企业是以盈利为目的的，制造企业也不例外。制造企业要想健康发展就必须把生产出来的产品卖出去，赢取利润，只有赚钱的企业才会有好的发展。因此，目前在很多的制造企业当中就形成了这样的观念：市场营销是制造企业的核心竞争力。他们的论据很简单：产品生产出来，做得再好卖不出去赚不到钱，质量再好也没用；反之，即便是垃圾，通过合理的营销模式能够卖出去也是成功的。这种想法是有一定道理的，但是过分抬高市场营销的地位，会导致让树枝遮住了树干。在河南有一家水泵生产厂家，销售人员的数量与一线工人差不多，因为老板深信只要把产品卖出去就能让企业有发展。他们的销售人员全国各地跑订单，起初阶段，公司发展迅速，由于销售人员营销有道，接到全国各地很多订单，公司的生产规模很大，工人加班加点赶生产进度。然而，经过调查发现这家公司的利润却很低，原因何在呢？因为公司只注重生产进度，忽视了产品质量，致使产品的返修率很高，仅三包费用就已经相当于其全部利润。随着时间推移，公司的回头客越来越少，同时在行业中也产生负面影响。因此，制造企业在确定自己的企业发展目标的同时，就必须首先确定自己的核心竞争力，事实证明，产品质量的优劣直接决定着制造企业的发展，是制造企业的根本。只有确立了这个根本，再辅以良好的市场营销模式，企业才能够像大树一样茁壮成长，才能够健康发展。提高产品质量不能只停留在口头上，寻找适合企业的质量管理体系是企业发展的重中之重，是每个制造企业必须研究的课题。一般来说，制造业的产品质量控制包括以下部分：控制产品材料的质量，即毛料质量，它决定产品的最终质量；产品零件加工过程中的质量控制；产品组装过程中的质量控制；产品售后服务质量的控制。影响产品质量的因素应该包含职工的素质、加工设备的能力和生产管理的科学性。在这些因素中，加工设备的能力是相对固定的。而人是最重要、最灵活、起决定性作用的因素。提高员工质量意识和员工参与质量管理的积极性，对于质量管理体系的合理建立十分重要。合理的质量管理体系应该遵循六大原则：● 以客户为中心：企业依存于其客户，因此，企业应当了解掌握客户目前和以后对产品的需要，制定相应的措施，保证能够满足客户对于产品质量的要求。● 充分发挥领导的作用：领导者将本企业的宗旨、方向和内部环境统一起来，并营造使员工能够充分参与实现企业目标的环境。● 必须全员参与：各级人员是企业之本，只有他们的充分参与，才能使他们的才干为企业带来最大的收益。这也就是以人为本的管理理念。● 科学过程方法：过程的控制对于制造业来讲也就是要在生产过程中，充分合理的利用有效资源，包括设备资源、人力资源等等，创造最大的生产能力。● 科学管理的系统方法：要根据制造企业的实际情况制定合理的、行之有效的管理文件，来约束职工的质量行为。● 具有持续改进的特点：质量管理体系必须具有持续发展的能力，要随时根据市场状况以及企业自身的经营状况进行改进，持续的改进质量管理方式才是企业发展的保证。质量管理必须是全面的、全过程的、全员参加的。全面质量管理中的质量不仅包括一般质量特征，而且包括成本质量和服务质量，它不仅包括产品质量而且还包括工程质量、工作质量。全过程的质量管理包括：产品设计、各个加工车间的生产合理化安排、制造毛料的控制、工艺文件的合理化、加工设备的合理使用等，也就是从采购开始到产品出厂的全过程的质量管理。在这个过程中就要求全员参与质量管理。产品的质量是企业素质的综合反映，涉及全体部门和员工，提高产品质量需要靠全体员工的共同努力，质量管理人人有责，从企业的领导人员到每个员工，都要学习，运用科学质量管理的理论和方法，提高本职工作质量。全员参与指的是要推动全员参与，对全过程进行质量控制与管理。以人为本，充分调动各级人员的积极性，推动全员参与。只有全体员工的充分参与，才能使他们的才干为企业带来收益，才能够真正实现对企业全过程进行质量控制与管理，并且确保企业在推行全面质量管理过程中，采用系统化的方法进行管理。制定质量管理体系必须做好以下几个方面的工作：第一，强化员工质量意识。“人”在质量管理体系中处于主导地位，起着决定性的作用。所以对企业员工的“质量意识”提升就显得更为重要。那么什么是质量意识呢？质量意识是一个企业从领导决策层到每一个员工对质量和质量工作的认识和理解，这对质量行为起着极其重要的影响和制约作用。提高质量意识需要企业管理者和全体员工的共同努力。首先企业管理者要以质量为中心，将质量管理贯穿于企业发展的全过程，通过优质的产品和满意的售后服务，使企业快速发展壮大。此外，利用多种宣传形式，加大宣传力度、强化质量意识，使员工在头脑中牢固地树立“质量第一”的思想意识。让员工在宣传活动中既强化了质量意识，又加强了自觉性和责任心。纵观国内外成功企业可以看出：企业应在质量意识教育中，培植企业文化，增强职工的团队精神，才能真正把全面质量管理落实到实处，充分体现质量意识的内涵和意义。第二，制定标准化的工作体系，包括技术标准、检测标准、工作标准等。其中工作标准是指必须根据实际情况制定不同职工的岗位标准，使每位职工都能够各司其职，充分发挥职工能动作用。第三，掌握准确的质量信息。质量信息是反映产品质量和供、产、销各环节工作质量的数据、原始记录，以便在产品使用过程中形成的各种数据和资料，加以汇总、整理、分析而得到的情况。第四，制定合理的质量监督措施。质量监督包括企业内部的质量审查和经过专业质量审查部门的审查（ISO9001认证等）。质量管理体系文件编制工作结束后即开始生效，质量管理体系投入运行实施。要重点对员工进行教育和培训，掌握全面质量活动的程序管理要求，明确各自的职责和权限，提高员工执行质量管理体系文件的自觉性和责任感。质量管理体系运行控制机制示意图质量管理体系改进是产品质量改进的重要组成部分，是质量管理的主要目的之一，重点是提高质量体系的有效性和效率，为企业及其客户和其他受益者提供更多收益的质量改进活动。企业质量管理体系改进重点是：把满足客户的期望和需要作为推进质量体系改进的基本动力；改进质量体系在资源配置上要充分考虑知识、技术、手段的更新和满足动态管理的要求，在战略上确保质量体系能够更好地服务于企业获得长期成功的总体目标的实现，要把提高质量体系的有效性作为质量改进的主要目标。在质量体系改进过程中，应尽量减少损失，降低质量成本，增长经济效益，有效利用资源，发挥现有资源的使用效率。在经营思想上要强化“面向客户，让客户满意”的理念，明确以“长远发展”而不是“眼前利益”为宗旨，倡导“树立品牌”。通过“三全”质量管理体系的实施，企业可以从采购开始进行合理的控制，提高毛料的质量，在生产中就可以减少由于材料问题引起的废品，减少废品率，降低成本。同时通过“三全”质量管理体系的实施，企业可以在过程控制中，更好地调动广大职工的工作积极性，更合理地对人力资源进行配置，充分发挥每个人的能动作用，减少目前企业中常见的废岗、重岗现象，节约人力成本。在此过程中，由于合理使用加工设备，可以最大程度的发挥每台加工设备的加工能力，使生产过程更加的科学化，提高产品生产的效率。品牌战略是目前企业发展的一个非常热点的话题，树立自身品牌已经成为很多企业都在追求的目标。品牌，是广大消费者对一个企业及其产品过硬的产品质量、完善的售后服务、良好的产品形象、美好的文化价值、优秀的管理结果等所形成的一种评价和认知，是企业经营和管理者投入巨大的人力、物力甚至几代人长期辛勤耕耘建立起来的与消费者之间的一种信任。而质量是品牌的本质、基础，也是品牌的生命。只有优秀的产品质量作为基础，才能够树立起优秀的品牌。通过“三全”质量管理体系的实施，制造企业可以达到利用科学的质量管理文件规定职工工作范围，提高职工工作积极性，提高职工工作效率、合理利用设备能力，控制生产全过程中的产品质量和工作质量，从而提高产品的最终质量和对客户的服务质量的目标。产品质量有了保障，就能够在行业中树立企业良好的口碑和企业品牌，也就是以产品质量树立品牌。制造企业的核心竞争力不只是体现在生产的产品质量上，还有诸如售后服务等其他方面。如果每个部门每位员工都能够注重自身的工作质量，也就在不同的范围内帮助企业提高了竞争力。比如：接待部门工作质量有了保障，在客户到企业进行考察的时候能够感受到亲切的接待，给客户留下良好的第一印象；财务部门提高工作质量，能够更好地提供合理的财务数据，是企业能够更准确地进行定位；售后服务人员提高自身的工作质量，能够更好的为客户提供周到的售后服务，解除客户的后顾之忧。这些方面的质量控制，能够使企业更好地找准市场定位，为客户提供满意的服务，无形中提高了企业的市场竞争力。产品质量是制造企业的生命，是核心竞争力，制造企业必须把提高产品质量作为企业发展的前提，因此，必须制定合理有效的质量管理体系并在企业中逐步实施，制造企业也必将能够从根本上提高产品质量，形成质量品牌，提高竞争力，企业也就会得到更好的发展。

