本文以甘蓝型油菜一个抗病毒品种和一个感病毒品种为试材，利用转基因手段进行了油菜抗病毒病相关研究。利用乙烯、甲基茉莉酸、水杨酸类似物苯丙噻重氮3种化学物质诱导处理油菜叶片，提取处理前后各材料的RNA，标记探针后与拟南芥芯片进行杂交，通过对基因表达谱的分析，获得与抗病性相关的基因，从中选择3个与病毒抗性相关的基因BNP5、BNP7和BNP10。其中BNP7和BNP10为全长序列，BNP5 5'端部分序列缺失，通过5'-RACE的方法获得该基因全长序列，分别构建3个植物过表达载体pGA5、pGA7和pGA10和3个RNAi载体pGR5、pGR7和pGR10（过表达和RNAi载体均带有除草剂抗性基因bar）。采用本实验室发明的高通量花蕾原位转化法分别对所选材料进行转化。转基因当代植株收获的种子播种以后，幼苗期喷施除草剂进行筛选，并经PCR鉴定，存活幼苗80%以上为阳性植株。目前正在进行阳性植株T1代幼苗病毒抗性鉴定及相关的后续实验。

植物生产在产前、产中、产后都受到环境条件和病原微生物及附生微生物的影响，在适宜的条件下植物及其产品都会产生病害，严重影响到植物及产品的产量和品质。联合国在1975年第七次特别会议就通过一项采后损失的决议，来要求一些国家重视减少采后损失的问题。但化学防治也带来了一系列生理生态问题，如农残、药害等现象得到了人们的充分重视，绿色食品、有机食品成为人们的关注对象。生物防治在这种情况下应时而生。为了生产“绿色食品”的需要，安徽省农业科学院绿色食品研究所在研制对人体无毒的植物源农药、兽药，获得了实验室产品“绿液”。“绿液”在动物上对鸡新城疫I系病毒、马立克氏火鸡疱疹有良好的防治效果；在医药上，对格兰氏阴性菌、格兰氏阳性菌、链球菌、乳杆菌、大肠杆菌、兼性厌氧菌，口腔中的梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、小韦荣氏球菌、放线菌、罗氏普氏菌、产黑普氏菌均具有杀灭作用。此外，对乙肝病毒中的HBSAg具有灭活作用，对菱孢774亦有抑制作用；在植物上对水稻白叶枯病、稻瘟病、烟草花叶病毒、芫菁花叶病毒均有防治效果，在食品上对酵母菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌均有抑制作用。为此，本文研究了生物制剂“绿液”对采后主要病原菌的抑制作用，以期为采后病害防治提供新途径。“绿液”，由安徽省农业科学院绿色食品研究所提供。苹果轮纹菌（Physalospora piricola Nose），苹果炭疽菌（Gloeospirium fructigenum Berk），青霉菌（Penicillum sp.），草莓灰霉菌（Botrytis cinerea），黄曲霉菌（Aspergillus flavus），由安徽农业大学植物保护学院提供。将“绿液”原液分别配成一定浓度的母液，然后分别吸取2ml至培养皿，把冷却到45～50℃的PDA培养基18ml加入含药剂的培养皿中，混匀凝固，配成相应浓度分别为0.10μg/ml、0.33μg/ml、0.65μg/ml、1.00μg/ml、3.33μg/ml、6.54μg/ml、10.00μg/ml、100.00μg/ml和1000.00μg/ml的含药平板。每皿移接一枚直径为0.6cm的供试病原菌的菌碟于其中央，置25℃光照培养箱中培养，重复3次，逐日定时定点在菌丝生长前沿划线，按十字交叉法测定菌落直径。计算药剂对菌丝生长的相对抑制率。按最小二乘法求回归式，计算EC50。结果见表1。可以看出在低浓度下，苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、青霉菌、黄曲霉菌的菌丝生长抑制率都为负值，苹果轮纹菌在“绿液”浓度为1.00μg/ml时，才对苹果轮纹菌有抑制作用；苹果炭疽菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时，才对苹果炭疽菌有抑制作用；烟青霉菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时，才对青霉菌有抑制作用；黄曲霉菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时，才对黄曲霉菌有抑制作用。从而说明“绿液”在低浓度下对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、青霉菌和黄曲霉菌有促进生长的作用，在高浓度下才有明显的抑制作用。相比较而言，“绿液”对草莓灰霉菌的抑制效果最好，在低浓度下就能抑制草莓灰霉菌的菌丝生长。在高浓度下，“绿液”对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌和草莓灰霉菌的抑制效果最好，在“绿液”浓度为100μg/ml与1000μg/ml时对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌和草莓灰霉菌的抑制率达到100%；而对烟青霉菌和黄曲霉菌是抑制作用就相对较差，在“绿液”浓度为1000μg/ml时对烟青霉菌的抑制率为50.6%，对黄曲霉菌的抑制率为54.0%。结果见表2。“绿液”对草莓灰霉菌的抑制效果最好，EC50为2.18μg/ml；对苹果炭疽菌和苹果轮纹菌抑制效果较好，EC50分别为3.97μg/ml和7.39μg/ml；“绿液”对青霉菌和黄曲霉菌的抑制效果也较差，EC50分别为982.06μg/ml和472.79μg/ml。浓度（μg/ml）苹果轮纹菌苹果炭疽菌烟青霉菌草莓灰霉菌黄曲霉0.10-23.3-2.60-6.801.00-10.80.33-18.5-0.70-3.101.90-4.300.65-9.603.707.409.205.401.008.9011.011.711.210.23.3317.034.112.345.018.36.5423.759.719.891.023.410.0023.779.927.295.128.1100.00100.0100.029.0100.032.41000.00100.0100.050.6100.054.0表1 不同浓度对各菌种的菌丝生长的抑制率菌株回归方程相关系数EC50（μg/ml）苹果轮纹菌Y=2.5992lgx+2.74120.91417.39苹果炭疽菌Y=2.4640lgx+3.52530.99193.97烟草青霉菌Y=0.4198lgx+3.74390.9623982.06草莓灰霉菌Y=2.1732lgx+4.26460.98482.18黄曲霉菌Y=0.4709lgx+3.74050.9540472.79表2 绿液对不同病原菌的毒力作用从试验结果可以看出，“绿液”对草莓灰霉菌、苹果轮纹菌和苹果炭疽菌的作用效果明显，EC50分别为2.18μg/ml、3.97μg/ml和7.39μg/ml；而对烟草青霉菌和黄曲霉菌的抑制作用最差，在“绿液”溶液浓度为1000μg/ml时对青霉菌的抑制率才达50.6%，对黄曲霉的抑制率达54.0%。此外“绿液”溶液在低浓度的时候对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、烟青霉菌和黄曲霉菌的菌丝生长不仅没有抑制作用，还对其菌丝有促进生长的作用。因此，在应用“绿液”时应注意浓度的使用。“绿液”在低浓度下对病菌生长的促进作用以及在较高浓度下对病菌的抑制作用机理有待于深入研究。

