目前的机制解析工作集中在对QS转录调控的研究。利用pcoI：：lacZ的染色体融合报告菌株，通过转座子Tn5随机插入突变，获得了一系列QS系统的上游调控因子。GacS/GacA双因子调控系统正调控QS系统的表达，同时正调控抗生素2，4-DAPG、氢氰酸和蛋白酶等的产生。该系统位于生防相关性状表达的信号传递链上游（图1），对生防功能起到重要的调控作用。通过转座子随机突变，还得到rpoS基因等一系列QS系统的负调控基因，其调控机制及与生防能力的关系正在研究中。图1 Pseudomonas fluorescens 2P24中与生防性状相关调控因子作用模式图

由大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb）引起的棉花黄萎病是棉花的主要病害。该病于1914年在美国弗吉尼亚州首次发现，以后随着棉种的调运传播到世界各个棉花主产国[1，2]。我国每年棉花黄萎病发病面积达2×106hm2，重病田病株率高达95%以上，造成极大的经济损失。棉花黄萎病的防治已成为世界棉花生产中的难题。国内外在抗病育种、农业措施和化学防治等方面做了大量工作，对控制此病的危害起到重要作用[3，4]。但目前生产上高抗丰产品种少、有效化学药剂匮缺、农药残留和抗药性问题突出。由于生物防治能克服上述弊病，被认为是一种有效且具有发展潜力的重要防治方法，而获得高效拮抗菌是生物防治的基础。关于棉花黄萎病拮抗菌的筛选，国内外已做了不少研究工作。有报道指出，芽孢菌、荧光假单孢菌、葡柄霉、链霉菌、黄色蠕形菌对大丽轮枝菌都有拮抗作用；Bacillus和Pseudomonas属的某些细菌能有效抑制大丽轮枝菌的生长和使部分分生孢子死亡；木素木霉（Trichoderma ligmerum）的某些菌系有明显的防病增产作用；植物内生菌及根际土壤细菌诱导棉花对大丽轮枝菌抗性[5～9]。由于棉花黄萎病菌存在生理分化现象，不同地区的温度、湿度、光照、植被等生态条件有异，因而不同地区筛选出的棉花黄萎病拮抗菌菌种的适应性和对棉花黄萎病菌的拮抗作用存在显著差异[10]。安徽目前尚未见关于棉花黄萎病拮抗菌筛选鉴定的研究鲜有报道[11，12]。因此，有必要在安徽地区开展对棉花黄萎病的生防研究。作者从安徽主要棉区广泛采集棉花根围土样，经室内分离获得细菌菌株120株，真菌菌株97株，经拮抗活性筛选，发现ZXC-9等7个菌株对棉花黄萎病菌具有较好的拮抗作用，可望应用于棉花黄萎病的生防。现将研究结果报道如下。供试病原菌棉花黄萎病菌（Verticillium dahliae Kleb） 菌株HF和WW3，供试生防菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株BS，均由安徽农业大学植物病原真菌研究室提供。真菌分离采用查氏酵母浸膏培养基和PDA培养基，细菌分离采用营养琼脂培养基（NA）和NB培养液，配制方法均参照文献[13]。1.3.1 土样的采集 在棉花黄萎病害发病田块采样，采用五点取样方法。取健康的棉花植株根土，取样时拨开土表（约5cm深），每样取50g（同地区取样至少相距100m以上），晾干后4℃保存待用。1.3.2 微生物的分离 取10g的土样放在量筒中，加入内装100ml无菌水的三角瓶中，于摇床上振荡2h。取1ml的悬浮液，加入9ml的灭菌水中，依次稀释到10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，各浓度取上悬浊液0.1ml涂于选择性培养基平板上，每浓度设3个重复。置于28℃±1℃恒温箱中培养24h后进行细菌检查，真菌和放线菌培养72h后调查，分别记录其菌落数。1.4.1 真菌对棉花黄萎病菌的拮抗作用测定 将分离菌与棉花黄萎病菌HF菌株对峙接种于PDA平板上（φ=9cm），菌丝块直径0.7cm，两菌块接种点相距4cm，并以单独接种棉花黄萎病菌的处理为CK，每处理重复3次，25℃恒温培养，连续7天观察菌落的相互影响，并在两菌株接种点连线上测定接种点到菌落前缘的距离，按下式计算抑菌率。抑菌率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径×1001.4.2 棉花黄萎病菌拮抗真菌的鉴定 在PDA平板上对拮抗真菌菌株进行培养，观察、记载菌落、菌丝、产孢结构和孢子形态特征，参照真菌字典[14]，对菌株种类做出鉴定。1.5.1 棉花黄萎病菌拮抗细菌的初步筛选 先将培养48h的病原菌（HF菌株）打成直径0.7cm的菌碟，移植在平板中央，同时将分离到的细菌培养24h后，接种在平板周围，每皿6点，待测菌与病原菌距离为3.5cm，置于28℃培养48h后，检查抑菌圈有无并测量其大小。抑菌带（D-D0）=细菌抑菌圈直径-细菌菌落直径拮抗细菌的分级[15]：0级（-）：D-D0=0（无透明带产生），无拮抗性；1级（+）：0mm＜D-D0＜3.9mm，弱拮抗性；2级（++）：4mm＜D-D0＜7.9mm，中等拮抗性；3 级（+++）：D-D0＞8.0mm，强拮抗性。1.5.2 拮抗细菌对棉花黄萎病菌的拮抗作用测定1.5.2.1 划线法测定结果 初步筛选出的4种细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9也通过连续10代转移培养，再进行复筛试验。