狗牙根草是一种重要的草坪牧草。普遍用于城市的绿化。2007年5月从湖北华中农业大学校园的草坪上，采集到狗牙根草（Cynogon dactylon）黑粉病的病株标本，发病症状是花序的小穗变为线状的粉末状黑褐色的孢子堆，除小穗的中轴外完全被破坏，黑粉易脱落（图1-A）。用稀释分离法自发病植株的黑粉部位分离获得该病原菌，并对其进行了形态学鉴定和rDNA-ITS序列分析等研究。结果表明：狗牙根草黑粉菌在PDA培养基上，菌落初期形态为乳白色，呈酵母式增殖，多为短棒状的担孢子。后期逐渐变为暗黄色，有不均匀的皱褶隆起，菌落边缘有少量菌丝产生。冬孢子黑色或黑褐色，圆形至椭圆形，表面有轮纹，大小为（10.3～6.2）μm×（10.9～5.5）μm，见图1-B。对病原菌进行了rDNA-ITS序列分析结果表明：该病菌5.8S rDNA及两侧的ITS区序列与狗牙根黑粉菌U.cynodontis AY740168的同源性达到99%。将同一株狗牙根草的小孽分别取样，用CTAB法自各样本组织的总DNA，并对其进行ITS-PCR的扩增。结果表明：取自同一株狗牙根草的不同小孽，无论有症状还是没有症状均含有狗牙根黑粉菌的特异性条带，这说明该病菌对狗牙根草是系统性侵染为害的。这是国内首次报道相关狗牙根草黑粉病病害。图1 狗芽根黑粉病状（A）及其冬孢子形态（B）（标尺：10μm）Figure 1 The symptom（A）of Bermudan grass（Cynogon dactylon）smut and teliospore （B），bar=10μm

2006年10月以来，温州市乐清、瑞安、苍南、瓯海、龙湾等地设施栽培的番茄上相继发生了一种新的严重为害蔬菜的病毒病——番茄曲叶病毒病。在各县有关部门的大力协助下立即从5个不同地点采集了病症表现典型的番茄植株样本，送到浙江大学生物技术研究所鉴定，经该研究所对病样用超薄切片电镜观察、酶学检测（ELISA）、分子检测，确认为台湾番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Tanwan virus，TLCV）。该病毒在温州市系首次发现，经检索国内未见报道。番茄曲叶病毒病是一种毁灭性的病害，是世界许多地区番茄生产上的重要限制因素，各地务必引起高度重视。据调查，2006年12月在苍南县灵溪镇河口叶村蔬菜基地、瑞安市梅屿乡外三甲村蔬菜基地、瓯海区新桥、娄桥街道蔬菜基地、乐清市虹桥镇武宅村，秋季定植的越冬番茄病毒病的株发病率为3%～30%；龙湾区天河镇蔬菜示范园区、乐清市蒲岐镇东门外村番茄受害最重，许多田块株发病率高达95%以上，农民已基本放弃管理或拉秧改种。据初步统计，2006年初冬温州各县（市、区）番茄病毒病的发生面积约3000亩，其中株发病率＞50%的田块面积约300亩，给当地的番茄生产造成了惨重损失。染病番茄植株矮化，生长缓慢或停滞，顶部叶片多稍褪绿发黄、变小，叶片边缘上卷，叶片增厚、叶质变硬，叶脉常呈紫色。早期染病的植株常严重矮缩，开花结果异常，后期染病的植株仅上部叶和新芽表现症状，结果减少、果实变小，成熟期果实着色不均匀（红不透），基本失去商品价值。该病病原为Tomato leaf curl Tanwan virus，属烟粉虱（Bemisia tabaci）传染类双生病毒，种子和土壤均不传毒。该病毒只能经由烟粉虱传播。温州地处亚热带地区，气候温暖，阳光充足，雨量充沛，降雨集中在春季和夏季，秋季较为干爽（年平均气温19.3℃，最热的7～8月平均气温29.1℃）。2006年7～11月，温州市天气总体上呈高温干爽天气，对虫媒烟粉虱的发生、繁衍十分有利，这可能是该病严重发生的诱因之一。据初步调查，2006年9～10月，秋番茄育苗时，烟粉虱发生普遍，经检测以B型为主。烟粉虱发生数量大、活动频繁是导致该病流行的重要原因。据初步调查，目前温州生产上推广的大多数番茄品种如红梅王、FA-189、516、托马雷斯、合作903等对该病毒的抗病性较差。据本所研究，B型烟粉虱在温州地区每年发生10～11代，在温室内无明显的越冬现象，十分适宜在当地生长、繁衍。预计今后该病很有可能会随着带毒烟粉虱的扩展而迅速蔓延开来，应立即采取积极有效的措施进行防控。防治病毒病的关键措施之一是选育抗病品种，抓紧引进、筛选抗耐病的优良品种是当前的重要任务。（1）育苗床与大田生产要分开；（2）使用40～60目防虫网隔离育苗，避免苗期感染；（3）苗床悬挂粘虫色胶板（本所研制）诱杀烟粉虱，减少传毒媒介。（1）加强肥水管理，增强植株抗病能力；（2）地膜覆盖，去除边际杂草；（3）及时去除植株下部烟粉虱虫、卵枝叶；（4）收获后及时清洁棚室和周围环境。及时、及早防治烟粉虱以控制病毒病的发生。