稻曲病Usitilaginoidea vriens是影响水稻产量及品质的重要穗部病害。稻曲病厚垣孢子可以侵染水稻，引起稻粒发病[1，2]。陈永坚[2]用室内越冬的厚垣抱子接种水稻种子、芽鞘、苗期叶片、秧苗根系，穗苞均可引起稻曲病的发生，说明稻曲病很有可能在种子萌发或插秧时已侵染水稻，水稻生长后期穗部发病，是一种系统性侵染病害。也有研究认为稻曲病不是系统侵染的病害[3，4]。为进一步明确稻曲病的侵染方式问题，有必要用更严谨的试验加以研究，为稻曲病的防治及抗源筛选提供的理论指导。于2007年8月1日在湖北省宜昌市远安县莲花镇进行套袋试验。莲花镇海拔510m，峡谷地貌，7、8月份日平均温度低于30℃，8月份降雨量超过212mm，是稻曲病的重要疫区，田间累积了大量的厚垣孢子。供试水稻品种为“粤优938”，在水稻圆杆拔节期，用40cm×10cm的纸袋套住单株水稻，以避免田间厚垣孢子的自然侵染，套袋共计68穗，于水稻乳熟期回收套袋稻穗并逐一检查稻曲病的发病情况。1.2.1 供试菌源 将4℃保存的2006年中稻“粤优938”上采集的稻曲球粉碎后，用2%的蔗糖溶液配置为厚垣孢子悬浮液A，置于28℃的培养箱（LRH-250型，广东省医疗器械厂）中保存24h备用；将2007年采集的早稻“金优402”上的稻曲球，粉碎后用2%的蔗糖溶液配置为厚垣孢子的悬浮液B，过滤后加入少量土温-20，在涡漩振荡器上振荡5分钟，在28℃条件下保存24h。以上厚垣孢子悬浮液在100×显微镜下一个视野内有约1000个厚垣孢子。1.2.2 供试水稻 2007年5月9日将水稻种子“粤优938”在自然日光下暴晒8h后用杀菌剂浸泡72h，然后置于培养皿（φ=9cm）内在28℃培养箱（LRH-250型，广东省医疗器械厂）中催芽，72h后播种育苗，2007年6月8号移栽插秧。1.2.3 方法 试验地点位于湖北省农科院网室内，网室周边农田环境中没有稻曲病疫情发生。试验用土壤经200℃电热鼓风干燥箱（HN101-1型，南通沪南科学仪器有限公司）灭菌1h后，分装入瓷盆（φ=25cm，h=32cm）中备用，瓷盆置于聚乙烯薄膜棚（长×宽×高=4×3×1.5m）内，棚顶敞开，用遮阳黑网覆盖。供试水稻做作以下处理：1）种子带菌：经消毒后的种子催芽时用少量厚垣孢子液A浸泡，2007年6月8日移栽入装有无菌土的瓷盆中。2）根部带菌：年6月8日插秧时，用清水洗净秧苗根部，在厚垣孢子液A中浸泡8h后移栽入装有无菌土的瓷盆中。3）穗期接种：2007年9月4日下午6时，将处于破口或杨花初期的水稻用手提猴头喷雾器在穗部喷雾接种厚垣孢子液B，喷雾后用聚乙烯薄膜将稻穗封闭保湿48h。4）不做任何接种处理。以上每处理2个瓷盆，每瓷盆内3兜水稻，分蘖后期每瓷盆内水稻有30～40株。水稻生长期正常管理，同时在水稻孕穗期以后，每天喷水两次，保持环境的湿度，同时观察记录稻曲病的发病情况。田间套袋试验结果：在水稻乳熟期回收的68个套袋稻穗中发病稻穗有38个，病穗率为55.9%，按照唐春生[5]的病情分级标准，病情指数为24.58。网室盆栽试验结果：在水稻灌浆初期，浸根处理的水稻首先发病，稻粒内外颖壳接缝处出现白色的菌丝团，逐渐长成白色球状物，形成稻曲球，4d后露出黄色的厚垣孢子，厚垣孢子颜色由鲜黄色逐渐转暗。浸根处理发病一个星期后种子带菌及喷雾接种处理都开始出现稻曲球。种子带菌、根部带菌及破口期喷雾接种带菌的病穗率分别为：25.0%、1.6%、5.8%。王国良[1]认为稻曲病厚垣孢子主要在水稻破口前1～4天至破口时从水稻柱头侵入引起发病。本次田间套袋试验中，在水稻圆秆拔节期用纸袋隔离了田间厚垣孢子的自然侵染，但后期调查病穗率仍高达55.88%，说明稻曲病厚垣孢子在水稻生长早期可能已被上年累积在田间的厚垣孢子侵染。在网室试验中对土壤及种子都进行了严格消毒，土壤中无自然存在的稻曲病厚垣孢子；试验中对照没有发病排除了种子自身带菌的情况。在水稻育秧及移栽以后的生长阶段都实施了隔离措施，避免了未知自然侵染对结果的干扰。试验中无论是水稻营养生长期还是生殖生长期接种，在水稻生长后期都出现了稻曲病粒，而且试验结果以厚垣孢子接种水稻种子的发病率最高，进一步说明了厚垣孢子在水稻生长早期侵染的可能性。试验中接种水稻种子所用的厚垣孢子源于2006年的中稻稻曲病粒，穗部接种菌源是2007年早稻病粒，说明上茬水稻上的稻曲病厚垣孢子可能是田间的重要侵染源。以上两试验结果表明稻曲病厚垣孢子侵染水稻的方式至少包括两种：1）系统侵染：土壤中或依附于种子表面的厚垣孢子，在水稻种子萌发初期侵入水稻胚内或在插秧时侵染水稻根部，灌浆期出现穗部病症；2）局部侵染：在水稻孕穗期，直接侵染穗部，灌浆期发病，而且以系统侵染为主要侵染方式。因此郭荣华等根据水稻穗部接种的结果及王国良的试验结论认为稻曲病不是系统侵染病害值得商榷。王疏等[6]用Nested PCR方法成功检测出水稻生殖生长期稻曲病在植株茎秆、穗部的分布特征，为研究稻曲病的侵染提供了分子生物学方法。故对于本次试验中水稻材料，可以用分子生物学手段检测水稻不同生长期稻曲病菌在水稻根部、茎秆、叶片及穗部的分布情况从而进一步明确稻曲病的侵染方式。

桑叶是家蚕的唯一饲料，桑树是蚕丝产业的物质基础。桑树生长在各种不同气候和地貌的生态环境，桑树萎缩病是蚕桑生产最严重的病害之一，主要有黄化型、萎缩型和花叶型3种类型，分布于中国、日本、韩国、格鲁吉亚、越南等蚕桑生产国，特别是中国和日本受害最为严重。桑树萎缩病在我国主要蚕桑区江浙、湖广及北方的山东、陕西等省均有分布，对蚕桑生产造成严重甚至毁灭性的危害，且防治比较困难。本研究对山东省发生的症状为萎缩型的桑萎缩病，采用PCR技术对其16S rDNA、延伸因子和核糖体蛋白基因片段进行扩增和直接测序，并且与已知的植原体各组中代表的植原体序列进行同源性比较，确定了该分离物的亚组分类地位。现将研究结果报道如下。表现萎缩型症状的发病桑树材料采自山东省宁阳市。克隆载体pMD18-T、PCR产物回收试剂盒、限制性内切酶及其他酶类等分子生物学试剂产品均购自TaKaRa公司。提取方法参照漆艳香等[1]的方法进行，总DNA于-20℃保存备用。植原体16S rDNA基因扩增采用Lee等[2]报道的通用引物R16mF2/R16mR1，植原体延伸因子基因的引物对fTufu/rTufu序列及核糖体蛋白（rp）基因的引物对rpF1/rpR1序列分别根据Schneider等[3]和Lim等[4]文献设计合成（Table 1）。以提取得病组织总DNA为模板进行PCR扩增。NamePrImersequenceTm(℃)ReferencesR16mF25′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′60[3]R16mR15′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′60[3]fTufu5′-CCTGAAGAAAGAGAACGTGG-3′50[4]rTufu5′-CGCAAATAGAATTGAGGACG-3′50[4]rpF15′-GGACATAAGTTAGGTGAATTT-3′55[5]rpR15′-ACGATATTTAGTTCTTTTTGG-3′55[5]Table 1 Primers used in this research to amplify three genePCR产物采用1%琼脂糖凝胶电泳检测，并用PCR纯化试剂盒进行纯化回收。PCR产物回收后与pMD18-T连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取筛选平板上的白色菌落培养，提取质粒，经PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒送上海英骏生物技术有限公司测序。将所得DNA 序列输入GenBank进行Blast检索，采用DNAMAN和MEGA3.1软件对所得到的核苷酸序列与GenBank中收录的相应基因的核苷酸序列进行比对分析，并构建系统进化树。以带有桑萎缩病原（Mulberry dwarf-Ningyang，MDNY）的发病桑树病组织总DNA为模板，16S rDNA引物经直接PCR扩增，得到长度为1.5kb的片段，延伸因子基因引物经PCR扩增，得到长度为0.8kb的片段，PCR扩增核糖体蛋白基因，得到长度为1.2kb的片段，与预期的结果一致，表明该病组织中存在植原体。对含有目标外源片断的重组质粒进行序列测定，扩增得到16S rDNA基因片断为1431bp；延伸因子基因片断为842bp，共编码280个氨基酸；核糖体蛋白基因片断为1249bp，DNAMAN软件分析表明该序列包括部分rps19和全部rp122和rps3基因。将MDNY的16S rDNA序列与GenBank中22个植原体分离物16S rDNA的核苷酸序列进行比对和构建系统进化树，该分离物与植原体的16S rI组处于同一个分支，与16S rI-B和16S rI-D亚组同源性最高。该分离物MDNY的延伸因子基因序列与GenBank中植原体16S rI组的7个亚组分离物延伸因子基因的核苷酸序列进行比对和构建系统进化树（Figure 1）。从系统进化树中可以看出，该分离物MDNY与16S rI-B和16S rI-D亚组处于同一分支，同源性最高，与16S rDNA的结果一致。Figure 1 Phylogenetic tree of MDNY based on the elongation factor gene sequences using neighbor-joining in MEGA3.1该分离物MDNY的核糖体蛋白基因（rp）序列与GenBank中植原体16S rI组的6个亚组分离物核糖体蛋白基因的核苷酸序列进行比对并构建系统发育树（Figure 2），从系统进化树中可以看出，该分离物与16S rI-D 的Paulownia witches-broom处于同一分支，同源性最高，确定了该分离物的亚组分类地位。Figure 2 Phylogenetic tree of MDNY based on the rIbosomal protein gene sequences using neighbor-joining in MEGA3.1夏志松等对桑黄化性萎缩病病原体16S rRNA基因序列进行了分析[5]，而刘清神等对广州桑萎缩病植原体进行检测时确定所检测的桑树植原体属于16S rI组[6]，没有确定桑萎缩植原体的亚组分类地位。本研究对分离物MDNY的16S rDNA和延伸因子基因构建系统发育树，确定该分离物与16S rI-B和16S rI-D的同源性最高。通过核糖体蛋白基因构建系统发育树表明该分离物MDNY属于16S rI-D亚组，进一步明确了其亚组分类地位。20世纪80年代至今，由于分子生物学技术，特别是分子克隆和PCR技术的应用大大加快了包括植原体在内的细菌系统学研究进展。目前植原体的分类16S rDNA是一种非常有效的手段，但对于16S rDNA类群内的进一步划分，用16S rDNA类群作为分类标准显得过于保守，延伸因子和核蛋白基因序列可以作为系统学研究的依据。Schneider等[7]对STOL类群和AY类群的16S rRNA和延伸因子基因进行序列分析，利用延伸因子基因比16SrRNA序列建立的遗传距离要远。Lee等[8]对植原体各亚组的16S rRNA和核糖体蛋白基因进行了分析，证明16S rRNA和核糖体蛋白基因序列分析可以作为植原体鉴定和分类的依据。本试验以16S rDNA基因，延伸因子基因及核糖体蛋白基因作为分类依据，在亚组水平明确了桑树萎缩病的分类地位，为今后研究桑树萎缩病植原体的来源、进化关系及其致病的分子机理提供了理论依据。

利用4个抗感杂交组合 （‘富士’ב金冠’ ‘金冠’ב富士’‘嘎拉’ב富士’ ‘富士’בQF-2’） 进行了苹果炭疽菌叶枯病抗性鉴定和遗传分析。结果表明，4 个群体中抗、感植株的分离比分别符合1∶1、1∶1、0∶1和1∶0的理论比值，初步推测苹果抗炭疽菌叶枯病性状受隐性单基因控制，抗病基因型为 rr，感病基因型为 RR和Rr。由此推测供试杂交群体的亲本品种 （系） ‘富士’ ‘金冠’‘嘎拉’ ‘QF-2’ 的基因型分别为rr、Rr、RR和rr。利用207株 ‘金冠’ב富士’ 的杂交后代为试材，构建了抗感基因池用于BSA分析。从HiDRAS和GenBank网站上下载了300 对均匀覆盖苹果染色体组的 SSR 引物，通过在亲本及抗感池中的初步筛选，将产生多态性条带的引物进行群体验证，获得了两个位于苹果15号连锁群上与抗病性状相关的分子标记 CH01d08 和 CH05g05。通过MapMarker 4.0 软件分析，将这两个标记定位于Rgls基因两侧，重组率分别为7.3%和 23.2%。依据苹果基因组 CH01d08 和 CH05g05 标记之间的序列，自行设计了276对SSR引物。经过亲本及抗感池的初步筛选及群体验证，最终筛选出 9 对与 R gls基因位点连锁的分子标记。将表型抗性鉴定结果与标记基因型数据相结合采用 JoinMap ver.4.0软件，完成了SSR标记与Rgls基因位点的连锁图谱。这11个标记覆盖了49.2 cM的遗传距离，最近的标记为 S0405127 遗传距离为 0.5 cM。Rgls基因位点两侧最近的两个标记 S0304673 和 S0405127 之间的物理距离为500kb。以‘金冠’和‘富士’及‘金冠’ב富士’的F1代群体中20株极端抗和20株极端感炭疽菌叶枯病的单株为材料，利用全基因组重测序（whole genome re-sequencing，WGR）技术，结合混合分组分析法（bulked szegregate analysis，BSA）共开发SNP位点3399950个，InDel位点573040个，SNP位点位于内含子上的465317个，位于外显子上的13029个，其中同义变异7330个，InDel位点位于内含子上的108996个，位于外显子上的19957个，其中插入或缺失3或3的整数倍的碱基，不改变蛋白质的编码框的有6928个。在全基因组范围内共得到33个候选的SNP位点及所对应的29个候选基因。通过对△（SNP-index）的筛选，将抗性基因位点快速定位于苹果第15条染色体的2～5Mb的区域内，结合SSR标记定位结果，最终锁定18个SNP位点、30个InDel位点，以及5个候选基因。通过对5个候选基因在接种病原菌后不同时间点的表达量差异及生物信息学分析，结果显示，基因MDP0000686092、MDP0000205432、MDP0000120033为功能未知蛋白，基因MDP0000945764具有CCHC型锌指结构，是丝氨酸/精氨酸富集剪接因子，具有核酸绑定、锌离子结合分子功能，参与RNA剪切生物过程，调节基因产物的表达。基因MDP0000864010具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸盐）NAD（P）绑定区域，属于NAD依赖差向异构酶/脱氢酶家族，具有辅酶绑定功能，可能与鼠李糖生物合成酶1有关。通过qRT-PCR验证，5个候选基因均不同程度的响应炭疽叶枯病病原菌的诱导，是苹果炭疽叶枯病抗病相关基因。通过高分辨熔解曲线 （HRM） 分析技术对SNP 及InDel标记进行验证。对SNP 及InDel引物在亲本和抗感基因池中进行初步筛选，将出现不同分型的引物在分离群体上进行验证，获得了6个SNP 及5 个InDel标记与Rgls基因位点紧密连锁。从中挑选了10 个标记对所检验出的重组个体进行了分析，将 Rgls基因位点定位于标记 InDel4199 和SNP4257之间，范围缩小为58 kb以内。以青岛农业大学苹果试验基地 （山东省胶州市） 栽培的50 个田间栽培品种和品系为试材，利用四个紧密连锁的分子标记 S0405127、S0304673、SNP4236和InDel4254验证了分子标记的可靠性。结果表明，SSR标记 S0405127，S0304673，SNP 标记 SNP4236，InDel标记InDel4254鉴定的准确率分别为 90.0%，94.0%，98.0%，96.0%，其鉴定结果的准确率均达到90%以上，可以应用于田间栽培品种、品系、种质资源以及杂种后代幼苗对炭疽菌叶枯病抗性的鉴定。一是通过对4个杂交组合的F1 群体及4个亲本进行苹果炭疽菌叶枯病抗性鉴定和遗传分析，推断出苹果抗炭疽菌叶枯病性状受隐性单基因控制，抗病基因型为rr，感病基因型为RR和Rr。二是通过300对均匀覆盖苹果染色体组的SSR引物和自行设计的276对SSR引物在亲本及抗感池中进行筛选，得到的多态性标记经作图群体验证，共获得了11个与Rgls基因位点连锁的分子标记，将抗病基因定位于苹果第15条染色体上，并完成了SSR标记与Rgls基因位点连锁图谱的构建。将 Rgls基因位点定位在 SSR 标记 S0304673 和S0405127之间，物理距离为500 kb，与最近的标记 S0405127 的遗传距离仅为0.5 cM。三是开发了与抗炭疽菌基因相关的 SNP 标记和 Indel标记，并对部分SNP 及 InDel 标记进行了验证，将 R gls基因位点进行精细定位，将抗病基因的范围进一步缩小至58 kb，并获得了14 个与抗病相关的候选基因。

