真菌病毒缺乏体外传播途径，其传播仅能依赖寄主的繁殖进行垂直传播或通过菌株间菌丝融合（hyphal anastomosis）进行水平传播；多数感染子囊菌的真菌病毒不能通过有性繁殖传播，受菌丝不融合的限制，真菌病毒不能在与寄主菌株处于不同营养体亲和型的菌株间扩散。近年来，有些研究论文报道，感染不同种属，甚至不同纲真菌的病毒具有高度的等同性（identity），表明真菌病毒可能存在一种潜在的有别于菌丝融合的传播途径。核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）弱毒株EP-1PN分离自黑龙江佳木斯茄子病残体上，较正常菌株生长速度慢，菌落异常扩展，菌核产量低，致病性弱。前期研究表明EP-1PN菌株中含有3条dsRNA片段，大小分别为7.4kb、6.4kb和1.0kb，证实6.4 kb dsRNA片段与核盘菌Ep-1PN菌株毒力衰退紧密相关；对该dsRNA片段进行了cDNA克隆和序列分析，证明其可能为真菌病毒SsDRV（核盘菌致病力衰退相关RNA病毒）的复制体形式。雪腐核盘菌（S.nivalis）是核盘菌的近缘种，其Let-19菌株分离自湖北省神农架发病莴苣。在PDA培养皿中，将核盘菌与雪腐核盘菌对峙培养，两菌落接触后，形成典型的坏死带（菌丝不融合所致）。我们将Ep-1PN菌株与Let-19菌株于20℃对峙培养，当两菌落接触后，自Let-19菌株的菌落边缘挑取菌丝尖端移至新的PDA平皿中培养，发现Let-19菌株继代培养物的菌落形态发生了显著的变化，它们较正常的Let-19菌株生长慢，菌落异常扩展、致病力较弱，这些继代培养物的表型与Ep-1PN菌株的类似。将这些继代培养物与Let-19菌株对峙培养，同样可以促使Let-19菌株的表型发生显著变化。表明与Ep-1PN菌株接触后，Let-19菌株获得了具传染性的衰退因子。采用纤维素粉CF-11吸附的方法自Let-19菌株的继代培养物的菌丝中提取获得了大小为7.6kb和6.4kb的dsRNA片段。经过Northern杂交验证，证实其中6.4kb的片段为SsDRV的dsRNA。表明核盘菌Ep-1PN菌株中的SsDRV已经传染至雪腐核盘菌Let-19菌株。为了检测真菌病毒在跨种间传播的频率，我们将核盘菌Ep-1PN菌株与雪腐核盘菌Let-19菌株于PDA平皿上对峙培养，12天后在Let-19菌株的菌落边缘挑取4个菌丝块移至新的PDA平皿中培养，观察继代培养物的表型变化，若出现类似衰退症状的培养物，将用提取dsRNA的方法进一步鉴定和确认，只要4个继代培养物中出现1个感染SsDRV的培养物，即计算为传播成功。试验重复100次，共获得400个Let-19菌株的继代分离物。研究证实，在100个对峙培养的培养皿中，有29个培养皿发生了SsDRV成功传播的事件，即传播频率为29%。

利用植物有益内生细菌进行植物病害生物防治和提高作物产量是当前农用微生物研究的一个热点。在我国，以植物有益内生细菌为主体的植物微生态制剂已经进入田间的农业生产应用，取得了良好的经济和生态效益。细菌在植物上发挥其功能的关键是细菌可以在作用部位很好的定殖。研究发现，在细菌与植物相互作用时，会引起该区域的氧自由基浓度的急剧升高；同时植物也会代谢分泌出一些酚类物质，这些物质都会产生氧自由基[1，2]。在该环境中定殖的细菌必须克服这种氧自由基对细胞的毒性。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）是细胞抗氧自由基毒性的一种关键酶。SOD广泛存在于生物体内，催化O·2歧化为H2O2 和O2。按照结合的不同金属离子，SOD主要分为Mn-SOD、Fe-SOD和CuZn-SOD[3]。其中，Mn-SOD和Fe-SOD在细胞体内发挥功能，而CuZn-SOD定位在胞壁空间或者胞外以清除细胞膜外的氧自由基[4]。Bacillus cereus 905是本研究室从小麦体内分离获得的一株具有很好的促生和防病效果的细菌，在小麦体内及根围定殖能力强。为分析其定殖的分子机制，根据已公布的蜡样芽孢杆菌的全基因组序列及本实验室已获得的B.cereus M22的CuZn-SOD基因[5]，推测在B.cereus 905中也存在CuZn-SOD基因。本研究试图从氧自由基毒性角度探讨CuZn-SOD在细菌与宿主相互作用时发挥的重要功能。比对Genbank发表的几个B.cereus菌株的CuZn-SOD基因序列，根据两端高度保守的序列设计引物，利用PCR方法扩增B.cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，化学抑制法验证蛋白种类。以B.cereus 905的基因组DNA为模板进行PCR，得到了B.cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。