美国白蛾繁殖量大，发生期长，且发生地点复杂，对其防治在技术上要区别于一般次要害虫的方法，要采取“人工与物理防治相结合、化学与生物防治相结合、地面与空中防治相结合”的措施，按照“一代为主，地面为主，村庄为主”的防治方针，依照“一挖二剪三喷四飞五放”的防治程序，进行全覆盖、多措施、不间断的防治。美国白蛾化蛹场所主要为树皮缝、墙缝、砖瓦堆下及枯枝杂草下等处，且化蛹比较集中。在越冬、越夏时期，组织人员在这些地方挖蛹，将挖得的蛹集中后埋入沙坑，坑口用网布封口，便于天敌羽化飞出。通过挖蛹可以大大降低美国白蛾发生基数，取得较好防治效果。每年的3月底至5月初、7月上旬、8月下旬，在美国白蛾发生地块，利用成虫趋光性，在成虫羽化期悬挂杀虫灯诱杀成虫。悬挂高度、挂灯间隔可根据不同类型的杀虫灯具体确定。以频振式杀虫灯为例：悬挂高度为离地面1.5m，悬挂间隔以100m为宜，每天从19：00至次日6：00开灯。在距离灯中心点50～100m的范围内进行喷药毒杀诱成虫，可获得较理想的防治效果。美国白蛾幼虫有群集和吐丝结网缀叶的习性，即1～4龄幼虫在树上为害时将局部枝条及叶片吐丝结成网幕状，在网内取食叶片。因此，在幼虫网幕期（分别在每年的5月中旬至6月上旬，7月中、下旬，9月上、中旬）人工剪除网幕，就可以达到直接防治的目的。人工剪网防治是一种最环保、最直接和成本最低的防治方法，同时也是效果极为明显的防治手段。具体方法：在美国白蛾各代幼虫4龄前，每隔2～3天仔细查找一遍美国白蛾幼虫网幕，发现网幕可用高枝剪将网幕连同小枝一起剪下。剪网时要特别注意不要造成破网，以免幼虫漏出。剪下的网幕必须立即集中烧毁或深埋，散落在地上的幼虫也应立即杀死。利用老熟幼虫有沿树干下树寻找潜伏场所进行结茧的习性，在树干上人为设置结茧场所，引诱其潜伏，然后予以消灭。此方法适用于防治困难的高大零星树木。具体操作方法：发现有美国白蛾为害的树木，在老熟幼虫开始下树时期（6月下旬，8月中旬，10月上旬），在树干离地面1～1.5m处，用谷草、稻谷、麦秸、杂草或草帘等，在树干上围绑起来，要求上松下紧，诱集下树老熟幼虫在其中化蛹。化蛹期间如果虫口密度过大时，每隔7～9天换一次草把，将换下来的草把集中销毁。喷药防治主要是在人工防治的基础上，在每一代幼虫破网前后进行。药剂选择主要以对环境和人、畜无害的仿生、生物和植物性杀虫剂为主。喷药可根据发生区域分地面喷药和飞机喷药进行。喷药地点：地面喷药主要适用于较低片林、村庄内零星分布疫点，以及飞机不便作业地点。喷药器械：地面喷药器械主要有担架式喷雾器、车载式高压喷雾器、背负式喷雾器和喷烟机等。喷药时根据不同情况选择适宜的喷药器械，担架式主要适合于村庄内零星疫点的防治，车载式高压喷雾器主要适合于绿化道两旁林木发生的美国白蛾防治，背负式喷雾器主要适合于较低的花草、绿化带上发生的美国白蛾防治，喷烟主要适合于林分密度较大的片林中发生的美国白蛾防治。喷药方法：对有网幕的树进行两次喷药；对剪除网幕的进行补充喷药；对发生的疫点周围扩大20～30m范围的林木进行预防喷药。喷药时要求必须均匀周到，不能漏喷，不留死角。药剂选择：在美国白蛾防治上，药剂选择除了选择使用环保、高效和无公害药剂外，还要根据美国白蛾幼虫发育阶段选择长效或速效的药剂。在进行大面积预防或提前喷药及幼虫破网前要选择药效比较长的药剂，在幼虫破网后要选择速效药剂。目前美国白蛾防治中选用药剂和使用浓度：20%除虫脲悬浮剂4000～5000倍液、20%米满胶悬剂1500～2000倍液、25%灭幼脲三号胶悬剂1500～2000倍液、杀蛉脲2000～3000倍液、森得保2000～3000倍液、1.8%阿维菌素4000～5000倍液、1%苦参烟碱1000～1500倍液、1.2%苦·烟乳油1000～2000倍液喷药。选用1.2%苦·烟乳油，在清晨或傍晚气温产生递增时，采用苦·烟乳油：柴油为1：10或1：20的比例喷烟；另外，可使用美国白蛾核型多角体病100倍液；或1.6万单位BT剂1000倍液。飞防地点：飞机喷药防治主要适合于大面积片林、绿色通道和河渠路堤两侧等村庄外窗口地带的林木。飞防机型：目前在林业有害生物飞防中使用的飞机机型有R44直升机、S-300型直升机、蜜蜂轻型飞机、运五型固定翼飞机、B-3105型通用飞机等。目前飞防中运用比较多的是前3种轻型飞机。与其他飞机相比较，轻型飞机在喷药防治中的优越性表现在：一是硬件条件容易满足。轻型飞机机动灵活，作业方便，受机场、跑道等硬件条件限制小，一般就地找一个净空比较好的学校操场，或两侧比较开阔的一段200m长公路，就可以满足轻型飞机的起降点条件，不需要远距离寻找机场或专门修建跑道。二是作业效率高。由于飞机起降点与作业点在同一地区，受气候环境影响小，且空飞路径少，机身小巧灵活，作业点转弯半径小，作业效率高。三是作业准确度高。轻型飞机一般均带有GPS导航仪，不需要人员领航。作业时飞机操作人员根据地面GPS定位图，与机载GPS相对应，进行定点喷药作业，作业准确度高，误差小。四是防治效果好。轻型飞机飞行高度低，一般在树上5～7m，加上旋翼卷风带动树叶翻转，喷施的雾滴均匀，且不限叶正面，叶背面也有雾滴，防治效果好。五是轻型飞机机场与作业点较近，喷药存在问题，可以很快反馈到起降点，及时进行补喷。前期准备要从六方面着手：一要准备GPS定位及绘制飞防作业图。根据调查的虫情及飞防条件，对计划飞防的作业点进行GPS定位，定位结束后，将所有作业点进行绘图，一般以当地行政图为底图在其上绘制飞防作业图。在图上准确绘出每个作业点的形状、位置，标明GPS定位经纬度和作业点面积，以及飞防作业区电塔、高压线、高大建筑物、养鱼、养虾池等位置，并在图上根据每架次飞机作业面积编排好作业架次和顺序。二要制定实施方案。飞机喷药作业是一项大规模林业有害生物防治工作，为了确保飞防工作顺利进行，保障飞行作业安全，提高防治效果，每一次飞防作业都要根据情况制定飞防实施方案，确定飞防任务、飞防作业区、资金预算、采用飞机机型、使用药剂、地勤服务和保障等方面工作措施。三要租赁飞机和采购药剂。飞防物资的采购招标也是一项比较繁琐的工作，为了确保飞机和药剂及时到位，飞防作业能够按时进行，要提前对飞防物资进行采购。根据飞防实施方案确定的飞机机型和飞防药剂类型，在飞防前一个月进行提前采购。四要选择飞机起降点。不同作业机型选择的飞机起降点不同，轻型飞机起降点条件要求较低，在飞防作业区附近一般能够就近找到满足起降条件的场所。如四周空旷，面积约4000m2的学校操场，或两侧开阔约长200m的宽公路，均能满足轻型飞机的起降。为了提高飞防效率，缩短空飞路径，可根据飞防作业区的大小、远近，选定多个起降点，飞防时可就近起飞作业，节约飞防时间和成本。五要进行飞防公告。飞防作业区一般在郊外，由于这些地方往往有养鱼、养虾养殖场所以及放风筝等情况的存在，为了避免引起纠纷和保障飞行安全，在飞防前要以当地政府的名义在飞防作业区各村街和养殖场所张贴飞防公告，告知群众飞防的时间、范围、使用的药剂以及注意事项。六要进行飞防作业参数测定。由于不同的机型及装载喷药设备不同，所以喷药时的参数不同，为了计算每架次飞防面积、调整喷雾雾滴，必须在飞防开始前对飞机飞防作业参数进行精确测定。飞机飞防作业参数主要有喷管长度、雾线角度、喷药时间、喷药压力、作业高度、作业速度等。通过对这些参数的测定，计算每架次飞防作业面积，根据每架次作业面积和每亩用药量，确定每架次的加药量和加水量。飞防药剂：飞机喷药作业主要用于有害生物除治和大面积预防，因高空作业，雾滴容易飘散，在飞防药剂选择上主要以药效较长、对环境污染小和对人、畜无害的药剂为主，为了提高雾滴沉降速度，在加药时配合加食盐，一般每架次加盐1kg。飞防作业一般包括作业保障、后勤保障、药滴测试、防效调查四方面内容。飞防时的地面作业保障直接影响飞防作业进度。由于飞机喷药作业受风、雨、雾、气温、气压和高空能见度等客观因素的影响，所以飞防作业时间一般选择在早晨5～9时、下午16～18时，一天当中真正有利于飞防作业的时间为6个小时，当飞防作业面积较大，虫情较紧时，如果地面作业保障跟不上，就会大大影响飞防作业进度，错过最佳防治时期，影响防治效果。因此，在飞防时要充分做好地面保障。地面保障主要是加药、加水，作业保障人员一般分组轮流进行，每组按加药、加水进行分工。为了提高加药、加水速度，在飞机起飞作业后，就开始准备下一架次的药剂和水，保证飞机一降落立即开始加药和水，不因药和水配制耽误时间。一般正常的加药和加水时间为3～5分钟。药和水准备好后要盖好，以防飞机降落时带起的扬尘弄脏了药和水，堵塞喷头。飞防作业后勤保障主要指飞机安全保障、起降点秩序维护和飞防物资的供应等工作。后勤保障组按分工可分作业区安全保障、起降点秩序维护和飞防物资供应三个小组。飞机安全保障主要是飞行作业区周围放风筝、高空气球等可能影响飞行安全活动的事前勘察和排除。由于飞机喷药对大多数作业区的群众来说是一件新鲜事，围观群众较多，所以要做好起降点秩序维护，要用红色警戒绳划出飞机起降区，派专人负责维护秩序，保证观看群众和飞机起降安全。为了保证飞防物资及时、足量到位，后勤保障组要根据需要及时补充飞防用药和油及其他物资，并根据作业情况，在向下一个起降点飞机转场前把飞防物资及时送到。飞防喷药是现代较高水平的机械喷药作业，由于是树上部较高位置喷药，对喷药雾滴的测试，除了在喷药前测定外，还要在喷药作业区设置标准地进行测试，根据测试情况，按照喷药要求对喷头和压力进行调整，以达到喷药雾滴大小和数量要求。具体方法：在作业区内的四个角和中间设置5个点，每个点在树下部挂置2～3个硬质黑纸板，飞机喷药过后，检查黑板上雾滴大小，并测量每平方厘米内的雾滴数量。