从烟粉虱零星发生开始，交替使用99.9%绿颖农用矿物油200～300倍稀释液、20%啶虫脒（兰宁）可溶性液剂3000倍稀释液、25%扑虱灵可湿性粉剂1000～1500倍稀释液、25%阿克泰水分散粒剂2000～3000倍稀释液、2.5%天王星乳油2000～3000倍稀释液、1.8%阿维菌素1500倍稀释液、1%甲胺基阿维菌素2000倍稀释液等药剂喷雾防治烟粉虱。绿野牌即开式环保型高效粘虫色胶板系列产品是温州市农业科学院生态环境研究所（植物保护开发研究中心）最新研制成功的一种工厂化生产的绿色植保产品，现已投入批量生产。本产品根据害虫特有的生物学特性，采用特种纸胶、光技术及先进工艺制成，不含有毒物质，不污染环境，可用于监测和防治经济作物的微小害虫及畜牧场、果蔬储藏室等地的双翅目卫生害虫等。本产品是一种高效、实用的害虫无害化防治新产品，使用本产品可避免和减少施用农药给环境带来的污染及其对人体健康的危害，本产品特别适合于在无公害农产品、绿色食品以及有机食品生产中使用。1.产品特点：特定光谱，诱杀效果显著，双面诱杀，控制范围广；特种纸板，平整不卷曲；胶种防水粘度高，高温不流淌，持久耐用；携带方便，即开即用。2.产品规格：通用A型（黄色），22cm×27cm、每封12张；通用B型（黄色），12cm×15cm、每封20张。3.用途：监测和直接诱杀防治害虫。4.诱杀对象：通用A、B型板诱杀烟粉虱，白粉虱、黄曲条跳甲、潜叶蝇、蚜虫、蓟马及多种双翅目害虫等，也可防治蟑螂等害虫。5.适用场地：温室、塑料大棚、花圃苗房、果园、果蔬储藏室、畜牧场、家居等。6.适用作物：蔬菜、花卉、茶叶、中药材、果树等。7.挂板时间：用于防治时，于害虫发生初期挂；用于监测时从作物苗期开始挂；其他酌情。8.悬挂方法：低矮生蔬菜和作物胶板东西向垂直挂在底边离植株15cm处；搭架作物顺行向垂直挂在架中部（即挂在两行中间）；其他酌情。9.用量：防治用每标准大棚（6m×30m）挂A型板1～2封，其他按面积测算，每粘满虫后换一张；监测用每棚挂B型板1～2小张，或将A型板一分为二后挂。10.专利号：ZL2004 20027355.1

柴胡（Bupleurum chinense DC.），别名北柴胡、竹叶柴胡，为伞形科多年生草本植物。野生资源主要分布于我国的华北、西北和东北，主产于陕西、山西、河南、吉林、辽宁、黑龙江等地[1]。柴胡过去多为野生，病害零星发生，随着人工抚育及栽培面积的逐年扩大，柴胡根腐病害的发生和为害程度不断增加。目前，国内外尚未见有关柴胡根腐病的系统报道，对其发生、流行规律，病原菌种类及病原菌生物学特性尚不清楚，因此生产过程中缺乏有针对性的防治手段。为了尽快明确上述问题，本研究在对柴胡根腐病病原菌进行分离鉴定的基础上，就病原菌的生物学特征进行了较为系统的研究，这为进一步开展柴胡根腐病害的防治奠定了理论基础。从北京市延庆县永宁镇和本所柴胡试验基地采集病害标样。病原菌的分离采用常规的组织分离法，具体操作参照方中达[2]编著的《植病研究方法》。观察柴胡根腐病对柴胡根部的为害症状；菌落的形状、色泽；在显微镜下观察大、小分生孢子的形状及多少，测量其大小，观察有无隔膜及隔膜的数目，观察产孢细胞的类型，厚垣孢子的有无以及着生部位和子实体类型等。1.3.1 室内离体根组织接种 选取健康无病的柴胡根组织，用无菌水清洗干净，采用针刺法接种，保湿培养。1.3.2 室内活体植株接种 将取自田间的柴胡植株移栽于室内花盆，将配好的孢子悬浮液用微孔注射器注入柴胡根部，定期观察柴胡发病情况。1.4.1 温度对菌丝生长的影响 将病原菌接种PDA培养基，分别于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃恒温培养箱中培养，6天后测量菌落直径，每个处理重复3次。1.4.2 培养基pH值对菌丝生长的影响 培养基灭菌后，分别调节pH4、6、8、10、12，接种后于25℃恒温培养箱中培养，6天后测量菌落直径。每个处理重复3次。1.4.3 分生孢子萌发 孢子萌发试验采用载玻片孢子悬滴萌发法。每1h计数孢子萌发数量，计算孢子萌发率。1.4.4 温度对分生孢子萌发的影响 共设5℃、10℃、20℃、25℃、30℃和35℃共6个温度梯度，24h镜检记录孢子萌发数，计算萌发率。每个处理重复3次。1.4.5 pH值对分生孢子萌发的影响 用pH值分别为2、4、6、8、10、12的水溶液配制孢子悬浮液，于25℃恒温培养箱中培养，24h后测定孢子萌发率。每个处理3次重复。1.4.6 湿度对分生孢子萌发的影响 在密闭容器中分别配制（NH4）2SO4、ZnSO4、NH4H2PO4和CaSO4饱和溶液，使其相对湿度（RH，Relative Humidity）分别维持在81%、90%、93%和98%，以清水（RH=100%）作对照，于25℃下培养，24h后测定孢子萌发率。每个处理3次重复。1.4.7 不同培养基对病原菌产孢的影响 分别配制PDA和小麦汁培养基，25℃恒温箱中培养，8天后观察分生孢子的产生情况。每个处理3次重复。