猕猴桃主要分为美味猕猴桃、中华猕猴桃、毛花猕猴桃、软枣猕猴桃和种间杂种猕猴桃。目前主栽的品种多数属于美味猕猴桃和中华猕猴桃，少数来源于毛花猕猴桃、软枣猕猴桃、种间杂种猕猴桃。（1） 美味猕猴桃。嫩枝具黄褐色或红褐色硬毛，叶背和叶柄也被有糙毛。芽基大而突出，芽体大部分隐藏。聚伞花序，花朵较大。果面被长硬毛，果形多变。花期5月上中旬，果实成熟期为9—10月。（2） 中华猕猴桃。一年生枝无毛或被茸毛，毛秃净、易脱落。芽体外露，球形，外被芽鳞。叶片纸质，老叶革质。聚伞花序，初花期时花呈白色，后变为淡黄色。果形多变，果面被柔软茸毛，并易脱净。花期4月下旬至5月上旬，果实成熟期为9月。相对来说，美味猕猴桃品种长势较中华猕猴桃强旺、果个较大，产量较高、成熟较晚、货架期较长；而中华猕猴桃中多早熟品种，果实较美味猕猴桃偏甜。颜色分类主要分为：绿心猕猴桃、黄心猕猴桃和红心猕猴桃。果心颜色为绿色的猕猴桃品种的总称。目前生产中仍以绿心猕猴桃的品种为主，如海沃德、秦美等。图2-1 绿心猕猴桃果心颜色为黄色的猕猴桃品种的总称。其果型一般为长圆柱形，单果重约为100克，果面较光滑，茸毛较少。图2-2 黄心猕猴桃由于其品质优良，也极具发展前途，近年部分地区把黄心猕猴桃称为 “黄金果”。其主要品种有金桃、金阳、金霞、金丰、庐山香、金早等。果心颜色为红色的猕猴桃品种的总称。红心猕猴桃果肉细嫩，香气浓郁，口感香甜清爽，酸度较低。绿色果肉中间有红色的果心，易使人有 “看之饱眼福、食之饱口福” 的感受，效益较高。主要品种有红阳、红华、红美、楚红等。图2-3 红心猕猴桃除了以上3种主要的分类方式以外，猕猴桃还可以按照雌、雄分为雌性品种和雄性品种；或者按照成熟期分为早熟品种 （9月上中旬）、中熟品种 （9月下旬）、晚熟品种 （10月上中旬）、极晚熟品种 （10月下旬至11月上旬）；或者按照果实的利用途径分为鲜食品种、加工品种及鲜食和加工兼用型品种。系西安市猕猴桃研究所选育，于2008年通过陕西省果树品种审定委员会审定。该品种果实美观端正、整齐、椭圆形 （与新西兰Hort-16A相似），横径3.5～4厘米，长7～7.5厘米；最大单果重130克，平均单果重82克，单株树上有70%的果实单果重可达100克，商品率90%；果肉深绿色，味香甜，芳香味浓，品质佳，适口性好，质地细而果汁多；可溶性固形物可达17%以上，总糖含量5.5%，总酸含量1.3%，维生素C含量为1850毫克/千克鲜果肉。该品种具有早熟、丰产、口感浓香、果肉翠绿、抗寒、抗风、抗病等优点 （图2-4）。图2-4 翠香系湖北省农业科学院果树茶叶研究所选育，于2009年通过湖北省林木品种审定委员会审定。果实长椭圆形，整齐美观，单果重120 克左右，果面密被黄褐色短茸毛，果点小；果实后熟后易剥皮，食用方便；果心呈浅黄色、长椭圆形，果肉翠绿，肉质细腻，风味浓郁；可溶性固形物含量最高达17.4%，可滴定酸1.8%，总糖含量9.2%，维生素C含量为724～1040毫克/千克；耐贮性强，常温条件下可贮藏20～30天，货架期7～10天。系江苏省海门市三和猕猴桃服务中心选育，于2010年9月通过江苏省农作物品种审定委员会审定。果实长圆柱形，平均单果重90克，最大单果重120克；果皮青褐色，有短茸毛；果心细柱状，乳白色，质软可食；果肉翠绿色，肉质细，汁液多，有香气，风味甜，品质好；可溶性固形物含量18.2%，总糖含量11.69%，总酸含量1.07%；在江苏省海门市，果实8月中下旬成熟，果实发育期90～100天，是极早熟品种。系四川省自然资源科学研究院选育，于2011年通过四川省农作物品种审定委员会审定。该品种平均单果重85.5克，果皮较粗糙，黄褐色，具短茸毛，易脱落；果肉黄色，子房鲜红色，呈放射状；可溶性固形物含量 17.6%，维生素 C 含量 1471毫克/千克，总糖含量12.0%；抗旱性和抗病力较强，抗涝力较弱。定植后第三年全部结果，第四年进入盛果期。株产 20～30 千克，每公顷产量达15000～22500千克。系陕西省宝鸡市陈仓区桑果工作站等单位选育，于2009年通过陕西省果树品种审定委员会审定，被陕西省果业管理局列为秦巴猕猴桃产区中晚熟新品种推广栽培。果实长椭圆形，果个均匀、整齐，平均单果重91克，最大单果重132 克，较红阳 （平均单果重75 克，最大单果重 130克） 大；果顶突出或平，梗洼浅，而红阳果实顶部稍大 （图2-5、 图2-6），萼洼内陷；果面绿褐色，皮厚，被褐色软毛；果实成熟后果肉黄绿色，红心，质细多汁，味甜爽口，风味浓香，品质优。10月中旬采收，可溶性固形物含量16.44%，维生素C含量972毫克/千克，总酸含量1.19%，总糖含量12.05%；后熟期20～30天，室温下可贮放40天左右，在0.5℃冷藏条件下可贮存4个月。果实软熟后仍能维持可食状态2周以上，较红阳货架期长1周。图2-5 晚红图2-6 红阳系河南省西峡猕猴桃研究所选育，于2010年通过河南省科学技术厅组织的科技成果鉴定。果实圆柱形，平均单果重96克，最大单果重167克，果实浅棕黄色或棕黄色；果心小且软，果肉黄绿色，肉质细，汁液多，香气浓郁，风味浓甜；可溶性固形物含量 15.50%～16.80%，总糖含量10.18%，总酸含量0.82%，维生素C 含量1210～1720毫克/千克；在河南省西峡县，果实9月中旬成熟，属于早熟品种。系湖南省园艺研究所和长沙楚源果业有限公司选育，于2010年通过湖南省种子管理局组织的现场评议。该品种果实近椭圆形，平均单果重59.8 克；果顶部略凹陷，果面光洁无茸毛，果皮深绿色，光滑细腻、皮孔小；果实为红心类型，肉质细嫩多汁，风味浓甜；可溶性固形物含量17.6%，维生素C含量2040～2580毫克/千克；8月上旬达到采收成熟度，贮藏性优异，红心性状稳定；较抗高温干旱，抗病虫害能力较强。系湖南省园艺研究所和长沙楚源果业有限公司选育，于2010年通过湖南省种子管理局组织的现场评议。果实卵圆形，平均单果重110 克；果顶平坦，果面光滑无毛，果皮黄绿色，色泽光亮，整齐度高；果肉黄绿色，肉质细嫩，风味浓甜；可溶性固形物含量18.0%，维生素C含量1560毫克/千克；丰产性好，成熟期为9月中下旬；较抗高温干旱，抗病虫害能力较强。系湖北省农业科学院果树茶叶研究所选育，于2011年5月获得农业部植物新品种保护授权，品种权号为CNA20080411.1。果实短圆柱形，平均单果重70克，最大单果重110克；果皮暗绿色，果面绒毛稀少，有小而密的果点；果肉黄绿色，肉质细腻，风味浓郁；含可溶性固形物17.0%～20.0%，可溶性总糖12.1%，可滴定酸1.28%，维生素C 1322毫克/千克；在武汉地区9月上旬成熟。系中国农业科学院郑州果树研究所选育，于2008年通过河南省林木良种审定委员会审定，并于同年进行农业部新品种保护登记。果实长椭圆形，平均单果重18.5克，最大单果重34.2克；果实横截面为卵形，果喙端形状微尖凸，果皮光洁无毛，其上均匀分布稀疏的黑色小果点，果肩形状方形；成熟后，果皮、果肉和果心均为玫瑰红色，而且无须后熟即可食用；果心较大，种子小且多，果实多汁；可溶性固形物含量15.0%以上，总糖含量12.1%，总酸含量1.12%。果实在8月下旬至9月上旬成熟，适于带皮鲜食，或做成 “迷你” 猕猴桃精品果品，并适于加工成红色果酒、果醋、果汁等；该品种适应性较强，成熟期不太一致，有少量采前落果现象，不耐贮藏 （常温下贮藏2天左右），所以栽培时需要分期、分批采收，推荐休闲果园栽培。系中国农业科学院郑州果树研究所选育，于2008年通过河南省林木良种审定委员会审定，并于同年进行农业部新品种保护登记。果实卵圆形或扁卵圆形，平均单果重12.02 克；平均果梗长度3.2厘米，果实光洁无毛，成熟后果皮、果肉和果心均为红色；可溶性固形物含量16%，果实有香味，味道酸甜适口；果实在8月下旬至9月上旬成熟；适于带皮鲜食、做成贝贝猕猴桃精品果品，并适于加工成果酒、果醋、果汁等，推荐休闲果园栽培。系浙江省农业科学皖园艺研究所选育，于2008年获得农业部植物新品种保护授权，品种权号为CNA20050673.0。果实长圆柱形，单果质量82～94克，是野生种的2～4倍，最重达132.2克；果皮绿褐色，密集灰白色长绒毛；果肉绿色，髓射线明显，肉质细腻，略酸，品质上等；可溶性固形物含量14.7%，总糖含量9.00%，可滴定酸含量1.24%，维生素C 含量6280毫克/千克；结果能力强，少量落花落果，徒长枝和老枝均可结果；果实常温下可贮藏3个月。

病菌能侵染嫩叶、嫩梢、花蕾、花梗和幼果，产生褐色至黑色的斑点，斑点周围常有黄色晕圈。较小叶龄病斑如针头状黑点，无黄色晕圈；较大叶龄病斑较大，黄色晕圈明显，并常沿着维管束扩散、沿叶脉扩展，形成类似带尾须的病斑。病叶、病果极易脱落。枝梢发病时，大部分嫩叶感病后脱落，随后整个枝梢枯死，严重时还会蔓延到大枝上，造成死树。重发病果园，当年春梢叶片可全部落光，只剩下上一年梢上的少数叶片，地面可见落叶一层。潮湿时病斑上有墨绿色霉层，为病原菌的菌丝和孢子(图8-1至图8-4)。图8-1 贡柑嫩梢柑橘褐斑病症状（1）图8-2 贡柑嫩梢柑橘褐斑病症状（2）图8-3 贡柑嫩梢柑橘褐斑病症状（3）图8-4 贡柑受害严重树（1）清园后树冠喷0.8～1.0波美度的石硫合剂。（2）在新梢长至3～5cm时及幼果期及时喷药保护，药剂可选用25%吡唑醚菌酯乳油1000～1500倍液、25%吡唑醚菌酯·代森联可湿性粉剂1000～1500倍液、25%嘧菌酯悬浮剂1000倍液、10%苯醚甲环唑可湿性粉剂800倍液、80%乙蒜素乳油1000倍液、80%代森锰锌可湿性粉剂600倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂600倍液。花期遇连续阴雨，花瓣上先出现水渍状小圆点，随后迅速扩大为黄褐色的病斑，引起花瓣腐烂，其上长出灰黄色霉层。若天气干燥，则呈淡褐色干腐。腐烂的花瓣若落在幼叶、嫩枝和幼果上，就可使其发病。嫩叶上的病斑，在潮湿天气时呈水渍状软腐；干燥时呈淡黄褐色，半透明。小枝受害后常枯萎。幼果受害易脱落，若不落，病斑则会木栓化，或稍隆起，呈形状不规则的花斑果(图8-5、图8-6)。图8-5 柑橘灰霉病果实症状图8-6 柑橘灰霉病花症状（1）栽培管理。冬季结合清园，剪除病枝、病叶，将其带出果园集中烧毁。花期遇雨，则进行摇花。花期发病，早上趁露水未干时摘除病花，以减少侵染源。（2）药剂防治。开花前喷1～2次药预防，可用400g/L嘧霉胺悬浮剂1000～1500倍液。在被害枝干上长出的子实体，如同贴着膏药一般，故称柑橘膏药病。白色膏药病的子实体表面较平滑，乳白色或灰白色，在条件适宜时，边缘常扩展新的菌膜，严重时菌膜包围枝条。褐色膏药病的子实体表面呈厚丝绒状，略隆起，通常呈栗褐色，周缘有狭窄的灰白色带。两种病菌的子实体，后期常龟裂，易剥离(图8-7、图8-8)。图8-7 白色膏药病发病症状（1）图8-8 白色膏药病发病症状（2）（1）栽培管理。加强管理，结合修剪，清除带病枝条和过密枝条，使柑橘园通风透光，减少发病。（2）药剂防治。在蚧壳虫幼蚧孵化盛期和末期，以及蚜虫发生期及时喷施药剂进行防治；用刀刮除病部子实体后，涂抹3～5波美度的石硫合剂，亦可用10%波尔多液涂刷病部子实体1～2次。病树往往大部分枝条同时发病，病枝不发或少发新梢。新梢上部分叶片黄化，继而老叶失去光泽，主脉、侧脉附近明显黄化，叶片褪色后不久逐渐脱落，部分仅叶身脱落，叶柄仍留在枝上。落叶后从腋芽长出的新梢弱而直立，叶小，色灰淡，主脉黄化，开花特别多。根系是细根先腐烂，然后大根逐渐腐烂。地上部许多小枝相继枯死，病树逐渐衰退，有的病树则在初期症状出现几个月后，突然萎蔫枯死，叶片干挂树上，此类型为急性衰退病(图8-9、图8-10)。图8-9 植株衰退病毒后表现的明脉症状图8-10 衰退病毒后表现的茎陷点症状（1）严格检疫，防止病毒传入。（2）种植无病毒苗木，不用带病接穗繁殖。（3）选择抗病砧木，如酸橘、江西红橘、枳、枳橙、红橘、粗柠檬和檫檬等作砧木。（4）加强栽培管理，注意防治蚜虫。最典型的症状是以枳或枳橙作砧木的柑橘树，感染了柑橘碎叶病毒后，嫁接部位出现褶折黄环，接穗基部肿大，地上部黄化、落叶，植株生长衰弱、矮化，结果很少，甚至枯死。在抗病、耐病砧木上无症状。在腊斯克枳橙上叶片表现黄色透明斑点，呈圆形或不规则形，叶片边缘缺损，叶片畸形且叶脉透明。在茎上首先出现水溃状的纵向条沟，后变成黄白色条斑，稍凹陷，剥开嫁接口的树皮，接穗与砧木的木质之间有一圈缢缩线，受强风等外力的作用，砧木与接穗之间容易断裂，裂面整齐。以枳橙、厚皮柠檬作接穗发病后，新叶上呈现黄斑和叶缘缺损扭曲。有时条斑联合成斑块，枝条弯曲。严重时，植株矮化(图8-11、图8-12)。图8-11 病树接穗基部肿大图8-12 病树嫁接（1）建立无病苗圃，培育无病苗木。从田间选取健康的优良单株，经指示植物腊斯克枳橙检测，证明不带柑橘碎叶病毒后，方可作为接穗无病母树。也可选取健康的优良单株嫁接苗，在30～44℃环境中处理40天以上，在生长点切取0.2mm微芽进行茎尖嫁接，即可获得无柑橘碎叶病毒的繁殖材料。（2）采用抗病、耐病砧木。避免用枳作砧木，可采用枸头橙、酸橘、红橘等作砧木。（3）更换砧木。凡感染碎叶病毒而出现黄化、生长衰弱的幼龄树，可以靠接2～3株抗病砧木，一年后树势便可以得到恢复，且获得一定产量。主要为害叶片、新梢和果实，尤其易侵染幼嫩组织。叶片染病，初生蜡黄色油渍状小斑点，后渐扩大，形成灰白色至暗褐色圆锥状疮痂，后病斑木质化凸起，叶背突出，叶面凹陷，病斑不穿透叶片，散生或连片，病害发生严重时叶片扭曲、畸形。新梢染病，与叶片症状相似，枝梢与正常枝相比较为短小，有扭曲状。幼果染病，果面密生茶褐色小斑，后扩大在果皮上形成黄褐色圆锥形，木质化的瘤状突起(图8-13、图8-14)。近成熟果实发病，病斑小不明显。合理修剪、整枝，增强通透性，降低湿度；控制肥水，促使新梢抽发整齐；结合修剪和清园，彻底剪除树上残枝、残叶；并清除园内落叶，集中烧毁。对外来苗木实行严格检疫或50%多菌灵可湿性粉剂800倍液浸30min。图8-13 柑橘疮痂病为害果实初期症状图8-14 柑橘疮痂病为害果实后期症状可为害地上部的各个部位。叶片受害症状分叶斑型及叶枯型两种。叶斑型(图8-15至图8-17):症状多出现在成长叶片、老叶边缘或近边缘处，病斑近圆形，稍凹陷，中央灰白色，边缘褐色至深褐色；潮湿时可在病斑上出现许多朱红色带黏性的小液点，干燥时为黑色小粒点，排列成同心轮状或呈散生。叶枯型(图8-18):症状多从叶尖开始，初期病斑呈暗绿色，渐变为黄褐色，叶卷曲，常大量脱落。枝梢症状分为两种:急性型:发生于连续阴雨时刚抽出的嫩梢，似开水烫伤状，后生橘红色小液点。慢性型:多自叶柄基部腋芽处发生，病斑椭圆形淡黄色，后扩大为长梭形，一周后变灰白枯死，上生黑色小点。幼果初期症状为暗绿色凹陷不规则病斑，后扩大至全果，湿度大时，出现白色霉层及红色小点，后变成黑色僵果。成熟果发病，一般从果蒂部开始，初期为淡褐色，以后变为褐色凹陷而腐烂。泪痕型:受害果实的果皮表面有许多条如眼泪一样的红褐色小凸点组成的病斑。也可为害柚子，症状同上。图8-15 柑橘炭疽病为害叶片叶斑型症状图8-16 柑橘炭疽病为害叶片叶斑型叶背症状图8-17 柑橘炭疽病为害叶片叶斑型叶缘受害症状加强橘园管理，重视深翻改土；增施有机肥，防止偏施氮肥，适当增施磷、钾肥；雨后排水；及时清除病残体，集中烧毁或深埋，以减少菌源；修去树冠上衰弱枝、交叉枝、扫帚枝。图8-18 柑橘炭疽病为害叶片叶枯型症状冬季清园时喷施1次0.8～1波美度石硫合剂，同时可兼治其他病害。在病害发生前期，可喷施下列药剂:65%代森锌可湿性粉剂600～800倍液；50%代森铵水剂800～1000倍液。