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报告Inhibition of A New-type Bioagent“luye”to Primary Postharvest Pathogens
出版时间:2007植物生产在产前、产中、产后都受到环境条件和病原微生物及附生微生物的影响,在适宜的条件下植物及其产品都会产生病害,严重影响到植物及产品的产量和品质。联合国在1975年第七次特别会议就通过一项采后损失的决议,来要求一些国家重视减少采后损失的问题。但化学防治也带来了一系列生理生态问题,如农残、药害等现象得到了人们的充分重视,绿色食品、有机食品成为人们的关注对象。生物防治在这种情况下应时而生。为了生产“绿色食品”的需要,安徽省农业科学院绿色食品研究所在研制对人体无毒的植物源农药、兽药,获得了实验室产品“绿液”。“绿液”在动物上对鸡新城疫I系病毒、马立克氏火鸡疱疹有良好的防治效果;在医药上,对格兰氏阴性菌、格兰氏阳性菌、链球菌、乳杆菌、大肠杆菌、兼性厌氧菌,口腔中的梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、小韦荣氏球菌、放线菌、罗氏普氏菌、产黑普氏菌均具有杀灭作用。此外,对乙肝病毒中的HBSAg具有灭活作用,对菱孢774亦有抑制作用;在植物上对水稻白叶枯病、稻瘟病、烟草花叶病毒、芫菁花叶病毒均有防治效果,在食品上对酵母菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌均有抑制作用。为此,本文研究了生物制剂“绿液”对采后主要病原菌的抑制作用,以期为采后病害防治提供新途径。“绿液”,由安徽省农业科学院绿色食品研究所提供。苹果轮纹菌(Physalospora piricola Nose),苹果炭疽菌(Gloeospirium fructigenum Berk),青霉菌(Penicillum sp.),草莓灰霉菌(Botrytis cinerea),黄曲霉菌(Aspergillus flavus),由安徽农业大学植物保护学院提供。将“绿液”原液分别配成一定浓度的母液,然后分别吸取2ml至培养皿,把冷却到45~50℃的PDA培养基18ml加入含药剂的培养皿中,混匀凝固,配成相应浓度分别为0.10μg/ml、0.33μg/ml、0.65μg/ml、1.00μg/ml、3.33μg/ml、6.54μg/ml、10.00μg/ml、100.00μg/ml和1000.00μg/ml的含药平板。每皿移接一枚直径为0.6cm的供试病原菌的菌碟于其中央,置25℃光照培养箱中培养,重复3次,逐日定时定点在菌丝生长前沿划线,按十字交叉法测定菌落直径。计算药剂对菌丝生长的相对抑制率。按最小二乘法求回归式,计算EC50。结果见表1。可以看出在低浓度下,苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、青霉菌、黄曲霉菌的菌丝生长抑制率都为负值,苹果轮纹菌在“绿液”浓度为1.00μg/ml时,才对苹果轮纹菌有抑制作用;苹果炭疽菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时,才对苹果炭疽菌有抑制作用;烟青霉菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时,才对青霉菌有抑制作用;黄曲霉菌在“绿液”浓度为0.65μg/ml时,才对黄曲霉菌有抑制作用。从而说明“绿液”在低浓度下对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、青霉菌和黄曲霉菌有促进生长的作用,在高浓度下才有明显的抑制作用。相比较而言,“绿液”对草莓灰霉菌的抑制效果最好,在低浓度下就能抑制草莓灰霉菌的菌丝生长。在高浓度下,“绿液”对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌和草莓灰霉菌的抑制效果最好,在“绿液”浓度为100μg/ml与1000μg/ml时对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌和草莓灰霉菌的抑制率达到100%;而对烟青霉菌和黄曲霉菌是抑制作用就相对较差,在“绿液”浓度为1000μg/ml时对烟青霉菌的抑制率为50.6%,对黄曲霉菌的抑制率为54.0%。结果见表2。“绿液”对草莓灰霉菌的抑制效果最好,EC50为2.18μg/ml;对苹果炭疽菌和苹果轮纹菌抑制效果较好,EC50分别为3.97μg/ml和7.39μg/ml;“绿液”对青霉菌和黄曲霉菌的抑制效果也较差,EC50分别为982.06μg/ml和472.79μg/ml。浓度(μg/ml)苹果轮纹菌苹果炭疽菌烟青霉菌草莓灰霉菌黄曲霉0.10-23.3-2.60-6.801.00-10.80.33-18.5-0.70-3.101.90-4.300.65-9.603.707.409.205.401.008.9011.011.711.210.23.3317.034.112.345.018.36.5423.759.719.891.023.410.0023.779.927.295.128.1100.00100.0100.029.0100.032.41000.00100.0100.050.6100.054.0表1 不同浓度对各菌种的菌丝生长的抑制率菌株回归方程相关系数EC50(μg/ml)苹果轮纹菌Y=2.5992lgx+2.74120.91417.39苹果炭疽菌Y=2.4640lgx+3.52530.99193.97烟草青霉菌Y=0.4198lgx+3.74390.9623982.06草莓灰霉菌Y=2.1732lgx+4.26460.98482.18黄曲霉菌Y=0.4709lgx+3.74050.9540472.79表2 绿液对不同病原菌的毒力作用从试验结果可以看出,“绿液”对草莓灰霉菌、苹果轮纹菌和苹果炭疽菌的作用效果明显,EC50分别为2.18μg/ml、3.97μg/ml和7.39μg/ml;而对烟草青霉菌和黄曲霉菌的抑制作用最差,在“绿液”溶液浓度为1000μg/ml时对青霉菌的抑制率才达50.6%,对黄曲霉的抑制率达54.0%。此外“绿液”溶液在低浓度的时候对苹果轮纹菌、苹果炭疽菌、烟青霉菌和黄曲霉菌的菌丝生长不仅没有抑制作用,还对其菌丝有促进生长的作用。因此,在应用“绿液”时应注意浓度的使用。“绿液”在低浓度下对病菌生长的促进作用以及在较高浓度下对病菌的抑制作用机理有待于深入研究。 -