复筛试验并以生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株作为防效对照。具体操作方法如下：用接种环取1环分离出的细菌在含有PDA培养基的培养皿中间划一直线，在距直线两侧2cm处分别接种直径为0.7cm的病原菌菌碟，并以单独接种棉花黄萎病病原菌的处理为对照1（CK1），以接种枯草芽孢杆菌BS菌株的处理为对照2（CK2）。每处理重复3次，在25℃下恒温培养，测定其抑菌效果。测量病原菌向拮抗菌方向生长的长度和对照中病原菌菌落的半径（cm），以R值表示拮抗作用的大小[16，17]。1.5.2.2 杯碟法测定结果 在划线法后选取4种细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9中抑制效果最为明显的XSZ-5菌株进行杯碟法实验。将活化好的XSZ-5菌株用3ml无菌水洗下，接入100ml的NB培养液中，并置于28℃，转速为100r/min的恒温摇床振荡培养。48h后得到菌量为1010～ 1011cfu/ml的活菌液。然后分别向18ml的PDA培养基中加入2000μl、500μl、100μl和10μl的BS活菌液，混合均匀后倒平板，并在平板上接种直径为0.7cm的病原菌菌碟，同时设置对照（即不加入XSZ-5菌的活菌液），各处理重复3次，25℃下恒温培养7天后测量菌落直径，计算抑菌率[16，17]。对自安徽各主要棉区采集土样进行室内分离，共获得真菌菌株97株。以棉花黄萎病菌HF、WW3为目标菌株，采用平皿对峙试验测定各真菌菌株对棉花黄萎病菌的拮抗作用，结果见表1。从表1可见，通过连续7天的测量观察，发现其中有3种菌株ZXC-9、ZZY-3和ZGC1-1对棉花黄萎病菌具有很明显的抑制效果，7天后抑制率分别达到了69.39%、67.52%和74.30%。拮抗真菌菌株Isolatesofantagonisticfungi项目Item不同处理时间的测定结果Testresultsatdifferenttimeaftertreatment3天4天5天6天7天ZXC-12-1菌落直径（cm）2.012.462.632.853.01抑制率（%）—6.8119.5322.6629.59ZXC-9菌落直径（cm）0.971.131.231.311.31抑制率（%）46.9957.1962.3964.4969.39ZGC1-1菌落直径（cm）0.820.951.001.031.10抑制率（%）55.1964.0269.4272.0974.30ZXC-12-2菌落直径（cm）1.721.932.022.092.18抑制率（%）6.0126.5237.9543.2848.99ZXC-2菌落直径（cm）1.311.721.922.002.12抑制率（%）28.4934.8741.2445.7950.28ZXC-15菌落直径（cm）2.332.672.863.073.08抑制率（%）——12.4716.5528.01ZHS-1菌落直径（cm）2.242.382.762.802.89抑制率（%）—9.8115.6124.0932.54ZXC-14菌落直径（cm）1.321.781.982.072.19抑制率（%）27.6632.5239.5443.7848.89ZZY-3菌落直径（cm）0.961.211.351.361.39抑制率（%）47.5454.1758.7263.1467.52CK菌落直径（cm）1.832.643.273.694.28表1 拮抗真菌菌株对棉花黄萎病菌的抑制作用测定Table 1 Inhibition of isolates of antagonistic fungi against V. dahliae2.2.1 棉花黄萎病菌拮抗细菌初筛结果 经过营养琼脂培养基（NA）分离，筛选得到12株拮抗细菌菌株。抑菌圈试验结果（表2）表明，这12株拮抗细菌菌株对棉花黄萎病菌HF菌株和WW3菌株都有一定的拮抗性，其中XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9这4个菌株对棉花黄萎病菌的拮抗作用较强，对两种目标菌株的作用效果相似，无明显差异。拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3XZY-1--XXX-9++++XZY-6+++++XXX-17+++XSZ-5+++++XZY-5++++XSZ-2+++XXC-3-+表2 12个细菌菌株对棉花黄萎病菌的抑菌试验结果Table 2 Inhibitory tests of 12 strains of bacteria against V. dahliae拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria棉花黄萎病菌菌株IsolatesofV.dahliaeHFWW3XXX-1+++XXC-5--XZY-8++++XXC-9++XZY-13++XXX-4++++++XGC2-9++++++续表22.2.2 拮抗细菌对棉花黄萎病菌的拮抗作用2.2.2.1 划线法测定结果 测定结果（表3）表明，处理5天后，病原菌菌株向各拮抗细菌方向生长缓慢，各菌株均有明显的抑菌带出现。6天后，各拮抗菌对病原菌菌株的抑制作用R值分别为0.571、0.571、0.563、0.571，均表现出较好的抑制效果，而对照生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株R值则为0.579。