苹果霉心病是近年来苹果果实上发生的一种重要病害。苹果霉心病又称苹果霉腐病、苹果心腐病，是苹果果实生长前期、采收前、贮藏期的主要病害之一，该病一般发生在果心部位，严重时可造成心室周围果肉腐烂，甚至烂到果皮下，严重影响了果农的经济收入。苹果霉心病主要是花期侵染。病菌在苹果枝干、芽体等多个部位存活，也可在树体上及土壤等处的病僵果或坏组织上存活，第二年春季开始传染。病菌随着花朵开放，首先在柱头上定殖，落花后，病菌从花柱开始向萼心间组织扩展，然后进入心室，导致果实发病。果实一般在贮藏期表现出来。在苹果霉心病防治上因群众不能够掌握住关键的防治适期，即花前、谢花后半月内的药剂防治，造成病菌的大量传播侵染，造成苹果霉心病发生重。为了更好地掌握苹果霉心病防治技术，从2005年开始，本站对苹果霉心病防治进行了系统的研究，具体研究如下：2005年，在陈村乡鱼池村进行了花期喷药防治红富士品种苹果试验。药剂主要有70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%多菌灵300倍液、50%甲霜铝铜300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液、70%百菌清300倍液，对照喷清水，共9个处理，每个处理喷5株树。喷药日期为花期4月20日和4月25日2次。仔细喷洒花朵，尽可能不漏喷。果实9月10日采收，土窑洞贮藏95天，2005年12月15日各处理剖果600个，调查各处理心腐果率。试验设在陈村乡南庄村，共设6个试验处理，即70%甲基托布津、大生M-45、菌毒清、扑海因、特谱唑及喷清水对照药液浓度同花期用药，品种为红富士。2006年为5月3日终花期喷药，9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。共设6个试验处理，即70%甲基托布津500倍液、80%大生300倍液、50%菌毒清300倍液、50%扑海因1000倍液、12.5%特谱唑1000倍液及喷清水对照，品种为红富士。喷药时间为4月22日花期和5月5日终药期共两次喷药。9月20日采收，土窑洞贮藏100天，于2006年12月30日剖果，各处理均剖果600个，调查心腐果烂果率。2005年花期喷甲基托布津为1.5%，大生为0.33%，菌毒清为1.83%，多菌灵为1.5%，甲霜铝铜为1.33%，扑海因为0.83%，特谱唑为0.5%，百菌清为0.67%，清水对照为6.83%。表明花期喷上述药液2次，对防治果实心腐烂果均有较好效果，以80%大生300倍液防效最好。2006年终花期喷药甲基托布津500倍液为3.17%，大生300倍液为2.17%，百菌毒清300倍液为1.67%，扑海因1000倍液为1.83%，特谱唑1000 倍液为1.5%，喷清水对照为7.17%。试验与2005年花期防效相比，终花期防效稍低于花期防效。在6种试验药剂中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。2006年花期加终花期两次喷药，甲基托布津500倍液为0.83%，大生300倍液为0.0%，百菌毒清300倍液为0.33%，扑海因1000倍液为0.5%，特谱唑1000 倍液为0.5%，喷清水对照为6.33%。在6种试验药中以80%大生300倍液和百菌毒清300倍液的防效最好。序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）备注170%甲基托布津500倍液60091.5280%大生300倍液60020.33350%菌毒清300倍液600111.83450%多菌灵300倍液60091.5550%甲霜铝铜300倍液60081.33650%扑海因1000倍液60050.83712.5%特谱唑1000倍液60030.5870%百菌清300倍液60040.679喷清水对照（CK）600416.83表1 2005年花期喷药防治苹果霉心病效果序号试验处理剖果（个）病果数病果率（%）花期+终花期终花期花期+终花期终花期1甲基托布津300倍液6005190.833.172大生300倍液60001302.173百菌清300倍液6002100.331.674扑海因1000倍液6003110.51.835特谱唑1000倍液600390.51.56清水对照（CK）60038436.337.17表2 2006年花期+终花期和终花期喷药防治苹果霉心病效果通过多年的防治试验示范，我们认为采用以下的综合防治措施，可收到较好的防治效果。3.1.1 清除病原 苹果采摘后清除果园内的病果、病叶、病枝、丛生的杂草，刮除树体病皮，并带出果园集中处理。3.1.2 科学管理 增施有机肥料，增强树势，提高植株抗病性；合理灌水，及时排涝，保持适宜的土壤含量，防止地面长期潮湿；科学修剪，建造合理的树体结构，保持果园通风透光良好，可有效地控制或减少霉心病的发生。采收时对田间发病较重的果实，应单存单贮。采收后24h内放入贮藏窖中，窖温最好保持在1～2℃。一般10℃以下，发病明显减轻。花前和谢花后7～10天是防治苹果霉心病的两个关键时期，有效药剂为80%大生、扑海因、多抗霉素等。3.2.1 芽前用药 苹果发芽前或花芽萌动期用3～5波美度石硫合剂+0.3%五氯酚钠，40%福美砷100倍防治。3.2.2 花前加谢花后7～10天用药，提高防治效果 药剂为：80%大生、70%甲基托布津300倍液、50%扑海因可湿性粉剂1500倍、50%退菌特可湿性粉剂600倍、70%代森锰锌可湿性粉剂500倍，可以有效防治霉心病，还能兼治轮纹斑、斑点落叶病。苹果霉心病是由霉心和心腐2种症状构成，其中霉心症状为果心发霉，但果肉不腐烂，不影响果实食用价值和商品价值，心腐症状不仅果心发霉，靠近果心的果肉也由里向外腐烂，影响食用甚至无食用价值，这种症状严重影响果品的经济效益。通过以上试验，可以看出，以花期加终花期喷药防治苹果霉心病效果最好，其次为花期两次喷药，终花期喷药防效相对差一些。但是3种防治方法对苹果霉心病均有较好防效。

目前的机制解析工作集中在对QS转录调控的研究。利用pcoI：：lacZ的染色体融合报告菌株，通过转座子Tn5随机插入突变，获得了一系列QS系统的上游调控因子。GacS/GacA双因子调控系统正调控QS系统的表达，同时正调控抗生素2，4-DAPG、氢氰酸和蛋白酶等的产生。该系统位于生防相关性状表达的信号传递链上游（图1），对生防功能起到重要的调控作用。通过转座子随机突变，还得到rpoS基因等一系列QS系统的负调控基因，其调控机制及与生防能力的关系正在研究中。图1 Pseudomonas fluorescens 2P24中与生防性状相关调控因子作用模式图