一般以低量喷药为好，雾滴直径0.8～1.0mm，雾滴数量为每平方厘米2滴以上。防效调查是对作业质量和药剂药效的检查。一般在标准地内设10株标准株，每个标准株设置1～3个标准枝（标准枝长50cm）。飞防前调查并记载有虫数及虫口密度，飞防后7日、11日和15日，分别调查标准枝上的虫口数，统计虫口死亡率。飞防条件是指作业区条件和气象条件。作业区条件要求：飞防片林面积应在666.7hm2以上，且郁闭度达到0.5以上；飞防绿色通道、河渠路堤两侧林木宽度不能小于一个喷幅；作业区内不存在高塔和高压线。气象条件要求：为了保证飞行安全和飞防效果，风速超过5m/s时不能喷药作业；由于降雨冲刷作用，影响药滴在树上着固，根据气象预报在6～12小时内有降雨时不能喷药作业；气温较高、上升气流较强时，雾滴容易飘失，不容易着落，气温达30°C以上时不能作业。天敌防治与病毒防治一样，与喷药防治相比较而言，控制时间长，且防治靶标专一，不会对天敌造成伤害，是一种较经济、防治效果较好的防治方法。美国白蛾天敌有寄生蜂、寄生蝇和捕食性天敌多种，目前能够大量繁育生产，并在防治中大量运用的主要有寄生蜂——周氏啮小蜂。放蜂时期：周氏啮小蜂是美国白蛾蛹寄生天敌，在田间放蜂时间的掌握是关键，一般选择在老熟幼虫期和化蛹初期进行放蜂。放蜂条件：利用周氏啮小蜂防治美国白蛾，要选择在美国白蛾低虫口密度的地区释放，才能达到较好防治效果。放蜂数量：根据调查的美国白蛾基数，确定防治区的放蜂数量，一般周氏啮小蜂与美国白蛾数量为（3～5）：1，为了提高放蜂效果，可采2次放蜂的方法进行放蜂，即在老熟幼虫期和化蛹期分2次放。放蜂方法：确定放蜂地点和数量后，放蜂时间一般选择在晴天上午9时以后。放蜂时把繁殖周氏啮小蜂的蚕茧用细铁丝或细绳挂在靠近树干树枝上，或用图钉固定在树干上即可。美国白蛾作为世界性检疫害虫，自1979年传入我国辽宁省丹东市后，经过多年的扩散、蔓延，目前已在我国7个省、市发生，对当地的经济、生产、生活产生了较大影响。经过近几年大力防治，已取得了明显防治效果。美国白蛾防治就是一场林业有害生物防治“攻坚战”，这场“战役”除了把握好战术措施外，还要在战略上到位。美国白蛾是检疫性林业有害生物，同时也是我国两种极度危险性林业有害生物之一。防治美国白蛾是一项保护生态环境的社会公益活动，属于社会防灾减灾范畴。美国白蛾防治需要投入大量的人力、物力，动员全社会力量，采取坚决措施才能取得真正的防治效果。因此，按照《森林病虫害防治重要条例》的有关规定，美国白蛾防治必须突出政府主导作用，由政府统一领导，统一组织，把美国白蛾防治工作纳入各级政府的防灾、减灾计划，统一部署，可以从以下五方面具体实施。一是成立防治指挥部。指挥部由各级政府逐级建立，以政府主要领导牵头，财政、林业、农业、园林、水利、交通、教育、房管等相关部门参加，确定各相关部门的责任和任务，制定应急组织方案。二是签订防治责任状。按照总体防治指标，划分防治目标和任务，并以此逐级签订上级政府与下级政府、政府与相关部门责任状。责任状明确签订单位的防治任务和完成的防治目标，并明确完成目标或未完成目标时的相应责任。三是组织发起防治动员活动。美国白蛾防治开展前，由政府组织各相关单位领导和下级政府领导参加的防治动员大会，安排部署美国白蛾防治前期准备工作和防治期防治开展工作，以及全年防治方案和任务。四是政府牵头，进行督导检查。根据美国白蛾防治工作需要，由政府牵头，组织相关部门人员，在防治期巡回督导检查各地防治工作开展情况。五是防治资金纳入本级政府财政预算。根据美国白蛾防治“属地管理、分级负责”的原则，美国白蛾防治资金要纳入本级政府财政预算，做到优先安排，重点保证。美国白蛾主要发生在村庄，在防治上要充分发挥和利用基层组织的中坚力量作用，建立县、乡、村三级专业防治体系，形成组织有效的快速反应防治机制，这样在防治上才能做到及时开展，有效防治。防治网络的建立可以在县级林业部门建立防治技术服务队，负责技术指导和人员培训的基础上，按照“乡自为战、村自为战、户自为战”的防治战略，以乡、村、户为单位，建立防治体系。在乡级建立2～3个防治专业队，并成立防治组织机构，负责防治专业队统一调配和村防治工作的督导。在村级设置查防员，成立防治小分队，对村内防治任务按片进行责任划分，由责任人每天对责任区进行巡查和防治。进入防治期后，由乡防治专业队根据查防员上报的查防情况，调配防治专业队逐村进行规模化防治。村级防治小分队主要负责村范围内零星疫点除治，村查防员主要负责村内美国白蛾发生情况的查防和上报，以及简单防治（剪网）。县、乡、村三级专业防治网络的建立，形成了“技术一线指导、防治多点开展、查防专人负责”的美国白蛾防治体系，对控制美国白蛾疫情的发生及蔓延起到积极有效的作用。根据美国白蛾第一代幼虫虫口密度小、网幕期长、发生疫点比较零散、且危害林木部位较低，有利于防治的特点，坚持以“一代为主、地面为主”作为防治美国白蛾的整体策略。第一代美国白蛾防治成效的好坏，直接关系到后期防治基础，影响到全年防治成果。第一代美国白蛾防治，从越冬蛹开始，在蛹期、成虫羽化期、幼虫期和幼虫化蛹期等美国白蛾发生的各个阶段，先后利用挖蛹、灯光诱杀、剪网幕、地面喷药、释放天敌等多种措施，进行各虫态全覆盖，多环节连续防治的手段，实现“全覆盖、多措施、不间断”的防治战略，重点突出地面防治工作，地面防治开展坚持以树为目标普遍喷药预防，以疫点为中心扩大范围二次喷药，以普遍查防为主消灭死角死面的措施，达到对第一代美国白蛾普遍防治的目的。在美国白蛾防治工作中，资金的保障是防治成功与否的决定性因素之一。美国白蛾防治投入不能单纯依靠国家财政资金，应制定完善的资金投入政策，依据“谁经营、谁防治”的原则，以林主自筹防治资金为主，省、市、县、经营单位（林主）按比例配套投资，建立多元化、长效型的防治资金投入保障体系，使美国白蛾防治工作建立在可靠的物质基础上，全面提高美国白蛾防治能力。群众对美国白蛾了解得越多，参与得也就越多，美国白蛾防治就有了良好的群众基础，有了基层广泛力量的支持，防治工作就更容易开展。美国白蛾基层防治宣传，通过电视、报纸等新闻媒体，利用村广播、黑板报、明白纸等形式，大力宣传美国白蛾发生危害状、识别特点，以及美国白蛾危害的严重性和防治工作的重要性，让群众深入了解美国白蛾对林木、人类生活，乃至生态环境带来的危害和影响。通过深入的宣传，消灭群众对美国白蛾可防可不防的消极思想，树立防治美国白蛾的紧迫感和责任感，增强群众参与美国白蛾防治的积极性和主动性，进而形成美国白蛾群防群治的良好局面。

营销的“推”主要是指主动推介销售，是销售人员主动寻找客户，把企业的产品和服务“推”出去。也就是说，“推”的战略主要是借助于强有力的销售队伍，在各种促销措施的支持下，将产品推向各种销售渠道，推上经销商的货架。从这个意义上说，它是指产品销售网络的渗透。营销的“拉”主要是指企业制定一些营销手段、策略让顾客自动发出回馈，形成互动，找上门来，这样的营销战略就是网络营销的“拉式”策略。也就是说“拉”的战略主要是围绕如何将顾客“拉”进销售点，并鼓励消费者从货架上将商品“拉”走。它往往是通过大量的广告宣传来烘托企业和产品品牌形象，从而创造出新的客户需求。网络营销的“推”主要是指网络销售，是网络销售人员主动的寻找客户，把企业的产品和服务“推”出去。网络营销的“拉”主要是指企业制定一些网络营销手段、策略让顾客自动找上门来，这样的网络营销战略就是网络营销的“拉式”策略。网络营销的“拉式”策略，是网络营销者应该主要应用的策略。网络营销的“拉式”策略的手段也是比较多的。比如可以采用搜索引擎优化、博客营销、互动营销、病毒式营销、网络炒作和网络视频营销等。总之，网络营销“拉式”与“推式”策略，网络营销公司在选择的时候根据实际情况灵活地选择并应用就可以达到网络营销的真正目的。渠道、终端之间进行很好地协调和联动，形成分销推力和零售终端的无形拉力，才会使分销及零售覆盖达到一个新的标准。在分销管理中，依靠有限的分销商来完成市场的零售终端覆盖总是显得力量比较单薄，需要厂家评估机制，先入为主施加压力。作为销售代表，可能会有一种企业在求经销商的感觉，经销商经常压着企业，给销售代表很大的压力。实际上反而需要给经销商增加压力，因为没有压力就没有动力。根据每个经销商的具体表现以及不同地区市场变化状况，各销售代表要定期地分析现有的渠道是否能满足终端零售覆盖的需求，是否需要开发新的渠道，或增加渠道中的个别经销商，乃至调整整个销售渠道结构等。定期评估该地区的覆盖率，对没有按照合同要求完成零售覆盖的，要求给予正式书面指正，并协助商议解决办法，对于连续多次没有达到零售覆盖标准的，可进行调整。将经销商当作合作伙伴对待，多帮助经销商收集与其自身有关的信息，经常交流，从而拉近与经销商之间的距离，消除猜忌和隔阂。销售渠道差异化：了解竞争对手与本企业所使用的销售渠道的差异，并进行比较；对于主要竞争对手，企业要进行销售渠道差异分析，以了解本企业在业界所处的地位。经营管理专业化：不定期协助经销商开展促销活动；对经销商进行销售管理知识培训，如进行商品陈列、销售技巧、店面管理、库存管理、订货系统等方面的培训。竞争对策有效化：竞争对手开辟了哪些新的渠道，实施了哪些新的销售策略，企业必须根据竞争对手的情况提出应对之策。因为在经销商面前，利益和优惠政策是最有说服力，也是最有效的。渠道信息规范化：销售渠道的一个重要功能就是信息传递功能，企业要通过销售渠道不断地收集和反馈市场信息。利益冲突最小化：销售渠道之间存在利益冲突，这是在所难免的，企业不能视而不见，必须通过有效的管理与控制手段，解决销售渠道间的冲突。