柑橘砧木的选择是决定其品质好坏和产量高低的重要因素之一。我国柑橘产区一般以枳壳(又称枸橘，俗称臭橘子)砧木为主，是因为其具有亲和性好、矮化树体、早结丰产和抗寒性强等优点。根据柑橘砧木的不同生态习性，特别是砧木的抗逆性和对养分吸收能力的差异，生产中不同的柑橘栽培区域宜选用不同的砧木类型。枳壳虽是我国柑橘的主用砧木，但其不耐盐碱，土壤含盐量过高时，容易发生缺铁性的黄叶现象。故在沿海地区不宜选用枳壳，应选用抗盐力强的枸头橙作为砧木。山地种植时，面临着土壤条件差、养分淋失严重等问题，可选用根系分布深、养分吸收能力强的枳橙、红橘作为砧木。橘苗应选择纯正的品种。根据不同的区域选择砧木，以嫁接愈合良好，根系发达，具有一定的高度和粗度，一年生苗木干茎粗度达0.7cm以上，具2～3个分枝，适合本地气候和外界环境的砧木为宜。橘苗应无严重病虫害和检疫病虫害。橘园定植苗木也可用计划密植园中疏伐出的橘树，大苗定植，嫁接优良品种，使其迅速恢复树势，便于提早投产。(1)单芽腹接。嫁接部位在砧木苗的腹部，离地面10～15cm，接穗为单芽，不剪砧，这种方法称单芽腹接法。因其接穗的削法和形状不同分为两种，其接穗用通头单芽者称为单芽腹接；用芽苞片者称为芽苞腹接或芽片腹接。①接穗削取方法：通头单芽削取方法接穗采自春梢或秋梢，削取时将接穗倒持于左手，最宽且较平的一面紧贴左手食指，使要用的芽眼向上。在芽眼下方1～1.2cm处以45°角削断接穗，此削面称短削面。再翻转接穗180°，把宽平的一面朝上，芽眼向下，在芽眼背面上方下刀不伤芽眼，由浅至深削下皮层，深度恰好到形成层(黄白色)，此削面为长削面，要求削面平、直、光滑。然后再把接穗翻转180°，在芽眼上方0.2cm处以45°角斜削断接穗，把单芽削到盛有清水的碗内待接，4h内接完。因长削面超过芽上方，削成的芽称为通头芽。芽苞片削取方法从粗壮春梢或秋梢上取芽片，左手顺持接穗，刀口向内，将嫁接刀的后刃放于芽眼外侧的叶柄背面，以20°角沿叶痕向叶柄基部斜拉切一刀，深达木质部，取出刀后用刀在芽眼上方0.2cm处沿与枝条平行方向向下平削，当削过与第一刀的切口交叉处时，用右手大拇指将芽苞片压在刀片上，取下芽片放入水碗，接芽削面带少量木质部，基部呈楔形，芽片可用作切接和腹接。②砧木切口与嫁接：在砧木主干上方离地10～15cm处，选用东南方向，较平宽光滑处，刀紧贴主干向下推压纵切一刀，由浅至深，正好切到形成层，切口长度比接穗长削面稍长，将削下的切口皮层上方切掉1/3～1/2。芽苞腹接时，切口皮层还可形成“T”形。接合时，用刀尖挑开皮层，把接穗长削面朝里插入切口，接穗下方短削面与砧木底部接触，砧木、接穗的形成层相互对准、紧贴后，削起的砧木皮贴住接穗背面，用长15cm、宽0.8～1.0cm的薄膜条带紧扎接穗和砧木接口。春季和5—6月嫁接时可进行露芽捆扎，仅露出芽眼。嫁接过程中，注意保持接穗削面、砧木切口及放接穗的水要清洁，以免影响成活。单芽腹接一般在秋季进行，嫁接成活后，由于没有剪砧，当年不萌发，待翌年春季剪砧后接穗才萌发。(2)单芽切接。切接的接穗可用单芽或芽苞片，用芽苞片的称芽苞切接，用单芽的称单芽切接。切接成活后发芽快而整齐，苗木生长健壮，不剪砧，只能在春季应用。春季雨水充足地区，砧木应于嫁接前1～2天，离地面10～15cm处剪断，使多余的水分蒸发，以防接后接口处水分过多而影响成活。砧木切口方法如腹接法切口，以只切到形成层为宜，在砧木切口的上部将刀口朝一侧斜拉断砧木，断面为光滑斜面，切口在砧桩低的一侧。将接芽嵌入砧木及砧木切口，用塑料薄膜带缚扎，砧木顶部用方块聚乙烯薄膜将接芽及砧木包在内，形成“小室”，萌发后再剪破“小室”上端。(3)“T”形芽接法。将砧木洗净，用芽接刀横切，再垂直纵切一刀，成“T”字形。然后用尾端骨片沿垂直口轻轻将树皮撬开，在芽上方0.5cm处横切一刀，深至木质部，再在芽下1cm处斜切与前刀口交叉处。将芽取下，用骨片挑除木质部，然后插入“T”字形切口撬开的皮层内，使芽穗与砧木两者形成层紧贴后绑扎。(1)清砧。一般情况下一株苗木选择3～5个健壮的大枝进行嫁接，若树冠较大且枝条较粗，每个大枝可选2个副主枝嫁接，即在二级分枝上嫁接。将不接芽的枝梢剪除，疏删扰乱树形的交叉枝、平行枝、重叠枝、丛生枝、过密枝、内膛弱枝及分枝部位过低的主枝。植株有2个以上主干的只保留1个，将多余的剪除。通过短截达到初步整形的目的。(2)合理分布嫁接点。采用低位分层少芽换接，由下而上分布嫁接点，从选定的骨干枝下部开始嫁接，每个嫁接点相距30～40cm，方位错开，不接顺风(即接芽分布在一个方位)和对口芽，也不要接一口双芽。一般一株小树或一个大枝嫁接2～4层，主干过高应在离地面50cm左右补接一芽(萌发后培养为主枝)。嫁接高度依树龄而定，一般5年以内的苗木为1m以内，10年以内的苗木为1.2m以内，15年以内的苗木为1.5m以内，通常主干最下部位的接穗高度不得超过1.5m。(3)嫁接。嫁接的方法根据树势的不同而有所不同，一般采用单芽腹接(即每枝段一芽)，若接穗较粗或为圆形可用小芽(即芽片)腹接。中间砧树势一般，选择腹接法(即成活后剪砧)，树势强旺，可选择切接，更有利于恢复树势。(1)检查成活率和补接。春季嫁接的50天左右检査成活率；秋季嫁接的20天以后检查成活率。检査方法：先将捆绑的薄膜解开，经过风吹日晒一个星期，判断接芽成活与否。成活者，接芽新鲜，芽眼饱满，接芽与砧木相互愈合，唯独叶柄发黄，轻轻一拢，叶柄即刻脱落。未接活者接穗发黄、干枯或霉烂。成活率在80%以上的可以不补接，低于80%的应进行补接。(2)解绑与锯砧。当年秋季嫁接芽或接穗，应于翌年春季萌芽，在萌芽时，应及时解绑(或在芽背面划开薄膜)，同时，进行锯砧。春季嫁接的不能1次全部解绑，应采取挑破芽眼上薄膜的方法，即在离接芽0.5cm处的薄膜上划开0.5～1cm的口子，并用小刀挑开薄膜露出芽眼，提高芽眼对外界环境的适应性，接芽下半部捆扎的薄膜仍继续全部保留，待接芽第一次抽梢停止生长后，再将薄膜全部解除。春季嫁接的剪砧，也在挑芽眼的同时进行。无论是春季嫁接的，还是秋季嫁接的，剪砧都应分两次进行，第一次在接芽上方30cm处剪砧(即保留砧桩)，剪面要平整、光滑(伤口愈合速度快)，以防剪砧伤口过大而致接芽枯死。第二次剪砧，在接芽第一次抽梢自剪后或有小指粗时进行(此时锯掉砧桩)。用桐油涂刷于剪砧后的伤口，以防水分过分蒸发和发生流胶病，秋季嫁接的苗木，树势比较弱，应采用相应的防寒防冻措施，即对主干进行刷白处理。(3)抹除砧木萌蘗。在嫁接或锯砧时，砧木嫁接部位以下有些潜伏芽会萌发生出，应及时抹除，随见随除，一般3～5天进行1次。(4)摘心与疏梢。春梢长度达15～20cm或8片叶时摘心，夏梢长度达20～25cm时摘心，有利于秋季结果母枝的抽梢。秋梢只对骨干枝的延长枝进行短截或摘心，其余的一律缓放(即不摘心，不短截)，以利早结果。过密分枝、交叉枝或丛生枝应适当疏除少许，避免消耗过多的养分，不利于结果，一般丛生枝按三疏一、五疏二的原则把握疏梢程度。(5)设立支柱。嫁接时，特别是枝接时，由于伤口还未愈合，嫁接部位比较脆弱，应将接穗及所抽新梢捆缚在支柱上，防止被强风吹折。(6)病虫防治和肥水管理。预防为主，综合防治。刚高接的苗木树势相对比较弱，应及时预防螨类、蚧类、橘蚜、潜叶蛾、粉虱和凤蝶等对柑橘的为害，以促进植株恢复和生长。(1)苗木。假植苗使用一年生嫁接苗，要求苗高35～45cm，茎粗0.8～1cm。苗相好，叶色健康，不带病虫。(2)营养袋。营养袋材料为黑色耐氧化聚乙烯膜，厚度为3丝。规格为高45cm，口径18cm。袋底和侧面设8～10个口径为0.5cm的滤水孔。(3)营养土。营养土基质为富含有机质(不低于3%)的肥沃园田土和塘泥，每立方米基质掺入0.1m3细河沙、100kg腐熟的人畜粪便、30kg经过充分腐熟的饼肥、4kg柑橘专用肥、150g硫酸亚铁和150g硫酸锌。以上材料混合均匀后，再用粉碎机粉碎细化，最后用500倍多菌灵消毒，堆沤15天后即可使用。(4)假植圃。假植圃一般设在基地的中心区域。假植圃对土壤的要求不高，只要是平地，排灌条件良好即可。假植圃内设若干小区，小区之间用道路和排灌渠道隔开，小区一般为长方形，长度以40m为宜，宽度一般不超过20m。(1)假植的时间。假植一般以11月和2月为宜。(2)起苗及运输。起苗一般在阴天进行，起苗前苗圃灌足水，起苗时尽量多保留须根。苗圃与假植圃邻近，一般在起苗的同时进行假植，不让苗木离土过夜。长距离运输的苗木，起苗的同时用浓泥浆浆根，并用农膜包根，存放在阴凉处。每次起运地苗木在运输过程中一定要做到全封闭，严禁风吹雨淋。(3)装袋及摆放。苗木进袋时要做到苗正根直、摆放整齐。小苗进袋的技术要求与大田植苗要求相同。假植圃中一般每行摆放4袋，行宽80cm，行间距(走道)60cm。(4)定根水。苗袋摆放好后立即浇足浇透定根水，定根水的标准是营养袋底孔出水。苗木进袋后遇高温，应连续浇水3～4次，防止苗木脱水枯死。定根水也不宜过量，否则，会造成营养的流失。有条件的可用一层湿木屑覆盖营养袋表层土，可以起到保水防草的作用。(5)定干。苗木进袋后要进行适当的修剪。一是剪除苗木40cm以上的中心干，促发苗木在假植期间抽发侧枝，增加分枝级数和末级梢量；二是剪除苗木的病虫枝、萎蔫枝叶，提高苗木成活率。(6)有检疫性病虫害的小区，宜在假植区罩上塑料网。(1)肥料。营养袋假植的苗木，由于营养土养分充足，基本可以满足苗木抽发春梢和夏梢的营养需求，因此，在7月前一般不用施肥。8月苗木抽发早秋梢前应补充1次肥料，肥料可施用速效氮肥。早秋梢生长结束后停止施肥。(2)水分。营养袋假植的苗木对水分的要求比较高，因为营养袋隔断了营养土与地面的联系，遇高温、干旱营养土更容易枯水，而袋内积水则会导致苗木烂根。因此，要根据天气情况及时补充水分和排出假植圃内的积水。(3)除草。在苗木抽生春、夏梢期间，由于营养袋营养充足，大量杂草也会同时发生，及时除草是这一阶段苗木管理的主要工作，否则，会影响到苗木的正常生长。营养袋除草要做到除早除小，人工拔除营养袋内失控大株杂草，容易伤及苗木根系，影响苗木生长。假植圃走道杂草可使用除草剂，营养袋除草严禁使用除草剂。(4)病虫防治。进圃假植的苗木要经过严格的检疫，防止携带检疫性病虫。假植圃苗木病虫防治的重点是恶性叶甲、红黄蜘蛛、黑刺粉虱和潜叶蛾，其中，春季的叶甲和秋季的潜叶蛾是重中之重。假植圃施药以无公害的农药为主，不能使用高毒高残留农药。(1)出圃苗木规格。营养袋假植苗木出圃规格为苗高60cm以上，茎粗1.2cm以上，有3～4个明显主枝，末级梢不少于40条，根系完整，细根发达。同时，做好出圃苗木的砧木、接穗的信息核对及出圃时间和去向的登记。(2)定植时间。经过营养袋假植苗木，在营养袋中生长的时间不宜超过6个月，最好在春梢老熟后即行移栽，否则，会造成主根弯曲，影响苗木的继续生长。营养袋假植的苗木出圃定植的时间不受季节、天气的影响，只要苗木达到定植规格，随时可以进园定植，且苗木的成活率、生长势均不会受到任何影响。(3)运输及定植。苗木运输过程中要尽量保证营养袋完整，根系不受伤害。定植时先将容器苗运放到定植点，栽时轻拍育苗袋四周，使苗木带土与袋分离。再一手抓住苗木主干的基部，另一手按住育苗袋，将柑橘苗带土轻轻拉出。栽苗时要疏理根群，使根系展开，扶正苗木，再填上细土夯实，不深不浅，土齐根茎。栽后整理树盘，浇足定根水，当风面最好立上支柱，防止主干摇动，确保充分成活。