灰霉病是番茄栽培中的重要病害，长期依赖农药防治该病严重污染环境和产品。利用诱导抗性是植物病害可持续控制的一条有效途径。E.A.Achuo和K.Audenaert等用适宜浓度的BTH处理土壤或叶片，显著降低番茄灰霉的发病程度[1]。众多研究表明，诱导植株下位叶片，可增强诱导叶和其上非诱导叶的抗病性[2～4]；而诱导上位叶片对诱导叶及其下位非诱导叶的抗病性的影响鲜见报道。本试验比较了5种化学物质诱导不同部位叶片对番茄灰霉病发生程度的影响，为诱抗剂的使用技术提供参考和依据。番茄品种为L402，灰霉菌（Botrytis cinerea）由田间分离所得。供试化学物质分别为：CaCl2（Calcium chloride，Ca），上海化学试剂公司生产；水杨酸（Salicylic acid，SA），沈阳化学试剂厂生产；茉莉酸甲酯（Methyl jasmonate，MJ）、龙胆酸（Gentisic acid，GeA）和β-氨基丁酸（3-Aminobutyric acid，BABA），购自Sigma公司。番茄穴盘育苗，苗期管理与一般生产相同。6叶期用20mmol/L的CaCl2，3mmol/L的SA、MJ、GeA和9mmol/L的BABA涂抹第3叶片（下位叶）或第5叶片（上位叶）。5天后用浓度为106个孢子/ml的灰霉菌孢子悬液接种第4真叶的前5片小叶，接种方法采用微量注射法[7]。接种后第5天调查发病程度并计算病指数。病害分级标准为：0级，无病斑；1级，病斑面积占叶面积5%以下；3级，病斑面积占叶面积5%～15%；5级，病斑面积占叶面积15%～25%；7级，病斑面积占叶面积25%～50%；9级，病斑面积占叶面积50%以上[7]。每处理3次重复，数据均用SPSS软件进行统计分析。无论是诱导第3叶片还是第5叶片，番茄灰霉病发生程度均显著低于对照。其中CaCl2、SA和GeA 诱导第3叶片和诱导第5叶片，番茄灰霉病发生程度之间没有显著差异；而MJ和BABA诱导第3叶片番茄灰霉病发生程度显著低于诱导第5叶片的发病程度（图1）。这一现象说明，CaCl2、SA、GeA、MJ和BABA诱导番茄的抗病信号既可以向上传递，也可以向下传递；而CaCl2、SA和GeA诱导的抗病信号向上和向下传递的能力相同，MJ和BABA诱导番茄的抗病信号向上传递能力高于向下传递能力。Figure 1 Disease index after induced leaves at different positions of tomato试验结果表明，CaCl2、SA、GeA、MJ和BABA均可诱导番茄抗病性增强，而且诱导的抗病信号可以在植株中进行双向传递，但诱导的抗病信号向植株下部传递能力不高于向上传递能力。蔡新忠等用叶霉菌非亲和小种4诱发接种番茄第3叶片，5天后用其亲和小种5挑战接种第3叶和第4叶，结果表明，诱导植株的第3叶和第4叶发病程度均显著低于对照，发病面积下降率分别为90%和85%[2]。童蕴慧等发现，用拮抗细菌处理番茄叶片可诱导番茄抗灰霉性增加，处理叶的上一叶位叶片中PAL、POD、PPO、SOD活性均显著高于对照，处理叶和上一叶位叶片中SA含量分别是对照的2.6倍和1.6倍[3]。张穗等用井冈霉素A处理珊西烟，处理叶和其上位叶片中几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶的活性均比对照植株相同叶位叶片显著增加，而这两种酶活性与TMV引起的烟草叶片枯斑数目呈负相关[4]。上述研究结果与本试验结果一致。所以在所用诱抗剂价格昂贵或数量不足时，建议用少量诱抗剂处理植株下位叶片来达到防病目标。

甜瓜为一年生草本植物，按其生态形分为薄皮甜瓜和厚皮甜瓜。济宁市种植薄皮甜瓜具有悠久的历史，但大面积集中栽培还是在近些年随着农业产业结构的调整而发展，目前仅在任城区、金乡县、鱼台县西部、嘉祥县南部保护地种植面积就达5万余亩，成为山东省最大的薄皮甜瓜种植基地。随着种植时间的延长和种植面积的不断扩大，甜瓜病害不断加重，特别是苗期病害，由于甜瓜多采用大棚育苗，育苗时间一般在1月下旬，常常遭遇低温，棚内温湿度不宜控制，病害容易发生，经常因防治不当，苗床大量死苗或移栽后造成大量死亡，若控制不力，将会对甜瓜的发展带来严重危害。几年来笔者针对为害较大的甜瓜苗期病害的发生及防治进行了试验研究，目的在于了解、掌握该类病害的发病特点和防治方法，进行经济有效的防治。已有国内外学者对该类病害进行了研究，特别是对露地栽培条件下的发生与防治研究较多[1～4]，而对保护地苗床期的发病特点和防治方法却少见报道。1.1.1 症状 发病初期，出土幼苗茎基部出现水烫状病斑，继而病斑逐渐加深为淡黄褐色，同时绕茎扩展，病部缢缩呈细线状，幼苗因失去支撑而折倒，刚折倒的病苗子叶短期内仍为绿色。发病严重时，种子未萌发或刚发芽时，即受病菌侵害，造成烂种、烂芽。湿度大时，成片幼苗猝倒，在病苗或病芽附近常密生白色棉絮状菌丝。1.1.2 病原菌 该病原菌为真菌Pythium aphanidermatum（Eds.）Fitsp.属鞭毛菌亚门，为瓜果腐霉菌。此外，甜瓜疫霉（P.melonis Katsura）和辣椒疫霉（Phytophthora capsici Leonian）等也可引起蔬菜幼苗猝倒病。1.1.3 传播途径和发病条件 病菌以菌丝体、卵孢子等随病残体在土壤中越冬，并可长期存活。遇有适宜条件，卵孢子萌发产生孢子囊，以游动孢子或直接长出芽管侵入寄主。田间病菌主要随水的移动、飞溅等进行传播蔓延。湿度大时，病苗上产生孢子囊和流动孢子，进行重复传染。低温高湿是猝倒病发生的必要条件。这是因为低温高湿不利于幼苗生长，但病菌仍能活动。一般猝倒病适宜地温为10℃左右。所以猝倒病多发生在早春育苗床上，尤其当幼苗期遇连阴天，光照不足，出现低温高湿环境，极易发生猝倒病。有的苗床开始发病时，是从棚顶滴水处的个别幼苗上先表现病症，几天后以此为中心，向周围蔓延扩展。该病也是甜瓜苗期的一种重要病害。据笔者几年调查，新苗床30%以上，老苗床50%以上可发现该病害。特别是老苗床，如不注意温湿度管理和及时防治，整个苗床可在几天基本死光，为害很大。是所有甜瓜种植区均能形成为害的一种病害。1.2.1 症状 刚出土的幼苗即可受害，以中后期发病为多。发病初期，病苗茎基部变褐，产生椭圆形病斑，叶片白天萎蔫，早晚尚可恢复。随病情发展，病斑渐凹陷、扩大，绕茎一周，叶片萎蔫不能复原，最后病部收缩干枯，病苗枯萎死亡。但病苗不呈猝倒状，病部有同心轮纹及淡褐色蛛网状菌丝。这一特点是本病与猝倒病相区别的主要特征。1.2.2 病原菌 该病原菌为真菌Rhizoctonia solani Kuhn.属半知菌亚门，为立枯丝核菌。该菌不产生孢子，主要以菌丝传播和繁殖。菌丝从无色变为黄褐色。病菌可产生菌核，菌核近球形或无定形，无色、浅褐色至黑褐色。有性阶段Pellicularia filamentosa（Pat.）Rogers.为丝核薄膜革菌。1.2.3 传播途径和发病条件 病菌以菌丝体和菌核在土中越冬，能存活2～3年。菌丝能直接侵入寄主，通过水流及带菌的堆肥传播为害。病菌生长适温为24℃。播种过密，间苗不及时，温度过高，易诱发此病。1.3.1 症状 该病害为一种生理性病害。幼苗出土后不长新根或不定根，幼根表面开始为锈褐色，尔后腐烂。沤根后地上部子叶或真叶呈黄绿或乳黄色，叶缘开始枯焦，严重的整叶皱缩枯焦，生长极为缓慢。在子叶期出现沤根，子叶即枯焦。在真叶期发生沤根，真叶就会出现枯焦。1.3.2 病因及发生条件 主要是苗床地温12℃以下持续时间较长，地势低洼、土壤黏重加之浇水过量或遇阴雨天气，苗床地温过低，致使幼苗根部呼吸作用减弱，活性降低。如此持续时间较长就会发生沤根。甜瓜育苗应选择土壤松而不散、黏而不硬、通气透水性良好、保肥保水力强的壤土新地或轮作3～5年的无病地育苗，大棚苗床必须选用无病土育苗。如用连作地或病地土壤，则苗床需深翻或用药剂消毒，常用50%福美双可湿性粉剂与40%五氯硝基苯粉剂消毒，或50%多菌灵可湿性粉剂，每平方米苗床8～10g，与20～30kg细干土拌匀成药土，待苗床所浇底水渗下后，取1/3药土作垫土铺底，种子播下后再将其余2/3药土覆在种子上，播后保持床面湿润；或将以上药土制成营养钵，再播种育苗。应用该方法进行防治，两年平均防治效果达到88.63%，实践证明这是一种经济有效的防治方法，可以兼治甜瓜猝倒病和甜瓜立枯病。加强苗床管理应以促进幼苗健壮生长，提高地温、降低苗床湿度为中心。为给幼苗创造良好生长条件，增强抗病能力，育苗前选用土质肥沃，不积水的苗床，施足优质腐熟有机肥，采用营养土育苗；提供使用无土育苗基质进行育苗。播种前浇足底水，出苗后尽量不浇水或少浇水，播种要均匀，密度不宜过大，防止床土过湿。出苗后，如果后，如果苗床出现过湿情况，可用小锄划锄或撒施干草木灰，以降低湿度；早春采用大棚育苗，必须做好增温保温工作。为了有效增加苗床温度，可结合实际情况，选用地热线育苗或火坑育苗，以缩短苗期时间。苗床还要尽量多地增加光照，并且苗床的通风、降湿，尤其在连续阴天、光照不足时更要抓住时机通风降湿；苗床要早分苗，使苗健壮，提高抗病力。