在春、夏、秋梢及嫩叶期、幼果期各喷药1次，可喷施下列药剂:25%嘧菌酯悬浮剂800～1250倍液；80%福美锌·福美双可湿性粉剂800～1000倍液。枝、叶、花、果及根部均可显症，尤以夏、秋梢症状最明显。发病初期，部分新梢叶片黄化，树冠顶部新梢先黄化(图8-19)，逐渐向下发展，经1～2年后全株发病，3～4年后失去经济价值。叶肉变厚、硬化、叶表无光泽，叶脉肿大，有些肿大的叶脉背面破裂，似缺硼状(图8-20、图8-21)。病树开花早而多，花瓣较短小，肥厚，淡黄色，无光泽。根部症状主要表现为腐烂，其严重程度与地上枝梢相对称(图8-22)。果实受害，畸形，着色不均，常表现为“红鼻子”果。也可为害柚子，症状同上。图8-19 柑橘黄龙病为害新梢症状图8-20 柑橘黄龙病为害叶片初期症状加强检疫。杜绝病苗、病穗传入无病区和新建的橘园。对幼龄树，在生长季节的4—8月，每月施1次稀薄水肥，年施肥4～6次。对结果树，每年要施好萌芽肥、稳果肥、壮果肥和采果肥。同时，也要科学地进行水分管理，要保证水分及时、适量供应。图8-21 柑橘黄龙病为害叶片后期症状图8-22 柑橘黄龙病为害后期症状播种前砧木种子用50～52℃热水预浸5min，再用55～56℃温水浸泡50min。接穗选自无病毒的高产优质母树，用1000mg/kg盐酸四环素液浸泡2h，取出后用清水洗净再嫁接。在嫩梢抽发期对病树进行治疗。重病树立即挖除；轻病树，可在主干基部钻孔，深达主干直径的2/3，从孔口注射药液，每株成年树注射1000mg/kg盐酸四环素液2～5L。主要为害叶片、果实和枝梢。叶片染病，初在叶背产生黄色或暗黄绿色油渍状小斑点，后叶面隆起，呈米黄色海绵状物；后隆起部破碎呈木栓状或病部凹陷，形成褶皱；后期病斑淡褐色，中央灰白色，并在病健部交界处形成一圈褐色釉光；凹陷部常破裂呈放射状(图8-23、图8-24)。果实染病，与叶片上症状相似(图8-25、图8-26);病斑只限于在果皮上，发生严重时会引起早期落果。枝梢染病，初生圆形水渍状小点，暗绿色，后扩大灰褐色，木栓化，形成大而深的裂口，最后数个病斑融合形成黄褐色不规则形大斑，边缘明显。图8-23 柑橘溃疡病为害叶片症状加强栽培管理。不偏施氮肥，增施钾肥；控制橘园肥水，保证夏、秋梢抽发整齐。结合冬季清园，彻底清除树上与树下的残枝、残果或落地枝叶，集中烧毁或深埋；控制夏梢，抹除早秋梢，适时放梢；及时防治害虫。图8-24 柑橘溃疡病为害叶片背面症状图8-25 柑橘溃疡病为害果实初期症状图8-26 柑橘溃疡病为害果实后期症状培育无病苗木，在无病区设置苗圃，所用苗木、接穗进行消毒，可用72%农用链霉素可溶性粉剂1000倍液加1%酒精浸30～60min，或用0.3%硫酸亚铁浸泡10min。冬季清园时或春季萌芽前喷45%晶体石硫合剂50～70倍液。春季开花前及落花后的10天、30天、50天，夏、秋梢期在嫩梢展叶和叶片转绿时，各喷药1次。可用药剂有:72%农用硫酸链霉素可湿性粉剂3000～4500倍液；20%噻菌铜胶悬剂300～500倍液；20%乙酸铜水分散粒剂800～1200倍液。主要为害柑橘成熟叶片，有时也可为害果实和小枝，常见有两种症状。一种是黄斑型:发病初期在叶背生1个或数个油浸状小黄斑（图8-27)，随叶片长大，病斑逐渐变成黄褐色或暗褐色，形成疮痂状黄色斑块。另一种是褐色小圆斑型（图8-28）：初在叶面产生赤褐色略凸起小病斑，后稍扩大，中部略凹陷，变为灰褐色圆形至椭圆形斑，后期病部中央变成灰白色，边缘黑褐色略凸起，在灰白色病斑上可见密生的黑色小粒点，即病原菌的子实体。果实受害，果面产生褐色的斑点，后逐渐扩大，至整个果面。也可为害柚子，症状同上。图8-27 柑橘黄斑病为害叶片黄斑型初期症状图8-28 柑橘黄磁病为害叶片症状（褐色小圆斑型，正面）加强橘园管理，增施有机肥，及时松土、排水，增强树势，提高抗病力。及时清除地面的落叶，集中深埋或烧毁。第1次喷药可结合疮痂病防治，在落花后，喷施下列药剂:50%多菌灵可湿性粉剂600～800倍液；80%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液；70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800～1000倍液；77%氢氧化铜可湿性粉剂800～1000倍液；65%代森锌可湿性粉剂500～600倍液；70%丙森锌可湿性粉剂600～800倍液等，间隔15～20天喷1次，连喷2～3次。主要为害果实，症状分黑星型和黑斑型两类。黑星型(图8-29):病斑圆形，红褐色，后期病斑边缘略隆起，呈红褐色至黑色，中部略凹陷，为灰褐色，常长出黑色粒状的分生孢子器。果上病斑达数十个时，可引起落果。黑斑型(图8-30):初期斑点为淡黄色或橙黄色，以后扩大形成不规则的黑色大病斑，中央部分有许多黑色小粒点。病害严重的果实，表面大部分可以被许多互相联合的病斑所覆盖。叶片上的病斑与果实上的相似。也可为害柚子，症状同上。图8-29 柑橘黑星病病果黑星型图8-30 柑橘黑星病病果黑斑型加强橘园栽培管理。采用配方施肥技术，调节氮、磷、钾比例；低洼积水地注意排水；修剪时，去除过密枝叶，增强树体通透性，提高抗病力；清除初侵染源，秋末冬初结合修剪，剪除病枝、病叶，并清除地上落叶、落果，集中销毁，同时喷洒1～2波美度石硫合剂，铲除初侵染源。柑橘落花后，开始喷洒下列药剂:50%多菌灵可湿性粉剂800～1000倍液；80%代森锰锌可湿性粉剂500～800倍液。症状青霉病多发生于储藏前期。病果初期呈现水溃状黄褐色圆形病班。2～3天后长出白色霉状物，随后病部中央产生青(蓝)色粉状霉层。病部边缘整齐明显。腐烂速度较慢，全果腐烂约需15天。病果有发霉气味，不会黏附在包装纸或箱子上。病原特征分生孢子梗无色，直立，顶端2～5个分枝，呈扫帚状。小梗瓶状，顶端渐尖细。分生孢子念珠状串生，单胞无色，近球形，(3.1～6.2)μm×(2.9～6.0)μm(图8-31、图8-32)。图8-31 青霉病病果图8-32 柑橘青霉病初期病果(1)不要在雨后或晨露未干时进行采收。从采收开始就应避免机械损伤。(2)拟储藏的果实采下时应立即用50%万利得乳油2000～2500倍液、25%戴唑霉乳油1000～1500倍液、45%扑霉灵乳油2000倍液等浸泡1min。症状多发生于储藏后期。病果初期症状与青霉病的相同。孢子丛绿色。病部边缘不整齐，不明显。腐烂速度较快，全果腐烂约需7天。病果具芳香气味，黏附在包装纸或箱子上(图8-33、图8-34)。图8-33 绿霉病病果图8-34 柑橘绿霉病后期病果同柑橘青霉病。橘树染病后致枝叶凋萎或整株枯死。枝干染病，有流胶和干枯两种类型。流胶型:病部初期呈灰褐色水渍状，组织松软，皮层具细小裂缝，后期流有褐色胶液，边缘皮层干枯或坏死翘起，致木质部裸露。干枯型:皮层初呈红褐色、干枯稍凹陷，有裂缝、皮层不易脱落，病健部相接处具明显隆起界线，流胶不明显。果实染病，表面散生黑褐色硬质凸起小点，有的很多密集成片，呈砂皮状(图8-35、图8-36)，果心腐烂比果皮快，当果皮1/3～1/2腐烂时，果心已全部腐烂，故又称“穿心烂”。也可为害柚子，症状同上。图8-35 柑橘树脂病为害果实初期症状加强管理，主要是防冻、防涝、避免日灼及各种伤口，以减少病菌侵染。剪除病枝，收集落叶，集中烧毁或深埋。图8-36 柑橘树脂病为害果实后期症状可于春芽萌发期喷1次0.8∶0.8∶100等量式波尔多液，喷洒时注意主干及大枝部分。认真刮除病枝或病干上病皮，病部伤口涂抹下列药剂:36%甲基硫菌灵悬浮剂100倍液；25%甲霜灵可湿性粉剂100～200倍液；80%三乙膦酸铝可湿性粉剂100倍液。若施药后再用无色透明乙烯薄膜包扎伤口，防效更佳。主要为害根颈部，地上部也可受害。根颈部染病(图8-37)，初期病部褐色，湿腐，具酒糟气味，流有胶液。后期如天气干燥，病部常干裂，条件适宜时，病斑迅速扩展，严重的环绕整个树干，致橘树死亡。果实发病时，先为圆形的淡褐色病斑，后渐变为褐色水渍状软腐，长出白色菌丝(图8-38)，有腐臭味，病健部明显，干燥时病斑干韧。图8-37 脚腐病症状图8-38 柑橘脚腐病为害果实症状选用抗病砧木是防治此病的根本措施。嫁接时，适当提高嫁接口位置，不宜定植太深。加强管理，低洼积水地注意排水，合理修剪，增强通透性，避免间作高秆作物。发现病树，及时将腐烂皮层刮除，并刮掉病部周围健全组织0.5～1cm，然后于切口处涂抹下列药剂:10%等量式波尔多液；2%～3%硫酸铜液；80%三乙膦酸铝可湿性粉剂100～200倍液；25%甲霜灵可湿性粉剂400～500倍液。主要为害叶片、枝梢及果实，初期仅在病部生一层暗褐色小霉点，后期逐渐扩大，直至形成绒毛状黑色或暗褐色霉层，并散生黑色小点，即病菌的闭囊壳或分生孢子器(图8-39、图8-40)。图8-39 柑橘煤烟病为害叶片前期症状及时防治蚧壳虫、粉虱、蚜虫等刺吸式口器害虫，加强橘园管理。图8-40 柑橘煤烟病为害叶片后期症状发病初期，喷施下列药剂:40%g菌丹可湿性粉剂400倍液;0.5∶1：100倍式波尔多液；90%机油乳剂200倍液；50%多菌灵可湿性粉剂600～800倍液。主要为害果实。果面近脐部变黄，似成熟果，后病部变褐，呈水溃状，不断扩大，呈不规则状，四周紫褐色，中央色淡，湿度大时，病部表面长出白色气生菌丝，后转为墨绿色，致果瓣腐烂，果心空隙长出墨绿色绒状霉菌，严重的果皮开裂。幼果染病，多发生在果蒂部，后经果柄向枝上蔓延，造成枝条干枯，致幼果变黑或成僵果早落(图8-41、图8-42)。图8-41 柑橘黑腐病为害果实初期症状图8-42 柑橘黑腐病为害果实后期症状加强橘园管理，在花前、采果后增施有机肥，做好排水工作，雨后排涝，干旱时及时浇水，保证水分均匀供应。及时剪除过密枝条和枯枝，及时防虫，以减少人为伤口和虫伤。发病初期，可喷施下列药剂:75%百菌清可湿性粉剂600～800倍液；70%代森猛锌可湿性粉剂500～600倍液；40%克菌丹可湿性粉剂400～500倍液。新梢少或部分小枝枯死，叶片小或叶脉附近绿色叶肉黄化，似缺锌状，病树树势弱但开花多，落花落果严重。枝条纤细，丛生，树冠矮化。砧木部分树皮纵向开裂，翅起延至根部，皮层剥落，木质部外露呈黑色(图8-43、图8-44)。图8-43 枳壳站木皮层纵裂图8-44 靠接枳壳砧木皮层纵裂操作前后用5%～20%漂白粉或25%福尔马林溶液加2%～5%氢氧化钠溶液或5%次氯酸钠浸洗嫁接刀、枝剪、果剪等工具和手1～2s，进行消毒，以防接触传染。果实染病后，出现橘黄色圆形斑。病斑在短时间内迅速扩大，使全果软腐，病部变软，果皮易脱落。后期出现白色黏状物，为气生菌丝及分生孢子，整个果实出水腐烂并发生酸败臭味(图8-45、图8-46)。图8-45 柑橘酸腐病为害果实的症状图8-46 酸腐病病果表面的白色霜霉层（左）和烂柿子状病果（右）参照柑橘青霉病与绿霉病的防治方法，及时清除烂果与流出的汁液。地衣是一类菌藻共生物，呈青灰色或灰绿色的叶状体组织附生于果树的枝干上，呈圆形膏药状紧贴于枝干树皮上，不易剥离，青灰色或灰绿色(图8-47、图8-48)。图8-47 地衣病为害枝干症状图8-48 壳状地衣加强栽培管理，采果后，清洁果园，及时修剪整枝，增强园内通风透光，降低果园湿度；科学施用肥料，增强果树长势。适度药剂防治:采用挑治法和刮疗法。于春季雨后，用竹片或削刀刮除枝干上的地衣和苔藓，然后用药治疗。刮除下来的地衣和苔藓必须收集烧毁。用10%～15%的石灰水涂刷。或用下列药剂喷施:30%氧氯化铜悬浮剂500倍液；1%～1.5%硫酸亚铁溶液；1∶1：100等量式波尔多液。主要发生在春梢上，夏秋梢因高温不表现症状。病树春梢新芽弓形。梢黄，向外侧反转，节间缩短，丛生状。叶小，凹凸皱缩状，下卷呈船形。低温时症状明显，较暖时，叶尖缩短，生长停止，成匙形。树冠萎缩，发病后期果实小，果皮粗厚，品质差(图8-49、图8-50)。图8-49 蜜柑船形叶症状图8-50 蜜柑匙形叶症状（1）种植无病苗木。（2）及时砍伐病树，在树周围开深沟以防止病情蔓延。（3）加强水肥管理，增强树势。（4）枝剪、嫁接刀等在使用前，用20%漂白粉液（或10倍漂白粉液）或1%次氯酸钠液进行消毒。病斑可发生在果面任何部位，初为淡褐色小斑，后病斑迅速扩展成圆形暗褐色水渍状软腐，有腐臭味，病果很快脱落。高温高湿时病部长出白色菌丝，干旱时病斑干韧。有时叶片亦受害，病斑呈水溃状，似开水烫伤，病、健部交界不明显，病斑近圆形或不规则形，初期颜色较浅，随后迅速转变为浅褐色至深褐色，易误诊为急性炭疽。病菌为害柑橘主干基部则引起皮层腐烂，称为“脚腐病”(图8-51、图8-52)。图8-51 疫菌褐腐病病叶图8-52 疫菌褐腐病病果（只侵染白皮层，不烂及果肉）(1)栽培管理。加强栽培管理，平衡施肥；雨季及时开沟排水，降低果园湿度；冬季清园，修剪过密及分枝过低的枝条，剪除病虫枝，清除病果，并将其集中烧毁，保持地面光洁和果园通风透光。(2)药剂防治。及时在全园喷药防治，重点对树冠中下部、内膛和地面喷药，每隔5～7天喷1次，连喷2～3次。药剂可选用70%甲霜灵锰锌可湿性粉剂800～1000倍液。主要为害嫩叶、新梢和幼果。在嫩叶的正面、背面和新梢表面呈现一层白色粉状物。病叶组织开始呈水渍状，后逐渐褪绿，最后呈黄色。病叶多为畸形、扭曲状。病部由叶柄传播到新梢，致使整条新梢和嫩叶被白色粉状物覆盖。严重时引起大量落叶、落果，新梢枯死(图8-53、图8-54)。图8-53 柑橘白粉病病枝、病叶图8-54 白粉病为害叶片在春梢萌芽前，喷洒药剂，可选用99%矿物油乳油200倍液、45%晶体石硫合剂150倍液、80%代森锰锌可湿性粉剂400～500倍液等。在容易发病的新梢期喷洒药剂，可选用25%三唑酮可湿性粉剂800～1000倍液。主要为害柑橘主干，其次在主枝，小枝上也可发生。初发病时，皮层出现红褐色小点，疏松变软，水渍状，并开裂和流胶。之后病斑扩大，且病斑不定形，病部皮层变褐色，流胶增多。感染至木质部后，除引起流胶症状外，病树常出现枯枝，叶片黄化脱落，树势弱，产量低，病树果实小，提前转黄，味酸，严重时引起植株木质部坏死，导致整株树死亡，甚至摧毁整个果园(图8-55、图8-56)。图8-55 柑橘流胶病树干症状（1）图8-56 柑橘流胶病树干症状（2）（1）栽培管理。合理修剪，多施有机肥，增强树势；雨季注意果园及时排水；减少树体机械伤口和其他病虫害的发生；冬季树干涂白。（2）药剂防治。晴天刮除病斑腐烂部分，刮除时采取浅刮深刻（即将病部的粗皮刮去，再纵切裂口数条，深达木质部，刮至健处韧皮部）的方法，待刮除部位风干水分后涂抹药剂，可选用70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、80%代森锰锌可湿性粉剂、25%吡唑醚菌酯乳油、25%吡唑醚菌酯·代森联可湿性粉剂、25%嘧菌酯悬浮剂、10%苯醚甲环唑可湿性粉剂、80%乙蒜素乳油等，将药剂稀释至30～50倍液使用，各药剂于发病期涂抹2～3次，间隔30天涂1次。因发病时期不同，可出现3种症状类型。（1）感染刚出土或尚未出土的幼芽，使病芽在土中变褐腐烂，形成芽腐。（2）幼苗顶部叶片染病，产生圆形或不定形淡褐色病斑，并迅速蔓延，叶片枯死，形成枯顶病株。（3）苗木靠近土表的基部缢缩，变褐色腐烂，叶片凋萎不落，苗木不倒伏，形成青枯病株，此为典型症状（图8-57、图8-58）。图8-57 柑橘苗木立枯病病株图8-58 柑橘苗木立枯病症状药剂防治。幼苗发病初期，立即用1%硫酸亚铁或70%敌克松500倍液施于苗木根颈部。如苗床较干，则配成液剂施用于苗木根颈部.施用之后随即用清水喷洗苗木，以防茎、叶部分受药害。如发现茎、叶腐烂型立枯病，要立即喷波尔多液［硫酸铜、石灰、水的比例为1∶1：（120～170）］，每隔10～15天喷1次。25%吡唑醚菌酯乳油2000倍液有良好的治疗作用，发病前用50%啶酰菌胺水分散粒剂1500倍液可起到预防作用。发病期可用80%代森锰锌600倍液、30%氧氯化铜悬浮剂300～400倍液。每5天喷1次，连续喷3次。该病主要为害柑橘幼苗的嫩叶、顶芽和嫩梢。苗木顶芽或嫩梢感病后，最初出现水渍状小斑点，后变成暗绿色或褐色病斑，天气潮湿时，病斑向四周扩展，直至嫩梢基部，使整条新梢或整株幼苗变为褐色而枯死。在潮湿天气下，新鲜的病部出现散生较薄的白色霉层，此为病原菌的孢子囊、孢子囊梗和菌丝体。根部在苗木枯死前无明显腐烂症状(图8-59、图8-60)。