哈密瓜细菌性果斑病（Bacterial Fruit Blotch，BFB）是由Acidovorax avenae subsp.citrullii，（Aac）引起的一种毁灭性的瓜类病害，该病菌已经成为了全球瓜类生产中巨大的威胁。中国至今已有12个省相继有该病的报道。目前，该病因其无免疫品种和特效的化学农药，轮作倒茬存在局限性等原因，有效防治该病仍然是一个难题。近几年已有人报道利用生物防治BFB来改变目前防治现状，但多以生防细菌为主（卢云等，2007；Fessehaie和 Walcott，2004），利用拮抗酵母防治瓜类细菌性果斑病国内外未见有报道。2006～2007年，本实验组从湖北武汉、新疆石河子、河南信阳等地采集不同植物叶片、土壤样品进行了酵母菌的分离，获得了463菌株。通过含菌平板测定拮抗性，表明有29个酵母菌菌株对Aac有拮抗作用，占总分离酵母菌株的6.3%，抑菌圈半径大于5mm的有13个。在温室盆栽试验中，将其中的13个酵母菌菌株的菌体悬浮液（1.2×108菌体/ml）分别喷雾接种于哈密瓜苗四叶期的植株上，24h后接种Aac菌体悬浮液（1.0×108cfu/ml），处理后的瓜苗放入温棚内，棚内温度为（32±2）℃，相对湿度大于90%。接种5天后调查各处理哈密瓜苗的发病情况。试验结果表明：菌株Y06109、Y07039和Y0709在哈密瓜子叶或第一片真叶上对BFB具有显著的防治效果。3株酵母菌处理的哈密瓜子叶发病率分别为33%、33%和76%，对照为96%，防效分别为65%、65%和21%。第一真叶发病率分别为14%、17%和10%，对照为96%，防效分别为80%、84%和90%。这些研究结果表明，拮抗酵母的一些种类或菌株对BFB具有一定的生防潜力。对于筛选出的具有抑菌作用的酵母菌株，将进一步测定其田间防病效果，并对其显著防效的拮抗酵母进行种类鉴定。

虽然应用化学杀菌剂在一定程度上可控制病害的发生，但目前已有越来越多的化学杀菌剂因“3R”现象（Resistance、Resurgence、Residue）而被禁止用于果蔬采后处理。因此，迫切需要寻求新的安全高效的防腐技术以逐步取代化学杀菌剂在果蔬防腐上的使用[1]，因而研究无公害采后病害防治措施势在必行。大量研究表明，植物内生菌除可以给植物提供所需要的营养物质及一些激素外，还参与植物的防卫功能，增强植物抗逆境、抗病害、抗动物危害的能力[2～4]。利用内生菌防治植物病害是个尚待开发的微生物新资源，植物学家、植物病理学家、微生物学家、生态学家及药物学家对此广泛关注和重视。黄皮[Clausena lansium（Lour.）Skeels]属芸香科（Rutaceae）亚热带常绿果树。原产华南，有1500多年栽培史。果实酸甜可口，风味独特，营养价值高且具有保健及药用价值，是深受人们喜爱的特产果品[5]。近年来，我国黄皮栽培面积不断扩大，产量逐年提高。但黄皮果实采后极不耐贮藏，在自然条件下极易变软腐烂，其中炭疽病是造成采后腐烂的重要原因之一，而极大地制约了黄皮果实的销售[6～8]。本研究拟对黄皮果实炭疽病病原菌的鉴定，并对无病果实果皮中存在的拮抗内生菌进行分离筛选，为黄皮果实炭疽病的生物防治打下基础。黄皮果实：黄皮病果来自院校市场，无病果实采自中国热带农业科学院试验场五队。1.2.1 黄皮果实炭疽病病原菌分离鉴定1.2.1.1 黄皮果实炭疽病病原分离、纯化与形态学观察 采用组织分离法对典型黄皮果实炭疽病病果进行病原菌分离、纯化，获得菌种，并进行单胞分离、纯化、保存备用。将纯化的菌种移至PDA平板上28℃恒温培养，记录病原菌的培养性状，显微观察菌丝体形态、孢子形态大小等。1.2.1.2 黄皮果实炭疽病病原致病性测定 将上述纯化的病原菌随机选取10个菌株在PDA培养基上培养7天后，采用刺伤和无伤两种方式进行致病性测定。每菌株刺伤和无伤接种时均接种5个果实，以无菌PDA培养基块接种为对照，重复3次，接种点用湿脱脂棉保湿24h后，将接种的病原菌和培养基清除，逐日观察发病情况。1.2.1.3 黄皮果实炭疽病病原菌鉴定 经分离纯化后获得的病原菌进行显微观察和采用病组织切片直接显微观察病原菌的形态特征，根据形态学鉴定其种类[6]。1.2.2 黄皮果实炭疽病拮抗内生菌筛选1.2.2.1 黄皮果实内生菌的分离纯化 将无病黄皮果实果皮剪成若干小块，经表面消毒与无菌水漂洗后，一部分组织块直接接种于PDA、NA和GSA培养基上，取剩余的材料1g加入10ml灭菌水研碎混匀，用50μl分别涂布于NA和GSA培养基上，28℃下恒温培养，逐日观察内生菌的生长情况，将不同形态的菌落及时转接到相应的斜面培养基上，并统一编号后于4℃保存备用。1.2.2.2 拮抗菌筛选 采用平板对峙法[9]进行对黄皮果实炭疽病病原菌具有拮抗活性的内生菌筛选。将培养7天的病原菌菌丝块（Φ=5mm）接种于PDA平板中央，采用十字交叉法在离菌块中心40mm处接种分离获得的内生菌，每菌株接种4点，以接种纯PDA培养基或NA培养基为对照，28℃下恒温培养3天后，分别测量对照及接种内生菌后的病原菌菌落直径、接种内生菌后的抑菌带宽度、显微观察接种内生菌后的病原菌边缘菌丝体及孢子的变化，计算平均抑菌率及平均抑菌带宽度、显微观察病原菌有无变化。1.2.3 拮抗菌鉴定 对5株具有强拮抗活性的内生菌进行鉴定。内生菌的培养特征、形态特征及生理生化特性测定采用东秀珠[10]的方法进行测定，试验结果参考《伯杰细菌鉴定手册》（第八版）[11]及《常见细菌系统鉴定手册》[10]鉴定其种类。2.1.1 黄皮果实炭疽病症状 黄皮果实感病初期，果皮出现水渍状褐色小点，后扩展为圆形、稍凹陷的褐腐状病斑，湿度大时病部表面产生橘红色孢子堆，果汁从病部裂口处溢出。2.1.2 病原菌培养特征及形态特征 经分离纯化，从病健交界处分离获得的病原菌基本表现一致的培养特征，在PDA平板培养基上，菌落初为白色，后变为灰白色，气生菌丝绒毛状，后期产生橘红色黏孢团。直接从黄皮果实病部的橘红色孢子堆镜检观察，分生孢子盘内产生大量褐色有隔刚毛，产孢细胞圆筒形，无色，分生孢子无色单胞，圆筒形，两端钝圆，内含物颗粒状，对分离纯化培养的病原菌进行镜检，菌丝无色，有隔，分生孢子无色，单胞，圆筒形，两端钝圆，大小9.5～16.7（13.6）μm×3.2～5.5（4.2）μm，具1～2个油球。分生孢子萌发后遇硬物则在芽管端部产生一褐色、近圆形或不规则形附着胞。2.1.3 病原菌鉴定 根据病原菌的形态特征、培养特性和致病性测定结果，参考有关文献[8，12～13]，将引起黄皮果实炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）。先后12批次从健康黄皮果皮组织上分离获得内生菌532株，其中真菌169株，占总分离物的31.77%；细菌363株，占总分离物的68.23%；但在整个试验中，未分离获得放线菌（见表1）。