该基因由537 bp组成，编码179个氨基酸残基。根据该蛋白的分子量大小和pET-22b载体中的多克隆位点上游pelB前导序列和下游His-tag序列，预测表达出的蛋白大小约为23kD。序列比对发现其与B.cereus M22同源性高至96%[5]，BLAST结果也显示其与其他的几株蜡样芽孢杆菌的CuZn-SOD基因的同源性在90%以上。在sodC推定的179个氨基酸残基中，甘氨酸（G）含量最高，达到12.29%（22/179，mol/mol），且在序列中均匀分布。在推定氨基酸序列中，不含酪氨酸（Y）和色氨酸（W），这与其他CuZn-SOD序列特征一致。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，NBT反相染色后，较未诱导样品相比，诱导后的细胞裂解液出现一条明显的亮带，表明该基因表达出的蛋白表现出SOD活性（图1）。SOD酶活测定也发现诱导后细胞裂解液的SOD酶活有了显著的提高，化学抑制法得出诱导出的SOD蛋白经KCN和H2O2处理后，其活性受到很大程度上的抑制，而氯仿/乙醇对其活性没有影响，确定了诱导表达出的蛋白为CuZn-SOD（图2）。Figure 1 Enzymatic activity tests of E.coli BL21(pET-22b-sodC) by Native-PAGEFigure 2 Identification of CuZn-SOD with chemical inhibitant methods超氧化物歧化酶普遍存在于所有的需氧生物中，从最低等的原核生物到高度复杂的人脑，都存在SOD的防御反应。B.cereus 905是一种植物内生细菌。有数据发现在细菌与植物互作及植物体内都可能有超氧阴离子的存在。B.cereus 905很可能依靠其CuZn-SOD的活性清除胞外的氧自由基以保证该细菌可以在植物体内很好的定殖。作为非病原菌的植物内生细菌，CuZn-SOD可能在其侵入及定殖过程中扮演着重要角色，更明确的结论需要下一步基因缺失后的定殖能力的比较分析。

黄瓜连作障碍的主要症状为根系生长受到抑制，吸收养分能力减弱，枯萎病等土传病害严重发生。导致黄瓜连作障碍的原因主要是土壤养分供应失衡，土壤中病原微生物、根结线虫增多，根系残茬及病原微生物产生的有毒物质积累。尽管连作障碍产生的原因很多，但主要原因来自土壤，其中微生物种群结构失衡是导致作物减产、土壤质量下降的主要原因之一。将丛枝菌根真菌，作为缓解连作障碍的有益菌株，利用筛选的合成有机物或菇渣为营养，与培养好的拮抗木霉制剂一起合成生物土壤添加剂，结合太阳能消毒土壤，从改善土壤养分促进养分吸收，抑制土传病害、分解或转化自毒物质，诱导抗性物质等方面，减缓连作障碍的发生。本研究组配制的生物土壤添加剂已在盆栽黄瓜和连作温室内应用，表现较好的抑菌防病作用。有必要对生物土壤添加剂克服黄瓜连作障碍的防病机制，特别是土壤微生物群落变化和诱导抗病性进行系统深入全面的研究。明确其促进植株生长，抑菌防病的机制，为合理利用生物土壤添加剂减轻连作障碍提供理论依据。供试生物土壤添加剂（Biologic soil amendment BSA）为天津市农业科学院植保所研制的一种由有机物、无机物及生防木霉菌和VA菌剂组成的混合物。生物土壤添加剂中含有机发酵肥60%以上，木霉菌剂的孢子数达106cfu/g，VA菌剂孢子20个/g，具有改良土壤，抑制病害的作用。木霉菌剂（Tr9801）为菇渣培养物含量为107cfu/g。黄瓜品种：津春2号，经25℃催芽露白后挑选发芽一致的种子播于营养钵内。供试土壤采自天津郊区北辰区日光温室，每年春秋两茬黄瓜，黄瓜枯萎病等土传病害严重发生的连作9年的重茬土。供试病原菌：黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum），天津市农业科学院植保所病害研究室保存。将F.oxysporum用PDA液体培养基25℃ 培养1周后，血球计数板镜检，将孢子悬浮液调整为106cfu/ml，备用。生物土壤添加剂分别按1%、3%、5%与土壤搅拌混匀，每营养钵装土400g，以不加添加物的连作土为空白对照。用枯萎病菌的孢子悬浮液浸泡已催芽的黄瓜种子30s，每钵3粒种子，每处理12盆，3次重复。播种后7天、14天、21天、28天调查黄瓜根际土壤微生物数量及区系。取根部样品，自来水强力冲洗后，用滤纸吸干，装入保鲜袋，放入-20℃低温冰箱中保存。土壤中微生物的分离采用土壤稀释分离法。土壤和根际真菌、放线菌、细菌分别以10-3， 10-5，10-7的稀释浓度，分别采用马丁氏培养基、改良高氏一号培养基和牛肉膏蛋白胨培养基进行分离。在26℃，28℃，30℃培养箱内培养6天、8天、10天，统计平板上的菌落数。