1.4.8 分生孢子致死温度测定 将孢子悬浮液装在200μl离心管中，在PCR仪上以温度35～70℃（温度间隔为5℃）处理10min后，于25℃恒温箱中培养24h，观察孢子萌发情况。得到分生孢子致死的大致温度范围后，再以1℃为温度间隔求得精准致死温度。2.1.1 病害症状 该病主要为害柴胡的主根，亦可为害侧根。发病初期，自根茎交界处产生黑褐色斑点，后逐渐扩大呈圆形、近圆形或不规则病斑。发病后期，根部表皮自顶端向下产生纵向干裂，裂口变褐或发黑并逐渐加宽、加深。裂口多为竖条形，椭圆形或菱形。发病初期地上部分与健株无明显区别。发病后期裂口遍及根部整个外周，病部稍膨大、变硬、变脆，裂口深及木质部并造成水分、营养运输中断，最终导致整个植株萎蔫死亡。一年生柴胡当年秋季地上部枯萎后至结冻前即有发生，来年5～8月份为病害盛发期。2.1.2 柴胡根腐病菌培养性状 自柴胡根部病组织分离的病原菌在PDA培养基培养，菌落呈乳白色，气生菌丝发达，菌落底部呈浅褐色；在麦汁培养基上培养后菌落颜色呈灰白色，气生菌丝稀少。显微镜观察发现，麦汁培养基上培养的菌丝有分生孢子梗，分生孢子大量簇生，且菌丝上直接长有大量厚垣孢子。PDA培养基上培养的菌丝中间有隔，上面无分生孢子梗，也未发现分生孢子及厚垣孢子。图1 柴胡根腐病田间发病症状Figure 1 The symptom of root-rot disease in Bupleurum chinense DC.图2 柴胡根腐病菌的菌落形态Figure 2 The appearance of Fusarium solani isolated from Bupleurum chinense DC.2.1.3 病原菌鉴定 室内镜检发现大量分生孢子梗和大、小分生孢子。分生孢子梗一般簇生、直立，分隔。小分生孢子数量多，卵形、长椭圆形或短棒状，无隔膜；大分生孢子镰刀形或细长椭圆形，1～3个隔膜（3个隔膜者占到总数的96%以上）。厚垣孢子近圆形，在菌丝顶端单生。参考真菌分类相关文献，确认柴胡根腐病的病原菌为茄镰孢菌（Fusarium solani）。2.1.4 致病性测定 接种一定时期后，接种部位开始表现症状，且与田间发病症状类似。在接种病株上再次分离病原菌，经PDA培养基培养数天后，显微镜观察发现再次分离到的病原菌与接种的病原菌为同一病原菌。图3 柴胡根腐病菌孢子形态Figure 3 Fusarium solani Conidia isolated from Bupleurum chinense DC.2.2.1 温度对菌丝生长的影响 温度对病原菌菌丝的生长具有显著影响，菌丝在10～30℃范围内均能生长，25～30℃是菌丝生长的最佳温度范围。环境温度≤5℃或≥35℃均对菌丝的生长产生明显的抑制作用。2.2.2 培养基pH值对菌丝生长的影响 柴胡根腐病菌菌丝在pH值4～12的PDA培养基上均能够生长。在pH值4培养基上菌丝的生长速度较其他培养基上的菌丝慢，且菌落的背面呈红褐色，其他培养基上的菌落背面呈暗白色。2.2.3 分生孢子萌发 在20℃条件下培养，分生孢子萌发速度较快。4h萌发率达到14%，6h萌发率为46%，9h萌发率达到98%，10h后分生孢子全部萌发。图4 柴胡根腐病菌分生孢子在20℃下的萌发率Figure 4 Germinating ratio of Fusarium solani Conidia isolated from Bupleurum chinense DC.at 20℃2.2.4 温度对分生孢子萌发的影响 温度对分生孢子的萌发十分关键。由表1可以看出，20～25℃是最适宜的产孢温度，温度低于10℃，孢子不能萌发，温度高于30℃，孢子萌发率显著降低。温度（℃）Temperature（℃）分生孢子Conidia萌发率（%）Germinationrate（%）重复1Repeat1重复2Repeat2重复3Repeat3平均值Mean51020253035Ma0000Mi0000Ma0000Mi0000Ma100969898Mi80848684Ma95969395Mi90949292Ma80838181Mi40454644Ma60646262Mi10868表1 温度对镰刀菌分生孢子萌发的影响Table 1 The effect of temperature to germination of Fusarium solani conidia isolated from Bupleurum chinense DC.2.2.5 pH值对分生孢子萌发的影响 pH值对分生孢子存在显著影响，且大、小分生孢子对pH值的敏感程度也明显不同。从表2可以看出，大分生孢子在pH值2～10的范围内均能维持较高的萌发率（＞90%），pH值大于12值萌发率显著降低；而小分生孢子在pH值4～6的范围内能够维持较高的孢子萌发率（大于或接近90%），pH值小于2或大于6时，孢子萌发率均显著降低。