各拮抗菌对病原菌菌株的抑制效果与生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株的防治效果相比无显著差异。拮抗细菌菌株Strainsofantagonisticbacteria项目Item不同处理时间的测定结果Testresultsatdifferenttimeaftertreatment2天3天4天5天6天XZY-6处理0.650.680.720.750.75R值0.7360.7010.6610.6360.595XSZ-5处理0.640.670.700.740.74R值0.7270.6910.6420.6270.587XXX-4处理0.660.710.740.750.76R值0.7500.7320.6790.6360.603XGC2-9处理0.650.690.710.740.75R值0.7390.7110.6510.6270.595CK2处理0.630.670.710.720.73R值0.7160.6910.6510.6100.579CKI对照0.880.971.091.181.26表3 拮抗细菌对棉花黄萎病的抑制作用（划线法）Table 3 Inhibition of 4 strains of antagonistic bacteria against V. dahliae by drawing-line method2.2.2.2 杯碟法测定结果 测定结果（表4）表明，XSZ-5菌株培养液对各菌株均有较好的抑制效果，抑制率均在70%左右。各供试菌株在含有XSZ-5活菌液的PDA培养基上均生长极为缓慢，表现出明显的拮抗作用。根据统计软件进行方差分析及差异显著性比较，XSZ-5菌株在不同菌量处理间菌丝生长差异显著，抑制率随菌量的增加而提高。WW3菌株在含有2000μl和10μl的XSZ-5活菌液的处理对菌丝生长的抑制率分别为78.33%和68.44%，且差异不显著。XSZ-5菌株对HF菌株的抑制率高于对WW3的抑制率，但各浓度间差异不显著。处理TreatmentsWW3HF菌落直径Diameter（cm）抑制率Inhibitionrate（%）菌落直径Diameter（cm）抑制率Inhibitionrate（%）CK3.33Aa—3.83Aa—2000μl1.27Bb78.331.17Cc84.98500μl1.30Bb77.191.23BCc83.07100μl1.37Bb74.521.47BCb75.4010μl1.53Bb68.441.67Bb69.01表4 不同浓度XSZ-5培养液对黄萎病菌生长的影响Table 4 Inhibitory effects of different concentration of XSZ-5 strain cultural liquid against V. dahliae对以上3种拮抗真菌菌株进行了培养观察。在PDA平板上，ZGC1-1菌落生长呈放射状，浅褐色，孢子生长迅速，覆盖整个平板底部；显微镜下观察发现，菌丝有隔膜，分生孢子梗顶部膨大形成顶囊，顶囊表面生出小梗，自小梗顶端形成具有串珠状的分生孢子（图1）；ZZY-3菌落质地为气生菌丝发达，菌丝致密菌落底部有辐射状皱褶条纹，孢子产生多，菌落颜色为黄色，分生孢子梗顶部膨大形成顶囊，顶囊表面生出小梗，自小梗顶端形成串珠状的分生孢子，分生孢子串生；ZXC-9菌落气生菌丝发达，菌丝亦生长致密，产孢多，底部有辐射状皱褶条纹，菌落颜色为深绿色。分生孢子梗顶端不膨大，经多次分枝，产生几轮对称或不对称小梗，小梗顶端产生成串的青色分生孢子，有些孢子梗形如扫帚（图2）。根据以上特征，参照真菌分类手册，将菌株ZGC1-1和ZZY-3初步鉴定为曲霉属真菌（Aspergillus sp.）；菌株ZXC-9初步鉴定为青霉属（Penicillium sp.）。图1 两种棉花黄萎病菌拮抗真菌的形态特征Figure 1 Morphology of two species of antagonistic fungi against V. dahliae通过室内平板对峙复筛试验表明，3株真菌菌株ZXC-9、ZZY-3、ZGC1-1和4株细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4、XGC2-9对于棉花黄萎病菌均具有很强的抑制作用。经连续10代的转移培养，3种拮抗真菌菌株对棉花黄萎病菌的抑制效果仍保持稳定，其中以第7天的抑制作用最为明显，抑制率分别为66.58%、68.30%和76.90%。而4种拮抗细菌菌株XZY-6、XSZ-5、XXX-4和XGC2-9，与生防菌枯草芽孢杆菌BS菌株的防治效果相比也无显著差异。处理5天后，病原菌菌株向各拮抗细菌方向生长缓慢，各菌株均有明显的抑菌带出现。杯碟法测定结果表明，其中的XSZ-5菌株培养液对两种病原菌菌株均有较好的抑制效果，抑制率均在70%左右，是筛选出的各拮抗细菌中效果最好的一种。目前生产上对于棉花黄萎病的防治，由于缺乏高抗丰产品种和有效化学药剂，生物防治被认为是一种具有发展潜力的重要防治途径[18]。本研究从安徽主要棉区棉花根围土样中筛选出了对棉花黄萎病菌具有较好拮抗效果拮抗微生物，为研制开发防治棉花黄萎病的新型生防制剂提供了基础和试验依据，对于棉花黄萎病的综合防治以及减少环境污染，减轻棉花黄萎菌的抗药性，促进可持续治理都具有重要意义。关于这些生防菌的鉴定、抗菌活性成分测定、盆钵试验、根际定殖力以及田间试验还需要进一步的试验研究。