图8-59 柑橘苗疫病症状（1）图8-60 柑橘苗疫病症状（2）（1）选择抗病砧木。选择红橘、枳壳等对疫病抗性较强的实生苗作砧木。（2）苗圃地选择。选择地势高、土质疏松、排灌方便的新地或作高畦栽培。（3）加强管理。育苗前整地要精细，施足腐熟的有机肥；苗期雨天要注意排水，及时挖除病苗或剪除零星受害叶片，清除病源中心，并喷药控制蔓延。（4）药剂防治。发现少数病苗时，及时剪除病部，将其集中烧毁并立即喷施农药1次，以后每隔10～14天再喷1次，共喷2～3次。有效的药剂有58%瑞毒霉锰锌可湿性粉剂600～800倍液、64%恶霜·锰锌可湿性粉剂500～600倍液、90%三乙膦酸铝可湿性粉剂500倍液、0.5%波尔多液、80%代森锰锌可湿性粉剂600倍液、50%烯酰吗啉可湿性粉剂1500倍液、50%啶酰菌胺水分散粒剂1500倍液等。根结线虫侵害果树根部，使根组织过度生长，形成大小不等的根瘤。根瘤大多数发生在细根上，感染严重时又会产生次生根瘤，并出现大量小根，根系盘结成须根团。新生根瘤乳白色，后期变成黄褐色至黑褐色，腐烂坏死。果树受害后，枝短梢弱，叶片变小，生长衰退，成年树开花多，结果少。受害严重时，叶色发黄，叶缘卷曲，似缺水状，最后可造成叶片干枯脱落，直至全株凋萎死亡(图8-61、图8-62)。图8-61 柑橘根结线虫为害 根系症状（1）图8-62 柑橘根结线虫为害根 系症状（2）（1）加强苗木检疫。外来苗木必须经过检疫，防止病苗传入无病区。（2）培育无病苗木。选用无病原的土地育苗。（3）苗木处理。对带病苗木用48℃热水浸根15min，可杀死病原线虫。（4）药剂防治。成年病树每株用1.5%阿维菌素颗粒剂150～200g或10%噻唑磷颗粒剂150～200g，在树盘外围开环状沟施入，也可每株用10.5%阿维·噻唑磷颗粒剂150～200g树盘撒施或2亿活孢子/g淡紫拟青霉粉剂25～33g在树盘外围开环状沟施入。柑橘根线虫侵害根部，受害根部没有明显的根瘤，须根比正常根粗大，表面不平，严重时小根粗短、畸形，易碎裂，无光泽。由于柑橘根线虫的穿刺，组织坏死呈黑色。严重受害时，可使皮层和中柱分离。柑橘受害后，叶片逐渐发黄或呈青铜色，严重受害时造成叶片脱落，小枝枯萎。有些病树整株落叶，有些病树仅1/2或1～2个枝条落叶，病树一般不枯死(图8-63、图8-64)。图8-63 根线虫病（1）图8-64 根线虫病（2）同柑橘根结线虫病防治方法。为害树干时，初期表现为黄绿色小点，后逐渐扩大成绿色斑块，直至包被整个树干。为害叶片时，先在中脉、叶尖和边缘处出现黄色小点，黄色小点逐步连成一片，最后形成一层绿色苔斑，俗称“青苔”。为害果实时，一般在果蒂附近先出现黄色小点，后逐步向其他部位蔓延，最后在果实表面形成一层绿色污斑，生产上常称其为“绿斑病”。该病主要在树冠的中下部发生，严重时整株受害，对树体光合作用及果实外观和品质造成严重影响(图8-65、图8-66)。图8-65 柑橘虚幻球藻为害的枝干图8-66 柑橘虚幻球藻为害的果实（1）栽培管理。加强果园管理，增强树势；注意果园排水，降低果园湿度；合理修剪，增强果园通风透光性，以减轻发病程度。（2）药剂防治。发病果园在冬季清园时，用45%代森铵水剂300倍液喷施；在柑橘生长季节，发病果园用80%乙蒜素乳油1000～1500倍液或50%氯溴异氰尿酸可溶性粉剂600～800倍液均匀喷雾，每隔10天左右喷1次，连喷2次。在贮藏期间，果实多从果蒂或近果蒂处开始发病，初期呈浅褐色水渍状，之后扩大，病部边缘呈波纹状，深褐色。由于果实内部较果皮腐烂快，当病斑扩大到果皮的1/3～2/3时，果心已经全部腐烂。病部表面大多会散生黑褐色的小粒点(图8-67、图8-68)。图8-67 褐色蒂腐病病果环绕果蒂呈水渍状图8-68 褐色蒂腐病病果内部白色菌丝（1）加强栽培管理，增强树势。（2）精细采收，尽量减少和避免机械损伤。（3）采果前2～4周，用50～100mg/L的2，4-D溶液喷湿果实。（4）果实采摘后3天内，用70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液，或25%咪鲜胺乳油500～1000倍液等浸果1～2min，晾干后贮藏。（5）贮藏前剔除病果、伤果。（6）在5 ℃左右的温度条件下贮藏果实。果实发病多自蒂部或近蒂部伤口开始。病部呈褐色病斑，之后蔓延全果。病斑可随瓤瓣排列而蔓延，使果面形成深褐色带纹，由蒂部直达脐部。病果表面常溢出琥珀色黏液。在高湿条件下，病果表面长出气生菌丝，起初呈污灰色，后渐变成淡黑色；在干燥条件下，则成黑色僵果。感病果实内部腐烂，并长出污灰色菌丝，瓤瓣、果皮最后变黑色。在菌丝中也产生黑色点粒(图8-69、图8-70)。图8-69 黑腐病病果心腐型图8-70 黑腐病病果内部症状枝干发病常从小枝顶端开始，迅速向下蔓延，或在小枝与树干的其他部位发病。病部红褐色，树皮开裂、流胶，严重时引起枝干枯死，病部密生黑色小粒点。参考柑橘褐色蒂腐病的防治方法。

氮是保证葡萄正常生长结果最主要的元素之一，是原生质和酶的必要成分。氮能调节生长及结实，当其他的任何一种元素缺乏时也不会和缺氮一样很快地引起生长的停止，任何一种元素作为肥料施入土壤时也不能像氮一样迅速而明显地起作用，甚至其他元素过量地施入，也不能和氮一样表现出相反的效果。因此，氮肥管理是葡萄施肥管理中的重点。氮供应充足时，可以大大促进植株或群体的光合总产量；但若过量施氮，可使叶片生长和发育过速，叶片内的含氮量“稀释”，并增加其他元素相对缺乏的可能性；同时枝叶旺长导致相互遮阴，光合效率下降，且枝叶旺长消耗大量营养，果实成熟期推迟、果实着色差、风味淡，不利于养分积累等，产生众多副作用。氮素缺乏常表现植株生长受阻、叶片失绿黄化、叶柄和穗轴呈粉红色或红色等，氮在植物体内移动性强，可从老龄组织中转移至幼嫩组织中，因此，老叶通常相对于幼叶会较早表现出缺素症状。在增施有机肥提高土壤肥力的基础上，葡萄生产上一般可在三个时期补充氮素化肥，即萌芽期、末花期后、果实采收后，每亩施尿素30～40千克或相当氮素含量的其他氮素化肥。磷元素参与生物基本代谢与合成，在能量代谢、促进碳水化合物的运转及遗传方面起重要作用。磷元素以磷酸根离子形式供植物吸收利用，有单价磷酸根离子()和二价磷酸根离子(233223)，土壤中磷酸根离子态受土壤pH值影响，当pH值小于7时，呈233223态，为主要吸收态，pH值大于7时呈233223态，易被吸附固定成不被植物利用状态，为缺素症发生的主要因素之一。改良土壤可使被吸附固定的磷重新被释放而被植物利用。磷在植物体内移动性良好，可再利用。磷元素参与生物基本代谢与合成，在能量代谢、促进碳水化合物的运转及遗传方面起重要作用。磷元素以磷酸根离子形式供植物吸收利用，有单价磷酸根离子()和二价磷酸根离子(233223)，土壤中磷酸根离子态受土壤pH值影响，当pH值小于7时，呈233223态，为主要吸收态，pH值大于7时呈233223态，易被吸附固定成不被植物利用状态，为缺素症发生的主要因素之一。改良土壤可使被吸附固定的磷重新被释放而被植物利用。磷在植物体内移动性良好，可再利用。磷元素参与生物基本代谢与合成，在能量代谢、促进碳水化合物的运转及遗传方面起重要作用。磷元素以磷酸根离子形式供植物吸收利用，有单价磷酸根离子()和二价磷酸根离子(233223)，土壤中磷酸根离子态受土壤pH值影响，当pH值小于7时，呈233223态，为主要吸收态，pH值大于7时呈233223态，易被吸附固定成不被植物利用状态，为缺素症发生的主要因素之一。改良土壤可使被吸附固定的磷重新被释放而被植物利用。磷在植物体内移动性良好，可再利用。磷元素参与生物基本代谢与合成，在能量代谢、促进碳水化合物的运转及遗传方面起重要作用。磷元素以磷酸根离子形式供植物吸收利用，有单价磷酸根离子()和二价磷酸根离子(233223)，土壤中磷酸根离子态受土壤pH值影响，当pH值小于7时，呈233223态，为主要吸收态，pH值大于7时呈233223态，易被吸附固定成不被植物利用状态，为缺素症发生的主要因素之一。改良土壤可使被吸附固定的磷重新被释放而被植物利用。磷在植物体内移动性良好，可再利用。葡萄植株缺乏磷元素时表现叶片较小、叶色暗绿、花序小、果粒小、果实小、单果重小、产量低、果实成熟期推迟等，一般对生殖生长的影响早于营养生长(彩图11-1-1)。葡萄磷元素的补充仍以土壤施入为主，在增施有机肥的基础上，宜在花期前后和果实采收后施入适当化肥，可选用磷酸铵、磷酸二氢钾或含磷的果树专用肥料等。每亩施过磷酸钙10～15千克或相当磷素的其他磷肥。钾与碳水化合物的形成、积累和运转有关，可提高果实含糖量、降低含酸量，促进芳香物质和色素的形成，有利浆果成熟，同时对细胞壁加厚和提高细胞液浓度有良好的作用，从而促进枝蔓成熟，加强养分的贮藏和积累，提高抗病力和抗寒性。钾还对葡萄花芽的分化、根系发育有促进作用。钾在植物体内移动性良好，可再利用。葡萄有“钾质植物”之称，在生长结实过程中对钾的需求量相对较大，缺钾时，常引起碳水化合物和氮代谢紊乱，蛋白质合成受阻，植株抗病力降低；枝条中部叶片表现扭曲，以后叶缘和叶脉间失绿变干，并逐渐由边缘向中间焦枯，叶子变脆容易脱落；果实小、着色不良，成熟前容易落果，产量低、品质差。钾过量时可阻碍钙、镁、氮的吸收，果实易得生理病害(彩图11-1-2)。葡萄钾元素的补充以土壤施入为主，在增施有机肥的基础上，宜在花期前后和果实采收后施入适当化肥，可选用硫酸钾或含钾的果树专用肥料等。每亩施入20千克硫酸钾或相当钾素量的其他钾肥。钙元素参与细胞壁形成、调节光合作用，是一些酶的激活剂，具有重要的生理功能。钙在植物体内移动性差，缺钙时新梢嫩叶上形成褪绿斑，叶尖及叶缘向下卷曲，几天后褪绿部分变成暗褐色，并形成枯斑。缺钙可使浆果硬度下降，贮藏性变差等。葡萄缺钙常发生在酸度较高的土壤上，同时过多的钾、氮、镁供应也可以使植株出现缺钙症状。葡萄根系对钙的吸收主要集中在花期到转色期，吸收量占全年总量的60%。可增施有机肥，调节土壤pH值，土壤施入硝酸钙或氧化钙，控制钾肥施入量，调节葡萄树体钾/钙比例。根据叶柄营养分析，使钾/钙比在1.2～1.5为宜，如果高于此值，减少钾或增加钙。钙也可通过叶面喷肥加以补充，缺钙严重的果园，一般可于葡萄生长前期、幼果膨大期和采前1个月叶面喷布钙肥，如硝酸钙、氯化钙等，浓度以0.5%为宜。钙在葡萄体内移动性差，因此，以少量多次喷布效果为佳。硼能促进葡萄花粉管的萌发和生长，促进授粉受精，提高坐果率，减少无籽小果比率，提高产量，促进芳香物质的形成，提高含糖量，改善浆果品质。同时，硼可以促进新梢和花序的生长，使新梢成熟良好。葡萄缺硼时可抑制根尖和茎尖细胞分裂，生长受阻，表现为植株矮小，枝蔓节间变短，副梢生长弱；叶片小、增厚、发脆、皱缩、向外弯曲，叶缘出现失绿黄斑，叶柄短、粗。根短、粗，肿胀并形成结，可出现纵裂。硼元素对花粉管伸长具有重要作用，缺乏时可导致开花时花冠不脱落或落花严重，花序干缩、枯萎，坐果率低，无种子的小粒果实增加(彩图11-1-3)。硼的吸收与灌溉有关，干旱条件下不利于硼的吸收，另一方面，雨水过多或灌溉过量易造成硼离子淋失，尤其是对于沙滩地葡萄园，由此造成的缺硼现象较为严重。硼缺素症的防治可在增施有机肥、改善土壤结构、注意适时适量灌水的基础上，在花前1周进行叶面喷硼，可喷21%保倍硼2000倍液或0.3%硼酸(或硼砂)等，在幼果期可以增喷一次。在秋季叶面喷硼效果更佳，一是可以增加芽中硼元素含量，有利于消除早春缺硼症状，二是此时叶片耐性较强，可以适当增加喷施浓度而不易发生药害。在叶面喷肥的同时应注意土壤施硼，缺硼土壤施硼宜在秋季每年适量进行，每亩每年施入硼砂500克，效果好于间隔几年一次大量施入。土壤施入硼时应注意均匀，以防局部过量而导致不良效果。锌元素参与多种酶促反应和植物激素的合成，尤其是与植物生长素和叶绿素的形成有关。缺锌时植株生长异常，新梢顶部叶片狭小，呈小叶状，枝条纤细，节间短。叶片叶绿素含量低，叶脉间失绿黄化，呈花叶状。果粒发育不整齐，无籽小果多，果穗大小粒现象严重，果实产量、品质下降。锌在土壤中移动性很差，在植物体内，当锌充足时，可以从老组织向新组织移动，但当锌缺乏时，则很难移动(彩图11-1-4、彩图11-1-5)。葡萄树栽植在沙质土壤、高pH值土壤、含磷元素较多的土壤上，易发生缺锌现象。防治缺锌症可从增施有机肥等措施做起，补充树体锌元素最好的方法是叶面喷施。茎尖分析结果表明，补充锌的效果仅可持续20天，因此锌应用的最佳时期为盛花期前2周到坐果期。可应用锌钙氨基酸、硫酸锌等。另外，在剪口上涂抹150克/升硫酸锌溶液对缺锌株可以起到增加果穗重、增强新梢生长势和提高叶柄中锌元素水平的作用。落叶前使用锌肥，可以增加锌营养的贮藏，对于解决锌缺乏问题非常重要和显著；落叶前补锌，开始成为重要的补锌形式。铁元素是植物许多蛋白和酶的组成成分，参与光合作用和呼吸作用，是植物叶绿素的重要组成物质，同时参与体内一系列代谢活动。铁在植物体内不易移动，葡萄缺铁时首先表现的症状是幼叶失绿，叶片除叶脉保持绿色外，叶面黄化甚至白化，光合效率差，进一步出现新梢生长弱，花序黄化，花蕾脱落，坐果率低(彩图11-1-6)。葡萄缺铁常发生在冷湿条件下，此时铁离子在土壤中的移动性很差，不利于根系吸收。同时铁缺乏还常与土壤较高pH值有关，在此条件下铁离子常呈不为植物所利用形态。克服铁缺素症的措施应从土壤改良着手，增施有机肥，防止土壤盐碱化和过分黏重，促进土壤中铁转化为植物可利用形态。同时可采用叶面喷肥的方法对铁缺素症进行矫正，可在生长前期每7～10天喷一次螯合铁2000倍液或0.2%硫酸亚铁溶液。铁缺乏症的矫正通常需要多次进行才能收到良好效果。葡萄气灼病，亦称为缩果病，是与特殊气候条件有直接或间接关系的生理性病害，为水分生理失调和高温环境共同作用引起的，属于“生理性水分失调症”之一。气灼病为红地球葡萄常见病害之一，尤其是果实套袋后发生较多；在其他葡萄品种上，气灼病也时有发生，有些年份非常严重。气灼病发生严重时，病穗率可在80%以上，产量损失可达10%～30%。在我国1998年的宁夏葡萄产区(贺兰山东麓)、2001年山西省晋南葡萄产区均发生了大范围的且比较严重的气灼病，损失惨重。在葡萄生产中，有些地区的果农把气灼病误认做“日烧病”。严格的讲，两者在发生时期、为害症状等方面均存在明显不同，应区别对待。气灼病一般发生在幼果期，从落花后45天左右，至转色前均可发生，以幼果期至封穗期发生最为严重。首先表现为失水、凹陷、浅褐色小斑点，并迅速扩大为大面积病斑，整个过程基本上在2小时内完成。病斑面积一般占果粒面积的5%～30%，严重时一个果实上会有2～5个病斑，从而导致整个果粒干枯。病斑开始为浅黄褐色，而后颜色略变深并逐渐形成干疤(几个病斑的果实，整粒干枯形成“干果”)。病斑常发生在果粒近果梗的基部或果面的中上部，在果粒的侧面、底部也可发生(彩图11-2-1至彩图11-2-3)。发生部位与阳光直射无关，在叶幕下的背阴部位、果穗的背阴部及套袋果穗上均会发生。如土壤湿度大(水浸泡一段时间后)、遇雨水(在葡萄粒上有水珠)后，若忽然高温，在有水珠的部分易出现气灼病。气灼病是由于“生理性水分失调”造成的生理病害，与特殊气候、栽培管理条件密切相关。任何影响葡萄水分吸收、加大水分流失和蒸发的气候条件、田间操作，都会引起或加重气灼病的发生。一般情况下，连续阴雨后，土壤含水量长期处于饱和状态，天气转晴后的高温、闷热天气，易导致气灼病发生。这可能是由于根系被水长时间浸泡后功能降低，影响水分吸收；而高温需要蒸腾作用调节体温，需要比较多的水分，植株需水与供水发生矛盾，导致水分生理失调而发生气灼病。气灼病发生情况在品种间有差异，如红地球、龙眼、白牛奶等品种气灼病相对较易发生。葡萄套袋，尤其是套袋前大量疏果会引起或加重气灼病的发生。土壤通透性差(土壤黏重、长期被水浸泡)、土壤干旱、土壤有机质含量低，会引起或加重气灼病的发生。葡萄气灼病的防治，从根本上是保持水分的供求平衡。因此，防治气灼病要从保证根系吸收功能的正常发挥和水分的稳定供应入手。首先要培养健壮、发达的根系，可采用增施有机肥来提高土壤通透性、调整负载量、防治根系和地上部病虫害等措施，有利于根系呼吸和根系功能正常，避免或减轻气灼病。水分的供应，包括土壤水分供应和水分在葡萄体内的输导两个方面。在易发生气灼病的时期(大幼果期)，尤其是套袋前后，要保持充足的水分供应。水分供应一般注意两个问题：第一，土壤不能缺水，缺水后要注意浇水。滴灌是最好的浇水方法，如果大水漫灌，要注意灌溉时间，一般在18：00至早晨浇水，避免中午浇水。第二，保持水分。