出苗后如有少量病苗时应立即挖除，移出苗床处理，并选择下列杀菌剂在病苗及全苗床喷雾防治：以猝倒病为主时使用72.2%普力克水剂400～600倍液，72%克露可湿性粉剂500～600倍液，70%百得富可湿性粉剂600倍液，64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液，50%多菌灵悬浮剂500倍液，75%百菌清可湿性粉剂600倍液；以立枯病为主时使用20%甲基立枯磷乳油800倍液，70%甲基托布津800倍液，70%敌克松原粉1000倍液，50%福美双可湿性粉剂500倍液，64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液，50%多菌灵悬浮剂500倍液，75%百菌清可湿性粉剂600倍液，每平方米苗床喷淋药液2～3L，视病情发展情况，间隔7～10天再喷一次；在瓜苗移栽定植前选择广谱性杀菌剂如百菌清、杀毒矾、代森锰锌、多菌灵等再喷雾一次，带药移栽定植。选用土壤疏松，透气、透水性好的田园土，施足优质腐熟有机肥或生物肥，采用营养土育苗，提倡使用无土育苗基质进行育苗，播种前浇足底水，出苗后尽量不浇水或少浇水，播种密度不宜过大，出苗后如果出现苗床过湿，可采用小锄划锄或撒施干草木灰，以降低湿度，白天温度控制在20～25℃，夜间15℃，最低应在12℃以上，如果苗床出现沤根，应立即控制浇水，采取各种降湿升温措施。除划锄或撒施干草木灰以外，还可用生石灰降湿除潮。方法是：选新烧制的生石灰，分散放入苗床小拱棚内，充分吸潮后，进行更换，但注意生石灰不能与瓜苗直接接触。

辣椒的落叶、落花、落果通称“三落”。这是辣椒生产上的一个重要问题，对产量影响很大，一般落花率达20%～40%，落果率达10%左右，有的更为严重。引起三落的原因主要有3个方面：辣椒生长过程中要求中等强度的光照，光照过强或不足，会引起“三落”。强光直射会造成生长不良，易发生日灼病，导致“三落”；光照不足同样引起生长不良，引发“三落”。温度过低（低于15℃）或温度过高（高于35℃）影响授粉及花粉管的伸长，造成辣椒子房不能受精，引起落花。气候干燥，土壤干旱，造成授粉不良或引起病毒病流行，易引起“三落”。雨涝或灌水不当，根系吸收能力减弱，致使植株生理失调或伤根，引起“三落”或死株。1.4.1 实行间作 每4行辣椒种1行玉米，玉米种在畦埂上，株距1m，每穴2株。可防止强烈阳光直射，灼伤叶片；更重要的是阻止蚜虫迁飞传毒；诱集蛀果性害虫，集中产卵于玉米叶面上，集中处理，减轻蛀果性害虫为害。1.4.2 干旱时要浇水防旱，田间喷清水增加湿度 雨涝或田间有积水时要及时防涝排水。氮肥过多，磷、钾肥相对偏少，使枝叶徒长，营养生长与生殖生长不平衡，引起落花，落果。氮肥过少，使植株脱肥，叶黄枝瘦，造成“三落”。防治方法：要控制氮肥，增施磷钾肥，尤其要注意硫酸锌及磷酸二氢钾的叶面追肥。根据情况及时补充磷钾肥（上述两种物质，中、前期不少于3次，后期要增施1～2次）。3.1.1 病毒病 病毒病是辣椒的重要病害。轻型病毒病只出现花叶，不会造成畸形和落叶。重型病毒病会使叶片褪绿、黄化、蕨叶；造成植株矮化、形成丛枝，畸形，引起“三落”。3.1.2 辣椒细菌性斑点病 该病又名“落叶瘟”，属细菌性病害，常会引起早期大量“三落”，影响产量。一般情况会形成疮痂病斑，高温高湿条件下不形成疮痂，而是迅速扩展为叶缘焦枯，成长叶片上形成许多小斑点，之后引起大量落叶。重茬地，生长差的田快发病较重（抗性差）。3.1.3 辣椒疫病 这是辣椒生产中为害最大的病害。常会造成整株枯死，大片死亡。3.1.4 辣椒白粉病 该病能引起叶片早落，严重者可使全株叶片落尽。此病一般在叶背形成白粉状霉层，正面出现浅黄色斑，气温高相对湿度大的情况下发病重，且传播速度快。3.1.5 炭疽病 该病为害叶片和果实，以为害果实为主，严重时会引起大量果实腐烂，造成落果。高温多雨，田间湿度大，氮肥过多会加重此病。该病俗称“撒墨水”，最初病斑呈深绿色水浸状圆点，然后扩大成圆形至椭圆形，并形成同心轮纹黑褐色，湿度大时，果面病斑上出现黑色霉层。3.1.6 蛀果型害虫 主要有棉铃虫和烟青虫，蛀食会引起落果。培育壮苗，加强肥水管理，增强植株的抗性，特别在炎热的夏季要及时追肥、灌水和排水，及时防治病虫害。与非茄科作物轮作3年以上。①培育无病适龄壮苗。播种前要用10%的磷酸三钠浸种20～30min捞出，充分洗净（如不洗净会影响种子发芽，漂洗3～4次漂洗1～2h），再催芽播种；用无病土育苗，防蚜，适时定植，壮苗定植。②促发棵，壮棵。③增施有机肥。④搞好中耕除草，及时防治蚜虫（整个生育期都防治）。⑤及时清除田间病叶、果、株残体。4.4.1 病毒病可用1.5%植病灵水剂1000倍液喷雾或用20%病毒A可湿性粉剂400～500倍液喷雾。辣椒细菌性斑点病可用硫酸链霉素（200万单位）4000倍液，每隔7天喷一次，连续喷2～3次。辣椒疫病可用72%的杜帮克露800倍液喷雾防治或70%代森锰锌600倍液喷雾防治。辣椒白粉病、炭疽病用55%的可湿性粉剂500倍液进行叶面、叶被喷雾。4.4.2 蛀果型害虫可用半枯带叶杨、柳枝，10根一捆，每亩插放10捆，晚放晨收扑，可诱杀一定量成虫（杨、柳枝全枯时要更换）；用BT乳剂400～500倍液防治；用敌杀死、杀灭菊酯或灭扫利喷药防治。

The term"programmed cell death"(PCD)is used to describe cell death that results from the activation of a cell suicide pathway that is encoded by the genome of the dying cell[1].So PCD is an important physiological mechanism for selective cell elimination during development or following damage in multicellular organisms[2].Characteristic morphological changes associated with PCD include cytoplasmic shrinking,chromatin condensation and nuclear DNA fragmentation[3].In plants,PCD is also an indispensable facet of development,defence response and architecture,which shares some characteristic features with animal apoptosis[4].Plant PCD is involved in anther,megagametophyte and vascular tissue development as well as in senescene,pollination,and sex determination[5].It is also employed as a controlled response to different biotic and abiotic stimuli[6,7].The hypersensitive response(HR)during the incompatible plant-pathogen interaction may be the most typical defence-related PCD process in plants[8].The PCD can be induced at the site of pathogen invasion as an attempt to isolate the pathogen and prevent it spreading to non-infected parts of the plant.Besides HR,plant also respond to a variety of externally added inducer by initiating PCD.These include elicitors(N-acetylchitooligosaccharides,chitosan)[9,10],signaling moleculars(hydrogen