开封市为河南省历史上的重要植棉基地，1998年以来抗虫棉在开封市的大面积种植，棉铃虫的发生防治已成为开封市棉花生产的一个次要害虫，而棉花枯、黄萎病却为影响开封市棉花产量及品质的两种重要病害。特别是近年来，由于气候、栽培管理、品种等因素的综合影响，棉花枯、黄萎病在开封市的发生呈逐年上升的趋势，并严重制约着开封市的棉花的优质高产。为了克服群众在防治这两种病害的恐惧心理，甚至放弃种植的现状，我们进行了大量的发生情况调查和防治探索，为开封市在生产上找到了一些有效的防治措施和方法，并指导群众进行大面积的应用，收到了较好的效果。通过多年来的大面积调查，认为生产上导致棉花枯、黄萎病偏重发生的主要因素有3种。由于枯、黄萎病菌寄主范围广，适应性强，病原菌很难根除等特点。连作棉田，土壤中、病残体等含有大量病菌，非常有利于病害的发生。据调查，相同品种在连作2年病株率增加56.2%，死株率增加5.1%，连作3年病株率增加67.5%，死株率增加7.9%。目前开封市大面积种植的抗虫棉品种如鲁棉21、欣抗3号、欣抗4号、丰抗6号、豫棉19等对枯黄萎病都有一定的抗性，但大多品种对枯萎病抗性较好，对黄萎病抗性较差，没有一个兼抗枯黄萎病的品种。据调查，近年来开封市枯萎病为中偏轻发生，而黄萎病为中度或中度偏重发生，病株率枯萎病一般为3%～7%，而黄萎病为12%～52%。因此，根据病害的发生特点，选用抗病品种，制定合理的防治措施，是病害防治的关键。开封市大部分土壤属砂壤土，漏水漏肥现象较重。相同条件下，土壤肥力不足的地块病害明显加重，而底肥充足特别是磷钾肥充足的棉田抗病性明显增强。据调查，一般亩施优质农家肥2000kg、饼肥50kg（混合堆沤10～15天，充分腐熟），专用复合肥（其氮磷钾含量为1：1：1.5，并含有适量硼、锌肥）50kg，比单用复合肥的病株率下降30%～50%。棉花枯、黄萎病虽说是棉花上没有办法根治的两种病害，但结合影响病害发生的主要因素制定简单、合理的防治方案进行大面积推广，仍收到较好的防治效果，有效的减少产量损失。防治配套措施为：近年来，棉农很少使用硫酸脱绒，一般选用包衣种子。据调查，进行硫酸脱绒后10kg种子用25%的多菌灵粉剂0.2kg或20%的灵福合剂0.2～0.3kg加入适量的细土拌种后进行播种，比包衣种子的棉花病株率下降17%～23%。开封市秋作物主要有棉花、花生、玉米、大豆、西瓜等，我们强调以棉花—小麦—玉米的栽培模式进行轮作。据调查，比其他轮作模式病株率下降20%～40%。根据开封市病害的发生特点，在枯、黄萎病特别是黄萎病发生严重的地块，推荐种植晋棉38、欣抗3号、欣抗4号、豫棉21等，在枯、黄萎病特别是枯萎病发生较重的地块推荐使用鲁棉21、丰抗6号、豫棉19等。棉田基肥我们强烈推荐农户亩施优质农家肥2000kg与饼肥50kg（混合堆沤10～15天，充分腐熟），专用复合肥（其氮磷钾含量为1：1：1.5，并含有适量硼、锌肥）50kg，最低是饼肥50kg与专用复合肥50 kg。棉苗染病前和染病初期，喷施叶面肥，增强营养，特别是棉花的蕾铃期，要及时补充营养，可提高棉株的抗病能力。如遇大雨，要及时排涝、中耕松土，可非常有效的减轻枯、黄萎病的发生程度。枯萎病盛发期是在棉花现蕾前后即开封市的6月中下旬，可在6月上中旬用OS施特灵加3%广枯灵500倍液或40%乙蒜素20～30ml加磷酸二氢钾100g，每7～10天喷施一次，连喷2～3次；黄萎病的盛发期在7、8月棉花花铃期，由于棉株较大，防治较难，防治时机在7月中下旬，用上述药剂及方法，间隔7～10天再喷一次。

苹果霉心病是近年来苹果果实上发生的一种重要病害。苹果霉心病又称苹果霉腐病、苹果心腐病，是苹果果实生长前期、采收前、贮藏期的主要病害之一，该病一般发生在果心部位，严重时可造成心室周围果肉腐烂，甚至烂到果皮下，严重影响了果农的经济收入。苹果霉心病主要是花期侵染。病菌在苹果枝干、芽体等多个部位存活，也可在树体上及土壤等处的病僵果或坏组织上存活，第二年春季开始传染。病菌随着花朵开放，首先在柱头上定殖，落花后，病菌从花柱开始向萼心间组织扩展，然后进入心室，导致果实发病。果实一般在贮藏期表现出来。在苹果霉心病防治上因群众不能够掌握住关键的防治适期，即花前、谢花后半月内的药剂防治，造成病菌的大量传播侵染，造成苹果霉心病发生重。为了更好地掌握苹果霉心病防治技术，从2005年开始，本站对苹果霉心病防治进行了系统的研究，具体研究如下：2005年，在陈村乡鱼池村进行了花期喷药防治红富士品种苹果试验。药剂主要有70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%多菌灵300倍液、50%甲霜铝铜300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液、70%百菌清300倍液，对照喷清水，共9个处理，每个处理喷5株树。喷药日期为花期4月20日和4月25日2次。仔细喷洒花朵，尽可能不漏喷。果实9月10日采收，土窑洞贮藏95天，2005年12月15日各处理剖果600个，调查各处理心腐果率。试验设在陈村乡南庄村，共设6个试验处理，即70%甲基托布津、大生M-45、菌毒清、扑海因、特谱唑及喷清水对照药液浓度同花期用药，品种为红富士。