报告Discussion of the Relation Between Rice Sowing Time and the Occurrence of Rice Stripe Virus
出版时间:2007近年来,水稻条纹叶枯病(Rice stripe Vir,RSV)在浙江嘉兴市呈快速上升态势,2007年全市发病面积达26.4万亩,对水稻安全生产带来严重威胁。影响水稻条纹叶枯病的发病流行的因素很多,如传毒媒介灰飞虱种群数量与带毒率、水稻品种抗病性、耕作制度、气候条件等。为了探索水稻播种期与灰飞虱迁移传毒和条纹叶枯病发病间的关系,为防治提供科学依据,2006~2007年进行了水稻不同播种期对病害发病程度的影响试验,现将结果综合整理如下。移栽单季晚稻,品种为秀水09。2006年与2007年均分4期播种,播种时间分别为5月15日、5月22日、5月29日和6月5日,每期间隔7天,每处理重复3次,每小区大田面积在0.5亩。播种前未做药剂浸(拌)种处理,按照处理要求时间,依次分期播种,待30天秧龄时依次分期移栽。秧田期、大田前期正常肥水管理,但不用杀虫剂、杀菌剂,让其自然发病。调查方法:秧苗移栽前调查病株率;大田期在移栽后至病情稳定期,各处理区用五点式取样法选定5点,每点40丛,计每区200丛,每隔5天调查1次,调查丛发病率与株病率,观察各处理区发病动态变化。秧田期各播种期间发病程度差异较为明显,2006年 5月15~22日播种的株病率高,分别为3.26%和2.25%,显著高于5月29日播种的0.24%,6月5日播种秧田未发病。2007年调查结果与2006年相似,见表1。调查试验表明,秧田期播种期越早,发病越重。年度播种期(月/日)5/155/225/296/520063.262.250.240.020074.205.300.370.33表1 水稻秧田不同播种期条纹叶枯病发病情况 (浙江嘉兴,2006~2007)在大田病情稳定期(7月中旬)调查,各播种期与病害的发生有着密切的关系,年度间、重复间基本一致。2006年的4个播种期中,从早到迟平均病丛率依次为18.5%、10.0%、5.67%和1.5%,平均病株率依次为4.07%、2.69%、1.89%和0.42%。随着播种期的推迟,病情递减。2007年的4个播种期中,前2个播种期病情重,病丛率分别为16.2%和16.67%,病株率分别为5.18%和7.31%,而后2个播种期的病丛率分别为2.7%和1.5%,病株率分别为1.9%和0.7%。试验进一步证实了播种期与发病程度间的密切关系,即播种期越早,发病越重,反之,则发病越轻。年度播种期(月/日)病丛率(%)病株率(%)重复1重复2重复3平均0.050.01重复1重复2重复3平均0.050.01200620075/1517.516.521.518.5aA4.163.164.884.07aA5/2210.510.59.010.0bB2.553.332.182.69bAB5/296.04.56.55.67cC2.021.072.571.89bBC6/52.00.52.01.5dD0.630.130.500.42cC5/1516.017.015.516.2aA6.225.214.115.18aA5/2218.015.516.516.67aA9.315.826.807.31aA5/293.03.02.02.7bB2.472.350.891.90bB6/52.01.01.51.5bB0.770.680.640.70bB表2 水稻播种期与大田条纹叶枯病发病关系调查 (浙江嘉兴,2006~2007)水稻不同播种期条纹叶枯病发病程度差异明显,分析原因主要是由传毒介体与条纹叶枯病的流行规律所决定的。条纹叶枯病是由灰飞虱为传毒媒介的病毒病,在一定的带毒虫源基数下,灰飞虱成虫高峰的早迟直接影响病害的流行与否。2006~2007年灰飞虱在嘉兴市的一代成虫高峰在5月中、下旬,如在此期间播种,出苗后正与一代成虫传毒高峰相吻合,此时水稻播种面积小,大量灰飞虱成虫迁移在秧苗上集中传毒,病害发生就重;而推迟至6月上旬播种,灰飞虱正处低龄若虫期或卵期,迁移能力不强,且随着气温的升高,灰飞虱数量减少,此时播种,传毒机率大为降低,病害发生就轻。观察表明,水稻条纹叶枯病与其他病害一样,经历始病期、剧增期、稳定期、下降期4个阶段。始病期随着播种期的不同而不同,播种越早,发病也越早,一般在移栽后2~7天开始出现病害症状;剧增期是病情急速发展的时期,各播种期间较为一致,2006年在6月25日~7月10日,历时15天;2007年在6月28日~7月12日,历时14天。病害稳定期各播种期间差异较小,2006年、2007年均在7月10日左右,此后病情开始缓慢下降,见图1、图2。图1 大田期各播种期条纹叶枯病发病动态(浙江嘉兴,2006)水稻播种期对条纹叶枯病发病有较大影响,在自然发病情况下,秧田期与大田期播种期早,病情重;播种期迟,病情轻。分析原因这与灰飞虱迁移和传毒特性有关,水稻播种期如与一代灰飞虱成虫高峰相吻合,发病就重。在浙江嘉兴市,一代灰飞虱成虫高峰一般在5月中下旬,此时播种容易造成集中传毒。水稻条纹叶枯病防治的根本措施是抗病品种的选育与推广,在目前缺乏抗病品种的情况下,适期播种是控制病害流行的最有效方法之一。水稻播种期的选择,应根据水稻品种的特性、灰飞虱成虫传毒高峰而定,在对水稻生长发育、产量、品质等影响较小和不受影响的前提下,水稻播种期应避开灰飞虱成虫传毒高峰期,应提倡适当推迟、同期播种,在浙江嘉兴市推迟至5月底至6月中旬播种较为适宜。图2 大田期各播种期条纹叶枯病发病动态(浙江嘉兴,2007) -
报告辣椒“三落”的原因及防治对策