可能选定的大多数分销商不能完成对所在区域的整个零售终端的零售覆盖，要达到原先的终端规模和数量就必须牢牢抓住县、镇一级二批商，只有通过他们自身固有的渠道才能完成对乡镇一级零售终端的覆盖问题。如果对一些已经停止合作的经销商采取了不理不睬的态度，加上又不直接供货后，经销商存在的抵触情绪，将会使销售代表望而却步。这样与这些经销商的关系就处理的不是很融洽。所以销售代表对二、三级批发商也要与直供的经销商同样的态度和热情对待，帮助他们完善网络，整合渠道，通过交流和沟通，消除误会，共同将本区域市场销售稳定和持续发展。二、三级批发商的选择应注意网络覆盖情况、渠道管理理念及发展状况、及资金信誉状况。建立二批商进行网络延伸将我们初步选定的二、三级批发商名单交给分销商，与分销商沟通，说服分销商与其接触并建立良好的合作关系，同时也要考虑到分销商自身的网络下线经销商，如果符合条件，也考虑作为我们的二批商。在选择好二、三级批发商后，就立刻着手进行谈判，可以由经销商负责谈判工作，主要针对价格、回款状况。销售代表走访终端，实现销量及销售四项基本原则（分销、货架陈列、助销、价格管理）；树立二批商经营我们产品的信心；帮助二批商制定出一个月的销售计划；把二批商（经销商）当做以前我们公司来作，帮助经销商建立下属终端的资金和信誉调查表，同时设计出经销商送货路线图；对经销商经营我们产品的利润和附带的其它产品所带来的额外利润的经营观念进行引导；让二批商印出名片，名片内容包括经营产品名单和价格单；和二批商一起商量订单设计和送货路线及送货时间、频率；销售代表在定期走访终端时收集订单，订单不光是我们的产品信息还可以收集其它品牌的信息，最后进行订单的归纳整理；对发展前景比较好的二批商，并且对我们公司政策比较支持的要加以引导。对于“推”与“拉”战略的应用，不同企业之间有不同的取向。实际上，“推”和“拉”常常是构成企业营销战略中的相互作用、不可或缺的两个要素。大量的广告（拉）将会促进产品的销售，而这反过来又会使到销售人员更加卖力地推销产品（推）。必须看到，要想取得长期的市场成功，仅靠推或拉是不够的。任何一个产品在市场上的成功往往取决于一个平衡的市场营销组合。同样地，如果产品已经渗透到各种不同的营销渠道，消费者也被广告吸引到销售点，但缺乏营销组合中的其它要素的支持，如价格太高或销售服务太差等，也可能使消费者对购买该产品望而却步。因此，如果要取得长期的市场成功，企业为客户提供的产品（或服务）必须与广告促销中的许诺相吻合。否则，消费者只会购买一次他认为是差的产品。“推”与“拉”是营销战略的两个基本取向，两者并无优劣之分。在实际运作中如果能够巧妙地把握两者之间的平衡，同时又注意到与其它营销要素的搭配使用，成功的希望就更大一些。营销的太极——“推”与“拉”，就是营销过程中的一张一弛，张弛有力有度，方可达到营销艺术的最佳境界。

全球化浪潮的兴起预示着一个新时代的来临，管理学大师彼得·德鲁克指出：在这样的时代里，“唯一关键的事情就是创新”。技术创新在现代社会有重要的意义。对企业而言，技术创新是提高竞争优势的主要途径，是企业参与竞争的主要手段，创新能够创造差别，使企业能够寻求新的竞争机会，并据此而获得差别优势和利益。改革开放以来，中国在国际经济舞台上的迅速崛起令世人瞩目，我国企业的生存与发展环境发生了巨大的变化，在赢得众多发展机会的同时，亦面临极为严峻的考验。竞争和创新也使市场更为动荡，人们越来越清醒地认识到，技术创新能力的培育对企业获取竞争优势的关键作用，从而迫使企业要不断地开展技术创新。何谓技术创新？有人定义创新为发明加开发，换句话说，它不只是发明创造活动，还包括把产品推向市场并销售给人们的活动。因此，技术创新是科技新设想转变成一种新的或改进的新产品或新工艺，并把新的或改进的产品、工艺、物料或服务开发并转移到它们适合的工厂或市场的过程。企业核心竞争力，是近几年来企业界谈论最多的话题，也不乏有一些理论性的研究和观点上的争论。“核心竞争力”这一术语首次出现是在1990年，著名管理专家C.K.Prahalad和Gary Hamel在《哈佛商业评论》上发表的《企业的核心竞争力》（The Core Competence of the Corporation）中指出：“核心竞争力是在一组织内部经过整合了的知识和技能，尤其是关于怎样协调多种生产技能和整合不同技术的知识和技能。”按照Prahalad和Hamel的定义，企业的核心能力有三个基本特征：核心能力提供了进入多样化市场的潜能；核心能力应当对最终产品中顾客重视的价值作出关键贡献；核心能力应当是竞争对手难以模仿的能力。那么，所谓核心竞争力就是指蕴涵于企业内质中的，支撑企业过去、现在和未来竞争优势的，并是企业长时间内在竞争环境中能取得主动的核心能力。Prahalad和Hamel提出了一个“树形”模型来解释核心能力：企业是一棵枝叶繁茂的大树，其最终产品是果实，最终服务是叶子，树枝是结合产品和服务的战略业务单位，树干和主枝是核心产品，为整棵树提供和输送养分，维系生命的根系就是企业的核心能力。这一模型是要表明核心能力与核心产品相关联，但是这种关联不是因为企业有自己的核心产品，因此相应的技术和技能就成为核心能力，而是强调以核心技术和知识为基础的核心能力导致了企业的核心产品。这一模型还表明了核心能力主要是一种和价值创造过程直接相关的技术能力，只有构成企业主体部分的价值创造活动中的能力才能带来实际的价值，并通过企业的产品或服务来体现。因此，技术创新能力是企业核心能力的根基。核心竞争力以企业核心技术能力为核心，通过企业战略决策、产品制造、市场营销、组织管理以及企业文化的整合而使企业获得长期竞争优势。而企业核心技术能力又在于不断创新。在经济全球化的市场经济体系下，企业所面对的市场不再是一个国家或一个地区，而是全球化的市场，企业今天的核心技术不等于明天的核心技术。因此，只有通过不断的创新，才能保证企业的技术始终走在科学的前沿，才能成为企业的核心。因特网搜索引擎技术的发展历史让人们充分体会到竞争环境变化之快，也证实了保持竞争优势有多么困难。1994年出现了第一个搜索引擎EINet Galaxy，它是“Yahoo！”搜索技术的基础。但是，90年代末期，在该领域Google就取代了Yahoo！的主导地位，现在其他的竞争者通过更多的链接以及能够浏览更多的页面向Google发起冲击。手机公司也同样面临快速变化的市场模式。1998年，诺基亚是手机生产商家的领军者，到2002年，诺基亚在市场中落到了第四，三星成为彩屏手机的领导者。但是在2003年，诺基亚凭借带摄像头的手机打入市场，再一次成为了该领域的领军人物。我们可以看到，获取持续竞争优势需要付出多年的努力，而要在超竞争的环境中保持竞争优势则更加困难。技术是竞争优势的来源，如何把企业的技术能力转换为竞争优势更为关键，那么技术创新就是联结技术能力和竞争优势的纽带。经济发展的现实已经证明，技术创新一直是整个历史上产业发展、生产率增长以及人们生活水平不断上升的强大动力。技术创新可能是使竞争对手之间市场份额发生重大变化的唯一的最为重要的源泉，它还可能同时是造成占有牢固地位的企业死亡或让位的最经常的原因，因为它能够创造或破坏企业的利润。技术创新还常常能创造新的产业，并且能改变或摧毁现有产业。简而言之，技术创新就是现代企业竞争环境中最具决定性和毁灭性的力量。因此在市场竞争日趋激烈的今天，企业要想求得生存与发展，必须加强技术管理与技术创新管理，以提升企业的核心竞争力。技术管理与技术创新管理已成为成功企业的一种新特征，其成功之处不是对已存的人、财、物和信息资源的管理，而是对自己独特的技术资源的管理，是对企业技术创新体系的建设。技术管理的关键不是要员工在职能管理的体制下各司其职，最大效率地完成其分担的工作，而是要创造一种机制和氛围，是企业员工个人及组织的技术创新能力能够最大限度地发挥出来。而创造竞争优势则需要开发和利用企业中的技术，包括企业员工的知识、技能和思想的交流，也包括历史和现有技术的应用。企业的技术管理最终能够达到提高企业核心竞争力的目标。创新是一个民族进步的灵魂，是国家兴旺发达的不竭动力，毫无疑问也是企业发展的不竭之源。企业应通过技术创新提高产品的独创性。一个行业，一个企业，如果没有持续不断的科技创新，就没有发展的源泉。企业的技术创新体系，通常以一项核心技术或几项关键技术为核心，企业的核心竞争力往往就体现在这些核心技术的开发和利用上。于是就有了这么一个逻辑：企业核心竞争力——企业自主创新——企业的生存与发展。在思考这三者关系时，企业的生存与发展是作为企业经营者最为关心的，是工作的目的；企业自主创新是方法、是手段；而企业的核心竞争力则是能力、是根本。即：企业经营者通过技术创新和产品创新等来把握和培育好企业核心竞争力，以达到企业发展的目的。只有源源不断地技术创新，企业才能不断向市场推出新产品，不断提高产品的知识含量和科技含量，改进生产技术，降低成本，进而提高顾客价值，提高产品的市场竞争力和市场占有率，并适时开拓新的市场领域。跨国公司都非常重视技术创新，设有专门的研发部门，并不断加大对技术创新的投入，以此增强企业的创新能力。据统计，世界500强的研发投入占销售收入的比重平均为5%～10%，大大高于中国企业的平均比重。2001年当国内各彩电品牌在大打价格战时，沉寂多年的索尼在中国市场仅50万台高端彩电的销售量所获得的利润就相当于国内所有彩电品牌的利润总和。“技术的索尼”的威力显露无遗。