企业如何才能在当今激烈的市场竞争中立于不败之地？怎样才能在竞争中取得胜利？归根结底依靠的是人，因为只有人才能创造价值。然而企业要想获得适合自身发展的人才就必须通过各式各样的培训来实现，企业的培训将给员工提供可以胜任他们职位的信息和技能。但是，对于企业管理者来说，除了具备胜任职位的基本技能和能力以外，企业更注重培训他们的团队意识、沟通能力、协作能力等管理能力。素质拓展训练就是以“磨炼意志、陶冶情操、完善人格、熔炼团队”为目的，在体验式培训中实现这一目的的。素质拓展训练起源于西方，英文outward-bound，意为一艘小船离开安全的港湾，驶向波涛汹涌的大海，去迎接挑战。二战时期，大西洋上有很多船只由于受到攻击而沉没，大批船员落水，由于海水冰冷，又远离陆地，绝大多数人不幸牺牲了，但极少数人在经历了长时间的磨难后得以生还。后来，发现得以生还的人并不是那些身体强壮的人，而是那些拥有强烈求生欲望的人。二战结束后，在英国出现了这种模仿真实管理情景，对管理者和企业家进行心理和管理两个方面培训的outward-bound管理培训。由于它新颖的培训形式和良好的培训效果，被世界各地不同的企业所采用。根据管理学理论，我们可以将管理的过程分为四个部分：计划、组织、领导和控制。我们以素质拓展训练中“扫雷”这个项目，来看一下管理过程中的四个部分是如何工作的。“扫雷”游戏是用一张分成若干方格并标上数字的地毯来模拟雷区，每一个方格的结果是有雷或是无雷，在“雷区”中间位置的两侧是分别有两个峡谷。而这个游戏的规则是每一名队员只有两次机会去“扫雷”，如果选择的方格没有雷，那么可以安全地选择前后左右的任意一格继续“探雷”。但如果选择的方格是有雷的话，就必须按原路返回，换另一名队员继续“扫雷”。这个任务获胜的依据就是在规定的时间内所有的队员都可以安全地通过“雷区”。那么，在这个游戏中将如何去应用管理学知识来实现胜利呢？我们知道，计划是每一件事情成功的第一步，在这个游戏中也不例外。作为一个团队，首先应当确定团队的目标，那就是成功走出“雷区”。在制定了这样一个目标之后，应该做的就是制定实现这个目标的计划。当计划完成之后的组织环节中，项目经理应当明确所有成员的分工、团队的分组等事宜，以便所有的成员可以各司其职，避免在项目实施的过程中出现漏洞或者人力资源的浪费。建立起一支高效的团队，在任何一个项目中都是领导环节的重要任务。在这个项目中，其实还有一点是管理者可以实践的，那就是如何去建立一支信任的团队。“扫雷”游戏在完成了一半的时候会有意设置一道障碍，那就是在两个“峡谷”之间的“雷区”全部都是有雷的，也就是要通过正常的途径是不可能通过“雷区”的。在团队成员即将取得胜利的前夕，团队将面临极为严重的信任危机，所有的人都会怀疑是不是记录路线的人记录出了问题，这时的争吵将使团队耽误相当多的时间。如果这样的情况发生了，对于管理者来说需要通过与大家沟通，使团队建立起相互的信任，共同克服困难，渡过团队面临的这一信任危机。管理过程的最后一个阶段就是控制，其实从实施这个项目的第一步起就开始了控制。当队员探雷失败的时候，其实就是表明这一步与团队的目标是不一致的，作为项目的管理者就应该及时纠正错误，派遣另一名队员寻找一条新的道路，从而达到控制的目的；在团队面临信任危机时，管理者也是通过不同的方式消除大家心中的疑虑，重新建立起团队的信任，使之与团队的目标一致。通过“扫雷”游戏，可以看出管理学是可以运用到生活的方方面面的，素质拓展训练就是通过这些看似简单实际却是障碍重重的小游戏，在娱乐与轻松中教会管理者如何运用管理学理论解决实际工作和生活中的一些琐事，使管理者在今后的企业管理中充分地信赖以及运用管理学理论，给企业带来收益。素质拓展训练的很多项目都是为了增进团队合作而设计的，例如攀爬“天梯”项目可以让队员在极为艰难的条件下体会到相互协作带来的力量；“孤岛求生”项目则可以增进队员之间的了解，培养管理者良好的沟通能力；而“背摔”项目则是要让队员在团队中建立起彼此的信任。在Stephen P.Robbins和Mary Coulter所著的《管理学》一书中认为高效团队应当具备以下的特征：清晰的目标、相关的技能、相互的信任、统一的承诺、良好的沟通、谈判的技能、恰当的领导、内部的支持和外部的支持。我们可以看出，素质拓展训练就是要增强管理者的团队合作意识，打造一支高效的团队，而高效的团队正是一个企业获取成功的关键因素之一。企业文化对企业发展的作用在当今的市场竞争中已不言而喻了，海氏集团副总裁梅尔文·斯塔克总结说：“最受赞赏公司的意见的一致程度超过我们研究的几乎所有公司。不仅在文化目标上一致，而且对公司如何争取那些目标的看法也是一致的。”可见，公司出类拔萃的关键在于文化。在素质拓展训练中，所有的参训者首先都会参与一个叫做“破冰”（ice break）的仪式，其最主要的目的就是增进彼此之间的了解，消除队员自我为中心的想法，组建成一支团队，确定团队的队名、队旗、队歌、口号等团队文化，由队员亲自创建的团队文化将是团队迈向成功的基础。当队员在体力透支意图放弃的情况下，团队的口号将是他们坚持的动力；当本队的分数落在其他队伍后面的时候，高亢的队歌将是他们奋勇追赶的声音；当队友在10米高空的木桩上失去信心的时候，挥舞的队旗将是他们勇气的源泉。在队员亲身感受到了组织文化的重要性后，必将加强员工对企业组织文化的认同感，同时迫使管理者利用各种方式建立起适合自身发展的组织文化。一位中信银行的人力资源部经理的体会是：“体验式培训方式对于加强员工对企业文化认同感很有效。尤其是新人，他们刚到新的企业，还抱着观望的态度，对新的人际关系和新的企业文化都要有一个适应的过程。体验式培训创造了一个企业了解新人、新人了解企业的机会，经过这次全员范围的体验式培训，企业里的人际关系有了明显的改善，我们人力资源部门在新员工的任用上也获得了不少直接的信息。”素质拓展训练无疑会对传统的培训方式带来巨大挑战。所谓传统培训方式，即是指由企业自行组织，通过邀请外部的专家学者担任培训讲师，定时、定点、有一定规模、脱产或半脱产，就某个专题进行为期数天或数星期的正式培训活动，采取的形式多为讲座式，辅以若干直观的教具、多媒体手段、案例分析、情景模拟、趣味技巧等。那么，素质拓展训练较之传统培训有什么优势呢？有关专家指出：阅读和听到的资讯，我们只能学到10%～15%，但体验过的事，我们却能收获80%。传统培训方式多数是员工被动的接受信息，自然收获到的东西很少，并且培训的可转换性较低，所以这种培训的效果并不明显。而素质拓展训练正是打破传统培训的枯燥，在青山绿水之间构建一系列的训练项目，使参训者在思想完全放松的状态下接受体验式培训，从而提高参训者的积极性，这样也会使培训起到事半功倍的效果。