出版时间:2007辣椒的落叶、落花、落果通称“三落”。这是辣椒生产上的一个重要问题,对产量影响很大,一般落花率达20%~40%,落果率达10%左右,有的更为严重。引起三落的原因主要有3个方面:辣椒生长过程中要求中等强度的光照,光照过强或不足,会引起“三落”。强光直射会造成生长不良,易发生日灼病,导致“三落”;光照不足同样引起生长不良,引发“三落”。温度过低(低于15℃)或温度过高(高于35℃)影响授粉及花粉管的伸长,造成辣椒子房不能受精,引起落花。气候干燥,土壤干旱,造成授粉不良或引起病毒病流行,易引起“三落”。雨涝或灌水不当,根系吸收能力减弱,致使植株生理失调或伤根,引起“三落”或死株。1.4.1 实行间作 每4行辣椒种1行玉米,玉米种在畦埂上,株距1m,每穴2株。可防止强烈阳光直射,灼伤叶片;更重要的是阻止蚜虫迁飞传毒;诱集蛀果性害虫,集中产卵于玉米叶面上,集中处理,减轻蛀果性害虫为害。1.4.2 干旱时要浇水防旱,田间喷清水增加湿度 雨涝或田间有积水时要及时防涝排水。氮肥过多,磷、钾肥相对偏少,使枝叶徒长,营养生长与生殖生长不平衡,引起落花,落果。氮肥过少,使植株脱肥,叶黄枝瘦,造成“三落”。防治方法:要控制氮肥,增施磷钾肥,尤其要注意硫酸锌及磷酸二氢钾的叶面追肥。根据情况及时补充磷钾肥(上述两种物质,中、前期不少于3次,后期要增施1~2次)。3.1.1 病毒病 病毒病是辣椒的重要病害。轻型病毒病只出现花叶,不会造成畸形和落叶。重型病毒病会使叶片褪绿、黄化、蕨叶;造成植株矮化、形成丛枝,畸形,引起“三落”。3.1.2 辣椒细菌性斑点病 该病又名“落叶瘟”,属细菌性病害,常会引起早期大量“三落”,影响产量。一般情况会形成疮痂病斑,高温高湿条件下不形成疮痂,而是迅速扩展为叶缘焦枯,成长叶片上形成许多小斑点,之后引起大量落叶。重茬地,生长差的田快发病较重(抗性差)。3.1.3 辣椒疫病 这是辣椒生产中为害最大的病害。常会造成整株枯死,大片死亡。3.1.4 辣椒白粉病 该病能引起叶片早落,严重者可使全株叶片落尽。此病一般在叶背形成白粉状霉层,正面出现浅黄色斑,气温高相对湿度大的情况下发病重,且传播速度快。3.1.5 炭疽病 该病为害叶片和果实,以为害果实为主,严重时会引起大量果实腐烂,造成落果。高温多雨,田间湿度大,氮肥过多会加重此病。该病俗称“撒墨水”,最初病斑呈深绿色水浸状圆点,然后扩大成圆形至椭圆形,并形成同心轮纹黑褐色,湿度大时,果面病斑上出现黑色霉层。3.1.6 蛀果型害虫 主要有棉铃虫和烟青虫,蛀食会引起落果。培育壮苗,加强肥水管理,增强植株的抗性,特别在炎热的夏季要及时追肥、灌水和排水,及时防治病虫害。与非茄科作物轮作3年以上。①培育无病适龄壮苗。播种前要用10%的磷酸三钠浸种20~30min捞出,充分洗净(如不洗净会影响种子发芽,漂洗3~4次漂洗1~2h),再催芽播种;用无病土育苗,防蚜,适时定植,壮苗定植。②促发棵,壮棵。③增施有机肥。④搞好中耕除草,及时防治蚜虫(整个生育期都防治)。⑤及时清除田间病叶、果、株残体。4.4.1 病毒病可用1.5%植病灵水剂1000倍液喷雾或用20%病毒A可湿性粉剂400~500倍液喷雾。辣椒细菌性斑点病可用硫酸链霉素(200万单位)4000倍液,每隔7天喷一次,连续喷2~3次。辣椒疫病可用72%的杜帮克露800倍液喷雾防治或70%代森锰锌600倍液喷雾防治。辣椒白粉病、炭疽病用55%的可湿性粉剂500倍液进行叶面、叶被喷雾。4.4.2 蛀果型害虫可用半枯带叶杨、柳枝,10根一捆,每亩插放10捆,晚放晨收扑,可诱杀一定量成虫(杨、柳枝全枯时要更换);用BT乳剂400~500倍液防治;用敌杀死、杀灭菊酯或灭扫利喷药防治。 -
报告Effects on Resistance to Grey Mould in Tomato after Induced Leaves at Different Positions
出版时间:2007灰霉病是番茄栽培中的重要病害,长期依赖农药防治该病严重污染环境和产品。利用诱导抗性是植物病害可持续控制的一条有效途径。E.A.Achuo和K.Audenaert等用适宜浓度的BTH处理土壤或叶片,显著降低番茄灰霉的发病程度[1]。众多研究表明,诱导植株下位叶片,可增强诱导叶和其上非诱导叶的抗病性[2~4];而诱导上位叶片对诱导叶及其下位非诱导叶的抗病性的影响鲜见报道。本试验比较了5种化学物质诱导不同部位叶片对番茄灰霉病发生程度的影响,为诱抗剂的使用技术提供参考和依据。番茄品种为L402,灰霉菌(Botrytis cinerea)由田间分离所得。供试化学物质分别为:CaCl2(Calcium chloride,Ca),上海化学试剂公司生产;水杨酸(Salicylic acid,SA),沈阳化学试剂厂生产;茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MJ)、龙胆酸(Gentisic acid,GeA)和β-氨基丁酸(3-Aminobutyric acid,BABA),购自Sigma公司。番茄穴盘育苗,苗期管理与一般生产相同。6叶期用20mmol/L的CaCl2,3mmol/L的SA、MJ、GeA和9mmol/L的BABA涂抹第3叶片(下位叶)或第5叶片(上位叶)。5天后用浓度为106个孢子/ml的灰霉菌孢子悬液接种第4真叶的前5片小叶,接种方法采用微量注射法[7]。接种后第5天调查发病程度并计算病指数。病害分级标准为:0级,无病斑;1级,病斑面积占叶面积5%以下;3级,病斑面积占叶面积5%~15%;5级,病斑面积占叶面积15%~25%;7级,病斑面积占叶面积25%~50%;9级,病斑面积占叶面积50%以上[7]。每处理3次重复,数据均用SPSS软件进行统计分析。无论是诱导第3叶片还是第5叶片,番茄灰霉病发生程度均显著低于对照。其中CaCl2、SA和GeA 诱导第3叶片和诱导第5叶片,番茄灰霉病发生程度之间没有显著差异;而MJ和BABA诱导第3叶片番茄灰霉病发生程度显著低于诱导第5叶片的发病程度(图1)。这一现象说明,CaCl2、SA、GeA、MJ和BABA诱导番茄的抗病信号既可以向上传递,也可以向下传递;而CaCl2、SA和GeA诱导的抗病信号向上和向下传递的能力相同,MJ和BABA诱导番茄的抗病信号向上传递能力高于向下传递能力。Figure 1 Disease index after induced leaves at different positions of tomato试验结果表明,CaCl2、SA、GeA、MJ和BABA均可诱导番茄抗病性增强,而且诱导的抗病信号可以在植株中进行双向传递,但诱导的抗病信号向植株下部传递能力不高于向上传递能力。蔡新忠等用叶霉菌非亲和小种4诱发接种番茄第3叶片,5天后用其亲和小种5挑战接种第3叶和第4叶,结果表明,诱导植株的第3叶和第4叶发病程度均显著低于对照,发病面积下降率分别为90%和85%[2]。童蕴慧等发现,用拮抗细菌处理番茄叶片可诱导番茄抗灰霉性增加,处理叶的上一叶位叶片中PAL、POD、PPO、SOD活性均显著高于对照,处理叶和上一叶位叶片中SA含量分别是对照的2.6倍和1.6倍[3]。张穗等用井冈霉素A处理珊西烟,处理叶和其上位叶片中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均比对照植株相同叶位叶片显著增加,而这两种酶活性与TMV引起的烟草叶片枯斑数目呈负相关[4]。上述研究结果与本试验结果一致。所以在所用诱抗剂价格昂贵或数量不足时,建议用少量诱抗剂处理植株下位叶片来达到防病目标。 -
