该苹果生态适宜区位于辽宁南部、华北和中原地区，包括山东、河北、河南、安徽，以及江苏大部、山西中南部、陕西东南部、湖北东北部和浙江北部。该苹果生态适宜区，包括山西中北部、陕西西部与北部、宁夏南部、甘肃东南部、青海东部、四川西北部和西藏东南部，以及新疆的伊犁盆地及塔里木盆地周边、喀什、库尔勒、和田和哈密等地。我国栽培的西洋苹果，最早于1871年由美国引入山东烟台。其后又从德国、俄罗斯、日本等国先后引入，逐渐形成辽南和胶东两大苹果产区，并传入河北、陕西和四川等省。1949年以后，苹果生产发展较快，生产区域不断扩大。目前，我国共有25个省（区）生产苹果，但苹果产区主要集中在渤海湾、西北黄土高原、黄河故道和西南冷凉高地等四大产区，其中黄土高原和渤海湾地区是我国苹果的优生区，并以陕西省和山东省的苹果面积与产量最大。该区域中重点区包括胶东半岛、泰沂山区、辽南、辽西部分地区和河北的秦皇岛地区，是我国苹果栽培最早、产量和面积最大、生产水平最高的产区，优质果商品率高。从气候条件的差异上，又可分为辽南与辽西产区、山东产区和河北与京津产区3个小区。本区包括范围很广，东起山西中北部，包括陕西中北部，宁夏、内蒙古阴山以南，甘肃的河西走廊，青海的黄河—湟水沿岸海拔低于2000米的地区，西至新疆的伊犁、阿克苏和喀什等地。本区地势高（苹果栽培区平均海拔在800～2000米），纬度高，昼夜温差大，日照充足，降水量少，特别适合苹果生产，果实产量高、品质好，病虫害轻。现在黄土高原地区已成为我国最大的苹果产区，也是我国苹果的优生区和主要的出口基地。本区主要的集中产地有延安市、运城市、天水市和庆阳市等，其栽培面积还在不断扩大。本产区以南到淮河、秦岭以北，东起连云港，经徐州、郑州，西至宝鸡，是中国新兴的一条最长的苹果栽培带。该区苹果种植面积较大，但苹果表面果锈较重，同时由于夏季高温和温差小，因而果实品质一般。该产区主要包括黄河故道产区和秦岭北麓产区。本区以四川省为主（四川盆地除外），包括西藏、云南和贵州等地低纬度的高山区。本区早在20世纪初已有零星的苹果生产，品种主要来自美国、法国和印度，但局限于个别庄园或其附近栽植。从20世纪50年代起，才逐步发展起来，现已成为中国重要的优质出口苹果基地之一，该区主栽苹果品种有金冠、元帅和红星等。苹果树的一生要经历生长、结果、衰老、更新和死亡过程，整个过程称为年龄时期。实生繁殖的果树年龄时期分幼年阶段（童期）、成年阶段和衰老期；无性繁殖的果树年龄时期划分为营养生长期、结果期和衰老期。种子萌发至真叶展开为幼苗期。指从种子萌发起，到具备开花潜能的这段时期。童期是果树特有的生命现象，实生苗在童期时芽小、枝密、多针刺枝。叶小而薄，叶肉发育差、栅栏组织和叶脉都不发达。即果树部分部位开始结果的时期。此期枝条先端开始形成少量质量较差的花芽，能开花结果，坐果率低。结果部位以下枝条仍处于童年阶段。所结果实含水量高、皮厚，味较酸，品质较差。大部分部位都结果的时期，年生长量趋于稳定。叶、芽、花等在形态上表现出该树固有特性。成花容易，结果部位扩大，果实品质达最佳状态，产量达最高水平。生长、结果和花芽形成达到平衡。经过一定的年限后，树势开始衰弱，表现树体骨干枝、骨干根逐步衰亡，枝条生长量小，纤细，结果枝或结果母枝比例下降，果实品质变差，产量下降。树冠更新复壮能力及抗逆性显著下降，果树较易感染各种病虫害。苹果和其他落叶果树一样，在一年中和气候环境条件的变化相适应进行有节奏地变化，表现为萌芽、展叶、开花、坐果、果实生长和成熟、花芽分化、新梢生长和成熟、落叶、休眠等物候期。各器官的物候期是按一定顺序，而不同器官是相互交错进行的。为了正确地制定年周期中的管理措施，需要正确了解苹果在年发育期中物候阶段性的特点。当日夜平均气温达10℃左右时，叶芽即开始萌动，同一株树萌芽期可延续一个月。强树、成年树发芽早，弱树、幼树发芽晚。不同地区，不同年份，苹果品种萌芽期的先后顺序基本一致。苹果芽萌动后约10天即进入展叶期，鳞片内第1～2片为稚叶，甚小，在展开后不久先后脱落，为非功能叶。展叶是指第一片功能叶平展，全树以5%发育枝顶芽展叶为准。在大于3℃的积温达到214℃以上时，苹果即开花。苹果开花期的早晚，与盛花期前40～50天内的旬平均最高气温的累积值密切相关。如果这一时期旬最高气温累积值高，开花期即早，相反就晚。不同品种所需积温值不同，所以开花早晚不同，早捷、萌、藤牧1号和陆奥开花早，富士、元帅系和津轻其次，国光最迟。开花物候期又分为花簇期、花蕾分离期、蕾铃期、初花期、盛花期和落花期。苹果落花后进入果实发育期，从坐果至果实成熟所经历的天数。不同品种的果实发育期差异较大。果实发育大体可分为果实细胞分裂期与果实细胞膨大期。苹果新梢生长期从新梢开始生长起，到顶芽形成为止。不同枝型生长历期长短不一：短枝、叶丛枝为30天左右；中长枝为45～60天；营养枝则为75～90天或更长。即芽能够分化为花芽的时期。整个植株，枝条是陆续停止生长的，花芽分化也是陆续开始的。盛果期大树短果枝多，分化期集中；初结果树，长果枝、中果枝、短果枝均有，分化期拖延较长；幼树枝条停止生长晚，开始分化的也晚。在华北地区，苹果在6月初开始分化花芽。果实发育至具有一定的果形、色泽、香气和硬度等特征，表现出其品种固有特性的时期。此期果实体积和重量不断增加，果实内的淀粉逐渐减少，糖增多，含酸量降低；叶绿素降解过程加速，果实底色由绿变黄，香气增加，进入生理成熟。温度是影响落叶的主要因素，当旬平均温度低于10℃，日照缩短至12小时，即开始准备落叶。全树变黄叶片开始脱落，至25%的叶片脱落为开始落叶期，正常生长的叶片落完为落叶末期。我国西北、东北和华北地区苹果落叶在11月份，西南地区在12月份。是指苹果从秋季自然落叶后至春季萌芽止。这一时期外表上看不出任何生长，但树体内部仍然进行着各种活动，如呼吸作用、水分蒸腾、芽的分化和根系对养分的吸收合成，以及树体内养分的转化等，只是这些活动比生长期微弱很多。根据树体休眠的状态，可分为自然休眠和强迫休眠。苹果树的根系因繁殖方法不同可分为以下三类：由种子实生繁殖所形成的根系为实生根系，如以海棠、山定子等为实生砧木的根系；由扦插、压条繁殖所形成的根系为茎源根系，如一些矮化砧的根系；由根蘖繁殖所形成的根系为根蘖根系。实生根系主根发达，根系分布较深，生命力强，对外界环境条件有较强的适应性，但个体间差异较大。茎源根系和根蘖根系则主根不明显，根系浅，抗逆性较差，但个体间较为一致。地上的所有枝叶组成了苹果的树冠，包括主干、主枝、侧枝和枝组。良好的苹果树冠结构对于改善通风透光条件、提高净光合速率、促进花芽分化和提高产量品质有着非常重要的作用。果树整形修剪就是维持合理树冠结构的重要手段。描述树冠结构的主要参数有叶面积指数、主枝数、亩枝量、叶幕厚度、树高和干高等。苹果叶为椭圆形或卵圆形，叶缘有钝锯齿，幼嫩时两面均具柔毛，成长后正面柔毛脱落，叶缘有锯齿。全树总叶片的自然分布构成叶幕。叶幕结构对苹果的产量、果实品质有决定性影响，因为叶幕层的厚度和叶子分布的疏密程度直接关系到光合作用效率。叶幕的形状与整形修剪制度有关。苹果叶幕有半圆形、纺锤形等。如采用主干疏层形叶幕为2～3层，纺锤形叶幕有3～5层，开心形叶幕只有1层。从生产实践上看，叶幕厚度以2～2.5米为宜，这样有利于提高光能利用率，提高果树的产量和品质。芽是枝、叶或花的雏体，是枝、花形成过程中的临时性器官，由枝、叶、花的原始体以及生长点、过渡叶、苞片和鳞片构成。芽还具有与种子相似的特点，在繁殖条件下可形成新的植株，芽或带芽的枝可用于嫁接、扦插繁殖。苹果芽依芽在枝上的位置分为顶芽、侧芽和不定芽。依芽的性质分为叶芽和花芽。依芽的萌发早晚可分为早熟性芽、晚熟性芽和潜伏芽。依同一节上芽的主副可分为主芽和副芽。叶芽芽体小，略长而尖，芽内只包含有枝叶原始体，萌芽后抽生出新梢。苹果叶芽除有中间的主芽外，两侧为副芽。一般情况下，只有主芽生长，而副芽潜伏不萌发。苹果的花芽为混合芽，以顶生为主，芽体大，充实饱满，既有花原基，也有叶原基，在春季萌芽后既长枝又开花。苹果花序为伞房花序（图1-1），每序有5～7朵花，当树势衰弱或树势过旺时花芽发育不好，只有3～5朵花。苹果的花由花萼、花瓣、雄蕊、雌蕊、子房和花托构成。花瓣白色，含苞未放时带粉红色，雄蕊20，花柱5。图1-1 苹果的花序苹果的果实为合生心皮下位子房与花托、萼筒共同发育而成（图1-2）。食用部分主要由肉质花托发育而成，心皮形成果心，所占比例较小，称为仁果，属假果。子房有5个心室，每个心室多有2个胚珠，可形成2粒种子。果实的生长物候期分为果实发育期、萼片闭合期、梗洼形成期、果实色泽变化期、采收期和自然成熟期。苹果树生长季对有效积温的要求为2500～3000℃，不同物候期对有效积温要求不同。苹果开花和果实成熟分别需要419℃和1099℃的有效积温。苹果在冬季最冷月旬平均温度低于-12℃或绝对低温达-30℃以下时，即发生严重冻害。冬季需要≤7.2℃温度1400小时左右的低温，才能满足苹果顺利通过休眠期对低温的要求。生长季（4～10月份）平均气温为12～18℃，夏季（6～8月份）平均气温为18～24℃，最适宜苹果生长，35℃以上则表现生长不良。根系一般可耐-12℃的低温，花蕾只能经受短期-2.5℃的低温，花期遇-1.5～1.7℃的低温，即有不同程度的伤害。幼果期经较长时间0～1℃低温，萼周就会出现霜环。图1-2 苹果的果实苹果是喜光树种，光照充足才能正常生长，一旦光照恶化，就会影响花芽分化和果实品质。所以，要采用高光效树形。红色品种要求年日照时数1500小时以上，或成熟期日照量不低于150小时。紫外线对节间伸长有抑制作用，使树体矮小、侧枝增多，而且可促进花芽的分化，有助于果实花色素的合成，使红色果实的色泽更加艳丽。一般苹果光合作用的光饱和点在800微摩/（平方米·秒），饱和点高的品种补偿点也高。苹果在年降水量为500～800毫米，且分布均匀的地区生长良好。花期多雨，影响授粉和坐果；夏季、秋季多雨，会造成枝叶徒长，病虫害严重，果实产量和品质下降；春旱和伏旱对苹果产量影响最大。苹果喜微酸性至中性土壤，适宜pH值为5.4～6.8，pH值4以下生长不良，pH值7.8以上常发生严重的失绿现象；土壤含盐总量在0.13%以下时生长正常。苹果树的生长发育，最适宜于土层深厚，地下水位保持在1米以下，富含有机质，心土通气排水良好的沙质土壤。风、海拔对苹果栽培也有影响。在大风地区，苹果易出现偏冠、落花落果重的现象，因此栽培时必须营造防护林。海拔高度的差异，造成气温、光照等一系列因子的变化，从而影响苹果生长发育及品质形成。如同一地区，因海拔高度不同而出现苹果物候期和品质上的差异，海拔高的地区昼夜温差大，有利于糖类（碳水化合物）的积累，果实着色好，综合品质高。我国黄土高原海拔一般在800～1500米，非常有利于苹果品质的提高。无公害农产品，是20世纪90年代在我国农业和农产品加工领域提出的全新概念，是指产地生态环境清洁，按照特定的生产技术规程，将有毒、有害物质控制在规定标准内，并由授权部门审定批准，允许使用无公害农产品标志的食品。无公害农产品允许有限制地使用农药、化肥等人工合成的物质和转基因产品；允许存在有害物残留，只要不超过标准规定就可以使用无公害农产品标志，更适合当前国内消费市场，还不能在国际市场通行。无公害苹果生产主要技术包括：基地环境的选择，栽培技术，施肥技术，病虫害防治技术，收获、加工、包装、贮藏运输技术和质量检测技术等。涉及苹果无公害生产的标准有：NY/T 5012—2001《无公害食品 苹果生产技术规程》；NY/T 5013—2001《无公害食品 苹果产地环境条件》等。无公害苹果产地应选择在生态条件良好，远离污染源，并具有可持续生产能力的农业区域。此外，对空气的质量、灌溉水质量和土壤环境质量也有具体要求。无公害苹果产地空气中的总悬浮颗粒日平均低于0.3毫克/立方米，二氧化硫低于0.15毫克/立方米，二氧化氮低于0.12毫克/立方米，以及氟化物低于7微克/立方米。农田灌溉水和土壤质量必须符合表1-1和表1-2的要求。项目指标值项目指标值（毫克/升）项目指标值（毫克/升）pH值5.5～8.5总砷≤0.1氟化物≤3.0总汞（毫克/升）≤0.001总铅≤0.1氰化物≤0.5总镉（毫克/升）≤0.005铬（六价）≤0.1石油类≤10.0表1-1 无公害苹果产地农田灌溉水质量要求无公害苹果生产要求肥沃的土壤和良好的土壤结构，一般生产高档苹果的土壤有机质含量要达到2%～3%，最好能达到3%～5%，而我国苹果产区的土壤有机质含量一般在1%以下，因而需要进行土地改良。主要通过深翻和果园生草的方法改良土壤。苹果树的土壤施肥以有机肥为主，化肥为辅，以保持或增加土壤肥力及土壤微生物活性；同时，所施用的肥料不应对果园环境和果实品质产生不良影响。项目指标值（毫克/千克）pH值＜6.5pH值为6.5～7.5pH值＞7.5镉≤0.3≤0.30.6总汞≤0.3≤0.51总砷≤40≤30≤25铅≤250≤300≤350铬≤150≤200≤250铜≤150≤200≤200表1-2 无公害苹果产地土壤环境质量要求病虫害防治是实现无公害苹果生产最关键的环节。无公害病虫害防治的原则是以预防为主，坚持以农业防治和物理防治为基础，生物防治为核心，按照病虫害的发生规律和经济阈值，科学使用化学防治技术，有效控制病虫为害。如果必须采用化学防治，则应根据防治对象的生物学特性和为害特点，使用生物源农药、矿物源农药和低毒有机合成农药，有限度地使用中毒农药，禁止使用剧毒、高毒、高残留农药。无公害苹果对重金属和农药残留的限量要求如表1-3。指标名称汞，铅，镉，砷，氟敌敌畏乐果，杀螟硫磷倍硫磷残留量≤（毫克/千克）0.01，0.2，0.03，0.5，0.50.21.0，0.40.05表1-3 无公害优质苹果重金属及农药残留限量