oxide, nitric oxide)[11,12] and environmental extremes(temperature stress,UV radition)[13,14].Chitosan and its fragments,the natural component of the fungi cell wall,have been shown to act as potent elicitor signals in several plant system.These include the induction of jasmonate synthesis[15],enhancement of cell wall lignification and phytoalexin production as well as to induce salicylic acid and PR proteins[16,17].In the present study,the events leading to the death of cultured tobacco cells treated with various doses of oligochitosan have been investigated.It is thus shown that oligochitosan can induce programmed cell death features in cultured tobacco cells including cell shrinkage,chromatin condensation,suggest the death process may be programmed.Oligochitosan with 85%N-deacetylation and polymerization degree from 2 to 10 was self-prepared by enzymatic hydrolysis method,solubilized(50mg/ml)in deionized water.Suspension cultures of tobacco(Samsun NN)were grown in Murashige and Skoog(MS)medium supplemented with 3%sucrose,0.5μg/ml 2,4-D.The culture were incubated with rotation(120rpm)at 25℃ with 16-hour photoperiod,on a 14 day growth cycle(10%v/v inoculum).After 12 days in culture,the cells were harvested,resuspended in fresh culture medium.All procedures were done under aseptic conditions.Oligochitosan used were sterilized by filtration through a millpore filter(0.22μm).Intracellular H2O2production was measured using 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate( DCFH-DA) as a probe.The cells were stained for 5 min with 2.5uM and then viewed under a fluorescence microscope with an excitation wavelength of 480nm.Cell viability was evaluated as described elsewhere[18],Briefly,cells in suspension culture were deprived of culture medium and incubated for 15min with 0.05%trypan blue.After several washings with deionized water to remove the excess of the dye,dye bound to dead cells was solubilized in 50%methanol/ 1%SDS and quantified spectrophotometrically by measuring the absorbance at 595nm.Hoechst 33342(HO)and Propidium Iodide(PI)was used to detect cellular change.After different times of treatment,the cells were incubated in the dark with 5μg/ml HO and 5μg/ml PI at room temperature for 30min and 15min respectively,then observed under fluorescent microscopy by using an excitation wavelength of 350nm and 570nm.Oligochitosan dose-dependently inhibited the growth of suspension-cultured cells of tobacco(Figure 1).Growth inhibition was estimated by determining the fresh weight of the cultures after 7 days of exposured to increasing concentrations of oligochitosan.In order to determine whether the antiproliferation effect of oligochitosan in tobacco suspension cultures was due to growth arrest or cell death,we analysed cell viability.Administration of 5～200μg/ml oligochitosan to tobacco cells for 6h and 24h caused cell death,as measured by trypan blue staining.The degree of cell death rose with the increase in elicitor concentration and length of treatment.The highest value was observed with 200μg/ml oligochitosan for 24h(about 55.6%),where as 50μg/ml caused about 30.6%cell death after the same time of elicitor incubation.5μg/ml is similar to control tobacco cell cultures exhibited about 5.3%of trypan blue stained cells(Fig-ure 2).Figure 1 Oligochitosan inhibits tobacco cells proliferation.Tobacco suspension(1g/100ml liquid medium),were treated with the indicated concentrations of oligochitosan, after 7 days of treatment, cell proliferation was determined by measuring