MBA教育是目前企业对管理人员采用比较多的培训方法，但是MBA教育的费用比较高。有资料显示：“中国的商学院从上世纪90年代末出现至今，短短不到10年的时间，平均学费就从2万元增长到9万元。”费用高不说，收到的效果也不一定好，很多学院通过MBA教育后，又落入只知道理论，而缺乏理论与实践相结合的尴尬局面。从邀请专家学者进行讲座的费用也不低，目前讲师平均课时收费为300～500元/小时，另加差旅费用。当然，西方式的10000美元/天更是难以接受的天文数字。而素质拓展训练的费用为600元/人左右，也就是说企业用于对一位管理者进行MBA培训的费用可以供150人进行一次素质拓展训练。而用于支付讲师授课一小时的费用也可以负担一位员工一天的素质拓展训练，并且企业在素质拓展训练后得到的效果也远大于传统培训得到的效果。意在培养起人们的团队精神、合作精神、凝聚力、勇敢、乐观等品质，这些都是企业员工所需要而平时的知识学习无法培养出来的。试想让一群平时正襟危坐的人放下手中的工作，全身心地投入像孩子们才会去做的游戏中去，本来就是让人很感兴趣的事。在精心设计的游戏中，原本就悟性很高的人们，很容易感受到平时被大家忽视的问题，比如团结才会产生效率，勇敢乐观更有助战胜困难等。有的人更是举一反三，从一个道理想到其他的道理。因为游戏深化了人们的记忆，在以后的工作中，有些人不仅性格有了变化，比以前积极主动起来，还自觉把培训的收获应用到工作和生活中去，待人接物呈现出与从前迥然不同的态度。例如，“背摔”游戏，当台下的人给台上的人做出承诺后，自己也多了一分责任，当伸出双臂去接台上摔下来的人时，是在用双臂托起别人的生命。而台上的人往下摔时，将自己的生命交给别人，也就对台下的人充满信任。通过参加这个游戏，企业所要求的责任和忠诚的品质便可以在潜移默化中培养起来。体验式训练无论从形式，还是从内容上，都适应企业员工提高素质的需要，具备现实操作性，其实用意义显而易见。中国的经济正处于飞速发展阶段，人的素质亟待提高，体验式训练在中国有着广阔的发展前景，随着人们观念的现代化，现代企业培训的趋势在于让更多的员工体验式的培训，通过体验式的培训激发员工的潜能，从而创造出更大的价值。素质拓展训练作为体验式培训重要的方面，将立足于如何帮助企业开发人的潜力，成为企业培训不可或缺的手段，打开企业培训的新思路。

市场经济最突出的特点之一就是竞争。而人才是竞争的核心，培养一支稳定的、有强烈进取心和创造性的员工队伍是一个企业发展的基石。要想在现代社会竞争中取得优势，企业就必需要储备大量人才，而且要对人才进行有效的管理和开发。因此，人力资源的开发管理在现代社会中具有十分重要的意义。然而，由于传统计划经济形成的旧的管理模式的影响和轻程序、轻理性的中国文化的积淀，国有企业在人力资源管理理念和操作方式上，均处于初级的层次。因此，对目前大多数国有企业而言，更重要的就是要进行规范化的人力资源管理体系建设。人力资源管理是现代管理的重要内容。所谓人力资源管理是指将组织内的所有人力资源作适当的获取、维护、激励以及活用于发展的全部管理过程与活动，亦即以科学的方法使企业的人与事作适当的配合，发挥最有效的人力运用，促进企业的发展。简单地说，人力资源管理就是企业对人的管理，也就是企业通过工作分析、人力资源规划、员工招聘选拔、绩效考评、薪酬管理、员工激励、人才培训和开发等一系列的手段来提高劳动生产率，最终达到人与事配合，事得其人，人尽其才的一种管理行为。由于人在整个社会经济活动中的支柱作用，决定了人力资源管理在社会经济管理体系中的关键地位。管理学中的激励理论往往以人的需要为基础，对激励的过程进行深入细致的研究，确定影响因素，寻找科学的激励方法，旨在提高激励结果的有效性，充分调动员工的工作积极性。激励就是指挥棒，激励什么，员工就重视什么。没有激励，没有优胜劣汰，没有奖惩，人力资源就无法发展，无法创造生机与活力。有效的激励竞争可满足人才的各方面需要，尤其是高层次的精神需要，使得个人的要求、发展与企业的发展战略紧密相连，极大地调动人才的积极性与创造性，实现个人与企业目标共赢。管理者应结合企业的不同情况采用不同的激励机制，做到物质激励与精神激励、短期激励与长期激励、管理激励与自我激励有机结合，积极营造一种良好的激励环境，激发、鼓励人才充分发挥自己的积极性、主动性和创造性，展示自己的潜能。报酬就是企业对员工为企业所做的贡献（包括他们实现的绩效、付出的努力、时间、学识、技能、经验与创造）所付给相应的回报或答谢。报酬在人力资源管理中对吸引、留住和激励人才起到重要的作用，会大大提升企业的竞争实力，具有增值功能、激励功能、导向功能、帮助员工实现自我价值的功能。报酬主要包括经济性报酬和非经济性报酬。经济性报酬是与经济有关的各类报酬，包括工资、薪水、佣金、奖金等直接经济报酬及各种福利、保险等间接经济报酬。非经济性报酬是指个人对工作或工作环境在心理上或物质环境上的满足感，诸如社会地位、成就感、发展机会、弹性工作制之类，包括工作本身和工作环境两个方面。人力资源管理与企业效益之间的关系不是来自抽象的理论概括，而是来自企业里每个人实实在在活动的结果，即来自企业员工个人的具体工作以及他们之间相互结成的关系。人力资源管理活动本身所产生的效益和费用支出，对企业效益产生了直接的贡献或者损害，这是人力资源管理对企业效益直接的作用结果：有效的人力资源管理政策和活动，促使员工工作效率的提高、生产或服务的质量提高和改善以及跳槽率的降低等所导致的企业收益提高或成本降低，是人力资源管理对企业效益的间接作用过程。人力资源管理目标是根据企业总体目标来确定的，人力资源管理部门再根据目标确定企业人力资源管理的政策和活动，通过人力资源管理效益实现企业效益。我国国有企业由于先天不足，对如何引人、育人、用人、留人，如何全面提高员工的积极性和工作效益，尚缺乏足够的认识和有效的措施。主要体现在以下几个方面。改革开放以后，虽然许多国有企业已经逐步认识到人力资源管理在企业经营活动中所创造的价值，但是相当一部分企业只是形式上的改动，换汤不换药，与原来无实质性的差异，从用工制度、人事制度、分配制度到企业经营者的任用制度基本沿用传统的方法。大多数企业的人力资源管理还处于以事为中心，把人视为一种成本，只注重使用和控制，不注重投入。在选人、用人的观念上，计划经济的用人模式和思维习惯依然存在。在大多数企业，根本没有设立专门的人力资源管理机构，而是把人力资源管理任务委托于企业长期以来设立的人事管理部门，即使设立人力资源管理机构，也没有赋予其相应的职责：绝大多数企业人力资源部门的绝大部分日常工作仍然在围绕诸如人事考勤、档案管理、薪酬福利管理、人员配置、绩效考评等事务性工作来开展，对人力资源发展规划、员工发展、政策制定完善、促进组织变革等方面的战略性工作很少顾及。我国大部分国有企业不重视员工的培训和继续教育工作，还没有把人才培养看成是知识经济时代最主要的基本建设，企业的人才培训还没有和员工的敬业爱岗、管理能力、创新精神以及自身价值等综合为一个整体去统筹考虑，还没有树立“日常管理是培训”、“终身接受培训”的观念。有的企业即使有一些培训，但培训内容的科技含量不高，也缺乏具体的要求，缺少具体的激励机制，使得教学形式单一，缺乏多样性，培训往往走过场，并不注重实效，随之而来的是员工创新动力不足，造成人才大量流失。国企人力资源管理水平明显偏低，主要表现在：管理观念陈旧，缺乏科学的人力资源管理；吸引人才机制严重滞后，企业因害怕人才流动，并设置种种障碍以尽可能减少人才流失；企业过分依赖人才管理，忽视制度管理，甚至连人事部门也缺乏制度化的规范管理；人才激励机制不健全，管理人员在实施激励机制的过程中不能有效地调动员工的积极性，对员工长期激励的措施不够，忽视了约束与激励相结合，造成人才大量流失。