砂糖橘、春甜橘、金柑、明柳甜橘、茂谷柑、W·默科特结果早，投产快，产量高，特别是砂糖橘、春甜橘，种后第5年每667平方米产量可达3000～5000千克。要获得高产优质，除了高标准建园、加强病虫害防治以外，种植后的田间管理措施特别是树冠管理技术是否科学、合理、及时、到位，就成为柑橘能否持续获得高产高效的极其重要的因素。因此，必须加强对结果树树冠的管理，通过科学的整形修剪、合理的肥水管理，培养通风透光良好、结果母枝多而健壮的丰产树形，通过保花保果技术的应用达到多结果、年年结果的目的，最终实现丰产、稳产、优质、高效的目的。砂糖橘、春甜橘、明柳甜橘、W·默科特主要以秋梢为结果母枝(图4-1),金柑、滑皮金柑则以春梢和少部分夏秋梢为结果母枝(图4-2)。因此，如何培养数量充足、充实健壮的秋梢或春梢作为结果母枝就十分关键，其数量和质量关系到翌年的产量和质量。要根据树龄、树势、挂果量培养好结果树各个阶段量足质优的结果母枝。一般要求青年结果树培养100～200条、长度20～30厘米；成年结果树和老年结果树培养200～300条、长度15～25厘米，叶片浓绿、健壮充实、无病虫害的结果母枝。图4-1 砂糖橘的秋梢结果母枝图4-2 金柑的春梢结果母枝放秋梢时间要根据树龄、树势、结果量、立地条件和气候条件来决定。砂糖橘、春甜橘以秋梢为结果母枝，如放梢太迟，秋梢不充实，影响花芽分化与结果；放秋梢过早，容易促发冬梢，影响翌年的花量。所以，对砂糖橘、春甜橘、明柳甜橘、茂谷柑、W·默科特来说，结果多、树势弱的缺水的山地果园，适宜在大暑至立秋前放秋梢；对结果少、树势旺盛、水田栽培或灌溉条件好的果园，则可在立秋后至处暑前放秋梢。金柑、滑皮金柑则以重点培养充实的春梢为结果母枝，在春梢萌芽前及时完成修剪、施肥、淋水等工作。图4-3 短剪徒长枝第一，在放梢前15～20天，对树冠中上部丛状密生枝、旺长枝、徒长枝、落花落果枝、弱枝进行短剪或疏剪(图4-3至图4-5)，促发更多健壮秋梢抽出。对结果多的树，应疏去部分皮厚、粗糙、过大、品质低劣和畸形的果实。同时，剪除病虫枝、枯枝，减少养分消耗，促发秋梢。第二，在金柑、滑皮金柑采果后要及时进行修剪，重点对树冠中上部的结果枝、落果枝、徒长枝、弱枝进行适当的短截，促发健壮的春梢，确保当年结果母枝的数量和质量。图4-4 砂糖橘丛状枝枝条多而密图4-5 短剪后的丛状枝砂糖橘、春甜橘、明柳甜橘、W ·默科特、金柑、滑皮金柑结果早，产量高，对肥水的要求较高，如果肥水管理跟不上，就容易造成树体营养失调，树势衰退，产量下降，砂糖橘、春甜橘、明柳甜橘、W·默科特还容易出现大小年现象。因此，应因地制宜，合理施肥。土壤施肥要根据品种、树龄、树势、产量、肥料、季节、天气、土壤等不同情况进行，才能最大限度地发挥肥料的效用，确保丰产、稳产、优质。原则上采取追肥、化肥浅施，基肥、有机肥深施。(1)深翻改土，增施有机肥。每年冬季的12月至翌年1月采果后或夏季的6—7月，沿树冠滴水线下挖长80～100厘米，宽、深各40～50厘米的长方形坑，施肥量约为全年的40%左右，肥料以有机肥为主，配合商品肥。以株结果50千克的产量计算，每株施入绿肥、杂草、腐熟农家肥等有机肥20～30千克，复合肥1～1.5千克，磷肥1千克，饼肥1～2千克，熟石灰1～1.5千克，肥料与土要尽量拌匀施下，避免肥料过于集中造成伤根。深施重肥的位置需逐年轮换，保证土壤疏松肥沃，树体有足够的养分，为丰产、稳产、优质打下基础。(2)萌芽促花肥。柑橘生长、开花结果周期长，生长量大，消耗养分多，而土壤养分有限，所以应及时通过追施肥料补充营养。可在春梢萌芽前10～15天，在树冠滴水线附近开深10～15厘米的环状沟，每株施入0.3～0.75千克尿素、0.5～1千克复合肥，加腐熟的麸水或沼气液30～40千克，施后回土。(3)稳果肥。春梢生长、开花坐果与幼果发育使树体养分大量消耗，而且新梢生长与花果之间还相互争夺养分，导致落花落果。因此，要及时施稳果肥以减少落花落果，促进新梢转绿，提高坐果率。可在谢花2/3左右时，开浅沟每株施入尿素0.3千克、复合肥0.5千克、硫酸钾0.2千克，加施腐熟猪牛栏粪水或沼液30千克。(4)壮果促梢肥。在秋梢抽发前10～15天，沿树冠滴水线附近挖10～15厘米深的浅沟，每株施入尿素0.3千克、复合肥0.5～1千克、腐熟花生麸2～3千克。此次施肥最好同时加腐熟花生麸水30～40千克。目的是保证树体有足够养分，促进果实膨大和秋梢抽发，为翌年开花结果创造条件。(5)采果肥。施采果肥的目的是恢复树势，为翌年开花结果做准备。一般在采果前后进行，树冠盖膜后往往不方便施肥，因此，为了既方便又能及时将肥料施下，可将采果肥提前至11月份、树冠盖膜前施完。肥料以农家肥和有机肥为主，结合商品肥料，按株产50千克计算，每株施农家肥20～30千克、饼肥2～3千克、复合肥1～1.5千克、石灰0.5～1千克。各次追肥的具体施肥种类与施肥量，需根据品种、树龄、树势、产量、土质、气候等情况灵活掌握。大部分叶面肥可与农药结合使用，从而减少劳力、节约开支，但使用时要注意农药及叶面肥使用的注意事项，以免降低药效和肥效。叶面肥最适宜在新梢期和幼果期使用，阴天或下午3时以后喷洒效果更好，具体的叶面肥种类、使用时期与浓度详见本章第四节。水分是柑橘生长发育不可缺少的重要条件。俗话说:收多收少在于肥，有收无收在于水。缺水会使植株萎蔫枯死，而土壤水分过多或湿度过大，则会造成烂根或发病落叶，导致植株衰退甚至死亡。因此，加强水分管理，对柑橘早结、丰产、稳产、优质具有重要的意义。在生产上，如果阴天叶片出现轻微萎蔫症状，或在高温干旱天气条件下卷曲的叶片在傍晚不能及时恢复正常，就要及时淋水，保证树体对水分的需要。柑橘在春梢萌动期及开花期(2—4月)、果实膨大期(5—10月)对土壤含水量十分敏感。当土壤含水量沙土<5%、壤土<15%、黏土<20%时，就要及时淋水。一般砂糖橘、春甜橘裂果期在9月上旬至11月上旬，这个时期如遇到连续干旱，那么每隔15天左右应淋水1次，保持土壤水分均衡，防止因缺水而影响果实膨大，并防止久旱下大雨导致裂果。同时，在秋冬季节利用果园生草，树盘覆盖，保持土壤湿润。一般柑橘在秋、冬季及秋梢老熟后要适当控水:一是防止水分过多，不利于花芽分化；二是抑制抽发晚秋梢和冬梢，使树体更好地积累养分；三是为了提高果实的含糖量，增进果实的风味，同时提高果实耐贮性，在果实采收前1个月内也要适当控制水分，保持土壤适当干旱。果实采收前的10～15天需完全停止灌水，以降低土壤含水量，提高果实品质。长期干旱会使土壤水分大量减少，导致柑橘植株缺水，叶片褪绿、卷缩，果实生长发育停止，严重时引起落叶、落果，枝叶干枯等，甚至出现植株死亡现象。反之，柑橘受涝时间过长或果园低洼长期浸水，植株容易发生根系腐烂、叶片黄化、枯枝等。因此，旱季要注意防旱，雨季注意防涝。主要措施有:第一，建园时搞好果园供水、排水系统，做到能灌能排；第二，改良土壤，每年通过深翻压绿肥，增加土壤肥力，改善土壤团粒结构，提高抗旱性，使土壤水分能排能蓄；第三，在干旱前和大雨过后，及时中耕松土，使空气进入土壤孔隙，可降低土温，减少水分蒸发；第四，在树盘覆盖稻草、杂草或反光薄膜(图4-6)，减少水分蒸发，降低土壤温度；第五，果园生草栽培(图4-7)，除树盘杂草要铲除外，株间、行间非恶性杂草宜保留，或人工种植白花草等。图4-6 树盘覆盖稻草图4-7 果园生草栽培影响柑橘落花落果的原因很多，如长期低温阴雨、缺乏光照、高温、栽培管理不当、树势衰弱、养分供应不足、树势生长过旺、砧木不当、新梢过多与花果争夺养分、病虫害严重等都会导致落花落果。因此，如何把保花保果各项技术措施及时做好非常重要。主要的保花保果技术如下。主要作用是壮蕾、壮花及提高花的质量，提高坐果率，柑橘从花芽分化开始到新梢萌芽至开花结果，树体消耗了大量的营养。特别是采用避雨避寒栽培技术后，砂糖橘、明柳甜橘、W ·默科特、夏橙、春甜橘、金柑留树挂果时间长，更要及时补充足够的养分，才能保证树体正常生长和开花结果。因此，在春梢萌芽前15天左右，沿树冠滴水线附近开环沟施1次花前肥。特别是对衰弱树，要加强肥水管理，增强树势。在现蕾期和谢花后，人工抹芽控梢，把部分营养春梢和谢花后无果的营养枝抹去，可减少落蕾落花。同时，在6月中下旬前，对结果树萌发的早夏梢全部抹除，以减少大量的养分消耗，防止大量落果。在花蕾期、谢花期和幼果期分别进行根外追肥，能及时补充养分，减少落花落果。在花蕾期喷施0.2%～0.3%尿素液+0.2%磷酸二氢钾+0.1%硼砂或速乐硼1000倍液，每隔10～15天1次，连喷2次。谢花后可喷1次0.3%～0.4%复合肥液加含微量元素的叶面肥。也可在花蕾期、生理落果期喷施600倍果叶康3～4次。春季雨水多，开花后花瓣和花丝容易黏附在子房和花托上，造成小果腐烂而落果。因此，可在开花期间每隔5～7天定期摇花，把凋谢的花瓣摇落。人工抹梢成本高，采用药物控梢见效快、效果好。在夏梢期喷杀梢素、控梢素能有效杀死已萌发的夏梢，抑制夏梢生长。但在使用时要严格控制浓度，切忌浓度过高，同时不能与叶面肥、农药混合使用，以免产生药害。在柑橘开花、生理落果期，根据品种的不同，特别是对无核的品种，适当喷施植物生长调节剂，能有效减少落花落果，提高坐果率。出现异常天气时，更要注重生长调节剂的应用。(1)植物生长调节剂的种类。生产上应用较多的主要是赤霉素(920)、芸苔素内酯、细胞分裂素、复硝酚钠(爱多收)、防落素(B9)、2，4-D等。(2)植物生长调节剂的使用。在使用前必须了解植物生长调节剂的有效成分和使用方法，然后根据落花落果和天气等情况使用。如春季低温阴雨，天气异常，为提高花的质量和壮蕾壮花，在现蕾期至谢花期间，宜用芸苔素内酯、细胞分裂素、复硝酚钠等；谢花后至第二次生理落果期落果最为严重，此时应喷施赤霉素、防落素、2,4-D,效果明显，喷时要对果面、果梗、蜜盘均匀喷洒。赤霉素有粉剂和水剂2种，粉剂为无色结晶粉末、不溶于水，要先用少许酒精或高度白酒溶解后使用，水剂则按指定浓度使用即可。(3)植物生长调节剂使用浓度及次数。使用植物生长调节剂要严格控制浓度和次数，不能随意增加或减少，当浓度超过100毫克/升时，易产生药害。生产上有的果农滥用药物，把4、5种植物生长调节剂加入几种叶面肥混合喷施，有的则从现蕾开始至幼果膨大期间，每10～15天喷1次，持续2～3个月喷植物生长调节剂加叶面肥，多达5～6次，这种做法既浪费，又达不到应有的效果。如用赤霉素每克加水10～15升或2,4-D每克加水50～80升，连续使用多次。多种植物生长调节剂加叶面肥混合使用，容易刺激果皮变粗、变厚。正确的使用方法是:赤霉素每克加水30～50升、2,4-D每克加水200～300升，5%芸苔素内酯与细胞分裂素用1000倍液，复硝酚钠用3000倍液，使用2～3次为宜。植物生长调节剂最多同时用2种，不能超出3种，叶面肥加1～2种即可。

美国白蛾喜生活于温暖、阳光充足的地方，第一代多发生在树冠下部的外围，第二、第三代转移到树冠上部危害。美国白蛾有“趋光”、“趋味”、“喜食”特性，其雄成虫趋光性更强；对气味敏感，特别是对腥、香、臭味最敏感。一般在河流两侧绿化带、停车场、农产品批发市场、停产、半停产企业、闲置院落等僻静场所、旅游景点周边和海腥、鱼腥、厕所、臭水坑、禽畜养殖与屠宰场等周围及城乡结合部、村庄、建筑工地周边等脏乱差地区极易发生美国白蛾疫情。该虫喜欢把卵产在稀疏林木中的喜食树种上，以行道树、四旁树、城市园林、果园容易发生。幼虫耐饥性较强，5龄以上的幼虫耐饥力可达8～15天，这一习性使美国白蛾很容易随货物或货物包装物的运输或附在交通工具上传到异地，所以车站、码头、货物、仓库周围、交通沿线及村镇周围的零星树也容易发生。美国白蛾是一种食性杂、繁殖量大、适应性强、传播途径广、危害严重的世界性检疫害虫。仅在我国的寄主植物就多达49科108属175种，几乎包含了林木、果树、农作物以及杂草等多方面的植物，但最喜食的植物有：桑、臭椿、糖槭、白蜡、梧桐、榆树、杏树和柿树等。该虫常以幼龄幼虫群集寄主叶上吐丝结网幕，在网幕内取食寄主的叶肉，受害叶片仅留叶脉和上表皮，呈白膜状而枯黄。老龄幼虫食叶呈缺刻和孔洞，严重时树木食成光杆，林相残破，直接影响了城镇环境绿化和美化，给林业生产也造成重大损失，对当地的经济、生态和人文景观影响严重。成虫 雌蛾体长9.5～15.0mm，翅展30.0～42.0mm。雄蛾体长9.0～13.5mm，翅展25.0～36.5mm。体白色，雄蛾前翅从无斑到有浓密的褐色斑，后翅斑点少，雌蛾前、后翅白色无斑点。雌蛾触角锯齿状，褐色，复眼黑褐色，无光泽，半球形，大而突出。雄蛾触角腹面黑褐色，双栉齿状，复眼稍大于雌蛾。下唇须小，侧面呈黑色。喙短而弱。前足基节、腿节橘黄色，胫节及跗节大部黑色。前足胫节端有一对短齿，一个长而弯，另一个短而直，后足胫节缺中距，仅有一对端距。卵 近球形，直径约0.50～0.53mm，表面具有许多规则的小刻点，初产的卵淡绿色或黄绿色，有光泽，后变成灰绿色，近孵化时呈灰褐色，顶部呈黑褐色。卵产在叶背面，呈单层排列，表面覆盖有雌蛾腹部脱落的毛和鳞片，呈白色。幼虫 幼虫头黑色具光泽。初孵幼虫一般头宽约0.3mm，体长约为1.8～2.8mm，体黄绿色或淡褐色。二龄幼虫头宽0.5～0.6mm，体长2.8～4.2mm，色泽与一龄幼虫大体相同，腹部趾钩始现。三龄幼虫头宽0.8～0.9mm，体长4.0～8.5mm，胴部淡黄色，胸部背面具2行大的毛瘤，腹部背面具2行黑毛瘤，各毛瘤突变得显著发达，腹足趾钩单序异形中带。四龄以上的幼虫同老熟幼虫。老熟幼虫背部有1条黑色宽纵带，各体节毛瘤发达，毛瘤上着生白色或灰白色杂黑色及褐色长刚毛的毛丛，腹面黄褐色或浅灰色。蛹 体长9.0～12mm，宽3.3～4.5mm。初淡黄色，后变橙色、褐色、暗红褐色。前胸、后胸具中央隆脊，中胸退化。第5～7节腹节沿前缘具一凸缘，并具光滑和浅色的深沟。臀棘8～17根，每根棘端部膨大，末端凹入，长度几乎相等。蛹外包裹着稀松的混以幼虫体毛的薄茧，成灰白色，椭圆形。美国白蛾在我国辽宁省、陕西省及河北省北部等地区1年发生2代，北京市、天津市、山东省及河北省中、南部地区1年发生3代，以蛹在墙缝、砖瓦堆、树皮缝和杂草枯枝落叶层中越冬。越冬蛹在翌年4月上旬开始羽化，羽化期可延续到5月下旬，羽化期可达40余天。第1代幼虫发生期为5月上旬至6月下旬，幼虫老熟时从树上向下爬行至隐蔽场所化蛹，越夏蛹则多集中在寄主树干皮下的缝隙内，部分在树冠下的杂草枯枝落叶层中、石块下或土壤表层内，蛹期延续到6月底。6月底至7月上旬为第1代成虫期。第2代幼虫发生于7月上旬至8月下旬。8月份开始出现世代重叠现象，可以同时发现卵、初龄幼虫、老龄幼虫、蛹及成虫。8月上旬至8月下旬为第2代蛹期。8月中旬为第2代成虫期，第3代幼虫从8月下旬开始危害至10月下旬，10月上旬第3代幼虫陆续化蛹越冬。越冬蛹多在树皮缝、砖块瓦砾下、建筑物缝隙等处。越冬蛹期一直持续到翌年4月。成虫夜间活动，飞翔能力不强，趋光性较强。在各种光中，尤对紫外光的趋性最强。因此，黑光灯仍能诱导一定量的成虫，其中多为雄成虫。第1代成虫羽化期较长，最多可持续1个多月。刚羽化的成虫，身体湿润，翅膀皱缩，当翅展开后，首先双翅竖立，约半小时，两对翅突然下落，呈屋脊状置于腹部两侧。成虫交尾后不久即开始产卵，产卵量500～800粒，最多可达2000粒，卵期6～20天。幼虫期30～40天，共6～7龄，幼虫具有暴食性。初孵幼虫有取食卵壳的习惯，孵化后不就即开始吐丝结网，营群居生活，开始吐丝缀叶1～3片，以后将越来越多的叶片包进网幕中，使之不断扩大，1～3龄幼虫群居取食寄主植物的叶肉组织，留下叶脉和上表皮，使被害叶呈网状枯黄，4龄开始分散取食，同时不断吐丝将被害叶缀成网幕，网幕随龄期的增大而扩散，有的长达1～2m，犹如一层白纱缚在树木上。5龄以后开始抛弃网幕分散取食，食量大增，进入暴食期，被食后的叶片仅剩主脉和叶柄。幼虫的耐饥性很强，5龄以上的幼虫耐饥力达8～12天。老熟幼虫爬行能力较强，有的可爬到数百米远，寻找化蛹场所。蛹期14～20天。化蛹前，老熟幼虫停止取食，并开始吐丝作茧。茧薄、灰色，杂有体毛构成。美国白蛾成虫有趋臭味、腥味、异味特性，尤其是臭水坑、畜舍、养殖场、厕所等卫生条件差的地方极易发生危害。另外，发生严重时，可将树叶吃光，转移危害农田作物，如白菜、大葱、玉米、杂草等，对农林生产造成严重危害。