2006年为5月3日终花期喷药，9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。共设6个试验处理，即70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液及喷清水对照，品种为红富士。喷药时间为4月22日花期和5月5日终药期共两次喷药。9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。2005年花期喷甲基托布津为1.5%，大生为0.33%，菌毒清为1.83%，多菌灵为1.5%，甲霜铝铜为1.33%，扑海因为0.83%，特谱唑为0.5%，百菌清为0.67%，清水对照为6.83%。表明花期喷上述药液2次，对防治果实心腐烂果均有较好效果，以80%大生300倍液防效最好。2006年终花期喷药甲基托布津500倍液为3.17%，大生300倍液为2.17%，百菌毒清300倍液为1.67%，扑海因1000倍液为1.83%，特谱唑1000 倍液为1.5%，喷清水对照为7.17%。试验与2005年花期防效相比，终花期防效稍低于花期防效。在6种试验药剂中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。2006年花期加终花期两次喷药，甲基托布津500倍液为0.83%，大生300倍液为0.0%，百菌毒清300倍液为0.33%，扑海因1000倍液为0.5%，特谱唑1000 倍液为0.5%，喷清水对照为6.33%。在6种试验药中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）备注170%甲基托布津500倍液60091.5280%大生300倍液60020.33350%菌毒清300倍液600111.83450%多菌灵300倍液60091.5550%甲霜铝铜300倍液60081.33650%扑海因1000倍液60050.83712.5%特谱唑1000倍液60030.5870%百菌清300倍液60040.679喷清水对照（CK）600416.83表1 2005年花期喷药防治苹果霉心病效果序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）花期+终花期终花期花期+终花期终花期1甲基托布津300倍液6005190.833.172大生300倍液60001302.173百菌清300倍液6002100.331.674扑海因1000倍液6003110.51.835特谱唑1000倍液600390.51.56清水对照（CK）60038436.337.17表2 2006年花期+终花期和终花期喷药防治苹果霉心病效果通过多年的防治试验示范，我们认为采用以下的综合防治措施，可收到较好的防治效果。3.1.1 清除病原 苹果采摘后清除果园内的病果、病叶、病枝、丛生的杂草，刮除树体病皮，并带出果园集中处理。3.1.2 科学管理 增施有机肥料，增强树势，提高植株抗病性；合理灌水，及时排涝，保持适宜的土壤含量，防止地面长期潮湿；科学修剪，建造合理的树体结构，保持果园通风透光良好，可有效地控制或减少霉心病的发生。采收时对田间发病较重的果实，应单存单贮。采收后24h内放入贮藏窖中，窖温最好保持在1～2℃。一般10℃以下，发病明显减轻。花前和谢花后7～10天是防治苹果霉心病的两个关键时期，有效药剂为80%大生、扑海因、多抗霉素等。3.2.1 芽前用药 苹果发芽前或花芽萌动期用3～5波美度石硫合剂+0.3%五氯酚钠，40%福美砷100倍防治。3.2.2 花前加谢花后7～10天用药，提高防治效果 药剂为：80%大生、70%甲基托布津300倍液、50%扑海因可湿性粉剂1500倍、50%退菌特可湿性粉剂600倍、70%代森锰锌可湿性粉剂500倍，可以有效防治霉心病，还能兼治轮纹斑、斑点落叶病。苹果霉心病是由霉心和心腐2种症状构成，其中霉心症状为果心发霉，但果肉不腐烂，不影响果实食用价值和商品价值，心腐症状不仅果心发霉，靠近果心的果肉也由里向外腐烂，影响食用甚至无食用价值，这种症状严重影响果品的经济效益。通过以上试验，可以看出，以花期加终花期喷药防治苹果霉心病效果最好，其次为花期两次喷药，终花期喷药防效相对差一些。但是3种防治方法对苹果霉心病均有较好防效。

开封市为河南省重要的沿黄稻区，由于品质优经济效益高，种植面积逐年扩大。近年来，由于多种因素的影响，水稻条纹叶枯病在沿黄稻区发生普遍，为害逐年加重。一般发生田，病丛率在10%～30%，严重地块高达80%以上，造成水稻秧苗的“假枯心”或大片的“黄化枯死”，发生后期的“假白穗”，严重挫伤了稻农的种植积极性。为了从根本上探明水稻条纹叶枯病连年偏重发生的原因，确定最佳的防治时机及防治方法，有效指导群众开展科学防治，近年来，我们从水稻的苗床期开始开展了系统观察和防治对比试验，收到了显著的防治效果。据调查，近年来，开封市麦田一代灰飞虱发生数量较往年有明显上升，且带毒率高，是造成苗床秧苗“假枯心”主要根源，而大田分蘖期的感病以灰飞虱第1代成虫第2代若虫传毒为主，表现症状为“黄化枯死”。而穗期出现的“假白穗”是本地第3、第4代灰飞虱传毒所致，但以秧苗期、分蘖期发病最重，产量损失大。一般说来，第一代灰飞虱发生数量越大，传毒率高，条纹叶枯病的发病范围越广，发病程度越重，发病一定重，否则，较轻。