报告浅析素质拓展训练与企业培训
出版时间:2009企业如何才能在当今激烈的市场竞争中立于不败之地?怎样才能在竞争中取得胜利?归根结底依靠的是人,因为只有人才能创造价值。然而企业要想获得适合自身发展的人才就必须通过各式各样的培训来实现,企业的培训将给员工提供可以胜任他们职位的信息和技能。但是,对于企业管理者来说,除了具备胜任职位的基本技能和能力以外,企业更注重培训他们的团队意识、沟通能力、协作能力等管理能力。素质拓展训练就是以“磨炼意志、陶冶情操、完善人格、熔炼团队”为目的,在体验式培训中实现这一目的的。素质拓展训练起源于西方,英文outward-bound,意为一艘小船离开安全的港湾,驶向波涛汹涌的大海,去迎接挑战。二战时期,大西洋上有很多船只由于受到攻击而沉没,大批船员落水,由于海水冰冷,又远离陆地,绝大多数人不幸牺牲了,但极少数人在经历了长时间的磨难后得以生还。后来,发现得以生还的人并不是那些身体强壮的人,而是那些拥有强烈求生欲望的人。二战结束后,在英国出现了这种模仿真实管理情景,对管理者和企业家进行心理和管理两个方面培训的outward-bound管理培训。由于它新颖的培训形式和良好的培训效果,被世界各地不同的企业所采用。根据管理学理论,我们可以将管理的过程分为四个部分:计划、组织、领导和控制。我们以素质拓展训练中“扫雷”这个项目,来看一下管理过程中的四个部分是如何工作的。“扫雷”游戏是用一张分成若干方格并标上数字的地毯来模拟雷区,每一个方格的结果是有雷或是无雷,在“雷区”中间位置的两侧是分别有两个峡谷。而这个游戏的规则是每一名队员只有两次机会去“扫雷”,如果选择的方格没有雷,那么可以安全地选择前后左右的任意一格继续“探雷”。但如果选择的方格是有雷的话,就必须按原路返回,换另一名队员继续“扫雷”。这个任务获胜的依据就是在规定的时间内所有的队员都可以安全地通过“雷区”。那么,在这个游戏中将如何去应用管理学知识来实现胜利呢?我们知道,计划是每一件事情成功的第一步,在这个游戏中也不例外。作为一个团队,首先应当确定团队的目标,那就是成功走出“雷区”。在制定了这样一个目标之后,应该做的就是制定实现这个目标的计划。当计划完成之后的组织环节中,项目经理应当明确所有成员的分工、团队的分组等事宜,以便所有的成员可以各司其职,避免在项目实施的过程中出现漏洞或者人力资源的浪费。建立起一支高效的团队,在任何一个项目中都是领导环节的重要任务。在这个项目中,其实还有一点是管理者可以实践的,那就是如何去建立一支信任的团队。“扫雷”游戏在完成了一半的时候会有意设置一道障碍,那就是在两个“峡谷”之间的“雷区”全部都是有雷的,也就是要通过正常的途径是不可能通过“雷区”的。在团队成员即将取得胜利的前夕,团队将面临极为严重的信任危机,所有的人都会怀疑是不是记录路线的人记录出了问题,这时的争吵将使团队耽误相当多的时间。如果这样的情况发生了,对于管理者来说需要通过与大家沟通,使团队建立起相互的信任,共同克服困难,渡过团队面临的这一信任危机。管理过程的最后一个阶段就是控制,其实从实施这个项目的第一步起就开始了控制。当队员探雷失败的时候,其实就是表明这一步与团队的目标是不一致的,作为项目的管理者就应该及时纠正错误,派遣另一名队员寻找一条新的道路,从而达到控制的目的;在团队面临信任危机时,管理者也是通过不同的方式消除大家心中的疑虑,重新建立起团队的信任,使之与团队的目标一致。通过“扫雷”游戏,可以看出管理学是可以运用到生活的方方面面的,素质拓展训练就是通过这些看似简单实际却是障碍重重的小游戏,在娱乐与轻松中教会管理者如何运用管理学理论解决实际工作和生活中的一些琐事,使管理者在今后的企业管理中充分地信赖以及运用管理学理论,给企业带来收益。素质拓展训练的很多项目都是为了增进团队合作而设计的,例如攀爬“天梯”项目可以让队员在极为艰难的条件下体会到相互协作带来的力量;“孤岛求生”项目则可以增进队员之间的了解,培养管理者良好的沟通能力;而“背摔”项目则是要让队员在团队中建立起彼此的信任。在Stephen P.Robbins和Mary Coulter所著的《管理学》一书中认为高效团队应当具备以下的特征:清晰的目标、相关的技能、相互的信任、统一的承诺、良好的沟通、谈判的技能、恰当的领导、内部的支持和外部的支持。我们可以看出,素质拓展训练就是要增强管理者的团队合作意识,打造一支高效的团队,而高效的团队正是一个企业获取成功的关键因素之一。企业文化对企业发展的作用在当今的市场竞争中已不言而喻了,海氏集团副总裁梅尔文·斯塔克总结说:“最受赞赏公司的意见的一致程度超过我们研究的几乎所有公司。不仅在文化目标上一致,而且对公司如何争取那些目标的看法也是一致的。”可见,公司出类拔萃的关键在于文化。在素质拓展训练中,所有的参训者首先都会参与一个叫做“破冰”(ice break)的仪式,其最主要的目的就是增进彼此之间的了解,消除队员自我为中心的想法,组建成一支团队,确定团队的队名、队旗、队歌、口号等团队文化,由队员亲自创建的团队文化将是团队迈向成功的基础。当队员在体力透支意图放弃的情况下,团队的口号将是他们坚持的动力;当本队的分数落在其他队伍后面的时候,高亢的队歌将是他们奋勇追赶的声音;当队友在10米高空的木桩上失去信心的时候,挥舞的队旗将是他们勇气的源泉。在队员亲身感受到了组织文化的重要性后,必将加强员工对企业组织文化的认同感,同时迫使管理者利用各种方式建立起适合自身发展的组织文化。一位中信银行的人力资源部经理的体会是:“体验式培训方式对于加强员工对企业文化认同感很有效。尤其是新人,他们刚到新的企业,还抱着观望的态度,对新的人际关系和新的企业文化都要有一个适应的过程。体验式培训创造了一个企业了解新人、新人了解企业的机会,经过这次全员范围的体验式培训,企业里的人际关系有了明显的改善,我们人力资源部门在新员工的任用上也获得了不少直接的信息。”素质拓展训练无疑会对传统的培训方式带来巨大挑战。所谓传统培训方式,即是指由企业自行组织,通过邀请外部的专家学者担任培训讲师,定时、定点、有一定规模、脱产或半脱产,就某个专题进行为期数天或数星期的正式培训活动,采取的形式多为讲座式,辅以若干直观的教具、多媒体手段、案例分析、情景模拟、趣味技巧等。那么,素质拓展训练较之传统培训有什么优势呢?有关专家指出:阅读和听到的资讯,我们只能学到10%~15%,但体验过的事,我们却能收获80%。