对优势菌属进行鉴定并用平板对峙培养法测定对黄瓜枯萎病菌抑菌作用。不同处理根系的酶活性测定，过氧化物酶POD活性的测定，采用愈创木酚法；多酚氧化酶PPO活性的测定，参照朱广廉的方法，采用邻苯二酚为底物，测定525 nm处的OD值，以每分钟OD值变化0.001为1个酶活单位U；根系脱氢酶采用TTC法。根系酚类物质含量的测定参照Folin 试剂比色法。施用生物土壤添加剂后各种微生物数量明显上升，各处理间真菌数量变化不大，细菌数量明显增加。随施着用量增加，根际微生物总量呈上升趋势，细菌数量增多，放线菌的数量也呈上升状态。细菌和放线菌数量较对照增幅较大，真菌变化相对较小。各处理土壤细菌的优势菌株主要为假单胞菌属和芽孢杆菌属的不同菌株。枯草芽孢杆菌、假单胞菌可以拮抗黄瓜尖镰孢菌（Fusarium oxysporum），可减少土壤中的病原菌。真菌主要为半知菌类，是土壤中常见的类群，不同处理产生的真菌类群主要为木霉菌，其次是青霉菌、毛霉属、根霉属、镰孢霉属及曲霉属，其他菌属所占比例较少。优势菌中的青霉、木霉和毛霉对黄瓜枯萎病菌有不同程度的抑菌作用。土壤放线菌主要为链霉菌，其中优势菌为黄孢类群、灰褐类群、白孢类群及粉孢类群，放线菌大多可以分泌抗生素抑制病原真菌，添加剂处理中黄孢类群、灰褐类群较对照增加，并且这两类菌株对黄瓜枯萎病镰刀菌有较强的抑制作用。在接种后第7天达到酶活性高峰，随着病原菌的侵染，POD酶活性下降，生物土壤添加剂的各处理显著高于对照。根系PPO活性随着添加剂施用量的增加呈现上升，在接菌后7天出现明显的酶活高峰，之后各处理逐渐下降，添加剂各处理的酶活性一直高于仅接枯萎病菌的对照。根系脱氢酶的活性随着施用量的增加其活性增强，随着病菌的侵入各处理的根系活力均有所下降。植株根系防御酶系POD酶及PPO酶活性变化与生物土壤添加剂的抗病性有直接关系，即抗病性越强，其植株内这两种酶的活性越高。酶活性含量越高，变幅越小，其抗性越强。生物土壤添加剂的应用显著提高了根系脱氢酶的活性。增强了根主动吸收的能力，有利于植株的生长。在病原菌的侵入期至潜育期总酚含量逐渐下降，但施用添加剂处理其酚类含量始终高于对照，这可有效阻止病原菌的入侵，植株开始发病时，根系酚类物质含量显著增加。酚类化合物是由植物体内自身合成的一些具有抗菌作用的次生代谢物质。酚类物质在植株体内的含量会受到外源病菌的侵入而发生相应的变化。与启动自身防御体系有关，以此来抵抗病原菌的侵害。生物土壤添加剂防病机制复杂，还有待进一步研究。既有土壤微生物的调节作用，又有添加物的诱导抗病性。生物土壤添加剂对连作障碍的防治作用可归为：①土壤中有益微生物对土传病原菌的拮抗作用增强。②土壤添加剂中含有丰富的营养物质及多种微量元素，可以补充作物生长的需要，促进根系的发育，增强植株的抗病性。③施用添加剂后，改善了土壤微生物的营养条件，提高了土壤微生物多样性，从生态水平上缓解了连作的发生。④生物土壤添加剂具有诱导抗病性，可以诱导植株体内与抗病有关的POD酶、PPO酶及根系脱氢酶的活性，提高植株体内抗病物质酚类化合物的含量。⑤生物土壤添加剂中的一些有机物对土传病原菌具有抑制作用。

真菌病毒广泛存在于真菌中，其核酸类型多为dsRNA，也有少数为ssRNA。大多数真菌被侵染后不表现症状，但有些真菌病毒可以对寄主造成显著影响，如引致寄主真菌生长缓慢、菌落形态异常和致病力显著下降等，即弱毒现象（Hypovirulence）。由于真菌病毒在植物病原真菌间扩散可导致病原真菌群体出现致病力衰退。因此，与植物病原真菌衰退相关的真菌病毒在植物病害控制中有重要的作用。前期研究证实核盘菌Ep-1PN菌株的衰退与真菌病毒SsDRV（核盘菌致病力衰退相关病毒）有关。但是我们发现Ep-1PN菌株可以通过有性繁殖摆脱SsDRV的为害，而恢复生长和致病，通过RT-PCR检测，Ep-1PN菌株的子囊孢子子代不携带有SsDRV；在Ep-1PN菌株的菌核分离物中，也可以获得恢复正常表型的培养物，这些培养物或携带SsDRV或不携带SsDRV。这即表明，在自然界感染真菌病毒（SsDRV）的核盘菌仍然有可能摆脱SsDRV的影响。带毒真菌的这种脱毒作用对利用真菌病毒控制植物病害造成了潜在的风险。植物病原真菌周遍存在众多的微生物，它们是否对带毒真菌的脱毒作用目前并不明了。盾壳霉（Coniothyrium minitans）是核盘菌的重寄生菌，其所需的适宜温度与核盘菌的相似，随核盘菌生长而生长。我们推定盾壳霉可能对Ep-1PN菌株的脱毒作用存在一定影响。将核盘菌Ep-1PN菌株在PDA平板上于20℃培养2～4天后，形成小菌落，移走菌落中接种时遗留的Ep-1PN菌株的菌丝块，并在此部位接种盾壳霉ZS-1菌株的菌丝块，继续置于20℃培养7～10天。依据混合菌落边缘的特征将其分成4种类型：A.菌落边缘长出生长速度较快的核盘菌菌丝，出现的频率为16.3%；B.