123456789101112合计百分比（%）内生真菌1212139181814171713101616931.77内生细菌35295616212828314323223136368.23内生放线菌00000000000000合计474169253946424860363247532表1 不同批次分离的内生菌数量2.2.1 拮抗内生菌的筛选 根据平均抑菌率及平均抑菌带宽度、显微观察病原菌菌丝体及孢子有无变化的测定结果看，分离获得的169株内生真菌对黄皮炭疽病病原菌均无拮抗作用，对内生真菌与病原菌交界处的病原菌进行观察，未发现病原菌菌丝体或分生孢子有异常变化。而在分离获得的363株内生细菌中，105株对黄皮炭疽病病原菌有不同程度的拮抗作用，占内生细菌的28.93%（见表2）。对峙培养3天后，5株内生细菌的平均抑菌率大于80%或抑菌带宽度大于10mm，分别为B98、B131、B232、B247和B294。拮抗活性无拮抗活性弱拮抗活性中度拮抗活性强拮抗活性菌株数25852485比例（%）71.0714.3313.221.38表2 内生细菌对黄皮炭疽病菌的拮抗活性5株内生细菌的菌落形态及经染色后观察的菌体形态见表3，生理生化特征见表4。依据参考文献《伯杰细菌鉴定手册》（第八版）[11]和《常见细菌系统鉴定手册》[1]，5菌株初步鉴定为：B98为荧光假单胞杆菌Pseudomonas fluorescens Migula，B131、B232、B247和B294均为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（Ehrenberg）Cohn。菌株菌落特征形状颜色边缘表面透明度可溶性色素革兰氏染色形态鞭毛染色芽孢运动性B98圆形淡黄色整齐光滑不透明黄绿荧光色素-杆状单根极生-+B131圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B232圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B247圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B294圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++表3 黄皮拮抗内生菌的培养特性及形态学菌株厌氧生长氧化酶接触酶明胶液化淀粉水解碳源利用D-葡萄糖L-阿拉伯糖D-木糖D-甘露糖柠檬酸盐葡萄糖产酸B98-+++-+++-++B131--+++++++++B232--+++++++++B247--+++++++++B294--+++++++++石蕊牛奶丙酸盐硝酸盐甲基红V-P反应pH值5.745℃生长吲哚产生H2S产生7%NaClB98还原、胨化++--+--++B131还原、胨化-+-+++--+B232还原、胨化-+-+++--+B247还原、胨化-+-+++--+B294还原、胨化-+-+++--+表4 黄皮拮抗内生菌的生理生化特征通过对病害症状的观察、病原菌的分离纯化、形态学鉴定及致病性进行测定，确定引起黄皮果实炭疽病的病原菌为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），该病原菌是造成黄皮果实腐烂的主要原因之一。通过对无病黄皮果实果皮组织中的内生菌研究表明，果皮中存在丰富的内生菌资源。大量的内生菌与黄皮的生长发育、抗病性等之间的关系有待进一步研究。通过对分离获得的内生菌与黄皮果实炭疽病病原菌（C.gloeosporioides）进行对峙培养，28.93%的内生细菌具有拮抗作用，可见在黄皮果实组织中存在对该病原菌有抑制作用的拮抗菌具有多样性，这可能是黄皮果实抗病力较强的重要原因之一，为开辟黄皮炭疽病的生物防治提供了重要的原材料，为黄皮的无公害生产打下了基础。

番茄营养丰富、酸甜可口、人们喜食、用途多、产量高，已成为蔬菜的主要品种。它的丰产与歉收，直接影响着市场的供需。近10年来由于保护地栽培，发展很快，引进番茄品种种类繁多，种植技术不断改进，生态环境也随之发生变化，促使新的病虫害种类不断出现，给番茄生产带来了新的问题。在2002～2003年，在北京的密云、延庆和大兴县大棚种植的番茄上发生了一种新的病害，受害番茄植株呈现失水萎蔫，后期植株干枯死亡，纵剖受害植株主茎，髓部呈现褐色腐烂坏死，导致全株凋萎干枯死亡。该病2002～2003年冬季在密云县发生，有212个大棚发病，品种为加西亚，平均受害株率达到100%，造成拔园毁种、绝产无收，给生产带来了惨重的损失。该病已经成为番茄生产上的一种潜在危险性病害。按Koch法则，从接种病株上，分离到原始接种细菌菌株。依此确认，该病是一种细菌性病害，暂称为番茄茎髓黑腐病。该病害与国内已知有发生记载的6种番茄细菌性病害：番茄青枯病[7]（Pseudomonas solamaearum）、番茄溃疡病[7]（Clavibacter michigabensis subsp.michigabensis）、番茄疮痂病[7，8]（Xanthomonas campestris pv.vesicatoria）、番茄斑点病[9]（Pseudomonas syrimgae pv.tomato）、番茄软腐病[7]（Erwinia carotovora subsp.carotovora）和番茄髓部坏死病[10]（Pseudomonas corruga）的受害症状和菌落形态特征不同。故认为该病是一种新的细菌性病害，本文对获得的22个菌株进行了病原菌的鉴定，结果报道如下：1.1.1 供试菌株 供试的22个菌株是2002～2003年从北京市的密云、延庆、大兴等地番茄上分离并纯化后获得的（表1），对照菌株为绿黄假单胞菌典型菌株PDDCC2848[Pseudomonas viridiflava（Burkholder；1930；Dowson 1939）]和边缘假单胞菌边缘致病变种典型菌株PDDCC3553[P.marginalis pv.marginalis（Brown）Stevens 1925]。1.1.2 供试植物 番茄品种加西亚和中蔬四号、烟草、马铃薯。1.1.3 培养基制备 KB固体培养基[1]、牛肉汁固体培养基[1]。1.2.1 病原菌的分离[4] 用灭菌解剖刀切取病株茎部，用75%酒精消毒2min，经无菌水冲洗后取髓部病组织置于小瓷皿中研磨，加无菌水浸泡10min，然后用接种环蘸取该组织液在KB培养基上划线。长出单菌落后用该培养基再划一次线使细菌纯化。纯化后用于致病性测定和病原菌的鉴定。1.2.2 烟草过敏反应[11，12] 将从各地分离获得的22个菌株和对照菌株（表1）在KB培养基上培养24h，以无菌水配制成细菌悬浮液，浓度为1×108cfu/ml，用注射针将细菌液从烟草下表皮注入叶肉细胞间[2]。选用未开花的烟草植株，用灭菌水作阴性对照。接种后，保持在25～28℃，相对湿度85%，日照16h条件下。24h后，调查过敏性反应。