有机质含量丰富、覆盖草或秸秆等，都有利于土壤水分的保持，减少或避免气灼病。另一方面，主蔓、枝条、穗轴、果柄出现问题或病害，会影响水分的输导，引起或加重气灼病的发生。尤其是穗轴、果柄的病害，如霜霉、灰霉、白粉等病害，及镰刀菌、链格孢为害，均影响水分传导。所以，花前花后病虫害的防治，尤其是花序和果穗的病害防治非常重要。从近几年的调查看，病虫害规范防治的葡萄园，可有效避免或减少穗轴、果柄伤害，能减轻或避免气灼病的发生。协调地上部和地下部的平衡关系。如果根系弱，要减少地上部的枝、叶、果的量，保持地上部和地下部的协调一致，会减轻或避免气灼病。主要发生在浆果近成熟期，表现为果皮开裂。裂果不仅影响果实的外观，而且会导致外源微生物的侵染，发生腐烂(酸腐病)，严重降低果实的商品价值(彩图11-3-1)。葡萄裂果一般是由于水分吸收不平衡而导致的果皮破裂，其发生的根本原因是葡萄果实在较长时间的干旱条件下突然大量吸水，引起果实含水量急剧增加，使果实皮层细胞的体积大幅度增加，而果实表皮细胞膨大较慢造成果实内外生长失调而形成裂果。引起葡萄裂果的原因还有果穗的粒间过于紧凑，后期因果实膨大而互相挤压造成裂果；病虫的为害和机械损伤，使果皮受到一定的损害，进而降低了果皮抗内压的能力，从而导致裂果；药害造成的果皮伤害，导致果皮韧性减小等。因此，影响葡萄裂果的主要因素如下。（1）水分供求平衡问题。尤其是在持续高温久旱的情况下，突遇大雨或大水灌溉，造成土壤和空气湿度急剧变化，使果肉细胞迅速膨大，易造成裂果。（2）与土壤条件有关。一般在地势低洼、易板结、排水不良、通透性差、易旱易涝的黏土上易裂果；土层厚、土质疏松、通透性好的沙壤土上裂果轻。（3）与品种有关。一般乍娜、里扎马特、香妃等品种裂果严重，而京亚、红地球等品种不易发生裂果。（4）与果皮强度有关。果皮强度随着果实成熟急剧下降，同一果粒不同部位降低的幅度不同。如玫瑰露葡萄，果粒密集，接触部位果皮薄，果皮强度降低幅度大；巨峰着色期，果顶部出现小龟裂或从蒂部到果粒中部产生纹状凹陷，这些部位果皮强度低，易裂果。（5）与某些病虫害有关。白粉病为害后，果皮硬化失去弹性，硬核期后从果顶纵裂。红蜘蛛为害后，果面形成褐色锈斑，多为果蒂纵裂。（6）与栽培管理有关。一般树势弱、光照差、通风不良及施氮肥过多的果园裂果重。负载量大、叶果比小、着色延迟，易诱发裂果。（7）与农药使用有关。幼果期，尤其是落花后的45天以内，农药的品种或使用不当，造成果皮伤害，后期容易裂果；喷布乙烯利或赤霉素易造成裂果。在易发生裂果的地区首先选择不易裂果的品种；栽培措施中应着重保持果实发育后期水分的供求平衡与水分供应的稳定性，防止土壤水分急剧变化现象的发生；做好花果管理工作，通过疏穗、疏粒控制负载量和果粒着生状况；易裂果品种不使用乙烯利或赤霉素；落花后农药品种的科学选择和使用；加强病虫害防控工作，减少病虫为害导致的裂果现象发生。葡萄成熟的果穗中有时会出现许多小粒果实，多数小粒果实不着色，但也有部分小粒果亦可着色、成熟，一般小粒果实中没有种子，但小粒果没有商品价值(彩图11-4-1)。果穗中出现较多小粒果的现象称为果实大小粒，它不仅影响果穗整齐度，使外观品质下降，也对产量有较大影响。在果实第一次速长期时，由于部分果实停止生长，果实体积不再增大，从而形成大小粒现象。葡萄大小粒的形成主要与授粉受精不良和树体营养及生长势有关。良好的授粉受精可使葡萄果实在发育过程中成为生长中心，可调运营养，满足果实的迅速生长发育之需，如授粉受精不良，导致果实发育受阻而形成小果。葡萄前期如果生长势过于旺盛，营养生长过强，营养生长与生殖生长不平衡，花芽分化过程中性细胞分化不良，常加重果实大小粒现象的发生。生产上前期若施氮肥过多、营养元素供应不平衡尤其是锌元素的缺乏、供水过多、修剪不合理等，易导致果实出现大小粒现象。合理修剪，调节树势。对新梢摘心时间和强度及副梢处理方式务必考虑品种特性，因品种而异。平衡施肥，控制氮肥施用量，对缺锌植株及时补充锌肥(参见锌肥施用方法)。花前或花期使用硼肥，促进授粉受精。合理灌溉，花前控制水分供应，减少枝梢旺长。及时进行花、穗管理，如修整果穗、掐穗尖、疏果等。葡萄上的药害分两个方面：葡萄园使用的药剂选择不当或使用不当造成的药害；葡萄园周围农田使用药剂，药液飘移造成的药害(彩图11-5-1至彩图11-5-11)。(1)代森锰锌。代森锰锌是混配型、安全性比较好的杀菌剂，但原药杂质高或质量不高(悬浮率等)时，容易造成药害。所以，注意选择使用质量比较好的品牌，或在花前及套袋前不使用，在套袋后及采收后使用。使用代森锰锌的混配制剂，代森锰锌原药的质量直接决定混配制剂的质量；如果代森锰锌原药选择不当，其混配产品产生药害的风险增大。(2)百菌清。在某些品种上有药害，用百菌清混配的制剂存在相同的药害风险。(3)溴菌腈(炭特灵)。在果皮比较薄的品种上产生药害。(4)三唑类。所有三唑类杀菌剂在葡萄上使用，几乎都存在药害的风险。最严重的药害是抑制果实、新梢、叶片的生长。其次是造成叶片的早衰。当然，这类产品差异性很大，有些比较安全。同时，葡萄的品种多，有些药剂对某些品种安全，但对另一些品种就存在比较大的药害风险。比较安全的三唑类农药有苯醚甲环唑、戊唑醇等。(5)克菌丹(开普敦)。我国在葡萄上很少使用，但国外报道在葡萄果实上使用克菌丹存在严重的药害，请谨慎选择和使用或避开幼果期使用。(6)硫制剂使用不当会在果实和叶片上存在药害。药害的发生，与产品质量、温度有直接关系：分散性、悬浮率不好，容易造成药害；温度高于30℃，容易产生药害。所以，我国一般在葡萄发芽前后、落叶前等时期使用硫制剂。(7)退菌特在葡萄上使用不当有药害。(8)赤霉素使用过量会影响花芽形成，影响第二年的产量和质量。(9)细胞分裂素。细胞分裂素类的物质往往造成叶片畸形。(10)其他。国外报道了乙烯菌核利、硫丹、甲基砷酸铁铵钠盐(田安)、百草枯、草甘膦、敌草隆、麦草畏、西玛津等对葡萄的药害。因我国在葡萄园使用比较少，不作介绍。由于分田到户，每家葡萄园面积不大，周围被其他人的农田包围；如果其他农田使用药剂(尤其是除草剂)，药剂飘移到葡萄园，造成药害。这种情况在东北地区非常严重，已经成为危害葡萄生产的重大问题，造成乡亲、邻里之间的矛盾和对立，不但影响葡萄生产和葡萄质量，还影响社会和谐。葡萄采收后，需要经过贮藏运输才能到达消费者手中。鲜食葡萄贮运期，会受到病害的困扰；发生的病害也有多种，归纳起来有两类：一类是侵染性病害，另一类是生理性病害。贮藏期的侵染性病害主要由真菌引起，按照病原菌对温度的适应范围，又可分为两类。即适于常温、亚常温和较低温度的一类病害，为了便于区别另一类病害，我们给这一类病害起名为低温病害，这类病害发生较多的有以下几种。1.葡萄灰霉病由于灰霉菌在-0.5℃仍可生长，因此，它是葡萄低温贮藏中的主要病害，也是鲜食葡萄贮藏中具毁灭性的病害。葡萄对此病的抵抗力很弱，各品种葡萄皆易感染。灰霉病在葡萄种植园的为害也时有发生，易在被侵染部位形成黑色的菌核，这些菌核在干燥或不利的条件下长期存活。菌核在潮湿的条件下则萌发产生大量分生孢子，这些孢子能侵染幼芽、花和浆果。在贮藏期间，目前尚无有效药剂可在防治灰霉病腐烂和总的适用性方面超过SO2的性能和效果。2.葡萄青霉病葡萄青霉病是葡萄贮运期间一种较常见的病害。（1）病原。青霉属真菌（Penicillium spp.），属半知菌亚门，丝孢纲。有几个不同的种，其中指状青霉（P.digitatum Sacc.）是较常见的种。在PDA培养基上生长茂盛；菌落绒状，暗黄绿色，后变榄灰色，背面无色或淡暗褐色，有特殊的香味，分生孢子梗较短，直径4～5微米，帚状枝大而不规则；小梗在不同的高度上形成，尺度为（14～21）微米×（2.8～6.5）微米。(2)症状。初期病原菌在葡萄上形成2～8毫米水浸状圆形凹斑，果面皱缩，果实软化，组织腐烂并有一种霉味。受害的果实，组织稍带褐色，逐渐变软腐烂，果梗和果实表面常长出一层相当厚的霉层。霉层开始出现时呈白色，较稀薄，为病菌的分生孢子梗和分生孢子，当其大量形成时，霉层变为青绿色，较厚实。受害果实均有腐败的气味。在密闭的包装箱里，一旦出现病果，腐烂便会迅速地扩展，造成大量葡萄果实腐烂，甚至全箱腐烂，危害甚为严重。(3)发病规律。青霉菌是弱寄生性菌，发生侵染的部位通常是因为操作粗放、包装过紧或其他原因造成的果实伤口。病害的扩展主要与湿度有关，在包装箱内湿度高的条件下，病菌侵入果实后，可以很快地繁殖，并扩散到烂果接触的邻近果实上。青霉菌的发生还与葡萄种类、环境温度有关。在鲜食和制干葡萄生产区，如果温度太高，不利于病菌的繁殖和扩散，青霉病就发生的少；对于冷凉地区的酿酒葡萄品种来说，由于葡萄穗上的果粒紧密，较低的温度又有利于病菌的扩展，青霉病一般发生较为严重。(4)预防措施。参考葡萄灰霉病。青霉菌在低温0℃以下生长缓慢。在运输和贮藏期间可用SO2杀死或抑制青霉菌发展。精细采收与贮运，也是防止伤果、防止青霉菌为害所不可忽视的有效措施。3.葡萄黑斑病(1)病原。由真菌引起的病害。主要有多枝孢霉(Cladosporium herbarum)、交链孢霉(Alternaria alternata)和葡柄霉(Stemphylium)，是葡萄贮藏后期的重要病害。各品种葡萄都易发生此病，其中以欧洲种葡萄发病为重。(2)症状。初期发病果实上有不规则近圆形浅褐色斑，表面光滑干燥，后形成黑色或浅绿色霉层；多发生在穗梗、果梗基部及果粒侧面，并使果梗迅速失水、干缩、失绿，易侵入果刷而导致果实落粒。(3)发病规律。病菌主要由采前经田间侵入，在1～2℃的冷库中仍然能发病。枯死的花易被侵染并成为传播源，孢子借空气传播。即使在无雨的条件下，病菌也能直接侵入健康的成熟果实组织，在潮湿条件下，葡萄果实会大量发病。(4)预防措施。参考葡萄灰霉病、炭疽病的防治。上述这些病害的特点，在环境温度0～2℃下分生孢子可以萌发，菌丝还可以缓慢生长，低温下危害较大，是长期贮藏防治的对象。这类病害的病原菌需在5℃以上的温度，菌丝才能生长并开始为害。随着温度不断升高，为害不断增强，是长途运输期的主要防治对象。常见的这类病害如下。1.葡萄黑霉病(1)病原菌。黑根霉(Rhizopus nigricans)。病原菌不能在-0.5～0℃条件下生长。它是在高温运输、存放或土窖贮藏时常出现的病害。常见于马奶、无核白等葡萄早、中熟品种。(2)症状。发病初期菌丝侵入果实，先出现褐色水浸状斑，后果实流汁、软烂，果皮易脱落，病组织可迅速感染健康组织。发病果实上长出绒毛状灰色黑头菌层，故称黑霉。病菌子实体出现之前，症状类似青霉菌引起的腐烂。(3)发病规律。黑根霉是一种喜温的弱寄生菌，它主要通过果实表面的伤口侵入，因此，葡萄园管理和采收、包装操作粗放，容易为病菌侵入创造条件，高温高湿的环境条件特别利于病害的发生和发展。病菌生活在土壤或植物残体中，其孢子借空气传播。初侵染多从伤口进入，可迅速传播并侵染邻近的健康果实。(4)预防措施。参考葡萄灰霉病。降低贮藏温度，防止果实碰伤和用SO2防腐均有明显的防治效果。采后葡萄迅速预冷可大大降低因根霉菌引起的腐烂。2.葡萄曲霉腐烂病（1）病原。引起黑粉病的主要病原菌是黑曲霉（Aspergillus niger V.Tieghem），属半知菌亚门，丝孢纲。分生孢子穗灰黑色至炭黑色，圆形至放射状，直径0.3～1毫米；分生孢子梗尺度为（200～400）微米×（7～10）微米；顶囊球形或近球形，表面生小梗两层；分生孢子成熟时球形，初光滑，后变粗糙或有细刺，有色物质表面沉积成瘤状、条状或环状，直径2.5～4微米；有时产生菌核。(2)症状。黑粉病的主要特征是烂果表面产生大量的黑粉或紫黑粉状物，这是病菌的分生孢子梗和分生孢子，烂果常有一股潮湿的腐败气味。葡萄成熟时开始发生，到收获时，烂果常剩下一层干壳，用手轻碰整个腐烂的果穗，便会释放出尘埃状的孢子粉末。(3)发病规律。黑曲霉也是一种喜温好湿的弱寄生菌，21～38℃的高温最有利于黑曲霉的扩展。因而，此病常见于湿热地区。黑曲霉的侵染需要伤口和高湿度。病菌的分生孢子存在于各种基质和空气中，但只有果皮破裂或受损伤才会侵染。(4)预防措施。葡萄在采收、包装、运输、贮藏过程中，应尽力避免机械伤。为此，应轻拿轻放，防止挤压，避免二次装箱和倒箱。病害防治方法参考葡萄灰霉病。鲜食葡萄采后在贮运过程中，由于环境条件不适宜，引起生理代谢失调，发生的病变，均属于生理病害。生理病害按其病变的原因，分以下几种。1.症状SO2是葡萄常用的防腐保鲜剂，使用不当极易使葡萄中毒，果皮出现漂白色，以果蒂与果粒连接处周围的果面或在果皮有裂痕伤处最严重，中毒葡萄粒上产生许多黄白色凹陷的小斑，与健康组织界限清晰；严重时一穗上大多数果粒局部成片褪色，甚至整粒果实呈黄白色，有时整穗葡萄受害。2.发病规律鲜食葡萄冷藏指南的国际标准(ISO 2168—1974)中明确提出，“为了防止真菌繁殖，特别是灰霉菌的繁殖，可使用杀菌剂。目前通常用二氧化硫进行预处理”。但在生产实践中发现，如果二氧化硫使用不当，特别是采用直接注入二氧化硫或点燃硫磺产生二氧化硫熏蒸时，往往因用量不当，二氧化硫与空气混合不均匀等原因，使葡萄褪色或出现异味。伤害程度取决于进入果粒的二氧化硫量。葡萄对二氧化硫忍耐最弱处是浆果与果柄之间的连接处。如果果粒表面有伤口，则二氧化硫也很容易从伤口处进入。一般来讲，果实温度高的葡萄吸收二氧化硫比果实温度低的葡萄快；未成熟的葡萄吸收二氧化硫比成熟的快；薄皮品种比厚皮品种吸收快；果穗松散的比紧密的吸收二氧化硫快。破碎、损伤、潮湿及发霉的葡萄吸收二氧化硫比自然状态良好的葡萄迅速；果蒂部对二氧化硫比果粒更敏感。研究和生产实践都表明，葡萄不同品种对二氧化硫的耐受性存在较大差异。巨峰、龙眼、玫瑰香、泽香、秋黑等葡萄品种较耐二氧化硫，而红地球、木纳格、马奶等品种对二氧化硫敏感。因此，耐二氧化硫的品种和对二氧化硫敏感的品种，在保鲜剂的使用量和配置方面是不相同的。以下情况会加速SO2释放而引起漂白和加重SO2对果实的污染：果箱袋内严重结露湿度过大；果箱垛码过紧，果箱间温度差异大，贮藏前期(15天)果实温度高于0℃；冷库预冷不达标，冷库温度波动大；药剂投放量偏多或使用粉剂型且释放速度快的药剂；药剂扎眼数多或孔很大；果实质量差，引起裂果和呼吸强度大；果实伤害较多，引起呼吸强度升高。3.防治措施对葡萄采用点燃硫磺产生二氧化硫的方法处理时，应采用低浓度、分次处理的方法。对于不耐二氧化硫的品种，一要使用较低的浓度，并要先做剂量试验，以免造成较大的损失。研究指出，导致葡萄吸收5～18毫克/千克的二氧化硫熏蒸处理，足以控制灰霉病的发生，在连续作用条件下，空气中二氧化硫的浓度应保持在80～300毫克/千克，这样宽的浓度幅度在实际应用时就应充分考虑，根据不同品种和其他情况灵活掌握。如果采用亚硫酸盐缓释剂与葡萄一起放入保鲜袋，则果实封袋前对葡萄必须进行良好的预冷处理，必须把果实的温度在尽量短的时间内降到0℃后(正常年份巨峰葡萄的预冷时间一般不得超过12小时，红地球葡萄的预冷时间一般不超过24小时)，再扎紧袋口。贮藏期间保持-1～0℃的恒定低温，以保证袋内不结露和出现水汽，就可使二氧化硫的挥发缓慢均匀，减免二氧化硫伤害。必须注意不同的品种对二氧化硫的忍耐性相差很大，绝不能把贮藏巨峰、龙眼等葡萄的保鲜剂用量，用于不耐二氧化硫的红地球等品种上。根据运输距离决定是否使用保鲜剂；用于贮运的葡萄分别使用运输用保鲜剂和贮藏用保鲜剂，注意药剂种类、品种选择等以控制二次污染；注意SO2型防腐保鲜剂在箱内的均匀摆放与药剂释放量的调控。总之，不要采摘成熟不良或采前灌水的葡萄用于贮藏；对SO2较敏感的品种如里扎马特、牛奶、粉红葡萄、皇帝、无核白、红地球等，要通过增加预冷时间、降低贮藏温度、控制药剂用量和包装膜扎眼数量或者使用复合保鲜剂，适当减少SO2释放量；减少人为碰伤，一旦果皮破伤或果粒与果蒂间有肉眼看不见的轻微伤痕，都会导致SO2伤害而出现果粒局部漂白现象。另外，挤压伤也会引起褐变，压伤部位呈暗灰色或黑色，并因吸收SO2而被漂白。1.病状裂果是葡萄贮藏过程中最易发生的生理病害，多在果顶或梗附近发生果皮与果肉破开。2.发病原因及条件粉红葡萄、红马拉加、无核白、乍娜、里扎马特、美国黑大粒等品种易发生裂果。若采前灌水或成熟期多雨，即使果皮较厚的巨峰葡萄，在贮藏期间也会发生裂果，随贮藏期的延长而加重。此病应通过栽培措施加以控制。开裂的果实在贮藏过程中不但自身易腐烂和出现漂白斑点，而且裂果易造成“保鲜剂局部积累过多”，其余部分葡萄果实周围的“药劲不足”。3.防治措施采收前防止裂果，请参考生理性病害。在贮藏过程中要防止裂果，主要办法是：①降雨量大的年份，或者生长前期干旱后期降雨量大的年份应延迟采收并延长预冷时间。