传统培训方式多数是员工被动的接受信息,自然收获到的东西很少,并且培训的可转换性较低,所以这种培训的效果并不明显。而素质拓展训练正是打破传统培训的枯燥,在青山绿水之间构建一系列的训练项目,使参训者在思想完全放松的状态下接受体验式培训,从而提高参训者的积极性,这样也会使培训起到事半功倍的效果。MBA教育是目前企业对管理人员采用比较多的培训方法,但是MBA教育的费用比较高。有资料显示:“中国的商学院从上世纪90年代末出现至今,短短不到10年的时间,平均学费就从2万元增长到9万元。”费用高不说,收到的效果也不一定好,很多学院通过MBA教育后,又落入只知道理论,而缺乏理论与实践相结合的尴尬局面。从邀请专家学者进行讲座的费用也不低,目前讲师平均课时收费为300~500元/小时,另加差旅费用。当然,西方式的10000美元/天更是难以接受的天文数字。而素质拓展训练的费用为600元/人左右,也就是说企业用于对一位管理者进行MBA培训的费用可以供150人进行一次素质拓展训练。而用于支付讲师授课一小时的费用也可以负担一位员工一天的素质拓展训练,并且企业在素质拓展训练后得到的效果也远大于传统培训得到的效果。意在培养起人们的团队精神、合作精神、凝聚力、勇敢、乐观等品质,这些都是企业员工所需要而平时的知识学习无法培养出来的。试想让一群平时正襟危坐的人放下手中的工作,全身心地投入像孩子们才会去做的游戏中去,本来就是让人很感兴趣的事。在精心设计的游戏中,原本就悟性很高的人们,很容易感受到平时被大家忽视的问题,比如团结才会产生效率,勇敢乐观更有助战胜困难等。有的人更是举一反三,从一个道理想到其他的道理。因为游戏深化了人们的记忆,在以后的工作中,有些人不仅性格有了变化,比以前积极主动起来,还自觉把培训的收获应用到工作和生活中去,待人接物呈现出与从前迥然不同的态度。例如,“背摔”游戏,当台下的人给台上的人做出承诺后,自己也多了一分责任,当伸出双臂去接台上摔下来的人时,是在用双臂托起别人的生命。而台上的人往下摔时,将自己的生命交给别人,也就对台下的人充满信任。通过参加这个游戏,企业所要求的责任和忠诚的品质便可以在潜移默化中培养起来。体验式训练无论从形式,还是从内容上,都适应企业员工提高素质的需要,具备现实操作性,其实用意义显而易见。中国的经济正处于飞速发展阶段,人的素质亟待提高,体验式训练在中国有着广阔的发展前景,随着人们观念的现代化,现代企业培训的趋势在于让更多的员工体验式的培训,通过体验式的培训激发员工的潜能,从而创造出更大的价值。素质拓展训练作为体验式培训重要的方面,将立足于如何帮助企业开发人的潜力,成为企业培训不可或缺的手段,打开企业培训的新思路。 -
报告Study on Health Testing and Disease Transmitting of Maize Seed from Beijing
出版时间:2007玉米是世界第三大粮食作物,在农业生产中占有重要的地位;也是我国北方和西南山区及其他干旱地区栽种的主要粮食作物之一。玉米生长过程中易受多种病虫为害,其中玉米丝黑穗病、瘤黑粉病和小斑病是广泛流行于各玉米产区的3种主要病害,近年来有不断传播蔓延的趋势。种子带菌是病害传播和流行的重要途径之一,了解北京地区玉米主栽品种种子带菌情况,以及种子带菌量和病害发生的关系,对防控这3种病害有着重要的实际意义。本研究以玉米种子为研究对象,筛选出适合检测3种病原菌的检测方法,检测了北京地区玉米主栽品种的带菌情况,并通过温室盆栽试验,初步研究了种子表面携带3种病原菌的负荷量和病害发生情况的关系。本研究比较研究了洗涤法、滤纸法、冷冻滤纸法和PDA培养法5种种子检测方法。结果表明,洗涤法适用于检测种子表面携带的玉米丝黑穗病菌和瘤黑粉病菌冬孢子;冷冻滤纸法和PDA培养法可以用以检测玉米小斑病菌。采用上述方法检测了北京地区7个玉米主栽品种的带菌情况,其中在京科25、农大3138、中糯301和高油4515这4个品种种子表面检测到了黑粉菌的孢子,不同品种的带菌率有所差异,高油4515携带瘤黑粉菌的菌量达到了421.1个/粒种子,丝黑穗菌的菌量为168.4个/粒种子;中糯301和高油4515还检测出带有玉米小斑病菌,带菌率分别为1.4%和1.0%,寄藏部位为胚乳;种子携带的其他真菌主要有镰刀菌属、链格孢属、枝孢霉属、曲霉属、青霉属和根霉属。在检测中我们发现,镰刀菌是种子携带的主要真菌,其中昌甜100(正交),高油4515品种中镰刀菌的携带量达到了105个/粒种子。已有相关研究报道表明,镰刀菌的携带量与种子的活力有关系,因此对于玉米种子携带镰刀菌的风险需要引起重视。选择感、抗和高抗3种抗性水平的玉米品种,采用浸种法在种子表面分别接种10个/粒、102个/粒、103个/粒、104个/粒和105个/粒5个浓度的3种病原菌孢子,温室条件下进行盆栽试验,结果表明,不同抗性的玉米品种接种系列浓度的病原菌孢子后发病情况不同:接种瘤黑粉病菌的处理中,感病品种中糯301在接种量为103个/粒时,抗病品种农大108在接种量为105个/粒时,而高抗品种郑单958在接种量为106个/粒时才分别开始发病;接种丝黑穗病菌孢子的处理与上述结果相近,感病品种中糯301在接种量为103个/粒时、抗病品种农大108接种量为106个/粒时开始发病,而高抗品种郑单958在所有接种量均未发病。接种小斑病菌的各处理没有病害发生,分析原因应该与病害的发生规律有关,小斑病是一个典型的气传病害,种子带菌不容易直接导致病害的发生,但是种子带菌会有增加田间初侵染的来源,同样有造成病害流行的风险。 -
报告Toxicity Bioassay and Control Effects of Several Fungicides against Tomato Late Blight Caused by Phytophthora Infestans(Mont)De Bary