与国外知名企业相比，中国企业普遍存在的一个问题便是对技术创新不够重视，忽视对新技术、新产品的研发投入，在研发方面的投入过低自主创新能力不强，而满足于以设备制造商方式赚取微利，动辄打“价格战”。由于历史原因，中国的许多企业还未从计划经济时代“生产工厂”的角色中完全脱胎出来，很多企业没有专门的研发部门，对技术创新的投入长期处于很低的水平上，这就直接导致了当前中国企业自主创新能力普遍较差的局面。因此我国企业必须制定技术创新战略，建立符合技术创新功能要求的组织机构，建立保证技术创新顺畅运行、互相衔接、及时反馈的运行程序以及科学的现代管理，建立能够鼓励技术创新并在一定程度上自主控制技术的管理体系；并围绕与高校、科研机构联合攻关，或形成研发战略联盟，从而大大提高企业的技术创新能力，以提高企业核心竞争力。技术创新战略决定企业创新的具体行为。企业能否正确选择并贯彻实施良好的创新战略，是其能否顺利推进技术创新，赢得创新利益的先决条件。那么如何选择正确的创新战略是企业面临的重大问题，是涉及企业生存与发展的根本前提。由于技术创新活动主要源于市场拉动或技术推动及两者结合，因此技术创新活动一方面要立足市场，另一方面要把握科技发展潮流。由于全球化浪潮不以人的意志为转移地到来，要求企业及早地融入全球化环境中。借鉴国外企业创新战略的经验，下面几种创新战略可以供我国企业选择、探索。● 自主创新战略。自主创新战略是当今国际上一些成功的知识型企业为在竞争中取胜而较多采用的创新战略。它所需的核心技术来源于企业内部的技术突破，是企业依靠自身力量，通过独立的研究开发活动而获得的。对于自主创新的企业来说，在技术开发方面，由于能在一定时期内掌握和控制某项产品或工艺的核心技术，这在一定程度上左右了行业或产品技术发展方向；同时由于自主创新者一般是新市场的开拓者，因而可处于完全独占性垄断地位。● 模仿创新战略。模仿创新战略的核心是快速高效而特别的技术积累。首先，向成功的率先创新企业学习，模仿创新活动，快速而有效地增长创新知识和技能。企业的技术积累中包含大量暗默性的知识和技能，模仿却能够让一个企业在不解析原理和结构的情况下，有效地“复制”另一个企业的知识技能而丰富其技术积累，再在此基础上消化吸收，进行新的探索，而在技术积累方面青出于蓝而胜于蓝。其次，在模仿创新中实现高效的技术积累，再在高效的技术积累基础上将技术积累的重点后移，即将注意力和主要资源投入到工艺、批量生产、质量控制等环节，在这些方面形成丰厚的技术积累，从而建立起核心竞争能力。● 联盟创新战略。当今世界全球性的技术竞争不断加强，企业技术创新活动中面对的技术问题越来越复杂，技术的综合性和集群性越来越强，即使是技术实力雄厚的大企业也会面临技术资源短缺的问题，单个企业依靠自身能力取得技术进展越来越难。因此，以企业间的分工合作方式进行重大的技术创新，通过外部技术资源内部化，形成联盟以实现知识资源共享和优势互补，成为新经济形式下企业技术创新的必然趋势。通过联盟各方技术经验和教训的交流，集中各方智慧，能为参与联盟的企业赢得市场，带来经济效益，使知识增值，提高企业在市场竞争的地位。随着全球经济一体化，市场、制造全球化的发展，世界已经步入全球化新时代，为应对全球化竞争，我国企业走向全球化已势在必行。因此提高技术开发与创新能力，获取技术与竞争优势尤为重要，在全球范围内获取与保持持续竞争优势实现持续发展也成为重中之重。结合技术创新战略，企业有效地采取与实施全球化战略与管理是中国企业走向全球化、获取全球化发展的根本出路。

2005年7月21日，我国根据经济发展状况，结合国际金融环境，及时地进行了人民币汇率形成机制改革和汇率调整，中国人民银行宣布自即日起，开始实行以市场供求为基础、参考一篮子货币进行调节、有管理的浮动汇率制度。人民币汇率不再盯住单一美元，形成更富弹性的人民币汇率机制，同时宣布人民币对美元升值2%，实现汇改以来，人民币汇率弹性循序增加。根据中国人民银行授权中国外汇交易中心公布的数据，2008年1月2日人民币对美元汇率中间价再创新高，人民币对美元汇率中间价为人民币7.2996元，2008年首日交易日即创下2005年7月汇改以来新高。美元对人民币中间价破7.3大关，人民币升幅达10%。金融市场这一新的变化，无疑将对中国的外贸以及中国与中亚国家的贸易具有较大的影响，乃至世界经济产生深远的影响。改革开放的最近十年来，人民币升值问题已经成为大家关注的焦点，人民币汇率存在升值压力的原因是一个国内与国际间错综复杂的社会、政治、经济利益紧密相结合的问题。造成人民币升值的原因很多，但总的来说主要可分为国内原因和国际原因，从国际环境上，要求人民币升值的呼声日益高涨，主要依据在于中国的贸易顺差，巨额外汇储备等因素。在国内物价日趋上涨的今天，政府希望提高人民币价值，加快吸收外国廉价物品以缓和有可能出现的通货膨胀等等。人民币汇率问题不仅是经济问题，也演变成了国际政治问题。有些西方国家学者频频呼吁人民币升值，或是出于嫉妒，或是转移国内对当局的指责，亦或是为了争取国内制造业的选票。引发西方国家呼吁人民币升值的主要因素有以下几点：一是人民币汇率过低，二是中国拥有大量的外汇储备，三是中国廉价商品大量出口造成世界通货紧缩。有人认为，导致日本和欧美通货紧缩是由于中国廉价产品大量出口造成的，因此中国应使人民币升值，在世界经济中担负相应责任。美国之所以施压人民币升值，是认为中国实行的“盯住美元汇率”政策，使美元贬值的积极效用没能全面发挥，只是“极大地增强了中国企业的出口竞争力，刺激了中国产品的出口”，尤其是2002年美元贬值的同时，美国外贸逆差却创出了4352亿美元的历史峰值，对华贸易逆差达到1031亿美元。美国通过美元贬值，既能减轻其外债负担，每次美元大幅贬值都能使美国债务减少三分之一，又能刺激其产品的出口，还能转嫁其各种经济危机，成为其对其他国家进行剥削的主要形式。近年来，关于“亚元”问题的讨论已越来越热，哪种货币能够成为未来“亚元”的载体，已变成一个日益敏感的话题。日本由于其经济十年来的萎靡不振，日元充当亚洲货币主导的可能性在变小。逼迫人民币升值，目的就在于想通过人民币升值，打垮人民币对日元的挑战，确保日元的未来主导地位。从经济学上讲，主要有以下几个方面的依据：第一，人民币汇率自1994年以来已近10年没有进行调整，而这10年中国经济和国力已经发生了深刻的变化。1994年中国人均GDP折合美元为2100美元，2000年中国人均GDP为856美元，2003年人均GDP为1087美元，2004年人均GDP为1490美元，2005年人均GDP达到1703美元，2006年是2017.6美元，2007年人均GDP为2280美元。第二，按照国际经济学的理论，外汇节余过多本身就表明外币定价过高，本币定价过低，本币有升值压力。截至2007年，中国的外汇储备已高达1.6多万亿美元，中国已成为世界上第一大外汇储备国。第三，从2001年以来，世界各主要货币包括东南亚国家的货币对美元都大幅度升值，只有人民币对美元的汇率一直没有调整，即人民币实际上也跟随美元对其他货币大幅度贬值。且不说20世纪90年代人民币是不是过度贬值或定价过低，单说近年来其他国家的货币对美元都大幅度升值，只有人民币对美元的汇率没有变化，仅此一条，就可以判断人民币对美元的价值有可能低估。中国与世界上几乎每一个国家的贸易都在增长。最明显的一些变化还是在中国周边地区。以蒙古为例。根据世界银行的数据，直到20世纪80年代末，蒙古经济还完全为前苏联所控制，其95%的出口都是面向苏联或其东欧卫星国。现在中国是蒙古最大的投资国和贸易伙伴。以美元计，2004年上半年蒙古约有60%的出口商品流向了中国，27%的进口来自中国。贸易联系正在为中国与中亚国家建立更稳固的关系铺平道路。中国正在建设或力促兴建的项目包括：从俄罗斯和哈萨克斯坦通往中国的石油和天然气输送管道，以及连接中国与俄罗斯、蒙古和缅甸的铁路线。贸易正在推动基础设施方面的支出。俄罗斯、蒙古和哈萨克斯坦拥有石油、天然气、铁矿石、铜等中国急需的资源。国际环境的这一转变对中国来说可谓巨大，在整个冷战时期，甚至在中国历史上很多时候，中国都是被充满敌意或怀疑态度的邻国包围的。中国政府已为缓解这些担心做了很多工作，特别是消除邻国对中国经济威胁的担心。当2002中国加入世贸组织时东南亚和印度等邻国尤为担心中国廉价的产品将涌入它们的市场，损害其本国生产商的利益。但当前对中国存在巨额贸易逆差的是遥远的美国和欧洲，因此，亚洲邻国对中国经济崛起的担忧正在消退。世界银行旗下国际金融公司（International Finance Corporation）的首席经济学家斯道延。坦尼夫说，亚洲邻国的心态已经变了，它们现在认为中国的经济崛起对它们是个机会，它们可以从中受益。虽然许多亚洲邻国对中国的担心依然存在，但中国已越来越被视为一个商业伙伴，它的经济崛起能给别人带来利益。中亚是指位于中亚地区的哈萨克斯坦、乌兹别克斯坦、塔吉克斯坦、吉尔吉斯斯坦和土库曼斯坦五国。其自然资源丰富，但产业结构单一；原材料工业发展较快，但加工工业滞后，且重工业依赖出口，轻工业依赖进口。我国西北的新疆作为中亚和南亚弧形经济圈中心，独特的地缘优势，无疑成为我国与中亚经济合作承接地和聚合点。通过其与中亚的贸易，构建中国与中亚各国陆上资源大通道，成为我国建立全球资源供应体系中一个重要组成部分。除了地域因素，我国与中亚贸易也有互补性。据1995～2006年新疆统计年鉴，新疆出口到中亚的商品主要是棉纱、肠衣、鞋、服装类、家用电器、日常生活用品、机电产品、汽车、工程机械等。从中亚主要进口能源、原材料商品，如钢材、原油、化工产品、有色金属、废旧金属、非金属矿石、金属矿石、木材、畜产品、机械配件等。