②采收前喷布100倍CT葡萄涂膜剂。③严禁有裂果的葡萄入库贮藏。④防止贮藏过程中保鲜袋内的结露。⑤采收及贮藏过程中要轻拿轻放，防止挤压、颠簸，包装容量不宜过大，应以单位重量5千克以下为宜。1.症状虽然略低于冰点的温度并不伤害果实，但可使果梗变成深绿色，呈水渍状态，贮藏时易受SO2侵害，出现浅褐色腐烂，最后造成果梗干缩变褐。果实受冻时可呈褐色、蔫软，或渗出果汁。冻害还导致霉菌侵染，引起霉变腐烂。2.发病原因及条件北方地区，晚熟、极晚熟品种会受各种因素影响而采收期推迟，常会在晚秋遇到早霜冻。冻害既可能发生在田间，也可能因冷库温度低于葡萄冰点引起冻害。在长城以北地区，极晚熟品种采收期极易遇早霜、轻霜，若持续时间不长，对果穗影响不大；经受重霜或霜冻危害的葡萄则不能用于贮藏。3.防治措施（1）采收期不宜过晚，应在早霜之前采收完毕。（2）贮藏过程中温度应严格控制在-0.5℃±0.5℃。（3）靠近冷风机附近的葡萄应加覆盖物。（4）及时观察库内的情况，一旦看到葡萄出现冻结情况应及时调控温度，如果冻结时间不很长，通过逐步升温可以缓解。1.症状葡萄果肉褐变在不同品种上的表现不同，红色品种褐变表现为果实色泽发暗，一些白色品种更易显现，如牛奶、无核白、意大利、白马拉加等欧洲种的脆肉型品种。这类品种在贮藏后期也易出现果肉内部褐变。一般是从维管束开始褐变向果肉扩展。2.发病原因及条件葡萄的褐变由多种因素引起，衰老也是褐变的一种表现，冻害或损伤也能引起果肉褐变。此外灰霉病等病菌的侵染，果实贮藏过程中气体不适也会引起果肉褐变。3.防治措施贮藏期应随时注意观察褐变的初始迹象，并及时出库销售。（1）贮藏温度过低，但未达到冰点，引起生理代谢失调，发生果皮、果梗及果穗褐变，属于冷害。（2）气调贮藏中，过低的O2（2%以下），过高的CO2（10%以上），产生的低O2和高CO2伤害。（3）贮藏温度过高，湿度过大，引起的大量脱粒；或采前使用催熟剂，发生脱粒。采前葡萄生育期的气候、栽培管理、病虫害防治、葡萄质量对采后各类微生物病害、生理病害均可产生影响(表11-1)。采前不利因素可能引起的贮藏病害花前多雨灰霉病菌侵入、潜伏，贮藏期发病霉烂果实成熟期多雨灰霉等病菌侵入、发病，贮藏期裂果、霉烂、SO2漂白果实熟期连续干旱裂果、干梗果实采前轻霜冻果梗SO2漂白、霉变黑梗产量过高或施氮过多裂果、SO2漂白、果穗内部腐烂花前花序拉长剂过量干梗果实熟期使用催熟、催红药脱粒、裂果后期感染霜霉病、白腐病、炭疽病干梗和果实腐烂采前灌水裂果、腐烂和SO2漂白表11-1 采前因素对葡萄贮藏病害的影响由于引起葡萄贮藏期果实腐烂的病原主要是一些由伤口侵染的弱寄生菌，其中有些是早期侵入后，由于寄主的抗性较强而潜伏于果实内，待果实成熟时才出现症状，引致腐烂；此外，多数是在高湿度和高温、不通风的贮藏条件下，有利于病害发展。因此，对这类病害的防治，应以做好早期的预防工作为主。1.采收前葡萄园应进行精细管理，通过修剪清除受伤和已发病的果实；使用一定浓度的赤霉素适当疏果，使果穗不要过于紧密，以防成熟前或成熟过程中，由于果粒膨大相互挤压造成果皮伤裂；在刚坐果和果实成熟时，应慎重用水，避免造成太大的田间湿度和在果实表面长时间留下自由水，而给病菌创造有利的侵染条件。此外，田间病虫害的防治，具有决定性作用。2.采收时采收时期过早，果实含糖量低、酸度高，会影响果实的品质和产量，采收过晚，有的品种易出现落粒现象，而且果实过熟往往不利于贮藏。因此，要根据品种的特性，市场的需要，选择相适宜的采收期。由于葡萄果实皮薄汁多，采收时，剪、拿、运、送等操作都要十分细致小心，尽量减少损伤，防止擦去果粉，采收的时间宜选择晴朗天气露水干后的上午或气温凉爽的傍晚，在露水未干的清晨、阴雨天，特别是雨后烈日暴晒的情况下不宜采收，不然会降低品质和不利于贮藏。3.采收后采收后应迅速将果实运送到阴凉处摊开散热，然后进行整修、分级包装。整修时应将所有病果、虫伤和机械损伤的果实剪除。装箱后要进行预冷，以消除田间带来的热气，及降低呼吸率，还可以预防果梗变干、变褐及果粒变软或落粒，利于延长贮存时间。贮藏前用二氧化硫熏蒸，不但能杀死果实表面各种可能引起果腐的病原菌，而且可以降低果实呼吸率，减少糖分的消耗，并能较长时间保持果色和保持果穗梗的新鲜状态。4.综合防治贮藏真菌病虫害防治的主要措施如下。(1)加强果园田间病害防治。(2)长期贮藏的葡萄可于采前对果穗喷一次杀菌剂。(3)采收时认真筛选栽培管理好的无病果园和挑选果穗，剔除病、虫、伤果。(4)轻拿、轻放、轻运，防止人为伤果。(5)迅速降低库温，保持温度稳定。(6)气调贮藏，选择适合不同品种的保鲜袋。(7)使用防腐保鲜剂。采后葡萄产品质量是葡萄贮藏病害防控的生命线。近年来我国葡萄质量虽有很大的进展，但与贮藏果品的质量要求还有差距。1.葡萄标准化栽培方面(1)整形修剪。葡萄果穗生长期间，可使用生长调节剂调控或进行整形修剪、疏花疏果，培育出适合的穗形和果粒。一般果穗在300～500克，大穗型在700～800克。亩产不超过1500～2000千克。(2)架式改良与机械化利用技术。通过架式以及栽培方式的改良，使得葡萄果实穗形、成熟度等各方面标准统一，既有利于采后葡萄果实外观以及品质质量，又方便机械化操作。(3)肥料使用技术。果穗生长期间，适量施用氮肥，适期多施有机肥和磷、钾肥。(4)节水灌溉技术。葡萄采前10～15天内停止灌溉，遇雨应推迟采收并及时排水。(5)病虫害综合防治技术。葡萄采前在田间病虫害的规范化防治，采前应喷1～2次食品添加剂级防腐保鲜剂。(6)植物生长调节剂安全使用技术。适量使用膨大剂和无核剂。严禁使用催熟、催红、催甜等激素。(7)葡萄栽培生产中，果实套袋管理。可调节果色，减少病虫污染和减少农药使用。(8)记录葡萄生产档案，建立质量追溯系统。控制葡萄源头的质量是确保物流中鲜食葡萄质量和安全的源头，建立质量可追溯系统，可实施产地标识，即在包装箱上清楚标记生产农户、产品名称、地点、产品标准、等级等，进行质量跟踪，提高安全意识。2.采收关键环节应在早晨露水干后或下午气温凉爽时采收，避免在雾天、雨天、烈日暴晒时采收。同一果园葡萄应多次采收。应选择果穗紧凑、穗形适宜，果粒均匀，且无病虫害的果实采收。人工采收应用圆头剪刀，一手握采果剪，一手提起主梗，贴近母枝处剪下，尽量带较长的主梗。轻采轻放，尽量避免机械伤害。采收同时，对果穗上的伤粒、病粒、虫粒、裂粒、日烧粒等进行剪除，并对果穗进行修整和挑选。落地果、残次果、腐烂果、沾泥果不能用于贮存。对田间经修整和挑选的葡萄，可直接放入贮藏容器或运输容器中，对未经修整和挑选的葡萄可放入采收容器中，运到包装间，进行修整和挑选处理。采收后，果实应放到阴凉处，或尽快运到包装间，避免日晒雨淋。果实随采、随运，采后田间停留不应超过2小时，应在6小时内进入预冷过程或冷藏环境。1.把好入贮质量关葡萄贮藏保鲜是葡萄生产的继续，提供代谢正常、田间带菌量低、质量好、耐贮藏、抗病强的葡萄入库贮藏，才能为产品长期贮藏获得良好的质量和效益奠定基础。要选择耐藏的优良品种。葡萄不同品种之间的耐藏性差异很大；一般情况晚熟品种比早熟、中熟品种耐贮藏，中熟品种比早熟品种耐贮藏。龙眼是北方常见的栽培品种，果实柔软多汁，味酸甜，果粉厚，果皮中厚，抗病，耐旱，耐贮运性很强；巨峰是各地主栽品种，果实味甜酸多汁，品质较好，果粒大，抗病力强，耐贮运性中上；玫瑰香属我国最早引入品种，果实含糖量高，味甜，有浓郁的玫瑰香味，鲜食品味极佳，果皮中厚且韧，耐藏性中等；牛奶品种肉质硬脆多汁，味甜无香味，品质上，皮薄，果粉薄，耐藏性中下；其他果皮厚韧，果面和穗轴含蜡质和含糖量高的晚熟优良品种：红提、秋黑、甲斐路、红宝石、红瑞宝耐藏性都较好；一些7月、8月份采收的莎巴珍珠、京亚、87-1、无核白鸡心等早熟品种，耐藏性差。2.库房消毒葡萄贮运设施(包括简易贮藏场所、通风库、机械冷藏库和运输车辆等)，是葡萄贮藏病害的主要初侵染源之一，对贮运设施进行清洁和消毒可有效地减少和杀灭贮运设施中的病原微生物，减少贮藏病害的发生。因而，在每次贮运产品前必须对贮运设施进行彻底清扫，地面、货架、塑料箱等应进行清洗，以达到洁净卫生。同时要对贮运设施、贮藏用具等进行消毒杀菌处理，常用的杀菌剂及使用方法如下。(1)高效库房消毒剂。CT高效库房消毒剂，为粉末状，具有杀菌谱广，杀菌效力强，对金属器械腐蚀性小等特点。使用时将袋内两小袋粉剂混合均匀，按每立方米5克的使用量点燃，密闭熏蒸4小时以上。(2)二氧化氯。该剂为无色无臭的透明液体，对细菌、真菌都有很强的杀灭和抑制作用。市售消毒用二氧化氯的浓度为2%。(3)过氧乙酸。是一种无色、透明、具有强烈氧化作用的广谱液体杀菌剂，对真菌、细菌、病毒都有良好的杀灭作用，分解后无残留，但腐蚀性较强。使用方法是，将市售的过氧乙酸消毒剂甲液和乙液混合后，加水配制成0.5%～0.7%的溶液，按每立方米空间500毫升的用量，倒入玻璃或陶瓷器皿中，分多点放置在冷库中，或直接在库内喷洒(注意保护操作人员的皮肤眼睛等，也不能将药液喷洒在金属表面)，密闭熏蒸。（4）高锰酸钾和甲醛的混合液（福尔马林含40%甲醛，使用时要折算成甲醛）。按1：1的重量比将高锰酸甲加入甲醛液体中，使用量为每百立方米1千克，操作时要注意安全，迅速撤离，密闭库房48小时以上。此法适用于污染较重的老库。(5)漂白粉溶液。贮运设施消毒常用4%的漂白粉溶液喷洒，在葡萄贮藏期间结合加湿，也可喷洒漂白粉溶液。3.温度、湿度、气体的控制在葡萄贮运保鲜过程中，温度、湿度、气体成分的控制与防腐保鲜剂的使用，是保持产品质量和延长贮运期限的四个必不可少的技术措施。葡萄贮藏的适宜低温为-1～0℃，适宜的低温在葡萄贮运保鲜的所有措施中可占60%～70%甚至更高的效应，这是因为低温能明显地降低葡萄的呼吸强度，延缓生理代谢过程，减少营养物质的消耗，提高葡萄对病菌侵染的抵抗力；低温对病菌孢子的萌发、生长和致病力有明显的抑制作用。葡萄保鲜的目的，从一个角度来理解，可认为是“保水”，水分散失较多，鲜度就会降低较多，通常当葡萄的水分散失量超过5%时，就会表现出明显的萎蔫皱缩，因此，葡萄贮运期间要求较高的相对湿度，一般应保持在90%～95%。气体调节可延缓葡萄的衰老，特别是葡萄果梗的衰老，并对病菌孢子的萌发、生长和致病力也有明显的抑制作用，将CO2控制在5%～8%尤为重要。葡萄在没有保鲜剂使用的情况下即使对温度、湿度和气体成分进行严格的控制，在不太长的贮藏期内其腐烂程度仍然是相当严重的，防腐保鲜剂的使用结合温度、湿度和气体成分的控制，才能对葡萄进行较长期的贮运保鲜，一般使用可控释放SO2的亚硫酸盐作为葡萄的保鲜剂。(1)冷藏。温度是一切水果和蔬菜贮藏的基础条件，一般说来，葡萄的最佳贮藏温度为0～10℃。葡萄粒的冰点为-3.7～-2℃，这种冰点差异主要来自于品种、成熟度以及果实的含糖量。如晚采的龙眼葡萄，含糖量达到15%以上时，其冰点为-3.5℃，这种葡萄即使贮藏在-3℃温度下，葡萄粒也不会遭受冻害。但当温度低于-1℃以下时，便会造成果梗和穗梗不同程度的冻害(果梗的冰点在-1.1℃，穗梗的冰点在-1.3～1.1℃)。所以，鲜食葡萄长期贮藏中，温度不宜过低，应在-1～0℃。但温度又不可过高，当贮藏温度长期在1℃以上时，便会加大病害的危害程度，腐烂率增高。这里简单介绍不同处理阶段的温度参数：①冷藏温度：-1～0℃。②变温贮藏：-1～10℃(不超过20天)。③预冷温度：1～3℃(12～18小时)。不同的品种适于冷藏或变温贮藏均有明显差异，以巨峰和龙眼两个品种为例，巨峰葡萄极适于冷藏，果实采后立即预冷(1～3℃)，将其贮藏在-1～0℃的条件下，效果较好。而龙眼葡萄则以变温贮藏效果最佳。鲜食葡萄贮运中的适宜相对湿度为90%～95%。(2)气调贮藏。应用气调进行鲜食葡萄的保鲜，虽然国外在生产上并未大量应用，而我国传统的贮藏方法中早已应用。民间采用的沙(土)埋、糠藏、囤藏以及后来的缸藏，均为气调贮藏的一种方式。目前，采用PVC或PE塑料小包装进行冷藏和变温贮藏，也是一种简易气调贮藏技术。试验证明，气调贮藏不但能保持果实水分和熏蒸防腐，更重要的是改变贮藏环境中的气体成分，抑制果实的呼吸强度，达到果实保鲜和果梗保绿，并防止果实脱粒。鲜食葡萄贮藏中的气体成分，不同品种之间虽然有一定的差异，但并不十分明显，大体趋势为：通常鲜食葡萄在气调贮藏过程中，对低氧和高二氧化碳是不敏感的，但过高的二氧化碳和过低的氧也会产生伤害。伤害的初期症状表现为，产生刺鼻的乙醇味，继而出现果皮褐变，果梗及穗梗发生浅褐色的病变。4.防腐保鲜葡萄柔软多汁，贮藏期内很易发生青霉病、灰霉病和褐腐病。在-1℃低温下仍可使病害传染，造成腐烂变质。多年贮藏实践总结的经验是葡萄贮藏必须配合使用防腐措施。(1)硫黄熏蒸。土窖和通风库入贮前，需每立方米用10～15克硫黄，窖内布点燃烧密闭熏蒸杀菌一昼夜，然后通风换气。采用装筐(箱)不封袋，或在窖内堆摆，或吊挂方法贮藏葡萄，入窖后按每立方米4克硫黄量熏蒸，前一个月10天熏1次，以后每月熏1次，用量为每立方米2克硫黄，开春3—4月，再增加到每立方米4克。(2)二氧化硫熏蒸。熏蒸应分次进行，首次可用0.5%的二氧化硫熏蒸20分钟，必须使二氧化硫迅速而均匀地达到每箱的每个果穗中，以确保防效而不致引起病害。再次熏蒸时，二氧化硫浓度用0.1%熏蒸30分钟。这种处理大约每隔7～10天进行一次。葡萄贮藏期用二氧化硫消毒，除了熏蒸法以外，还有其他多种处理方法，可参考其他的有关资料。(3)防腐保鲜片。采用衬薄塑料袋装箱，冷库堆垛的可在入库敞口预冷后或在田间按每千克葡萄加4片CT-保鲜片(每小袋2片，用大头针在小袋两层膜上扎2个透眼)。5.包装包装分为预包装、短期冷藏及运输包装和长期冷藏包装。预包装包括用软绵纸单穗包裹、用纸袋或用果实套袋单穗包装、用开孔塑料或塑料与纸做成的T-形袋、圆底袋或方形袋单穗包装。也有以300～500克装入塑料盒、塑料盘、纸盘和泡沫塑料盘，再用自粘膜或收缩膜进行裹包。短期冷藏及运输包装一般装入5～10千克。包括不衬塑料膜(袋)箱装和塑料膜(袋)衬里箱装。不衬塑料膜(袋)箱装是把无预包装或经预包装的葡萄单层放入瓦楞纸箱、塑料箱(筐)、泡沫塑料箱或木箱；塑料膜(袋)衬里箱装是用0.02～0.03毫米厚有孔或无孔塑料膜(袋)展开，衬放瓦楞纸箱、塑料箱(筐)、泡沫塑料箱或木箱后，再把无预包装或经预包装的葡萄单层放入。两者最后要进行托盘包装，也就是将葡萄包装箱摆放在托盘上，用拉伸(收缩)塑料膜或塑料网缠绕包裹。长期冷藏包装包括不衬塑料膜(袋)箱装和塑料膜(袋)衬里箱装。不衬塑料膜(袋)箱装是把无预包装的葡萄，单层直接放入瓦楞纸箱、塑料箱(筐)、泡沫塑料箱或木箱；塑料膜(袋)衬里箱装是用0.02～0.03毫米厚塑料膜(袋)展开，衬放瓦楞纸箱、塑料箱(筐)、泡沫塑料箱或木箱，再把无预包装的葡萄单层放入。