生产组织流程就是将各种要素结合起来，在一定的约束条件下，形成产出的过程，并以较高的生产率为目标。所谓的生产组织流程优化，就是如何有效利用企业的有限资源，将这些要素更好的结合在一起，为了追求更高的生产率，从而提高企业的竞争力。在经济全球化，市场竞争越来越激烈的今天，企业如何应对并在新形势下不断发展壮大，持续提高竞争力，是关系到企业生存发展的至关重要的问题。毋庸置疑，生产组织流程优化是解决这一问题的关键所在。21世纪是知识经济的世纪，在知识经济时代，企业已成为创新的主体，持续创新能力建设则是企业获得持续竞争力的源泉，是企业竞争取胜之道。在当前中国烟草改革与发展的重要调整时期，中国烟草机械工业企业面临着市场经济条件下外部环境深刻变化的严峻挑战，面临着行业自身深层次矛盾的严峻挑战和国外先进烟草机械工业企业的激烈竞争。对于这种挑战和竞争，烟草机械工业企业要认清形势，紧紧抓住烟草行业调整的重要机遇，努力提高企业自身的生产管理水平，满足卷烟工业的需求，适应行业改革与发展的需要，这既是行业对烟草机械工业企业提出的新要求，也是烟草机械工业企业进一步提高自身实力，参与国际竞争并取得竞争优势的必然选择。生产组织形式的变革是企业管理思想发展的最直接的体现。从最早期的手工作坊式单件生产模式到如今以ERP系统为平台的精益生产方式，都是由于经济的快速发展，市场环境的巨大变化，使得企业的管理思想、经营理念随之发生变化，也就导致了每一次生产组织形式的变革。由此可见，生产组织流程优化的实质其实就是管理创新。中国烟草工业企业伴随整个烟草行业的繁荣，已经形成了一定专业化、规模化的格局，已经形成一个拥有了以中国烟草机械技术中心、上海烟草机械有限责任公司、常德烟草有限责任公司、许昌烟草有限责任公司、秦皇岛烟草有限责任公司等直属烟草机械制造企业为核心、多行业烟草机械工业企业整机和零配件制造企业配套的中国烟草机械集团。特别是直属烟草机械工业企业通过近20年的发展，技术装备硬件上已经接近国际先进水平。但随着我国加入WTO，相对封闭的烟草机械市场逐步走向市场经济，与国外烟草机械工业企业的竞争不可避免。目前，相对于G.D.、豪尼、福克等国际烟草机械巨头，我国烟草机械工业企业规模小、技术水平落后，缺乏自主创新能力，在生产管理、技术管理、成本管理、营销管理上存在着很大的不足，一旦与国际接轨，则很难与国外同行直面对抗。因此，我们在加强自主创新的同时，也要加强对烟草机械工业企业的管理、引导和支持企业的生产流程优化工作。目前，烟草行业经过联合重组及实施工商分离等一系列重大改革措施后，烟草行业的改革与发展进入了新阶段，全行业正在努力实现企业由大变强目标。在这种新形势下，烟草机械工业企业市场也随之发生了很大变化，烟草机械工业企业需求越加个性化，具体表现在下列几个方面：第一，烟草行业的不断改革和发展推动了行业不断向前进步，也导致了专卖体制下的适度竞争加强。各个卷烟工业企业之间的适度竞争必然导致它们之间对烟草机械工业企业需求的不同。第二，打造中式卷烟的要求。“中式卷烟”是中国烟草的核心竞争力，各个卷烟工业企业打造中式卷烟，首先必须提高它们的技术装备水平，这也就对我们烟草机械工业企业提出了更高的要求。第三，烟草机械工业的定位。作为烟草行业的技术装备部，为烟草行业的发展提供强有力的技术装备保障，是以为烟草行业提供优质产品和服务为基础的。烟草机械工业企业应着眼于长远发展，通过逐步实施以信息化为基础的现代企业科学化管理，不断提高核心制造能力。完善质量管理体系，致力于建立持续提高产品质量的长效机制，更好地服务于烟草行业。多年来，在国家烟草专卖局、中国烟草总公司的指导和支持下，结合企业自身的发展需要，烟草机械工业企业对生产组织的流程改善和先进生产管理技术的应用，进行了有益的探索，主要改善的过程表现为：一条主线，三个阶段。一条主线是以通过推进MRPⅡ系统应用为主线，优化和提高生产管理过程的工作效率，提升管理水平。三个阶段是：1.在应用多年的成组管理技术的基础上，推行以MRPⅡ信息化管理应用为基础的管理信息化和管理流程再造；2.以MRPⅡ信息管理系统向ERP管理系统升级为契机，继续深化信息化管理应用；3.逐步引入对外实行供应链管理、对内实行信息化管理技术下的精益生产，实施生产物料的“拉动式”生产管理技术，加快物流的流转速度和效率，加快生产节奏。回顾多年的持续改进，在现代生产管理的要求下，管理过程信息化显得尤为重要，随着企业信息化管理的逐步推进，逐步深入，企业的发展也不断站在新的高度，获得新的发展平台。生产组织技术持续优化是企业保持高效快速增长的有力保障。2006年以来，国内烟草机械企业以进一步拓展ERP信息化系统深化应用为基础，从以下几方面改进和完善了生产管理流程：一是以ERP信息化系统为核心，大力推行“准时化”任务管理。通过不断完善ERP系统任务排产和动态调整管理机制，彻底打破台份计划管理思路，以计划任务的时间节点为控制重点，完善和加强考核力度，既防止任务拖期，又限制任务提前，使计划任务按期完成率能全面稳定在90%以上的水平，并实现了在多品种轮番装配的情况下物料良好的成套率，大大提高了物流和装配生产效率。二是以培育公司核心制造能力为基础，提高生产效率和防止关键技术流失。对精密机加，大件、基础件生产组织及装配环节在生产管理上均按核心制造技术重点培育与管理。大件、关键件等核心制造能力零件采取定机台，稳定工艺路线，并安排合适投产批量，使得这些生产周期长，质量精度高的零件生产过程更加稳定，生产效率不断提高，为企业产量持续提升提供了有力保障。为抓好装配环节管理，通过加强人员队伍建设，适度补充力量，并加强跨产品交叉学习和技能提升管理，使装配质量和生产能力得到明显提高。同时通过加强质量控制，在质量不断提升的前提下实施产品调试外包管理，有效缓解了企业装配人手不够的紧张局面，也确保了装配核心制造环节的全面自组织。三是构建和推行机加零件配送和免检管理。对质量稳定的外协品种，企业开发能支持供方库存、物流和任务管理等功能的外部信息平台，启动装配物料按日送达的准时配送管理，能实现按需求储备，按部套准时配套送达的管理机制，对供应链管理效能进一步提升开创了较好优化模式。同时对供方供货质量稳定的品种，按严格评估，逐级审核的原则确定免检零件目录，实施到货抽查工作机制，大大提高了质检验收效率和物流通过速度。四是利用信息化系统，实现配送物料装筐化管理，加强返库物流过程监控，提高物流管理运行效能。通过实施配送物料装筐化，减轻了装配人员查找物料工作量，通过提高辅助物流人员工作质量和精细程度，有效提高了装配人员工作效率。强化返库物料系统管理，实现装配物料按批及时清理，防止了现场多余物料的失控状态，保持了装配现场良好的工作环境。五是以ERP外部信息平台为依托，强化对供方的管理延伸。通过构建量化的质量进度监控考核体系，以外部信息平台为纽带，通过外部网络对40余家主要供方开通网络管理系统，实施远程信息发布和互动管理，辅以管理、技术支持，较好实现了供方生产管理能力的提升和质量进度协同的目标，为企业下一步生产管理以供应链为重要支撑提高企业竞争力打下了较好基础。此外，还通过推行油漆件准时制送料管理、优化返修流程管理，废品损失定额管理，外协任务进度监控管理，毛坯配送和安全库存精细管理等系统优化工作，为企业生产、物流体系的高效运行提供了更有力的支撑平台，为企业多年来坚持走管理创新提高产能之路打下了良好基础。烟草机械工业企业这几年在生产管理方面所做的工作，是在基于企业发展自身和外部影响所采取的积极措施。烟草机械工业企业各项生产组织模式优化工作通过前期调研、中期探讨到现在实施及后续维护，各项工作的调整优化过程本身也是一个各种管理思想的碰撞、交流与融合的过程，体现了烟草机械工业企业在市场环境下对自身的一种思考与定位。生产流程优化工作只有开始，没有结束，我们应结合企业自身的特点，继续探索生产组织模式的发展方向，使企业逐步在未来的竞争中能真正立于不败之地。ERP系统带来的不仅是软件系统，更多的是管理变革。根据管理及决策需求，结合ERP系统特点，对采购、库房、财务、销售和制造等各相关部门现有业务流程调研和分析后，重组业务流程，可以大大提高企业管理效率和工作效率。企业应以ERP系统为平台，大力开展生产组织流程优化工作，以此来提升企业的管理效能，并使之成为管理改进的主线。当前在中国烟草改革与发展的重要调整时期，中国烟草机械工业面临着市场经济条件下烟草发展外部环境深刻变化的严峻挑战，面临着行业自身深层次矛盾的严峻挑战和国外先进烟草机械工业企业的激烈竞争。对于这种挑战和竞争，烟草机械工业企业要认清形势，紧紧抓住烟草行业调整的重要机遇，求真务实，积极探索烟草机械工业深化改革之路，根据烟草总公司的发展思路，顺应调整，满足需求，把不断提高烟草机械工业企业竞争水平的生产流程优化工作作为增强企业核心竞争力的中心环节，真正成为烟草行业整体竞争力不可缺少的重要组成部分，切实为行业发展提供强有力的技术装备保障和支撑。

“战略”，是筹划和指导战争全局的方略。最初这一词汇是应用在军事领域，进入研究领域的时候，也是以研究带有全局性的军事斗争指导规律的学科。随着国际政治关系和实力对比的变化而变化，甚至从某种意义上指导着上述关系和实力的发展。当这一词汇进入到和平生活中另一场没有硝烟的战争——商战中的时候，企业战略的意义和作用，同真正的战争中一样，也必将是具有不可替代性和决定性意义的。“执行力”则是一个带有十足西方文化色彩的翻译词汇，目前在企业管理领域是比较流行的一个概念，但是它并没有一个标准化的定义去概括，而是一个可以统一内涵和外延的理解概念——执行并实现企业既定战略目标的能力。执行力虽然是一个新鲜词汇，但它的含义并不新鲜，中国古代就有其相关概念的阐述：“言必信，行必果”、“将者，智信仁勇严”等。甚至可以称得上中国古代第一贤君的唐太宗专门作了一篇政府首脑执行力研究的书——《帝范》，其中“君体”为第一要务：“兆庶之所瞻仰，天下之所归往”，是为执行力一个最好的注脚。企业战略是一个复杂庞大的战略体系。在这个战略体系中，有竞争战略、发展战略、技术开发战略、市场营销战略、信息化战略、人才战略，还有其他战略。这里讨论的是执行力在企业战略实施中的作用，我们不妨先做一个假设：这个需要贯彻执行的企业战略是一个建立在对该企业进行了科学研究、严谨逻辑论证之上的具有可行性和先进性的优良企业战略。拥有了优良的战略，下一步就是落实、执行、实施，再好的战略也不能仅仅落实在纸面上，一定要实施下去，不能得到很好实施和执行的战略就不叫战略，战略必须具体化、细节化。实施企业战略是将组织的战略计划转变成行动，然后转变成结果。这是一项整个管理队伍的工作，而不仅仅是几个员工的事情。组织的领导人员和各业分支、各部门的负责人对于战略成功的实施都负有责任，战略实施的过程会影响组织结构的每一部分，从最大的组织单位到最小的基层工作小组。要成功的将优良的企业战略转化为企业成长的具体阶梯，使得企业一步步走向战略的目标，达到行业中一个具有强大竞争力和核心凝聚力的存在，要点就是将精神思维成果——战略，转化为物质文化成果——落实。管理层能够对组织变革的有关事宜进行清楚而有说服力的传达，使各级人员对于实施战略、达到业绩目标都能坚定拥护执行，这个转化的过程所凭借的就是执行力。一个拥有执行能力的领导人，可以唤起人们对本企业战略足够大的热情，从而将战略的实施过程演变为一场全企业的实际运动。当企业达到了预定的战略和财务业绩，并在实现其长期战略展望方面显示出很大进步时，说明领导层在实施战略方面是拥有足够执行力的。执行力在企业的战略实施中的表现为如下作用。