“人是管理工作的核心和动力，是企业在日趋激烈的竞争中立于不败之地的重要保证。”人才是企业经营的重点，唯有企业或组织拥有优秀人才，企业才有可能生机不断。国企要生存要发展，就必须树立人力资源是第一资源的思想。人本管理思想正是以人为中心的管理思想。主要体现为充分尊重知识，尊重人才；把人作为企业最重要的资源，在工作中充分考虑到员工的成长和价值。使员工的利益得以最充分的体现。企业有了这种方针，才能谈得上运用科学的管理方法，进行全面的人力资源管理与开发。随着社会的进步和人们受教育程度的不断提高，人和企业之间的关系变得越来越紧密，并且不断地向更为合理的方向演变。人力资源管理策略中的一个重要体系就是激励体系。第一，加强物质激励。物质激励体现企业对人的创造性劳动、对社会所作贡献的一种酬劳和补偿。第二，加强精神激励。精神激励是企业对人才所作贡献的一种表彰和宣扬。企业通过各种形式的认定、宣传和褒奖，使人才获得荣誉感、成就感和责任感，并用尊重和企业精神来激励员工，发挥榜样的激励作用。第三，加强情感激励。情感激励就是以个人与个人或组织与个人之间的感情联系作为激励的手段，通过调节人的情绪系统，实现激励的目的。第四，企业根据其特点而采用不同的激励机制。激励是一种催化剂，但用得过多，就成了滥奖，其负效应会妨碍员工的竞争活力，达不到预期得目的。第五，建立良好的激励机制的同时形成有效的约束机制，使企业对员工的激励是约束中的激励，是基于责任的激励。绩效管理是实现人力资源管理的前提之一，也是一个企业管理的缩影，从一个侧面反映了企业的经营哲学和价值观。绩效评估可以为企业的各项人事决策提供客观依据，同时能加强组织的团队建设，提高管理效率。一个完善的绩效管理体系有如下五个构件：第一，设定绩效管理的目标；第二，持续不断的沟通过程；第三，记录员工的绩效表现，形成管理文档；第四，绩效考评；第五，绩效管理体系的诊断和提高。这五个构件既是绩效管理体系的组成部分，又是绩效管理体系的流程。一个完整的绩效管理体系必须同时具备上述五个构件，缺一不可。第一，建立以市场为导向的薪酬管理机制。引入市场价位机制，调整分配关系。新的分配制度参照劳动力市场价位，重点向关键管理、科研技术岗位以及企业主体生产岗位倾斜。第二，建立以岗位工资为主要形式的工资制度，明确岗位职责和技能要求，实行以岗定薪，岗变薪变。第三，在坚持效率优先分配原则的同时，兼顾职工的历史贡献。对于老职工将体现职工历史贡献的技能工资和工龄工资合并为保障工资，充分兼顾了职工的历史贡献。对于新职工，可直接将当地最低生活水平线作为保障工资。第四，加大绩效考核力度，将员工的工资分配直接和个人工作绩效挂钩，除保障工资和部分岗位工资外，将其他工资全部列入考核范围，加大考核发放工资的比重。这样就将单位的实际经营状况传递给员工，并以员工胜任工作岗位的能力和在工作中的表现为价值导向，将月度考核结果和员工收入挂钩。职工的培训和发展是企业人力资源管理与开发的一个重要内容。员工的教育培训能够实现其自身价值，也是有效提高劳动生产率的途径。加大员工培训力度，企业首先要对人力资源工作者进行培训。由于人力资源工作者的自身素质和专业知识及技能决定着他对人力资源管理的认识，企业要树立提高本企业的人力资源素质的前提首先要提高人力资源工作者的自身素质。其次，培训应有全面的计划和系统的安排，将教育培训与员工的考核、提升、晋级有机地结合起来，以提高员工参与培训的积极性。对那些有发展潜力的员工，培训的目的就使为了让他们担负起更重要的工作。再次，要把培训与业务考核结合起来。业务考核和培训的目的都是为了让员工更好地工作，所以，二者的目的是一致的，把二者有机地结合起来，有利于增强培训的效果，有利于人才的成长。最后，要把培训与工作需要结合起来。对员工培训必须结合每个员工的工作需要、每个员工的能力，采取因人而异、因材施教的原则进行。同时，要加强一线员工的培训，提高一线员工的知识技能，而不能只培训高层管理人员。要培养企业良好的人际关系和亲和的文化氛围。良好的人际关系，有利于沟通，使人心情愉快；亲和的文化氛围，有助于凝聚人心，培养团队精神和力量。企业文化的核心内容，主要是指企业内部具有明确统一的思想、意识、精神、信仰和价值观。企业文化所蕴含的管理哲学和企业核心价值形成的企业人格，对于企业的经营行为起着至关重要的作用。企业文化建设和管理的实质是贯彻“以人为本”的人本思想，良好的人际关系和亲和的文化氛围仅仅是企业文化重要内涵的体现。始终爱护人，尊重人，承认人的劳动和做出的成绩，构建企业上下左右良好的沟通系统，让人才了解和参与企业的决策与管理，并切实为他们提供各种必要的保障，增强他们的认同感、归属感和忠诚心，让他们毫无怨言地努力与奉献，才是抓住了企业文化建设的“本”，才能从根本上稳定人心，留住人才。职业生涯是指一个人一生中的所有与工作相联系的行为或活动，以及相关的态度、价值观、愿望等连续性的经历的过程。职业生涯规划是指组织建立职业通道，针对组织成员各自的才能与个性制定定向培养计划，以适应各工作岗位的需要，帮助人才充分发挥自己的潜能，达到应有的职业生涯高峰。有效的职业生涯规划要求人才的个人需要与组织需要之间相互结合。在人才的整个职业生涯中，个人与组织双方均处于一个不断变化的环境中，二者需要相互匹配是个动态的过程。如果匹配过程能够有效地进行，人才就会很好地融入组织，组织得到人才的忠诚、合理利用与开发人才资源与潜能，组织绩效提高，人际关系改善，人才个人将能较好地管理自己的职业生涯，实现个人与组织的最佳配合，个人才能充分发挥，态度与价值观较好地实现，个人在管理阶梯上步步高升。通过职业生涯规划，让人才走上发展之路，是企业送给人才最好的礼物，因而也是留住人才非常有效的方式。国有企业应从根本战略上重视人力资源管理，从长远发展着眼于管理体制的变革和人力资源工作的推行。国有企业只有开放思维，采取先进的人力资源开发与管理方法，从大处着眼，建立科学、理性的制度系统，再逐步根据企业具体环境加以变通和灵活应用，同时改革落后的机制，建立规范的价值评价和分配系统，设计合理的薪资结构、报酬体系，明确员工发展路径，国有企业就一定可以从根本上形成吸引人才、凝聚人才、培养人才的企业氛围，从而增强企业的竞争力。

晚疫病是露地、保护地及南方山区蔬菜基地番茄的重要病害，由致病疫霉[Phytophthora infestans（Mont）De Bary]侵染所致，是一种毁灭性的世界性蔬菜病害[1]。南方4～5月，北方6～7月，南方山区7月前后的阴天多雨天气及保护地秋末和早春棚室温度达16℃时均易发生。病害流行性强，年度间病情差异大，一些地方称为“疫病”、“怪病”、“过火风”[2]。晚疫病在番茄的整个生育期均可发生，主要为害茎、叶和果实，发生普遍，蔓延速度快，严重田块可减产70%以上，甚至绝收，严重制约了番茄生产的进一步发展[3]。目前生产中存在的主要问题是选药不当、错过防治适期，致使该病蔓延成灾。鉴此，笔者征集了部分国内外杀菌剂品种，试图通过室内毒力测定和田间药效试验，筛选出对番茄晚疫病菌抑菌效果显著的杀菌剂，为田间防治番茄晚疫病提供参考。1.1.1 培养基和菌株 黑麦蔗糖琼脂培养基（Rye sucrose agar）用于番茄晚疫病菌的分离、培养及测定对杀菌剂的敏感性。配备抗菌素母液，称取2.0g氨比西林（氨苄青霉素ampicillin），1.0g制霉菌素（Nystatin）和0.2g利福霉素（利福平Rifamycin）加入到100ml二甲基亚砜中[DMSO，（CH3）2SO]；待基础培养基冷却至大约50℃，立即在每100ml培养基中加入1ml抗菌素母液。混匀，倒平皿。本研究是采用番茄晚疫病菌的菌株为F1。真菌菌株在PDA培养皿培养，在PDA试管斜面上保存。