尽管中亚及其辐射地区的购买力比不上发达国家和地区，但因其消费结构的特殊性且消费水平较低，目前通过我国西北部的新疆基本上能够满足中亚从我国的进口需求。人民币升值可以改善我国与中亚的贸易条件。随着人民币汇率的升值，我国从中亚地区进口的能源、石油以及非金属矿的成本得到了改善。近些年来，我国政府主导的固定资产投资增长居高不下，从中亚等国进口的能源和原材料等初级产品所占比重大幅攀升。同时，我国经济的迅速发展导致进口需求的上升无疑在一定程度上提高了国际原材料、技术密集型产品的价格，进一步造成贸易条件的恶化。人民币升值将会降低进口产品价格，特别是原材料和高科技设备价格的降低，企业将会加速技术引进，提高生产效率，进行产品更新换代，实现产品动态比较升级。人民币升值可以优化我国与中亚贸易的商品结构。目前，我国的贸易结构还不是很合理，大多数企业都处在劳动密集型且技术含量不高的水平上，加工收益近80%被拥有高新技术的知名品牌的外国所有者所转移。通过人民币升值的手段，可以最有效率地把制造业中那些技术含量与附加值低的、管理不善地挤出去，这符合中国产业结构转变的发展方向。因为本国货币的持续升值让它们面临“优胜劣汰”的压力，从而不断激励企业创新、再创新。最终走向世界知名品牌之路。可见，人民币升值对于推动我国企业贸易结构调整并激发其自主创新，实现可持续发展具有重要意义。根据一般的经济规律，实际有效汇率的进一步上升会削弱出口。由于人民币对美元汇率的升值，会造成出口产品的美元价格的提高，直接影响出口产品的市场竞争力。因而会削弱我国对中亚地区的出口。但是，根据《人民币汇率升值与贸易余额实证分析——以新疆对中亚贸易为例》的资料显示，在1994～2005年人民币汇率持续升值的同时，新疆与中亚的贸易余额与人民币汇率存在负相关系。从人民币汇率与新疆对中亚贸易余额相关性的回归分析中，也同样证实了直接标价下的人民币对美元汇率与中亚贸易余额存在负相关系，即人民币对美元升值会引起新疆对中亚贸易余额加大。这是因为，虽然人民币对美元的名义汇率升值，但人民币的实际有效汇率是在下降。实际有效汇率不仅涉及一国主要贸易伙伴国货币的变动，且剔除通货膨胀因素，更全面反映一国货币的对外价值，也更准确反映一国相对于贸易伙伴国的竞争力。即一国实际有效汇率下降，该国产品国际竞争能力相对提高，贸易账户余额易出现顺差。此外，也不能忽视包括中亚在内的其他亚洲国家的货币对美元是否升值。第一，考虑调整出口退税率，减少对高能耗低附加值商品的出口补贴。第二，加强对短期资本流动的管制是降低人民币进一步升值的重要途径。对于像企业境外直接投资、大型中资跨国公司的全球资金调拨以及银行持有更多的海外资产等应逐步放宽，扩大国内企业和居民用汇的权利等。第三，降低人民币存款利率或提高贷款利率。存款利率应下调到使人民币的收益率低于其他国家货币如美元的收益率，从而有助于避免大量“热钱”流入我国，降低人民币来自资本项目盈余的升值压力；提高贷款利率会增加出口企业的成本从而会引起出口增长放慢，降低人民币来自经常项目盈余的升值压力。第四，适度控制、合理利用我国的外汇储备。合理利用我国充足的外汇储备，提高企业出口竞争力，这是应对人民币升值贸易冲击的关键。由人民币升值压力微观基础的分析可知，由于人民币升值压力很大程度来源于大量外汇储备，所以利用我国目前大量外汇储备来进口石油、粮食、矿砂和技术设备等我国紧缺资源和亟须技术，不但可以缓解大量外汇储备所累积的人民币升值压力，而且可以提高我国企业生产能力和整体素质，最终有利于对外国的产品出口，充分发挥人民币升值对我国贸易的有利作用。第五，循序渐进地改革人民币汇率形成机制。浮动汇率制度是我国汇率形成机制未来的改革方向，所以最终缓解人民币升值压力，保障我国对外贸易快速平稳发展，必须落实到汇率形成机制改革上来。

企业是以盈利为目的的，制造企业也不例外。制造企业要想健康发展就必须把生产出来的产品卖出去，赢取利润，只有赚钱的企业才会有好的发展。因此，目前在很多的制造企业当中就形成了这样的观念：市场营销是制造企业的核心竞争力。他们的论据很简单：产品生产出来，做得再好卖不出去赚不到钱，质量再好也没用；反之，即便是垃圾，通过合理的营销模式能够卖出去也是成功的。这种想法是有一定道理的，但是过分抬高市场营销的地位，会导致让树枝遮住了树干。在河南有一家水泵生产厂家，销售人员的数量与一线工人差不多，因为老板深信只要把产品卖出去就能让企业有发展。他们的销售人员全国各地跑订单，起初阶段，公司发展迅速，由于销售人员营销有道，接到全国各地很多订单，公司的生产规模很大，工人加班加点赶生产进度。然而，经过调查发现这家公司的利润却很低，原因何在呢？因为公司只注重生产进度，忽视了产品质量，致使产品的返修率很高，仅三包费用就已经相当于其全部利润。随着时间推移，公司的回头客越来越少，同时在行业中也产生负面影响。因此，制造企业在确定自己的企业发展目标的同时，就必须首先确定自己的核心竞争力，事实证明，产品质量的优劣直接决定着制造企业的发展，是制造企业的根本。只有确立了这个根本，再辅以良好的市场营销模式，企业才能够像大树一样茁壮成长，才能够健康发展。提高产品质量不能只停留在口头上，寻找适合企业的质量管理体系是企业发展的重中之重，是每个制造企业必须研究的课题。一般来说，制造业的产品质量控制包括以下部分：控制产品材料的质量，即毛料质量，它决定产品的最终质量；产品零件加工过程中的质量控制；产品组装过程中的质量控制；产品售后服务质量的控制。影响产品质量的因素应该包含职工的素质、加工设备的能力和生产管理的科学性。在这些因素中，加工设备的能力是相对固定的。而人是最重要、最灵活、起决定性作用的因素。提高员工质量意识和员工参与质量管理的积极性，对于质量管理体系的合理建立十分重要。合理的质量管理体系应该遵循六大原则：● 以客户为中心：企业依存于其客户，因此，企业应当了解掌握客户目前和以后对产品的需要，制定相应的措施，保证能够满足客户对于产品质量的要求。● 充分发挥领导的作用：领导者将本企业的宗旨、方向和内部环境统一起来，并营造使员工能够充分参与实现企业目标的环境。● 必须全员参与：各级人员是企业之本，只有他们的充分参与，才能使他们的才干为企业带来最大的收益。这也就是以人为本的管理理念。● 科学过程方法：过程的控制对于制造业来讲也就是要在生产过程中，充分合理的利用有效资源，包括设备资源、人力资源等等，创造最大的生产能力。● 科学管理的系统方法：要根据制造企业的实际情况制定合理的、行之有效的管理文件，来约束职工的质量行为。● 具有持续改进的特点：质量管理体系必须具有持续发展的能力，要随时根据市场状况以及企业自身的经营状况进行改进，持续的改进质量管理方式才是企业发展的保证。质量管理必须是全面的、全过程的、全员参加的。全面质量管理中的质量不仅包括一般质量特征，而且包括成本质量和服务质量，它不仅包括产品质量而且还包括工程质量、工作质量。全过程的质量管理包括：产品设计、各个加工车间的生产合理化安排、制造毛料的控制、工艺文件的合理化、加工设备的合理使用等，也就是从采购开始到产品出厂的全过程的质量管理。在这个过程中就要求全员参与质量管理。产品的质量是企业素质的综合反映，涉及全体部门和员工，提高产品质量需要靠全体员工的共同努力，质量管理人人有责，从企业的领导人员到每个员工，都要学习，运用科学质量管理的理论和方法，提高本职工作质量。全员参与指的是要推动全员参与，对全过程进行质量控制与管理。以人为本，充分调动各级人员的积极性，推动全员参与。只有全体员工的充分参与，才能使他们的才干为企业带来收益，才能够真正实现对企业全过程进行质量控制与管理，并且确保企业在推行全面质量管理过程中，采用系统化的方法进行管理。制定质量管理体系必须做好以下几个方面的工作：第一，强化员工质量意识。“人”在质量管理体系中处于主导地位，起着决定性的作用。所以对企业员工的“质量意识”提升就显得更为重要。那么什么是质量意识呢？质量意识是一个企业从领导决策层到每一个员工对质量和质量工作的认识和理解，这对质量行为起着极其重要的影响和制约作用。提高质量意识需要企业管理者和全体员工的共同努力。首先企业管理者要以质量为中心，将质量管理贯穿于企业发展的全过程，通过优质的产品和满意的售后服务，使企业快速发展壮大。此外，利用多种宣传形式，加大宣传力度、强化质量意识，使员工在头脑中牢固地树立“质量第一”的思想意识。让员工在宣传活动中既强化了质量意识，又加强了自觉性和责任心。纵观国内外成功企业可以看出：企业应在质量意识教育中，培植企业文化，增强职工的团队精神，才能真正把全面质量管理落实到实处，充分体现质量意识的内涵和意义。第二，制定标准化的工作体系，包括技术标准、检测标准、工作标准等。其中工作标准是指必须根据实际情况制定不同职工的岗位标准，使每位职工都能够各司其职，充分发挥职工能动作用。第三，掌握准确的质量信息。质量信息是反映产品质量和供、产、销各环节工作质量的数据、原始记录，以便在产品使用过程中形成的各种数据和资料，加以汇总、整理、分析而得到的情况。第四，制定合理的质量监督措施。质量监督包括企业内部的质量审查和经过专业质量审查部门的审查（ISO9001认证等）。质量管理体系文件编制工作结束后即开始生效，质量管理体系投入运行实施。要重点对员工进行教育和培训，掌握全面质量活动的程序管理要求，明确各自的职责和权限，提高员工执行质量管理体系文件的自觉性和责任感。质量管理体系运行控制机制示意图质量管理体系改进是产品质量改进的重要组成部分，是质量管理的主要目的之一，重点是提高质量体系的有效性和效率，为企业及其客户和其他受益者提供更多收益的质量改进活动。