以北京信必达计算机技术开发中心为例，该中心是国有电力全资企业，主要从事电力信息自动化工作，是服务于强电企业的弱电公司，公司的主要以服务电力为主业，其目标是要成为产业中的信息化工程运营企业，“服务好大兴供电公司，具体体现在对电网科技新项目研发及电网科技信息技术的应用上要起到确实作用，就顾客的需求开发、研制科技产品，在产业内独树一帜，具有一种独特地位的研发型企业。”这是企业的长远发展战略，在这一战略发展过程中，随着阶段性工作的实施，短期战略目标的实现，执行过程会有相对阻碍的阶段。但是，选择一个明确而稳定的重点，要把一个目标落实到具体的业务执行中是很难的，为了使科学的战略有效运行，就需要一个坚定决策的执行能力。不能把重点分散在多个问题上，当机遇来临的时候，作为领导人不仅仅要自问：我们有没有为机遇准备好。更要自问：机遇是不是与中心的总体战略目标相背离。如国家电网SG186项目的实施，需要该中心担任支持角色，这与该项目的研发战略有所不同，但是，这项工作关系到国家电网信息化改革的成败，关系到电网的命脉，在这一实施初期是非常关键的，在这一大的战略下，要暂时舍弃该技术研发中心的战略目标，坚定不移地执行下去，做好实施支持工作。作为中心领导不能因为一些个案的利益得失而改变重点，正因为明白这样的道理，明白战略重点的转移需要领导认清方向性后的坚定执行力，所以，研发中心从成立之初，到现在成为电力系统中进行弱电信息化工程建设的优秀部门，在多次抓住机遇做出决策的同时，我们并没有偏离总体战略目标。战略实施过程中，有两种称为习惯阻力的常规阻力，一是来自实施战略人员的本身。高层领导在制订战略时，没有考虑到一些可能对中层实施人员已有习惯有影响的改革细节。另一种阻力是对现有的企业制度、惯例进行体制良性改革的时候，对正在实施的战略的冲击造成的阻力。这两种阻力都是良性的改革导致的阻力，第一种是贯彻阻力，第二种则是制度阻力。这种改变人们习惯导致的阻力，是所有战略在实施过程中都会触及到的细节阻力，虽然不会直接导致战略的戛然而止，但却可以使企业的战略目标不为人察觉的越行越远。贯彻能力，就是本文讨论的执行力的主体内涵，好的实施人员，能够认清自己在企业的整体战略中的地位，明白在战略实施过程中自己的角色。实施战略的人员首先是作为下属的管理者，代表公司进行管理；避免职务角色与个人角色混淆；坚定贯彻执行职务行为。体现经营者的意志；体现高层意志与目标。其次，是作为同事的管理者。最后，是作为上司的继承者。当这些角色的定位植根于实施者自己的头脑中的时候，即是他具备了推行战略的执行力，具备了全局目光的执行力，能够将自己的既定利益习惯向企业的长远战略靠近、改变、直至与战略保持一致。从而达到将各类组织、个人统一到他所要执行贯彻的战略的前进道路上来，克服期间的各种人事阻力和制度阻力保质保量的完成他自己所肩负的工作和任务。制度适应能力，是本文讨论的执行力的外延部分。是“执行并实现企业既定战略目标的能力”所衍生出的维护现有制度体制的辐射部分。能够运用现行体制和体制的良性改革都是建立在对现有体制的支持和拥护的基础上的。作为一个企业战略实施的领导人员，当这样一个群体是制度的拥护者的时候，他们就是一群“有章可循”的标杆。企业要成长、要发展，要通过企业的各种生产经营活动形成积累，所以企业自然会对各种活动提出要求，以保证企业目标的最终实现，所以制度反映的是企业的要求，这个要求包括长期的战略目标要求和短期的阶段利益要求，遵守企业的管理制度，满足企业的管理要求，帮助企业达成目标，是企业中每一个员工的基本义务。制度的执行，首先需要领导人员带头，作为企业中的一名员工，不论是普通员工还是管理者，能否认真遵守企业的各项制度，也反映出能否做到个人服从整体、局部服从大局，能否在企业中与他人进行良好的合作，配合企业制定的长远战略目标。当然，随着企业自身的发展，随着外部环境因素的变化，制度也需要随之不断进行改进，以保证制度与实际目标的匹配，制度的改进主要就是依靠管理者来推动。那么，既负有企业战略实施推动责任的管理者，就又肩负上制度良性改革推动者的任务，而这一切的顺利执行仰仗的正是：执行力。制度与具有执行力的领导人员的配合关系，就好像是标准产品与客户应用之间的关系一样，是一般与特殊的关系。在许多的管理制度中，都提供了自由裁量权力，允许领导人员拥有自己对长期战略目标的理解，可以根据实际的工作需要，对原有的过程进行调整，增加新的模式、减少原有模式过程、重新组合模式之间的关系等。执行力在这里体现为善始善终、强大的凝聚力、以身作则、勇于承担责任和承担风险，及时向受到影响的个体征询意见，整合群体意见。如果这些执行力的体征体现在企业战略的实施人员的身上，那么就将领导或者叫做引领两种改革触及到的个体们改变自己的习惯、适应改革，同时贯彻企业战略目标，良性改革的阻力将不再成为阻力。对于企业战略实行的跟踪监控，这是使得企业的战略施行能够“不折不扣”执行下去的好办法，但是“跟踪监控”不仅涉及法律、道德、舆论等多方面的影响，而且还会使企业的运营成本出现几何级数的叠加。所以绝大多数企业能够做到跟踪监控的往往是公司的财务状况。当然财务的好坏是多种因素造成的，不仅是公司战略造成的。对于其他的部门和项目则只能通过简单的数字、报表来监控，而在数字背后，达到数字的工作行为却不能全面了解。这就往往出现企业员工为了达到数字目标而实行背离企业战略的工作行为，就像政府公职人员的职务行为一样，个体的“职务行为”，将被视为他所代表的机构的意志。从监控角度阐述，最为闻名的例子莫过前几年甚嚣尘上的巴林银行倒闭案和安然公司破产案。巴林银行集团是有232年历史的老牌英国银行，在全球拥有雇员1300多人，总资产逾94亿美元，所管理的资产高达460亿美元，许多的英国上室显贵，包括英女王伊丽莎白二世和查尔斯王子都是它的顾客，曾被称为英国的皇家银行。是英国金融市场体系的重要支柱。然而，巴林银行长达两个多世纪的辉煌业绩，却在1995年2月毁于一旦。巴林银行内部监控管理不善，一名交易类职员，既是清算部负责人，又是交易部负责人，一身二职，说明巴林银行内部监控管理极不严谨。同时巴林银行也没有风险控制检验机构对其交易进行审计监控。巴林银行的轰然倒塌说明了企业业务跟踪监控的重要性和必要性。而安然公司则是监控方面的反面例证。我们在本文中不去讨论安然公司转型战略决策的正确与否，只讨论在企业战略决策下达后，安然公司的执行力问题。安然公司存在明显的暗箱作业，安然公司的上层管理者将债务、坏账转移到分支公司。通过严密控制的一种“会计捏造”，达到“安然将财务的责任从账面载体上消除，创造性地做账，防范任何方面的人士（中下层职员、政府部门、股民等）发现他们的外强中干、外荣内枯的真实情况。”不可否认他们拥有“强有力”的监管能力，可是，所贯彻的是完全与安然公司既定战略相违背的方针。公司战略的执行人员不是为实现公司的战略转型而实施严密的控制，而是为了掩盖公司的亏损、黑金等问题而严密控制员工状况和工作行为。这样的跟踪监控不仅背离了一个企业作为市场主体最为基本的诚信原则，而且，也是整个企业上层缺乏执行力的表现。当安然上层做出了由电力能源转向电信科技类企业时，就应当对企业所有部门贯彻自己的转型决策，每一个负有责任的中上层领导者，都应当让自己的部门和下属知道公司的战略目标，为了这个战略目标的实现，不怕犯错，不怕承担责任。当安然公司上层对所面临的商业环境做出假设、对组织的能力进行评估，将战略、运营及实施战略的相关人员进行结合、对这些人员及其所在的部门进行协调的时候，就是摆正了公司、管理人员、员工之间的关系，后来所出现的由上至下的工作行为——假账也就不会出现。因为企业是不断发展的，不同阶段、不同规模的企业所建立的管理体系也存在规模和复杂程度的不同，出现断层、断裂甚至是倾轧都是正常的，也就是说管理体系本身也是动态的、不断发展的，需要企业领导、决策人员、管理人员不断地审视自己的管理体系是否与企业发展规模相匹配，不断地调整企业管理思路并建立相应的模式，企业执行力重要作用之一，就是即使出现转型过程中的阶段性亏损，也能够依据实际情况改变手段，为继续实施策略调整好包括企业文化、员工心态在内的接受能力。在上述的状况下，考验的是企业战略实施人员执行力中的号召力、影响力，或者叫做个人魅力、领导艺术。当企业的上层战略实施人员具有这样的执行力，他在企业战略的实现过程中的作用将可以代替跟踪监视，成为员工个人行为的潜在规范，员工的职务行为会按照领导人员的言行、指令达到自认自发、自信互信的理解和维护企业的战略意图。企业战略成功实施的一个重要因素是必须由有执行力的人去实施战略，如果没有一个能干的战略实施班子，再好的战略也会失败，执行力在企业战略实施的过程中起决定作用。企业的战略对于一个企业的发展与成长有着至关重要的作用，关系到企业的胜败兴衰与生死存亡，所以可以比喻言之，企业犹如一艘航行在大海上的船只，企业的战略就好比是灯塔，它指引着企业前进的方向，在这艘大船驶向目标的过程中，起决定作用的是，船长要拥有领导这艘大船上所有的船员坚定不移地朝着那个正确的方向前进，并且在航行计划时间内最终到达灯塔目标的执行力。

大蒜（Allium sativum L.）为百合科葱属草本植物，别名胡蒜（崔豹《古今注》）、葫（《名医别录》）等，原产中亚，栽培历史悠久。味辛，性温；入脾、胃、肺经；有行滞气、暖脾胃、消癥积、解毒、杀虫之功效。近几年来，随着大蒜的市场需求越来越大，在湖北省当阳、广水等地已经开始大规模种植，并成为当地农业增效、农民增收的支柱产业。但随着种植面积的不断扩大，加上大蒜品种单一，为病害的发生创造了有利条件。2005～2007年在湖北省当阳市大蒜生产基地调查发现，大蒜白斑病发生十分严重，植株发病率在95%以上，均产损失超过2/3，部分田块绝收，严重影响了大蒜的产量与品质。大蒜白斑病主要为害叶片。叶片最初受侵染后，上部出现许多卵圆形或圆形小白斑，部分白斑湿度大时会演变成紫斑，后期叶片变枯黄。2006年4月从湖北省当阳市采集典型大蒜病叶，经分离、鉴定得到大蒜白斑病菌（Stemphylium solani），对其生物学特性进行研究。结果表明，在PSA培养基上，该菌菌丝在5～35℃均可生长，最适生长温度为20～30℃；pH值在4～10均能生长，最适pH值为6～8。在查彼克液体培养基中，病菌能利用多种碳、氮源，其中以淀粉为最佳碳源，谷氨酸为最佳氮源。菌丝的致死温度为55℃，10min。对9种供试杀菌剂采用菌丝生长速率法进行室内药剂筛选，研究表明，40%福星乳油对菌丝生长抑制效果最好，而75%百菌清可湿性粉剂对其抑制效果最差。

SNP （单核苷酸多态性） 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA 序列多态性，包含单个碱基的转换、颠换等。InDel是指插入/缺失 （Insertion/Deletion） 基因组中小片段的插入和缺失序列，个体重测序中特指1～50 bp 的小片段插入和缺失。在生物的进化进程中，生物全基因组水平上积累了大量的微小变异，主要包括SNP 和InDel。这些微小变异的变异程度决定了物种之间在表型和生理结构等方面的差异，为新物种的形成提供了最原始的动力，是物种多样性的本质体现。SNP 标记是基因组DNA序列中分布最广泛的一类标记，植物基因组中平均每数百bp就存在着一个SNP （Huang et al.，2010；Qi et al.，2013）。InDel标记也是一种重要的遗传标记，已被广泛应用于图位克隆、基因定位、动植物遗传多样性的鉴定、分子标记辅助育种等领域（Jander et al.，2002；Schnabel et al.，2005；王岩等，2009；王明军等，2010）。随着高通量测序技术的快速发展，利用全基因组重测序（whole genome re-sequencing，WGR） 技术结合混合分组分析法（bulked segregate analysis，BSA） 可高效检测出通过双亲杂交建立的后代群体中导致表型变异的 QTL和突变位点 （Abe et al.，2012；Takagi et al.，2013），并且可以识别大量的 SNP 和 InDel 位点，从而进行SNP 及InDel标记的开发，获得基因区间的SNP 及InDel标记。本研究利用WGR技术及 BSA法相结合，获取与抗炭疽菌叶枯病基因相关的SNP 和InDel位点，并通过对△ （SNP-index） 图谱分析，快速锁定抗病区域，再通过ANNOVAR软件分析，提取注释信息，筛选出候选的抗病基因。并利用实时荧光定量 PCR （qRT-PCR） 技术对候选基因经过炭疽叶枯病病原菌侵染后的不同时间段基因表达量的变化进行分析，寻找响应炭疽叶枯病病原菌侵染的抗病相关基因并对其进行详细的功能分析，以期揭示苹果抗炭疽菌叶枯病的分子机制。用于全基因组重测序的材料为 ‘金冠’ ‘富士’ 及第三章中经过抗病鉴定的 ‘金冠’ב富士’ 的 F1 代群体中极端抗炭疽菌叶枯病的20个单株和极端感炭疽菌叶枯病的20 个单株。取其嫩叶3～5 片，液氮速冻，置于-70℃冰箱保存，用于提取DNA。用于qRT-PCR 分析的材料为 ‘富士’ 和 ‘金冠’ 带嫩叶的一年生健壮新梢各30 枝，用于室内人工离体接种。