pH值pH分生孢子Conidia萌发率（%）Germinationrate（%）重复1Repeat1重复2Repeat2重复3Repeat3平均值Mean24681012Ma90949091Mi40353737Ma100989999Mi95979495Ma100969898Mi90869289Ma100949697Mi40453639Ma90928990Mi20182421Ma60566259Mi10121011表2 pH值对镰刀菌分生孢子萌发的影响Table 2 The effect of pH to germination of Fusarium solani conidia isolated from Bupleurum chinense DC.2.2.6 湿度对分生孢子萌发的影响 研究发现，病原菌分生孢子在相对湿度≥90%的环境下均能够萌发，萌发率与相对湿度呈线性正相关，分生孢子的最适相对湿度为100%；相对湿度低于90%，分生孢子不能萌发。2.2.7 不同培养基对病原菌产孢的影响 分别用PDA和麦汁培养基培养柴胡根腐病菌。培养8天后，PDA培养基上的病菌气生菌丝发达，颜色纯白，挑取少量菌丝在显微镜下观察，未发现分生孢子；麦汁培养基上培养的病菌气生菌丝稀少，颜色发暗，挑取少量菌丝在显微镜下观察，可见大量的大、小分生孢子。2.2.8 分生孢子致死温度测定 研究发现，柴胡根腐病菌分生孢子在35～50℃之间均能够萌发，而在55～70℃均不能正常萌发。进一步研究发现，51℃为柴胡根腐病菌分生孢子的致死温度（表3）。处理时间（min）Treattime（min）温度（℃）Temperature（℃）35404550515253545560657010++++--------表3 柴胡镰刀菌分生孢子的致死温度测定Table 3 Lethal temperature of Fusarium solani conidia isolated from Bupleurum chinense DC.本研究通过对柴胡根腐病病原菌的分离鉴定、致病性测定以及病原菌的生物学特征的初步研究，得出如下结论：3.1 根据病原菌的形态特征和致病性测定结果，确认柴胡根腐病病原为镰刀菌（Fusarium solani）。3.2 实验结果表明，柴胡根腐病菌菌丝生长的最适温度为25～30℃，在pH值6～12条件下均能正常生长；分生孢子萌发的最适温度为20～25℃，最适相对湿度为100%，最适pH值为4～6。分生孢子的致死温度为51℃。3.3 柴胡根腐病早有发现，但因以前多为野生，病害只是零星发生。近年来，随着柴胡需求量的逐年提高，柴胡的人工栽培面积不断扩大，这为柴胡根腐病的发生和发展提供了便利条件，柴胡根腐病的发生逐年加重。目前，尚未见有关柴胡根腐病的发生、流行及防治策略的研究报道，开展柴胡根腐病害的侵染、流行及综合防治领域的研究工作势在必行。

毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii Briq）系唇形科鞘蕊花属植物，是一种多年生、半肉质的脆性草本药用植物。可用于治疗感冒、咳嗽等疾病，其提取物forskolin 具有降压、强心和抗炎等作用，可治疗心血管疾病、皮肤病等。同时它还可以通过激活腺苷酸环化酶而调节各种组织，是一种其他药物的活化剂。也可作为生化试剂而广泛应用。湖北通城县新磨苗圃基地从云南昆明植物所引种的毛喉鞘蕊花，最近几年连续发生严重的枯萎病，直接降低当地经济效益以及药用开发。其种植土壤为砂壤土，pH值5.5～6.5。每年7月初开始发病，7月下旬到8月初发病最严重，9月份开始减轻。阴雨连绵天气其发病程度加重。因此，自2004年起对其发生为害、病原以及防治进行研究。毛喉鞘蕊花整个生育期都可发病，但不同生育阶段为害程度有所不同，苗期表现较轻，生长中期发病较重。苗期症状表现为：下部叶片最先卷曲，而后下垂，接着整株叶片逐渐萎蔫，似缺水状，数日后叶片呈褐色干枯状，植株萎缩，严重时全株死亡；中后期发病时，接近地面的根茎最先显现症状，表皮粗糙明显变褐，接着沿着根茎向上蔓延，直至全株根茎变褐，剖开其茎部，可见其维管束腐烂呈黑褐色。阴雨天气可见病部表面有白色霉层，即病菌的分生孢子。病株采自湖北省通城县新磨苗圃基地。在发病根茎病健交界处切取小块根茎组织，按常规的组织分离法在PDA培养基上分离菌株。在菌落边缘挑取形态比较单一的小块菌丝块转移到新的平板上培养，重复纯化2～3次。最后进行单孢纯化后保存于PDA斜面上置4℃冰箱内贮存备用。采用伤根蘸孢悬液接种法进行致病性测定，接种7天后可观察到与田间病株相同的发病情况。再分离可得到与接种菌一致的分离物，说明病害即为该病原菌所致。在 PDA平板上观察培养的菌落，再根据病原菌产孢表型、分生孢子及分生孢子梗等形态特征对病原菌进行形态学鉴定。