菌株号No.strain致病性Pathogenicity采集地点Location分离时间Timeisolated烟草过敏TobaccohypersensitivityPnt1+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt2+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt3+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt4+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt6+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt8+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt9+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt10+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt11+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt12+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt13+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt14+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt15+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt18+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt19+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt23+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt24+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt27+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt20+北京大兴（Daxing）2003-5-20+Pnt21+北京大兴（Daxing）2003-5-20-Pnt30+北京延庆（Yanqing）2003-9-2+Pnt31+北京延庆（Yanqing）2003-9-2-表1 番茄茎髓黑腐病菌株及致病性和烟草过敏1.2.3 马铃薯腐败[1] 选取新鲜无病而且较大的马铃薯块茎，将其表面洗净，在无菌条件下，用75%酒精表面消毒，超净工作台上风干。在无菌条件下，用灭菌牙签蘸取适量在KB培养基上培养24h的细菌，插入马铃薯中，随后将其放在24℃培养箱内，并且用不接菌的马铃薯作对照，调查马铃薯腐败情况。1.2.4 番茄上致病性测定 在温室培养的加西亚和中蔬四号上接种。用灭菌牙签蘸取适量在KB培养基上培养24h的供试细菌，包括对照菌株，插入枝条和茎的交界处，置于自然条件下，调查发病情况。1.2.5 鉴定方法 细菌的形态特性、培养特性、生理生化反应及碳源利用等项实验方法，主要参照《一般细菌常用鉴定方法》[1]、《植物病害研究方法》[2]、N.W.Schaad编著的《植物病原细菌鉴定实验指南》[3]、《植物病原细菌的分类与鉴定》[4]等书中的方法进行。2.1.1 病原菌分离 共获得了22株细菌（表1），纯化后用于致病性测定和病原菌的鉴定。2.1.2 烟草过敏反应 pnt21，pnt30和对照菌株3553注射部位表现过敏性枯斑反应（HR），这证明了其对植物有致病作用。试验结果见表1。2.1.3 马铃薯腐败 供试菌株均对接种马铃薯产生不同程度的症状。其中供试菌株pnt1、pnt2、pnt13、pnt14、pnt15、pnt21、pnt30、pnt31和对照菌株2848、3553均表现出明显的腐烂症状，其余菌株所接种马铃薯都出现水浸状。2.1.4 番茄上致病性测定 致病性测定试验结果见表1。2.2.1 病原细菌革兰氏染色 所有供试菌株革兰氏染色阴性。2.2.2 培养性状 供试的菌株在KB培养基上28℃培养箱里培养48h，形成圆形菌落，全缘，不透明，表面光滑，均能产生荧光。其中菌株pnt1～pnt19的菌落绿黄色，直径1～3mm；菌株pnt20、pnt21、pnt30和pnt31产生黄色菌落，黏稠状，微隆，直径3～5mm；pnt23、pnt24和pnt27为乳黄色菌落，黏稠状，隆起，直径1～2mm。2.2.3 生理生化性状 生理生化性状试验结果见表2～表4。2.2.4 碳源利用 碳源生长利用结果见表2～表4。项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt1～pnt19对照菌株（CKstrains）28483553P.f.biovarⅠKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Starchhydrolysis-（2、8、10、12）---[5]配糖体的分解EsculinHydrolysis-（11）+-耐盐性试验Salttolerance3%（1∶5%）3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity水渍状（1、2、13、14、15：+）++表2 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt1～Pnt19）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt1～pnt19对照菌株（CKstrains）28483553P.f.biovarⅠ酪氨酸酶测定Tyrosinasetest+（6、12、18、19）+-氧化酶Oxidase+-++[5]冰核测定Icenucleationactivity-（8、12-18未做）--3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（2-11、15、19）--烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity--+苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer---甲基红测定