Keywords:Magnaporthe grisea;pathogenicity;T-DNA insertional mutants;gene function稻瘟病菌[Magnaporthe grisea（Hebert）Barr.，无性世代为Pyricularia grisea（Cooke）Sacc.]侵染水稻引起的稻瘟病是水稻“三大病害”之一[1，2]，严重限制世界水稻产量，但迄今为止对其致病性及其变异的机制了解得仍然不够透彻。已知水稻与稻瘟病菌之间的特异性互作，符合Flor提出的“基因对基因”关系假说[3]。对稻瘟病菌无毒基因的研究，将有助于进一步了解稻瘟病菌致病性变异的机制以及水稻与稻瘟病菌之间分子水平特异性互作的机制。目前，通过遗传分析或分子标记技术，已鉴定了至少30个稻瘟病菌无毒基因[4～7]，其中仅有5个无毒基因（PWL1、PWL2、AVR1-CO39、AVR-Pita、ACE1）被克隆[8～12]。此外，稻瘟病菌的侵染过程是一个错综复杂的循环过程，涉及一系列形态结构与生理生化的变化，故而除了无毒基因之外，与稻瘟病菌致病过程有关的基因的研究也是研究者关注的焦点，目前已经克隆和分析了包括MPG1，CPKA1，PTH11，PMK1，MPS1，MAGB，MAC1，PDE1，PSL1，TPS1等40余个参与稻瘟病菌生活史各个阶段的功能基因[13，14]。稻瘟病菌基因组全序列测定已经完成[15]，伴随着生物信息学的飞速发展，进一步以功能基因组学的研究方法从全基因组水平研究水稻与稻瘟病菌之间特异性互作的分子机制、诠释关键基因的功能已经成为解决持久抗瘟问题的关键所在。本研究正是通过接种筛选本实验室已建成的稻瘟病菌菌株FJ95054 B T-DNA插入突变体库，获得致病性变异稳定的突变体，运用TAIL-PCR方法获得了突变体被T-DNA标记的侧翼序列，并通过一系列表型分析、分子生物学实验及生物信息学分析初步分析了T-DNA插入区域的基因功能，为进一步获得相关病菌小种的无毒基因或与致病性相关的基因奠定良好的基础。稻瘟病菌菌株FJ95054B，是本研究的野生型对照菌株，由本实验室从福建田间单孢分离得到的菌株；供筛选的突变体菌株，是随机从本实验室已建成的稻瘟病菌菌株FJ95054B T-DNA插入突变体库中抽取的。供接种筛选的水稻品种CO39近等基因系：C101LAC Pi-1（t）、C101A51 Pi-2（t）、C104PKT Pi-3（t）、C101PKT Pi-4a、C105TTP-4L-23 Pi-4b及感病对照CO39，由国际水稻研究所提供。稻瘟病菌菌株的活化、扩大培养及产孢方法参照王宝华等[16]，育苗及接种方法参照张学博等[17]。接种后8～10 天，采用目测法调查并记载各品种水稻叶片上的病斑反应型。病斑反应型的记载标准参照Valent等[18]的方法，具体分级标准如下：0级：无病斑；1级：只有针尖大小的褐色斑点（病斑直径可达0.5cm）；2级：直径约0.5～1mm褐色病斑，病斑有明显黄褐色中心；3级：直径约为2mm的褐色眼状病斑，中央灰色，边缘褐色；4级：长约3～4mm中等大小的灰色梭形病斑，边缘褐色；5级：病斑达到最大（CO39的眼状病斑最长约为5mm），甚至多个病斑连片，叶枯死，如出现暗绿色急性病斑或叶节瘟也属于这一类型。其中，0～2级记为抗病反应，3～5级记为感病反应。参考李宏宇方法[19]，观察所获得突变体的形态特征及其生长发育过程，记录菌落直径、产孢量、孢子萌发率、附着胞形态和形成率以及洋葱表皮侵入情况。稻瘟病菌基因组DNA的提取参照何月秋方法[20]。TAIL-PCR反应使用的T-DNA左、右边界嵌套引物为：LB1：5'-GGGTTCCTATAGGGTTTCGCTCATG-3'；LB2：5'-CATGTGTTGAGCATATAAGAAACCCT-3'；LB3：5'-GAATTAATTCGGCGTTAATTCAGT-3'；RB1：5'-GGCACTGGCCGTCGTTTTACAAC-3'；RB2：5'-AACGTCGTGACTGGGAAAACCCT-3'；RB3：5'-CCCTTCCCAACAGTTGCGCA-3'。使用的随机引物为AD7：5'-TG（A/T）GNAG（A/T）ANCA（G/C）AGA-3'；AD9：5'-TCGTTCCGCA-3'；AD12：5'-（A/T）AGTGNAG（A/T）ANCANAGA-3'。以上引物由上海生工生物工程服务有限公司合成。10×PCR Bufer、dNTP、rTaq酶均购自宝生物公司（TAKARA）。TAIL-PCR反应程序参考文献[21]。将TAIL-PCR第2、3步扩增产物用0.5×TBE制备1.0%琼脂糖凝胶进行电泳检测，电泳电压为5 V/CM。电泳结束后，将凝胶放入含EB的0.5×TBE 中染色20～30min，用紫外透射反射仪观察并照相记录。TAIL-PCR扩增产物通过电泳分离后，回收目的片段，纯化后与pGEM-T Easy Vector（购自Promega公司）连接；连接产物通过热激转化到DH5α感受态细胞中，通过蓝白斑反应初筛转化子；采用碱裂解法少量提取转化子中的质粒DNA，通过PCR及酶切鉴定，挑选。将含正确插入的转化子的克隆，送由上海鼎安生物科技有限公司测序。测序获得的序列去除T-DNA载体序列后，将剩余的序列与GenBank数据库（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）、稻瘟菌基因组数据库（http：//www.broad.mit.edu/annotation/fungi/magnaporthe/index.html）进行Blast比较分析及相关生物信息学分析，以推断T-DNA所插入的基因及其可能的功能。此外，应用SignalP 3.0 server（Http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）推断所获得的基因序列中是否含有信号肽（signal peptide，SNP）；应用Pfam（http：//www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/）推测基因编码的蛋白可能的结构域；应用TMHMM-v 2.0（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）预测基因编码的蛋白可能的跨膜结构域；应用Protcomp-v 6.0（http：//sun1.softberry.com/berry.phtml）对基因编码的蛋白质进行亚细胞定位，该软件可将蛋白质按细胞核、质膜、胞外分泌、细胞质、线粒体、内质网等归属进行划分；应用TargetP-v 1.1（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/）进一步确定预测蛋白的亚细胞定位，其可将蛋白质的定位归属于线粒体、叶绿体、胞外分泌以及其他亚细胞定位。将随机选取的60个突变体与野生型菌株FJ95054B分别接种在国际水稻研究所提供的CO39近等基因系的6个水稻品种上，即C101LAC Pi-1（t）、C101A51 Pi-2（t）、C104PKT Pi-3（t）、C101PKT Pi-4a、C105TTP-4L-23 Pi-4b、CO39，每个突变体都进行3个平行以上的接种试验。接种后发病情况显示：野生型菌株FJ95054B对Pi-1（t）、Pi-2（t）、Pi-4a均无致病性，对Pi-3（t）、Pi-4b、CO39致病，而在随机选取的突变体中有3个突变体的致病性发生了稳定的变异，如表1、图1所示。其中，突变体2t-2 T940024501对水稻品种Pi-2（t）从无毒转变为有毒，突变体T940084501和T940086501在水稻品种CO39上的致病性减弱。菌株号IsolatesC101LACPi-1（t）C101A51Pi-2（t）C104PKTPi-3（t）C101PKTPi-4aC101TTP-4L-23Pi-4bCO39FJ95054B（WT）RRSRRS2t-2T940024501/++////T940084501/////—T940086501/////—表1 稻瘟病菌T-DNA插入致病性突变体接种CO39近等基因系的发病情况*Table 1 Virulence of T-DNA insertional pathogenicity mutants on CO39 NILs稻瘟病菌侵染过程中的任何一个环节被破坏均会导致致病性减弱或丧失，因此，对致病性减弱的突变体进行相关表型分析，有助于了解其致病性减弱的原因。筛选出的两个致病性减弱突变体的生长发育变化情况如表2所示。与野生型FJ95054 B相比，两个突变体均表现出生长速度减缓、单位面积产孢量显著减少、孢子萌发率和附着胞形成率降低的性状（在α=0.05水平上差异显著）， 这些都可能是造成突变体致病性减弱的原因。图1 稻瘟病菌致病性突变体的变化情况Figure 1 Pathogenicity of mutants of M.grisea compared with wildtype FJ95054B菌株Isolate菌落直径Colonydiameter（cm）产孢量Sporulation（105spores/cm2）8h孢子萌发率Percentageofsporegermination8hpi（%）16h附着孢形成率Percentageofappressoriumformation16hpi（%）95054B（WT）5.20±0.100.7499.0693.68T-9400845014.17±0.030.001287.9073.17T-9400865014.22±0.070.003383.8963.69表2 稻瘟病菌致病性减弱突变体的生长发育变化Table 2 Morphology and development of pathogenicity-decreased mutants of M.grisea此外，在洋葱表皮侵入实验中，野生型FJ95054B侵入正常，能形成正常的附着胞以及侵染栓，并能观察到菌丝在洋葱细胞内广泛蔓延。相比之下，突变体T940084501的孢子能够形成附着胞，但随后并未形成侵染栓侵入，未发现菌丝在洋葱细胞内蔓延；而突变体T940086501的部分孢子能够形成附着胞，但同样未能形成侵染栓侵入，也未发现菌丝在洋葱细胞内蔓延，还有部分孢子甚至不会形成附着胞。这些都可能是其致病性减弱的原因。实验结果如图2所示。图2 稻瘟病菌致病性减弱突变体的洋葱表皮侵入实验结果Figure 2 The results of onion penetration assays of pathogenicity-decreased mutants of M.grisea使用右边界嵌套特异引物RB与随机简并引物AD7组合，扩增出了突变体2t-2 T940024501的T-DNA侧翼序列（如图3A所示）；使用左边界嵌套特异引物LB与随机简并引物AD9组合，扩增出了突变体T940084501的T-DNA侧翼序列（如图3B所示）。突变体T940086501的T-DNA侧翼序列通过TAIL-PCR反应尚未获得。通过在稻瘟菌基因组数据库进行的比对分析，结果显示突变体2t-2 T940024501 T-DNA侧翼序列中的117～591 bp区段与稻瘟病菌基因组supercontig5.183的776534～777008 bp同源（同源率98%）， T-DNA 插入位点位于基因 MGG_07927.5 的外显子区，该基因位于Chromosome/Linkage GroupⅢ，编码一个假定蛋白（ hypothetical protein）， 该蛋白属于Glyco-syl hydrolases family 18（糖基水解酶家族18）。图3 TAIL-PCR第二步和第三步产物的电泳图谱Figure 3 Electrophoresis patterns of secondary and tertiary TAIL-PCR products（secondary and tertiary products of the same isolate are loaded side by side）分别利用SignalP 3.0、Protcomp-v 6.0、TMHMM-v 2.0、TargetP-v 1.1以及Pfam对该基因编码的蛋白进行分析。首先通过Signal IP 3.0预测，并不包含信号肽结构；继而经TMHMM-v 2.0预测，不含跨膜结构；通过Protcomp-v 6.0和TargetP-v 1.1分析表明，含有胞外分泌信号，是一种胞外分泌蛋白，在胞内无定位。另外，Pfam分析结果表明，该基因可能具有某种糖基水解酶活性。目前仅知该基因被T-DNA阻断后，突变体菌株对水稻品种Pi-2（t）从无毒转变为有毒，至于其在病原菌致病过程中的具体功能尚需通过进一步的基因敲除和功能互补实验加以确定。至于突变体T940084501的T-DNA侧翼序列，在稻瘟病菌基因组数据库中未比对到其同源序列，而在GenBank数据库中同样未比对到与稻瘟病菌相关的同源序列。由于该序列可能是FJ95054B菌株的特异序列，拟根据该序列扣除与载体有关序列及引物序列后的剩余序列设计引物，筛选FJ95054B BAC文库。对稻瘟病菌无毒基因以及致病过程有关基因的研究一直是了解稻瘟病菌致病性及其变异机制乃至水稻与稻瘟病菌特异性互作机制的关键所在，而研究某一个具体基因的功能最便捷的方法就是对该基因的突变体进行分析，这也正是本研究筛选T-DNA插入所致致病性突变体的初衷所在。获得致病性变异稳定的突变体是本研究的关键之一。本研究通过大量平行、重复实验初步筛选出致病性表型稳定的突变体，随后为避免由于菌株污染而造成的致病性变异的假象，还进一步将所获得的致病性突变体进行单孢分离，将分离的单孢与原菌株一同进行接种实验，结果显示单孢与原菌株的发病情况基本保持一致。这为进一步的分子水平的研究奠定了良好的基础。本研究对所获得的基因的功能还只是做了初步的预测，为了明确其功能尚需要借助进一步的基因敲除和功能互补实验。另外，为了明确致病性变异是否为单基因作用所致，尚且需要对致病性突变体的后代群体进行接种实验和潮霉素抗性分析，通过检测其后代的表型分离比率加以验证。

在建园前要根据柑橘(柑橘)的生物学特性，分析建园地的地形、气候、土壤、水源等环境条件，综合评价，因地制宜选择园地。园地选定后，应根据建园要求与当地自然条件，本着充分利用土地、光能、空间和便于经营管理的原则，进行全面的规划。规划的具体内容包括:作业小区的划分、道路设置、水土保持工程的设计、排灌系统的设置以及辅助建筑物的安排等。1.修筑等高梯田梯田是山地果园普遍采用的一种水土保持形式，是将坡地改造成台阶式平地，使种植面的坡度消失，从而防止了雨水对种植面土壤的冲刷。同时，由于地面平整，耕作方便，保水保肥能力强，因而所栽植的柑橘(柑橘)生长良好，树势健壮(图4-1)。图4-1 水平梯田2.挖鱼鳞坑坡度较大、地形复杂的山坡地，不适合修水平梯田和撩壕时，可以挖鱼鳞坑(图4-2)进行水土保持，或因一时劳力不足、资金紧缺等原因，不能及时修筑梯田的山坡，可先修鱼鳞坑，以后逐步修筑水平梯田。图4-2 鱼鳞坑(1)定定植点。修筑时，先定基线，测好等高线，其方法与等高梯田相同。在等高线上，根据果树定植的行距来确定定植点。(2)挖坑。以定植点为中心，从上部取土，修成外高内低半月形的小台面，大小为2～5m2，使之一半在中轴线内、一半在中轴线外，台面的外缘用石块或土堆砌，以利保蓄雨水。将各小台面连起来看，好似鱼鳞状排列。(3)回填表土和有机肥。在筑鱼鳞坑时，要将表土填入定植穴，并施入有机肥料。这样，栽植的果树才能健壮生长。3.撩壕撩壕，是在山坡上，按照等高线挖成的等高沟。把挖出的土在沟的外侧堆成垄，在垄的外坡栽果树，这种方法可以削弱地表径流，使雨水渗入在撩壕内，既保持了水土，又可增加坡的利用面积(图4-3)。图4-3 撩壕1.平地果园的开垦平地包括旱田、平缓旱地、疏林地及荒地。规模在10hm2*以上的果园，可采用重型大马力拖拉机进行深犁(30cm)，重耙2次后，与坡度垂直方向定线开行和定坑，根据果树树种确定行株距。如坡度在5°～10°可按等高线定行，按同坡向1hm2或2～3hm2为一小区，小区间留1m宽的小道，4个以上的小区间设3m宽的作业道与支道相连。果园内设等高防洪、排水、蓄水沟，防洪沟设于果园上方，宽约100cm、深约60cm；排水和蓄水沟深约30cm、宽约60cm。规模在10hm2以下的小果园，由于设在平地或平缓地，应精心开垦和进行集约化栽培管理，在有限的土地面积中夺取最高效益。开垦中尽量采用大马力重型拖拉机进行深耕并重耙2次，然后根据地形地势和果树树种按等高线或直线确定行株距。地势坡度为5°～10°，可采用水平梯田开垦，根据果树树种确定行株距;地势坡度在5°以下，地形完整的经犁耙可按直线开种植畦，畦中开浅排水沟，沟宽约50cm、深约20cm，种植坑直径约1m、深0.8～1m。如在旱田或地下水位高的旱地建园，必须深沟高畦，以利排水和果树根系正常生长。2.丘陵果园开垦在海拔高度为400m以下、坡度为20°以内的丘陵地建果园较为适宜。(1)兴建10hm2以上的果园。坡度在10°～15°、坡地面积在5hm2以上、海拔在200m以下的丘陵地，可采用45匹马力(1马力≈735W)左右履带式或中型机具挖土和推地于一体的多功能拖拉机，先按行距等高定点线推成2～3m宽水平梯带，而后再按株距定点挖种植坑(1m3)。海拔在200～400m高、坡高度在15°～20°、坡地面积在5hm2以下的丘陵地，先按行距等高定点线推成1～1.5m宽水平梯带，而后按株距定点挖成0.6m×0.6m×0.6m的种植坑。(2)兴建10hm2以下的果园。可根据开垦地海拔高度、坡度，以坡面大小进行等高定行距，先开成水平梯带，然后按株距挖坑；或者根据行距等高线定株距挖坑。种植后力求在2年内，结合扩坑压施绿肥、作物秸秆、有机肥改土时逐次修成水平梯带，方便今后作业、水土保持和抗旱。开垦和挖坑应在回坑、施基肥前2个月完成，使种植坑壁得到较长时间的风化。1.优质壮苗选择壮苗是柑橘(柑橘)早结丰产的基础。