出版时间:2007晚疫病是露地、保护地及南方山区蔬菜基地番茄的重要病害,由致病疫霉[Phytophthora infestans(Mont)De Bary]侵染所致,是一种毁灭性的世界性蔬菜病害[1]。南方4~5月,北方6~7月,南方山区7月前后的阴天多雨天气及保护地秋末和早春棚室温度达16℃时均易发生。病害流行性强,年度间病情差异大,一些地方称为“疫病”、“怪病”、“过火风”[2]。晚疫病在番茄的整个生育期均可发生,主要为害茎、叶和果实,发生普遍,蔓延速度快,严重田块可减产70%以上,甚至绝收,严重制约了番茄生产的进一步发展[3]。目前生产中存在的主要问题是选药不当、错过防治适期,致使该病蔓延成灾。鉴此,笔者征集了部分国内外杀菌剂品种,试图通过室内毒力测定和田间药效试验,筛选出对番茄晚疫病菌抑菌效果显著的杀菌剂,为田间防治番茄晚疫病提供参考。1.1.1 培养基和菌株 黑麦蔗糖琼脂培养基(Rye sucrose agar)用于番茄晚疫病菌的分离、培养及测定对杀菌剂的敏感性。配备抗菌素母液,称取2.0g氨比西林(氨苄青霉素ampicillin),1.0g制霉菌素(Nystatin)和0.2g利福霉素(利福平Rifamycin)加入到100ml二甲基亚砜中[DMSO,(CH3)2SO];待基础培养基冷却至大约50℃,立即在每100ml培养基中加入1ml抗菌素母液。混匀,倒平皿。本研究是采用番茄晚疫病菌的菌株为F1。真菌菌株在PDA培养皿培养,在PDA试管斜面上保存。1.1.2 杀菌剂 50%烯酰吗啉(dimethomorph)可湿性粉剂(德国巴斯夫股份有限公司生产)、25%甲霜灵(metalaxyl)可湿性粉剂(江苏宝灵化工股份有限公司生产)、64%杀毒矾(oxadixyl mancozeb)可湿性粉剂(瑞士先正达作物保护有限公司生产)和75%百菌清(chlorothalonil)可湿性粉剂(江苏龙灯化学有限公司生产),72%霜脲·锰锌(mancozeb+cymoxanil)可湿性粉剂(北京华戎生物激素厂生产)。1.1.3 供试作物和品种 番茄,品种为“合作903”。1.2.1 室内毒力测定 采用生长速率法[6],将供试杀菌剂稀释成不同浓度梯度,浓度梯度由试验测定。最后计算抑制生长率,求出毒力回归方程,计算EC50和EC95。根据预备试验结果,确定各个供试杀菌剂的系列剂量分别为:50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂和64%杀毒矾可湿性粉剂的浓度梯度均为10μg/ml,5μg/ml,2.5μg/ml,1.25μg/ml,0.63 μg/ml;75%百菌清可湿性粉剂100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml,72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的浓度梯度为25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、1.5625μg/ml。各个杀菌剂的最高浓度配制方法分别为:50%烯酰吗啉可湿性粉剂称取1.0g溶于50ml水中,然后稀释100倍;25%甲霜灵可湿性粉剂称取1.0g溶于25ml水中,然后稀释100倍;64%杀毒矾可湿性粉剂称取1.0g溶于64ml水中,然后稀释100倍;75%百菌清可湿性粉剂称取1.0g溶于75ml水中,然后稀释10倍;72%霜脲·锰锌可湿性粉剂称取1.0g溶于72ml水中,然后稀释40倍。再倍半稀释至所需浓度。用取液器量取上述配好的溶液(每个剂量)3ml,加入事先溶化好的27ml黑麦培养基,充分混匀后倒在3个直径为9cm的灭过菌的培养皿中,凝固后在培养皿正中间接入直径6mm的番茄晚疫病菌饼。以上操作均在无菌操作台进行。置(18±0.5)℃、光照14h和黑暗10h的培养箱培养。当空白对照菌落扩展到整个培养皿时,测量各皿的菌落直径,取平均值后计算抑制率(%)。生长抑制率(%)=[(A-B)-(C-B)]/(A-B)×100%,其中A为对照菌落直径,B为菌饼直径,C为处理菌落直径。将抑制率转化为几率值,将剂量取对数,算出剂量—反应曲线方程,进一步算出EC50值和EC95值。1.2.2 田间药效试验 经室内毒力测定结果表明,25%甲霜灵WP,64%杀毒矾WP,50%烯酰吗啉WP室内测定的毒力均较高,为在田间进一步验证其防效,特进行田间药效试验。试验地位于武汉市洪山区青菱乡长江村,近几年每年都有番茄晚疫病发生,所有试验小区的栽培条件均匀一致。于2006年5月13日、19日晚疫病发生初期喷雾施药,试验期间共施药两次,此时为番茄结果期。通过预备试验,设置杀菌剂浓度25%甲霜灵WP稀释800倍(每亩制剂量93.75g),64%杀毒矾WP稀释800倍(每亩制剂量93.75g),50%烯酰吗啉WP稀释3000倍(每亩制剂量25g),以75%百菌清WP稀释600倍(每亩制剂量125g)作为对照药剂,另设清水对照。小区面积15m2,4次重复,随机区组排列,用水量75kg/667m2。试验期间气温21.93~33.86℃。第2次施药后7天调查各处理发病情况,每小区按对角线5点取样,每点2株,每株分上、中、下共调查10片叶,以每株每一叶片上的病斑面积占整个叶面积的百分率来分级,计算病指与防效。分级标准:0级,无病斑;1级,病斑面积在5%以下;3级,病斑面积占整个叶面积的6%~10%;5级,病斑面积占整个叶面积11%~20%;7级,病斑面积占整个叶面积21%~50%;9级,病斑面积占整个叶面积50%以上[8]。试验结果见表1。5种杀菌剂50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的EC50值分别为2.24μg/ml、1.83μg/ml、2.05μg/ml、21.33μg/ml和5.33μg/ml,EC95值分别为9.76μg/ml、7.76μg/ml、8.71μg/ml、85.60μg/ml和27.77μg/ml。按毒力高低排列分别为25%甲霜灵可湿性粉剂>64%杀毒矾可湿性粉剂>50%烯酰吗啉可湿性粉剂>72%霜脲·锰锌可湿性粉剂>75%百菌清可湿性粉剂。25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、50%烯酰吗啉可湿性粉剂室内测定的毒力显著高于75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂,可以为田间防治番茄晚疫病提供一定依据。杀菌剂剂量-反应曲线概率P值EC50(置信限)(μg/ml)EC95(置信限)(μg/ml)50%烯酰吗啉WPY=2.57x-0.900.242.24(1.99,2.53)9.76(7.87,12.91)25%甲霜灵WPY=2.62x-0.690.471.83(1.62,2.06)7.76(6.31,10.15)64%杀毒矾WPY=2.63x-0.820.312.05(1.82,2.32)8.71(7.06,11.41)75%百菌清WPY=2.72x-3.620.2221.33(19.05,23.94)85.60(69.82,111.11)72%霜脲·锰锌WPY=2.29x-1.670.205.33(4.67,6.07)27.77(21.77,38.20)表1 5种杀菌剂对番茄晚疫病室内毒力测定结果试验结果见表2,两次施药后的病指和防效,64%杀毒矾WP 800倍液为8.9和75.1%,25%甲霜灵WP 800倍液为9.9和72.5%,50%烯酰吗啉WP 3000倍液为10.6和70.4%,3种杀菌剂对番茄晚疫病有较好的控制作用,均显著高于对照农药75%百菌清WP 600倍液的防效,其差异均达极显著水平,是防治番茄晚疫病的有效杀菌剂。