Methylred-+-过氧化氢酶Catalase+++硝酸盐的还原Nitrateredution-（2）---[5]3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction---+[5]蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose+（6、11-14、18、19）-+果聚糖的产生Levanformation++++[5]41℃生长Growthat41℃----[5]果胶溶解Pectinaseactivity+-+H2S的产生H2Sproduction---卵磷酸酶Lecithinasetest+（1-3、12、13）+++[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（1、2、4、19）++吲哚的产生Indoleproduction---吐温80的测定Tween80hydrolysis+（6、9、10、18）+++[5]明胶液化Gelatinliquefaction++++[5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose++++[5]蔗糖Sucrose++++[5]乳糖Lactose-（2、4、11）---[5]麦芽糖Maltose-（3、11-14）---[5]鼠李糖Rhamnose+（6、12、13、19）--山梨醇Sorbitol++++[5]肌醇Insoitol+++d[5]赤藓醇Erythritol+++d[5]丙酸Propionate-（1、11）--+[5]组氨酸Histidine++++[5]L-半乳糖L-Galactose++++[5]葡萄糖Gluconate++++[4，5]甘露醇Mannit++++[5]抗坏血酸Ascorbate---柠檬酸Citricacid+++续表2项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31对照菌株（CKstrains）28483553Pv.syringaeKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Hydrolysisofstarch-（21、31）---[5]配糖体的分解Esculinhydrolysis+（20、31）+-耐盐性试验Salttolerance3%（31：5%）3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity+（20：水渍状）++-[4]酪氨酸酶测定Tyrosinasetest++-氧化酶Oxidase-（20）-+-[4，5]冰核测定Icenucleationactivity+（20未做）--+[4]3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（31）---[6]烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity+（20、31）-++[4]苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer----[6]甲基红测定Methylred++--[6]过氧化氢酶Catalase++++[6]硝酸盐的还原Nitrateredution----[4]3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction---蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose-（21、30）-+果聚糖的产生Levanformation++++[3～5]41℃生长Growthat41℃----[4，5]果胶溶解Pectinaseactivity+-++[3，4]H2S的产生H2Sproduction----[6]卵磷酸酶Lecithinasetest-++d[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（20）++吲哚的产生Indoleproduction----[6]吐温80的测定Tween80hydrolysis++++[5]明胶液化Gelatinliquefaction++++[4，5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose+++d[5]蔗糖Sucrose++++[4，5]乳糖Lactose---+[3～5]麦芽糖Maltose---表3 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31对照菌株（CKstrains）28483553Pv.syringae鼠李糖Rhamnose-（31）--山梨醇Sorbitol++++[3，4，5]肌醇Insoitol++++[3，4，5]赤藓醇Erythritol+（20）+++[3，4，5]丙酸Propionate---d[4，5]组氨酸Histidine+++d[4，5]L-半乳糖L-Galactose+++葡萄糖Gluconate+++d[4，5]甘露醇Mannit++++[3，4，5]抗坏血酸Ascorbate----[5]柠檬酸Citricacid+++续表3项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt23、pnt24、pnt27对照菌株（CKstrains）28483553P.viridiflavaKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Hydrolysisofstarch+（24）---[5]配糖体的分解Esculinhydrolysis-+-耐盐性试验Salttolerance3%3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity水渍状+++[4]酪氨酸酶测定Tyrosinasetest++-氧化酶Oxidase+（24）-+-[3，4，5]冰核测定Icenucleationactivity-（24未做）--3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（27）---[6]烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity--++[4]苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer----[6]甲基红测定Methylred-（24）+--[6]过氧化氢酶Catalase++++[6]硝酸盐的还原Nitrateredution---3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction----[3～5]蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose+（24）-+果聚糖的产生Levanformation+++-[4，5]表4 