从近几年开封市几种主要水稻品种发病情况调查对比看，不同的种植品种间病情有明显差异。主栽品种豫粳6号系列为高感病品种，其次为黄金晴。津稻1007、豫粳7号、郑稻18、原稻1号较抗条纹叶枯病。糯稻系列特别是米粒较长的糯稻品种一般不发病或很少发病。发病初期特别是秧苗期的发病没有引起群众的重视，即使个别群众及早用药，由于大面积用药偏晚而造成相互传毒危害，防治效果差。据系统观察，水稻从发芽到分蘖均为条纹叶枯病的易感病期。一般苗龄越小越易感病。近年来由于种种原因开封市黄河放水拖后，造成群众抢水播种，导致大部分地块的易感期与灰飞虱成虫转移高峰期相遇，大大增加了传毒感病的机会。从以上影响水稻条纹叶枯病的发生因素综合分析，制定了开封市的最佳防治时机：一是秧苗期即开封市的5月底至6月上旬，二是移栽后1周，即开封市的7月上中旬。防治水稻条纹叶枯病应采取“治虫防病”的防治策略，防治方法以农业防治为基础，以化学防治为主的“一看，二早，三连片”的防治方法，即系统观察、早防治、组织群众开展大面积连片统防，把灰飞虱消灭在产卵、传毒之前。3.1.1 种植抗（耐）病品种，以降低为害程度。3.1.2 由于稻飞虱有趋向狗尾草等杂草上取食产卵的习性。因此，及时铲除路边、田间杂草，可有效减少虫源，降低传毒机会。同时大田底肥要充足，特别是要增施磷钾肥，水要能灌能排，秧苗要合理密植，每墩最多3～4株，以确保秧苗的健壮生长，增强抗病能力。3.2.1 秧苗田 以治虫为主，选择用药为25%扑虱灵60g/667m2（噻嗪酮）或40%毒死蜱100ml/667m2或5%的锐劲特30～40ml/667m2，加入2%宁南霉素（菌克毒克）50～100g/667m2，分别在5月底至6月初、移栽前2～3天，各喷打一次，有显著的治秧苗、保本田的防治效果。3.2.2 大田防治 水稻移栽后7～10天，即水稻进入返苗后的分蘖期，一旦发现病叶要立即用上述药剂，同时加入促根、壮苗的植物生长调节剂如用天丰素、复硝酚钠等，以增强水稻的抗病虫能力。要每隔5～7天连防2～3次，可达到理想的防治效果。2006～2007年调查，系统防治田比群众自防田防效提高87.3%，病株率下降94.8%。

辣椒病毒病又名辣椒花叶病，是辣椒生产的主要病害之一，近年来在三门峡地区发生日趋严重。发病田块一般减产10%～30%。花叶型初现明脉轻微褪绿或现浓、淡绿相间的斑驳，全株叶片褪绿，继续发展则叶面皱缩畸形，或形成线形叶，果实变小，植株严重矮化；黄化症状呈上升趋势，表现为叶色均匀黄化或黄色斑驳，植株矮化或矮化不明显；坏死型主要表现为枯顶症状，病株部分组织变褐坏死，植株生长点呈水渍状枯死，叶片黄化，随后叶片逐渐脱落，在叶片上，产生黄绿相间的斑驳或大型黄褐色环斑；畸形丛枝型的植株节间缩短，幼叶狭窄或呈线状，叶面皱缩，植株上部叶丛生，呈丛簇状，重病果面有深绿、浅绿相间的花斑和疣状凸起，果面凸凹不平，病果易脱落；易导致落叶、落花、落果，病株严重矮化，叶小而少，株小。果实常出现黄绿相间的花斑或黄色环斑、畸形，易腐生其他杂菌而烂果，严重影响辣椒的产量和品质。主要为前两种。在辣椒上，烟草花叶病毒和马铃薯X病毒引起系统花叶症状，烟草花叶病毒的不同株系分别引起系统花叶、系统环斑和条斑症状。黄瓜花叶病毒寄主范围非常广泛，毒源植物十分普遍。在田间主要靠蚜虫飞迁传毒，主要种类有桃蚜、萝卜蚜和瓜蚜等。种子和土壤中的病残体不能传播，摩擦传毒也不重要。烟草花叶病毒的主要初侵染源是土壤中的病残体，而带毒种子和卷烟或旱烟不是主要的初侵染源。在田间主要通过田间操作接触传播。马铃薯X病毒主要毒源是马铃薯，主要靠摩擦传播，不能通过蚜虫传毒，种子和土壤中的病残体也不能传播。辣椒病毒病发生及轻重与病毒类型、环境条件、栽培技术、品种抗病性有密切关系。栽植适龄壮苗，合理密植，早期防蚜等综合防治措施可以有效地减轻辣椒病毒病。在早春采用薄膜覆盖等提高地温和保湿防风的措施，秧苗健壮，抗病力增强，可使辣椒不发病或发病轻。而不覆盖的辣椒病毒病较重。定植健壮、适龄的幼苗比弱苗、老龄苗生长好，病毒病轻。重茬地发病重，轮作发病轻。辣椒病毒病的发生还与邻茬有关，辣椒地块的邻茬为番茄则发病重。植株生长茂密、徒长、通风不良的田块发病亦重；辣椒与茄科作物连作、移栽偏晚、地势低洼、土壤贫瘠、缺肥的田块，均可加重病毒病的发生。肥水充足，管理水平高，辣椒生长旺盛，病毒病发生较轻；反之发生较重。黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒与蚜虫的发生情况关系密切，冬季高温干旱时，蚜虫等传毒介体发生多，扩展速度快，花叶和畸形等类型辣椒病毒病发生早，病害扩展速度快，为害严重。但枯顶型病毒病往往在田间湿度大时发生较多，传播较快；烟草花叶病毒和其他多种植物病毒可以经接触及伤口传播，通过整枝打杈等农事操作传染。新育成的品种如农大21号、农大22号、中椒5号、津椒3号均是抗病的优良品种。3.2.1 种子消毒 用10%硫酸三钠溶液浸种20～30min，洗净后催芽，可防治烟草花叶病毒感染。3.2.2 从无病株上采种，携带烟草花叶病毒的种子可用10%磷酸三钠溶液浸种30min，清水洗净后播种 育苗地要疏松肥沃，清除病残体，并适当早播和适当稀播。在满足幼苗对营养和水分等要求的前提下，实行昼促夜控的苗床温度管理，培育茎秆粗壮，具12～14片叶和50%以上植株现蕾的壮苗，并注意及时防治蚜虫。这样的适龄壮苗定植后一周即可转青，而且封垄早，生长健壮，抗病力强。