菌落边缘大部分是类似核盘菌Ep-1PN菌株的菌落，出现的频率为47.1%；C.菌落边缘大部分是盾壳霉ZS-1菌株菌落，出现的频率为28.8%；D.菌落边缘全部是ZS-1菌株的菌落，出现的频率为7.7%。对A型菌落，挑取核盘菌菌丝尖端进行继代培养。随机选择34株进行表型分析，测定其菌丝生长速度、致病力和观察其菌落形态。结果表明这些继代培养物均恢复为强毒力菌株的特性，称恢复菌株。这些恢复菌株的菌落形态正常、生长速度在1.7～3.0cm/天，其中17株培养物集中于2.2～2.4cm/天，8株培养物的生长速度大于2.4 cm/天。它们的致病力较强，病斑扩展速度在1.0～1.4cm/天之间，其中16株培养物的病斑扩展速度在1.15～1.3cm/天之间，有9株培养物的扩展速度大于1.3cm/天；而Ep-1PN菌株仅能形成微小的病斑，或不形成病斑。这些恢复菌株对SsDRV不具有抗性，与Ep-1PN菌株对峙培养后又重新被感染表现弱毒特性。对这些恢复菌株提取dsRNA发现大部分含有7.4 kb的片段，小部分菌株同时含有7.4kb和6.4kp的片段，还有一部分未检测出含任何dsRNA。未发现含有1.0kb或仅含6.4 kb，但不含7.4 kp片段的培养物。我们的研究证实核盘菌寄生真菌盾壳霉对Ep-1PN菌株摆脱SsDRV的影响具有一定的促进作用，盾壳霉促进Ep-1PN菌株摆脱SsDRV的影响的机理有待进一步研究。

植物生产在产前、产中、产后都受到环境条件和病原微生物及附生微生物的影响，在适宜的条件下植物及其产品都会产生病害，严重影响到植物及产品的产量和品质。联合国在1975年第七次特别会议就通过一项采后损失的决议，来要求一些国家重视减少采后损失的问题。但化学防治也带来了一系列生理生态问题，如农残、药害等现象得到了人们的充分重视，绿色食品、有机食品成为人们的关注对象。生物防治在这种情况下应时而生。为了生产“绿色食品”的需要，安徽省农业科学院绿色食品研究所在研制对人体无毒的植物源农药、兽药，获得了实验室产品“绿液”。“绿液”在动物上对鸡新城疫I系病毒、马立克氏火鸡疱疹有良好的防治效果；在医药上，对格兰氏阴性菌、格兰氏阳性菌、链球菌、乳杆菌、大肠杆菌、兼性厌氧菌，口腔中的梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、小韦荣氏球菌、放线菌、罗氏普氏菌、产黑普氏菌均具有杀灭作用。此外，对乙肝病毒中的HBSAg具有灭活作用，对菱孢774亦有抑制作用；在植物上对水稻白叶枯病、稻瘟病、烟草花叶病毒、芫菁花叶病毒均有防治效果，在食品上对酵母菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌均有抑制作用。为此，本文研究了生物制剂“绿液”对采后主要病原菌的抑制作用，以期为采后病害防治提供新途径。“绿液”，由安徽省农业科学院绿色食品研究所提供。苹果轮纹菌（Physalospora piricola Nose），苹果炭疽菌（Gloeospirium fructigenum Berk），青霉菌（Penicillum sp.），草莓灰霉菌（Botrytis cinerea），黄曲霉菌（Aspergillus flavus），由安徽农业大学植物保护学院提供。将“绿液”原液分别配成一定浓度的母液，然后分别吸取2ml至培养皿，把冷却到45～50℃的PDA培养基18ml加入含药剂的培养皿中，混匀凝固，配成相应浓度分别为0.10μg/ml、0.33μg/ml、0.65μg/ml、1.00μg/ml、3.33μg/ml、6.54μg/ml、10.00μg/ml、100.00μg/ml和1000.00μg/ml的含药平板。每皿移接一枚直径为0.6cm的供试病原菌的菌碟于其中央，置25℃光照培养箱中培养，重复3次，逐日定时定点在菌丝生长前沿划线，按十字交叉法测定菌落直径。计算药剂对菌丝生长的相对抑制率。按最小二乘法求回归式，计算EC50。结果见表1。可以看出在低浓度下，苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、青霉菌、黄曲霉菌的菌丝生长抑制率都为负值，苹果轮纹菌在“绿液”浓度为1.00μg/ml时，才对苹果轮纹菌有抑制作用；苹果炭疽菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时，才对苹果炭疽菌有抑制作用；烟青霉菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时，才对青霉菌有抑制作用；黄曲霉菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时，才对黄曲霉菌有抑制作用。