the fresh weight.Figure 2 Effect of oligochitosan on viability of tobacco cells. Exponential growing cells(1g/100ml liquid medium),were treated with the indicated concentrations of oligochitosan, after 6h (closed bar) and 24h (open bar) treatment.The 100% value corresponds to heat treatment (30min 100℃).Data are means ±SD of three independent experiments.To further determine the nature of the cell death induced by oligochitosan,we analyzed the occurrence of the main PCD hallmarks recognized for plant cells such as morphological changes,nuclear morphology,and DNA fragmentation,focusing our attention on the concentration of 50μg/ml.Under light microscopy control cells showed a well defined structure with round nuclei, while oligochitosan-treated cells were found to undergo various progressive morphological changes.Cells treated for 24h with 50μg/ml,oligochitosan showed a cell disorganization with a gradual condensation of the cytoplasm and a consequent detaching of the plasma membrane from the cell wall(Figure 3 E).Different degrees of cell disorganization were found coexist,indicating a different sensitivityto the elicitor molecule in an asynchronized cell population.Treatment with 200μg/ml led to highly collapsed cells after 24h.Figure 3 Chromatin condensation and cytoplasm shrinkage induced by oligochitosan for 24h in tobacco cells. Aliquiots of both control (A,C) and oligochitosan-induced(B,D,E) cells were collected ,stained with Hoechst 33342(A,B) and Propidium Iodide(B,D),analyzed by fluorescence microscopy, or stained with trypan blue(E), and visualized under light microscopy. Pictures represent typical examples.To further investigate the cellular changes induced by oligochitosan a double staining of cells with HO/PI dyes were carried out.This staining allows the simultaneous detection of the early stages of apoptotic cells(HO+ and PI- nuclei)and of late apoptotic(HO+ and PI+ nuclei)or necrotic cells(mainly HO- and PI+ nuclei).As showen in Figure 3, Nuclei of tobacco control cells exhibited a large central nucleolus surrounded by uniformly stained chromatin,whereas the chromatin had a granular appearance with lobated nuclei in cells after oligochitosan treatment,resembling those observed during apoptosis in animals cells.Taken together the present data are suggestive of the induction by 50μg/ml oligochitosan of a cell death pathway showing some PCD-like features recognized for animal apoptosis.In the light of the crucial role played by ROS in PCD,we investigated production of ROS in oligochitosan-induced suspension-cultured tobacco cells by monitoring H2O2 production.Generation of H2O2,measured by following the fluorescence of the dye 2′,7′-dichlorofluorescin produced from the cell-permeable non-fluorescent probe 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate( DCFH-DA)in the presence of H2O2.Fluorescence occurred in the majority of cells immediately after oligochitosan treatment,as shown in Figure 4,whereas production of ROS in control cells was negligible.Figure 4 Production of H2O2 in tobacco cells induced by oligochitosan. The cells were stained with DCFH-DA.and H2O2 production was visualized by fluorescent microscopy as described in "Materials and Methods." Pictures represent typical examples.Plant cells can activate their intrinsically programmed cell death when respond to a variety of extracellular stimulus.This process may be related with plant resistance[1].Oligochitosan has been shown to be a potent elicitor,in this paper tobacco suspension cell