企业质量管理体系改进重点是：把满足客户的期望和需要作为推进质量体系改进的基本动力；改进质量体系在资源配置上要充分考虑知识、技术、手段的更新和满足动态管理的要求，在战略上确保质量体系能够更好地服务于企业获得长期成功的总体目标的实现，要把提高质量体系的有效性作为质量改进的主要目标。在质量体系改进过程中，应尽量减少损失，降低质量成本，增长经济效益，有效利用资源，发挥现有资源的使用效率。在经营思想上要强化“面向客户，让客户满意”的理念，明确以“长远发展”而不是“眼前利益”为宗旨，倡导“树立品牌”。通过“三全”质量管理体系的实施，企业可以从采购开始进行合理的控制，提高毛料的质量，在生产中就可以减少由于材料问题引起的废品，减少废品率，降低成本。同时通过“三全”质量管理体系的实施，企业可以在过程控制中，更好地调动广大职工的工作积极性，更合理地对人力资源进行配置，充分发挥每个人的能动作用，减少目前企业中常见的废岗、重岗现象，节约人力成本。在此过程中，由于合理使用加工设备，可以最大程度的发挥每台加工设备的加工能力，使生产过程更加的科学化，提高产品生产的效率。品牌战略是目前企业发展的一个非常热点的话题，树立自身品牌已经成为很多企业都在追求的目标。品牌，是广大消费者对一个企业及其产品过硬的产品质量、完善的售后服务、良好的产品形象、美好的文化价值、优秀的管理结果等所形成的一种评价和认知，是企业经营和管理者投入巨大的人力、物力甚至几代人长期辛勤耕耘建立起来的与消费者之间的一种信任。而质量是品牌的本质、基础，也是品牌的生命。只有优秀的产品质量作为基础，才能够树立起优秀的品牌。通过“三全”质量管理体系的实施，制造企业可以达到利用科学的质量管理文件规定职工工作范围，提高职工工作积极性，提高职工工作效率、合理利用设备能力，控制生产全过程中的产品质量和工作质量，从而提高产品的最终质量和对客户的服务质量的目标。产品质量有了保障，就能够在行业中树立企业良好的口碑和企业品牌，也就是以产品质量树立品牌。制造企业的核心竞争力不只是体现在生产的产品质量上，还有诸如售后服务等其他方面。如果每个部门每位员工都能够注重自身的工作质量，也就在不同的范围内帮助企业提高了竞争力。比如：接待部门工作质量有了保障，在客户到企业进行考察的时候能够感受到亲切的接待，给客户留下良好的第一印象；财务部门提高工作质量，能够更好地提供合理的财务数据，是企业能够更准确地进行定位；售后服务人员提高自身的工作质量，能够更好的为客户提供周到的售后服务，解除客户的后顾之忧。这些方面的质量控制，能够使企业更好地找准市场定位，为客户提供满意的服务，无形中提高了企业的市场竞争力。产品质量是制造企业的生命，是核心竞争力，制造企业必须把提高产品质量作为企业发展的前提，因此，必须制定合理有效的质量管理体系并在企业中逐步实施，制造企业也必将能够从根本上提高产品质量，形成质量品牌，提高竞争力，企业也就会得到更好的发展。

市场经济最突出的特点之一就是竞争。而人才是竞争的核心，培养一支稳定的、有强烈进取心和创造性的员工队伍是一个企业发展的基石。要想在现代社会竞争中取得优势，企业就必需要储备大量人才，而且要对人才进行有效的管理和开发。因此，人力资源的开发管理在现代社会中具有十分重要的意义。然而，由于传统计划经济形成的旧的管理模式的影响和轻程序、轻理性的中国文化的积淀，国有企业在人力资源管理理念和操作方式上，均处于初级的层次。因此，对目前大多数国有企业而言，更重要的就是要进行规范化的人力资源管理体系建设。人力资源管理是现代管理的重要内容。所谓人力资源管理是指将组织内的所有人力资源作适当的获取、维护、激励以及活用于发展的全部管理过程与活动，亦即以科学的方法使企业的人与事作适当的配合，发挥最有效的人力运用，促进企业的发展。简单地说，人力资源管理就是企业对人的管理，也就是企业通过工作分析、人力资源规划、员工招聘选拔、绩效考评、薪酬管理、员工激励、人才培训和开发等一系列的手段来提高劳动生产率，最终达到人与事配合，事得其人，人尽其才的一种管理行为。由于人在整个社会经济活动中的支柱作用，决定了人力资源管理在社会经济管理体系中的关键地位。管理学中的激励理论往往以人的需要为基础，对激励的过程进行深入细致的研究，确定影响因素，寻找科学的激励方法，旨在提高激励结果的有效性，充分调动员工的工作积极性。激励就是指挥棒，激励什么，员工就重视什么。没有激励，没有优胜劣汰，没有奖惩，人力资源就无法发展，无法创造生机与活力。有效的激励竞争可满足人才的各方面需要，尤其是高层次的精神需要，使得个人的要求、发展与企业的发展战略紧密相连，极大地调动人才的积极性与创造性，实现个人与企业目标共赢。管理者应结合企业的不同情况采用不同的激励机制，做到物质激励与精神激励、短期激励与长期激励、管理激励与自我激励有机结合，积极营造一种良好的激励环境，激发、鼓励人才充分发挥自己的积极性、主动性和创造性，展示自己的潜能。报酬就是企业对员工为企业所做的贡献（包括他们实现的绩效、付出的努力、时间、学识、技能、经验与创造）所付给相应的回报或答谢。报酬在人力资源管理中对吸引、留住和激励人才起到重要的作用，会大大提升企业的竞争实力，具有增值功能、激励功能、导向功能、帮助员工实现自我价值的功能。报酬主要包括经济性报酬和非经济性报酬。经济性报酬是与经济有关的各类报酬，包括工资、薪水、佣金、奖金等直接经济报酬及各种福利、保险等间接经济报酬。非经济性报酬是指个人对工作或工作环境在心理上或物质环境上的满足感，诸如社会地位、成就感、发展机会、弹性工作制之类，包括工作本身和工作环境两个方面。人力资源管理与企业效益之间的关系不是来自抽象的理论概括，而是来自企业里每个人实实在在活动的结果，即来自企业员工个人的具体工作以及他们之间相互结成的关系。人力资源管理活动本身所产生的效益和费用支出，对企业效益产生了直接的贡献或者损害，这是人力资源管理对企业效益直接的作用结果：有效的人力资源管理政策和活动，促使员工工作效率的提高、生产或服务的质量提高和改善以及跳槽率的降低等所导致的企业收益提高或成本降低，是人力资源管理对企业效益的间接作用过程。人力资源管理目标是根据企业总体目标来确定的，人力资源管理部门再根据目标确定企业人力资源管理的政策和活动，通过人力资源管理效益实现企业效益。我国国有企业由于先天不足，对如何引人、育人、用人、留人，如何全面提高员工的积极性和工作效益，尚缺乏足够的认识和有效的措施。主要体现在以下几个方面。改革开放以后，虽然许多国有企业已经逐步认识到人力资源管理在企业经营活动中所创造的价值，但是相当一部分企业只是形式上的改动，换汤不换药，与原来无实质性的差异，从用工制度、人事制度、分配制度到企业经营者的任用制度基本沿用传统的方法。大多数企业的人力资源管理还处于以事为中心，把人视为一种成本，只注重使用和控制，不注重投入。在选人、用人的观念上，计划经济的用人模式和思维习惯依然存在。在大多数企业，根本没有设立专门的人力资源管理机构，而是把人力资源管理任务委托于企业长期以来设立的人事管理部门，即使设立人力资源管理机构，也没有赋予其相应的职责：绝大多数企业人力资源部门的绝大部分日常工作仍然在围绕诸如人事考勤、档案管理、薪酬福利管理、人员配置、绩效考评等事务性工作来开展，对人力资源发展规划、员工发展、政策制定完善、促进组织变革等方面的战略性工作很少顾及。我国大部分国有企业不重视员工的培训和继续教育工作，还没有把人才培养看成是知识经济时代最主要的基本建设，企业的人才培训还没有和员工的敬业爱岗、管理能力、创新精神以及自身价值等综合为一个整体去统筹考虑，还没有树立“日常管理是培训”、“终身接受培训”的观念。有的企业即使有一些培训，但培训内容的科技含量不高，也缺乏具体的要求，缺少具体的激励机制，使得教学形式单一，缺乏多样性，培训往往走过场，并不注重实效，随之而来的是员工创新动力不足，造成人才大量流失。国企人力资源管理水平明显偏低，主要表现在：管理观念陈旧，缺乏科学的人力资源管理；吸引人才机制严重滞后，企业因害怕人才流动，并设置种种障碍以尽可能减少人才流失；企业过分依赖人才管理，忽视制度管理，甚至连人事部门也缺乏制度化的规范管理；人才激励机制不健全，管理人员在实施激励机制的过程中不能有效地调动员工的积极性，对员工长期激励的措施不够，忽视了约束与激励相结合，造成人才大量流失。“人是管理工作的核心和动力，是企业在日趋激烈的竞争中立于不败之地的重要保证。”人才是企业经营的重点，唯有企业或组织拥有优秀人才，企业才有可能生机不断。国企要生存要发展，就必须树立人力资源是第一资源的思想。人本管理思想正是以人为中心的管理思想。主要体现为充分尊重知识，尊重人才；把人作为企业最重要的资源，在工作中充分考虑到员工的成长和价值。使员工的利益得以最充分的体现。企业有了这种方针，才能谈得上运用科学的管理方法，进行全面的人力资源管理与开发。随着社会的进步和人们受教育程度的不断提高，人和企业之间的关系变得越来越紧密，并且不断地向更为合理的方向演变。人力资源管理策略中的一个重要体系就是激励体系。第一，加强物质激励。物质激励体现企业对人的创造性劳动、对社会所作贡献的一种酬劳和补偿。第二，加强精神激励。精神激励是企业对人才所作贡献的一种表彰和宣扬。企业通过各种形式的认定、宣传和褒奖，使人才获得荣誉感、成就感和责任感，并用尊重和企业精神来激励员工，发挥榜样的激励作用。第三，加强情感激励。情感激励就是以个人与个人或组织与个人之间的感情联系作为激励的手段，通过调节人的情绪系统，实现激励的目的。第四，企业根据其特点而采用不同的激励机制。