从而说明“绿液”在低浓度下对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、青霉菌和黄曲霉菌有促进生长的作用，在高浓度下才有明显的抑制作用。相比较而言，“绿液”对草莓灰霉菌的抑制效果最好，在低浓度下就能抑制草莓灰霉菌的菌丝生长。在高浓度下，“绿液”对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌和草莓灰霉菌的抑制效果最好，在“绿液”浓度为100μg/ml与1000μg/ml时对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌和草莓灰霉菌的抑制率达到100%；而对烟青霉菌和黄曲霉菌是抑制作用就相对较差，在“绿液”浓度为1000μg/ml时对烟青霉菌的抑制率为50.6%，对黄曲霉菌的抑制率为54.0%。结果见表2。“绿液”对草莓灰霉菌的抑制效果最好，EC50为2.18μg/ml；对苹果炭疽菌和苹果轮纹菌抑制效果较好，EC50分别为3.97μg/ml和7.39μg/ml；“绿液”对青霉菌和黄曲霉菌的抑制效果也较差，EC50分别为982.06μg/ml和472.79μg/ml。浓度（μg/ml）苹果轮纹菌苹果炭疽菌烟青霉菌草莓灰霉菌黄曲霉0.10-23.3-2.60-6.801.00-10.80.33-18.5-0.70-3.101.90-4.300.65-9.603.707.409.205.401.008.9011.011.711.210.23.3317.034.112.345.018.36.5423.759.719.891.023.410.0023.779.927.295.128.1100.00100.0100.029.0100.032.41000.00100.0100.050.6100.054.0表1 不同浓度对各菌种的菌丝生长的抑制率菌株回归方程相关系数EC50（μg/ml）苹果轮纹菌Y=2.5992lgx+2.74120.91417.39苹果炭疽菌Y=2.4640lgx+3.52530.99193.97烟草青霉菌Y=0.4198lgx+3.74390.9623982.06草莓灰霉菌Y=2.1732lgx+4.26460.98482.18黄曲霉菌Y=0.4709lgx+3.74050.9540472.79表2 绿液对不同病原菌的毒力作用从试验结果可以看出，“绿液”对草莓灰霉菌、苹果轮纹菌和苹果炭疽菌的作用效果明显，EC50分别为2.18μg/ml、3.97μg/ml和7.39μg/ml；而对烟草青霉菌和黄曲霉菌的抑制作用最差，在“绿液”溶液浓度为1000μg/ml时对青霉菌的抑制率才达50.6%，对黄曲霉的抑制率达54.0%。此外“绿液”溶液在低浓度的时候对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、烟青霉菌和黄曲霉菌的菌丝生长不仅没有抑制作用，还对其菌丝有促进生长的作用。因此，在应用“绿液”时应注意浓度的使用。“绿液”在低浓度下对病菌生长的促进作用以及在较高浓度下对病菌的抑制作用机理有待于深入研究。

甜瓜为一年生草本植物，按其生态形分为薄皮甜瓜和厚皮甜瓜。济宁市种植薄皮甜瓜具有悠久的历史，但大面积集中栽培还是在近些年随着农业产业结构的调整而发展，目前仅在任城区、金乡县、鱼台县西部、嘉祥县南部保护地种植面积就达5万余亩，成为山东省最大的薄皮甜瓜种植基地。随着种植时间的延长和种植面积的不断扩大，甜瓜病害不断加重，特别是苗期病害，由于甜瓜多采用大棚育苗，育苗时间一般在1月下旬，常常遭遇低温，棚内温湿度不宜控制，病害容易发生，经常因防治不当，苗床大量死苗或移栽后造成大量死亡，若控制不力，将会对甜瓜的发展带来严重危害。几年来笔者针对为害较大的甜瓜苗期病害的发生及防治进行了试验研究，目的在于了解、掌握该类病害的发病特点和防治方法，进行经济有效的防治。已有国内外学者对该类病害进行了研究，特别是对露地栽培条件下的发生与防治研究较多[1～4]，而对保护地苗床期的发病特点和防治方法却少见报道。1.1.1 症状 发病初期，出土幼苗茎基部出现水烫状病斑，继而病斑逐渐加深为淡黄褐色，同时绕茎扩展，病部缢缩呈细线状，幼苗因失去支撑而折倒，刚折倒的病苗子叶短期内仍为绿色。发病严重时，种子未萌发或刚发芽时，即受病菌侵害，造成烂种、烂芽。湿度大时，成片幼苗猝倒，在病苗或病芽附近常密生白色棉絮状菌丝。1.1.2 病原菌 该病原菌为真菌Pythium aphanidermatum（Eds.）Fitsp.属鞭毛菌亚门，为瓜果腐霉菌。此外，甜瓜疫霉（P.melonis Katsura）和辣椒疫霉（Phytophthora capsici Leonian）等也可引起蔬菜幼苗猝倒病。