rice seedling bed depressed the small brown planthoppers quantity,and the function is very obviously for ease the occurrence of the rice stripe virus.Analyzed the incidence of the rice stripe virus in various processing,it in the field with once and two times application distinctly descend 18.23%and 37.83%compared with no application;but when with the application number of times increase to 3 times,the descends range of the incidence is 63.75%and prevent effect is obviously higher than that with 2 times application,than after 4 times application the incidence descend to come to 76.54%.The relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling bed and incidence of rice stripe in rice seedling bed and field analytical,such as table 4,figure 2 shown.The relativity analyzes indicated,the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in rice seedling bed(y)relation type is y=0.03 x+2.89,related coefficient r=0.99**;the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in the field(y)relation type is y=0.10x+11.03,related coefficient r=0.98**.The relationship between the small brown planthoppers quantity and incidence of rice stripe virus in rice seedling bed and field present positive correlation.ApplicationtimesChangerateofthequantity(%)Incidenceinriceseedlingbed(%)Incidenceinthefield(%)0time78.995.5618.292times37.243.8914.943times-14.202.2711.375times-41.261.506.636times-57.241.364.29Table 4 The investigation of the small brown planthoppers quantity and incidence of the rice stripe virus(Jiaxing,2006)It is very obvious that preventing the small brown planthoppers in rice seedling bed for controlling the occurrence of the rice stripe virus.The result of adopting the different application times indicates,that is repressed growth of the small brown planthoppers quantity,and also eased the occurrence of the rice stripe virus with increasing the application number of times.As the result of the test shows,there is the forward relationship between the range of incidence and