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt23、pnt24、pnt27）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt23、Pnt24、Pnt27对照菌株（CKstrains）28483553P.viridiflava41℃生长Growthat41℃----[3～5]果胶溶解Pectinaseactivity+-+H2S的产生H2Sproduction----[6]卵磷酸酶Lecithinasetest-+++[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（24）++吲哚的产生Indoleproduction----[6]吐温80的测定Tween80hydrolysis+++-[5，6]明胶液化Gelatinliquefaction++++[4，5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose+++d[5]蔗糖Sucrose++++[4，5]乳糖Lactose---麦芽糖Maltose---鼠李糖Rhamnose-（27）---[3，5]山梨醇Sorbitol++++[3～5]肌醇Insoitol++++[5]赤藓醇Erythritol+（23）+++[5]丙酸Propionate---d[5]组氨酸Histidine++++[5]L-半乳糖L-Galactose+++葡萄糖Gluconate+++d[5]甘露醇Mannit++++[3，5]抗坏血酸Ascorbate---柠檬酸Citricacid+++续表4从表2～表4可以看出，供试菌株和对照菌株的试验结果存在不一致性。但在如下的试验中表现出相同的结果，超过41℃不能生长，严格好氧，对葡萄糖能氧化（OF试验）不能发酵，3%KOH拉丝，不产生吲哚，不产生硫化氢，在pH值5.0和pH值7.0下果胶凹陷，明胶液化、过氧化氢酶（接触酶）和葡萄糖酸氧化均为阳性；乙酰甲基甲醇测定（V.P.试验）、3-酮基乳糖的产生、苯丙氨酸脱氨酶和脱氮反应均为阴性。在淀粉水解、配糖体的分解、酪氨酸酶测定、耐盐性测验、甲基红测定、氨气的产生、尿素的测定、生长因素要求性的测定、氧化酶反应、冰核测定、卵磷酸酶测定等生理生化试验项目中结果不同。由表2～表4可知，各菌株均能利用木糖、葡萄糖、山梨醇、肌醇、甘露醇、组氨酸、柠檬酸、L-半乳糖、蔗糖；不能利用抗坏血酸。只有pnt1和pnt11能利用丙酸，试验各菌株对乳糖、麦芽糖、鼠李糖和赤藓醇利用结果不一致。根据上述致病性试验结果，供试的22个菌株和对照菌株PDDCC2848，PDDCC3553分别接种番茄品种中蔬四号和加西亚后，均表现发病症状。细菌学特性鉴定结果表明，供试番茄菌株为革兰氏阴性，接触酶（过氧化氢酶）阳性，对葡萄糖不能厌气发酵产酸，不产生吲哚，不产生硫化氢，乙酰甲基甲醇测定为阴性，据此可确定该病属于假单胞属（Pseudomonas）[5]。供试的22个菌株在各试验项目上表现出不同的结果，综合各个试验结果，可大致将供试菌株分为三类，其中pnt1、pnt2、pnt3、pnt4、pnt6、pnt8、pnt9、pnt10、pnt11、pnt12、pnt13、pnt14、pnt15、pnt18和pnt19可归为一类，记为A类；pnt23、pnt24和pnt27可归为一类，记为B类；pnt20、pnt21、pnt30和pnt31可归为一类，记为C类。A类菌株在KB培养基上产生绿色荧光素，可确定为腐生荧光假单胞类群[4，5]。氧化酶测定、明胶液化、过氧化氢酶试验结果均为阳性；甲基红测定、吲哚的产生、硫化氢的产生等试验结果均为阴性；能利用葡萄糖、蔗糖、肌醇、山梨醇、甘露醇、组氨酸、赤藓醇、L-半乳糖、木糖，据此可初步确定A类菌株属于荧光假单胞生物变种Ⅰ（Pseudomonas fluorescens biovarⅠ），但在鼠李糖和麦芽糖的利用、淀粉水解、生长素要求性的测定、吐温80的测定、卵磷酸酶测定等试验上存在差异。Saygili H[11]报道该病菌可以侵染番茄。B类菌株能利用组氨酸、肌醇、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、木糖，不能利用蔗糖、抗坏血酸和鼠李糖；耐盐性测验3%、无冰核活性，在吐温80的分解、酪氨酸酶测定的试验结果中呈阳性，与对照菌株2848完全相同；在氧化酶测定、淀粉水解、卵磷酸酶测定、配糖体的分解、尿素测定、生长素要求性的测定等试验上略有差异，据此初步确定该菌类属于绿黄假单胞菌（Pseudomonas viridiflava）。Alippi A.M.（2003）[12]报道该病菌可以侵染番茄。对于C类，在卵磷酸酶测定、氨气的产生试验结果中呈阴性；在吐温80的分解、酪氨酸酶测定、甲基红测定的试验结果中呈阳性；根据LOPAT试验，从蔗糖形成果聚糖（Levan formation），氧化酶反应（Oxidase），马铃薯软腐试验（Potato decay capacity），精氨酸双水解酶（Arginine reaction），烟草过敏反应（Tobacco hypersensitivity）的结果；不能利用鼠李糖，能利用木糖、葡萄糖、山梨醇、肌醇、甘露醇、组氨酸、赤藓醇；葡萄糖酸氧化呈阴性反应，可以初步确定属于丁香致病变种（P.syringae pv.syringae）。近年来番茄发生茎髓黑腐病，分析其原因，一是可能与品种有关，即引进的番茄品种不抗细菌病害；二是与栽培有关，发病的番茄大棚前茬栽培过芦荟，有线虫为害，可能是线虫为害番茄造成了伤口使得细菌侵入，鉴定出的3种细菌均是弱寄生菌，也正说明了这一点，它们可以侵染生长势弱的番茄。