王显安1 张龙芝2（1.安康市植保站 陕西安康 725002；2.汉滨区植保站 陕西安康 725000）摘要：新世纪以来，安康市先后争取中、省项目建设资金，在汉滨、旬阳、汉阴、平利四县区建设农业有害生物预警控制区域站，按照国家标准、行业标准和技术操作规程，加强项目管理和资金监督使用，项目建设取得明显成效，项目建成运行后，对该市和跨区域农业有害生物的监测和防治具有十分重大的意义，同时也提高了安康市乃至陕西省农业有害生物预警的整体水平。关键词：农业；有害生物；监测预警；区域站建设农业有害生物是农业生产的重要灾害之一。它不仅造成农作物产量大幅度减产，而且降低农产品的质量，是农民增收、农村稳定和经济全面发展的重要制约因素。及时、准确的对农业有害生物和突发重大生物灾害进行监控，合理有效的对其进行综合治理，最大程度的减轻其为害水平，降低化学农药投入量，提高农产品品质，是农业生产安全和可持续发展的重要保证。新世纪以来，安康市先后争取中央及省项目建设资金，在汉滨、旬阳、汉阴、平利四县区建设农业有害生物预警控制区域站，及时制定了《农业重大自然灾害突发事件应急预案》，将农作物有害生物预报、预警作为一项重点来抓。要求农业部门强化服务职能，搞好病虫害监测，跟踪病虫害的发生、发展动态，及时做出病虫害预报，发布病虫情报，增强农业有害生物预警的应急能力，扩大预警辐射范围，提高有害生物预警的准确性和及时性，保证农业健康稳定发展，最大限度降低病虫害造成的损失，减少农药施用，提高农产品质量，发展绿色有机农业。在确保本市粮食安全生产的同时，也对周边区域农业有害生物预警起到了积极作用。1 项目区基本情况1.1 气候特点陕西省安康市地处陕西南部，北依秦岭，南靠巴山，是我国南北气候交界的过渡地带。该市南与重庆、东与湖北、西南与四川等省接壤，北部和西北与本省同处陕南的汉中和商洛二市连接。市内气候温和，雨量充沛，水热资源丰富，南北物种荟萃，农、林、牧、药、果开发优势很强。年平均气温15.7℃，无霜期257天，年降雨量800～1 100毫米。1.2 作物布局全市农业人口298万人，可耕地面积50.67万公顷。常年播种粮食作物42.67万公顷，其中小麦12万公顷，玉米14万公顷，水稻4 万公顷，薯类9.33 万公顷，豆类3.33 万公顷；经济作物27.5 万公顷，其中油菜5.33万公顷，蔬菜3.33万公顷，烤烟1.33万公顷，桑4万公顷，茶2.5万公顷，果树3.33万公顷，中药材6.67万公顷、魔芋1万公顷。主要分布在海拔170～1 600米区域。1.3 病虫发生概况境内沟壑纵横，山川交错，河流密布，独特的地理环境和湿润的气候条件，既有利于各种农作物生长，也给各种生物灾害提供了有利的发生发展条件。据调查统计，全市有各种农业有害生物种类435种，其中害虫85种，病害68种，鼠害21种，草害79科261种，特别是近年来小麦条锈病每年发生6.67万～10万公顷，水稻稻瘟病年发生2万公顷，损失较重，魔芋软腐病和白绢病年年大发生，严重挫伤了农民种植积极性。据初步统计，全市每年病虫发生40多万公顷，每年使用农药500～700吨，而农药利用率仅30% ～40%，防治效果不甚理想，每年因生物灾害损失仍达5 000万元以上。这些有害生物对全市农业生产构成极大威胁，严重影响农村经济的发展。1.4 存在的主要问题由于受条件制约，现有的植保体系、监测仪器设备难以适应现代农业发展的要求。具体表现在：一是病虫害发生频率加快，一部分次要病虫害跃升为主要病虫害，偶发性病虫害变为常发性病虫害；二是一些病虫害突发、重发规律尚未完全掌握，一些新发生的有害生物难以得到准确预测和有效控制；三是食品安全行动要求合理使用农药，目前的植保体系难以对农药质量、农产品农药残留进行监测，难以对病虫害抗药性进行鉴定。2 项目建设的主要内容2.1 建设目标按照国家标准、行业标准和技术操作规程，建设设施齐全的综合检验实验室、信息处理室和标准病虫观测场，有害生物监测与防控指导点；配备相应的仪器设备，建成设施完善、功能齐全的农业有害生物预警控制区域站；通过捕捉病虫发生发展动态，进行检疫性病虫监测、农药质量检测、病虫抗药性检测；运用数据信息处理、传输、发布等手段，及时准确地对区域农业有害生物进行预警，开展植物检疫、农药质量监督及病虫抗性监测；筛选高效低毒低残留农药，制定防治方案和措施，有效指导病虫害防治，控制有害生物蔓延，最大限度地降低为害损失，促进农业增产、农民增收、提高农产品质量安全水平。2.2 建设任务新建综合检测楼，新建应急药品及器械库和标准病虫观测场，设立有害生物监测与防控指导点，配备有害生物监测、检疫性病虫监测、农药质量检测、病虫抗性监测以及病虫数据信息和可视化信息采集、处理、传输、制作、发布及通讯等所需的仪器和设备等。2.3 建设内容土建工程：相继新建综合检测楼4幢4 200.63平方米，新建应急药品及药械库1 110.22平方米，新建车库97.2平方米，道路硬化2 500平方米，并配套相应的水电设施。田间工程：先后新建标准病虫观测场4 个3.5 万平方米，新建温室4 个420 平方米，铁丝网围墙1 500米，修筑田间道路3 000平方米，布设孢子捕捉塔7座，并配套相应的水电设施仪器设备：先后购置仪器设备484台（套），其中检测检疫设备196台（套），网络软件及培训设备92台（套），病虫监测与防控设备116台（套），其他设备80台（套）。资金使用：四县区共争取中央财政投资1 106万元，地方配套122万元，共计1 228万元。主要用于建安工程464.5万元；田间工程213.万元；仪器设备购置550.3万元；其中（1）检验检测设备125.8万元；（2）网络软件及培训设备62.3万元；（3）病虫监测与防控设备288.7万元；（4）其他设备73.5万元。3 项目管理3.1 组织管理4县区分别专门成立以主管农业的县区长为组长，农业局局长为副组长，计划局、财政局、审计局、农技中心主要负责人为成员的项目领导小组，在农技中心设立办公室，领导小组负责协调各方关系，决定重大事宜，审查项目实施计划、物资及仪器采购使用计划、监督资金使用等，对项目实施情况进行全面的监督和管理。办公负责项目建设实施的具体工作，负责工程质量的监督，物资的采购与安装，资料的收集整理，项目验收、使用运行等方面的日常管理。3.2 施工管理项目建设全部实行工程招标投标制和合同管理制度，选择具有相应资质的设计单位对项目进行勘察设计及施工图设计，并公开招标、确定施工单位。建设工程中选择有资质的监理单位对整个工程建设进行全过程监理，确保了工程建设质量。采购的物资设备仪器，根据实际进度编制详细的采购计划及清单，按照规格型号及质量要求，根据《政府采购法》的要求，均由政府采购中心，按照公开招标的原则进行采购。所有项目实施均采取合同管理，项目承担单位与设计、施工、监理单位签订合同，实行工程质量领导负责制，项目法人责任制，参建单位工程质量领导责任制、工程质量负责制等制度，确保了工程质量。3.3 资金管理项目资金实行专用账户专人管理，严格按照农业部批复方案开支，并建立健全财务审批、使用和报账制度，严防项目资金挪作它用，充分发挥审计、监督及资金管理部门的作用，加强对资金的检查和监督力度，确保了各项目的如期完成。3.4 竣工验收项目建成后对每个项目建设过程中各环节的资料及时收集，整理归档，做到资料记载翔实可靠。并及时对建设任务、工程质量、资金使用、建设效果等进行自查自检，自验合格后，申请上级有关部门正式验收，验收合格交付使用，经过验收审计后做好国有资产登记，加强国家固定资产管理。4 项目建设成效四县区农业有害生物预警控制区域站于2009 年10 月相继建成并先后投入运行，发挥了很好的作用，大大提高了安康市农业有害生物预警控制整体水平。项目建成运行后，通过启用先进的数据处理系统，将当地历年来病虫观测调查资料进行处理，建立病虫测报数据库，将各类农业有害生物动态信息，通过网络传输到周边地区，并上报省、市业务部门，使资料信息得到共享，共同受益。对增强本市和跨区域农业有害生物的监测和防治具有十分重大的意义，同时也提高了安康市乃至陕西省农业有害生物预警的整体水平。一是通过监测仪器、实验室等设施的配套，大大提高预警水平和信息传递速度，并为中、省、市、县农业部门及科研单位提供准确详实的科学数据，达到指导防治的目的，同时，也为当地拓宽病虫监测和防治范围起到重要作用。二是防治设施的建立和防治技术的落实，有效降低当地越冬菌源基数，大大减少病原菌向项目地周边省市流行扩散，在保护区域农作物生产安全的同时，也降低了临近省市的病虫害发生。三是通过监测和防治水平的提高，可减少农药使用量，提高农产品产量和品质，发展无公害生产，保护生态环境不受污染。杜绝高毒高残留农药、国家禁止使用的农药以及假冒伪劣农药流入市场给农业生产造成巨大损失。四是充分调动了农业科技人员工作积极性，发挥专业技术人员的才智，对提高其技术水平和业务能力起到了极大地促进作用。随着农业产业化的不断发展，预警区域站将覆盖全市及周边地区，可有效提高对农业有害生物预警和控制能力，病虫监测覆盖面积达1 000万亩以上，病虫监测覆盖种类达100余种，农作物病虫害预报预警准确率达95%以上，年发布病虫情报150期，达到年检测病虫害样品3 000份、农药样品1 000份的能力，每年平均挽回经济损失18 668万元。对保障全市、全省农业产业安全，维护地域性生态平衡，促进农业可持续发展发挥重要作用。

云斑鳃金龟（Polyphylla laticollis Lewis），鞘翅目（Coleoptera），金龟科（Scarabaeidae）。我国除西藏、新疆未见报道外，其余各省（区）均有发生。国外朝鲜半岛、日本也有发生。成虫和幼虫均可为害。成虫取食高粱、玉米等禾本科作物及树木的叶片，尤其喜食细嫩柳枝的表皮及松树的针叶。幼虫为害果树、苗木和多种粮食作物的地下部分（根、茎）。严重发生年份可全生长季为害，严重受害地块可造成绝产。图3-29 云斑鳃金龟为害状（苗根被切断）（张治良摄）成虫体长28～41mm，宽14～21mm，体多呈暗褐色少数红褐色，上覆白色、黄色鳞毛组成斑纹。足、触角、鳃片为暗红褐色。雄虫触角鳃片部7节，大而弯曲，长大约为前胸背板长的1.25倍；雌虫触角鳃片部6节，小而直。头除覆有黄色鳞毛外，在额区还有竖立的长黄细毛。前胸背板前半部中间具2个窄而对称、由黄鳞毛组成的纵带斑，其两侧有2～3个纵列毛斑。覆在鞘翅上的鳞毛，组成云状斑纹。前足胫节外齿雄2雌3，中齿显近顶齿。老熟幼虫体长60～70mm，头宽9.8～10.5mm。肛腹片后部覆毛区中间的刺毛列，每列多为10～12根小短锥状刺毛，两列刺毛多整齐平行排列；刺毛列长度未达到覆毛区钩毛群的前缘。蛹体长49～53mm。触角雌、雄异型。发音器2对，位于腹部第4、5节和第5、6节背板中央节间处，腹部第3～6 节背部中央（即发音器外侧处）各具1对弧形凹陷。尾节近三角形，尾角尖锐，呈锐角岔开。雄蛹尾节腹面具2个纵向瘤突，雌蛹尾节腹面平坦。云斑鳃金龟在我国北方4年完成1代。以幼虫越冬。幼虫历期600余天，以第二年秋季和第三年秋季为害重。成虫盛发期在7月。成虫有假死习性，趋光性强，尤其是雄虫。成虫活动可分前、后两段，前段昼伏夜出，后段白天取食，夜间迁飞。图3-30 云斑鳃金龟（左：成虫♂；右：成虫♀）（张治良摄）图3-31 云斑鳃金龟（左：幼虫；右：蛹）（张治良摄）参见东北大黑鳃金龟防治。