接种方法同第二章，分别于接种后0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h七个时间点采集叶片，液氮速冻后，用于提取RNA，检测基因表达。参考Doyle和Doyle （1987） 及 Cullings （1992） 提取基因组DNA的CTAB法，并加以改进，详见第三章。利用1%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的纯度和完整性。条带单一、清晰明亮、无降解、无污染的DNA样品作为合格样品用于后续研究。运用NanoPhotometer ? 分光光度计 （IMPLEN，CA，USA） 对DNA的纯度进行检测。DNA经过 Qubit ? DNA Assay Kit in Qubit ? 2.0 Flu-rometer （Life Technologies，CA，USA） 进行浓度的精确定量。将DNA浓度调整为100 ng/μl。苹果嫩叶总RNA的提取方法如下。（1） 将500 μl裂解液RLT Buffer、50 μl PLANTaid、5 μl β-巯基乙醇，依次加入灭菌的1.5 ml离心管中，混匀，待用。（2） 将冻存于-70℃下的苹果嫩叶0.2 g置于预冷的研钵中，加少量液氮快速研磨成细粉状后转入上述待用的的离心管内 （样品容易褐化，动作要迅速，并保证液氮挥发完全）。（3） 56℃温育5～10 min，期间不断剧烈震荡混匀，以保证充分裂解。（4） 12000 r/min 离心10 min，将离心管缓慢从离心机中取出，将上清液转到新离心管中 （吸取上清液时一定要缓慢，尽量不要吸到底部沉淀）。（5） 较精确估计上清液体积，加入 0.5 倍体积的无水乙醇，盖盖，上下颠倒混匀，此时可能会出现沉淀，但是不影响提取的过程。（6） 将混合物 （每次上样应小于800 μl，可分两次加入） 加入吸附柱中，12000 r/min离心60 s，弃废液。（7） 在吸附柱中加700 μl去蛋白液 RW1，室温下放置5 min （可稍延长时间，去除吸附柱上的蛋白污染），12000 r/min 离心30 s，弃废液。（8） 在吸附柱中加入 500 μl 漂洗液 RW （加过无水乙醇），12000 r/min离心 30 s，弃废液。再加入 500 μl 漂洗液 RW，重复1遍。（9） 将吸附柱放回空收集管中，12000 r/min空离心2 min，尽量除去吸附柱中残留的漂洗液。（10） 将吸附柱放入一个 RNase free 离心管中，在吸附膜上加40 μl RNase-free water （最好事先在 70～90℃中水浴加热），室温放置2 min，12000 r/min 离心1 min，如需RNA浓度较高，可重复离心1次。（11） 取4 μl RNA加入6×RNA Loading Buffer，用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA提取的质量与纯度，并估测提取浓度。（12） 将检测质量好的RNA放入-70℃下保存备用。参照 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser （Perfect Real Time） 试剂盒 （TaKaRa）。具体操作步骤如下 （全程冰上操作）。（1） 基因组 DNA 的去除。在 0.2 ml 灭菌的离心管中依次加入1 μg 总 RNA，2 μl 5×gDNA Eraser Buffer，1 μl gDNA Eraser，用RNase-Free水补足10 μl，42℃，2 min （或者室温5 min）；4℃。（2） 反转录反应。在0.2 ml灭菌的离心管中依次加入10 μl步骤1的反应液，1 μl PrimerScript RT Enzyme Mix I，1 μl RT Primer Mix，4 μl 5×PrimerScript Buffer 2 （for Real Time），用 RNase Free 水补足20 μl。37℃，15 min；85℃，5 s；4℃。（3） 质量检测。用 β-actin 基因的引物对反转录的 cDNA 进行PCR扩增，并用1%的琼脂糖电泳检测，选取质量好的样品在-20℃下保存备用。将 ‘金冠’ב富士’ 的F1 代群体中选取出的 20 个极端抗病的单株和20个极端感病的单株DNA等量混合构建成两个表型池。检验合格的4 份 DNA 样品每份取1.5 μg进行基因文库的构建。通过Covaris破碎机将DNA样品随机打断成长度为350 bp的片段。采用TruSeq Library Construction Kit 进行建库，严格使用说明书推荐的试剂和耗材。DNA 片段经末端修复、加 ployA 尾、加测序接头、纯化、PCR扩增等步骤完成整个文库制备。构建好的文库通过 illumina HiSeqTM PE150进行测序 （附图4-1）。文库构建完成后，先使用 Qubit 2.0 进行初步定量，稀释文库至1 ng/μl，随后使用Agilent 2100对文库的插入片段 （insert size） 进行检测，符合预期后，使用Q-PCR 方法对文库的有效浓度进行准确定量 （文库有效浓度＞2 nM），以保证文库质量。4个文库检验合格后，把不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求pooling后进行 Illumina HiSeq TM PE 150 测序。围绕350 bp的片段进行双末端 125 bp 测序。表型差异的两个亲本测序深度为10 X，抗感池测序深度为20 X。信息分析的主要步骤如下 （附图4-2）。步骤一：对下机得到的原始测序数据 （Raw data） 进行质控得到有效测序数据 （Clean data）。步骤二：将Clean data比对到参考基因组上。步骤三：根据比对结果，进行 SNP、InDel 的检测，分析 SNP、InDel的分布情况并进行注释。步骤四：对子代SNP 频率差异进行分析。步骤五：根据分析结果对目标性状区域进行定位。步骤六：确定候选基因。测序得到的原始测序序列 （Sequenced Reads或者 raw reads），里面含有带接头的、低质量的 reads。为了保证信息分析质量，必须对raw reads过滤，得到有效测序序列 （clean reads），后续分析都基于clean reads。数据处理的步骤如下。一是去除带接头 （adapter） 的reads pair。二是当单端测序read中含有的N的含量超过该条read长度比例的10%时，需要去除此对paired reads。三是当单端测序read中含有的低质量 （Q≤5） 碱基数超过该条read长度比例的 50%时，需要去除此对paired reads。有效测序数据通过 BWA （http：//bio-bwa.sourceforge.net/） 软件 （Li and Durbin，2009） 与 ‘金冠’ 苹果的基因组 （ https：//www.rosaceae.org/data/download） 进行比对，确定reads在基因组上的位置。比对结果使用 SAMTOOLS （ http：//samtools.sourceforge.net/）软件进行SNP-calling （Li and Durbin，2009），发掘 reads 与参考序列以及 reads 之间的 SNP 位点，利用 SAMtools 软件中的 “rmdup” 指令去除序列文件中的重复。人们采用GATK3.3软件 （McKenna et al.，2010） 的UnifiedGeno-typer模块进行多个样本 SNP 和 InDel的检测，使用 VariantFiltration进行过滤，SNP 的过滤参数为：cluster Window Size 4，filter Expression“QD＜4.0 ‖ FS＞60.0 ‖ MQ＜40.0”，G filter “GQ＜20”。InDel的过滤参数为：cluster Window Size 4，filter Expression “QD＜4.0 ‖ FS＞200.0 ‖ ReadPosRankSum＜-20.0 ‖ InbreedingCoeff＜-0.8”。利用ANNOVAR软件 （Wang et al.，2010） 对 SNP 和 InDel 检测结果进行注释。SNP 频率的统计：SNP 频率是指所检测到的总的SNP 数与参考基因组序列的总长度的比值，是衡量一个物种变异程度和多态性的指标。转换颠换率的统计：分别统计发生转换和颠换的SNP 数目。子代 SNP 的频率 （Takagi et al.，2013），即 SNP-index，是与SNP 位点的测序深度相关的参数，是指某个位点含有 SNP 的 reads数与测到该位点的总 reads数的比值。以参考基因组作为参照，分析计算两个子代在每个 SNP 位点的 SNP-index。SNP-index计算方法如附图4-3所示。若该参数为0，则代表所有测到的reads都来自作为参考基因组的亲本，即 ‘金冠’。参数为1则代表所有的reads都来自另一个亲本，即 ‘富士’。参数为0.5，代表此混池中的 SNP 来自两个亲本的频率一致。为减少测序错误和比对错误造成的影响，对计算出 SNP-index后的亲本多态性位点进行过滤，过滤标准如下。（1） 两个子代中 SNP-index 都小于0.3，并且 SNP 深度都小于7的位点，过滤掉。（2） 一个子代SNP-index缺失的位点，过滤掉。计算△ （SNP-index），即两个子代 SNP-index 作差：△ （SNP-index）=SNP-index2 （极端抗病性状）-SNP-index1 （极端感病性状）。为直观反映△ （SNP-index） 在染色体上的分布情况，对其在染色体上的分布进行作图。默认选择1 Mb 为窗口，1 kb 为步长。进行1000次置换检验，选取95%置信水平作为筛选的阈值。为了不忽略掉微效QTL的影响，在全基因组范围内挑选两个子代在SNP-index差异显著的SNP 位点，即挑选子代2 （极端抗病性状） SNP-index大于0.7，且子代1 （极端感病性状） SNP-index小于0.3的位点，并与亲本 ‘富士’ 为纯合及亲本 ‘金冠’ 为杂合的位点取交集，做为候选的基因位点。提取ANNOVAR的注释结果，优先挑选使基因获得终止密码子的变异 （stop loss） 或者使基因失去终止密码子的变异 （stop gain） 或者非同义突变 （missense） 或可变剪接的位点（Splicing） 所在的基因作为候选基因。从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus_x_domestica/下载候选基因的 mRNA，从基因编码区核苷酸序列的近3’端位置设计引物，PCR产物长度在150～250 bp，引物序列见表4-1，内参基因为β-actin基因。荧光定量 PCR 在罗氏 LightCycler 480 系统上进行，反应体系配制按 SYBR Green PCR Master Mix 说明书进行操作，具体如下：10.0 μl SYBR Premix Ex Taq Ⅱ （2×），0.8 μl正反向引物，2.0 μl cDNA，去离子水补足20 μl。反应程序为95℃ 预变性5 min，95℃ 10 s变性，55℃ 10 s退火，72℃ 10 s延伸，扩增45 个循环。循环结束后进行熔解曲线分析：95℃ 15 s，60℃ 20 s，然后缓慢升温至95℃。基因的相对表达量用公式：F=2-ΔΔCt，ΔΔCt=（待测组目的基因 Ct值-待测组内参基因 Ct值）-（对照组目的基因 Ct值-对照组内参基因Ct值）。Illumina HiSeqTM PE150 测序平台，四个样本共产生 47.115 G的测序原始数据 （Raw data），通过对原始数据中的接头序列，低质量碱基以及未测出的碱基 （用 N 表示） 进行过滤后，得到有效数据 （Clean data） 46.974 G，各样本的 Raw data 在 7774.247～17017.174 Mb，Clean date 在7751.990～16969.215 Mb，过滤后获得的有效数据比率在99.64%～99.72%，碱基错配率低于0.05%。测序质量 Q20 ≥ 95.08%、Q30 ≥ 88.97%，GC 含量在 39.04%～39.16%。这表明所有样本的数据量充足，测序质量很高，GC 分布正常，建库测序成功，保证了后续数据分析的准确性 （表4-1）。