1.1.2 杀菌剂 50%烯酰吗啉（dimethomorph）可湿性粉剂（德国巴斯夫股份有限公司生产）、25%甲霜灵（metalaxyl）可湿性粉剂（江苏宝灵化工股份有限公司生产）、64%杀毒矾（oxadixyl mancozeb）可湿性粉剂（瑞士先正达作物保护有限公司生产）和75%百菌清（chlorothalonil）可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司生产），72%霜脲·锰锌（mancozeb+cymoxanil）可湿性粉剂（北京华戎生物激素厂生产）。1.1.3 供试作物和品种 番茄，品种为“合作903”。1.2.1 室内毒力测定 采用生长速率法[6]，将供试杀菌剂稀释成不同浓度梯度，浓度梯度由试验测定。最后计算抑制生长率，求出毒力回归方程，计算EC50和EC95。根据预备试验结果，确定各个供试杀菌剂的系列剂量分别为：50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂和64%杀毒矾可湿性粉剂的浓度梯度均为10μg/ml，5μg/ml，2.5μg/ml，1.25μg/ml，0.63 μg/ml；75%百菌清可湿性粉剂100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml，72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的浓度梯度为25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、1.5625μg/ml。各个杀菌剂的最高浓度配制方法分别为：50%烯酰吗啉可湿性粉剂称取1.0g溶于50ml水中，然后稀释100倍；25%甲霜灵可湿性粉剂称取1.0g溶于25ml水中，然后稀释100倍；64%杀毒矾可湿性粉剂称取1.0g溶于64ml水中，然后稀释100倍；75%百菌清可湿性粉剂称取1.0g溶于75ml水中，然后稀释10倍；72%霜脲·锰锌可湿性粉剂称取1.0g溶于72ml水中，然后稀释40倍。再倍半稀释至所需浓度。用取液器量取上述配好的溶液（每个剂量）3ml，加入事先溶化好的27ml黑麦培养基，充分混匀后倒在3个直径为9cm的灭过菌的培养皿中，凝固后在培养皿正中间接入直径6mm的番茄晚疫病菌饼。以上操作均在无菌操作台进行。置（18±0.5）℃、光照14h和黑暗10h的培养箱培养。当空白对照菌落扩展到整个培养皿时，测量各皿的菌落直径，取平均值后计算抑制率（%）。生长抑制率（%）=[（A-B）-（C-B）]/（A-B）×100%，其中A为对照菌落直径，B为菌饼直径，C为处理菌落直径。将抑制率转化为几率值，将剂量取对数，算出剂量—反应曲线方程，进一步算出EC50值和EC95值。1.2.2 田间药效试验 经室内毒力测定结果表明，25%甲霜灵WP，64%杀毒矾WP，50%烯酰吗啉WP室内测定的毒力均较高，为在田间进一步验证其防效，特进行田间药效试验。试验地位于武汉市洪山区青菱乡长江村，近几年每年都有番茄晚疫病发生，所有试验小区的栽培条件均匀一致。于2006年5月13日、19日晚疫病发生初期喷雾施药，试验期间共施药两次，此时为番茄结果期。通过预备试验，设置杀菌剂浓度25%甲霜灵WP稀释800倍（每亩制剂量93.75g），64%杀毒矾WP稀释800倍（每亩制剂量93.75g），50%烯酰吗啉WP稀释3000倍（每亩制剂量25g），以75%百菌清WP稀释600倍（每亩制剂量125g）作为对照药剂，另设清水对照。小区面积15m2，4次重复，随机区组排列，用水量75kg/667m2。试验期间气温21.93～33.86℃。第2次施药后7天调查各处理发病情况，每小区按对角线5点取样，每点2株，每株分上、中、下共调查10片叶，以每株每一叶片上的病斑面积占整个叶面积的百分率来分级，计算病指与防效。分级标准：0级，无病斑；1级，病斑面积在5%以下；3级，病斑面积占整个叶面积的6%～10%；5级，病斑面积占整个叶面积11%～20%；7级，病斑面积占整个叶面积21%～50%；9级，病斑面积占整个叶面积50%以上[8]。试验结果见表1。5种杀菌剂50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的EC50值分别为2.24μg/ml、1.83μg/ml、2.05μg/ml、21.33μg/ml和5.33μg/ml，EC95值分别为9.76μg/ml、7.76μg/ml、8.71μg/ml、85.60μg/ml和27.77μg/ml。按毒力高低排列分别为25%甲霜灵可湿性粉剂＞64%杀毒矾可湿性粉剂＞50%烯酰吗啉可湿性粉剂＞72%霜脲·锰锌可湿性粉剂＞75%百菌清可湿性粉剂。25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、50%烯酰吗啉可湿性粉剂室内测定的毒力显著高于75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂，可以为田间防治番茄晚疫病提供一定依据。杀菌剂剂量-反应曲线概率P值EC50（置信限）（μg/ml）EC95（置信限）（μg/ml）50%烯酰吗啉WPY=2.57x-0.900.242.24（1.99，2.53）9.76（7.87，12.91）25%甲霜灵WPY=2.62x-0.690.471.83（1.62，2.06）7.76（6.31，10.15）64%杀毒矾WPY=2.63x-0.820.312.05（1.82，2.32）8.71（7.06，11.41）75%百菌清WPY=2.72x-3.620.2221.33（19.05，23.94）85.60（69.82，111.11）72%霜脲·锰锌WPY=2.29x-1.670.205.33（4.67，6.07）27.77（21.77，38.20）表1 5种杀菌剂对番茄晚疫病室内毒力测定结果试验结果见表2，两次施药后的病指和防效，64%杀毒矾WP 800倍液为8.9和75.1%，25%甲霜灵WP 800倍液为9.9和72.5%，50%烯酰吗啉WP 3000倍液为10.6和70.4%，3种杀菌剂对番茄晚疫病有较好的控制作用，均显著高于对照农药75%百菌清WP 600倍液的防效，其差异均达极显著水平，是防治番茄晚疫病的有效杀菌剂。处理重复与防效ⅠⅡⅢⅣ平均防效（%）平均病指差异显著性5%1%64%杀毒矾WP800倍75.474.574.775.675.18.9aA25%甲霜灵WP800倍75.171.969.673.372.59.9ab50%烯酰吗啉WP3000倍70.870.669.670.870.410.6bA75百菌清WP600倍49.254.655.960.755.116.0cB表2 几种杀菌剂对番茄晚疫病的防治效果室内毒力测定结果仅说明该杀菌剂对番茄晚疫病菌在离体条件下的直接活性，田间的防治效果受到的影响因素很多，因此，室内的毒力测定结果需要在田间做进一步验证。田间试验结果表明，64%杀毒矾WP 800倍液，25%甲霜灵WP 800倍液，50%烯酰吗啉WP 3000倍液3种杀菌剂田间防治番茄晚疫病均有较好的防治效果。这几种杀菌剂对番茄无不良反应，不产生药害，建议在田间推广使用，推荐剂量64%杀毒矾WP 62.5～75ml/667m2，25%甲霜灵WP 62.5～75ml/667m2，50%烯酰吗啉WP 16.7～20ml/667m2。在实际应用中，应在病害流行之前，即发病初期开始用药，当气候条件有利于病害发生流行时，每隔7～10天后进行下一次施药，连续喷药2～3次，使用浓度以推荐浓度为宜，并注意不同杀菌剂的交替使用，以达到更好的防治效果。