导致棉花枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌萎蔫专化型 [Fusarium oxysporumSchlectend：Fr.f.sp.vasinfectum（Atk.）W.C.Snyder&.H.N.Hans.]。在相当长的一段时期内，镰刀菌的分类是很混乱的，各研究者曾把该属划分为1000种以上的种、变种和型（俞大绂，1977；张素轩，1991；Bilai等，1955；Tousson等，1975）。1935年Wollenweber等把镰刀菌归纳为16组、143种、变种和型，奠定了镰刀菌分类的基础。在其以后，Suyder等（1968）、Joffe（1974）、Gordon（1952）、Bilai（1955）等对镰刀菌分类都进行了大量的研究，并提出各自的分类概念和系统（Amstrong等，1977；Nelson等，1983）。但所有这些都是以Wollenweber Reinking的专著《镰刀菌属》（Die Fusarien，1935）为基础的。Booth（1971）根据Gordon的分类体系，以大形分生孢子形态作为鉴别镰刀菌种的主要特征，重视标准培养条件、分生孢子梗形状和分生孢子的产生方式，把分生孢子形态、大小、菌落颜色、产孢细胞和厚垣孢子有无及着生位置、生长速度以及基质特性等作为区分组、种、变种的重要依据。中国一些研究者在分离棉花枯萎镰刀菌研究中，注意到有不同类型大分生孢子，除典型的Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum（尖孢镰刀菌萎蔫专化型）外，还分离到在孢子形态、菌落色泽、培养性状和致病性方面不同于前者的菌株，对此提出质疑，认为我国棉花枯萎镰刀菌可能还有F.redolens Wr.（芬芳镰刀菌）或者F.oxysporum var.redolens（Wr.）Gordon（尖孢镰刀菌芬芳变种）。澄清我国棉花枯萎镰刀菌的种、型，查明其在分类上的归属是一项十分必要的基础工作，对指导棉花抗病育种与品种合理布局具有重要意义。为此，陈其英和孙文姬（1992）从全国15个植棉省、自治区采集棉花枯萎病株，经分离纯化，获得273个单孢菌株，并对其中13个单孢菌株进行系统研究，断定我国棉花枯萎镰刀菌是尖孢镰刀萎蔫专化型。隶属的分类体系是：半知菌亚门（Deuteromycotina）、丝孢目（Moniliales）、瘤座孢科（Tuberculariaceae），镰孢属（Fusarium Lind），美丽组（Eleganswu.），尖孢种（Oxyporumschl.）。棉花枯萎病菌为尖孢镰刀菌萎蔫专化型，其培养性状，在PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）培养基上，菌丝为白色，若培养时间稍长培养基经常出现紫色，菌丝体透明，有分离。具有3种类型孢子，分别为大型分生孢子、小孢子和厚垣孢子（图2-1）。镜检时，重点检查有无镰刀状大型分生孢子和厚膜孢子。大型分生孢子呈镰刀形，略弯曲，两头稍尖，足孢明显，无色，大多具3个分隔，少数为2个，偶见有4～5个分隔，大小为（22～23）μm×（3～5）μm（以3个隔膜的大型分生孢子长度和宽度作标准）。小分生孢子呈卵圆形或纺锤形，无色透明，大多数为单胞，少数有一个分隔，大小为（5～6）μm×（2～3.5）μm。厚膜孢子近圆形，顶生或间生1～3个，但也有数个相连的，卵黄色，直径5～15μm，厚膜孢子是抵抗不良环境的繁殖体。图2-1 棉花枯萎病菌自Alkinson 1892年首先提出引起棉花枯萎病菌是侵染导管萎蔫镰刀菌（Fusarium vasinfectumAtk）后，认为棉花枯萎病菌的寄生性很强，寄主范围很窄。但Butler（1926）、Kulharm（1934）、Armstrong（1940）、Armstrong和Bennoett（1942）、Ebbeds等（1975），前后报道枯萎病菌的寄主多达40余种，计有大豆、烟草、花椰菜、卷心菜、辣椒、牛角椒、木豆、决明、咖啡、印度麻、黄瓜、龙爪稷、三叶胶、秋葵、番茄、苜蓿、类香蒲、狼尾草、绿豆、豌豆、豇豆、蓖麻、茄子、高粱、肿柄菊、大麦、铁荸荠、小花锦葵、大花苘麻、几内亚茴麻、毛里塔尼亚苘麻、束黄麻、酸木槿、柠檬黄木槿、洋麻、裂叶木槿、类酸浆木槿、葡萄叶木槿、尖刺黄花稔和印度蛇婆子等。许如琛等（1964）用人工接菌盆栽试验，甘薯、玉米、薄荷、黄麻、烟草、荞麦、小麦、大麦、黑麦、燕麦、大豆、豌豆、蚕豆、四季豆、胡萝卜、黄瓜、萝卜、莴苣、油菜、菠菜、青菜和婆婆纳等共47种植物因均不发病，故没有作为枯萎病菌的寄主植物。顾本康等（1979）将生长在枯萎病菌人工接菌土内的供测作物植株、采用组织捣碎稀释分离的方法，能够分离出枯萎病病原菌，将它回接到棉花上能够表现枯萎症状，再从菌落形态及孢子大小，都证明是棉花枯萎病病原菌，因此认为，玉米、牛角椒、大麦、元麦、小麦、番茄、乌豇豆、茄子、大豆、柽麻、芝麻、花生、山芋、赤豆和扁豆等作物虽然没有明显症状，而确是棉花枯萎病菌的带菌植物。棉花枯萎病菌在很多植物上只能停留于植物的根表皮，但不能深入导管系统，所以，往往出现隐症状态。因此认为，除已被证明的许多作物或杂草是棉花枯萎病菌的寄主植物外，实际上还有更多植物是棉花枯萎病菌的不表现症状的带菌体；这就是在枯萎病区推行与旱作物轮作对防治枯萎病无效的道理。李君彦等（1990）对小麦、大麦、玉米、高粱、甘薯、大豆、豌豆、红麻、向日葵、烟草、番茄、茄子、辣椒、黄瓜和笋瓜15种植物作棉花枯萎病致病或带菌的研究，其结果表明，15种作物都可带菌，只是带菌的部位有差异，将病菌在棉花上回接，只有小麦、玉米、高粱和向日葵回接不成功。植物病原菌在不同环境、营养条件和寄主植物影响等外界因素作用下，再加上自身的遗传变异，致病力不断地变化。但在长期演变过程中逐渐形成了一些比较稳定的类型，这就是在种和变种以下所区分的转化型、生理型或小种。专化型是一个群体，据不同鉴别寄主的致病反应，可以进一步化分为若干生理小种。鉴定棉花枯萎病生理小种，以及生理小种在不同地区的分布，对培育棉花抗病品种，以及优良品种在不同种植区的分布有指导意义。棉花枯萎病菌具有较强的专化性，不同地区的枯萎病菌尽管形态相似，但致病力不一定相同。Elbeles（1975）根据枯萎病菌对陆地棉、海岛棉、亚洲棉及某些作物的侵染能力的差异，划分为5个生理小种：小种1号和2号，来源于美国，严重感染陆地棉，轻度感染海岛棉，不感染亚洲棉，但小种2号尚能感染烟草及Yel-redo大豆；小种3号为来自埃及的枯萎病菌，感染海岛棉和亚洲棉，不感染陆地棉；小种4号为印度的枯萎病菌，只感染亚洲棉，不感染海岛棉和陆地棉；小种5号为苏丹的枯萎病菌，感染亚洲棉，不感染海岛棉及陆地棉。Armstrong等（1978）描述并提出了巴西的棉花枯萎病菌小种6号。至此，全世界报道的棉花枯萎病生理小种共6个。1972～1973年全国棉花枯萎病、黄萎病综合防治研究协作组收集了我国主要枯萎病区（冀、豫、晋、陕、鲁、皖、苏、浙、鄂、川等省的县）有代表性的菌株76个，在海岛棉、陆地棉和中棉3个棉种的9个鉴别寄主棉花品种上测定其致病力。结果菌株被划分为3个致病型（表2-1）：Ⅰ型侵染海岛棉、陆地棉和中棉，包括南方棉区的22个菌株，北方棉区的26个菌株；Ⅱ型侵染海岛棉和陆地棉，但不侵染中棉，包括南方棉区的17个菌株和北方棉区的16个菌株，为害陆地棉严重；Ⅲ型只侵染海岛棉，不侵染陆地棉和中棉。鉴别品种致病型Ⅰ致病型Ⅱ致病型Ⅲ海岛棉SSS陆地棉SSR中棉SRR表2-1 全国各地棉花枯萎病菌在鉴别寄主上的接菌反应陈其煐等（1985）于1982年用国际通用的一套鉴别寄主对中国各地采集的144菌系筛选出有代表性的17个菌系进行全面的研究，发现我国的棉花枯萎病菌致病力与当时国际上已报道的6个小种有区别。为此，将我国的棉花枯萎病菌分为3个小种，即3号、7号和8号，其中7号、8号小种是首次报道，并认定棉花枯萎病Ⅲ型即为国际3号小种，而Ⅰ型、Ⅱ型被定为新小种，即7号和8号。7号小种是我国的优势小种，广泛分布于国内的各主产棉区，对鉴别寄主中的海岛棉、陆地棉和亚洲棉均表现出高度侵染，不感染或轻度感染5个非棉属寄主；而8号小种则不感染或轻度感染3个棉种的7个品种，轻度感染非棉属的秋葵、金元烟和大豆，严重感染紫苜蓿和白肋烟，仅在我国湖北省的新洲县和麻城县及江苏省的南京发现；3号小种严重感染海岛棉的Coastland、Sakel和亚洲棉的Ronzi，不感染海岛棉的Ashmouni和陆地棉，不感染非棉属寄主的秋葵、金元烟、白肋烟和大豆，极轻度感染紫苜蓿（表2-2）。鉴别寄主小种及分布3新疆麦盖提和吐鲁番7全国各地8湖北麻城及江苏南京海岛棉AshmouniRSW-RCoastlandSSWSakelSSW表2-2 我国不同小种对鉴别寄主植物的侵染力（陈其煐等，1985）鉴别寄主小种及分布3新疆麦盖提和吐鲁番7全国各地8湖北麻城及江苏南京陆地棉AcalaRSWRowdenRSWStonevileRSW亚洲棉RoziSSW秋葵ClemsonspinelaesRW-RW紫苜蓿GrimmRW-RS烟草Burley5RW-RSGolddolarRRW大豆YelredoRW-RW-R表2-2 我国不同小种对鉴别寄主植物的侵染力（陈其煐等，1985）（续）-1致病性是病原、寄主和环境条件相互作用的结果。棉枯萎菌致病性变异的原因比较复杂，可能有：镰刀菌发生突变、异核现象和准性生殖而发生变异；棉花种和品种的更换，造成寄主基因型对病原菌群体遗传结构的影响而发生变异；随土壤中微生物群落变化而发生变异及棉枯萎菌靠寄主种子远距离传播，导致外来致病菌的传入或为新小种提供亲本等。为此，孙文姬等（1999）采用国际通用的鉴别寄主（简称通用寄主）包括棉属寄主海岛棉的SaKel、Coastland、Ashmouni；陆地棉的Rowden等4个；非棉属寄主紫苜蓿（Grimm）、白肋烟（Berley5）、金元烟（Gold dollar）3个，以及鉴于国际通用的鉴别寄主中的所有棉属寄主均被7号小种菌系高度感染，不能明显区分广泛分布于我国各棉区7号小种不同菌系间的致病力强弱，于是在1996～1997年试验中，增加了抗病性不同的辅助棉属鉴别寄主（简称辅助寄主），包括海岛棉的8763依（感病）、K102（抗性敏感）；陆地棉的鄂荆1号（感病）、86-1号（抗病）等4个品种，对1986～1997年在我国河北、河南、山东、山西、安徽、湖北、江苏、陕西、辽宁和新疆10个主要产棉省（自治区）采集的84个棉枯萎镰刀菌代表菌系进行了生理小种变异监测研究。结果表明：与陈其煐等（1985）报道的基本相同，仍为第3号、7号、8号3个小种，其中，7号小种占83.3%，是我国毒力强的优势小种，广泛分布于我国各大棉区；3号和8号小种分别局限于新疆吐鲁番地区和湖北新洲地区。同时，发现局部地区有些菌系出现了变异，特别是1991～1994年采集的3号小种5个菌系出现了对鉴别寄主Sakel的致病力明显减弱的变异型。分布于黄河、长江流域及新疆广大棉区，对非棉属寄主表现为“R”（发病株率为0）或“W”型（发病株率为50%以下），在棉属寄主上以“S”型（病指为20.1以上）为主。1996～1997年28个代表菌系在8个棉属寄主上测定结果，除2个菌系对Sakel致病力为“W”型（病指为20.0以下）外，其余26个菌系对Ashmoumi、SaKel、Coastland、Rowden、8763依、鄂荆1号等6个棉属寄主致病力均为“S”型；28个菌系在有一定抗性的K102寄主上，13个为“W”型，15个表现为“S”型；在抗病品种86-1寄主上，24个为“W”型，4个为“S”型。按各菌系在8个棉属鉴别寄主上平均病指划分为强、中、弱3个类群，4个菌系为强致病类型，17个菌系为中等致病类型，7个菌系为弱致病类型。1998年发现湖北新洲的1个菌系和山西太原菌系对抗病品种86-1的致病力接近“S”型。1988年分离的3号小种2个菌系和1991～1994年分离的3号小种变异型5个菌系均分布于3号小种的原发生地新疆吐鲁番地区。对非棉属寄主均为“R”或“W”型；对陆地棉Rowden均为“R”型（病指为0），对海岛棉Coastland均为“S”型。2个3号小种与5个3号小种变异型的差异表现在对Ashmouni和SaKel的致病力上，前者在Ashmouni和Sakel上分别为“R”和“S”型；后者对Ashmoum的致病力增强了，除l个为“R”型外，2个为“W”型，2个为“S”型，而对SaKel的致病力减弱了，均为“W”型。