处理重复与防效ⅠⅡⅢⅣ平均防效(%)平均病指差异显著性5%1%64%杀毒矾WP800倍75.474.574.775.675.18.9aA25%甲霜灵WP800倍75.171.969.673.372.59.9ab50%烯酰吗啉WP3000倍70.870.669.670.870.410.6bA75百菌清WP600倍49.254.655.960.755.116.0cB表2 几种杀菌剂对番茄晚疫病的防治效果室内毒力测定结果仅说明该杀菌剂对番茄晚疫病菌在离体条件下的直接活性,田间的防治效果受到的影响因素很多,因此,室内的毒力测定结果需要在田间做进一步验证。田间试验结果表明,64%杀毒矾WP 800倍液,25%甲霜灵WP 800倍液,50%烯酰吗啉WP 3000倍液3种杀菌剂田间防治番茄晚疫病均有较好的防治效果。这几种杀菌剂对番茄无不良反应,不产生药害,建议在田间推广使用,推荐剂量64%杀毒矾WP 62.5~75ml/667m2,25%甲霜灵WP 62.5~75ml/667m2,50%烯酰吗啉WP 16.7~20ml/667m2。在实际应用中,应在病害流行之前,即发病初期开始用药,当气候条件有利于病害发生流行时,每隔7~10天后进行下一次施药,连续喷药2~3次,使用浓度以推荐浓度为宜,并注意不同杀菌剂的交替使用,以达到更好的防治效果。 -
报告Application of Gene Expression Research Methods in Plant Pathology
出版时间:2007基因表达是基因在生物体内转录、翻译以及所有加工的过程,在真核生物中,约有10万个基因,而表达的基因只占基因组的15%左右,了解不同条件下细胞内基因表达的变化,可以帮助我们了解控制生命过程的机理[13]。对于植物来说,在植物不同的发育阶段和不同的环境条件下,基因的时空表达受到严密的调控。当植物受到病原物,如细菌、真菌、病毒、线虫等的侵袭时,植物体内存在防御机制,诱导相关基因表达,或者诱导相关基因表达量增加,产生次生代谢产物或表达抗性基因,从而抵御病原物的侵袭。因此研究植物基因表达变化水平对于揭示植物抗感病机理有重要的意义。在人类控制植物病虫害的措施中,抗病虫转基因植物是其中的重要手段之一,这样可以减少农药的使用,减少对环境的污染,并且符合可持续发展农业的要求,而基因表达分析又是其中必不可少的一步。它可以检测抗病虫基因能否高效的表达,以及能否在特定的发育阶段或者特定的组织器官中表达。基因表达研究方法有Northern杂交法、表达序列标签、mRNA差别显示技术、基因表达的系列分析方法和基因表达芯片等,本文对主要基因表达研究方法在植物病理学上的应用进行了简单概述。Northern杂交技术是用于测定真核生物RNA样品中特定mRNA分子的量和大小以及估计其丰度的技术,是研究基因转录产物的重要手段[14]。Northern杂交技术是在Southern技术的基础上建立起来的,具体的步骤是首先从要研究的组织或细胞中分离完整的mRNA,然后将RNA根据大小用变性琼脂糖凝胶电泳分离,再通过毛细管作用或负压法装置使RNA条带转移到纤维膜上,进行必要的处理后,用固相RNA与探针分子杂交,对特异结合的探针分子的图象进行检测、捕获和分析[15]。这种方法具有较高的特异性,主要是应用于检测特异rnRNA,以分析已知基因的表达情况。李子银等[16]根据已知植物抗病基因的保守区域设计引物,从抗稻瘟水稻品种窄叶青8号第一链cDNA和基因组DNA中扩增出3个与植物抗病基因同源的序列,利用Northern杂交技术,显示其中一个基因在水稻叶片、幼茎和根中均有转录。程志强等[17]利用已知的植物R类基因保守结构域,设计简并引物作为随机引物,分析水稻愈伤组织受白叶枯病菌诱导的mRNA表达丰度差异,获得3个差异片段。Northern杂交结果证实该片段受白叶枯病菌诱导表达,且在抗性品种中的诱导表达明显强于感病品种的诱导表达。黄萱等[18]根据已知植物抗病基因的保守结构域设计引物,从抗锈病小麦品种西农88基因组DNA扩增触3条与植物抗病基因同源的序列,通过Northern杂交表明其中一个同源序列在小麦中受水杨酸调控,属于诱导型表达的抗病基因。表达序列标签(EST)技术是由Adams等[1]提出的。典型的真核基因mRNA是由5’帽子,5’-UTR,编码区,3’-UTR,3’polyA尾巴五部分组成,其中5’-UTR和3’-UTR对基因具有特异性,3’或5’端的一段序列就可以表示在某种条件下基因的表达情况[19]。表达序列标签即在不同的组织构建的cDNA文库中,随机挑选不同的克隆,进行克隆的部分测序从而产生的cDNA序列。目前,已经建立了大量的EST数据库,可以根据不同时间,不同处理、不同组织,不同条件下EST数据的比对,鉴别特异表达的基因。但是,此技术对实验室的仪器、测序、经费等要求高。马金彪等[20]利用EST技术构建条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库,通过序列分析,了解小麦与条锈菌互作过程中表达的基因,为从分子水平揭示寄主与病原菌亲和互作机理奠定了理论基础。mRNA差别显示技术,又称差示反转录PCR(differential display of reverse transcriptional PCR),简称DDRT-PCR,它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。几乎所有的真核基因mRNA分子的3’末端都带有poly(A)尾巴,在RNA聚合酶的作用下,以mRNA为模板,以oligo(dT)为引物合成出cDNA链[21]。此技术的优点在于简单方便、灵敏度高,但同时它也存在局限性,如:假阳性比例高,可达50%~70%;扩增的片段分子量比较小;工作量大等[13]。