样本原始数据/bp有效数据/bp有效率/%错误率/%Q20/%Q30/%GC含量/%富士7774246500775199010099.710.0395.4389.6339.16金冠7900566600787192650099.640.0395.5589.8839.05BR（基因抗池）170171739001696921590099.720.0395.4489.6239.04BS（基因感池）144234894001438116750099.710.0495.0888.9739.15表4-1 测序数据质量概况将四个样品的有效数据与已经发布的金冠苹果参考基因组序列（https：//www.rosaceae.org/data） 进行比对，计算出比对到参考基因组 （参考基因组大小为609314018 bp） 上的 reads条数、测序深度及碱基覆盖率。结果表明，四个样品的比对率均在87%以上，两个亲本的测序深度达到15×以上，抗感池样品的测序深度达到 30×以上。在参考基因组中至少有1个碱基覆盖的位点占基因组的比例达到95%以上，至少有 4 个碱基覆盖的位点占基因组的比例 “富士” 为88.3%，“金冠” 为91.26%，其他两样品达到96%以上。这进一步的说明，本试验测序的数据质量很高，可用于后续的变异检测及相关分析 （表4-2）。样本比对到reference上的reads条数①有效测序数据的reads总条数比对率/%②平均测序深度/x③参考基因组中至少有1个碱基覆盖的位点占基因组的百分比/%参考基因组至少有4个碱基覆盖的位点占基因组的百分比/%富士455966535167993488.2315.9595.9588.3金冠459536665247951087.5615.6798.0991.26BR（基因抗池）10045340711312810688.834.4298.896.67BS（基因感池）8962925610163794888.1830.8898.7896.44表4-2 测序深度及覆盖度统计通过全基因组重测序技术共获得3399950个 SNP 位点，苹果参考基因组总长度为 609314018 bp，据此计算出 SNP 出现的频率为3399950/609314018=0.56%。转换 （T/C、C/T） 和颠换 （T/G、T/A、C/A、C/G） 发生频率 （附图 4-4） 的统计结果显示，T/C 和C/T转换发生的频率分别为 32.5%和 34.1%，T/G、T/A、C/A和C/G颠换发生的频率分别为 9.2%、9.4%、9.4%、5.4%。转换/颠换率为2.0。利用测序获得的有效数据，比对苹果参考基因组序列，经 ANN-OVAR软件分析共得到 SNP 位点 3399950个，InDel 位点 573040个，SNP 位点位于内含子上的465317个，位于外显子上的436309个，其中同义变异 210404个，非同义变异 220539个，InDel 位点位于内含子上的 108996个，位于外显子上的 19957个，其中插入或缺失3 或 3 的整数倍的碱基，不改变蛋白质的编码框的有 6928个。这表明绝大部分变异位于非编码区，或不会导致基因编码的改变，这有利于维持植物体正常的生长发育，保证品种特性的稳定遗传 （表4-3）。类别SNP数量基因上游184156获得终止密码子4837失去终止密码子529外显子同义变异210404非同义变220539内含子465317剪接位点2196基因下游177312基因上游/基因下游12750基因间区2105122转换2265734颠换1134216转换/颠换/%1.997合计3399950表4-3 SNP及InDel检测及注释类别InDel数量基因上游51816获得终止密码子376失去终止密码子68Frameshiftdeletion①7330外显子Frameshiftinsertion5255Non-frameshiftdeletion②3843Non-frameshiftinsertion3085内含子108996剪接位点598基因下游44305基因上游/基因下游3896基因间区342800插入262868缺失310172合计573040表4-3 SNP及InDel检测及注释（续）-1△ （SNP-index）=SNP-index B （极端抗病性状）-SNP-index A （极端感病性状）。进行1000次置换检验，选取95%置信水平作为筛选的阈值。一般情况下，在苹果 F1 群体中，由于每个位点的碱基均来源于双亲中的一个，所以在基因组中大部分区域的 SNP-index都在0.5附近。如果某个SNP 位点与抗性相关，那么在该处的 SNP-index就会显著偏离0.5，△ （SNP-index） 就会显著大于此处的阈值。从抗感池中△SNP-index值在染色体上的分布可以看出，在第15 条染色体2～5 Mb区间内△SNP-index值显著的大于阈值，预示着该区域内可能存在着与抗炭疽菌叶枯病基因相关的位点 （附图4-5）。这与第三章SSR标记所确定的抗性基因所在的区域吻合。在全基因组范围内挑选在两个子代池中 SNP-index 差异显著的SNP 位点，即挑选在抗池中 SNP-index 大于 0.7，在感池中 SNP-index小于0.3，△ （SNP-index） 大于 0.5 的 SNP 位点，并与亲本‘富士’ 为纯合，亲本 ‘金冠’ 为杂合的位点取交集，共得到258 个候选的多态性标记位点 （表4-4）。这258 个 SNP 位点中位于基因上游1 kb的19个，基因下游1 kb 的12 个，位于基因上游1 kb 区域，同时也在另一基因的下游1 kb区域的2 个，位于基因间区的173 个。位于外显子上非同义变异的13 个，同义变异7 个，位于内含子上的31个。其中位于第15条染色体上的有123 个，占整个候选 SNP 位点的47.7%。类别SNP数量基因上游19获得终止密码子0失去终止密码子0外显子同义变异7非同义变13内含子31剪接位点1基因下游12基因上游/基因下游2基因间区173转换161颠换97转换/颠换/%1.659合计258表4-4 候选多态性标记位点的注释提取ANNOVAR的注释结果，优先挑选能引起基因获得终止密码子、失去终止密码子的变异，或者非同义突变，或者可变剪接的位点所在的基因作为候选基因。经筛选后得到33 个 SNP 位点及所对应的29个候选基因 （表4-5）。这些SNP 位点中发生转换的 （G/A、C/T、T/C、A/G） 共 16 个，占 48.5%，发生颠换的 （G/C、C/G、G/T、A/C、A/T、T/G、T/A、C/A） 共17 个占51.5%，其中有21 个位于第15条染色体上。基因ID类型染色体SNP位点参考基因组碱基型Ref突变碱基型AltMDP0000294705nonsynonymous24029182TCMDP0000311597upstream26560007TCMDP0000335197upstream238255166CTMDP0000481284nonsynonymous511687941TCMDP0000266783nonsynonymous516570950ACMDP0000223383upstream814935907CTMDP0000203531upstream918259400TGMDP0000265695upstream919790733GAMDP0000224187nonsynonymous1034991229ATMDP0000226279upstream1123158805AGMDP0000480608upstream123704417TGMDP0000504610upstream1229472316TCMDP0000292279upstream151396770CTMDP0000686092nonsynonymous153955717AGMDP0000686092nonsynonymous153955724AGMDP0000686092nonsynonymous153955738TAMDP0000205432nonsynonymous154094431TAMDP0000120033upstream154236293AGMDP0000864010nonsynonymous154257246GAMDP0000945764nonsynonymous154336468CAMDP0000149107splicing154970310CTMDP0000609131upstream156771435CAMDP0000169753upstream157074724ACMDP0000296372upstream157704309CT表4-5 候选基因ID基因ID类型染色体SNP位点参考基因组碱基型Ref突变碱基型AltMDP0000199827upstream157710714TAMDP0000194508nonsynonymous157757532GAMDP0000320004upstream158084422ATMDP0000320004upstream158084636TCMDP0000320004upstream158084637ACMDP0000148808upstream158365795GTMDP0000133266upstream1533862275AGMDP0000157213nonsynonymous1549031042CGMDP0000169687nonsynonymous1552444208TC表4-5 候选基因ID（续）-1结合 SSR标记定位及全基因组重测序中对△ （SNP-index） 值分析的结果，从这29 个候选基因中筛选出位于第15 条染色体3.9～4.9 Mb距离内的5个基因 MDP0000686092、 MDP0000205432、MDP0000120033、 MDP0000864010、 MDP0000945764 做为抗炭疽菌叶枯病的最终候选基因。通过对5个候选基因进行 GO 功能富集分析发现，5 个候选基因中有3个功能未知。基因 MDP0000120033 具有核酸绑定功能，锌离子结合分子功能，参与 RNA 剪切生物过程，调节基因产物的表达。蛋白结构上具有CCHC型结构域的锌指结构，是丝氨酸精氨酸富集剪接因子。进一步同源比对该基因为 SR基因家族 RSZ亚家族基因，与拟南芥AtRSZ21蛋白的序列一致性达到60%，与花生AdRSZ21蛋白的序列一致性达到79%。基因 MDP0000864010 具有辅酶绑定功能，蛋白结构上具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 （磷酸盐） NAD （P） 绑定区域，属于NAD依赖差向异构酶/脱氢酶家族，进一步的同源性比对，该蛋白与鼠李糖生物合成酶 1 （rhamnose biosynthetic enzyme 1，RHM1） 有较高同源性 （表 4-6）。候选基因编码的氨基酸序列见附录五。基因ID基因功能注释MDP0000686092功能未知蛋白MDP0000205432功能未知蛋白质。MDP0000120033核酸绑定功能，锌离子结合分子功能，参与RNA剪切生物过程，调节基因产物的表达。具有锌指结构，CCHC型结构域，丝氨酸精氨酸富集剪接因子。MDP0000864010辅酶绑定功能，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸盐）NAD（P）绑定区域，NAD依赖差向异构酶/脱氢酶家族，可能与鼠李糖生物合成酶1有关。MDP0000945764功能未知蛋白表4-6 抗炭疽菌叶枯病候选基因的功能注释利用TMHMM2.0软件对候选基因进行跨膜结构分析，基因MDP0000686092和MDP0000120033具有跨膜结构。基因MDP0000686092具有1个跨膜区，基因MDP0000120033具有3个跨膜区，位置分别在153～172、187～209、214～236的区域内（附图4-6）。引物名称引物序列MDP0000686092基因荧光定量PCR引物P1-FP1-RF：5′-CAGGCTGGAGCGAAGTTTA-3′R：5′-CCTTTCTGTGATGGCATTGTT-3′MDP0000205432基因荧光定量PCR引物P2-FP2-RF：5′-GAAAAGCCAGCACCAGAAAC-3′R：5′-CGTATTCGTGGGGTTATAGAGC-3′MDP0000120033基因荧光定量PCR引物P3-FP3-RF：5′-TCTGGGAATGCTGCTAAAACTC-3′R：5′-GCAGGGCAGTAGTGAAGCAC-3′MDP0000864010基因荧光定量PCR引物P4-FP4-RF：5′-CGTGACCAATCGCCTAATA-3′R：5′-GGACGTGAGTGCCGTAGAC-3表4-7 荧光定量PCR引物引物名称引物序列MDP0000945764基因荧光定量PCR引物P5-FP5-RF：5′-TTTGCCAGCCTGTCAGAAGT-3′R：5′-AGTTGTAGAGGGAGGAGGAAGA-3′β-actin基因荧光定量PCR引物P6-FP6-RF：5′-CACTGCTTCTATGACTGGTTTTGA-3′R：5′-CTGGCATATACTCTGGAGGCTT-3′表4-7 荧光定量PCR引物（续）-1对接种炭疽菌叶枯病病菌后 0 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h的 ‘富士’ 和 ‘金冠’ 枝条进行采样，提取 RNA，反转录成cDNA后，对5个候选基因的表达进行实时荧光定量分析。