另外，1995～1998年从该地区采集的海岛棉病株上一直未分离到3号小种。1988～1995年分离的8号小种5个菌系均分布于其原发地区的湖北新洲地区，在非棉属鉴别寄主紫苜蓿和白肋烟上均表现为“S”型，4个在棉属鉴别寄主上表现为“R”或“W”型，其中，1995年分离的Ag136菌系对抗病品种86-1表现为“S”型（病指25.0）。另外，1998年从该地区采集的病株上分离出8号小种6个菌系。2007年，马存等把目前世界上已报道的棉花枯萎病菌8个小种归纳成如表2-3所示。寄主植物小种编号12345678分布地区世界各地美国埃及印度苏丹巴西中国中国亚洲棉（G.arboreumcv.Ronzi）RRSSSRSR海岛棉阿西莫尼（G.barbadebsecv.Ashmouni）SSRRSSSR海岛棉萨克耳（G.barbadebsecv.Sakel）SSSRSSSR陆地棉阿卡拉44（G.hirsutumcv.Acala44）SSRRRSSR金元烟（Nicotianatabacumcv.GoldDolar）RSRR—RRR大豆（Glycinemaxcv.Yelredo）RS——RRR羽扁豆苜蓿（Lupinusluteuscv.Weiko）SS——R表2-3 世界各国不同小种对不同寄主植物的侵染力新疆棉区棉花枯萎病生理小种，自徐怡心（1994）鉴定认为国际7号小种之后，李国英等（1998）、缪卫国等（2000）、王雪薇等（2001）、吴彩兰等（2004）和张莉等（2005）采用目前国际上通用的一套棉属鉴别寄主及当地的辅助鉴别寄主对从不同产棉县（市、团场）采集的枯萎病菌株样本鉴定后认为，目前，7号生理小种仍为新疆棉花枯萎病菌优势生理小种，主要分布在新疆南疆（和田、喀什、阿克苏）、北疆（石河子、昌吉、乌苏）、东疆（吐鲁番）主要棉区。从各供试菌系对9个品种的发病始期及发病程度看，新疆棉花枯萎病菌菌系强致病型主要分布在南、北疆主要棉区，部分菌系属中等致病型，枯萎病菌为害时期较早，棉株出苗后10～12天，造成棉苗子叶青枯萎蔫或叶脉黄化网纹；新疆棉花枯萎病菌菌系弱致病型主要分布在东疆棉区，枯萎病菌为害时期均较晚，较南、北疆棉区发病始期晚5～7天，即棉花出苗后15～20天才出现子叶青枯萎蔫或叶脉黄化网纹症状。营养体亲和性（Vegetative Compatibility，简称VC）是指缺乏有性生殖真菌，通过不同菌系间的菌丝融合交流物质，进而形成异核体的能力，其实质就是异核体亲和性，会导致病原菌形态和致病性的变异。由若干具有营养体亲和性的菌系构成的群，称为营养体亲和群（Vegetative Compatibility Group，简称VCG）。做致病性测定存在着费时、费力、结果易受外界因素影响及不能反映不同菌株间的遗传关系等公认的问题（Hart等，1981；Kraft等，1978；Pound等，1953），所以，有必要探索和寻找鉴别小种更为简便有效的途径。Puhalla（19850）首先确立的用不能还原硝酸盐作唯一氮源生长的突变体（nit突变体）作营养体亲和性试验的方法，为此提供了一条有效的途径。此法通过观察不同菌株的nit突变体之间能否互补而形成异核体把它们分成不同的营养体亲和群。根据他的理论，亲和与否反映出不同菌株在遗传进化过程中的亲缘性远近，国内外不少报道都认为营养体亲和性是鉴别镰刀菌不同专化型及小种间菌株的有效方法。1985年Puhalla首次将VCG技术应用到尖孢镰刀菌专化型的研究，结果认为专化型与VCG之间有一定的对应关系，即同一VCG的菌系属于同一专化型，而不同专化型的菌系属于不同VCG。随后，大量的不同专化型的菌系证明了Puhalla的观点（Ploetz，1990）。鲍建荣等（1992）对尖孢镰刀菌的6个专化型的20个菌系进行了营养体亲和性研究，结果显示，不同专化型菌系的nit株之间无互补反应，而同一专化型的不同菌系上分离的nit株之间可产生亲和反应，也证明了nit突变株的营养体亲和群与菌系的专化型有相关性。在棉花专化型内，研究证明，生理小种与VCG有一定的相关性，来自同一生理小种的菌系，甚至是不同地理来源的菌系，都可划为同一VCG。Katan等（1988）测定来自以色列全国不同地区的同为3号生理小种的12株棉花枯萎病菌菌系，结果均属于同一VCG。丁之金等（1992）采用不能还原利用硝酸盐作唯一氮源生长的突变体（nit突变体），对中国棉枯萎镰刀菌的3号、7号、8号小种的61个菌株做了营养体亲和性研究。结果表明，第3号小种7个菌株和第7号小种42个菌株各属一个不同的营养体亲和群，第8号小种的8个菌株则属6个不同亲和群，不同小种的菌株间没有亲和性。营养体亲和性试验结果与致病性测定结果吻合，能从遗传学角度区分棉枯萎菌不同小种，用它作为鉴定手段，结果更能反映出不同菌系间的本质联系，并可克服致病力测定工作中费时、费力及结果不稳定等缺点。王克荣等（1996）利用氯酸钾毒性，诱变棉花枯萎病菌产生硝酸盐利用缺陷型突变体（nit）。通过对nit突变体在亚硝酸盐和次黄嘌呤为唯一N源的MM营养基上的生长鉴定，获得了4种生理表现型的nit突变体。在485个nit突变体中，nit A为357个（73.6%），nit B 59个（12.3%），nit C 65个（13.4%），nit D 4个（0.8%）。4种类型的突变体产生的频率差别很大，nit A类型最易产生，nit D突变类型则很难得到。Nit A类型的突变体也很容易回变成野生型。不同菌株产生突变类型的比例也有差异。菌株258产生的11个突变体均为nit A型，而菌株262产生的8个突变体都是nit B型，菌株207和328则产生4种生理表现型的突变体。产生nit突变体的107个菌株经互补类型配对测定的结果见表2-4。由此看出，我国的棉花枯萎病菌中，以VCG1为优势群体，分布广泛。有8个菌株分属另外3个VCGS，这些群体是否属于尖孢镰孢萎蔫转化型（Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum），可能需要进行分子遗传学比较才能明确。营养体亲和群（VCG）菌株数菌株来源营养体亲和群（VCG）菌株数菌株来源VCG15江苏丹徒VCG26江苏丹徒（303，315，316，319，328，329）江苏江浦江苏启东江苏淮海农场VCG31江苏丹徒（234）新疆四川浙江VCG41江苏南京（402）江西表2-4 棉花枯萎病菌的营养体亲和群及其来源除了属于4个VCGs的103个菌株，另有4个菌株（菌株号219，226，227，302）只产生一种表观型的突变体（nit A），这些突变体与其他菌株的互补型突变体配对不能形成亲和性反应。这些实验结果表明，我国的部分地区，包括新疆、四川、浙江、江西和江苏的棉花枯萎病菌多属于同一个营养体亲和群。在表现症状的棉花上部茎叶中也分离到其他营养体亲和群的菌株，这些菌株经测定，对陆地棉的棉花品种具有寄生能力和一定的致病力。王雪薇等（1996）报道，新疆棉花枯萎病株或病田土中分离得到的尖孢镰刀菌具有明显的营养体亲和性。将分离自新疆5个不同地点的棉病株或棉田土的7个菌株经单孢分离得到18个单孢株，经鉴定均为尖孢镰孢。7个菌株的18个单孢株分别在KPS培养基上诱得数量不等的nit突变体，将它们分别与两个采自老病区莎车的棉枯萎病菌株进行营养体配对试验，结果显示，7个菌株分别归属2个营养体亲和群（VCGs），其中，与莎车菌株明显亲和，属V1的6个菌株与莎车菌株应同属于尖孢镰孢萎蔫专化型。研究结果还表明，不同菌株产生的亲和带的形态特征不同，如MK菌株的各nit突变株间产生的亲和带均表现为水平扩展，迅速呈纺锤形，但气生菌丝不发达，亲和带仅表现为菌丝层比突变体菌丝层厚，随着亲和带的发展可在两突变株间连成片，暂称扩展型亲和带；而MK7-1菌株的各nit突变株间产生气生菌丝茂密，且扩展宽度均匀的线形亲和带，亲和带朝更浓密方向发展，仅加宽，但不易成片，暂称线型亲和带。所有亲和菌株（或单孢株）与MK形成的亲和带均属扩展型亲和带，而与MK7-1形成的均属线型亲和带。依据不能利用硝酸盐的突变体（nit）间营养体亲和性划分出的棉花枯萎病菌营养体亲和群（VCGs）与其生理小种间高度相关，即不同生理小种间营养体不亲和，而同一生理小种归属于一个或少数几个VCGs。张莉等（1998）从新疆各植棉区采集棉花枯萎病病株，经分离纯化获49个单孢菌株。经营养体亲和性测定结果表明，供测49个菌株分为4个亲和群，其中，VCG1包括46个菌株，占供测菌株的93.9%，均与标准菌株中的7号小种Ag84亲和，另外3个（吐-2、昌-4、石-2）分属不同的亲和群，它们与标准菌株中的7号、8号和3号小种的Ag84、Ag16、Ag2菌株的突变体均不亲和。20世纪90年代后期以来，随着新疆植棉面积的不断扩大及从各地大量调运棉种，其病原种群是否有所变化，不少植棉单位存在一定疑问。为此，张莉等（2005）采用营养体亲和性技术，对新疆棉花枯萎病菌的生理小种类型及其病原种群进行了变异监测研究。结果表明，28个供试菌系高度侵染海岛棉、陆地棉及K102（辅助鉴别寄主），属典型的7号生理小种，其余12个菌系在鉴别寄主上的反应与7号生理小种略有差异；供试菌系属于一个营养亲合群，且与7号生理小种的标准菌系相亲和，与3号、8号小种的标准菌系不相亲和；新疆棉花枯萎病菌依旧以7号生理小种为主。与以往的研究结果相比，新疆棉花枯萎病菌的群体组成基本没有发生变化。此外，王雪薇等（2000）的研究结果也表明，52个待测菌株与7号小种的4个标准菌株间存在着不同程度的营养体亲和性，而与3号小种和8号小种的标准菌株均不亲和。因此，它们属于7号小种营养体亲和群—VCG701。在棉花枯萎病菌的生理小种及其遗传进化关系的研究中，通过突变体的诱发而进行的营养体亲和群判别方法是行之有效的重要研究方法之一，但在突变体的诱发与鉴定上存在较大的难度，方法不一，试验的稳定性较差。为此，白剑宇等（2007）对棉花枯萎病菌突变体的诱发与鉴定做进一步的方法验证与技术探讨。从32个供试棉花枯萎病菌菌株中共诱得288个nit突变体，根据其在不同氮源培养基上的生长划分出4种突变体类型：nit 1、nit 3、nit M和nit 8。对各菌株的突变体诱发与鉴定结果表明诱得突变体的难易程度主要因菌株的不同有很大差异，有些菌株（FKLMYN-23，FKTN-11，FSYN-Z6）很容易诱得各类型突变体，有些菌株不易诱得某种突变体类型，有个别菌株（FMYN-02，FYL2N-07）在KClO3含量10～60g/ml的各浓度梯度中都未能诱发出任何突变体。不同KClO3浓度梯度的KPS培养基上的突变体诱发情况比较表明，在KClO3浓度为25g/ml时诱得突变体的比例最高，约76%的菌株在此浓度下诱得突变体。85.0%的供试菌株上诱发到的突变体类型不全，只有15.0%的菌株能诱发到4种类型的突变体。在诱得的288个突变体中，各突变体类型所占比率高低依次为nit 1＞nit 3＞nit 8＞nit M。在这4种突变体中，nit 1型突变体的诱得比例最高（76.7%），且在绝大多数菌株（93.7%）中易诱得，此结果与王雪薇等（1996）和李国英等（1998）的报道基本一致。但nit M型突变体较难诱发到，供试的32个菌株中，只有13个菌株诱发到了nit M突变体，其比率为40.0%，在所有诱发到的288个突变体中，nit M所占比例仅为4.9%，该结果与王雪薇等（1996）和李国英等（1998）的报道有所差异。这些结果对建立稳定和准确的实验方法体系，为进一步查明棉花枯萎病菌的营养体亲和群分化情况，营养体亲和群与生理小种的对应关系，生理小种的种类及其分布，病原菌的分化，遗传进化关系提供了有科学价值的依据。异核现象是半知菌普遍具有的特性，也是病原菌变异的主要原因。史大刚等（1991）结合新疆吐鲁番地区，原只发现枯萎菌生理Ⅲ型，后又发现了生理Ⅱ型的现象，研究了异核现象与枯萎菌变异的关系认为，异核现象是导致生理Ⅲ型菌系致病力增强产生生理Ⅱ型的重要因素。棉花枯萎病菌在遗传上都是十分复杂的种群，遗传的多变性可以由多种因子引起，例如，转座因子、染色体突变、基因漂移、准性生殖等。这种种群上遗传多变性决定了必须依靠更为客观的研究方法来研究它。VCG是依靠真菌自身遗传特征来划分的，不仅能反映菌系之间的遗传相似性，而且有助于真菌繁殖方式及其群体遗传结构的分析。但目前，棉花枯萎病菌营养体亲和性研究菌系来源十分有限，而且棉花枯萎病菌主要集中在专化型内，这样不能更为确切地了解种群的发育与变异。