激励是一种催化剂，但用得过多，就成了滥奖，其负效应会妨碍员工的竞争活力，达不到预期得目的。第五，建立良好的激励机制的同时形成有效的约束机制，使企业对员工的激励是约束中的激励，是基于责任的激励。绩效管理是实现人力资源管理的前提之一，也是一个企业管理的缩影，从一个侧面反映了企业的经营哲学和价值观。绩效评估可以为企业的各项人事决策提供客观依据，同时能加强组织的团队建设，提高管理效率。一个完善的绩效管理体系有如下五个构件：第一，设定绩效管理的目标；第二，持续不断的沟通过程；第三，记录员工的绩效表现，形成管理文档；第四，绩效考评；第五，绩效管理体系的诊断和提高。这五个构件既是绩效管理体系的组成部分，又是绩效管理体系的流程。一个完整的绩效管理体系必须同时具备上述五个构件，缺一不可。第一，建立以市场为导向的薪酬管理机制。引入市场价位机制，调整分配关系。新的分配制度参照劳动力市场价位，重点向关键管理、科研技术岗位以及企业主体生产岗位倾斜。第二，建立以岗位工资为主要形式的工资制度，明确岗位职责和技能要求，实行以岗定薪，岗变薪变。第三，在坚持效率优先分配原则的同时，兼顾职工的历史贡献。对于老职工将体现职工历史贡献的技能工资和工龄工资合并为保障工资，充分兼顾了职工的历史贡献。对于新职工，可直接将当地最低生活水平线作为保障工资。第四，加大绩效考核力度，将员工的工资分配直接和个人工作绩效挂钩，除保障工资和部分岗位工资外，将其他工资全部列入考核范围，加大考核发放工资的比重。这样就将单位的实际经营状况传递给员工，并以员工胜任工作岗位的能力和在工作中的表现为价值导向，将月度考核结果和员工收入挂钩。职工的培训和发展是企业人力资源管理与开发的一个重要内容。员工的教育培训能够实现其自身价值，也是有效提高劳动生产率的途径。加大员工培训力度，企业首先要对人力资源工作者进行培训。由于人力资源工作者的自身素质和专业知识及技能决定着他对人力资源管理的认识，企业要树立提高本企业的人力资源素质的前提首先要提高人力资源工作者的自身素质。其次，培训应有全面的计划和系统的安排，将教育培训与员工的考核、提升、晋级有机地结合起来，以提高员工参与培训的积极性。对那些有发展潜力的员工，培训的目的就使为了让他们担负起更重要的工作。再次，要把培训与业务考核结合起来。业务考核和培训的目的都是为了让员工更好地工作，所以，二者的目的是一致的，把二者有机地结合起来，有利于增强培训的效果，有利于人才的成长。最后，要把培训与工作需要结合起来。对员工培训必须结合每个员工的工作需要、每个员工的能力，采取因人而异、因材施教的原则进行。同时，要加强一线员工的培训，提高一线员工的知识技能，而不能只培训高层管理人员。要培养企业良好的人际关系和亲和的文化氛围。良好的人际关系，有利于沟通，使人心情愉快；亲和的文化氛围，有助于凝聚人心，培养团队精神和力量。企业文化的核心内容，主要是指企业内部具有明确统一的思想、意识、精神、信仰和价值观。企业文化所蕴含的管理哲学和企业核心价值形成的企业人格，对于企业的经营行为起着至关重要的作用。企业文化建设和管理的实质是贯彻“以人为本”的人本思想，良好的人际关系和亲和的文化氛围仅仅是企业文化重要内涵的体现。始终爱护人，尊重人，承认人的劳动和做出的成绩，构建企业上下左右良好的沟通系统，让人才了解和参与企业的决策与管理，并切实为他们提供各种必要的保障，增强他们的认同感、归属感和忠诚心，让他们毫无怨言地努力与奉献，才是抓住了企业文化建设的“本”，才能从根本上稳定人心，留住人才。职业生涯是指一个人一生中的所有与工作相联系的行为或活动，以及相关的态度、价值观、愿望等连续性的经历的过程。职业生涯规划是指组织建立职业通道，针对组织成员各自的才能与个性制定定向培养计划，以适应各工作岗位的需要，帮助人才充分发挥自己的潜能，达到应有的职业生涯高峰。有效的职业生涯规划要求人才的个人需要与组织需要之间相互结合。在人才的整个职业生涯中，个人与组织双方均处于一个不断变化的环境中，二者需要相互匹配是个动态的过程。如果匹配过程能够有效地进行，人才就会很好地融入组织，组织得到人才的忠诚、合理利用与开发人才资源与潜能，组织绩效提高，人际关系改善，人才个人将能较好地管理自己的职业生涯，实现个人与组织的最佳配合，个人才能充分发挥，态度与价值观较好地实现，个人在管理阶梯上步步高升。通过职业生涯规划，让人才走上发展之路，是企业送给人才最好的礼物，因而也是留住人才非常有效的方式。国有企业应从根本战略上重视人力资源管理，从长远发展着眼于管理体制的变革和人力资源工作的推行。国有企业只有开放思维，采取先进的人力资源开发与管理方法，从大处着眼，建立科学、理性的制度系统，再逐步根据企业具体环境加以变通和灵活应用，同时改革落后的机制，建立规范的价值评价和分配系统，设计合理的薪资结构、报酬体系，明确员工发展路径，国有企业就一定可以从根本上形成吸引人才、凝聚人才、培养人才的企业氛围，从而增强企业的竞争力。

利用植物有益内生细菌进行植物病害生物防治和提高作物产量是当前农用微生物研究的一个热点。在我国，以植物有益内生细菌为主体的植物微生态制剂已经进入田间的农业生产应用，取得了良好的经济和生态效益。细菌在植物上发挥其功能的关键是细菌可以在作用部位很好的定殖。研究发现，在细菌与植物相互作用时，会引起该区域的氧自由基浓度的急剧升高；同时植物也会代谢分泌出一些酚类物质，这些物质都会产生氧自由基[1，2]。在该环境中定殖的细菌必须克服这种氧自由基对细胞的毒性。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）是细胞抗氧自由基毒性的一种关键酶。SOD广泛存在于生物体内，催化O·2歧化为H2O2 和O2。按照结合的不同金属离子，SOD主要分为Mn-SOD、Fe-SOD和CuZn-SOD[3]。其中，Mn-SOD和Fe-SOD在细胞体内发挥功能，而CuZn-SOD定位在胞壁空间或者胞外以清除细胞膜外的氧自由基[4]。Bacillus cereus 905是本研究室从小麦体内分离获得的一株具有很好的促生和防病效果的细菌，在小麦体内及根围定殖能力强。为分析其定殖的分子机制，根据已公布的蜡样芽孢杆菌的全基因组序列及本实验室已获得的B.cereus M22的CuZn-SOD基因[5]，推测在B.cereus 905中也存在CuZn-SOD基因。本研究试图从氧自由基毒性角度探讨CuZn-SOD在细菌与宿主相互作用时发挥的重要功能。比对Genbank发表的几个B.cereus菌株的CuZn-SOD基因序列，根据两端高度保守的序列设计引物，利用PCR方法扩增B.cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，化学抑制法验证蛋白种类。以B.cereus 905的基因组DNA为模板进行PCR，得到了B.cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。该基因由537 bp组成，编码179个氨基酸残基。根据该蛋白的分子量大小和pET-22b载体中的多克隆位点上游pelB前导序列和下游His-tag序列，预测表达出的蛋白大小约为23kD。序列比对发现其与B.cereus M22同源性高至96%[5]，BLAST结果也显示其与其他的几株蜡样芽孢杆菌的CuZn-SOD基因的同源性在90%以上。在sodC推定的179个氨基酸残基中，甘氨酸（G）含量最高，达到12.29%（22/179，mol/mol），且在序列中均匀分布。在推定氨基酸序列中，不含酪氨酸（Y）和色氨酸（W），这与其他CuZn-SOD序列特征一致。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，NBT反相染色后，较未诱导样品相比，诱导后的细胞裂解液出现一条明显的亮带，表明该基因表达出的蛋白表现出SOD活性（图1）。SOD酶活测定也发现诱导后细胞裂解液的SOD酶活有了显著的提高，化学抑制法得出诱导出的SOD蛋白经KCN和H2O2处理后，其活性受到很大程度上的抑制，而氯仿/乙醇对其活性没有影响，确定了诱导表达出的蛋白为CuZn-SOD（图2）。Figure 1 Enzymatic activity tests of E.coli BL21(pET-22b-sodC) by Native-PAGEFigure 2 Identification of CuZn-SOD with chemical inhibitant methods超氧化物歧化酶普遍存在于所有的需氧生物中，从最低等的原核生物到高度复杂的人脑，都存在SOD的防御反应。B.cereus 905是一种植物内生细菌。有数据发现在细菌与植物互作及植物体内都可能有超氧阴离子的存在。B.cereus 905很可能依靠其CuZn-SOD的活性清除胞外的氧自由基以保证该细菌可以在植物体内很好的定殖。作为非病原菌的植物内生细菌，CuZn-SOD可能在其侵入及定殖过程中扮演着重要角色，更明确的结论需要下一步基因缺失后的定殖能力的比较分析。