结果显示，5个基因均不同程度响应病原菌侵染 （附图4-7、 表4-7）。除了基因MDP0000864010在 ‘富士’ 叶片中的表达量表现为下调外，其余 4个基因均为上调表达。在 ‘富士’ 叶片中，基因 MDP0000205432、MDP0000120033和MDP0000945764 的表达量在接种后 24 h 均达到最高值，48 h降到最低值，然后又缓慢提高。在 ‘金冠’ 叶片中的表现不同于 ‘富士’，三个基因表达量的最高值出现在36 h，但最低值同样出现在48 h，这说明在这3个基因在抗病植株中对病原菌的应答要早于感病植株。尽管基因 MDP0000686092 和 MDP0000945764 在‘富士’ 和 ‘金冠’ 叶片中也均表现为上调表达，但是在 ‘金冠’ 叶片中的表达变化更为显著，基因 MDP0000945764 在 ‘金冠’ 叶片中的表达量达到最高值时为接种前的60 倍，而在 ‘富士’ 中的提高量为接种前的10倍。以上结果说明，5个候选基因均受炭疽菌叶枯病病菌的诱导，是苹果炭疽菌叶枯病抗病相关基因。SNP 标记的开发主要依赖于含有大量测序序列的数据库。通过全基因组测序，不仅可以获得大量的 SNP 标记，还可以了解到 SNP 标记在整个基因组中的分布情况，有利于我们进一步了解不同物种的生物学特性，以及利用标记进行不同需求的生物学研究。在葡萄的基因组测序中发现，SNP 位点的密度高达7%（Jaillon et al.，2007）；2010发表的金冠苹果全基因组序列中，SNP 标记的频率约为 4.4 kD/SM，即227 bp/SNP （Velasco et al.，2010）；梨的全基因组序列中共检测到3402159个 SNP 位点，约占基因组序列的 1.02%（Wu et al.，2013）；柑橘中得到的 SNP 位点数量为106 万个 （Xu et al.，2013）。对于有参基因组，通过全基因组重测序手段进行大量 SNP 标记开发，也是研究不同品种间差异的有效途径之一。通过对6 个玉米自交系的进行全基因组重测序，在非重复序列区域内共获得了 1272134个SNP 标记 （Lai et al.，2010）；对葡萄的230个基因片段重测序，数据统计结果显示，每64 个碱基中就存在着一个 SNP 位点 （Lijavetzky et al.，2007）；在水稻中，水稻籼稻恢复系 7302R 通过全基因组重测序，检测到307627个SNP 位点，其中有30239个位于mRNA序列中（Li et al.，2012b）；通过对苹果品种 ‘金冠’ 和 ‘红玉’ 进行全基因组重测序，在 ‘金冠’ 中得到了 2222816个 SNP 位点，在 ‘红玉’中得到了 4950346 个 SNP 位点，密度分别为 293 bp/SNP 和210 bp/SNP （孙瑞，2015）。SNP 变异从理论上来看主要包括转换、缺失、颠换和插入四种形式，但实际上发生的只有两种，即转换和颠换，二者之比为2∶1。并且SNP 在CG序列上出现的最为频繁，而且多是 C 转换为 T，主要原因为CG中的胞嘧啶常被甲基化，而后自发脱氨基形成胸腺嘧啶 T （Johnson and Told，2000；Mullikin et al.，2000）。从本实验中对 SNP转换/颠换频率统计结果来看，转换/颠换比为2.0，发生转换的频率为66.6%，发生颠换的频率为 33.4%，C/T 转换发生的频率最高为34.1%。这与前人研究的结论相符。通过重测序技术可以获得海量SNP 标记，利用这些标记构建高密度遗传连锁图谱为不同群体的进化分析，不同性状基因的遗传定位，分子标记辅助育种等提供有效信息。‘M.27’בM.116’ 的高密度遗传图谱是由306个SSR标记和2272个 SNP 标记组成，图谱密度达到了每 0.5 cM 一个标记 （Antanaviciute et al.，2012）。Khan 等（2012） 利用2875个分子标记构建了苹果的整合遗传图谱，其中包含了2033个 SNP 标记和 843 个 SSR 标记，总长为 1991.38 cM。Clark等 （2014） 利用3个不同的F1 杂交群体和SNP 芯片分型技术构建了包含1091个 SNP 标记的苹果品种 ‘Honeycrisp’ 的整合遗传图谱，标记间的平均距离为1.36 cM。基于高通量基因组重测序技术能够更加准确、全面的对测序物种进行全基因组水平上的位点进行评估，可以精确的完成单核苷酸多态性位点的检测，分子标记的开发，遗传图谱的构建，不同群体间的进化分析，与表型变异相关基因的挖掘以及快速定位等等。本研究通过运用全基因组重测序的方法对有着明显抗感性状分离的 ‘金冠’ 和 ‘富士’ 及其由 F1 代极端表型个体组成的抗感池进行全基因组范围内的遗传变异检测，共筛选得到 SNP位点3399950个，InDel位点573040个。通过对△SNP-index图谱的分析发现，在第15条染色体的2～5 Mb的区间内，△SNP-index显著的大于阈值，存在着明显的连锁不平衡，意味着该区域可能存在着抗炭疽菌叶枯病基因位点。这一结果与SSR标记所定位的抗炭疽菌叶枯病基因位点位置相吻合。SNP 广泛分布于基因组DNA中，且数量巨大。因为任何碱基均有可能发生变异，因此SNP 既有可能出现在基因的编码区，也有可能在基因的非编码区，或者两个基因之间的序列上。总的来说，位于基因内编码区的SNP 比较少，且该部分的 SNP 有可能会直接影响产物蛋白质的结构或基因表达水平，因此位于编码区 SNP 的研究更受关注。本试验对可能引起基因获得终止密码子、失去终止密码子、非同义突变、可变剪接的变异位点进行重点筛选，将其所在的基因作为候选基因。通过筛选共得到33个候选SNP 位点和29个候选基因。结合第三章SSR标记对炭疽叶枯病抗性基因的定位，最终锁定了 5 个候选基因： MDP0000686092、 MDP0000205432、 MDP0000120033、 MDP0000864010、MDP0000945764。锌指结构是一类在很多蛋白中存在的具有指状结构的模体，是具有识别特定碱基序列的一种转录因子结构。锌指的典型功能是作为互作的组件与核酸、蛋白质和小分子等多种物质相结合，参与多种细胞过程，如DNA的复制与修复、RNA 转录与翻译、物质代谢与信号转导、细胞的增殖与凋亡等 （Krishna et al，2003）。可变剪切 （Alternative splicing，AS） 是重要的转录后调控机制，在动物中对其在不同的生理以及病程条件下的可变剪切的调控作用研究的较多 （Garcia-Blanco et al.，2004；Nilsen and Graveley，2010）。据报道在拟南芥中超过 42%的外显子基因存在可变剪切现象（Filichkin et al.，2010）。在植物可变剪切数据库中有很大比例的 AS参与逆境响应基因的表达，这进一步强调了可变剪切在逆境响应中的重要作用 （Wang and Brendel，2006；Duque，2011）。在生物胁迫中，有许多试验证明AS参与植物的抵抗和防御机制。例如，在一些 R 基因中如番茄的N 基因，拟南芥的SNC1、 RPS4基因，发现可变剪切的存在 （Dinesh-Kumar and Baker，2000；Zhang and Gassmann，2003）。SR蛋白，丝氨酸/精氨酸富集剪切蛋白 （serine/arginine-rich proteins，SR protein） 是RNA绑定蛋白家族中功能和结构高度保守的一类因子，参与可变剪切过程。例如， AtSR30在高盐碱以及过氧逆境中被上调表达 （Tanabe et al.，2007）。SR在不同的环境条件下的表达量的差异说明了SR蛋白在逆境响应中的调控作用。基因MDP0000120033具有核酸绑定，锌离子结合分子功能，参与 RNA 剪切生物过程，调节基因产物的表达。具有CCHC型锌指结构和丝氨酸/精氨酸富集剪接因子，属于SR 基因家族 RSZ 亚家族基因。丝裂原活化蛋白激酶 MPK6 和MPK3在植物的防御反应中起着重要作用，而拟南芥基因 AtRSZ21 在体外试验中被发现能够被MPK6/MPK3磷酸化 （Feilner et al.，2005），这就意味着 AtRSZ21 也可能参与了植物的防御应答。Kumar 和 Kirti （2012） 报道了花生的一个属于 SR 亚家族基因 RSZ 蛋白基因AdRSZ21，在植物的超敏反应和抗逆反应中起着重要的作用。NAD依赖差向异构酶/脱氢酶家族是真菌病原体镰刀菌致病机制中的一个关键酶 （Srivastava et al.，2014）。细胞壁是植物细胞进行正常的生命活动不可缺少的重要组成部分。其不但在维持细胞形态、细胞间黏结、细胞壁的强度和调控细胞伸长等方面起着重要的作用，还参与了细胞的分化、抗病、细胞识别及信号传导等一系列生理、生化过程。细胞壁主要成分包含纤维素、半纤维素、果胶和少量的结构蛋白等。基因MDP0000864010属于依赖差向异构酶/脱氢酶家族，并且与鼠李糖合成酶Ⅰ （ RHMⅠ） 有较高的同源性。可能参与合成鼠李糖，而鼠李糖是细胞壁果胶多聚糖的重要组分之一。所以该候选基因有可能在细胞的组成层面增加个体的抗性。基因的相对表达量分析也表明，五个基因都不同程度的响应了病菌的诱导，是与抗炭疽菌叶枯病相关的候选基因。但是其参与抗病的机理和途径仍不清楚，深入的研究将继续展开。

柑橘缺氮症状常发生在营养生长旺盛的夏季和果实采收后的寒冬，尤以土壤贫瘠的橘园更突出。植株表现为:新梢抽生短，枝叶稀少而纤细，叶薄而黄化，全株外观呈淡黄绿色；开花少，挂果少，易落果；当氮的生长供求由正常转缺乏时，部分叶片会出现不规则的黄绿色相嵌的杂斑，最后叶变黄凋落；严重时出现秃冠，树势衰退速度加快，乃至濒死。当结果枝叶片的含氮量低于2%时，可视为缺氮。柑橘缺镁症状主要发生在老叶上。晚夏和秋季果实成熟时较常见，尤其是挂果多的老年树，其结果母枝上的老叶发病更普遍。缺镁症状的初期特征为叶缘两侧的中部出现不规则的黄色条斑，以后病斑不断扩大，在中脉两侧连成不规则的黄色带条，最后仅主脉及基部保持三角形的绿色区。严重缺镁时，叶片全部黄化，在植株上保留相当长的时间后至冬季大量落叶，形成枯枝。健康叶含镁量为0.13%～0.23%,病叶含镁量为0.1%以下。当其含量为0.15%以下时，为缺镁的临界值。图5-1 柑橘缺氮图5-2 柑橘缺镁柑橘缺钾症状，是沙质土橘园的一种常见现象。此类土或有机质少的土壤，雨水冲淋后造成钾素大量流失，或其含量低的土壤因施氨态氮过多而阻止了根系的正常吸收，都会导致钾缺乏症。缺钾症状表现为:先在老叶叶尖和上部叶缘开始发黄，随着缺钾的加剧，黄化区域向叶中部扩展，严重时直达基部。重病树叶卷缩畸形，新梢抽长弱短，根系生长也差，果实发育不良，个体小而皮薄，味淡而酸。当柑橘叶片中钾的含量低于0.3%时被认作缺钾，0.9%以下则表示钾素已不足植株所需。图5-3 柑橘缺钾碳酸钙或其他碳酸盐含量过高的碱性土壤，铁元素被固定，容易出现缺铁。柑橘缺铁现象一般不常见，其最大特点是叶片失绿黄化，与严重氮缺乏症状相似，但程度强得多。本病症状特征为:多从幼枝新叶开始发病，叶脉保持绿色而脉间组织发黄，后期黄叶上呈现明显的绿色网纹。严重者，除主脉近叶柄部绿色外，其余部分褪绿呈黄白色，叶面失去光泽，叶缘褐裂，提前脱落留下光秃枝。但此时，同树的老叶仍保持绿色，形成黄绿相映的鲜明对照。分析测定病叶组织中全铁含量是难以得出正确结论的，因为所含铁多数由于沉积而失效。同样，测定土壤中全铁和游离态铁也不能了解土壤供铁能力。但测定土壤中CaCO3的含量和pH值，是可以了解土壤供铁情况的，因为土壤中有效铁含量与叶组织中活性铁含量有很好的相关性。0～20厘米土层，r=0.9521;20～40厘米土层，r=0.8841。两者相关分析表明，正常叶片活性铁含量在40毫克/千克以上，而患病叶片中铁含量则明显低于此数值。图5-4 柑橘缺铁锰是柑橘树体内多种酶的活化剂或组分，起着十分重要的生理作用。碱性土可使锰变得不易溶解，而酸性土壤中pH值>6.3时，有效态的Mn2+就会变成不溶性的Mn4+，根系不易吸收。此外，酸性土和沙质土都易使还原性二价锰流失。缺锰症状初期与缺锌症状相似，且缺铁症状又常隐症于缺锰症状，所以柑橘缺锰常伴随前两种缺素症的发生，使人不易识别或误作缺锌。此病的症状表现为:轻度缺锰时，叶片中脉和侧脉附近的叶肉现黄绿色区域，严重时黄色斑不断扩大。冬季病叶易脱落，产量和果品质量下降。本病与缺锌症状的区别在于叶片大小、叶形和果实大小不改变，失绿区的黄白化程度不如缺锌症状突出。