因此，今后应进一步扩大棉花枯萎病菌的研究种群，并结合更多的研究技术，包括分子技术，对日益复杂化的棉花枯萎病菌的种群进行更深入的研究。生物体内的同工酶是基因与生物外部形态性状的连接物，同工酶酶谱是生物内部生物化学特性的反映，许多学者认为，病菌不同的致病类型与酯酶同工酶有较密切的关系。吕金殿等（1982）用聚丙烯酰胺凝胶电泳对42个采自我国各省（自治区）的棉花枯萎病菌的酯酶同工酶进行了比较研究，根据主酶带的情况可将42个菌系分为3个类型，分别为类型Ⅰ，包括4条主酶带，含有31个菌系，来自13个省（直辖市）；类型Ⅱ，包括3条主酶带，含有6个菌系，来自6个省；类型Ⅲ，包括2条主酶带，含有1个菌系，来自新疆。张莉等（2000）用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定新疆棉花枯萎病菌酯酶同工酶，同时结合以往研究分析其酶谱类型与生理小种的关系。结果表明：（1）新疆棉花枯萎病菌有4种酶谱类型，供试的30个菌株中有25个菌株的酶谱属于类型Ⅰ据以往研究，这25个菌株中，有24个菌株属于7号生理小种，它们与标准的7号生理小种的酯酶同工酶酶谱基本一致。这说明，可利用酯酶同工酶作为研究棉花枯萎病菌致病力分化的一种辅助方法。同时，从生化的方面再次证明7号生理小种是新疆棉花枯萎病菌的优势小种。（2）主酶带的多少与致病力的强弱成正相关类型Ⅰ中的菌株有5条主酶带，次酶带也最多，在供试菌株中属致病力最强的类型；类型Ⅱ中的菌株有2条主酶带，次酶带较少，属供试菌株中致病力较弱的类型。（3）试验证明，酶谱类型与生理小种的类型并不完全一致如塔2菌株的酶谱类型属于类型Ⅳ，它与本次试验提供的3个标准菌株酶谱均不相似，但在利用鉴别寄主的鉴定中属7号小种；还有石-15菌株酶谱类型与标准3号小种相一致，但其小种也属于7号。这些现象有待进一步研究。曹君等（2005）通过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了各供试枯萎病菌酯酶同工酶，并结合同工酶谱的聚类分析研究其酶谱类型与菌株致病力及生理分化的关系。结果表明，在棉花枯萎病菌中酯酶含量较高，电泳酶谱稳定，重复性好。14个供试菌株与标准菌株J-1的枯萎病菌酯酶酶谱基本一致，既反映了棉花枯萎病菌在专化型水平上的遗传一致性，又能在专化型下区分出不同的致病类型。根据酯酶酶谱和聚类分析结果（图2-2）将供试菌株分为4种类型。类型Ⅰ的菌株有5条主酶带，次酶带也最多，在供试菌株中属致病力强的类型；类型Ⅱ中的菌株的致病力属于中等水平，类型Ⅲ、类型Ⅳ的菌株分别有3条、2条主酶带，次酶带较少，属供试菌株中致病力较弱的类型，表明主酶带的多少与致病力的强弱有关。因此，酯酶同工酶酶谱类型和致病类型有较密切的相关性，利用酯酶同工酶分析能够准确且快速地鉴别出棉花枯萎病菌的不同致病类型，克服了传统棉花枯萎病菌致病性鉴定方法的一些弊端，且该方法简单、方便、准确，重复性好，可以成为鉴定棉花枯萎病菌不同致病类型的重要方法之一。图2-2 同工酶酶谱聚类分析树状图棉花枯萎病菌各生理小种间，不论是酯酶同工酶、过氧化物同工酶，还是可溶性蛋白质，经电泳后或多或少都可出现特征性条带，差异比较明显，易于区分。吴彩兰等（2004）对棉花枯萎病菌的3号、8号和7号3个生理小种的标准菌株和新疆所采31个供试菌株采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了酯酶同工酶谱、过氧化物同工酶谱和可溶性蛋白质谱分析。结果表明：①菌体酯酶同工酶电泳：所有供试菌株的酯酶同工酶酶谱多态性丰富，谱带数目一般为3～8条，清晰可辨。棉花枯萎病菌不同生理小种的酯酶同工酶谱存在明显差异，3号生理小种有6条谱带，8号生理小种有3条谱带，7号生理小种有8条谱带，其中，Rf值为0.1和0.35的两条带为7号生理小种的特征性条带。供试菌株谱带数为4～8条，其谱带虽具有多型性，但都与7号生理小种标准菌株的特征性条带中的一条或两条一致。31个供试菌株经可溶性蛋白质谱分析，它们与7号生理小种的标准菌株的特征性条带中的一条或两条一致，说明新疆棉花枯萎病菌仍以7号生理小种为主要的优势小种，这与多次用鉴别寄主法测定的结果一致。在同工酶电泳实验中，过氧化物同工酶因其为单位结构，故谱带少，多态性差，有的菌株谱带不清；酯酶同工酶谱和可溶性蛋白质谱不仅谱带数目多，而且具有清晰易辨的特点，效果好，在实验中拟优先选用。②过氧化物同工酶电泳：所有供试菌株的过氧化物同工酶谱带数目为1～4条，多态性差，且有的菌株谱带不清。但不同生理小种间仍存在差异，其中，Rf值为0.42和0.56，为3号生理小种的特征性条带，Rf值为0.52为8号小种的特征性带，Rf值为0.4为7号小种的特征性条带。31个供试菌株谱带数都少，但它们基本都与7号小种的特征性条带一致。③可溶性蛋白质谱。棉花枯萎病菌不同生理小种的可溶性蛋白质谱存在明显的差异，3号和7号生理小种均有6条谱带，8号生理小种标准菌株只有4条谱带。谱带Rf=0.1、Rf=0.3和Rf=0.52为该3个生理小种所共有，8号生理小种Rf=0.4的谱带又与7号生理小种所共有，即8号生理小种的4条谱带均与7号生理小种共有；谱带Rf=0.2、Rf=0.38和Rf=0.45是3号生理小种所独有的特征性带；谱带Rf=0.08和Rf=0.42是7号生理小种所独有的特征性带。31个供试菌株可溶性蛋白质谱虽有差异，但差异不大；它们绝大部分谱带都具有7号生理小种的特征性谱带1条或2条，而不具有其他小种的特征性带。吴彩兰等（2004）采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对2002～2003年，从新疆各主要植棉区采集到的31个棉花枯萎病菌菌株及3号、7号和8号生理小种的标准菌株进行了可溶性蛋白质谱分析。结果表明，棉花枯萎病菌不同生理小种的谱带存在明显差异，易于区分，并且3号和7号标准菌株都有自己的特征性谱带；同一生理小种不同菌株谱带的一致性较高，差异不大，供试菌株与7号生理小种的特征性谱带中的1条或2条一致。从电泳图谱聚类分析可将其分为3类：3号和8号标准菌株各为1类，供测大部分菌株的电泳图谱与7号生理小种标准菌株的相似性水平高，亲缘关系近，与3号生理小种的相似性水平低，亲缘关系最远（图2-3）。这与鉴别寄主法进行生理小种测定的结果基本一致，说明采用可溶性蛋白凝胶电泳对棉花枯萎病菌生理小种的鉴定具有重要的参考价值，可作为常规鉴别寄主法和营养体亲和群鉴定法的一种重要辅助手段。图2-3 棉花枯萎病菌供试菌株电泳图谱聚类分析树状图由于传统的生理小种划分主要以病菌对特定寄主的致病力强弱作为依据，病菌自身的变异及环境因子的复杂变化也可造成致病力变异，仅依靠传统的形态学和致病力差异来划分病菌生理小种已难以得出令人信服的结论。因此，需要借助于诸如遗传学、生物化学、分子生物学的手段加以验证，如血清学、营养体亲和性、凝胶电泳以及近年来发展迅速的RFLP及RAPD等技术，已逐步应用于病原菌的鉴定。而采用分子生物学手段，可将致病力在分类中的作用从遗传学的角度加以重新评价。随着分子生物学技术的发展，利用分子特征进行真菌分类鉴定已逐步被人们所采纳。在对病菌遗传背景了解甚少的情况下，采用随机引物扩增多态性DNA分子标记对尖孢镰刀菌专化型以下的小种进行多态性分析是行之有效的。RAPD（Random Amplified Podymorphic DNA）技术是20世纪90年代由William等在PCR基础上创立起来的一种利用随机引物扩增DNA的分子标记方法。该技术一出现，就以其快速而便于检测大量样品，所需DNA量少、不需要生物的特殊基因文库作探针以及操作安全、所需费用较低等突出优点，迅速应用于生物学研究的各个领域。冯洁等（1999）对来自中国11个省（自治区）的棉花枯萎病菌不同生理小种菌株的基因组DNA进行随机扩增，筛选出10个扩增多态性好且稳定的随机引物，不同引物的条带数为9～19条，扩增片段的DNA分子量为300～3000bp，10个引物扩增得到的140个DNA条带中，有123个多态性条带，占总条带的87.8%。根据供试菌株RAPD-PCR扩增条带的有无，以1.0记数，统计稳定、清晰出现的条带，采用Statistics统计软件对数据进行类平均法系统聚类分析，建立树状图（图2-4）。以连锁距离为5.0划分时，供试的29个菌株可划分为6个RAPD组。Ⅰ组为所有的3号小种菌株（1～5）及国外3号小种对照（29）；Ⅱ组为所有的7号小种共16个菌株（11～26）；Ⅲ组为8号小种的3个菌株（6～8）；Ⅳ组为8号小种的另外2个菌株（9、10）；V、Ⅵ组分别为国外的1号小种（27）及6号小种（28），它们各独自为一类。通过亲缘关系树状图可以看出，我国的3号小种与国外的3号小种对照亲缘关系十分密切，同属于一个RAPD组Ⅰ，这个RAPD组与其他5个组的菌株在亲缘关系上相距较远，独为一类；我国特有的7号小种自成一类；而我国的8号小种遗传背景较为复杂，分属于2个不同的RAPD组，其中，归为第Ⅳ的菌株（9、10）与7号小种的亲缘关系较近，归为第Ⅲ组的菌株（6～8）与7号小种的亲缘关系较远。国外的1号、6号小种（27、28）与我国的7号、8号小种在亲缘关系上相距较远。从亲缘关系树状图中还可以看出，我国的3号、7号小种都分别属于两个独立的RAPD组，8号小种分属于两个不同的RAPD组，这与传统的以致病力差异为依据的鉴别寄主划分生理小种的结果基本一致。从分子水平上证实了中国生理小种划分的正确性，并证明中国除3号小种与国外相同外，7号、8号小种是不同于国外其他小种的独立小种。8号小种在我国的分布只局限在湖北新洲和南京江浦，是遗传背景最为复杂的一个小种，今后在这一群体中可能会划分出新的小种。图2-4 供试棉花枯萎病菌菌株的RAPD聚类分析树状图新疆是我国最大的棉花生产基地，但植棉面积迅速扩大、连作年限延长、引种频繁，导致棉花枯萎病迅速扩展，为害严重。为了有效控制棉花枯萎病菌，有必要对新疆不同植棉区枯萎病菌的生理小种及遗传多样性进行分析，为新疆棉花抗病育种、植物检疫及病害防治提供科学依据。王雪薇等（2001）和田新莉等（2002）利用RAPD技术比较新疆棉花枯萎病菌不同菌株间在分子水平上的共性与差异。RAPD分析结果显示出这37个供试菌株与7号小种各对照菌株间基因组DNA的指纹图谱高度相似，属同一遗传相似组，而与3号和8号小种的对照菌株间遗传差异较大，亲缘关系较远，即7号生理小种是组成目前新疆棉花枯萎病菌群体的优势小种。仅发现一株可能属于3号小种的菌株，未发现属于8号小种的菌株。此外，从分子水平上证明新疆棉花枯萎病菌存在明显的遗传分化，即使在7号小种内也存在遗传上的差异，从而导致致病性强弱的不同。冯洁等（2000）采用10个随机引物对我国3个棉花枯萎病小种的26个菌株PCR扩增结果表明，不同小种在扩增的DNA条带之间差异明显，并分别筛选到了3号、2号和8号小种的特征带。3号小种特征条带2以OPF-10为引物扩增，3号小种的5个菌株（编号l～5）均在分子量为513bp处出现OPF-10513特征条带，而其他小种菌株均未扩增出此带。7号小种特征条带以OPF-08为引物，所有的7号小种菌株（编号11～26）均扩增出了分子量为371bp的特征条带OPF-08371。8号小种特征条带以OPF-12为引物，供试的5个8号小种菌株均在703bp处扩增出了特征条带OPF-12703。采用ABI 377全自动测序位，以T7方向进行序列测定，3个插入片段均可一次通读全部序列，3号小种的特异性探针OPF-10511含有513个碱基，内含5个内切酶位点（Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、Xba Ⅰ、BstⅪ、EeorⅤ），G+C含量为45.4%；7号小种特异性探针OPP-08371含有371个碱基，内含7个内切酶位点（Ecor V、Bsp 106、Nci I、Dra Ⅱ、Xho I、Sac I、Ecor V），G+C含量为43.4%；8号小种特异性探针OPF-12703含有703个碱基，内含7个内切酶位点（Kpn Ⅰ、Bsp 106、Hind Ⅲ、Aat Ⅱ、Ecor V、Bsp106、Kpn Ⅰ），G+C含量为42.1%。利用随机引物对棉花枯萎病菌不同生理小种的菌株进行PCR扩增，获得了大量的RAPD标记，并分别筛选到可将不同小种扩增出不同特征带的引物，为以致病力差异为基础的鉴别寄主划分生理小种的传统方法提供了分子水平的证据，说明我国棉花枯萎菌不同生理小种间在分子水平上存在较大差异，并且这种差异导致了病菌致病力的不同，不同小种之间特征性条带的存在也正是基因序列改变的真实体现。