cultures treated with exogenous oligochitosan showed some programmed cell death features including cell shrinkage,chromatin condensation,suggest the death process may be programmed.By contrast to the degradation of DNA to nucleosomal fragments observed in several plant PCD process,no detectable DNA ladder was observed in tobacco cells undergoing cell death in the considered time interval.Anna and his coworkers found that chitosan can induce programmed cell death in soybeans,and they do not observe DNA ladder either[10].Nevertheless,the lack of apoptotic bodies in plants is not surprising,if their fuction is to facilitate phagocytosis of their contents by neighboring cells.There is no way for typical apoptotic bodies to pass through the cell wall[19].Plants have an arsenal against the invasion of a broad array of environmental microorganisms.These include preexisting structure and chemical barriers as well as induced-defenses.Plants can combined different kinds of weapons to deal with enemies.Although PCD is a kind of death,it is still an active defense-related process which under plants control.Tobacco cells treated by oligochitosan produce ROS.This phenomenon has been reported already for cells subject both to pathogen attack or to abiotic stress[21,22].Oligochitosan may trigger the death program,which involve the alter of cellular redox homeostasis.It should be noted that in the cascade of events leading to cell death,the cellular level of ROS is critical.A threshold level of ROS is required to activate the signal transduction pathway that result in PCD,but at high doses,the process is subverted and death occurs rapidly by necrosis[23].These data are suggestive of the induction of PCD pathway depending on the amounts of ROS accumulated in given cells.On the whole our data suggest that tobacco cell suspension can trigger cell death program shared features with animal apoptosis when responded to oligochitosan,and it may be a kind of plant defense mechanism.

近年来，水稻条纹叶枯病（Rice stripe Vir，RSV）在浙江嘉兴市呈快速上升态势，2007年全市发病面积达26.4万亩，对水稻安全生产带来严重威胁。影响水稻条纹叶枯病的发病流行的因素很多，如传毒媒介灰飞虱种群数量与带毒率、水稻品种抗病性、耕作制度、气候条件等。为了探索水稻播种期与灰飞虱迁移传毒和条纹叶枯病发病间的关系，为防治提供科学依据，2006～2007年进行了水稻不同播种期对病害发病程度的影响试验，现将结果综合整理如下。移栽单季晚稻，品种为秀水09。2006年与2007年均分4期播种，播种时间分别为5月15日、5月22日、5月29日和6月5日，每期间隔7天，每处理重复3次，每小区大田面积在0.5亩。播种前未做药剂浸（拌）种处理，按照处理要求时间，依次分期播种，待30天秧龄时依次分期移栽。秧田期、大田前期正常肥水管理，但不用杀虫剂、杀菌剂，让其自然发病。调查方法：秧苗移栽前调查病株率；大田期在移栽后至病情稳定期，各处理区用五点式取样法选定5点，每点40丛，计每区200丛，每隔5天调查1次，调查丛发病率与株病率，观察各处理区发病动态变化。秧田期各播种期间发病程度差异较为明显，2006年 5月15～22日播种的株病率高，分别为3.26%和2.25%，显著高于5月29日播种的0.24%，6月5日播种秧田未发病。2007年调查结果与2006年相似，见表1。调查试验表明，秧田期播种期越早，发病越重。年度播种期（月/日）5/155/225/296/520063.262.250.240.020074.205.300.370.33表1 水稻秧田不同播种期条纹叶枯病发病情况 （浙江嘉兴，2006～2007）在大田病情稳定期（7月中旬）调查，各播种期与病害的发生有着密切的关系，年度间、重复间基本一致。2006年的4个播种期中，从早到迟平均病丛率依次为18.5%、10.0%、5.67%和1.5%，平均病株率依次为4.07%、2.69%、1.89%和0.42%。随着播种期的推迟，病情递减。2007年的4个播种期中，前2个播种期病情重，病丛率分别为16.2%和16.67%，病株率分别为5.18%和7.31%，而后2个播种期的病丛率分别为2.7%和1.5%，病株率分别为1.9%和0.7%。试验进一步证实了播种期与发病程度间的密切关系，即播种期越早，发病越重，反之，则发病越轻。年度播种期（月/日）病丛率（%）病株率（%）重复1重复2重复3平均0.050.01重复1重复2重复3平均0.050.01200620075/1517.516.521.518.5aA4.163.164.884.07aA5/2210.510.59.010.0bB2.553.332.182.69bAB5/296.04.56.55.67cC2.021.072.571.89bBC6/52.00.52.01.5dD0.630.130.500.42cC5/1516.017.015.516.2aA6.225.214.115.18aA5/2218.015.516.516.67aA9.315.826.807.31aA5/293.03.02.02.7bB2.472.350.891.90bB6/52.01.01.51.5bB0.770.680.640.70bB表2 水稻播种期与大田条纹叶枯病发病关系调查 （浙江嘉兴，2006～2007）水稻不同播种期条纹叶枯病发病程度差异明显，分析原因主要是由传毒介体与条纹叶枯病的流行规律所决定的。条纹叶枯病是由灰飞虱为传毒媒介的病毒病，在一定的带毒虫源基数下，灰飞虱成虫高峰的早迟直接影响病害的流行与否。