台农一号、青皮芒、水英达、鸡蛋芒(粤西一号)、白玉象牙。金煌芒、红象牙芒、玉文芒6号、贵妃、黄金煌、紫花芒(又名农院3号)、象牙22号、金穗芒、桂热10号、金兴、桂热120、吕宋、田阳香芒、串芒、象牙芒、红金煌芒。桂七芒、凯特芒、红苹芒、印度一号、桂香芒。杧果的主根发达、侧根少，生长较深。根的生长一年中有两次生长高峰期，第一次在果实采收后到秋梢萌芽前，第二次在秋梢停止生长后到冬季低温来临前。杧果树在8—10月抽生的秋梢和11月上中旬抽生的早冬梢是次年主要的结果母枝。早中熟品种在11—12月，晚熟品种在1—2月，同一品种在不同年份花芽分化期因气候的差异可能相差15～25d。顶生或腋生的圆锥状花序；花型有雄花和两性花两种，雄花量大，两性花量少，雄花子房退化。早中熟品种的开花期在11月至翌年2月，晚熟品种如栽培管理适宜开花期在3—5月。花期授粉：杧果是典型的虫媒花植物，传粉主要昆虫是蝇类，因此，花期要在果园采取措施吸引蝇类。果实生长期110～150d。华南地区主栽的早熟品种一般成熟期在5月下旬至6月上中旬；中熟品种一般成熟期在6月下旬至7月上中旬；晚熟品种成熟期大多在7月下旬至8月上中旬。杧果适宜在年平均气温20～24℃。临界低温-3℃范围内生长；杧果耐湿、耐旱，但花期如阴雨连绵则不利花朵的授粉受精；杧果生长结果良好要求充足的光照；pH值为5.5～7.0的各种类型土壤均可栽植杧果。(1)常用砧木。一般选用土杧、扁桃(柳叶杧)的实生苗。(2)常用嫁接方法。单芽枝腹接、切接。一般选择土层深厚、疏松肥沃的丘陵坡地建园。采用等高定点开坑或按等高线开垦成简易梯田后定点开坑。坑直径1m、深0.8m；在定植前2个月左右挖好，坑底填入绿肥或草皮20kg、厩肥30kg、过磷酸钙1kg及石灰0.5kg混合堆沤,使之在定植前腐解沉实。一般选择春植(3—4月)和秋植(9—10月)。以选择在春季进行为佳，其次是秋植，此时雨水少，气候干燥，必须注意淋水。定植规格可依据园地环境条件、栽培管理水平确定，一般株行距(3～5)m×(4～6)m；每667m2栽22～55株；配置授粉树。(1)淋足定根水，并覆盖杂草在树盘。(2)在苗旁宜用竹子或树枝支撑果苗，以防风吹摇动伤根而影响成活。(1)花前肥。在2月上中旬施，氮、磷、钾配合。一般施复合肥0.5～1.5kg/株；如干旱结合灌水施肥。(2)壮果肥。在4月下旬到5月上旬谢花后施肥。施速效氮肥和钾肥各0.5～1.0kg/株，花量小的植株可不施氮肥。(3)采果肥。在8—9月采果后施，以氮肥为主，氮磷钾肥配合，施速效氮肥0.5～1.0kg/株加复合肥0.5～1.0kg/株。10月中旬结合灌水追施速效尿素促进晚秋梢和早冬梢萌芽；可起到延迟次年花期的效果。(4)基肥。在8—9月结合采果肥与基肥同时施入。结合深翻改土进行,沿树冠滴水线开环状沟，沟深40cm，沟宽30cm，基肥以厩肥、堆肥、绿肥等有机肥为主，施30～50kg/株、磷肥1.0～1.5kg/株。一般直径在0.7～0.9cm的结果母枝易成花且坐果率高，过粗的不易成花，过小的易成花但坐果难。通过两次修剪来培养结果母枝：第一次在8月下旬前完成采果后的修剪；第二次在10月中旬全园灌水并施少量尿素或其他速效性氮肥，促使全园在10下旬到11月上旬有60%以上的枝梢萌芽。第二次在萌发的秋梢长到5～10cm时进行，此时疏剪过密、过弱或过强的新梢，每剪口留梢2～3条，促使选留的新梢生长壮实，在12月中下旬老熟，顺利在2月下旬到3月上旬开始抽生花穗。由于早春低温阴雨对杧果的授粉受精的危害较大，必须避开此时开花，因此，必须进行花期调整，主要方法如下所述。(1)人工摘除早花穗。生产上将2月中旬前抽生的花穗视为早花。一般都要控制。紫花杧等一些品种的花序再生能力强，可通过摘除早期抽生的顶生花穗，促进腋芽进行花芽分化，可推迟花期15～20d，避开3月低温阴雨天气对开花的影响。(2)生长调节剂的应用。在合适时段叶面喷雾(试用参考浓度800～2000mg/L)，可延迟花期10d左右，1—2月早抽生的花穗人工摘除后每隔7～10d喷一次多效唑(试用参考浓度400～800mg/L)，喷1～2次可延迟花期30d左右。(3)树体管理。分为采果后修剪和果实生长期修剪。(4)采果后修剪。结果树的修剪一般在采果后10～15d进行，不宜延迟到9月下旬以后才修剪。初结果树修剪量小。成年结果树要疏剪顶生和外围的过密枝、衰老弱枝、下垂枝、病虫害枝、枯枝回缩树冠之间的交叉枝；短截过长营养枝和结果母枝，保证树冠通风透光。(5)果实生长期修剪。为提高果实品质，要保证树冠通风透光，6月上中旬疏剪挂果部位中上部的营养枝：疏剪遮盖果实的枝叶和果实旁“老鼠尾”状的花穗残梗；每果穗选留果实2～3个，其余的疏除。剪除影响主枝生长的辅助枝，着生位置不当的重叠枝、交叉枝以及病虫枝、徒长枝，剪掉过长、过旺枝，促进有效分枝生长。杧果套袋一般根据品种果实的大小，选用相应规格且质量好的杧果专用纸袋进行果实套袋。杧果一般在谢花后35～45d，第二次生理落果结束时进行(像鸡蛋大小)。华南地区一般要求在4月下旬至5月中旬雨季来临之前进行，套袋时间过早，由于果柄幼嫩，易受损伤而影响以后果实的生长，同时由于果实太小，不易确定果实的形状是否端正，或因生理落果而影响套袋的成功率。套袋过晚，果实过大增加了套袋的难度，易将果实套落，同时，也达不到预期的效果。套袋应选在晴天进行。(1)套袋前的准备。套袋前修剪，疏除病虫枝、交叉枝，并起先疏果，并剪去落果果梗；再用1∶1∶100波尔多液或800倍液施保克或500倍液大生等杀菌剂喷施果面。果面干后套袋，要求当天喷药当天套完。(2)套袋操作。套袋前先将整捆果袋放在潮湿处，让它们返潮、柔韧,以便于使用，套袋时先将纸袋撑开，并用手将底部打一下，使之膨胀起来，然后，用左手两指夹着果柄，右手拿着纸袋，将幼果套入袋内，袋口按顺序向中部折叠，最后弯折封口铁丝，将袋口绑紧于果柄的上部，使果实在袋内悬空，防止袋纸贴近果皮造成摩擦伤或日灼。

培育和种植抗病品种是防控植物病害的重要途径之一。研究苹果对炭疽菌叶枯病的抗性遗传规律，对筛选与炭疽菌叶枯病抗性基因连锁的分子标记，利用分子标记辅助育种有着极其重要的意义。作者采用两个高抗苹果炭疽菌叶枯病品种 （系） ‘富士’和‘QF-2’ （‘秦冠’ב富士’ 杂交后代中的高抗品系）；两个高感病品种 ‘金冠’ 和 ‘嘎拉’ 为亲本配制了4个杂交群体，采用室内人工离体接种的方法对4个杂交组合的F1 单株进行了苹果炭疽菌叶枯病的抗性鉴定，以期揭示苹果炭疽菌叶枯病的抗性遗传规律，为发掘与抗性基因紧密连锁的分子标记，开展苹果抗炭疽菌叶枯病分子育种奠定基础。选择青岛农业大学苹果试验基地 （山东省胶州市） 2009—2014年种植的4个杂交组合的F1 群体及4个亲本作为室内人工接种鉴定的试验材料。4个群体分别是：‘金冠’ב富士’ F1 代 207 株、‘富士’ב金冠’ F1 代95 株、‘嘎拉’ב富士’ F1 代 262 株、‘富士’בQF-2’ F1 代198株。取样期间不喷施农药，其他管理正常。室内人工离体接种采用的病菌取自山东省莱西市南墅镇上庄村的‘嘎拉’ 苹果炭疽菌叶枯病病叶。经鉴定病原为围小丛壳 G. cingulata （Wang et al.，2012）。将收集到的 ‘嘎拉’ 苹果炭疽菌叶枯病病叶在25℃室内保湿培养3 d，从病叶上产生的分生孢子中，挑取单孢，在PDA培养基中培养，获得纯培养菌株，并在5℃冰箱中保存。