3.2.3 营养钵育苗在育苗期间，采用塑料钵育苗 把调配好的营养土装入钵内，每钵播种3粒种子。保证成活两株幼苗，然后带钵土定植。这种方法一可减少分苗假植程序，节省用工；二可自种子出土后，就有充足的营养面积，保证幼苗粗壮；三可防止造成根部伤口，减少病毒入侵机会。3.2.4 苗龄不宜过长，应控制在70～80天。定植苗株高与植株横径相近，控制在10～15cm，具5～6片真叶。株高10～15cm时，茎基部直径应达0.5～0.6cm。叶片宽、厚、平、绿，茎尖嫩壮。幼小根系发达白嫩。为防止病毒病或减轻病毒病发生，将单株栽培习惯改为在分苗时就进行双株分苗假植，尔后双株定植，每亩栽种3000～3500墩。双株法是减轻病毒病的有效措施。采用大小垄密植栽培，一般大垄宽为50～53cm，小垄宽22～33cm，每亩4500～5000穴，每穴栽2株。春季气温低，垄作和小水灌溉比平畦和大水漫灌地温高，并且土壤疏松利于发根，提早封垄，雨季利于排水。夏季高温炎热，密植能够较早地遮严地面，降低地温和保持土壤水分，有利于植株生长，不利于病毒病发展。3.4.1 采用配方施肥技术，施足基肥。3.4.2 覆盖地膜，适当提早定植 要求秧苗株型矮而壮实，在第一分杈具有花蕾时定植为宜。3.4.3 与玉米、菜豆等高秆作物间作，避免强光高温，可有效防止病毒病。注意轮作换茬，精细整地，施足基肥，增施磷、钾肥。露地栽培可在定植时铺地膜或加盖小拱棚，并适度蹲苗，促进发根。生长前期避免大水漫灌，浇水后及时中耕，力争做到早定植，早生根，早结果，在发病盛期到来之前已花果满枝。结果期不能缺水缺肥，以防早衰。搞好田园卫生，及时清除田间路边杂草，如酸浆、反枝苋、刺儿菜及藜等，以减少病毒来源。3.5.1 苗期及生长期要及时喷药治蚜 可用2.5%溴氰菊酯乳剂2000～3000倍液，或20%速灭杀丁乳剂2000～3000倍液，或2.5%天王星乳油3000倍液，喷洒注意喷嘴对准叶背，将药液尽可能喷射到蚜虫体上。药剂有50%辟蚜雾可湿性粉剂或2.5%溴氰菊酯乳油2000～3000倍液等。3.5.2 应用弱毒性病毒进行人工免疫可减轻病毒病害，如烟草花叶病毒弱株系N14防烟草花叶病毒，烟草花叶病毒卫星核糖核酸制剂S52和S54防烟草花叶病毒，但必须在辣椒感染自然界强株系之前接种上弱毒性病毒。接种方法主要有两种：一种是人工摩擦或高压喷枪接种，苗龄在1～3叶期为宜；另一种是浸根接种，当幼苗2叶期进行第一次假植时，将幼苗拔出洗净根部后立即浸入疫苗液中5～10min。疫苗液的浓度一般为100倍液（S52和S54）和1000倍液（N14），详见产品说明。另外，也可喷洒NS-83增抗剂100倍液，定植前后各喷1次，还可在定植前、缓苗后及盛果期各喷1次0.1%硫酸锌溶液，都有一定的防病作用。3.5.3 发病始期喷施病毒A800倍液+高锰酸钾1000倍液+0.3%硫酸锌，或用叶康或小叶敌300倍液。注意用药时每隔7天喷1次，连喷3次，才能收到良好效果。3.5.4 设置生物屏障在进行定植的时候，有计划地栽种4行辣椒间种1行玉米，使玉米成为高温季节对辣椒进行遮光降温的生物屏障，降低病毒病的发生，并从栽培玉米中得到一定效益。3.5.5 钝化剂和微肥的应用 用500倍的AV-2或100倍的豆浆释液或100倍的豆制品浆水，从4叶期开始每隔10～15天叶面喷布1次，共喷3～5次，可有效的减轻病毒病的为害。锌对控制TMV侵染有明显效果，常规用量为1‰的硫酸锌水溶液，每亩用75～100kg稀释液喷布叶面，喷2～3次。

21世纪是环保的世纪。随着环境保护呼声的日益高涨，高毒农药的大量使用对农业生态及生态环境造成的负面影响已引起世界范围的广泛关注，以高效，低毒农药逐步替代传统的高毒农药是农药发展的必然趋势。植物源农药可在环境中迅速分解，对环境无任何影响，是符合环境保护，农业持续发展方向的[1]。藜芦（Veratrum nigrum L.），问荆（Equisetum arvense）多年生草本植物，据《神农本草经》和《本草纲目》记载，全草入药，具有清热，止咳，祛痰等功效，在中药学上有广泛的用途[2～3]。黄瓜枯萎病（Fusarium oxysporan）又叫萎蔫病，属世界性病害，在黄瓜的整个生长期都可发病，轻者减产10%～20%，重者达30%以上，是保护地和黄瓜生产的重要病害之一[4]。本实验就问荆和藜芦的甲醇提取物对黄瓜枯萎病的病原菌抑制作用进行了室内测定，旨在为开发出一种经济、安全、有效的新型杀菌剂提供理论依据。1.1.1 供试样品 试验所用问荆、藜芦采自山西省庞泉沟自然保护区，将采集的植物材料洗净后在室内阴干（约25℃），放入恒温箱内（40～45℃）烘干，磨碎，过60目筛，备用。1.1.2 供试菌种 黄瓜枯萎病菌，由山西农业大学农学院植物病理实验室提供。1.2.1 问荆、藜芦提取物的制备 分别准确称取问荆、藜芦全株干粉50g，装入500ml小烧杯内，加入干粉5倍量的有机溶剂甲醇，室温下（30±2）℃浸泡3～5天后，过滤并浓缩至稠膏状，称取一定的量，并依次配成实验所需的浓度。1.2.2 抑菌活性测定 生长速率测定法[5]，用打孔器取6mm菌落边缘生长旺盛的菌种，放在加药的PDA平板上培养，以培养基内加等量无菌水作对照，每次重复3次，置25℃下培养。