2006～2007年灰飞虱在嘉兴市的一代成虫高峰在5月中、下旬，如在此期间播种，出苗后正与一代成虫传毒高峰相吻合，此时水稻播种面积小，大量灰飞虱成虫迁移在秧苗上集中传毒，病害发生就重；而推迟至6月上旬播种，灰飞虱正处低龄若虫期或卵期，迁移能力不强，且随着气温的升高，灰飞虱数量减少，此时播种，传毒机率大为降低，病害发生就轻。观察表明，水稻条纹叶枯病与其他病害一样，经历始病期、剧增期、稳定期、下降期4个阶段。始病期随着播种期的不同而不同，播种越早，发病也越早，一般在移栽后2～7天开始出现病害症状；剧增期是病情急速发展的时期，各播种期间较为一致，2006年在6月25日～7月10日，历时15天；2007年在6月28日～7月12日，历时14天。病害稳定期各播种期间差异较小，2006年、2007年均在7月10日左右，此后病情开始缓慢下降，见图1、图2。图1 大田期各播种期条纹叶枯病发病动态（浙江嘉兴，2006）水稻播种期对条纹叶枯病发病有较大影响，在自然发病情况下，秧田期与大田期播种期早，病情重；播种期迟，病情轻。分析原因这与灰飞虱迁移和传毒特性有关，水稻播种期如与一代灰飞虱成虫高峰相吻合，发病就重。在浙江嘉兴市，一代灰飞虱成虫高峰一般在5月中下旬，此时播种容易造成集中传毒。水稻条纹叶枯病防治的根本措施是抗病品种的选育与推广，在目前缺乏抗病品种的情况下，适期播种是控制病害流行的最有效方法之一。水稻播种期的选择，应根据水稻品种的特性、灰飞虱成虫传毒高峰而定，在对水稻生长发育、产量、品质等影响较小和不受影响的前提下，水稻播种期应避开灰飞虱成虫传毒高峰期，应提倡适当推迟、同期播种，在浙江嘉兴市推迟至5月底至6月中旬播种较为适宜。图2 大田期各播种期条纹叶枯病发病动态（浙江嘉兴，2007）

冻害症状:冬季0℃左右的低温天气持续时间长，或遇极值温度低于-5℃时，柑橘枝梢叶片将严重受冻。从叶尖、叶缘向中脉方向纵卷，并产生大块相连的灰褐色枯死斑；秋梢嫩茎也变褐枯死；老叶受冻，症状与前述相似，但枯斑面积较小，一般不卷曲。3月底至4月初春梢抽发时，受冻叶片纷纷脱落，形成秃枝，嫩梢发育差，花蕾小，坐果率低，对产量影响很大。如措施不力，树势很难在当年恢复(图9-1、图9-2)。图9-1 蜜橘类低温寒害和冻害图9-2 柑橘整株结冰一是自然灾害。二是人为因素。冬季，尤其是春节前由广东向华北、东北、西北调运柑橘时，途中需几天时间，防寒设施跟不上很易出现冻害。(1)预防低温寒害对接芽和果实的伤害，应注意把握好农事季节，特别要掌握好当地的气温变化规律，即破膜露芽时间最好在柑橘园20%～30%植株芽萌发5mm长左右(贵州在4月初)。(2)预防冻害首先应培育壮树，控制秋梢抽发过度，用15%多效唑可湿性粉剂1000mg/kg，在秋梢抽发3cm左右时喷枝梢至湿透，可达到控制树梢矮壮、促进花芽分化、提高翌年坐果率之目的；受冻后，3月灌水浇透，可减少落叶、落花和落果；春季萌芽前及时剪除冻伤枝梢，减少养分消耗，促进中间态的中弱枝转换成果枝；全园进行2～3次叶面喷肥，第一次生理落果期可加10mg/kg的2，4-D钠盐保果；全年注意合理施肥，防治好重要病虫害，尽快恢复冻前的树势。(3)冬季柑橘调运时，设法用空调车，防止贮运途中受害。(4)为了防止柑橘类冻害提倡喷洒3.4%赤·吲乙·芸可湿性粉剂(碧护)7500倍液，不仅可防止寒害和冻害，还可生产碧护柑橘美果。干旱初期表现为幼嫩枝叶萎蔫、卷曲、干枯；随着干旱程度加剧，老熟叶片卷曲、脱落，土壤表层根系死亡；严重时，枝梢甚至整株枯死(图9-3、图9-4)。干旱易诱发的次生灾害主要为柑橘红蜘蛛、柑橘锈壁虱和柑橘炭疽病等。图9-3 干旱导致叶片卷曲图9-4 干旱导致叶片失水干枯（1）尽量选择水源条件好的地方建园，如果水源条件不好，要因地制宜修建蓄水设施。（2）通过深翻改土、压埋有机质等措施改良土壤，柑橘园的改土深度应达到80cm以上，增强土壤保水能力。（3）采用生草栽培，以降低土壤温度，增加土壤的蓄水能力。（4）采用滴灌、微喷灌、地下渗灌等节水灌溉方式。（5）没有灌溉条件的柑橘园，遇到严重干旱时，应首先剪除未老熟的新梢；如果干旱有长期持续的趋势，应进一步剪除部分枝叶，减少树体水分蒸发。低洼地、水田等改造的柑橘园，由于排水不畅或地下水位过高，会导致柑橘树根系处于积水缺氧状态。长时间根部积水，首先表现为须根变褐、腐烂，随后侧根皮层腐烂，木质部腐朽；树冠表现为叶片变黄、脱落，部分新梢枯死，生长势衰弱，严重时树冠全部死亡(图9-5、图9-6)。图9-5 低洼果园淹水状图9-6 淹水后枝干流胶洪涝灾害时，沿江果园由于洪水冲袭，易造成主干从环割口、嫁接口断裂，或从主枝分叉处劈裂；河滩果园土层被严重冲刷，露出根系或严重倾倒。地势低洼，排水不良的果园由于淹没深度和时间的不同，会造成不同程度的伤害。未成熟叶片对淹水敏感，淹水后叶片全部呈水浸状，继而腐烂干枯；多数老叶和部分成熟叶片卷曲、脱落，少量1～2年生枝枯死；长时间淹水后，落叶严重，大部分1～2年生枝枯死，部分3～5年生枝枯死，严重的整株树死亡。果实淹水后会导致幼果脱落或在枝梢上变黑，长时间淹水后会导致大量落果。另外，树体受害程度与洪水状态也有关，一般情况下，如果水流较慢或基本静止，淹没高度不超过树冠(枳砧)高度的1/2，浸泡1～2天仍可维持基本正常，不会出现大量落叶落果(成熟期果树除外);如果洪水无污染，流速较快，则浸泡2～3天仍可维持基本正常。另外，柑橘果实成熟期雨水过多会导致果实品质下降、浮皮发泡、裂果、难以储藏、大量落果及腐烂发霉等。水涝灾害易诱发的次生灾害主要为柑橘炭疽病、柑橘溃疡病、柑橘枝干流胶病等。(1)选择合适的果园地址。果园应建在地势较高的地方，尽量避免在河滩地、低洼地等易被洪水淹没的地方建园。(2)做好果园排水系统水田、平地建设柑橘果园，应根据地下水位情况，起垄栽培、深挖排水沟和建设畅通的排灌系统。(3)洪涝灾害后橘园的救治措施。及时排水:洪水退去后，立即挖沟疏渠，清除障碍物，及时清除淤泥，排尽积水，加速表土干燥。冲洗树冠:在淹水退去时，应及时清洗树冠，去除树冠淤泥；同时将挂留在树上的树枝、杂草及垃圾等杂物清理干净。因树修剪、清除病枯枝:树体正常、长势一般的成年树，只剪除黄叶而任其挂果；幼树或长势差、流胶病严重的树，除疏果外，还需疏剪丛生枝、交叉枝和衰弱枝，缩剪夏梢，减少叶面水分蒸发和树体养分消耗，加速树势恢复；落叶严重又烂根的树，回缩多年生枝条。病虫害防治:水淹后树冠和根系受到一定程度的伤害，易使病菌入侵，地面和树冠要及时喷药1～2次，以预防炭疽病、溃疡病及流胶病等。培土及中耕松土:退完水后，将冲倒或冲歪的树扶正并固定，对泥土被冲走、根系外露的果树进行培土；整个果园在脚踩表土不感觉黏烂时，及时中耕松土，翻土深度10cm左右，以免伤根。合理施肥:淹水后不宜立即在根际施肥，可用0.3%磷酸二氢钾根外追肥2次，每次间隔10～15 天。恢复后(1个月左右)成年结果树可每株沟施粪水或沤熟麸肥20～25kg，尿素100～200g，促进新根萌发。同时开环状沟重施一次基肥，每株施菜麸肥1.5～2.5kg、复合肥250～500g。树干涂白:柑橘树受涝后造成大量枯枝落叶，致使主干和主枝暴露在烈日下，易发生日灼病，用生石灰1份、水10份，充分溶解后涂刷在主干和主枝上，保护树体。近成熟果实阳面果皮易受害，初呈青灰色，后变黄褐色，灼伤部果皮呈焦灼状变硬、粗糙，有的稍下陷。受害轻的焦灼部仅限于果皮；受害重的可深入到囊肉，致使囊瓣、汁胞干缩呈海绵状，汁少而味淡，品质和品级下降(图9-7、图9-8)。图9-7 日灼症状（1）图9-8 日灼症状（2）（1）营造防护林，实行生态防除。（2）深翻改土，增施有机肥，实行配方施肥，增强根系活力，使植株地上部和地下部保持平衡。（3）果面涂白，对顶生无绿叶遮挡的果实用比例为1∶4：0.2的石灰、水、猪油调匀后的混合物涂至果面。果皮在生长后期纵裂开口，瓤瓣亦裂开露出汁泡，失水后干枯或受次生真菌侵入引起腐烂。久旱遇骤雨、水分供应不均匀；缺钙；果皮较薄的品种易发生(图9-9、图9-10)。图9-9 脐橙裂果症状（1）图9-10 脐橙裂果症状（2）改善果园排灌条件，果实生长期均匀供水和养分，后期避免灌水过多；喷洒3.4%赤·吲乙·芸薹可湿性粉剂7500倍液。新梢抽发少且叶片小而薄，老叶发黄直至全叶发黄，树势弱。枝叶稀少而细小；叶片薄黄，呈淡绿色至黄色，以致全株叶片均匀黄化，提前脱落；严重时，枯梢，树冠光秃；花芽分化少，坐果率低，果小，果皮苍白光滑，常早熟(图9-11、图9-12)。