接种前将保存的菌种转接到PDA培养基中，25℃活化，待菌落长满培养皿的2/3时，用接种环刮除气生菌丝，25℃继续培养2～3 d，直至培养基中长出橘黄色分生孢子角。用接种环挑取适量分生孢子角，放入盛有无菌蒸馏水的烧杯中摇匀，用血球计数板检测孢子悬浮液浓度，调至104 个/ml备用。孢子悬浮液现配现用，放置时间不超过1h。在洁净的单凹载玻片上滴一滴苹果炭疽病菌孢子悬浮液，然后盖上盖玻片，放入底面盛有少许水的培养皿中，盖上皿盖，放入 25℃培养箱中培养12 h。显微镜下观察孢子的萌发力。孢子平均萌发力在20%以上均为可用。从供试苹果树上剪取一年生健壮的新梢，每个材料取 4 个枝条（2个用于接种鉴定，2 个用作对照），剪除枝条两端，保留顶部4 个完全展开的叶片。用0.6%的次氯酸钠对叶片表面消毒，然后用无菌水冲洗，沥干，用小型喷雾器将摇匀后的分生孢子悬浮液均匀喷洒到叶片正反两面，至叶片刚刚开始流水为止。将接种及喷有无菌蒸馏水的枝条 （对照）均匀分插到两个孔穴盘上，置于装有适量蒸馏水的泡沫箱内，加盖密封保湿，置于25℃恒温培养箱内暗培养。4d 后进行抗性鉴定和数据记录，将叶片上无病斑的定为 “抗病”，记为 （R），把有病斑的定为“感病”，记为 （S）。卡方检验采用SPSS13.0软件进行分析。鉴于该病尚无有效防治措施，为防止病原传播，作者未进行田间接种鉴定。通过室内人工接种对4个杂交组合中的4 个亲本及1 个相关品种进行抗性鉴定 （表2-1）。‘富士’ 和 ‘QF-2’ 的叶片无病斑，表现为对炭疽菌叶枯病的高度抗性；‘金冠’ ‘嘎拉’ 和 ‘秦冠’ 的叶片均出现病斑，且病斑数均在20 个以上，表现出对炭疽菌叶枯病易感染性。亲本叶片平均病斑数抗病性富士0抗病（R）QF-20抗病（R）金冠21.1感病（S）秦冠22.8感病（S）嘎拉22.4感病（S）表2-1 不同苹果品种 （系） 对炭疽菌叶枯病抗性的室内接种鉴定离体接种鉴定结果 （附图 2-1） 表明，不同品种和 F1 杂交后代单株对炭疽菌叶枯病抗感表现差异明显。而且这一结果与田间抗性调查结果相符 （附图2-2）。在安徽砀山发病区，‘嘎拉’ （附图2-2 左图） 和 ‘秦冠’ （附图2-2右图） 苹果树干上嫁接 ‘富士’ 枝条，染病后，‘嘎拉’ 和 ‘秦冠’ 的叶片已经全部脱落，‘嘎拉’ 仅剩下光秃的枝干，‘秦冠’ 仅剩下果实，与 ‘富士’ 枝条上翠绿的叶片形成鲜明的对照。这充分显示不同品种 （系） 对苹果炭疽菌叶枯病的抗性差异明显，遗传性对苹果炭疽菌叶枯病的抗性起着主导作用，同时也证实了上述品种 （系） 可以作为苹果炭疽叶枯病遗传规律研究的典型材料。在 ‘金冠’ב富士’ 组合的F1 代群体中，共调查了207株，其中抗病株为 93 株，感病株为 114 株，经适合性检验， x20.05=1.07 （ P＞0.05）；在 ‘富士’ב金冠’ 组合的 F1 代群体共调查 95 株，其中抗病株为 40 株，感病株为 55 株， x20.05=1.20 （ P＞0.05） （表2-2）。二者卡方值均小于 x20.05=3.84， P 值均大于0.05，说明样本的抗病与感病的表型比值符合1∶1的理论分离比，初步判断该试验组合中苹果对炭疽菌叶枯病的抗性由单基因控制。计算 ‘金冠’ב富士’ 组合正反交之间抗感差异得卡方值0.21 （小于 x20.05=3.84），二者没有显著性差异，说明苹果抗炭疽菌叶枯病为细胞核遗传，不受胞质遗传物质影响，即不存在母性遗传效应。杂交组合株数总株数抗病感病抗感比抗感比期望值x2P金冠×富士207931140.82∶11∶11.070.30富士×金冠9540550.73∶11∶11.200.27嘎拉×富士26242580.02∶10∶1—0.12富士×QF-2198195365∶11∶0—0.25表2-2 杂交F1 代植株对苹果炭疽菌叶枯病的抗性表现在 ‘嘎拉’ב富士’ 杂交后代群体中，共调查了262 株，出现了4株抗病单株，经适合性检验， P值为0.12，大于0.05，无显著性差异，符合0∶1 的理论比值，表明该杂交后代抗病对感病呈隐性单基因遗传；‘富士’בQF-2’ 杂交后代群体中共调查了198 株，出现3株感病植株， P值为0.25，符合1∶0的理论比值 （表 2-2），说明该杂交后代抗病性受单基因控制。综合上述研究结果，可以确定苹果对炭疽菌叶枯病的抗性由隐性单基因控制。综合不同杂交组合的亲本及后代对苹果炭疽菌叶枯病抗性的表型性状分析结果，可以假设本试验群体中，对苹果炭疽菌叶枯病表现为抗病的植株基因型为rr，感病植株为 RR或 Rr，并由此推测出供试亲本品种 （系） ‘富士’ ‘金冠’ ‘嘎拉’ ‘QF-2’ 的基因型分别为 rr、Rr、RR和rr，‘秦冠’ 为Rr （附图2-3）。病害的发生是寄主与病原菌在一定环境条件下相互作用的结果。所以接种条件和病原菌的致病性对寄主的抗性鉴定结果有着重要的影响。根据Wang等 （2015） 的试验结果，25℃是苹果炭疽菌叶枯侵染的最适温度，自由水或高湿条件是分生孢子萌发的必要条件，接种后第4d病斑数达到最大值，特征最明显。本试验所采用的接种方法和试验条件是根据Wang等 （2015） 所得出的试验结论进行的，采用适宜的孢子浓度、温度、湿度和最佳病斑计数时间，使寄主与病原菌的互作关系得到充分体现。所用的病原菌是从 ‘嘎拉’ 感病叶片上采集、分离、纯化的，对 ‘嘎拉’ ‘金冠’ ‘秦冠’ 等具有强致病性，保证了鉴定结果的可靠性。目前对于苹果炭疽菌叶枯病的一些报道还仅限于对引起病害的相关因素、病原菌的生理学、致病机制、寄主响应及防治措施等方面的研究 （González，2006；Wang et al.，2012；Velho et al.，2014；Araujol and Stadnik，2013；Wang et al.，2015；王薇等，2015），对于抗性遗传规律、分子标记定位等研究少有报道。作者利用4个杂交群体的后代个体对炭疽菌叶枯病抗性表现进行了综合分析，得出苹果杂交后代中抗炭疽菌叶枯病受隐性单基因控制的结论，这与Dantas等 （2009） 研究认为 ‘嘎拉’ ‘富士’ 等苹果品种对炭疽菌叶枯病的抗性是由一对隐性基因控制的结果相一致。作者认为抗病基因型为rr，感病基因型为 RR或 Rr，由此推测供试杂交群体的亲本品种 （系） ‘富士’ ‘金冠’ ‘嘎拉’ ‘QF-2’ 的基因型分别为rr、Rr、RR和rr，‘秦冠’ 的基因型为Rr。由于苹果在遗传构成上高度杂合，又是自交不亲和植物，杂种树童期较长，对苹果树抗病遗传规律的研究很难采用和借鉴其他作物的遗传群体创建方法，如通过自交，回交，侧交等手段获得 F2、BC 等分离群体。本试验采用 4个不同的杂交群体后代对炭疽菌叶枯病的抗性进行表型鉴定，这一方法可以为类似的果树抗病性遗传研究提供参考。