当病叶中全锰的含量低于20毫克/千克时，被视作缺锰的临界值。新梢叶出现水渍状斑点，叶片变形，叶脉发黄增粗，叶片向后弯曲，叶背有黄色水渍状斑点，老叶失去光泽，严重的主、侧脉木栓化破裂，叶片易脱落。幼果在缺硼初期出现乳白色微凸小斑，严重时出现下陷的黑斑，引起大量落果。残留的果实小。图5-5 柑橘缺锰图5-6 柑橘缺硼土壤中缺氮或施入的有机肥量不足引起缺氮。一是柑橘对镁的需要量较其他微量元素多，在酸性土(pH值=5)和沙质土中镁素易流失，容易发生缺镁症。二是钾肥、磷肥施用过多，可引起缺镁症。三是果实内核多的品种较少核或无核品种易发生缺镁症。土壤中钾元素供给不足，或基肥施用量不够。一是盐碱地或含钙较多的土壤中铁的含量虽然很高，但大量可溶性的二价铁被转化为不溶的三价铁盐，不能为柑橘吸收利用，因此易发病。尤其遇干旱条件，水分蒸发量大，土壤含盐量增高，致黄叶病加重。二是地下水位高的低洼盐碱地、土壤黏重、排水不良且又经常浇水的果园易发病。三是缺铁常与砧木耐盐性有关，如枸头橙作砧木与温州蜜柑嫁接，不易发病，用枳壳作砧木的则发病重。酸性或碱性土壤易导致缺锰。酸性土壤中锰易流失，碱性土壤锰易变为不溶解态。土壤中硼不够用所致。冬季根据树龄大小、当年结果多少而施足不同量的底肥。当生长期新叶缺氮发黄时，叶面喷施0.5%的尿素，进行根外追肥矫正或每株树根施100克硝铵。注意对中低产橘园的扩穴改造。酸性土壤缺镁时，可按每公顷1吨或每株1～2千克的量，拌施钙镁磷肥。叶部病症出现初期，可喷0.5%硫酸镁溶液，可以矫正镁缺乏症状。对轻度缺钾的果园，生长期喷0.5%的硫酸钾数次，矫正钾缺乏症。表现严重缺钾的植株，冬季或初春每株根施120～150克硫酸钾。当pH值达8.5时，植株常表现缺铁症，故增施有机肥、种植绿肥等是解决土壤缺铁的根本措施。发病初期，用0.2%柠檬酸铁或硫酸亚铁，可矫正缺铁症状的发生。在柑橘营养生长旺盛期之5—6月，喷施0.3%硫酸锰液多次，间隔10～15天1次。冬季采果后，春梢萌发时盛花期喷洒0.05%～0.1%硼酸溶液或0.1%～0.2%硼砂溶液，提倡施用速乐硼、高纯硼、金硼液、围光硼等叶面肥。椐树体大小确定施用量。一般小树株施硼砂10～20克,施硼时不要过量，土施硼肥最好与有机肥配合施用。喷洒3.4%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂(碧护)7500倍液，可调节柑橘对养分的吸收利用，打造碧护柑橘美果。柑橘是适宜在热带、亚热带地区生长的喜温植物，对温度表现敏感。其品质和越冬安全等与栽培所处纬度及海拔高度有关。大体上，其种植区划分为适合生长区域、可植区和非适生区三种，寒害和冻害主要出现在可植区。如在广东、云南、贵州800～1500米海拔垦建的柑橘园，寒害和冻害都时有发生。初秋在苗圃砧木上包芽嫁接，或对柑橘更新换种包芽腹接，春季破膜时间过早，芽萌抽发后，受到春寒低温侵袭而死亡；春季露芽接时间过早，也会受到同样损失。病因是萌芽在低温天气下，由于嫁接口初愈合的穗、砧形成层细胞会很快死亡，芽渐失去水分而枯萎脱落。若寒潮突然袭来，或秋霜提前发生时，果实含水量高，寒害便出现。轻者，在果皮表面出现火灼状赤褐色至棕黑色不规则凹斑；形似近成熟期喷炔螨特浓度过高造成的药害状。重者，出现大块赤褐色斑后，果实很快水腐落地。冻害症状:冬季0℃左右的低温天气持续时间长，或遇极值温度低于-5℃时，柑橘枝梢叶片将严重受冻。从叶尖、叶缘向中脉方向纵卷，并产生大块相连的灰褐色枯死斑；秋梢嫩茎也变褐枯死；老叶受冻，症状与前述相似，但枯斑面积较小，一般不卷曲。3月底4月初春梢抽发时，受冻叶片纷纷脱落，形成秃枝，嫩梢发育差，花蕾小，坐果率低，对产量影响很大。如措施不力，树势很难在当年恢复(图5-7)。图5-7 蜜橘类低温寒害和冻害一是自然灾害。二是人为因素。冬季，尤其是春节前由广东向华北、东北、西北调运柑橘时，途中需几天时间，防寒设施跟不上很易出现冻害。(1)预防低温寒害对接芽和果实的伤害，应注意把握好农事季节，特别要掌握好当地的气温变化规律，即破膜露芽时间最好在柑橘园20%～30%植株芽萌发5毫米长左右(贵州在4月初)。(2)预防冻害首先应培育壮树，控制秋梢抽发过度，用15%多效唑可湿性粉剂1000毫克/千克，在秋梢抽发3厘米左右时喷枝梢至湿透，可达到控制树梢矮壮、促进花芽分化、提高次年坐果率之目的；受冻后，3月灌水浇透，可减少落叶、落花和落果；春季萌芽前及时剪除冻伤枝梢，减少养分消耗，促进中间态的中弱枝转换成果枝；全园进行2～3次叶面喷肥，第1次生理落果期可加10毫克/千克的2，4-D钠盐保果；全年注意合理施肥，防治好重要病虫害，尽快恢复冻前的树势。(3)冬季柑橘调运时，设法用空调车，防止储运途中受害。(4)遇有雨雪低温冷冻灾害袭击时，一是对已被大雪覆盖的柑橘园要及时清除树枝上的积雪，防止积雪压劈压断树枝，勿使树体遭到二次损伤，可用稻草秸秆包扎树干或覆盖树盘以求保温。二是对已受冻的柑橘园，雪后气温稳定后适时适当修剪，做到小伤摘叶、中伤剪枝、大伤锯干，对枝干完好叶片焦枯未落的尽早进行人工辅助脱叶；对冻伤明显的枝、干，及时带青修剪。剪口要准确控制，并涂蜡液包扎保护。三是加强树基培土、施有机肥等保护措施。(5)为了防止柑橘类冻害提倡喷洒3.4%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂(碧护)7500倍液，不仅可防止寒害和冻害，还可生产碧护柑橘美果。农药种类很多，橘园常用的为杀虫剂、杀菌剂和植物生长调节剂，其浓度和施药时期掌握不好，就会对柑橘树造成药害。如:利用石硫合剂防治柑橘红蜘蛛、矢尖蚧幼若虫和炭疽病，冬季可用0.8～1波美度石硫合剂喷雾树冠，如在夏季仍用此浓度，叶、果将大量脱落；95%机油乳剂稀释200～300倍液防叶螨效果很好，但如低于200倍稀释液喷雾，柑橘嫩叶就会枯卷；40%乙烯利2000～2500倍稀释液于采果前20天喷树冠，可促使橘果早熟上市，如喷于长势弱的树或药液低于此稀释倍数，就会导致植株叶、果掉落；用2,4-D钠盐保花保果，阴天使用浓度为10毫克/千克,如烈日下喷雾，柑橘叶片将呈船形反卷，幼果会僵化畸形。由此可见，农药品种不同，产生药害的症状各不相同，现举例描述于下。炔螨特药害症状(图5-8):烈日高温下喷73%炔螨特乳油预防红蜘蛛，低于商品说明书上规定的稀释浓度，1周后果上产生赤褐色凹斑，病部油囊细胞坏死膨大，生长期的果实虽不脱落，但终身留下疤痕，近成熟和已着色的果实易落果。叶片受害后，有几种表现:叶尖病斑呈“八”字形，枯白色，内缘有宽的褐色坏死带；叶面病斑大小相间，小斑近圆形，灰白色坏死。大斑中域灰白色，斑缘带褐色。代森锌药害症状:春末夏初，用70%代森锌可湿性粉剂预防幼果期炭疽病，低于400倍稀释液喷雾，幼果积液过多，渐出现灰褐色的不规则凹斑，病部僵硬，影响鲜果品质和市场价格。图5-8 柑橘炔螨特药害防治方法。根据柑橘不同生育期对化学农药的敏感性、喷药浓度及施药时间的温度等主要因素，结合自我实践经验，正确选择和使用农药品种。药害发生轻的也可喷洒3.4%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂(碧护)7500倍液，效果好。物理防治是通过热处理、机械阻隔、射线等方法防治植物病害。任何生物，包括植物病原物都对热有一定的忍耐性，超过限度生物就要死亡。在园林植物病害防治中，热处理有干热及湿热两种。有病苗木可用热风处理，温度为35～40℃,处理时间1～4周；也可用40～50℃的温水处理，浸泡时间为10分钟至3小时。如唐菖蒲球茎在55℃水中浸泡可以防治镰刀菌干腐病；有根结线虫病的植物在45～65℃的温水中处理(先在30～35℃的水中预热30分钟)可以防病，处理时间0.5～2小时,处理后的植株用凉水淋洗。一些花木的病毒病是种子传播的，带毒种子可进行热处理。在热处理过程中种子只能有低的含水量，否则会受灼伤。种苗热处理的关键是温度和时间的控制。做某种病植物的热处理事先要进行实验。热处理时要缓慢升温，切忌迅速升温，应使植物有个适应温热的锻炼，一般从25℃开始，每天升高2℃,6～7天后温度达到37℃±1℃的处理温度。湿热处理休眠器官较安全。现代温室土壤热处理是使用热蒸汽(90～100℃)处理时间为30分钟。蒸汽处理可大幅度降低香石竹镰刀菌枯萎病、菊花枯萎病的发生。在发达国家中，蒸汽热处理已成为常规管理。进行太阳能热处理土壤也是有效的措施。在7—8月将土壤摊平做垄，垄向为南北向。浇水后覆盖塑料薄膜(25微米厚为宜)，在覆盖期间保证有10～15天的晴天。耕作层温度高达60～70℃，能基本上杀死土壤中的病原物。温室大棚中的土壤也可按此法处理。当夏季花木搬出温室后，将门窗全部关闭，土壤上覆盖塑料薄膜能较彻底地杀灭温室中的病原物。覆盖薄膜增产是有目共睹的，覆膜也能达到防病的目的。许多叶部病害的病原物是在植物残体上越冬的，花木栽培地早春覆膜可大幅度地减少叶病的发生，如芍药地覆膜后，芍药叶斑病成倍地减少。覆膜防病的原理是:膜对病原物的传播起了机械阻隔作用；覆膜后土壤温、湿度提高，加速病残体的腐烂，促进病原物的消亡，减少了侵染来源。除此之外，人们也进行光生物学、超声波、辐射技术防病的研究，虽然都处在实验阶段，但都有开发价值。化学防治是指用化学药剂来防治病、虫、螨类、线虫、杂草及其他有害生物的一种方法。具有快速、高效，使用方法简单，不受地域限制，便于大面积机械化操作等优点。当病害大发生时，化学防治可能是唯一的有效方法。今后相当长时期内化学防治仍然会占重要的地位。但其缺点是容易引起人畜中毒，污染环境，杀伤天敌，引起病菌产生不同程度的抗药性等。对于这些缺点，未来可通过发展选择性强，高效、低毒、低残留的农药，改变施药方式，减少用药次数等逐步加以解决。杀菌剂的品种繁多，加工剂型也多种多样，防治对象的寄生部位、危害方式、环境条件也不尽相同，因此，使用方法也有多种。常用的方法如下。喷雾是借助于喷雾器械将药液均匀地喷布于防治对象及被保护的寄主植物上，是目前生产上应用最广的一种方法。适合于喷雾的剂型有乳剂、可湿性粉剂、可溶性剂等。在进行喷雾时，雾滴大小可影响防治效果，一般地面喷雾直径最好为50～80微米，喷雾时要求均匀周到，使目标物上均匀地有一层雾滴，并且不形成水流从叶子上滴下为宜。喷雾时最好不要选择中午，以免发生药害和人体中毒现象。喷粉是利用喷粉器械产生的风力，将粉剂均匀地喷布在目标植物上的施药方法，此法最适于干旱缺水地区使用。适于喷粉的剂型为粉剂。此法的缺点是用药量大，粉剂黏附性差，效果不如同药剂的乳油和可湿性粉剂好，而且易被风吹失和雨水冲刷，污染环境。因此，喷粉时，宜在早晚叶面有露水或雨后叶面潮湿静风条件下进行，使粉剂在叶面易沉积附着，提高防治效果。土壤处理是将药粉用细土、细沙、炉灰等混合均匀，撒施于地面，或将药液浇淋土表，然后进行耧耙翻耕等，主要用于土壤消毒及防治土传病害。种苗处理有以下几种方法:拌种。在播种前用一定量的药粉或药液与种子搅拌均匀，用以防治种子传染的病害。拌种用的药量，一般为种子重量的0.2%～0.5%。浸种和浸苗。将种子或幼苗浸泡在一定浓度的药液里，用以消灭种子幼苗所带的病原菌。闷种。把种子摊在地上，把稀释好的药液均匀地喷洒在种子上，并搅拌均匀，然后堆起重闷并用麻袋等物覆盖，经1昼夜后，晾干即可。熏蒸是利用有毒气体来杀死病菌的方法，一般应在密闭条件下进行。主要用于防治温室、仓库和种苗上的病菌。用注射机或兽用注射器将内吸性药剂注入树干内部，使其在树体内传导运输而防治病害。打孔法是用木钻、铁钎等利器在树干基部向下打一个45°的孔，深约5厘米，然后将5～10毫升的药液注入孔内，再用泥封口。对于树势衰弱的古树名木，也可用注射法给树体挂吊瓶，注入营养物质，以增强树势。总之，农药的使用方法很多，在使用农药时可根据药剂的性能及病害的特点灵活运用。农药的合理使用就是要贯彻“经济、安全、有效”的原则，从综合治理的角度出发，运用生态学的观点来使用农药。在生产中应注意以下几个问题。各种药剂都有一定的性能及防治范围，即使是广谱性杀菌剂也不可能对所有的病害都有效。因此，在施药前应正确诊断病害，根据实际情况选择合适的药剂品种、使用浓度及用量。切实做到对症下药，避免盲目用药。在调查研究和预测预报的基础上，掌握病害的发生发展规律，抓住有利时机用药。既可节约用药，又可提高防治效果，而且不易发生药害。防治病害时，可考虑在冬季消灭病原，或在生长季节初期孢子萌发阶段用药，同时还要注意气候条件及物候期。长期使用同一种农药防治1种病菌，易使病菌产生抗药性，降低防治效果。因此，应尽可能地轮回用药，所用农药品种应尽量选用不同作用机制的农药。将2种或2种以上的对病虫害具有不同作用机制的农药混合使用，以达到同时兼治几种病虫，提高防治效果，扩大防治范围，节省劳动力的目的。农药之间能否混用，主要取决于农药本身的化学性质。农药混合后它们之间不产生化学和物理变化，才可以混用。安全用药包括防止人畜中毒、环境污染和植物药害。生产上应准确掌握用药量、讲究施药方法，注意天气变化，施药者要做好防护措施并严格遵守农药使用规定。