玉米是世界第三大粮食作物，在农业生产中占有重要的地位；也是我国北方和西南山区及其他干旱地区栽种的主要粮食作物之一。玉米生长过程中易受多种病虫为害，其中玉米丝黑穗病、瘤黑粉病和小斑病是广泛流行于各玉米产区的3种主要病害，近年来有不断传播蔓延的趋势。种子带菌是病害传播和流行的重要途径之一，了解北京地区玉米主栽品种种子带菌情况，以及种子带菌量和病害发生的关系，对防控这3种病害有着重要的实际意义。本研究以玉米种子为研究对象，筛选出适合检测3种病原菌的检测方法，检测了北京地区玉米主栽品种的带菌情况，并通过温室盆栽试验，初步研究了种子表面携带3种病原菌的负荷量和病害发生情况的关系。本研究比较研究了洗涤法、滤纸法、冷冻滤纸法和PDA培养法5种种子检测方法。结果表明，洗涤法适用于检测种子表面携带的玉米丝黑穗病菌和瘤黑粉病菌冬孢子；冷冻滤纸法和PDA培养法可以用以检测玉米小斑病菌。采用上述方法检测了北京地区7个玉米主栽品种的带菌情况，其中在京科25、农大3138、中糯301和高油4515这4个品种种子表面检测到了黑粉菌的孢子，不同品种的带菌率有所差异，高油4515携带瘤黑粉菌的菌量达到了421.1个/粒种子，丝黑穗菌的菌量为168.4个/粒种子；中糯301和高油4515还检测出带有玉米小斑病菌，带菌率分别为1.4%和1.0%，寄藏部位为胚乳；种子携带的其他真菌主要有镰刀菌属、链格孢属、枝孢霉属、曲霉属、青霉属和根霉属。在检测中我们发现，镰刀菌是种子携带的主要真菌，其中昌甜100（正交），高油4515品种中镰刀菌的携带量达到了105个/粒种子。已有相关研究报道表明，镰刀菌的携带量与种子的活力有关系，因此对于玉米种子携带镰刀菌的风险需要引起重视。选择感、抗和高抗3种抗性水平的玉米品种，采用浸种法在种子表面分别接种10个/粒、102个/粒、103个/粒、104个/粒和105个/粒5个浓度的3种病原菌孢子，温室条件下进行盆栽试验，结果表明，不同抗性的玉米品种接种系列浓度的病原菌孢子后发病情况不同：接种瘤黑粉病菌的处理中，感病品种中糯301在接种量为103个/粒时，抗病品种农大108在接种量为105个/粒时，而高抗品种郑单958在接种量为106个/粒时才分别开始发病；接种丝黑穗病菌孢子的处理与上述结果相近，感病品种中糯301在接种量为103个/粒时、抗病品种农大108接种量为106个/粒时开始发病，而高抗品种郑单958在所有接种量均未发病。接种小斑病菌的各处理没有病害发生，分析原因应该与病害的发生规律有关，小斑病是一个典型的气传病害，种子带菌不容易直接导致病害的发生，但是种子带菌会有增加田间初侵染的来源，同样有造成病害流行的风险。

灰霉病（gray mold）是番茄生产中一种重要的气传病害，其病原为灰葡萄孢属（Botrytis cinerea）真菌，寄主范围广，再侵染频繁，为害严重。化学防治仍是目前生产中防控该病害的主要手段，其中以甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为代表的呼吸作用抑制剂近年来在灰霉病防治实践中显现出了良好的防效，而线粒体作为真核细胞呼吸作用的主要场所，在线粒体上合成的ATP提供了细胞生命活动所需的大部分能量。为此，进行高纯度线粒体的分离对于开展呼吸抑制剂类杀菌剂的作用机制研究[1～5]具有十分重要的意义。至今，从病原真菌中分离获得高纯度线粒体的方法尚不成熟，国内外一般采用从动物或高等植物中分离得到的线粒体作为替代品来进行研究。本研究拟借鉴相关研究[6～7]方法，采用机械破壁及差速离心的方法从番茄灰霉病菌中分离获得线粒体，并对其进行呼吸测定，以确证获得的线粒体是否具备完整的结构和功能。现将研究结果报道如下。1.1.1 番茄灰霉病菌（B.cinerea）菌株NJ-9，由中国农业大学植物病理学系种子病理学和杀菌剂药理学实验室提供。1.1.2 供试药剂 α-酮戊二酸，NADHNa2（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐）为Roche公司产品，ADPNa2（5′-腺苷二磷酸二钠盐）为Sigma公司产品。线粒体分离液的配制[9]：0.5mol/L 蔗糖，5mmol/L半胱氨酸，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.3%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.1mol/L（pH值7.4）磷酸盐缓冲液；线粒体保持液（洗液）的配制[9]：0.5mol/L 蔗糖，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.3%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.1mol/L（pH 7.4）的磷酸盐缓冲液；线粒体呼吸测定的反应液[9]：0.5mol/L 蔗糖，10mmol/L KCl，5mmol/L MgCl2，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.1%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.01mol/L（pH 7.2）的磷酸盐缓冲液。1.1.3 菌体的培养 将浓度为8×106个/ml的孢子悬浮液接种到1L的复合盐液体培养基（SSY）[9]（10g可溶性淀粉，2g KH2PO4，1.5g K2HPO4，0.5g MgSO·7H2O4，1g（NH4）2SO4，2g 酵母粉，1L去离子水，pH 6.2）中，置于23℃，150rpm条件下摇培24h。1.1.4 供试仪器 Oxytherm氧电极（Hansatech Instruments Ltd.），DHZ-D冷冻恒温振荡器（江苏太仓实验设备厂），高速低温离心机（Beckman Coulter AvantiR J-E）。1.2.1 灰霉病菌孢子的获得 将菌株NJ-9接种至MEA（麦芽糖20g，酵母粉5g，琼脂粉14g，1L去离子水）培养基上，25℃下黑暗培养5～7 天后，放置于日光灯和长波长紫外灯（黑光灯）下，12h轮流交替照射7～14天，产生大量的分生孢子，备用[8]。1.2.2 线粒体的分离 通过真空抽滤的方法收集幼嫩菌丝，依次用4℃的去离子水冲洗两次，再用线粒体分离液冲洗。随后各操作中所用的器材必须在4℃下经过预冷处理，操作过程均需在0～4℃下进行。将用线粒体分离液预洗得到的菌丝悬浮在3倍体积的分离液中，分别采用以下两种方式进行破碎细胞壁：（1）杵状玻璃匀浆器法：每30～40g菌丝用100ml的分离液悬浮，用杵摩擦20次左右，混合到匀浆物均一、平滑即可。每次时间不要超过2～3min，整个样品处理的时间不要超过30min。立即将得到的匀浆物倒入50ml的离心管中，于2000g离心25min，取上清液于7000g转速下离心20min后取上清液于12000g再次离心15min，最后小心弃去上清，沉淀即为分离到的线粒体，外观为浅黄色胶状物。将线粒体悬浮在200μl的线粒体保持液中，置于冰上备用，放置时间不能超过3～4h，避免线粒体的降解。（2）高速组织匀浆器法：采用高速组织匀浆机（恒定功率220W），破碎菌丝，每次破碎时间15s，破碎3次，中间的隔1min（防止匀将机刀口发热影响线粒体的分离，将匀浆物用双层预冷的湿纱布快速过滤，过滤的时间不要超过30s，立即将匀浆物倒入50ml的离心管中，于1200g下离心20min；取上清于6000g离心20min后再取上清于12000g离心15min，小心弃去上清，沉淀即为分离到的线粒体。