mRNA差别显示技术最初是为动物研究设计的,但是从其原理来看,在植物基因表达的研究上也存在很大的潜力,可以应用于植物抗病基因的表达研究上,研究发现,抗病基因中很多都是多基因家族,这样的多基因家族在抗、感病品种中都存在,只是其中的成员有所不同,有的基因缺失,这可能就是造成抗病品种抗病、感病品种感病的原因。所以,可以应用mRNA差别显示技术分析比较抗病品种和感病品种的差异表达的基因,从而进行进一步的分析。黄旭等[22]通过外源DNA浸泡幼胚将普通野生稻(Oryza rufipogen)抗稻瘟系YD1005总DNA导入受体粳稻寒丰S(Oryzasativa ssp.japonica)育成一抗稻瘟病变异株(D1代),利用mRNA 差别显示技术分离得到一个原品种中没有的与抗稻瘟病相关的一个cDNA。饶志明等[23]人利用mRNA差别显示技术对水稻感病品系G71受苯并噻二唑诱导3天的应答反应进行分析,从抗病及其相关基因保守结构域设计的10个引物组合的反应中获得11个受BTH诱导的cDNA差异片段,进一步利用Northern杂交证实其中一个阳性片段的表达受BTH和稻瘟病菌的诱导。由于差别杂交技术、mRNA差别显示技术各有缺点,不能够提供全面的表达分析图谱,不能够全面系统的分析基因转录组。因此,在此基础上,1995年Velculesue等[2][3]描述了一种基因表达的序列分析技术(SAGE),该技术能快速详细的分析成千上万个转录子,能够全面的对基因组的表达进行分析,而无须依赖以前的转录信息。在一个转录物中,可以找到一段特异的序列,这个特异的序列就可以代表这个转录物,该序列即转录序列标签(SAGE标签),一般为9~10bp;SAGE 标签经随机连接、扩增并集中在1个克隆中测序,标签重复出现的次数代表该转录物的拷贝数。根据其占总标签数的比例即可分析出其所对应的编码基因的表达频率。SAGE是分析诱导表达的抗病基因的一种有效的方法,Matsumara等[4]应用SAGE 技术研究水稻在白粉病菌侵染后基因表达的整体变化,旨在发现与稻瘟病抗性相关的新基因;Mitchell 等[5]利用SAGE 方法对水稻与稻瘟病菌之间相互识别及病理反应进行全基因组分析,以了解与病原菌致病力和寄主抗性相关的基因。Mysore 等[6]以番茄为材料,分析了不亲和的植物病原菌互作过程中经诱导产生或被抑制的基因表达图谱。基因芯片技术最早是由Fodor[7]等提出的,基因芯片是一种用于合成和分析生物分子的微型装置。其原理是指是指将大量生物讯息密码,以预先设计的方式固定在玻片、硅片、塑料和尼龙膜等固相载体上组成的密集分子阵列。微阵列在一定条件下进行生化反应,反应结果用化学荧光法、酶标法、同位素法显示,再用扫描仪等光学仪器进行数据采集,最后通过专门的计算机软件进行数据分析[8]。微阵列芯片主要有两种:基于寡核苷酸微阵列芯片和基于cDNA 片段的微阵列芯片。虽然寡核苷酸阵列芯片的检测灵敏度高,可检测出一个碱基的错配,但寡核苷酸芯片的制作是基于DNA 序列已知的基础上,而cDNA 片段可以来自序列未知的cDNA 克隆、EST 克隆,隐含的基因组克隆,或已知的基因组序列的扩增ORFs [24]。因此,基因表达芯片技术是一种高通量的对两种组织或细胞基因表达进行检测和分析的方法。该方法并且克服了核酸杂交技术的操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等问题[19]。Whitham等[9][25]通过使用微阵列技术,对不同种RNA病毒对易感的拟南芥基因表达的影响进行了研究,结果发现,不同种RNA病毒在易感植物宿主中诱发相同的反应,此研究有利于深入理解RNA病毒致病机理。在遗传上有显著差异的植物病原菌Xylellafastidiosa(Xf)的菌株导致了许多种植物病害,在全世界造成了巨大的经济损失。Nunes 等[10]以Xf 9a5c 菌株(导致柑橘花斑缺绿症)的基因组为参照,使用以微阵列技术为基础的方法,比较了12 个Xf 分离菌株,并对菌株间的基因组组成差异进行全面的评价。定量RT-PCR技术是在反转录和定量PCR的基础上发展起来的一种检测特定基因表达量的技术,可以根据PCR扩增产物的量确定目的基因的表达水平[26]。包括相对定量RT-PCR,竞争性定量RT-PCR、比较定量RT-PCR 和实时定量RT-PCR[27]。朱建裕等[28]根据番茄环斑病毒(ToRSV)各株系RNAⅠ聚合酶基因的保守序列,设计并合成1对引物和1条Taqman荧光探针,建立了对ToRSV的实时荧光RT-PCR检测方法。Chang JH等[11]根据番茄Pto基因家族的序列,设计特异性引物,应用RT-PCR技术,验证了Pto基因家族成员在抗感病番茄中的表达情况,结果发现Pto基因家族成员LescFen、Lescpth2和Lescpth5在感病番茄Rio Grande 76S中表达,Pto、Fen、Lpimpth2和Lpimpth5在抗病番茄Rio Grande 76R中表达。Gene calling是Shimkets等[12]人于1999年提出的,该技术受专利保护(USPYO5871697和USPYO5972693)。主要分为三步:①限制内切酶双酶切②加接头③PCR扩增,并对每个片段回收测序,测序结果数据库比对。具体步骤如下:合成双链cDNA,限制内切酶双酶切,对酶切产物加接头,然后用接头特异性的引物进行PCR扩增,引物分别用生物素和FAM标记,扩增产物毛细管电泳分离,并对每个片段回收测序,测序结果数据库比对。它可以对同一位点的基因表达种类和表达丰度进行分析[29]。此技术的应用有以下几个方面:①确定新的、稀少的表达基因;②当植物受到病原物侵袭时,可以快速检测到特异表达的基因;③可以利用比较基因组学比较种间基因差异,从而确定基因功能;④可以敏感地确定基因表达的微量变化等。另外,还有一些基因表达研究方法,如差异杂交,但仅适用于基因组基因组复杂程度较低的基因组,如酵母;S1核酸酶保护分析法间接的检测mRNA,适用于基因调控方面的研究,但是费时费力费用高;噬菌斑原位杂交可以分离cDNA中的目的基因,但费用较高;基因表达指纹技术,它采用酶切代替了PCR扩增,所获结果含有一定的编码信息,但是仅能得到高表达的基因,并且受电泳技术限制。在植物病理学研究领域,基因表达分析技术已经广泛的应用于病原菌的检测、转基因植物的检测、植物病原物互作机理的研究以及植物抗病信号转导研究等方面,使植物病理学研究者根据不同时期基因表达的变化,揭示植物抗感病机理、防治病虫害的发生以及选育植物抗病品种。虽然目前还有一些问题需要解决,但是相信随着各种基因表达研究方法的不断完善和改进,在植物病理学研究上将会有越来越广泛的应用。