结果表明，该病原菌在 PDA 培养基上，生长3天气生菌丝茂盛，白色絮状，略带浅紫色；培养基反面菌丝呈辐射状分布，5天菌丝由浅紫色变为深紫色。产孢表型观察，气生菌丝有隔、分枝、透明，直径3～5μm，产孢细胞瓶梗状。小型分生孢子0～1 个分隔，卵形或椭圆形，假头状着生，大小为4～11μm× 1.8～4μm。大型分生孢子为典型的镰刀状轻度弯曲，向两端逐渐狭细，顶细胞渐尖并弯曲成喙状，基细胞足状，多数为3隔，少数4～7隔，大小为19～45μm× 2.5～3.5μm。菌落生长 10 天左右大量产生厚垣孢子，多数单个，球形，细胞壁粗糙，直径7～10μm。根据病原菌的形态特征将该菌鉴定为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）。在形态学鉴定的基础上，采用分子鉴定进行辅助鉴定。利用CTAB法提取菌株的DNA，以ITS1与ITS4为引物进行扩增，扩增的DNA测序结果与GenBank中的相关序列进行比对，该菌株与登陆号为DQ002550.1、DQ016211.1～DQ016203.1 Fusarium oxysporum的菌株序列达到最高的同源性，能够比对上的碱基数目最多，E-value值为最小值0。根据生物信息学同源性比对的结果再结合形态学鉴定，将该菌鉴定为尖孢镰刀菌。

内生真菌是指那些生活在植物组织内的真菌，用以区分生活在植物表面的真菌。对植物内生真菌的研究可追溯至19世纪末，在100多年的研究中取得了丰硕的成果[1～3，7～9]。内生真菌与植物之间存在密切的互利共生关系，对植物的生理代谢调控和生长发育有较大的影响，目前还未发现不存在内生真菌的植物种类。我国也从大量的植物中报道了内生真菌的存在，寄主种类涉及林木、蔬菜及花卉植物[10～16]，但还有相当数量的植物内生菌没有被研究过，进一步深入开展植物内生菌的研究，对于丰富各类菌物的生物多样性知识和植物内生菌资源的应用开发具有十分重大意义。辣椒是国民经济中重要的蔬菜作物，但发生在辣椒上的病害较多，对辣椒的生产带来了不利的影响，在内生真菌表现巨大生防潜力的前提下，未见到辣椒内生真菌的报道，因而开展辣椒内生真菌的研究，以期从中筛选出有生防价值的内生真菌，必将会促进辣椒的生产并带来不可估量的经济和生态效益。山东省莱阳市莱阳农学院园艺系蔬菜大棚种植干制椒型辣椒。选择生长性良好、无病虫害症状的健康辣椒植株的叶片、茎秆及果实，分别于发芽期、幼苗期、开花坐果期和结果期采样。植株采下后装入无菌塑料袋中，带回实验室立即进行分离。1.2.1 内生真菌的组织分离法 所有的叶片和茎秆样品在蒸馏水冲洗2次，然后浸没在70%酒精1min，3%次氯酸钠4min，然后再在70%酒精中浸没30s，灭菌水中洗3次，每次洗1min。经过表面消毒的组织，切成5～7mm的组织块，无菌操作下转移至PDA培养基（pH值6.8，马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂15g；121℃灭菌15min）上，倒平板前加入100μg/ml的土霉素以抑制细菌的生长，取最后一次冲洗组织的灭菌水倒于平板上，以检查表面消毒是否彻底。1.2.2 内生真菌的稀释分离法 组织表面消毒的方法同1.2.1，将经过表面消毒的叶片和茎秆在灭菌的研钵中研碎，加入等体积的灭菌水稀释，然后用移液器吸取1ml组织悬浮液转于PDA培养基（加入100mg/ml的土霉素）上，然后用灭菌玻棒涂平。1.2.3 种子内部真菌的分离 将种子用70%酒精浸泡30s，很快放入无菌水中冲洗3次，然后置于铺有灭菌滤纸的培养皿内，并加入少量灭菌水，加入的量以润湿滤纸为佳，每皿中放入5粒种子。1.2.4 内生真菌的培养、纯化、保藏及计数 为了便于分离生长缓慢的真菌和产孢能力低的真菌的生长，将一半平板放入26℃培养箱中培养，另一半平板放入37℃中培养。每天进行检查，一直到30天后，将长出的真菌及时进行分离、纯化及保藏（4℃，PDA斜面）以便进一步进行鉴定，并记录不同部位分离出的菌株数。1.2.5 内生真菌的鉴定 从培养的菌落上挑取菌丝制成临时玻片进行观察，如果观察的菌丝及分生孢子梗大量聚集在一起，不易看清结构，则应先将菌丝置于滴有1滴70%酒精的载玻片上10s，然后将玻片倾斜倒去酒精，并用吸水纸将酒精彻底吸净后，再在菌丝及分生孢子梗上滴1滴水制成临时玻片放在光学显微镜下观察，拍照，测量孢子大小，并记录形态特征，所有鉴定的菌种均以在PDA培养基上生长的特性为标准，参考有关书籍进行鉴定[4～6]。采用不同的分离方法得到的菌株数不同，稀释分离法得到的菌株数较多，而经组织分离法得到的菌株数少（表1），但稀释分离法得到的菌株不易纯化，而组织分离法得到的菌株易纯化。从种子中分离得到的内生真菌数量较少，仅占到总分离菌株数的7.8%；叶片和茎秆上分离到的菌株数无多大差别。