在棉花枯萎病菌小种间寻找到特异性DNA扩增片段，目前在国内外尚属首例。AFLP（Amplified Fragmentlength Polymorphism）分子标记技术是在基因序列未知的情况下，利用少数几对引物对相关物种基因组多态性进行有效检测。AFLP、RAPD及RFLP 3种分子标记多态性的检出效率的大小顺序依次为：AFLP>RAPD>RFLP。由于AFLP综合了RAPD和RFLP的技术优点，因而在植物病原真菌的遗传多样性分析、构建遗传图谱、标定基因、辅助育种的研究中得到了广泛应用。王兰等（2008）应用AFLP分子标记技术，选用9对EcorⅠ和MseⅠ引物组合，对新疆南疆地区不同团场的枯萎病菌12个菌系进行AFLP扩增，结果显示，每对引物均扩增出多态性的位点，说明供试菌系之间在DNA分子水平上存在丰富的遗传变异。9对引物共产生条带总数263条，其中，多态性条带205条，占总数的77.9%。参照琼脂糖凝胶电泳图谱，利用DPS数据处理软件中类平均法聚类分析，建立树状图谱（图2-5）。由图2-5可知，供试的12个菌系在0.52的水平上可分为4类，第Ⅰ类包括6个菌系，分别为F05、F06、F07、F011、F016和F043；第Ⅱ类为3个菌系，分别为F01、F012和F015；第Ⅲ类为2个菌系，分别为F09、F013；第Ⅳ类为1个菌系F03。（......）而与其同属于相同生态环境条件的菌系却属于另一个AFLP组。这说明同一生态环境下的棉花枯萎病菌株在遗传上可能不一致。图2-5 12个不同菌株AFLP聚类的树状图张莉等（2009）研究结果显示，新疆棉花枯萎病菌的AFLP多态性较高，这充分反映了枯萎病菌7号生理小种的群体内存在着一定的遗传多样性。出现这种情况的原因可能有两个：一是棉花枯萎病主要靠种子带菌传播，新疆大量从内地调运棉花种子，外来的棉花枯萎病菌传入新疆，这也暗示着新疆棉花枯萎病菌最初可能不是共同的来源；二是随着抗病品种的应用以及气候条件的变化，当地菌株发生突变，形成了适应新品种和当地自然条件的新菌株。研究的结果还表明，新疆棉花枯萎病菌AFLP多态性与菌株的地理来源有一定的相关性，但基于AFLP标记划分的AFLP类群与基于寄主病指划分的致病力类群间关系不一致。出现这种结果的原因可能有：①所用引物数目相对较少，揭示的可用于区分菌株的多态性不丰富；②所用菌株材料均仅根据致病力的不同而选定，忽视其他遗传差异的存在，加之选用菌株数目较多，干扰了分析结果；③AFLP分子标记所揭示的遗传变异反映了整个基因组水平的变异，而生理小种、致病性等表型变异仅反映一个或几个基因的变异程度。AFLP技术包含多个实验环节，要想获得理想的实验结果，需要对每个实验环节进行优化。在DNA酶切、连接试验过程中，需要制备高质量的DNA：一方面，DNA的纯度影响着酶切的效果；另一方面，DNA的完整性影响着实验结果的稳定性和重复性。单纯固体或液体培养基中含有糖和琼脂等营养物质，培养过程中使棉花枯萎病菌细胞中富含多糖、蛋白质等杂质，不利于DNA的纯化。限制性内切酶的选择对AFLP分析的准确度具有关键性作用，一般采用双酶切，其组合由1个高频内切酶和1个低频内切酶组成。目前国内外大多采用EcoRⅠ/MseⅠ和PstⅠ酶切组合，但Gomez等利用HaeⅢ/PstⅠ酶切组合和EcoR I/Mse I酶切组合对黑莓锈病病菌（Phragmidium violaceum）进行遗传多样性研究，结果显示HaeⅢ/PstⅠ酶切组合的AFLP分析虽然获得的扩增条带较少，但多态性位点较多，更利于条带的统计分析。王晓光等（2011）采用玻璃纸PDA培养基来收集棉花枯萎病菌菌丝体，采用改良CTAB法提取、纯化棉花枯萎病菌基因组DNA，最终得到了纯度高、适合AFLP分析的基因组DNA，而后利用HaeⅢ/PstⅠ酶切组合对棉花枯萎病菌进行了AFLP分析，结果显示，利用3对引物组合共获得301条带，其中，多态性条带164条，表明利用该酶切组合对棉花枯萎病菌进行AFLP分析能够得到较为丰富的多态性条带，能够用于棉花枯萎病菌遗传多态性的分析。通过对酶切时间、预扩增模板浓度、选择性扩增模板浓度进行梯度优化试验，建立了适合棉花枯萎病菌的AFLP分析体系，即酶切反应：250ng DNA经HaeⅢ/PstⅠ 37℃酶切2h后，加入1μl PstⅠ再进行酶切2h；连接反应：酶切产物25℃连接过夜（≥16h）；PCR反应中，以连接产物稀释10倍（P10）作为预扩增模板，预扩增产物稀释50倍（P10S50）作为选择性扩增模板。利用优化的AFLP反应体系对棉花枯萎病菌标准菌株进行分析，发现能够完全区分3号、7号和8号生理小种，证明了其有效性，可从整个基因组水平反映不同棉花枯萎病菌生理小种之间的遗传差异。对20个棉花枯萎病菌代表菌株进行AFLP分析，聚类分析结果表明，它们均与7号生理小种具有较高的遗传相似性，印证了7号生理小种是我国棉花枯萎病菌的优势小种，但同一生理小种内不同供试菌株之间也存在一定的差异性。棉花枯萎病菌的生长及其产孢量是病原菌生命活动和自身遗传的反应，同时也受到温度、pH值、碳源和氮源等因素的影响。李生才等（1998）认为，病菌生长温度范围为10～33℃，最适温度为27～30℃。曹君等（2005）研究结果表明（图2-6），供试棉花枯萎病菌菌株在10～35℃下均能生长，最适温度为25℃。棉花枯萎病菌生长温度因菌株不同而有差异已经得到证实。Raillo（1958）指出，尖孢镰刀菌生长适宜温度15～25℃，最高温度为35℃；陈其煐等（1992）报道，棉花枯萎病菌最适生长温度为25℃，最高温度大多为35℃，但有2个菌株能在37℃下生长；缪卫国等（2000）的研究结果与陈其煐等（1992）报道相似，但同时发现新疆吐鲁番棉枯萎病菌菌株HAI-17较耐高温，能在40℃下生长。不同研究结果所显示的棉花枯萎病菌生长温度的差异可能主要与供试菌株个体差异性有关，后者又与遗传和环境等因子有关。李生才等（1998）报道，棉花枯萎病菌在pH值2.5～7.0均可生长，pH值3.5～5.3为最适。曹君等（2008）研究结果指出（图2-7），棉花枯萎病菌在pH值4～10范围的PDA培养基上均能生长，最适pH值6～7。pH值6与pH值7差异不大，生长量几乎是其他各处理的2倍。这种不同研究结果的差异可能主要与供试菌株个体差异性有关，后者又与遗传和环境等因素有关。图2-6 不同温度对棉花枯萎病菌菌丝生长的影响图2-7 不同pH值对棉花枯萎病菌菌丝生长的影响在供试的4种碳源中，供试菌株在以蔗糖、乳糖、可溶性淀粉为碳源的培养基上菌丝生长较快，3种碳源之间在0.05水平上无明显差异。在以甘油为碳源的培养基上生长相对较慢，无碳源（对照）的生长与可溶性淀粉相似，但其菌丝不产生色素，而且气生菌丝稀疏、贴附生长。液体培养的菌丝干重与平板培养的菌丝干重之间有一定的变化：蔗糖作为碳源时，菌丝在平板上生长最快，但菌丝干重略低于可溶性淀粉；甘油作为碳源时菌丝在平板上生长略低于乳糖，而液体培养时却略好于乳糖。平板培养与液体培养之间有一定的联系，但结果不一定完全相同。蔗糖作为碳源时产孢量最大，可溶性淀粉其次，乳糖和甘油较差，清水（对照）最差（表2-5）。因此，做产孢实验时宜用蔗糖作为碳源。碳源生长速率（mm/天）菌丝干重（g）产孢量（个/ml）CK（清水）—0.0732.80×106蔗糖12.611.94845.93×107可溶性淀粉12.362.21854.76×107乳糖12.080.29211.20×108甘油11.210.33512.50×107表2-5 碳源对棉花枯萎病菌生长、产孢的影响（曹君等，2008）在供试的5种氮源中，供试菌株在以脲、硝酸钠为氮源的培养基上菌丝生长较快，两氮源在0.01水平上无明显差异。硝酸铵其次，在0.05水平上与前两种氮源以及磷酸氢二铵、硫酸铵差异明显。磷酸氢二铵、硫酸铵两氮源对菌丝生长影响较小。在供试氮源中，对菌丝干重而言，硝酸铵最好，磷酸氢二铵其次，脲、硝酸钠菌丝干重的差异不明显，硫酸铵较差，无氮处理（CK）的菌丝干重很少，说明氮是该菌生长的必需元素，对该菌的生长必不可少。对于产孢量而言，在供试氮源中以硝酸铵最好，脲、硝酸钠、磷酸氢二铵以及无氮对照其次，硫酸铵的产孢量较少（表2-6）。碳源生长速率（mm/天）菌丝干重（g）产孢量（个/ml）CK（无氮）—0.06483.21×107脲12.560.20624.28×107硝酸钠12.500.20683.32×107硝酸铵10.670.27301.40×108磷酸氢二铵5.610.22782.24×107硫酸铵3.200.17373.80×106表2-6 氮源对棉花枯萎病菌生长、产孢的影响（曹君等，2008）

高粱叶螨又名高粱红蜘蛛，俗称火蜘蛛、红砂火龙等，属真螨目（Acariforms），叶螨科（Tetranychidae）。在我国，高粱叶螨有多种，主要有截形叶螨（Tetranychus truncatesEhara）、朱砂叶螨（Tetranychus cinnabarinusBoisduval）和二斑叶螨（Tetranychus urticaeKoch）。世界温暖地区均有发生报道。我国各高粱产区都有不同程度的发生，以干旱年份发生较重。高粱叶螨以成螨、若螨先在下部叶片为害，群集于高粱叶背刺吸汁液，受害叶片出现失绿斑点，不能进行正常的光合作用。叶螨逐渐在叶片蔓延，扩展到整株叶背、叶面和茎秆，受害叶片呈红褐色或黄褐色，枯死。严重发生时，虫口密度大，布满整个植株，呈火烧状，严重影响高粱产量，甚至绝收。图3-93 高粱叶螨田间为害状（叶片红褐色干枯，密结白色丝网）图3-94 前期叶片受害状（左：正面观；中：背面观）图3-95 后期叶片受害状（左：正面观；右：背面观）高粱叶螨可为害高粱、玉米、谷子、棉花、豆类、瓜类、麻类、辣椒、茄子等多种植物。雌螨椭圆形，截形叶螨和朱砂叶螨为深红色或锈红色，二斑叶螨淡黄或黄绿色，足4对，体背侧有黑色斑纹；背毛12对，肛毛和肛侧毛各2对，无臀毛。幼螨蜕皮后为若螨，分幼螨和若螨2个时期，足4对，体形、体色与成螨相似但体小；初孵幼螨近圆形，长约0.18mm，体色透明或淡黄，取食后变淡绿色，足3对。雄螨红色或淡红色，形态特征与雌螨同，阳具弯曲背面形成端锤，其近侧凸起尖利或稍圆，远侧凸起尖利，两者长度几乎相等。卵圆球形，直径0.13mm，新产卵无色透明，后变橙色，孵化前可出现红色眼点。图3-96 高粱叶螨（若螨、成螨及卵）高粱叶螨以受精雌成螨聚集在高粱、茄子、豆类等作物的枯枝落叶内、杂草根际和土壤裂缝中越冬。翌年春天先在杂草、小麦上取食活动，5天平均气温大于7℃，越冬成螨开始产卵。卵散产在叶背中脉附近或新吐的丝网上，早春平均单个雌螨产卵量30粒，夏季100粒左右。5天平均气温高于12℃时，第一代卵开始孵化，发育至若螨或成螨时正值高粱出苗期，5月中旬至6月上旬迁往高粱田为害。高粱叶螨一般行两性生殖，也可不经交配行孤雌生殖，其后代多为雌性。最适繁殖为害温度为26～30℃。1年发生10～20代，繁殖1代需10～27天，整个生长季世代重叠。高粱叶螨的发生与气象条件及种植方式关系密切。高粱和小麦套作，或靠近果园、菜地等的高粱田常易发生。5～6月份干旱少雨，虫量迅速上升，若7～8月份干旱少雨，条件适宜，迅速蔓延至全田，严重发生为害。降雨强度大，可冲刷掉大量叶螨，降低种群密度，具有抑制作用。高粱叶螨的天敌很多，主要有小花蝽、捕食性螨类、深点食螨瓢虫、黑襟毛瓢虫、塔六点蓟马、中华草蛉、大草蛉、丽草蛉、草间小黑蛛等，对高粱叶螨具有一定的控制作用。不同高粱品种间的抗螨性存在明显差异。1.农业措施防治 清除田埂、路边和田间的杂草及枯枝落叶，耕整土地以消灭越冬虫源和早春寄主。严重发生地区，避免与大豆、蔬菜、小麦作物间作套种。推广种植高抗和抗螨品种。高温期适时灌溉，增加高粱田相对湿度，抑制叶螨繁殖。2.物理防治 利用高粱叶螨对黄色、蓝色的趋性，在叶螨迁入农田初期到盛发期，于高粱田边、行间插置诱虫板诱杀高粱叶螨。3.生物防治 利用天敌，如长毛钝绥螨、德氏钝绥螨、异绒螨、塔六点蓟马和深点食螨瓢虫等，控制螨类发生。4.化学防治 加强田间害螨监测，在点片发生阶段及时防治。药剂有：40%菊杀乳油，40%菊马乳油，20%螨卵脂可湿性粉剂，1.8%阿维菌素（虫螨克）乳油，20%三氯杀螨醇乳油，也可用波美0.1～0.3度石硫合剂。