灰霉病（gray mold）是番茄生产中一种重要的气传病害，其病原为灰葡萄孢属（Botrytis cinerea）真菌，寄主范围广，再侵染频繁，为害严重。化学防治仍是目前生产中防控该病害的主要手段，其中以甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为代表的呼吸作用抑制剂近年来在灰霉病防治实践中显现出了良好的防效，而线粒体作为真核细胞呼吸作用的主要场所，在线粒体上合成的ATP提供了细胞生命活动所需的大部分能量。为此，进行高纯度线粒体的分离对于开展呼吸抑制剂类杀菌剂的作用机制研究[1～5]具有十分重要的意义。至今，从病原真菌中分离获得高纯度线粒体的方法尚不成熟，国内外一般采用从动物或高等植物中分离得到的线粒体作为替代品来进行研究。本研究拟借鉴相关研究[6～7]方法，采用机械破壁及差速离心的方法从番茄灰霉病菌中分离获得线粒体，并对其进行呼吸测定，以确证获得的线粒体是否具备完整的结构和功能。现将研究结果报道如下。1.1.1 番茄灰霉病菌（B.cinerea）菌株NJ-9，由中国农业大学植物病理学系种子病理学和杀菌剂药理学实验室提供。1.1.2 供试药剂 α-酮戊二酸，NADHNa2（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐）为Roche公司产品，ADPNa2（5′-腺苷二磷酸二钠盐）为Sigma公司产品。线粒体分离液的配制[9]：0.5mol/L 蔗糖，5mmol/L半胱氨酸，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.3%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.1mol/L（pH值7.4）磷酸盐缓冲液；线粒体保持液（洗液）的配制[9]：0.5mol/L 蔗糖，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.3%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.1mol/L（pH 7.4）的磷酸盐缓冲液；线粒体呼吸测定的反应液[9]：0.5mol/L 蔗糖，10mmol/L KCl，5mmol/L MgCl2，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.1%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.01mol/L（pH 7.2）的磷酸盐缓冲液。1.1.3 菌体的培养 将浓度为8×106个/ml的孢子悬浮液接种到1L的复合盐液体培养基（SSY）[9]（10g可溶性淀粉，2g KH2PO4，1.5g K2HPO4，0.5g MgSO·7H2O4，1g（NH4）2SO4，2g 酵母粉，1L去离子水，pH 6.2）中，置于23℃，150rpm条件下摇培24h。1.1.4 供试仪器 Oxytherm氧电极（Hansatech Instruments Ltd.），DHZ-D冷冻恒温振荡器（江苏太仓实验设备厂），高速低温离心机（Beckman Coulter AvantiR J-E）。1.2.1 灰霉病菌孢子的获得 将菌株NJ-9接种至MEA（麦芽糖20g，酵母粉5g，琼脂粉14g，1L去离子水）培养基上，25℃下黑暗培养5～7 天后，放置于日光灯和长波长紫外灯（黑光灯）下，12h轮流交替照射7～14天，产生大量的分生孢子，备用[8]。1.2.2 线粒体的分离 通过真空抽滤的方法收集幼嫩菌丝，依次用4℃的去离子水冲洗两次，再用线粒体分离液冲洗。随后各操作中所用的器材必须在4℃下经过预冷处理，操作过程均需在0～4℃下进行。将用线粒体分离液预洗得到的菌丝悬浮在3倍体积的分离液中，分别采用以下两种方式进行破碎细胞壁：（1）杵状玻璃匀浆器法：每30～40g菌丝用100ml的分离液悬浮，用杵摩擦20次左右，混合到匀浆物均一、平滑即可。每次时间不要超过2～3min，整个样品处理的时间不要超过30min。立即将得到的匀浆物倒入50ml的离心管中，于2000g离心25min，取上清液于7000g转速下离心20min后取上清液于12000g再次离心15min，最后小心弃去上清，沉淀即为分离到的线粒体，外观为浅黄色胶状物。将线粒体悬浮在200μl的线粒体保持液中，置于冰上备用，放置时间不能超过3～4h，避免线粒体的降解。（2）高速组织匀浆器法：采用高速组织匀浆机（恒定功率220W），破碎菌丝，每次破碎时间15s，破碎3次，中间的隔1min（防止匀将机刀口发热影响线粒体的分离，将匀浆物用双层预冷的湿纱布快速过滤，过滤的时间不要超过30s，立即将匀浆物倒入50ml的离心管中，于1200g下离心20min；取上清于6000g离心20min后再取上清于12000g离心15min，小心弃去上清，沉淀即为分离到的线粒体。1.2.3 氧消耗量的测定 采用极谱法在25℃条件下使用Oxytherm氧电极进行测定，标准反应液2ml，加入线粒体50μl（蛋白质的含量大约为0.3mg），反应液中氧饱和的最大浓度是226μmol/L，所有的底物都溶解到反应液中，依据Estabrook[10]的方法计算RCR和P/O值。提取过程保持0～4℃低温条件下，杵状玻璃匀浆、高速组织匀浆两种破壁方法均可从番茄灰霉病菌幼嫩的菌丝中分离得到紧密偶联的线粒体。全玻璃杵状匀浆器手工破壁操作耗费人力，需要的菌丝量较少，从10g到几十克湿重菌丝都能分离到完整的线粒体。通常60～80g湿重菌丝即可以分离得到满足试验需要的线粒体。高速匀浆器省力快速，但是在匀浆器高速转动时易产热可导致分离物的降解，操作过程中持续时间不能过长，必要时应使用循环冷却水降温或置于低温环境下操作；同时该法需要的菌丝量也较多，以50g 以上的湿重菌丝为宜，菌丝量少时容易在破碎过程中使线粒体结构受到破坏，从而影响提取效果。番茄灰霉病菌线粒体的底物利用，呼吸控制率和磷氧值测定结果见表1。当以外源的NADH和α-酮戊二酸作底物被氧化时，状态3（在线粒体中加入底物及ADP后测定的线粒体呼吸速率）的呼吸数率明显增加，反映了在ADP刺激下线粒体功能增强的程度；两种底物的呼吸控制率（RCR）值都在3.1～3.3之间，高的呼吸控制率值表明线粒体中电子传递与氧化磷酸化紧密偶联；加入NADH做外源的呼吸底物时，磷氧比值（P/O）是1.3～1.7，表明有2个氧化磷酸化位点，即ATP生成有两个部位；α-酮戊二酸的磷氧比值（P/O）是2.2～2.5，表明有3个氧化磷酸化位点，即ATP生成有3个部位。图1表示两种破壁方法获得线粒体在外援NADH电子供体下呼吸特征图。以上研究结果表明分离的高纯度线粒体具有在活细胞中对等的生物功能，可作为线粒体生物学研究的适宜材料。MethodsofdisruptionSubstratesState3respirationrates(nmolO2/min)(mgprotein)Respiratorycontrolrations(RCR)ADP/OrationsAll-glassNADH90.16±203.8±0.11.7±0.2Potter-Elvehjemhomogenizerα-ketoglutarate175.43±453.3±0.62.2±0.1AwaringNADH118.96±303.5±0.71.3±0.1blendorα-ketoglutarate198.17±653.1±0.52.5±0.2Table 1 Respiration properties of mitochondrial isolated from mycelia of Botrytis cinereaaFigure 1 oxidation of NADH and α-ketoglutarate by mitochondrial isolated from mycelial of B.cinerea, Concentration of substrates were 10mmol/L α-ketoglutarate,2mmol/L NADHNa2, the ADP concentration was 200μmol/L and reaction were carried with 0.2~0.4mg mitochondrial protein本研究获得以下结论：（1）采用杵状玻璃匀浆器和高速组织匀浆机两种机械力可以有效破碎番茄灰霉病菌的细胞壁，借助梯度离心可以实现番茄灰霉病菌线粒体的有效分离；（2）使用本方法获得的番茄灰霉病菌线粒体结构完整、功能齐备，具有在活细胞中对等的生物功能，可作为线粒体生物学研究的适宜材料。（3）B.cinerea在培养液中生长很缓慢，选取生长代谢最旺盛的菌丝，有利于线粒体的分离。目前常用的破碎细胞方法包括传统的机械法（如匀浆、研磨、压榨、研磨、超声等）和非机械法（包括酶溶、冻融、化学等），都有其适用范围和优缺点，选择的原则是该方法不影响目标蛋白和产物的结构和功能。本文除采用上述两种机械破壁方法外，也曾尝试过超声波破壁方法以及采用蜗牛酶和纤维素酶进行酶解处理以获得原生质体的方法，但均没有获得理想的结果，推测可能与真菌细胞壁较厚，或使用的降解酶的降解特点有关。有关线粒体生物学和呼吸动力学的研究报道[9]表明，RCR 比ADP/O比值更能反映线粒体功能的完整性和氧化磷酸化的效率，ADP/O值是指线粒体每吸收一克原子氧的同时，生成ATP 的克分子数的比值，它反映线粒体的能量转化效率。RCR是表征线粒体结构、功能完整性及氧化磷酸化效率的指标。本文研究表明外源的NADH仅有2个氧化磷酸化位点，即只能生成2个ATP，然而，有文献报道[11]灰霉病菌的线粒体在氧化NADH的电子传递链中有3个磷酸化位点。因此，需要进一步研究不同的呼吸抑制剂和氧化磷酸化抑制剂在灰霉菌线粒体的电子传递链的各种抑制效果。