application times;through investigating the incidence in the field,we can confirm that reasonable application is effectively to controlling the occurrence of the rice stripe virus.Moreover analysis of the relationship between the small brown planthoppers quantity,incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed and it in the flied,there have a positive correlation.Experiment shows,the reasonable and multiple application in rice seedling bed is the effective means to reduce the small brown planthoppers quantity and controlling the rice stripe virus.The controlling effect of the rice stripe virus is reached 70%with application 3 or 4 times on rice seedling stage.Therefore we suggest that we should pay attention to controlling the small brown planthoppers of the rice seedling bed at the rice stripe virus heavier region or age,especially in the rice seedling bed where sow seeds early and easily cause the small brown planthoppers centralize immigration.In order to prevent effectively,we should increase the number of application times to lower the small brown planthoppers quantity in the field,and control the harm of the rice stripe virus.Figure 2 Relationship between the small brown planthoppers quantity andin cidence of rice stripe virus in different prevention of rice seedling bed

台农一号、青皮芒、水英达、鸡蛋芒(粤西一号)、白玉象牙。金煌芒、红象牙芒、玉文芒6号、贵妃、黄金煌、紫花芒(又名农院3号)、象牙22号、金穗芒、桂热10号、金兴、桂热120、吕宋、田阳香芒、串芒、象牙芒、红金煌芒。桂七芒、凯特芒、红苹芒、印度一号、桂香芒。杧果的主根发达、侧根少，生长较深。根的生长一年中有两次生长高峰期，第一次在果实采收后到秋梢萌芽前，第二次在秋梢停止生长后到冬季低温来临前。杧果树在8—10月抽生的秋梢和11月上中旬抽生的早冬梢是次年主要的结果母枝。早中熟品种在11—12月，晚熟品种在1—2月，同一品种在不同年份花芽分化期因气候的差异可能相差15～25d。顶生或腋生的圆锥状花序；花型有雄花和两性花两种，雄花量大，两性花量少，雄花子房退化。早中熟品种的开花期在11月至翌年2月，晚熟品种如栽培管理适宜开花期在3—5月。花期授粉：杧果是典型的虫媒花植物，传粉主要昆虫是蝇类，因此，花期要在果园采取措施吸引蝇类。果实生长期110～150d。华南地区主栽的早熟品种一般成熟期在5月下旬至6月上中旬；中熟品种一般成熟期在6月下旬至7月上中旬；晚熟品种成熟期大多在7月下旬至8月上中旬。杧果适宜在年平均气温20～24℃。临界低温-3℃范围内生长；杧果耐湿、耐旱，但花期如阴雨连绵则不利花朵的授粉受精；杧果生长结果良好要求充足的光照；pH值为5.5～7.0的各种类型土壤均可栽植杧果。(1)常用砧木。一般选用土杧、扁桃(柳叶杧)的实生苗。(2)常用嫁接方法。单芽枝腹接、切接。一般选择土层深厚、疏松肥沃的丘陵坡地建园。采用等高定点开坑或按等高线开垦成简易梯田后定点开坑。