1.1.3 传播途径和发病条件 病菌以菌丝体、卵孢子等随病残体在土壤中越冬，并可长期存活。遇有适宜条件，卵孢子萌发产生孢子囊，以游动孢子或直接长出芽管侵入寄主。田间病菌主要随水的移动、飞溅等进行传播蔓延。湿度大时，病苗上产生孢子囊和流动孢子，进行重复传染。低温高湿是猝倒病发生的必要条件。这是因为低温高湿不利于幼苗生长，但病菌仍能活动。一般猝倒病适宜地温为10℃左右。所以猝倒病多发生在早春育苗床上，尤其当幼苗期遇连阴天，光照不足，出现低温高湿环境，极易发生猝倒病。有的苗床开始发病时，是从棚顶滴水处的个别幼苗上先表现病症，几天后以此为中心，向周围蔓延扩展。该病也是甜瓜苗期的一种重要病害。据笔者几年调查，新苗床30%以上，老苗床50%以上可发现该病害。特别是老苗床，如不注意温湿度管理和及时防治，整个苗床可在几天基本死光，为害很大。是所有甜瓜种植区均能形成为害的一种病害。1.2.1 症状 刚出土的幼苗即可受害，以中后期发病为多。发病初期，病苗茎基部变褐，产生椭圆形病斑，叶片白天萎蔫，早晚尚可恢复。随病情发展，病斑渐凹陷、扩大，绕茎一周，叶片萎蔫不能复原，最后病部收缩干枯，病苗枯萎死亡。但病苗不呈猝倒状，病部有同心轮纹及淡褐色蛛网状菌丝。这一特点是本病与猝倒病相区别的主要特征。1.2.2 病原菌 该病原菌为真菌Rhizoctonia solani Kuhn.属半知菌亚门，为立枯丝核菌。该菌不产生孢子，主要以菌丝传播和繁殖。菌丝从无色变为黄褐色。病菌可产生菌核，菌核近球形或无定形，无色、浅褐色至黑褐色。有性阶段Pellicularia filamentosa（Pat.）Rogers.为丝核薄膜革菌。1.2.3 传播途径和发病条件 病菌以菌丝体和菌核在土中越冬，能存活2～3年。菌丝能直接侵入寄主，通过水流及带菌的堆肥传播为害。病菌生长适温为24℃。播种过密，间苗不及时，温度过高，易诱发此病。1.3.1 症状 该病害为一种生理性病害。幼苗出土后不长新根或不定根，幼根表面开始为锈褐色，尔后腐烂。沤根后地上部子叶或真叶呈黄绿或乳黄色，叶缘开始枯焦，严重的整叶皱缩枯焦，生长极为缓慢。在子叶期出现沤根，子叶即枯焦。在真叶期发生沤根，真叶就会出现枯焦。1.3.2 病因及发生条件 主要是苗床地温12℃以下持续时间较长，地势低洼、土壤黏重加之浇水过量或遇阴雨天气，苗床地温过低，致使幼苗根部呼吸作用减弱，活性降低。如此持续时间较长就会发生沤根。甜瓜育苗应选择土壤松而不散、黏而不硬、通气透水性良好、保肥保水力强的壤土新地或轮作3～5年的无病地育苗，大棚苗床必须选用无病土育苗。如用连作地或病地土壤，则苗床需深翻或用药剂消毒，常用50%福美双可湿性粉剂与40%五氯硝基苯粉剂消毒，或50%多菌灵可湿性粉剂，每平方米苗床8～10g，与20～30kg细干土拌匀成药土，待苗床所浇底水渗下后，取1/3药土作垫土铺底，种子播下后再将其余2/3药土覆在种子上，播后保持床面湿润；或将以上药土制成营养钵，再播种育苗。应用该方法进行防治，两年平均防治效果达到88.63%，实践证明这是一种经济有效的防治方法，可以兼治甜瓜猝倒病和甜瓜立枯病。加强苗床管理应以促进幼苗健壮生长，提高地温、降低苗床湿度为中心。为给幼苗创造良好生长条件，增强抗病能力，育苗前选用土质肥沃，不积水的苗床，施足优质腐熟有机肥，采用营养土育苗；提供使用无土育苗基质进行育苗。播种前浇足底水，出苗后尽量不浇水或少浇水，播种要均匀，密度不宜过大，防止床土过湿。出苗后，如果后，如果苗床出现过湿情况，可用小锄划锄或撒施干草木灰，以降低湿度；早春采用大棚育苗，必须做好增温保温工作。为了有效增加苗床温度，可结合实际情况，选用地热线育苗或火坑育苗，以缩短苗期时间。苗床还要尽量多地增加光照，并且苗床的通风、降湿，尤其在连续阴天、光照不足时更要抓住时机通风降湿；苗床要早分苗，使苗健壮，提高抗病力。出苗后如有少量病苗时应立即挖除，移出苗床处理，并选择下列杀菌剂在病苗及全苗床喷雾防治：以猝倒病为主时使用72.2%普力克水剂400～600倍液，72%克露可湿性粉剂500～600倍液，70%百得富可湿性粉剂600倍液，64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液，50%多菌灵悬浮剂500倍液，75%百菌清可湿性粉剂600倍液；以立枯病为主时使用20%甲基立枯磷乳油800倍液，70%甲基托布津800倍液，70%敌克松原粉1000倍液，50%福美双可湿性粉剂500倍液，64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液，50%多菌灵悬浮剂500倍液，75%百菌清可湿性粉剂600倍液，每平方米苗床喷淋药液2～3L，视病情发展情况，间隔7～10天再喷一次；在瓜苗移栽定植前选择广谱性杀菌剂如百菌清、杀毒矾、代森锰锌、多菌灵等再喷雾一次，带药移栽定植。选用土壤疏松，透气、透水性好的田园土，施足优质腐熟有机肥或生物肥，采用营养土育苗，提倡使用无土育苗基质进行育苗，播种前浇足底水，出苗后尽量不浇水或少浇水，播种密度不宜过大，出苗后如果出现苗床过湿，可采用小锄划锄或撒施干草木灰，以降低湿度，白天温度控制在20～25℃，夜间15℃，最低应在12℃以上，如果苗床出现沤根，应立即控制浇水，采取各种降湿升温措施。除划锄或撒施干草木灰以外，还可用生石灰降湿除潮。方法是：选新烧制的生石灰，分散放入苗床小拱棚内，充分吸潮后，进行更换，但注意生石灰不能与瓜苗直接接触。