tissuedilutedisolationmethodtissueisolationmethodnumberofisolatesfrequenceofisolationnumberofisolatesfrequenceofisolationleaf4730.03219.1stem4023.83621.4seed——137.8Table 1 The comparison of endophytic fungi isolated by different methods经过对辣椒叶片、茎及种子823份材料中内生真菌的分离，共得到168株菌株，定殖率为20.4%，图1表明了暗色丝孢菌是最常见的分离菌。经鉴定属于14属20种真菌（表2）。其中，弯孢属Curvularia、链格孢属Alternaria、平脐蠕孢属Bipolaris、芽枝孢属Cladosporium、黑附球属Epicoccum、细基格孢属Ulocladium、皮司霉属Pithomyces、拟青霉属Paecilomyces、青霉属Penicillium、曲霉属Aspergillus、枝顶孢属Acremonium、镰刀菌属Fusarium是常见的内生真菌，而黑团孢属Periconia和矛束霉属Doratomyces是首次分离到的内生真菌，从种子中分离获得，对其形态学特征描述见2.3。大多数的菌株在28℃分离培养获得，而在37℃得到的是一些不孕性菌丝。2.3.1 小孢矛束霉（图1～图2）Doratomyces microsporus(Sacc.)F.J.Morton&G.Smith,Mycol.Pap.86:77,1963.KindsSpeciesKindsSpeciesNondemati-aceousgen-eraPaecilomycessinensisQ.D.ChenPenicilliumdigitatum(Pers.)Sacc.PenicilliumexpansumLinkAspergillusnigerTieghAspergillusochraceusG.WilhAspergillusversicolor(Vuill.)TirabAcremoniumroseogriseum(S.B.Saksena)W.GamsFusariumoxysporumvar.liniSnyder&H.N.HansenDematia-ceousgeneraCurvularialunatusR.R.Nelson&HaasisCurvulariaintermediaBoedijnUlocladiumconsortiale(Thüm.)E.G.SimmonsPithomycessacchari(Speg.)M.B.EllisAlternariaalternata(Fr.)KeisslAlternariabrassicicola(Schwein.)WiltshireAlternariatenuissima(Kunze)WiltshireBipolarisaustraliensis(Ellis)Tsuda&UeyamaCladosporiumherbarum(Pers.)LinkPericoniabyssoidesPers.SterilehyphaeEpicoccumnigrumLinkDoratomycesmicrosporus(Sacc.)F.J.MortonTable 2 Kinds of endophytic fungi from hot pepper菌落在CMA上平展，粉状，灰绿色或灰褐色，背面褐色，培养后期明显可见直立的孢梗束。菌丝体表生或大部分埋生，淡褐色或褐色，常形成菌丝束。孢梗束高100～800μm，柄部暗褐色，由紧密压在一起的分生孢子梗组成，头部圆柱形。产孢小梗多个簇生在分生孢子梗中上部。分生孢子卵形，端部多数尖，基部平钝，无色至淡棕色，聚集在一起呈暗褐色，光滑，3.5～5.5μm×2.5～4μm。2.3.2 黑团孢（图7～图8）Periconia byssoides Pers.ex Schweinitz,Persoon,syn.Meth.Fung.(G?ttingen):686,1801.Figure 1～2 Doratomyces microsporus 1.Conidiophore 2.Conidia; Figure 3 Conidia of Fusarium oxysporum var. lini; Figure 4～5 Cuvurlaria lunatus 4.Conidia; 5.Conidiophores and conidia;Figure 6 Conidiophore of Bipolaris australiensis; Figure 7～8 Periconia byssoides 7.Conidiophores; 8.Conidia; Figure 9～10 Epiccocum nigrum 9.Conidia; 10.Conidiomata菌落在CMA上絮状，稀薄，白色。