1.2.3 氧消耗量的测定 采用极谱法在25℃条件下使用Oxytherm氧电极进行测定，标准反应液2ml，加入线粒体50μl（蛋白质的含量大约为0.3mg），反应液中氧饱和的最大浓度是226μmol/L，所有的底物都溶解到反应液中，依据Estabrook[10]的方法计算RCR和P/O值。提取过程保持0～4℃低温条件下，杵状玻璃匀浆、高速组织匀浆两种破壁方法均可从番茄灰霉病菌幼嫩的菌丝中分离得到紧密偶联的线粒体。全玻璃杵状匀浆器手工破壁操作耗费人力，需要的菌丝量较少，从10g到几十克湿重菌丝都能分离到完整的线粒体。通常60～80g湿重菌丝即可以分离得到满足试验需要的线粒体。高速匀浆器省力快速，但是在匀浆器高速转动时易产热可导致分离物的降解，操作过程中持续时间不能过长，必要时应使用循环冷却水降温或置于低温环境下操作；同时该法需要的菌丝量也较多，以50g 以上的湿重菌丝为宜，菌丝量少时容易在破碎过程中使线粒体结构受到破坏，从而影响提取效果。番茄灰霉病菌线粒体的底物利用，呼吸控制率和磷氧值测定结果见表1。当以外源的NADH和α-酮戊二酸作底物被氧化时，状态3（在线粒体中加入底物及ADP后测定的线粒体呼吸速率）的呼吸数率明显增加，反映了在ADP刺激下线粒体功能增强的程度；两种底物的呼吸控制率（RCR）值都在3.1～3.3之间，高的呼吸控制率值表明线粒体中电子传递与氧化磷酸化紧密偶联；加入NADH做外源的呼吸底物时，磷氧比值（P/O）是1.3～1.7，表明有2个氧化磷酸化位点，即ATP生成有两个部位；α-酮戊二酸的磷氧比值（P/O）是2.2～2.5，表明有3个氧化磷酸化位点，即ATP生成有3个部位。图1表示两种破壁方法获得线粒体在外援NADH电子供体下呼吸特征图。以上研究结果表明分离的高纯度线粒体具有在活细胞中对等的生物功能，可作为线粒体生物学研究的适宜材料。MethodsofdisruptionSubstratesState3respirationrates(nmolO2/min)(mgprotein)Respiratorycontrolrations(RCR)ADP/OrationsAll-glassNADH90.16±203.8±0.11.7±0.2Potter-Elvehjemhomogenizerα-ketoglutarate175.43±453.3±0.62.2±0.1AwaringNADH118.96±303.5±0.71.3±0.1blendorα-ketoglutarate198.17±653.1±0.52.5±0.2Table 1 Respiration properties of mitochondrial isolated from mycelia of Botrytis cinereaaFigure 1 oxidation of NADH and α-ketoglutarate by mitochondrial isolated from mycelial of B.cinerea, Concentration of substrates were 10mmol/L α-ketoglutarate,2mmol/L NADHNa2, the ADP concentration was 200μmol/L and reaction were carried with 0.2~0.4mg mitochondrial protein本研究获得以下结论：（1）采用杵状玻璃匀浆器和高速组织匀浆机两种机械力可以有效破碎番茄灰霉病菌的细胞壁，借助梯度离心可以实现番茄灰霉病菌线粒体的有效分离；（2）使用本方法获得的番茄灰霉病菌线粒体结构完整、功能齐备，具有在活细胞中对等的生物功能，可作为线粒体生物学研究的适宜材料。（3）B.cinerea在培养液中生长很缓慢，选取生长代谢最旺盛的菌丝，有利于线粒体的分离。目前常用的破碎细胞方法包括传统的机械法（如匀浆、研磨、压榨、研磨、超声等）和非机械法（包括酶溶、冻融、化学等），都有其适用范围和优缺点，选择的原则是该方法不影响目标蛋白和产物的结构和功能。本文除采用上述两种机械破壁方法外，也曾尝试过超声波破壁方法以及采用蜗牛酶和纤维素酶进行酶解处理以获得原生质体的方法，但均没有获得理想的结果，推测可能与真菌细胞壁较厚，或使用的降解酶的降解特点有关。有关线粒体生物学和呼吸动力学的研究报道[9]表明，RCR 比ADP/O比值更能反映线粒体功能的完整性和氧化磷酸化的效率，ADP/O值是指线粒体每吸收一克原子氧的同时，生成ATP 的克分子数的比值，它反映线粒体的能量转化效率。RCR是表征线粒体结构、功能完整性及氧化磷酸化效率的指标。本文研究表明外源的NADH仅有2个氧化磷酸化位点，即只能生成2个ATP，然而，有文献报道[11]灰霉病菌的线粒体在氧化NADH的电子传递链中有3个磷酸化位点。因此，需要进一步研究不同的呼吸抑制剂和氧化磷酸化抑制剂在灰霉菌线粒体的电子传递链的各种抑制效果。

白粉病是我国小麦、蔬菜及花卉等作物上的一种常见重要病害。气候适宜时，该病在湖北麦区以及大棚瓜类蔬菜上分别造成小麦白粉病和瓜类白粉病流行，损失严重[1～2]。三唑酮、烯唑醇、福美双、氟化硅等是我国防治白粉病的常用药剂，而一些研究表明，在某地区已发现白粉病对这些药剂防效有所降低，已产生一定程度的抗药性[3～5]。随着人们对可持续发展和环境污染的高度重视，开发对环境友好且又能延缓抗药性产生的杀菌剂成为农药研究的一个新方向。为寻找和开发替代三唑酮的高效、无公害的杀菌剂，由本课题组和内蒙古清源保科技有限公司联合研制了用于防治植物白粉病的植物源提取物Vegard（0.5%大黄素水剂），该制剂对黄瓜白粉病和小麦白粉病室内活性明显，为明确该药剂的田间效果，对该制剂进行了防治小麦和甜瓜白粉病的试验，现将结果报道如下。0.5%Vegard水剂，内蒙古清源保科技有限公司生产；15%三唑酮可湿性粉剂，江苏利民化工有限公司生产；共设6个处理：①Vegard 500倍液；②Vegard 200倍液；③Vegard 100倍液；④Vegard 50倍液；⑤15%三唑酮可湿性粉剂1000倍液；⑥ 清水对照。小麦白粉病防治试验设在湖北省农业科学院南湖试验农场进行。小麦品种为“郑98”，高感白粉病，条播，试验每个处理3次重复，小区面积30m2，小区随机区组排列，亩施5kg尿素作拔节肥。甜瓜白粉病试验在湖北省农业科学院新科源温室内进行，供试甜瓜为感白粉病品种“金红”，营养钵育苗后移植至温室，行距1m，株距0.5m，小区面积15m2，每个处理3次重复，随机排列。分别在小麦始见零星白粉病斑期和甜瓜白粉病发病初期分别进行施药，施药量为小麦每亩对水50kg，甜瓜每亩对水60kg喷雾，喷药时尽量做到叶面均匀喷透。喷雾器械为426-8型压缩式喷雾器。对于小麦白粉病，药前调查病情基数，药后14天作最终病情结果调查，各小区对角线五点法取样，每点定15株，采用0～9级分级标准，每株调查上3叶。对于甜瓜白粉病，每小区对角线五点法取样，每点取2株，采用0～9级分级标准，调查每株上所有叶片的病情（每小区约调查80～100片叶），调查时期分别为药前，药后7天、10天和14天。病情分级标准、病指、药效的计算方法参照《农药试验田间药效准则》进行，并对防效进行平均值的多重比较（SSR法）。从表1可以看出，Vegard对小麦白粉病具有明显的保护效果，采用该药剂50～500倍液，于始见病期施药1次即可达到76.2%～94.2%的效果，其中该制剂200倍液、100倍液和50倍液药液的防效间差异不显著，该制剂100倍液和50倍液处理的防效与对照药剂15%三唑酮可湿性粉剂1000倍液的防效相当。