辣椒的落叶、落花、落果通称“三落”。这是辣椒生产上的一个重要问题，对产量影响很大，一般落花率达20%～40%，落果率达10%左右，有的更为严重。引起三落的原因主要有3个方面：辣椒生长过程中要求中等强度的光照，光照过强或不足，会引起“三落”。强光直射会造成生长不良，易发生日灼病，导致“三落”；光照不足同样引起生长不良，引发“三落”。温度过低（低于15℃）或温度过高（高于35℃）影响授粉及花粉管的伸长，造成辣椒子房不能受精，引起落花。气候干燥，土壤干旱，造成授粉不良或引起病毒病流行，易引起“三落”。雨涝或灌水不当，根系吸收能力减弱，致使植株生理失调或伤根，引起“三落”或死株。1.4.1 实行间作 每4行辣椒种1行玉米，玉米种在畦埂上，株距1m，每穴2株。可防止强烈阳光直射，灼伤叶片；更重要的是阻止蚜虫迁飞传毒；诱集蛀果性害虫，集中产卵于玉米叶面上，集中处理，减轻蛀果性害虫为害。1.4.2 干旱时要浇水防旱，田间喷清水增加湿度 雨涝或田间有积水时要及时防涝排水。氮肥过多，磷、钾肥相对偏少，使枝叶徒长，营养生长与生殖生长不平衡，引起落花，落果。氮肥过少，使植株脱肥，叶黄枝瘦，造成“三落”。防治方法：要控制氮肥，增施磷钾肥，尤其要注意硫酸锌及磷酸二氢钾的叶面追肥。根据情况及时补充磷钾肥（上述两种物质，中、前期不少于3次，后期要增施1～2次）。3.1.1 病毒病 病毒病是辣椒的重要病害。轻型病毒病只出现花叶，不会造成畸形和落叶。重型病毒病会使叶片褪绿、黄化、蕨叶；造成植株矮化、形成丛枝，畸形，引起“三落”。3.1.2 辣椒细菌性斑点病 该病又名“落叶瘟”，属细菌性病害，常会引起早期大量“三落”，影响产量。一般情况会形成疮痂病斑，高温高湿条件下不形成疮痂，而是迅速扩展为叶缘焦枯，成长叶片上形成许多小斑点，之后引起大量落叶。重茬地，生长差的田快发病较重（抗性差）。3.1.3 辣椒疫病 这是辣椒生产中为害最大的病害。常会造成整株枯死，大片死亡。3.1.4 辣椒白粉病 该病能引起叶片早落，严重者可使全株叶片落尽。此病一般在叶背形成白粉状霉层，正面出现浅黄色斑，气温高相对湿度大的情况下发病重，且传播速度快。3.1.5 炭疽病 该病为害叶片和果实，以为害果实为主，严重时会引起大量果实腐烂，造成落果。高温多雨，田间湿度大，氮肥过多会加重此病。该病俗称“撒墨水”，最初病斑呈深绿色水浸状圆点，然后扩大成圆形至椭圆形，并形成同心轮纹黑褐色，湿度大时，果面病斑上出现黑色霉层。3.1.6 蛀果型害虫 主要有棉铃虫和烟青虫，蛀食会引起落果。培育壮苗，加强肥水管理，增强植株的抗性，特别在炎热的夏季要及时追肥、灌水和排水，及时防治病虫害。与非茄科作物轮作3年以上。①培育无病适龄壮苗。播种前要用10%的磷酸三钠浸种20～30min捞出，充分洗净（如不洗净会影响种子发芽，漂洗3～4次漂洗1～2h），再催芽播种；用无病土育苗，防蚜，适时定植，壮苗定植。②促发棵，壮棵。③增施有机肥。④搞好中耕除草，及时防治蚜虫（整个生育期都防治）。⑤及时清除田间病叶、果、株残体。4.4.1 病毒病可用1.5%植病灵水剂1000倍液喷雾或用20%病毒A可湿性粉剂400～500倍液喷雾。辣椒细菌性斑点病可用硫酸链霉素（200万单位）4000倍液，每隔7天喷一次，连续喷2～3次。辣椒疫病可用72%的杜帮克露800倍液喷雾防治或70%代森锰锌600倍液喷雾防治。辣椒白粉病、炭疽病用55%的可湿性粉剂500倍液进行叶面、叶被喷雾。4.4.2 蛀果型害虫可用半枯带叶杨、柳枝，10根一捆，每亩插放10捆，晚放晨收扑，可诱杀一定量成虫（杨、柳枝全枯时要更换）；用BT乳剂400～500倍液防治；用敌杀死、杀灭菊酯或灭扫利喷药防治。