坑直径1m、深0.8m；在定植前2个月左右挖好，坑底填入绿肥或草皮20kg、厩肥30kg、过磷酸钙1kg及石灰0.5kg混合堆沤,使之在定植前腐解沉实。一般选择春植(3—4月)和秋植(9—10月)。以选择在春季进行为佳，其次是秋植，此时雨水少，气候干燥，必须注意淋水。定植规格可依据园地环境条件、栽培管理水平确定，一般株行距(3～5)m×(4～6)m；每667m2栽22～55株；配置授粉树。(1)淋足定根水，并覆盖杂草在树盘。(2)在苗旁宜用竹子或树枝支撑果苗，以防风吹摇动伤根而影响成活。(1)花前肥。在2月上中旬施，氮、磷、钾配合。一般施复合肥0.5～1.5kg/株；如干旱结合灌水施肥。(2)壮果肥。在4月下旬到5月上旬谢花后施肥。施速效氮肥和钾肥各0.5～1.0kg/株，花量小的植株可不施氮肥。(3)采果肥。在8—9月采果后施，以氮肥为主，氮磷钾肥配合，施速效氮肥0.5～1.0kg/株加复合肥0.5～1.0kg/株。10月中旬结合灌水追施速效尿素促进晚秋梢和早冬梢萌芽；可起到延迟次年花期的效果。(4)基肥。在8—9月结合采果肥与基肥同时施入。结合深翻改土进行,沿树冠滴水线开环状沟，沟深40cm，沟宽30cm，基肥以厩肥、堆肥、绿肥等有机肥为主，施30～50kg/株、磷肥1.0～1.5kg/株。一般直径在0.7～0.9cm的结果母枝易成花且坐果率高，过粗的不易成花，过小的易成花但坐果难。通过两次修剪来培养结果母枝：第一次在8月下旬前完成采果后的修剪；第二次在10月中旬全园灌水并施少量尿素或其他速效性氮肥，促使全园在10下旬到11月上旬有60%以上的枝梢萌芽。第二次在萌发的秋梢长到5～10cm时进行，此时疏剪过密、过弱或过强的新梢，每剪口留梢2～3条，促使选留的新梢生长壮实，在12月中下旬老熟，顺利在2月下旬到3月上旬开始抽生花穗。由于早春低温阴雨对杧果的授粉受精的危害较大，必须避开此时开花，因此，必须进行花期调整，主要方法如下所述。(1)人工摘除早花穗。生产上将2月中旬前抽生的花穗视为早花。一般都要控制。紫花杧等一些品种的花序再生能力强，可通过摘除早期抽生的顶生花穗，促进腋芽进行花芽分化，可推迟花期15～20d，避开3月低温阴雨天气对开花的影响。(2)生长调节剂的应用。在合适时段叶面喷雾(试用参考浓度800～2000mg/L)，可延迟花期10d左右，1—2月早抽生的花穗人工摘除后每隔7～10d喷一次多效唑(试用参考浓度400～800mg/L)，喷1～2次可延迟花期30d左右。(3)树体管理。分为采果后修剪和果实生长期修剪。(4)采果后修剪。结果树的修剪一般在采果后10～15d进行，不宜延迟到9月下旬以后才修剪。初结果树修剪量小。成年结果树要疏剪顶生和外围的过密枝、衰老弱枝、下垂枝、病虫害枝、枯枝回缩树冠之间的交叉枝；短截过长营养枝和结果母枝，保证树冠通风透光。(5)果实生长期修剪。为提高果实品质，要保证树冠通风透光，6月上中旬疏剪挂果部位中上部的营养枝：疏剪遮盖果实的枝叶和果实旁“老鼠尾”状的花穗残梗；每果穗选留果实2～3个，其余的疏除。剪除影响主枝生长的辅助枝，着生位置不当的重叠枝、交叉枝以及病虫枝、徒长枝，剪掉过长、过旺枝，促进有效分枝生长。杧果套袋一般根据品种果实的大小，选用相应规格且质量好的杧果专用纸袋进行果实套袋。杧果一般在谢花后35～45d，第二次生理落果结束时进行(像鸡蛋大小)。华南地区一般要求在4月下旬至5月中旬雨季来临之前进行，套袋时间过早，由于果柄幼嫩，易受损伤而影响以后果实的生长，同时由于果实太小，不易确定果实的形状是否端正，或因生理落果而影响套袋的成功率。套袋过晚，果实过大增加了套袋的难度，易将果实套落，同时，也达不到预期的效果。套袋应选在晴天进行。(1)套袋前的准备。套袋前修剪，疏除病虫枝、交叉枝，并起先疏果，并剪去落果果梗；再用1∶1∶100波尔多液或800倍液施保克或500倍液大生等杀菌剂喷施果面。果面干后套袋，要求当天喷药当天套完。(2)套袋操作。套袋前先将整捆果袋放在潮湿处，让它们返潮、柔韧,以便于使用，套袋时先将纸袋撑开，并用手将底部打一下，使之膨胀起来，然后，用左手两指夹着果柄，右手拿着纸袋，将幼果套入袋内，袋口按顺序向中部折叠，最后弯折封口铁丝，将袋口绑紧于果柄的上部，使果实在袋内悬空，防止袋纸贴近果皮造成摩擦伤或日灼。