图9-11 柑橘缺氮果实及叶片症状图9-12 柑橘氮过量果实症状确定合理的氮肥施用量、施用时期以及施用方法；多施有机肥，增加土壤保肥能力；不要偏施钾肥。氮肥用量一般在0.5～1.2kg/株，分2～4次施用，最好沟施或穴施或对水施用；也可叶面喷施1%～1.5%的尿素。氮过量：枝叶繁茂，树势生长过旺，夏秋梢旺盛，叶色浓绿，多为徒长枝，花少果少，果实变旺，果皮加厚，着色不良，含糖少，不耐储藏，严重时会导致缺钾和缺钙。老叶片变为淡绿色至暗绿色或青铜色，失去光泽，下部叶片发紫以致早落；枝条细弱，新梢上有小而窄的稀疏叶片，叶片狭小，密生；果小皮厚而粗糙，无光泽，出现皱皮，味酸(图9-13)。图9-13 柑橘缺磷果实症状过酸土壤通过施用石灰类肥料矫正土壤酸度，并选择施用碱性的钙镁磷肥，并通过重施有机肥提高土壤磷的有效性；干旱季节注意灌溉，防止土壤干旱导致缺磷。磷肥施用量:过磷酸钙0.5～1.0kg/株，分2～4次施用；酸性土则施用钙镁磷肥；或者叶面喷施0.5%～1.0%过磷酸钙或1%磷酸铵，7～10天喷施1次，连续喷施2～3次。磷过量：会诱导锌、铁、硼等元素的缺乏，果实会浮皮(皱皮)。生产中施用1∶1：1(N：P2O5：K2O)复合肥的柑橘产区，易因磷施用比例高诱发钙、硼、锌等的缺乏。老叶叶尖和上部叶叶缘首先变黄，逐渐向叶部中心扩展，变为黄褐色至褐色焦枯，叶缘向上卷曲，叶片畸形，叶尖枯落；新梢纤细，叶片较小；严重时，开花期大量落叶，枝梢枯死；果小皮薄光滑，着色不好，汁多酸少，果汁味淡，易腐烂脱落(图9-14)。图9-14 柑橘缺钾果实症状沙质土、红壤等钾易流失的土壤，增施有机肥以增加其保水保肥能力，减少钾的流失；根据柑橘对各种矿质营养的需求量及需求比例，进行配方施肥，减少因氮、磷、钙、镁等肥料施用过多导致的缺钾。钾肥施用量:硫酸钾0.5～1kg/株，分2～4次施用；或叶面喷施0.5%硝酸钾、硫酸钾或磷酸二氢钾溶液，1周喷施1次。钾过量：目前在柑橘园还未见钾过量对树体和果实外观产生影响，但已有的研究表明，钾过量会导致果实糖/酸比下降，影响果实品质。嫩叶由叶尖开始黄化，黄化区域沿叶缘向下扩大，叶幅变窄，叶形变小，枝条端部枯死。钙移动性差，故缺钙一般发生于幼嫩部位，生长点和根尖受害最重。缺钙时新梢短弱早枯，先端呈丛芽，叶片褪绿先在叶缘出现，后逐渐扩展到叶脉间，这是与缺硼枯梢的区别所在。植株缺钙，果实膨大期易产生裂果。在酸性土壤中，钙含量偏低；在温暖多雨地区，土壤中钙素易被淋溶而流失掉，导致土壤中钙素不足；土壤中过量施用氨态氮化肥(如硫酸铵、硝酸铵等)，或土壤中钾、镁、锌、硼元素含量多，在干旱时造成元素不均衡，易诱发缺钙(图9-15、图9-16)。图9-15 柑橘缺钙图9-16 沙糖橘缺钙每亩施石灰100～150kg，调节土壤pH值至5.5～6.5为宜。在嫩梢期和幼果期，喷施液体钙。树盘覆盖、适时淋水与叶面喷施液体钙结合，防止裂果。老枝、成叶先显症，但老叶形状正常。老叶初期中脉两侧叶肉呈黄白色，主侧脉仍呈绿色，肋骨状，后期大部分黄化，仅叶尖处及主脉为绿色，叶片基部呈现一个绿色倒“V”字形。以夏末和秋季发病较多，特别是果实接近成熟时发病最多，以老叶和果实附近的叶片表现较为突出。柑橘缺镁和缺硼往往同时出现(图9-17、图9-18)。图9-17 金柑缺镁图9-18 柑橘缺镁果实症状镁在酸性土或轻沙质土中易流失；磷、钾肥施用过多易诱发缺镁；柑橘多核品种比无核或少核品种更易产生缺镁病。（1）叶面喷施0.2%硫酸镁（添加0.3%尿素）2～4次，或在叶面喷施1%硝酸镁（5月以后使用）。（2）对严重缺镁的植株，最好采用镁肥混合堆肥根施，效果更好。酸性土（pH值<6）宜施用石灰镁（0.8～1.0kg/株），微酸性至碱性土宜施用硫酸镁或硝酸镁，酸性土中每株树施1kg氧化镁作基肥。新叶色淡透明，黄化起泡，形成黄色斑点；叶片反卷失去光泽，叶脉稍肿大，老叶主、侧脉木栓化，纵向破裂，呈暗色；果小，皮厚而硬，汁少渣多，常称为“石头果”，果心及海绵层均有褐色胶状物。初夏，开始时幼果果皮呈现乳白色凸起小斑，随后斑点变黑下陷，形成不规则黑斑，同时中果果皮、果心出现褐色胶状物。严重缺硼时，幼芽突然变黑枯落。酸性土壤中硼易流失；花岗岩、片麻岩、片岩等成土母质，硼含量低；碱性土壤中硼的有效性低；磷肥或石灰施用过多，或土壤干旱，影响硼的有效性和根系对硼的吸收，均容易缺硼；酸橙对硼的吸收力弱，以酸橙做砧木的品种容易缺硼(图9-19、图9-20)。图9-19 夏橙缺硼症状图9-20 柑橘缺硼叶片症状（1）每亩果园土壤施硼砂250～500g，要与有机肥或土壤混合施用，避免硼肥和根系直接接触，以免伤根。沙质土宜浅施，黏重土土施比叶面喷施效果好，或土施持力硼。硼砂、大粒硼难溶于水，最好在春季施基肥时，将其混入肥料中撒施，每株施50g。（2）花期喷硼是矫治缺硼的关键时期，叶面喷施0.1%～0.2%的硼酸或硼砂溶液（如速乐硼、持力硼等），每隔7天喷1次，连喷2～3次。禾丰硼和金钾硼为速溶性硼，可用1000～2000倍液喷雾。新梢幼叶先显症。具体表现为嫩叶不均匀黄化(即嫩叶主、侧脉间的叶肉黄化，主脉、侧脉及其附近仍呈绿色)；嫩叶变得窄小、直立；叶肉黄化，经常在褪绿区出现小绿点；枝叶丛生。在弱酸至强酸性土壤中锌含量低；黄泥土和石灰性土缺锌，在碱性土壤中锌元素虽存在，但溶解度低，不能被柑橘植株吸收利用；土壤有机质缺乏、瘦瘠；氮、磷、钾和钙施用过量，或镁、铜元素不足，皆易缺锌(图9-21)。图9-21 柑橘缺锌叶片症状（1）酸性土施硫酸锌（100g/株）。（2）叶面喷施0.2%硫酸锌，连喷2～3次。初发病时，幼枝长而柔软，稍呈三角形，上部扭曲下垂或呈“S”形，叶片变大且浓绿，叶面不平整，中脉弯曲呈弓形。严重时病株抽生大量不定芽，形成丛生枝且很快枯死。轻度缺铜时，果实表面产生许多大小不等的褐色斑点，随着果实成熟斑点变成黑色，内果皮出现树脂斑，果皮变厚且畸形。发病特别严重的病株，根群大量死亡，病枝的皮部和木质部之间呈现袋状树脂泡包围中心柱而产生的流胶(图9-22、图9-23)。图9-22 缺铜枯梢图9-23 缺铜枝条导管凝胶淋溶性强的酸性或碱性沙质土以及酸性腐泥土易缺铜；大量施用磷肥以及氮肥施用过多均易引起缺铜。春梢萌动前，叶面喷施0.1%的硫酸铜液，每隔10天喷1次，喷1～2次，须注意硫酸铜容易烧伤叶片，故嫩叶及炎夏慎用；为结合防治其他病害，叶面喷施硫酸铜、石灰、水配比为0.5∶0.5∶100的波尔多液。田间症状主要是叶片出现黄斑。病斑在初春叶片叶脉间呈水渍状，后发展成圆形褪绿小点，最后变成圆形黄斑，叶片和果实的向阳面黄斑较为普遍。晚夏及初秋较低的叶片分泌树脂胶状物，并很快变成黑色。严重时褪绿部分坏死，叶斑破裂穿孔，落叶落果(图9-24、图9-25)。图9-24 柑橘褪绿叶片图9-25 柑橘缺钼叶片症状土壤酸性过重或锰过量，抑制钼的吸收；长期使用硫酸铵等酸性肥料，使土壤中的钼难以被果树吸收。（1）对酸性过重的土壤，每亩施150kg石灰，调节土壤pH值，使其在5.5～6.5。（2）春季叶面喷0.008%～0.015%的钼酸钠或0.008%～0.025%钼酸铵溶液，每隔7～10天喷1次，连喷2～3次。为防止新梢受药害，只能在幼果期喷施。（3）每亩用20～35g钼酸铵与钙镁磷根施。叶脉间区域变黄色，叶脉及侧脉保持绿色，病叶呈现绿色的网状脉，严重时，仅叶片中脉保持绿色，叶片呈乳白色。石灰性土壤，土壤水分过多、透气不良；磷酸氢根离子含量高，营养元素不平衡；碱性土壤，枳砧品种易缺铁(图9-26至图9-28)。图9-26 沙糖橘缺铁图9-27 甜橙缺铁图9-28 柑橘缺铁叶片症状（1）改良土壤，多施有机肥和绿肥，搞好排灌，保持土壤疏松、通透。（2）在酸性土壤中，土施螯合铁（EDTA-Fe），每株施10～20g，配合灌水或与有机肥混施效果更好，但对碱性土无效。（3）叶面喷0.2%柠檬酸铁或硫酸亚铁，喷施时加等量石灰水，以免产生药害。严重缺锰时，叶片在淡绿色的底色上呈现暗绿色的网状脉纹；缺锰较轻时，叶脉和主脉、侧脉及附近叶肉呈暗绿色不规则色带，其余叶肉呈黄绿色。缺锰时叶片大小形状正常，与缺锌的叶片变窄小有别。（1）叶面喷施0.3%硫酸锰（加0.1%熟石灰）或有机螯合锰3000～5000倍液，连喷2～3次，最好在春季施用。（2）酸性土施锰，每亩施硫酸锰3.0～4.0kg，与有机肥混施；中性和碱性土施锰无效（图9-29）。图9-29 柑橘缺锰叶片