近年来，水稻条纹叶枯病（Rice stripe Vir，RSV）在浙江嘉兴市呈快速上升态势，2007年全市发病面积达26.4万亩，对水稻安全生产带来严重威胁。影响水稻条纹叶枯病的发病流行的因素很多，如传毒媒介灰飞虱种群数量与带毒率、水稻品种抗病性、耕作制度、气候条件等。为了探索水稻播种期与灰飞虱迁移传毒和条纹叶枯病发病间的关系，为防治提供科学依据，2006～2007年进行了水稻不同播种期对病害发病程度的影响试验，现将结果综合整理如下。移栽单季晚稻，品种为秀水09。2006年与2007年均分4期播种，播种时间分别为5月15日、5月22日、5月29日和6月5日，每期间隔7天，每处理重复3次，每小区大田面积在0.5亩。播种前未做药剂浸（拌）种处理，按照处理要求时间，依次分期播种，待30天秧龄时依次分期移栽。秧田期、大田前期正常肥水管理，但不用杀虫剂、杀菌剂，让其自然发病。调查方法：秧苗移栽前调查病株率；大田期在移栽后至病情稳定期，各处理区用五点式取样法选定5点，每点40丛，计每区200丛，每隔5天调查1次，调查丛发病率与株病率，观察各处理区发病动态变化。秧田期各播种期间发病程度差异较为明显，2006年 5月15～22日播种的株病率高，分别为3.26%和2.25%，显著高于5月29日播种的0.24%，6月5日播种秧田未发病。2007年调查结果与2006年相似，见表1。调查试验表明，秧田期播种期越早，发病越重。年度播种期（月/日）5/155/225/296/520063.262.250.240.020074.205.300.370.33表1 水稻秧田不同播种期条纹叶枯病发病情况 （浙江嘉兴，2006～2007）在大田病情稳定期（7月中旬）调查，各播种期与病害的发生有着密切的关系，年度间、重复间基本一致。2006年的4个播种期中，从早到迟平均病丛率依次为18.5%、10.0%、5.67%和1.5%，平均病株率依次为4.07%、2.69%、1.89%和0.42%。随着播种期的推迟，病情递减。2007年的4个播种期中，前2个播种期病情重，病丛率分别为16.2%和16.67%，病株率分别为5.18%和7.31%，而后2个播种期的病丛率分别为2.7%和1.5%，病株率分别为1.9%和0.7%。试验进一步证实了播种期与发病程度间的密切关系，即播种期越早，发病越重，反之，则发病越轻。年度播种期（月/日）病丛率（%）病株率（%）重复1重复2重复3平均0.050.01重复1重复2重复3平均0.050.01200620075/1517.516.521.518.5aA4.163.164.884.07aA5/2210.510.59.010.0bB2.553.332.182.69bAB5/296.04.56.55.67cC2.021.072.571.89bBC6/52.00.52.01.5dD0.630.130.500.42cC5/1516.017.015.516.2aA6.225.214.115.18aA5/2218.015.516.516.67aA9.315.826.807.31aA5/293.03.02.02.7bB2.472.350.891.90bB6/52.01.01.51.5bB0.770.680.640.70bB表2 水稻播种期与大田条纹叶枯病发病关系调查 （浙江嘉兴，2006～2007）水稻不同播种期条纹叶枯病发病程度差异明显，分析原因主要是由传毒介体与条纹叶枯病的流行规律所决定的。条纹叶枯病是由灰飞虱为传毒媒介的病毒病，在一定的带毒虫源基数下，灰飞虱成虫高峰的早迟直接影响病害的流行与否。2006～2007年灰飞虱在嘉兴市的一代成虫高峰在5月中、下旬，如在此期间播种，出苗后正与一代成虫传毒高峰相吻合，此时水稻播种面积小，大量灰飞虱成虫迁移在秧苗上集中传毒，病害发生就重；而推迟至6月上旬播种，灰飞虱正处低龄若虫期或卵期，迁移能力不强，且随着气温的升高，灰飞虱数量减少，此时播种，传毒机率大为降低，病害发生就轻。观察表明，水稻条纹叶枯病与其他病害一样，经历始病期、剧增期、稳定期、下降期4个阶段。始病期随着播种期的不同而不同，播种越早，发病也越早，一般在移栽后2～7天开始出现病害症状；剧增期是病情急速发展的时期，各播种期间较为一致，2006年在6月25日～7月10日，历时15天；2007年在6月28日～7月12日，历时14天。病害稳定期各播种期间差异较小，2006年、2007年均在7月10日左右，此后病情开始缓慢下降，见图1、图2。图1 大田期各播种期条纹叶枯病发病动态（浙江嘉兴，2006）水稻播种期对条纹叶枯病发病有较大影响，在自然发病情况下，秧田期与大田期播种期早，病情重；播种期迟，病情轻。分析原因这与灰飞虱迁移和传毒特性有关，水稻播种期如与一代灰飞虱成虫高峰相吻合，发病就重。在浙江嘉兴市，一代灰飞虱成虫高峰一般在5月中下旬，此时播种容易造成集中传毒。水稻条纹叶枯病防治的根本措施是抗病品种的选育与推广，在目前缺乏抗病品种的情况下，适期播种是控制病害流行的最有效方法之一。水稻播种期的选择，应根据水稻品种的特性、灰飞虱成虫传毒高峰而定，在对水稻生长发育、产量、品质等影响较小和不受影响的前提下，水稻播种期应避开灰飞虱成虫传毒高峰期，应提倡适当推迟、同期播种，在浙江嘉兴市推迟至5月底至6月中旬播种较为适宜。图2 大田期各播种期条纹叶枯病发病动态（浙江嘉兴，2007）