壮苗的基本要求:品种纯正，地上部枝条生长健壮、充实，叶片浓绿有光泽。苗高35cm以上，并有3个分枝。根系发达，主根长15cm以上，须根多，断根少。无检疫性病虫害和其他病虫害，所栽苗木最好是自己繁育或就近选购的，起苗时尽量少伤根系，起苗后要立即栽植。2.营养篓假植苗营养篓假植苗木与大田苗木直接上山定植相比，具有以下优点。(1)成活率高。春季定植，多数为不带土定植。由于取苗伤根，特别是从外地长途调运的苗木，往往是根枯叶落，加上瘦土栽植，成活率低，通常只有70%～80%。而采用营养篓假植苗木移栽，苗木定植后成活率达98%以上。(2)成园快。常规建园栽植，由于缺苗严重，不但补栽困难，而且成活苗木往往根系损伤过重，春梢不能及时抽发，影响正常生长，造成苗木大小不一，需要2～3年才能成园。而营养篓假植苗木，可充分发挥营养篓中营养土和集中培育管理的作用，使伤根及早得到愈合，春季能正常抽发春梢，不但避免了春栽的缓苗期，同时还减少了缺株补苗过程，可使上山定植苗木生长整齐一致，实现一次定植成园。(3)投产早。营养篓假植苗，由于营养土供应养分充足，避免了缓苗期，上山栽植当年就能抽生3～4次梢，抽梢量大，树冠形成快，投产早。(4)集中管理。由于营养篓假植苗木相对集中，可以采用塑料薄膜等保温措施，防止苗木受冻；同时，还可以集中防治病虫害。由于营养篓假植苗定植时不伤根，没有缓苗期，因此可以周年上山定植。合理密植是现代化果园发展的方向，可以充分利用光照和土地，使柑橘(柑橘)提早结果，提早收益，提高单位面积产量，提早收回投资。提倡密植，但并不是愈密愈好，栽植过密，树冠容易郁闭，果园管理困难，植株容易衰老，经济寿命缩短。通常在地势平坦、土层较厚、土壤肥力较高、气候温暖、管理条件较好的地区，栽植可适当稀些，株行距可采用2.5m×3m的规格，每亩栽植88株左右。在山地和河滩地，以及肥力较差、干旱少雨的地区栽植可适当密些，株行距为2m×3m，每亩栽植110株左右。1.栽植时期柑橘(柑橘)的栽植时期，应根据其生长特点和当地气候条件确定。一般在新梢老熟后至下一次新梢抽发前，均可以栽植。(1)大田繁殖苗木的栽植时期。通常分为春季栽植和秋季栽植。春季栽植，以2月底至3月进行为宜，此时春梢转绿，气温回升，雨水较多，容易成活，可省去秋植灌水之劳。秋季栽植，通常在9月下旬至10月秋梢老熟后进行，这时气温尚高，地温适宜，只要土壤水分充足，栽植苗木根系的伤口就愈合得快，而且还能长出一次新根，有利于翌年春梢的正常抽生。秋季栽植常会遇秋旱，需要有灌溉保证，而且还有可能遭受寒冻，因此秋季栽植可用营养篓(袋)假植。秋植比春植效果好，这是因为秋季时间长，可充分安排劳力，而且当年伤口易于愈合，根系容易恢复，所以秋植苗木成活率高，翌年春苗木长势好。栽植最好选在阴天或阴雨天进行，遇毛毛雨天气可以栽植，但大风大雨不宜栽植。(2)营养篓假植苗栽植时期。营养篓假植苗通常不受季节限制，随时可以上山定植，但夏秋干旱季节，降水少、水源不足栽植会影响成活率。所以，最佳移栽时期是春梢老熟后、5月中下旬至6月上中旬。2.栽植方法(1)大田苗木栽植方法。栽植前，解除薄膜，修理根系和枝梢，对受伤的粗根剪口应平滑，并剪去枯枝、病虫枝及生长不充实的秋梢。栽植时，根部应蘸稀薄黄泥浆，泥浆浓度以手沾泥浆不见指纹而见手印为适宜。泥浆中最好加入适量的细碎牛粪，并将1.8%复硝酚钠水剂600倍液+70%甲基硫菌灵可湿性粉剂500倍液混合，加入泥浆中搅拌均匀，然后蘸根，以促进生根。注意泥浆不能太浓，否则会引起烂根；复硝酚钠加入太多会引起死苗。种植时，两人操作，将苗木放在栽植穴内扶正，理顺根，让新根群自然斜向伸展，随即填以碎土，一边埋土，一边均匀踩实，并将树苗微微振动上提，以使根、土密接，然后再加土填平。栽植后在树的周围覆盖细土，土不能埋过嫁接口部位，并要做成树盘。树盘做好后，充分灌水，水渗下后，再于其上覆盖一层松土，以利保湿。栽植过程，要真正做到苗正、根舒、土实和水足，并使根不直接接触肥料，防止肥料发酵而烧根。树盘可用稻草、杂草等覆盖。(2)营养篓苗栽植方法。定植前，先在栽植苗木的位置挖定植穴(穴深与篓等高为宜)，将营养篓苗置于穴中央，去除营养篓塑料袋后，用肥土填于营养篓四周，轻轻踏实，然后培土做成直径1m左右的树盘，浇足定植水，栽植深度以根颈露出地面为宜。树盘做好后覆盖稻草，可保湿、防杂草滋生、保持土壤疏松。柑橘(柑橘)苗木定植后如无降雨，在定植后的3～4天，每天均要淋水保持土壤湿润。以后视植株缺水情况，每隔2～3天淋水1次，直至成活。栽植后7天，穴土已略下陷可插竹枝支撑固定植株，以防风吹摇动根群，影响成活。若发现卷叶严重，可适当剪去部分枝叶，以提高成活率。一般植后15天左右部分植株开始发根，30天后可施稀薄肥，可用腐熟人粪尿加水5～6倍，或0.5%尿素溶液，或0.3%三元复合肥溶液浇施，每株浇施1～2kg。如果用绿维康液肥100倍液浇施，则效果更好，可促使幼树早发根、多发根。以后每月淋水肥1～2次，注意淋水肥时不要淋在树叶上，施在离树干10～20cm的树盘上即可。新根未发、叶片未恢复正常生长的植株不宜过早施肥，以免引起肥害，影响成活。土壤是柑橘树生长结果的基础，是水分和养分供给的源泉。土壤管理的目的在于维持和增进地力，使柑橘树的根系充分扩大，充分吸收水分和养分，以满足柑橘树生长发育的需要。我国柑橘产区主要分布在红壤、黄壤和紫色土区域，这些区域一般土质瘠薄，土壤结构不良，有机质含量低，土壤酸碱度也不完全适合柑橘树的生长。因此，加强柑橘园土壤管理，优化土壤环境是柑橘园实现持续优质丰产的一项重要工作。柑橘、春甜橘、明柳甜橘、W·默科特、金柑、滑皮金柑结果早、产量髙，对肥水的要求较高，如果肥水管理跟不上，就容易造成树体营养失调，树势衰退，产量下降，柑橘、春甜橘、明柳甜橘、W·默科特还容易出现大小年现象。因此，应因地制宜，合理施肥。许多豆科植物都具有一定的固氮作用，且其茎叶组织中含有多种营养物质，如果每年坚持绿肥还田就可使这些营养物质转化为土壤养分，从而大大提高土壤肥力，特别是提高土壤含氮量。可见，合理利用柑橘园行间绿肥间作或生草，并适时刈割压埋或覆盖于表土，对减少果园水土流失、调节土壤温度、改良土壤结构、促进有机质和矿质营养的积累等都有重要作用。特别是幼年柑橘园，合理间作不仅可促进幼年树的生长发育，对提高土地利用率、增加果园早期经济效益也有明显效果。对三峡库区坡地紫色土柑橘园的间作试验区(木豆、黄豆)和清耕试验区的土壤进行分析后表明，在前述两种豆科作物种植的当年，除土壤有机质和有效钾含量较清耕试验区差异不明显以外，木豆和黄豆种植区土壤的碱解氮、有效钾和有效磷含量都有明显增加，其中木豆和黄豆种植区土壤的碱解氮分别增加了20倍和12倍，土壤有效磷含量均增加了1.18倍。滋生于柑橘园的杂草，尤其是株间、行间的杂草，可利用其保持水土，降低土温，繁衍天敌，增加果园有机物生产量。但在失控的情况下，杂草往往会与柑橘树竞争养分，并且为病虫害的潜伏、繁衍提供有利条件。因此，应对柑橘园杂草进行有效控制。柑橘园间作(生草)和土壤覆盖，对柑橘园杂草的控制均有极为显著的效果。作者通过在中国农业科学院柑橘研究所盆栽场连续两年的观察发现，在春季至夏季，柑橘园间作黑麦草的试验小区，几乎见不到杂草的滋生。光叶紫花苕、白三叶、百喜草等因具有耐瘠薄、须根发达等优点，对杂草的抑制能力也很强。实践证明，不论对杂草控制的效果，还是对环境和生态的保护，间作(生草)和土壤覆盖都应是柑橘无公害栽培的首选技术。此外，对果园自然滋生的杂草合理控制，便可变害为利。即只要控制住恶性杂草的生长，对柑橘树生长影响较小的其余草类予以保留，也可达到生草覆盖的效果。柑橘园中(浅)耕除草的时间和次数应根据当地的气候、杂草的多少而定。一般在杂草出苗期进行浅耕除草、在结籽前进行中耕除草的效果较好，能消灭大量杂草，减少除草次数。浅耕除草深度应小于10cm，中耕除草深度以10～15cm为宜。在越靠近主干的地方中耕深度应越浅。为了有效防控杂草，有条件的柑橘园最好使用割草机割草，既可控制杂草高度，又不会造成环境污染和土壤板结。杂草较多的柑橘园，可限量使用对环境影响较小的除草剂。除草剂的选择应针对柑橘园主要杂草种类。草甘膦、莠去津、氟乐灵、二甲戊乐灵、乙草胺、氟草烟、茅草枯等是柑橘无公害生产允许使用的除草剂，可根据除草剂效能和杂草对除草剂的敏感度、忍耐力决定使用浓度和使用时间。为了减少对环境的影响，一年中使用的次数不宜超过2次。使用除草剂除草，应在杂草新叶大量形成时期或花期进行，春季于5月上中旬、夏季于7月上中旬施用。要求能控制住杂草的旺盛生长，但果园还应有一定的覆盖度。这样既能保证柑橘树的生长发育，又可保持果园土壤的生态稳定，还可大大减少除草剂的施用量，有利于生态环境的保护。山地柑橘园梯壁上的杂草一般不宜使用除草剂控制，以免加剧雨水的冲刷，致使梯壁垮塌。水分是柑橘生长发育不可缺少的重要条件。俗话说:收多收少在于肥，有收无收在于水。缺水会使植株萎蔫枯死，而土壤水分过多或湿度过大，则会造成烂根或发病落叶，导致植株衰退甚至死亡。因此，加强水分管理，对柑橘早结、丰产、稳产、优质具有重要的意义。在生产上，如果阴天叶片出现轻微萎蔫症状，或在高温干旱天气条件下卷曲的叶片在傍晚不能及时恢复正常，就要及时淋水，保证树体对水分的需要。柑橘在春梢萌动期及开花期(2—4月)、果实膨大期(5—10月)对土壤含水量十分敏感。当土壤含水量沙土<5%、壤土<15%、黏土<20%时，就要及时淋水。一般柑橘、春甜橘裂果期在9月上旬至11月上旬，这个时期如遇到连续干旱，那么每隔15天左右应淋水1次，保持土壤水分均衡，防止因缺水而影响果实膨大，并防止久旱下大雨导致裂果。同时，在秋冬季节利用果园生草，树盘覆盖，保持土壤湿润。一般柑橘在秋、冬季及秋梢老熟后要适当控水:一是防止水分过多，不利于花芽分化；二是抑制抽发晚秋梢和冬梢，使树体更好地积累养分；三是为了提高果实的含糖量，增进果实的风味，同时提高果实耐贮性，在果实采收前1个月内也要适当控制水分，保持土壤适当干旱。果实采收前的10～15天需完全停止灌水，以降低土壤含水量，提高果实品质。长期干旱会使土壤水分大量减少，导致柑橘植株缺水，叶片褪绿、卷缩，果实生长发育停止，严重时引起落叶、落果，枝叶干枯等，甚至出现植株死亡现象。反之，柑橘受涝时间过长或果园低洼长期浸水，植株容易发生根系腐烂、叶片黄化、枯枝等。因此，旱季要注意防旱，雨季注意防涝。主要措施有:第一，建园时搞好果园供水、排水系统，做到能灌能排；第二，改良土壤，每年通过深翻压绿肥，增加土壤肥力，改善土壤团粒结构，提高抗旱性，使土壤水分能排能蓄；第三，在干旱前和大雨过后，及时中耕松土，使空气进入土壤孔隙，可降低土温，减少水分蒸发；第四，在树盘覆盖稻草、杂草或反光薄膜，减少水分蒸发，降低土壤温度；第五，果园生草栽培，除树盘杂草要铲除外，株间、行间非恶性杂草宜保留，或人工种植白花草等。当柑橘进入10月底、11月后，一般都已经进入了花芽分花期。有种植经验的果农都清楚，促花是柑橘细化管理工作中重要的一环，直接关系到翌年柑橘成花和挂果的数量与质量。当然也有人说，不做控梢促花处理的果园也能成花，如果想要花质量高，翌年春寒天气坐果率高，必须进行有效的控梢促花工作。抽发大量晚秋梢，会消耗结果母枝养分，影响成花。通过叶面喷施药、肥抑制晚秋梢、冬梢的抽发，提高结果母枝营养水平，可以保证翌年成花数量和质量。影响柑橘落花落果的原因很多，如长期低温阴雨、缺乏光照、高温、栽培管理不当、树势衰弱、养分供应不足、树势生长过旺、砧木不当、新梢过多与花果争夺养分、病虫害严重等都会导致落花落果。因此，如何把保花保果各项技术措施及时做好非常重要。主要的保花保果技术如下。主要作用是壮蕾、壮花及提高花的质量，提高坐果率，柑橘从花芽分化开始到新梢萌芽至开花结果，树体消耗了大量的营养。特别是采用避雨避寒栽培技术后，柑橘、明柳甜橘、W·默科特、夏橙、春甜橘、金柑留树挂果时间长，更要及时补充足够的养分，才能保证树体正常生长和开花结果。因此，在春梢萌芽前15天左右，沿树冠滴水线附近开环沟施1次花前肥。特别是对衰弱树，要加强肥水管理，增强树势。在现蕾期和谢花后，人工抹芽控梢，把部分营养春梢和谢花后无果的营养枝抹去，可减少落蕾落花。同时，在6月中下旬前，对结果树萌发的早夏梢全部抹除，以减少大量的养分消耗，防止大量落果。在花蕾期、谢花期和幼果期分别进行根外追肥，能及时补充养分，减少落花落果。在花蕾期喷施0.2%～0.3%尿素液+0.2%磷酸二氢钾+0.1%硼砂或速乐硼1000倍液，每隔10～15天1次，连喷2次。谢花后可喷1次0.3%～0.4%复合肥液加含微量元素的叶面肥。也可在花蕾期、生理落果期喷施600倍果叶康3～4次。春季雨水多，开花后花瓣和花丝容易黏附在子房和花托上，造成小果腐烂而落果。因此，可在开花期间每隔5～7天定期摇花，把凋谢的花瓣摇落。人工抹梢成本高，采用药物控梢见效快、效果好。在夏梢期喷杀梢素、控梢素能有效杀死已萌发的夏梢，抑制夏梢生长。但在使用时要严格控制浓度，切忌浓度过高，同时不能与叶面肥、农药混合使用，以免产生药害。在柑橘开花、生理落果期，根据品种的不同，特别是对无核的品种，适当喷施植物生长调节剂，能有效减少落花落果，提髙坐果率。出现异常天气时，更要注重生长调节剂的应用。大多数果树为虫媒花，故花期果园放蜂可明显地提高授粉率和增加坐果。一般每亩放蜂一群即可，蜂箱距离以不超过500m为宜。在花期尽量不要喷药，以防蜂群中毒。在大风、低温阴雨天，蜜蜂不能活动，则要进行人工辅助授粉。果树开花时，如气温高，空气干燥，可在果树盛花期喷水，使空气湿润，有利花粉发芽。同时可在水中加入少量蜂蜜，能招引蜜蜂。人工辅助授粉，一般可提高坐果率70%～80%。首先，在授粉前2～3天，从授粉亲和力高的品种树上，采花蕾或初开的花朵，置于室内清洁的纸上摊开，经1～2天花药即开裂散出花粉，收取花粉备用。然后进行授粉。授粉方法有以下几种。（1）点授。用小毛笔、橡皮头等在花朵开放当天的上午柱头新鲜湿润时进行点授，如苹果、梨每一花序上点2～3朵即可。（2）喷雾。采用喷雾可提高人工授粉效率，是把花粉与糖、硼酸等配成水悬液，用喷雾器向花朵上喷洒。如梨树花粉溶液的配制比例:花粉50g，蔗糖1kg，水10kg，硼酸10g。最好随配随用。（3）喷粉。将花粉用填充剂（滑石粉等）稀释。花粉与填充剂的比例为1：（50～250）。用喷粉器向花朵上喷撒。（4）挂花枝。在开花初期剪授粉品种的花枝，插在广口瓶、竹筒等中，挂在需要授粉的树上。疏花疏果是疏去过多的花果，减少生理落果，维持生长与结果的平衡，保证树体健壮，防止大小年，达到优质、高产、稳产的目的。为了节省营养，疏花疏果越早越好。冬剪时，可剪除过多的花芽，使留下的花芽营养状况得到改善，发育良好；疏花宜在果树盛花期进行；疏果一般从谢花后1周开始，在短期内完成。具体时间，要依据树种、品种、开花迟早和坐果多少先后分批完成。一般来说，开花早、易坐果、坐果多的品种可先疏，早定果；开花晚、不易坐果、坐果少的品种，要晚疏，晚定果。留果量应根据树势、树的枝叶量、枝的强弱与果实的分布状况来决定。确定留果量方法有多种，可根据枝果比、叶果比，也可根据树冠体积留花留果。1.人工疏花疏果人工疏花疏果具有高度的灵活性和准确性，可以实现“看树定产”“按枝定量”的疏果原则。“看树定产”就是看树龄、树势、品种特性及当年的花果量，确定适当负荷量。“按枝定量”就是根据枝条生长情况、着生部位和方向、枝组大小、副梢发生的强弱等来确定留果量。一般经验是强树、强枝多留，弱树、弱枝少留；树冠中下部多留，上部及外围枝少留。疏花，对花序较多的果枝可隔一去一，或隔几去一，疏去花序上迟开的花，留下优质早开的花。疏果，先疏弱枝上的果、病虫果、畸形果，然后按负荷量疏过密过多的果。2.化学疏花疏果人工疏花疏果效果较好，但需要较多劳力，成本高，工效低。目前国内外均在试用或应用化学药剂疏花疏果。常用的化学药剂有石硫合剂、蔡乙酸、疏桃剂等。在疏花疏果的同时，对果实进行套袋。套袋的作用：一是能促进果面着色，防除果锈，保持果面光洁度及避免枝叶擦伤果皮，提高水果的外观质量；二是能减少尘土污染、能预防病、虫和鸟类的为害，减少农药残留量；三是提高果实耐储性，提高商品价值，增加经济效益。但套袋后果实的含糖量降低、风味变淡。一般在果树疏果、定果后，细致喷施长效杀虫、杀菌剂，然后及时套袋。套袋可选用专门生产的果袋，也可自制报纸袋。套袋时先用手撑开袋口，将袋口对准幼果扣入袋中，并让果在袋内悬空，不可让果实接触袋纸，在果柄或母枝上呈折扇状收紧袋口，反转袋边用预埋扎丝扎紧袋口，再拉伸袋角，确保幼果在袋内悬空。