1 选地 初建温室、简易温室、大棚均须注意选地。甜瓜是喜光作物，应选择背风、向阳、排水良好、土层深厚、肥沃的砂壤土为宜。应在冬季来临之前建好各种类型的棚室，并进行秋翻整地、施足基肥。结合深翻（30～40厘米），亩撒施充分腐热的有机肥2～4立方米，三元复合肥60～100千克，将土壤与肥料耙压、混匀整平后起垄准备定植。温室及简易温室大行距按80厘米，小行距60厘米；春大棚按垄距100厘米顺棚向起垄。垄台高20厘米，待扣棚升温后定植。2 施肥 甜瓜为钾性植物。一般1000千克商品瓜需氮3千克、磷1.5千克、钾5.6千克。而各个生育期对氮、磷、钾的要求也不一样，幼苗期、伸蔓期需氮量最大；开花坐果后需钾量日渐增多，果实膨大期达到最高峰。根据不同生育时期对氮、磷、钾的不同需要，调节好各元素供应比例，是甜瓜夺得高产的关键。氮肥可促进茎叶生长和果实肥大，提高产量，但施用量过多易徒长、晚熟、发病；施用磷肥可促根系发达，植株健壮；施用钾肥可提高品质、增加甜度、提高抗病性。3 定植前提早扣棚升温 设施甜瓜一般都是反季节生产，要求提早扣棚进行升温，使北方冬季冻结的土壤，在定植之前必须化开的同时，地温还要达到12℃以上，才能定植。扣棚时间与定植时间，一般要相距30天以上，以充分暖棚升温后再定植，避免棚里土壤还没有解冻就定植秧苗受冻受寒现象。春棚扣棚后如果要提前定植，常在棚内膜下吊1～3层内幕（膜内含有无滴剂的薄膜），三层内幕之间的距离一般相距14厘米左右，能有效起到保温增温的效果。内吊一层幕的，比不吊幕的可以提早定植10～15天；内吊两层幕的，可以提前定植20～25天；内吊三层幕的，能提早定植30～40天。甜瓜上市期可提前10～20天以上。棚内吊幕这项工作，扣棚后要马上进行，以提早升温。然后及时将吊甜瓜秧子的胶丝绳，拴在甜瓜定植垄上方的铅丝绳上，准备定植后吊秧。4 定植前5～7天进行棚室消毒 方法同育苗棚消毒（注意放风排毒）。开沟、施肥、浇水，在冬前做好的垄台上开15厘米深的浅沟，地力差的亩施三元表复合肥15～20千克，地力好的可不施肥，为防地下害虫可顺垄沟对水浇施50%辛硫磷1千克，然后合垄再浇足水，待水下渗，定植前进行高垄搭台找平，准备定植。高垄栽培可有效防止化肥烧苗和增加土壤的热容量，定植后发根、缓苗快。浇水后白天要注意升温和夜间的保温，封严棚门和各层棚膜，努力创造适宜甜瓜定植及生长的温、湿度环境。连作、重茬地块的土壤处理：如果是在同一块地上，翌年再进行生产的连作地块，由于甜瓜怕重茬和土壤盐渍化的危害，用作底肥的化肥用量要在原来施肥基础上，减少计划用量的1/2或1/3，同时每亩施用海藻菌肥2～3千克激活根系生长活力，对水冲施，在降低化肥用量，节省生产成本的同时，生物菌在土壤里还能还能活化土壤，分解过剩养分在土壤中的残留，固定空气中游离的氮，供作物吸收利用。反季节生产提高地温1～3℃，提高植株的抗寒、抗病能力。1 定植密度 定植密度要根据设施的类型、生产的季节、地力水平以及品种的特性而定。由于冬季生产植株长势较弱，温室及简易温室可适当密植，一般可定植2500～3000。早春大棚定植密度，一般2000株，地力水平差的可提高到2300株。根据品种特性，植株长势旺的适宜稀植，长势弱的可以适当密植。2 定植方法 在做好的垄背上开沟或打孔，采用水稳苗的方法定植，水下渗后封坨。封坨时要注意土坨与垄面持平，不要土坨露出地面太多，嫁接苗的切口切忌不能离地面太近，更不能埋入土中，否则失去嫁接的意义。打孔定植的，覆盖地膜前，进行垄沟表面68%精甲霜灵锰锌水分散粒剂500倍液地面杀菌封闭，以期降低秧苗感染茎基腐病的风险。然后再将地膜覆盖好，再打孔定植。垄背上开沟定植的，也可将营养钵底部穿透直接移栽垄背穴中，这样可以有效防治移栽时茎基腐病的侵染。

病害按致病的原因可以分为侵染性病害种非侵染性病害。侵染性病害是由病原物侵染引起的。非侵染性病害又称生理性病害，是由不良的外界环境条件或生理变化引起的一类病害。1.黄龙病又名黄梢病，是我国南方柑橘产区的毁灭性病害，俗称柑橘“癌症”。主要分布在包括广东、广西、福建、江西等省（自治区）南部的柑橘产区，云南、四川、贵州、浙江、湖南种台湾等省的部分柑橘产区。黄龙病主要靠苗木、接穗种昆虫（木虱）传播。主要采取以减少或消灭病原为原则，切断传播媒介为防治手段进行综合防治。（1）严格实行检疫 要严格禁止病区的接穗种苗木向无病区或新种植区域调运。新区引人的苗木或接穗要有当地植物检疫部门出具合格证书，确保接穗或苗木是无病毒苗。（2）建立无病苗圃培育无病苗木 苗圃应选在远离柑橘园的位置，至少在5千米，如在山区最好建在山窝里，有森林种山的阻隔，减少感染。所以砧木种子种接穗都需要经过消毒处理。砧木种子消毒方法：先将种子浸人50℃左右的温水中浸泡5 分钟，然后取出放人55～56℃的温水中浸泡50分钟。接穗的消毒方法为：可将接穗放人44℃温水中预热5 分钟，然后放人47℃左右的温水中8～10分钟，取出后用湿布包好，隔24 小时后再处理，同样条件下重复3 次即可。也可用1 000 毫克/升的盐酸四环素或盐酸土霉素溶液浸泡2小时，取出用清水冲洗后即可剥芽嫁接。（3）隔离种植 新建果园应远离老病果园，以减少自然传播。（4）加强防控柑橘木虱 柑橘木虱是传播黄龙病的最主要媒介，应当消灭其虫源。在每次抽新梢时喷药防治，药剂有10%吡虫啉可湿性粉剂1 500～2 000倍液、5%氟虫腈1 500倍液、25%噻虫嗪水分散粒剂4 000～5 000倍液种松碱合剂 15～20倍液。（5）及时拔除病株 移栽前整树喷杀虫剂，杀死病树上的木虱。或连根拔除，并种落叶一块烧毁。2.溃疡病柑橘溃疡病是国内外植物检疫的对象之一，是为害柑橘枝梢、叶片种果实的重要病害之一。主要分布在广东、广西、台湾、江西等省、自治区，近年来四川、湖南、浙江种云南等省也有局部发生。主要通过苗木、接穗、果实种带菌的种子及土壤远距离传播，由昆虫、人、工具种风力等作近距离传播。其主要防治方法为：（1）严格实行检疫措施 绝对禁止从病区输人柑橘苗木、接穗、果实种种子等。（2）培育无病苗木 苗圃应设在无病区内，周围1 千米以内无柑橘类的植物，砧木种子种接穗应采自无病果园，且必须经过消毒才能进人无病苗圃。砧木种子消毒方法：先将种子装人纱布袋内，放人50～52℃热水中预热5 分钟，然后转人55～56℃恒温热水中浸 50 分钟，晒干后播种。接穗的消毒方法：在700mg/kg硫酸链霉素种1%乙醇的混合液中浸30 分钟，取出静置20～30分钟，清水冲洗，晾干后保湿用于嫁接。（3）病区防治 病区必须采取综合防治技术，包括冬季清园、加强树体管理、药剂防治等，放梢要整齐，特别是秋梢，注意防止潜叶蛾的为害。防治药剂有45%代森铵水剂500 倍液、0.5%倍量式波尔多液、25%叶枯宁可湿性粉剂1 000倍液。3.衰退病是由衰退病毒侵染引起的一种很普遍的病害，全世界柑橘产区均有分布。我国分布也相当普遍，主要为害以酸橙种香椽等作砧木的嫁接树。它可通过带病毒的苗木种带病的芽、皮种叶碎片嫁接传染，在田间是由橘蚜、棉蚜、橘二叉蚜与绣线菊蚜等传播。防治方法有：（1）由于衰退病在我国普遍存在，传病媒介昆虫——橘蚜等遍布各柑橘产区，因此选用积、酸橘、红橘等耐病品种做砧木是切实可行的有效方法。（2）枸头橙是浙江省常用的砧木品种，具有生长势强健、耐盐碱的优点。它虽然属酸橙，但经有关单位测定，对衰退病有较强的耐病性，也可作砧木。4.裂皮病主要为害以积、积橙作砧木的植株，引起植株矮化、树干裂皮、树势衰退、产量下降。是由类病毒引起的病害，病原随苗木种接穗做较远距离的传播，并可通过嫁接或修剪的工具机械传播。种子不传病，也未发现媒介昆虫。防治方法有：（1）母树用伊特洛格香橼亚得桑那861 品系作指示植物进行鉴定，凡是无病毒株可采接穗进行苗木繁殖。（2）嫁接、修剪、采穗时，要注意刀具等的消毒。用20%漂白粉液（含1.05%次氯酸钠）或1%次氯酸钠液浸渍，并立即用清水冲洗。（3）在田间发现病株，可以靠接红橘、枸头橙等抗病砧木。5.碎叶病最早始于美国在莱檬上发现，它是由柑橘碎叶病毒引起的病害，主要危害以积种积橙作砧木的柑橘树。国内目前存在感染碎叶病的品种有北京柠檬、蕉柑、本地早、冰糖橙，其典型症状主要表现为嫁接口接穗部肿大呈瓜皮帽状，剥皮后可见嫁接口环隘症状。防治方法见裂皮病。6.脚腐病柑橘脚腐病又称裙腐病，是一种由疫霉菌或镰刀菌复合感染引起的一种根颈病害。全国各地柑橘产区都有不同程度发生。主要防治方法有：（1）利用积、枸头橙、香橙、酸橘等抗病砧木是防治该病最简单、最有效的方法。（2）对已感病的植株，每株可靠接3 株以上的抗病砧木，嫁接口离地面20厘米以上。发现病斑，可以刮去病斑，再用刀纵刻，深至木质部，然后用25%瑞毒霉可湿性粉剂100 倍液，或用50%多菌灵或70%甲基托布津可湿性粉剂100倍液涂伤口。（3）加强树体管理，改良土壤，注意果园排水沟的清整，防治果园积水，尤其注意嫁接口应露出土面。7.疮痂病柑橘重要的病害之一，是由疮痂病菌引起的，分布十分广泛，主要为害幼叶、新梢种幼果，但以温带地区的春梢发病最重。橘类最感病，橙最抗病，而柑介于二者之间。主要防治方法有：（1）使用无病苗木 在无病区或新种植区，采用无病苗木，或对外来苗或接穗用45%苯来特可湿性粉剂800 倍液或70%甲基托布津可湿性粉剂800倍液浸泡30分钟。（2）减少病源，冬季及时清园 冬季修剪时，剪除病枝种扫除落叶，并收集起来一并烧毁。（3）加强栽培管理 加强肥水管理，注意果园通风透光，及时防治病虫害，统一放梢。（4）药剂防治 在春季新梢刚抽发种谢花2/3 时喷药保护，如果遇阴雨低温天气再喷一次，药剂主要有80%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液、75%百菌清可湿性粉剂1 000倍液、10%甲醚苯环唑水分散颗粒剂2 000～2 500倍液。8.炭疽病炭疽病是在我国柑橘产区普遍发生的为害叶片、枝梢种果实的病害，也为害苗木、花种果梗，造成叶枯或叶腐、梢枯、果梗枯。主要防治方法有：（1）加强栽培管理 重视深翻改土，增施有机肥料，适当施用磷、钾肥，及时排水、灌溉，做好防冻、治虫等工作，增强树势，提高抗病能力。（2）清园 结合冬季修剪，剪除病虫枝，扫除落叶种果实，清出园外集中烧毁。（3）药剂防治 在春、夏种秋梢嫩叶期、幼果期及老果园采前落果期贮藏期间，用80%代森锰锌可湿性粉剂600 倍液或25%咪鲜胺乳油500～1 000倍液或0.5倍量式波尔多液喷防。9.黑斑病柑橘黑斑病又名黑星病，在我国长江以南各柑橘产区均有发生。主要为害果实种叶片，引起大小不等的病斑。有黑星型种黑斑型两种类型。防治方法有：（1）剪除枯枝，清除落叶 结合冬季修剪，剪除病枝，并将落叶种落果清除出园集中深埋或烧毁，同时喷0.8～1 波美度的石硫合剂，可减少病菌的侵染。（2）加强栽培管理 增施有机肥，少施速效的氮、磷种钾肥，开好果园排水沟，防治好病虫害，提高树体自身抗病能力。（3）药剂防治 发病果园，在落花后15 天内喷第一次药，隔15天再喷1次，连续2～3次。药剂：70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800～1 000倍液，10%甲醚苯环唑水分散粒剂1 200～1 500倍液，80%代森锰锌可湿性粉剂600 倍液，或77%氢氧化铜可湿性粉剂800倍液。10.立枯病立枯病是多种真菌病菌侵染引起的柑橘幼苗期病害，发生蔓延迅速，为害严重。防治方法有：（1）选择地势高、排水方便的沙壤土地块作苗地，合理轮作，避免连作。（2）加强栽培管理 要求精细整地，增施有机肥料，注意排灌，雨后及时松土。（3）土壤消毒 可于播种前20天整地后用95%棉隆原粉对细沙或细土撒于土壤表面，与土壤翻拌均匀后泼水压紧，密闭20天后松土播种。也可用45%代森铵水剂500 倍液进行土壤杀菌消毒。（4）发现病株立即拔起烧毁，然后用70%敌克松可溶性粉剂500倍液或50%多菌灵可湿性粉剂500倍液喷雾防治。11.根线虫病柑橘根线虫病主要是由一种半穿刺线虫引起的为害根部的病害，柑橘产区分布十分普遍。主要防治方法有：（1）利用抗病砧木 积砧是最抗根线虫的砧木，应选用此种砧木。（2）药剂防治 春季在滴水线开环形沟，施杀虫剂，每亩用5千克15%克线磷种1.25千克40%毒死蜱乳油。1.螨类主要包括叶螨科的柑橘红蜘蛛种黄蜘蛛，瘿螨科的锈壁虱种瘤壁虱，跗线螨科的侧多食跗螨等，其中以红蜘蛛分布最广。（1）红蜘蛛 又名柑橘全爪螨，是我国柑橘产区最严重的害虫，一年发生10～20 代，其发育的最适条件是20～30℃种60%～70%的相对湿度。防治方法为：苗木种幼年果园以化学防治为主，除春、秋季外，还应加强冬季防治。