结果表明，Vegard 50倍液和100倍液两个浓度处理的防效在用药后7天、10天、14天均在90%以上；200倍液处理在用药后7天和10天调查的防效分别为89.9%和89.1%，14天后的防效也达80%以上；500倍浓度在施药后7天和10天的防效分别为84.0%和83.6%，14天的防效下降为77.8%（表2）。三唑酮对甜瓜白粉病防效不理想，该药剂在药后7天、10天、14天的防效为79%、66%和30%，明显低于Vegard的防效。Vegard对瓜类白粉病具有良好的防治效果且残效期较长。500倍浓度的残效期为10天，比常规药剂三唑酮的残效长3～4天。100倍液和50倍液处理药后14天绝对病情指数未有发展，表明在这两个浓度下其残效长于14天。处理Treatment稀释倍数Dilution药前病指Diseaseindexbeforeapplication药后14天病指Diseaseindexafterapplication14days防效（%）Effect显著性Significant0.5%Vegard水剂0.5%vegard500倍500×0.221.6476.2c200倍200×0.241.3383.6bc100倍100×0.220.5592.2a50倍500×0.160.3194.2a15%三唑酮可湿粉15%triadimefon1000倍1000×0.160.2495.8a空白对照Watercontrol—0.248.32——表1 Vegard防治小麦白粉病试验结果Table 1 Effect of Vegard on wheat powdery mildew处理Treatment稀释倍数Dilution药前病指Diseaseindexbeforeapplication药后7天病指Diseaseindexafterapplication7days防效（%）Effect药后10天病指Diseaseindexafterapplication10days防效（%）Effect药后14天病指Diseaseindexafterapplication14days防效（%）Effect0.5%Vegard水剂0.5%vegard500倍500×7.7011.5584.0c13.2383.6c20.4377.8c200倍200×8.037.5589.9b9.2589.1b16.1383.2bc100倍100×7.053.5594.6a6.5091.5b8.5390.0ab50倍50×7.983.3595.5a3.0096.5a4.9894.7a15%三唑酮可湿粉剂15%triadimefon1000倍1000×7.6014.5379.1d27.3366.0d63.1830.1d空白对照Watercontrol—7.6071.63—81.20—91.63—表2 Vegard防治甜瓜白粉病试验结果Table 2 Effect of Vegard on melons powdery mildew随着人们对环保意识的高度关注，无公害农药的研制成为农药开发领域的一个新方向。本课题组和内蒙古清源保科技有限公司联合开发的无公害植物源提取物Vegard田间防治小麦和甜瓜白粉病效果明显。在发病初期喷施，Vegard 200倍液对小麦白粉病可达83.6%的效果，100倍液和50倍液防效可达90%以上的效果，其防效与15%三唑酮1000倍液的防效相当。该制剂对瓜类白粉病防效亦突出，且防效明显超过三唑酮常规用量的防效，持效期长。从防治成本考虑，在防治小麦白粉病和瓜类白粉病上可选用Vegard 100～200倍液在发病初期喷施，10～12天用药1次，则可取得理想的效果。

利用植物有益内生细菌进行植物病害生物防治和提高作物产量是当前农用微生物研究的一个热点。在我国，以植物有益内生细菌为主体的植物微生态制剂已经进入田间的农业生产应用，取得了良好的经济和生态效益。细菌在植物上发挥其功能的关键是细菌可以在作用部位很好的定殖。研究发现，在细菌与植物相互作用时，会引起该区域的氧自由基浓度的急剧升高；同时植物也会代谢分泌出一些酚类物质，这些物质都会产生氧自由基[1，2]。在该环境中定殖的细菌必须克服这种氧自由基对细胞的毒性。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）是细胞抗氧自由基毒性的一种关键酶。SOD广泛存在于生物体内，催化O·2歧化为H2O2 和O2。按照结合的不同金属离子，SOD主要分为Mn-SOD、Fe-SOD和CuZn-SOD[3]。其中，Mn-SOD和Fe-SOD在细胞体内发挥功能，而CuZn-SOD定位在胞壁空间或者胞外以清除细胞膜外的氧自由基[4]。Bacillus cereus 905是本研究室从小麦体内分离获得的一株具有很好的促生和防病效果的细菌，在小麦体内及根围定殖能力强。为分析其定殖的分子机制，根据已公布的蜡样芽孢杆菌的全基因组序列及本实验室已获得的B.cereus M22的CuZn-SOD基因[5]，推测在B.cereus 905中也存在CuZn-SOD基因。本研究试图从氧自由基毒性角度探讨CuZn-SOD在细菌与宿主相互作用时发挥的重要功能。比对Genbank发表的几个B.cereus菌株的CuZn-SOD基因序列，根据两端高度保守的序列设计引物，利用PCR方法扩增B.cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，化学抑制法验证蛋白种类。以B.cereus 905的基因组DNA为模板进行PCR，得到了B.cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。该基因由537 bp组成，编码179个氨基酸残基。根据该蛋白的分子量大小和pET-22b载体中的多克隆位点上游pelB前导序列和下游His-tag序列，预测表达出的蛋白大小约为23kD。序列比对发现其与B.cereus M22同源性高至96%[5]，BLAST结果也显示其与其他的几株蜡样芽孢杆菌的CuZn-SOD基因的同源性在90%以上。在sodC推定的179个氨基酸残基中，甘氨酸（G）含量最高，达到12.29%（22/179，mol/mol），且在序列中均匀分布。在推定氨基酸序列中，不含酪氨酸（Y）和色氨酸（W），这与其他CuZn-SOD序列特征一致。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，NBT反相染色后，较未诱导样品相比，诱导后的细胞裂解液出现一条明显的亮带，表明该基因表达出的蛋白表现出SOD活性（图1）。SOD酶活测定也发现诱导后细胞裂解液的SOD酶活有了显著的提高，化学抑制法得出诱导出的SOD蛋白经KCN和H2O2处理后，其活性受到很大程度上的抑制，而氯仿/乙醇对其活性没有影响，确定了诱导表达出的蛋白为CuZn-SOD（图2）。Figure 1 Enzymatic activity tests of E.coli BL21(pET-22b-sodC) by Native-PAGEFigure 2 Identification of CuZn-SOD with chemical inhibitant methods超氧化物歧化酶普遍存在于所有的需氧生物中，从最低等的原核生物到高度复杂的人脑，都存在SOD的防御反应。B.cereus 905是一种植物内生细菌。有数据发现在细菌与植物互作及植物体内都可能有超氧阴离子的存在。B.cereus 905很可能依靠其CuZn-SOD的活性清除胞外的氧自由基以保证该细菌可以在植物体内很好的定殖。作为非病原菌的植物内生细菌，CuZn-SOD可能在其侵入及定殖过程中扮演着重要角色，更明确的结论需要下一步基因缺失后的定殖能力的比较分析。