用十字交叉法测每个菌落的直径，以其平均值代表菌落的直径，以下式求出抑制菌丝生长率：抑制菌丝生长率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.6）×100%将问荆、藜芦甲醇提取物配制成浓度为2mg/kg的溶液进行生物活性测定（所有生物活性测定对照均为1%吐温80溶液）。由表1可以看出，两种植物的甲醇提取物对黄瓜枯萎病的病原菌均有明显的抑制作用，问荆的抑制率达到57.8%，藜芦为59.1%。同时与对照相比，处理的菌丝在培养皿中出现消减，变粗等现象。植物提取物菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate72h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate120h抑制率Inhabitingrate问荆Equisetumarvense2.4756.503.6057.804.2754.00CK4.90—7.70—8.80—藜芦VeratrumnigrumL.1.9859.102.8154.003.8151.00CK3.82—5.4—7.15—表1 问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhabiting of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporum由表1可以看出问荆、藜芦甲醇提取物对病原菌都有明显的抑制作用，为了进一步确定其生物活性，将两种植物甲醇提取物稀释成5个不同浓度（4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.25mg/kg），对黄瓜枯萎病的病原菌进行测定，分别求出毒力回归方程及抑制中浓度（EC50），结果见表2、表3。两种植物提取物对黄瓜枯萎病菌的抑制作用都是随着浓度的增大，抑菌活性逐渐增强。且浓度为4mg/kg时问荆和藜芦的抑制率分别达到74.0%和79.2%，具有很强的抑菌作用。同时，随着时间的推移，抑菌效果逐渐降低。植物提取物浓度（mg/kg）Concentration菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate72h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate120h抑制率Inhabitingrate问荆Equisetumarvense藜芦VeratrumnigrumL.4.0001.0274.001.9572.202.6570.12.0001.6257.702.9857.103.8056.81.0002.1244.203.8045.104.8344.90.5002.5732.004.7031.205.6335.70.2502.8324.904.8529.706.5525.1CK3.75—6.87—8.72—4.0001.7279.201.8873.502.4769.702.0001.9059.702.7555.503.4553.901.0002.3246.603.3543.104.3539.300.5002.4343.203.6037.904.7233.300.2502.6037.903.9530.605.0827.50CK3.82—5.43—6.78—表2 不同浓度问荆、藜芦甲醇提取物对枯萎病菌菌丝生长的抑制作用Table 2 Inhabiting of the different concentration of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporan处理Treatment毒力方程RegressiveequationEC??50相关系数r问荆EquisetumarvenseY=1.6167+1.0975X1.2100.9918藜芦VeratrumnigrumL.Y=2.0920+0.9915X0.8750.9644表3 问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌的毒力Table 3 Virulence of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporan抑菌剂主要是通过抑制微生物细胞膜的膜透性或某些酶作用从而抑制代谢过程发挥作用的。具体来说，是抑制新陈代谢中某些酶或蛋白质的合成或活性发挥，或者抑制核酸的合成，也有的是通过改变细胞透性，如干扰细胞壁的组成物质合成等，也有许多抑菌剂则是作为代谢拮抗物影响代谢的进行而发挥抑菌作用的，一般说来抑菌剂的分子结构特征与生物膜脂分子结构特征愈相似，则愈易进入菌体从而更易发挥抑菌作用[6～7]。许多植物组织具杀菌或抑菌作用的可挥发性物质，如单萜、倍半萜、醛类、酯类、酸类、醇类和一些芳香类物质。它们几种或多种共同作用使得植物组织具有较强抵御病菌侵入能力[8]。本实验研究表明问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌确实有较好的抑制作用，其抑制中浓度EC50分别为1.21mg/ml，0.857mg/ml。从保护环境的角度出发，问荆、藜芦作为一种生物农药，具有良好的开发前景和应用价值。至于问荆、藜芦粗提物对其他病菌的活性，及其对病原菌的作用方式和作用机制均有待于进一步的探讨。