成年果园在开花前着重进行化学防治，后期尽量以生物防治为主。具体方法如下：● 加强预测种预报。以四川、重庆地区为例：在春梢萌芽前，于田间用放大镜随时观察，1～2头/叶，且天气又较干旱及时进行喷药防治。花后种秋季气温较高时，5～6头/叶时应及时喷药。● 药剂防治。花前使用：10%四螨嗪悬浮剂1 000～1 500倍液、1.8%阿维菌素乳油2 000～3 000倍液、15%哒螨灵乳油1 500倍液、5%尼索朗2 000～3 000倍液、24%季酮酯悬浮剂4 000～6 000倍液、30%天达农悬浮剂4 000～5 000倍液。花后使用：40%炔螨特乳油1 500倍液，或25%单甲脒水剂1 000～1 500倍液，或20%双甲脒乳油1 000～1 500倍液。● 生物防治。在果园释放捕食螨、食螨瓢虫、日本方头甲种草蛉等，可以有效防治红蜘蛛。（2）四斑黄蜘蛛 防治方法同红蜘蛛，但春季防治时间早10～15天。（3）锈壁虱 又名锈螨、锈蜘蛛。我国各柑橘产区均有分布，为害柑橘果实种叶片，以秋梢叶片受害最重，果实受害后变成黑褐色或铁锈色或铜绿色，故称为黑炭丸种铜病等。防治方法有：● 加强预测种预报。结果园一般从5月起到果园观察，一旦发现有受害果时即喷药防治，发现当年春梢的叶片背面有受害症状时应及时喷药防治。● 药剂防治。除尼索朗外，其他防治红蜘蛛的药均可，用65%代森锌800倍液效果也较好。● 生物防治。田间释放长须螨种汤普逊多毛菌对锈壁虱控制有很好效果。（4）侧多食跗线螨 又称茶半跗线螨，为害柑橘嫩叶、嫩梢种果实，受害叶片纵向反卷，扭曲变形；受害幼果表面呈银白色或赤褐色，像蒙上一层米汤状薄膜，龟裂，用手指可刮除。防治方法有：在果园种苗圃附近不种植豆科或茄科蔬菜，摘除抽发不整齐的新梢，以降低虫口基数，切断食物链。在5月下旬及6～8月份，选择喷药防治。药剂参照红蜘蛛，但单甲脒种双甲脒效果较差。2.蚧类又名蚧壳虫，属同翅目蚧总科，为害柑橘的主要蚧类有：盾蚧科的矢尖蚧、糠片蚧、褐圆蚧、黑点蚧、白轮蚧种红圆蚧等，蜡蚧科的红蜡蚧、角蜡蚧、网纹绵蚧种龟蜡蚧，硕蚧科的吹绵蚧，粉蚧科的橘小粉蚧、柑橘粉蚧种橘根粉蚧等。（1）矢尖蚧 又名矢尖介壳虫，国内柑橘产区分布十分普遍。主要为害柑橘，吸食柑橘叶片、小枝种果实的汁液。其防治方法为：● 农业防治。重剪虫枝、干枯枝种郁闭枝，改善果园通风透光条件，加强肥水管理，以增强树势。● 药剂防治。园内出现个别2龄雄虫后5天、最先发现初孵若虫之后20～25天或谢花后25～30天为最佳用药时期，第一次用药后隔20天左右重新喷布1 次。可选择的药剂：40%乐斯本乳油1 000～2 000倍液，95%机油乳剂100～200倍液、25%噻嗪酮（优乐得）1 000～1 500倍液、25%喹硫磷乳油1 000～2 000倍液种0.5%果圣水剂800～1 500倍液。● 生物防治。矢尖蚧天敌有日本方头甲、整胸寡节瓢虫、红唇点瓢虫、矢尖蚧黄蚜小蜂、花角蚜小蜂种镞盾蚧黄小蜂等，如果矢尖蚧20头/100叶以上或者有虫叶片10%以上时，进行天敌投放。另外，天敌投放时间最好在6月中上旬矢尖蚧第一代若虫发生后种第二代若虫发生前，或者采果后天敌数量少时11～12月投放防治效果好，按1∶50（天敌∶矢尖蚧）比例投放。投放天敌前用药剂防治一次，在喷药时尽量不用有机磷种拟除虫菊酯类杀虫杀螨剂，可较好地保护天敌。（2）糠片蚧 又名灰点蚧，我国各柑橘产区均有分布，为害柑橘的枝干、叶片种果实，诱发煤烟病，严重时枝枯叶落，影响树势种产量。防治方法有：药剂种农业防治见矢尖蚧。天敌主要有糠片蚧蚜小蜂、红圆蚧（蛉南）黄蚜小蜂、黄金蚜种盾蚧长缨蚜小蜂，还有日本方头甲、瓢虫种草蛉等，应加强保护种利用。（3）吹绵蚧 又名绵团蚧、吹绵蚧壳虫，我国柑橘产区分布广泛，以雌成虫种若虫群集在柑橘的枝干种叶片上为害，为害严重时枝干枯死，叶片枯黄，引起落叶种落果。可诱发煤烟病，降低树势，影响果实产量种品质。其防治方法有：由于其寄主广泛，繁殖世代多，易暴发成灾，因此以生物防治为主，辅以化学防治。天敌有澳洲瓢虫种大红瓢虫，能有效控制吹绵蚧的暴发。化学防治见矢尖蚧，但机油乳剂防效较差。3.粉虱类为害柑橘的粉虱有黑刺粉虱、柑橘粉虱、双刺姬粉虱、马氏粉虱种珊瑚粉虱，其中以黑刺粉虱分布最广泛，为害最严重，其次为柑橘粉虱。主要为害柑橘叶片，吸食法液，还可诱发煤烟病。防治方法有：（1）利用天敌进行生物防治 黑刺粉虱的天敌有粉虱细蜂、红点唇瓢虫种斯氏寡节小蜂，柑橘粉虱的天敌有橙黄粉虱蚜小蜂、红斑粉虱蚜小蜂、粉虱座壳孢种刀角瓢虫等。（2）化学用药同矢尖蚧 用90%的敌百虫1 000倍液也有很好的防治效果。（3）农业防治 合理修剪，剪除过密枝、枯枝种病虫枝，清扫园内落叶种落果，集中烧毁。（4）物理防治 利用黄板诱杀，每亩挂35～40张。4.蚜虫类柑橘蚜虫又名天厌、厌虫，在我国分布较普遍，为害柑橘的蚜虫有9种，主要是橘蚜、橘二叉蚜、棉蚜种桃蚜。橘蚜一年发生10～20 代，以成虫种若虫群集在柑橘嫩梢种嫩芽上吸食汁液，受害叶片畸形扭曲、枯萎，所排蜜露能诱发煤烟病，影响树体光合作用，以至于树势衰弱，影响果实产量种品质。防治方法有：（1）农业防治 结合冬季修剪，剪除枝上越冬卵种虫，统一放梢，以打断食物链，降低虫口数量。（2）生物防治 蚜虫的捕食性种寄生天敌很多，主要是寄生蜂、草蛉、食蚜蝇、瓢虫种寄生菌等。5月份温度高，天敌繁殖速度快，减少用药，以保护利用天敌。（3）化学防治 当新梢有蚜率20%以上时，且新梢被害率达25%以上时喷药防治。药剂：50%抗蚜威1 000～2 000倍液、40%乐果1 500倍液、10%氯氰菊酯或 20%灭扫利3 000倍液、20%丁硫克百威2 500 倍液种0.5%果圣1 000～1 500倍液，每10天喷1次，连喷2次。（4）黄拉诱杀 柑橘蚜虫对黄色有很强的趋性，把黄板用铁丝或绳子挂在果园1～2米高处，再在黄板正反两面均匀涂上黏虫剂（10号机油、黄油种凡士林等）即可。每隔10～15天清理一下黄板，重新涂一次黏虫剂。5.天牛类天牛属鞘翅目，天牛科。我国为害柑橘的天牛主要有星天牛（脚虫）、褐天牛（干虫）种绿橘天牛（枝天牛）等。其中，星天牛种褐天牛分布最广泛，我国各柑橘产区均有，而绿橘天牛只在部分柑橘产区有分布。防治方法有：（1）捕捉成虫。白天中午捕捉星天牛种枝天牛，晚上捕捉褐天牛成虫。（2）剪除虫卵种初孵幼虫。（3）钩杀幼虫种蛹。（4）药物防治。用40%氧化乐果或氯化苦等塞人虫孔后将孔封闭以毒杀幼虫，或在5～7月每半个月喷1 次树干，以毒死成虫种幼虫。（5）加强树体管理。保持树干表现干净光滑，堵塞虫孔，刷除树干苔藓。6.叶甲类为害柑橘的叶甲有恶性叶甲种橘潜斧，取食柑橘嫩叶、花蕾种幼果。恶性叶甲的防治方法主要为：（1）化学防治。在成虫活动或幼虫孵化盛期喷90%敌百虫或80%敌敌畏1 000倍液、2.5%溴氰菊酯或中西杀灭菊酯3 000～5 000倍液1～2次。（2）幼虫人土时，在树干捆扎带泥的草诱集幼虫并烧毁。（3）加强树体管理，清除越冬种化蛹场所，堵塞树干虫洞，清除残桩。（4）天敌有蠼螋、猎蝽种瓢虫。橘潜斧化学防治方法同恶性叶甲，此外应清除受害落叶烧毁，减少虫口，清除地衣苔藓等，中耕松土以杀灭成虫种蛹。7.蛾、蝶类（1）潜叶蛾 柑橘潜叶蛾属橘潜蛾科，又名绘图虫种鬼画符。各柑橘产区均有分布，以幼虫潜人嫩梢、嫩叶种果实表皮下蛀食。防治方法有：● 农业防治。在放梢前10～15 天施足肥料，干旱还需要灌水，使夏、秋梢抽发整齐；适时抹芽放梢，摘除过早或过晚抽发不整齐的嫩梢，减少虫口基数种切断食物链。● 化学防治。多数新梢长出0.5～2厘米时喷药防治，7～10天1 次，连续2～3 次。可选择的药剂有：1.8%阿维菌素乳油2 000～3 000倍液，10%吡虫啉可湿性粉剂1 000～1 500倍液，3%啶虫脒乳油1 500～2 000倍液，20%除虫脲悬浮剂1 500～2 500倍液，5%伏虫隆乳油1 000～2 000倍液或5%虱螨脲乳油1 000～2 000倍液。● 生物防治。9月以后在重庆地区白星啮小蜂等寄生性天敌数量较多，还有捕食性天敌如草蛉种蚂蚁等，注意用药时间，以保护天敌。（2）吸果夜蛾 我国为害柑橘的吸果夜蛾约有50 种，常见的有18种，在柑橘成熟时成虫飞人果园吸食果实汁液，受害处有针刺小孔，2天后刺孔周围出现1厘米左右的粉红色圆圈，受害果多数发生霉烂脱落。防治方法为：● 注意果园规划。离山近或近山地果园不种或少种早熟种；避免不同果树或不同品种混栽。● 夜间捕捉或驱避成虫。于夜间在果园周围用波长5 934埃的黄色荧光灯或白炽灯驱避，或用香茅油10毫升滴于5厘米×6厘米纸上，每晚每株挂4～5片。● 利用黑光灯或频振式杀虫灯诱杀成虫。● 果实套袋保护。（3）凤蝶 为害柑橘最严重种最常见的凤蝶是柑橘凤蝶种玉带凤蝶，在我国柑橘产区均有分布，是柑橘幼树种培育苗木的主要害虫之一，以幼虫为害柑橘嫩叶种嫩芽。防治方法有：● 人工防治。网捕成虫，或于嫩梢抽发期在田间捕杀卵、幼虫种蛹，冬季清园时捕杀越冬蛹。● 生物防治。柑橘凤蝶卵寄生蜂凤蝶赤眼蜂在重庆地区9～10月寄生率达80%以上，还有寄生后期幼虫种蛹的凤蝶金小蜂，寄生率达50%以上，可控制其种群数量，应加以保护利用。● 化学防治。可选用90%敌百虫或80%敌敌畏800～1 000倍液、20%灭扫利乳油4 000倍液、10%吡虫啉可湿性粉剂1 000～1 500倍液、3%啶虫脒乳油1 500～2 000倍液。8.花蕾蛆又名橘蕾瘿蝇，属双翅目，瘿蚊科。我国柑橘产区均有分布，仅为害柑橘。成虫在花蕾直径2～3毫米时将卵产于花蕾中，幼虫为害花器，被害花蕾呈圆球形白色，不能开放，形似灯笼，故名灯笼花。防治关键是抓住成虫出土时地面撒药。（1）药剂防治 现蕾初期（花蕾直径2～3毫米），用2.5%溴氰菊酯乳油2 000～3 000倍液，或90%敌百虫800倍液喷布树冠，每隔3～5 天1 次，防1～2 次即可。或用4.5%的甲敌粉1.5千克/亩、10%二嗪农颗粒剂1.1千克/亩，每7～10天喷施地面1～2次。（2）农业防治 在成虫出土前地面覆膜，阻止成虫出土羽化；人工摘除虫蕾，并将花蕾深埋、烧毁或煮沸，以杀死幼虫。

白星花金龟（Potosia brevitarsisLewis），属鞘翅目（Coleoptera），金龟科（Scarabaeidae）。我国东北、华北、西北、华中各省（区）均有发生。国外蒙古、俄罗斯、日本、朝鲜半岛也有发生报道。白星花金龟主要以成虫为害。成虫取食花器和伤口处流出的汁液。在高粱成株期，成虫主要为害幼嫩小穗、枝梗和籽粒，造成穗残缺不全，并由于被害穗产生伤口、籽粒破损，从而加重高粱穗、籽粒霉变。也可啃食高粱茎秆吸取汁液，特别是茎秆的伤口处被啃食，茎秆易倒折。白星花金龟主要为害高粱、向日葵、蔬菜和果树作物。成虫体长18～22mm，宽12.5mm，椭圆形。体表具光泽，多古铜色或青铜色。唇基短宽，前缘折翅且稍中凹。触角10节，鳃片部3节。前胸背板长短于宽，两侧弧形，基部最宽，后角宽圆形，后缘小盾片前部中凹。小盾片长三角形，顶角钝。鞘翅宽大，长方形，除刻点外，白绒斑多为横向波浪形，多集中在中后部。臀板短宽，密布皱纹和黄绒毛，每侧具白绒斑。中胸腹突扁平，前端圆，基部强烈缢缩。腹部第1～4节腹板近边缘布有白绒斑。前足胫节具3个外齿，爪弯曲成对。老熟幼虫体长40～50mm，上唇3裂片状。肛腹片后部覆毛区布满短粗直刺和混杂长针状毛，刺毛列位于后部中间，各由14～22根宽扁而钝的锥状刺组成，呈长椭圆形排列，中部（腰部）部分缢入。肛门孔横裂缝状。裸蛹，蛹黄褐色，体长21～22mm。腹部背面中央具6对发音器。尾节端部半圆形。雄蛹腹面外生殖器瘤突状，雌蛹腹面平坦，生殖孔位于近基缘中间。图3-26 植株被害状（左：啃食茎秆；右：咬食籽粒致霉烂）图3-27 白星花金龟成虫图3-28 白星花金龟幼虫 （张治良摄）白星花金龟1年发生1代，以幼虫于腐殖质和厩肥堆中越冬，幼虫为腐食性。成虫5月份出现，在东北盛发期为6月中旬至8月中旬。成虫产卵于含腐殖质多的土中或堆肥和腐物堆中。成虫具有假死性、趋光性和趋化性。1.农业措施防治 消灭粪肥中的幼虫，施用充分腐熟的有机肥。2.诱杀成虫 在田边以黑光灯诱杀成虫，利用白星花金龟对酒醋味的趋性，在地边架置装有糖醋液体容器，诱杀成虫。3.药剂防治 用50%辛硫磷乳油，或40%甲基异柳磷乳油，喷洒在幼虫较集中的腐殖质或厩肥中，充分翻拌，杀死白星花金龟幼虫。或采用毒土法，每亩用40%甲基异柳磷乳油100ml，拌潮湿细土20kg，充分混拌入白星花金龟幼虫较多的腐殖质或厩肥中。