2006年10月以来，温州市乐清、瑞安、苍南、瓯海、龙湾等地设施栽培的番茄上相继发生了一种新的严重为害蔬菜的病毒病——番茄曲叶病毒病。在各县有关部门的大力协助下立即从5个不同地点采集了病症表现典型的番茄植株样本，送到浙江大学生物技术研究所鉴定，经该研究所对病样用超薄切片电镜观察、酶学检测（ELISA）、分子检测，确认为台湾番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Tanwan virus，TLCV）。该病毒在温州市系首次发现，经检索国内未见报道。番茄曲叶病毒病是一种毁灭性的病害，是世界许多地区番茄生产上的重要限制因素，各地务必引起高度重视。据调查，2006年12月在苍南县灵溪镇河口叶村蔬菜基地、瑞安市梅屿乡外三甲村蔬菜基地、瓯海区新桥、娄桥街道蔬菜基地、乐清市虹桥镇武宅村，秋季定植的越冬番茄病毒病的株发病率为3%～30%；龙湾区天河镇蔬菜示范园区、乐清市蒲岐镇东门外村番茄受害最重，许多田块株发病率高达95%以上，农民已基本放弃管理或拉秧改种。据初步统计，2006年初冬温州各县（市、区）番茄病毒病的发生面积约3000亩，其中株发病率＞50%的田块面积约300亩，给当地的番茄生产造成了惨重损失。染病番茄植株矮化，生长缓慢或停滞，顶部叶片多稍褪绿发黄、变小，叶片边缘上卷，叶片增厚、叶质变硬，叶脉常呈紫色。早期染病的植株常严重矮缩，开花结果异常，后期染病的植株仅上部叶和新芽表现症状，结果减少、果实变小，成熟期果实着色不均匀（红不透），基本失去商品价值。该病病原为Tomato leaf curl Tanwan virus，属烟粉虱（Bemisia tabaci）传染类双生病毒，种子和土壤均不传毒。该病毒只能经由烟粉虱传播。温州地处亚热带地区，气候温暖，阳光充足，雨量充沛，降雨集中在春季和夏季，秋季较为干爽（年平均气温19.3℃，最热的7～8月平均气温29.1℃）。2006年7～11月，温州市天气总体上呈高温干爽天气，对虫媒烟粉虱的发生、繁衍十分有利，这可能是该病严重发生的诱因之一。据初步调查，2006年9～10月，秋番茄育苗时，烟粉虱发生普遍，经检测以B型为主。烟粉虱发生数量大、活动频繁是导致该病流行的重要原因。据初步调查，目前温州生产上推广的大多数番茄品种如红梅王、FA-189、516、托马雷斯、合作903等对该病毒的抗病性较差。据本所研究，B型烟粉虱在温州地区每年发生10～11代，在温室内无明显的越冬现象，十分适宜在当地生长、繁衍。预计今后该病很有可能会随着带毒烟粉虱的扩展而迅速蔓延开来，应立即采取积极有效的措施进行防控。防治病毒病的关键措施之一是选育抗病品种，抓紧引进、筛选抗耐病的优良品种是当前的重要任务。（1）育苗床与大田生产要分开；（2）使用40～60目防虫网隔离育苗，避免苗期感染；（3）苗床悬挂粘虫色胶板（本所研制）诱杀烟粉虱，减少传毒媒介。（1）加强肥水管理，增强植株抗病能力；（2）地膜覆盖，去除边际杂草；（3）及时去除植株下部烟粉虱虫、卵枝叶；（4）收获后及时清洁棚室和周围环境。及时、及早防治烟粉虱以控制病毒病的发生。从烟粉虱零星发生开始，交替使用99.9%绿颖农用矿物油200～300倍稀释液、20%啶虫脒（兰宁）可溶性液剂3000倍稀释液、25%扑虱灵可湿性粉剂1000～1500倍稀释液、25%阿克泰水分散粒剂2000～3000倍稀释液、2.5%天王星乳油2000～3000倍稀释液、1.8%阿维菌素1500倍稀释液、1%甲胺基阿维菌素2000倍稀释液等药剂喷雾防治烟粉虱。绿野牌即开式环保型高效粘虫色胶板系列产品是温州市农业科学院生态环境研究所（植物保护开发研究中心）最新研制成功的一种工厂化生产的绿色植保产品，现已投入批量生产。本产品根据害虫特有的生物学特性，采用特种纸胶、光技术及先进工艺制成，不含有毒物质，不污染环境，可用于监测和防治经济作物的微小害虫及畜牧场、果蔬储藏室等地的双翅目卫生害虫等。本产品是一种高效、实用的害虫无害化防治新产品，使用本产品可避免和减少施用农药给环境带来的污染及其对人体健康的危害，本产品特别适合于在无公害农产品、绿色食品以及有机食品生产中使用。1.产品特点：特定光谱，诱杀效果显著，双面诱杀，控制范围广；特种纸板，平整不卷曲；胶种防水粘度高，高温不流淌，持久耐用；携带方便，即开即用。2.产品规格：通用A型（黄色），22cm×27cm、每封12张；通用B型（黄色），12cm×15cm、每封20张。3.用途：监测和直接诱杀防治害虫。4.诱杀对象：通用A、B型板诱杀烟粉虱，白粉虱、黄曲条跳甲、潜叶蝇、蚜虫、蓟马及多种双翅目害虫等，也可防治蟑螂等害虫。5.适用场地：温室、塑料大棚、花圃苗房、果园、果蔬储藏室、畜牧场、家居等。6.适用作物：蔬菜、花卉、茶叶、中药材、果树等。7.挂板时间：用于防治时，于害虫发生初期挂；用于监测时从作物苗期开始挂；其他酌情。8.悬挂方法：低矮生蔬菜和作物胶板东西向垂直挂在底边离植株15cm处；搭架作物顺行向垂直挂在架中部（即挂在两行中间）；其他酌情。9.用量：防治用每标准大棚（6m×30m）挂A型板1～2封，其他按面积测算，每粘满虫后换一张；监测用每棚挂B型板1～2小张，或将A型板一分为二后挂。10.专利号：ZL2004 20027355.1