菌丝体表生或埋生，无色。26℃培养1周左右，单根或2～5个簇生、直立、黑色的分生孢子梗从菌落中长出，基部暗橄榄褐色或褐色，光滑或粗糙，不分枝，梗长1.0～1.5mm，宽10～15μm，3～6隔膜，顶端为分生孢子和产孢细胞聚集形成的头部结构。产孢细胞近无色，椭圆形，产生单生或链生的分生孢子。分生孢子球形，初淡黄色，后暗褐色，粗糙，壁厚，直径15～17.5μm。本文首次研究了辣椒内生真菌的种类，共得到15属20种真菌，均属于无性态真菌。其中暗色丝孢菌数量及种类居多，与已报道的植物内生真菌种类及数量较一致[10，13～16]，但又具有一定的差异性，首次报道了黑团孢（P.byssoides）和小孢矛束霉（D.microsporus）是内生真菌，均由种子内分离得到。总结有关内生真菌的文献，发现内生真菌多数为无性态真菌，其次为子囊菌，接合菌居第三，担子菌及鞭毛菌极少存在[10，13～16]，而本次试验分离出的全部是无性态真菌，未见其他类群的真菌，这并不说明辣椒内生真菌中就不存在其他种类的真菌，下一步应改进分离培养方法并采集不同生长时期的组织和部位进行大量分离，以期全面准确地了解辣椒内生真菌的种类，并对内生真菌进行抗活性的筛选工作。组织分离是目前内生真菌分离的主要方法，简单易行，但由于有些真菌在人工基质上不能生长，因而不能得到全部的内生真菌，有很大的局限性。本文首次将组织研碎，采用稀释分离的方法分离内生真菌，获得的菌株种类上与组织分离法无多大差异，但较组织分离法获得的菌株数量多，在没有更好的内生真菌分离方法的情况下，应尝试采用多种分离方法和多种培养基进行分离，掌握合适的分离培养条件，尽可能多的得到内生真菌。

猕猴桃采收期，可根据果实的生长期、果实硬度及果面特征变化来确定，不同品种和地区的采收时期不同。判断猕猴桃果实成熟度的方法主要有两种。一种方法是根据果实的生育期来估测。如中华猕猴桃的果实生育期为140～150天，美味猕猴桃则需要170～180天，当生长期达到需要的生育期时，才能采收。栽培品种按照成熟期来划分，早熟品种一般到9月上中旬果实成熟，中熟品种到9月下旬，晚熟品种到10月上中旬，极晚熟品种则要到10 月下旬至11 月上旬果实才成熟。另一种方法是根据果实中可溶性固形物含量来确定。测定时，削取少量果肉，将汁挤到糖量计中，观察读数即可。一般来说，可溶性固形物达6.5%～7.5%时，即为可采成熟度；达9%～12%时为食用成熟度；超过12%时则达到了生理成熟度。一般用于贮藏的，达到可采成熟度就可以采收了。而用于鲜销的，则应采得稍晚些，待达到食用成熟度时再采，需要外销的可在些基础上稍为提早。用于加工果脯、果干的，可在七八成熟时采收，而用于加工果汁、果酱的则要求达九成熟时采收。有人工采收和机械采收两种方式，见下页表。采收方式优点缺点人工采收轻拿轻放、避免损伤，减少腐烂效率低机械采收效率高容易造成机械损伤、影响贮藏效果表 采收方式优缺点比较现今，提倡生产 “精品” 和 “高档” 产品，国内外猕猴桃采收主要靠人工采收。在采收前20天、10天分别喷施0.3%氯化钙溶液各1 次，以提高果实耐贮性。为长途运输销售和贮藏，在采前10 天左右，果园应停止水。如下雨，在雨后3～5天进行采收。在晴天上午或晨雾、露水消失以后采摘。避免阳光直射和阴雨天采摘。一棵树上的果实成熟期也略有不同，釆收时应先下后上，由外向内。猕猴桃果实果皮薄，容易受到机械伤和挤压伤，表皮茸毛易脱落，在采收过程中要避免多次倒箱。猕猴桃果实进行标准分级的优点是：保证质量，促进高质量生产，并能实行优质优价；将好与劣的果实分开可减少病菌感染，防止腐烂，便于检疫；有利包装、运输并减少周转中的损耗。机械分级速度快、精确度髙，但投资大，而且机械分级也需要人工辅助操作。为便于识别，一些国家在分级机旁挂一张标准图，果形不正、病虫和损伤果等的图样旁有 “×” 记号，提醒操作人员把 “×” 果挑出，标准果入选。海沃德大体可分为8级，供参考。新西兰为保证猕猴桃果实出口的质量，在果实采收后用铲车将盛果实的木箱运到包装厂房，输入滚动式分级机；输送台有很好的照明设备，每次有6～8个果实移动、传送到输送台上；有经验的操作者很快会将有污染、损坏或病虫的果实挑出来，再由自动机械按不同重量分级后，分装入有塑料袋的托盘。有的分级机是轨道型的，当果实投掷到空中后，会按果实重量的差别，在不同的间隔距离上掉落在帆布制成的斜槽中。我国目前多数采用人工分级，中华猕猴桃开发集团曾提出分级标准的试行草案。鲜果的质量标准如下。（1） 单果重在60克以上，分60～80克、80～100克和100克以上3个等级。（2） 果形端正、美观，无污点、病虫斑点。（3） 每100克鲜果肉中维生素C含量为100毫克以上。（4） 可溶性固形物在12%以上 （以开始软化时为准）。（5） 甜酸可口，无异味。（6） 耐贮性好，美味猕猴桃在常温条件贮藏10天以上不软化，（0±1）℃冷藏可保存3个月以上，货架期3～5天，中华猕猴桃可适当缩短期限。（7） 农药残留量不得超过国际允许标准。（8） 要求品种纯正。包装是商品流通中的重要环节。合理的包装在流通过程中能保证商品果实的质量。市场上可以看到各种小包装，但多数还是仿制托盘包装。这种包装能使猕猴桃保存在较好的温湿度环境中；防止果实擦伤和挤压；运输方便，适合批发和零售两用。托盘按果实分级有8种规格，每个托盘装果实约3.6千克，有一个木制的卡片纸板或塑料的外盖，旁边有通气孔；一个预制的塑料容器垫，垫内有很厚的浅绿色聚乙烯衬垫膜可以保持有限的空气湿度，避免果实脱水。果实成排或按对角线装在盘内预制的塑料容器盒内，盒外用聚乙烯薄膜包裹，上下都有瓦楞纸板。托盘包装好后在一端标明果实数量、规格、品种名称、栽培者及注册商标，还有铁路和水运的记号等。每个托盘里只允许一种规格的猕猴桃。174个托盘用绳带绑紧，摞放在货盘 （集装箱） 上，准备预冷、贮藏或运输。分级和包装密切结合，组合内容可用图解表示 （图7-1）。包装业务复杂，必须参与手工操作。包装业是劳动密集型行业，一个劳动力每天采摘的果实需要2～3个人完成包装。一般的包装厂每天需要用50个工人才能完成4000个托盘的包装业务。自动化程度高的包装厂，1分钟可装20个托盘，运转完全由计算机控制。除托盘外也有用木箱的，规格：长、宽、高为45厘米×18厘米×18厘米或40.5厘米×30.5厘米×11.5厘米，这种木箱约装9千克；或40.5厘米×15.2 厘米×11.5 厘米规格的可装4～4.5千克；也有的果实散装，到达目的地后再改用小纸箱包装出售。我国除托盘包装外也有用小纸匣，或中间用框格隔开的，容量有0.5千克、3千克和3.5千克，但在山区或交通不发达的农村仍用竹筐、柳条筐等，其筐内需要用山草、稻草等作衬垫。果实需轻拿轻放，为防止果皮擦伤，可用地膜或低压聚乙烯膜单果包裹，效果也很好。产品的外包装最好能设计成与产品协调的图案，力求简单大方，不宜华丽装饰。图7-1 猕猴桃分级包装示意将充分冷却的鲜果装入垫入有0.03毫米聚乙烯塑料袋的果箱中，每袋内放猕猴桃保鲜剂一包或放入一些用饱和高锰酸钾溶液浸泡过的碎砖块，用橡皮筋扎紧袋口，放于阴凉的房间或地下，每隔半个月检查一次。适用于冷凉地区少量存放。塑料袋一般采用50厘米×35厘米×15厘米规格，每袋装2.5千克为宜。为防止猕猴桃发酵变质，用抗氧化剂0.2%赤藻糖酸钠溶液浸果3～5 分钟，晾干后装在聚乙烯袋内，可提高贮藏效果。适用于个体经营者短期贮藏，是一种简单易行的贮藏方法。选择阴凉、地势平坦处，铺15厘米厚的干净细沙，然后一层猕猴桃一层沙子排放。一层沙子的厚度约5厘米，果与果之间约有1厘米间隙，厚度1.2～1.5厘米，外盖10～20厘米湿沙，以保温保湿。沙子湿度要求以手握成团，手松微散为宜。此法可使猕猴桃放置2个月左右。应注意的是，10天左右检查一次果品质量，及时剔除次果、坏果，以免相互感染，使病情蔓延。检查时间以气温较低的清晨为好。将采收的果实放在冷凉处过夜降温，然后把果实放入铺有松针和湿沙的木箱或筐中，一层果实一层松针和沙，放在阴凉通风处。土窑贮藏技术是一种结构简单、建造方便的节能贮藏设施，但是无法精确控制温度。选择地势高、地下水位低、土质坚实、干燥的地方建窑，窑门最面向北或西北方向。窑门宽1.2～1.5米，高2～2.5米。每次贮藏前和结束后，对窑洞进行彻底清扫、通风，把使用器具搬到洞外晾晒消毒。一般可采用硫黄燃烧熏蒸，用量为5～10克/平方米，药剂在库内要分点施放或者按每100立方米容积用1%～2%甲醛3千克或漂白粉溶液对库内地面和墙壁进行均匀喷洒消毒。消毒时，将贮藏所用的包装容器、材料等一并放入库内，密闭1～2 天，然后开启门窗通风 1～3 天，之后方可入贮猕猴桃。通风库是在良好的绝热建筑和灵活的通风设备的情况下，利用库内外温度的差异，以通风换气的方式来保持库内低温的一种场所。选在交通方便、接近产地或销售的地方。库房宽度7～10米，长度不限，高度3.5～4.5米。库顶有抽风道，屋檐有通风窗，地下有进风道，构成循环系统 （图7-2）。图7-2 通风库剖面果实入库前2～3周，库房用硫黄熏蒸消毒。采用堆贮和架贮两种形式。入库后1～2周以降温排湿为主，除雨天、雾天外，打开所有通风窗，加强通风，温度控制在 10℃ 以下，相对湿度85%～90%。贮藏后期的库房管理主要是降温，夜间开窗通风，日出前关上门窗和通风窗，以阻止外部热空气进入。可使用SM-8 保鲜剂，防止果实腐烂、失水和软化，保鲜效果良好。果实采收后立即用SM-8保鲜剂8倍稀释液浸果，晾干后装筐，每筐净重12.5千克左右，码放存贮于通风库中，晚上打开进气扇和排风扇通风排气，将库温控制在16.2～20℃，相对湿度在78%～95%。贮藏前期和后期库温较高时，每隔8小时开紫外灯30分钟，利用产生的臭氧清除乙烯，同时臭氧也具有强烈的灭菌作用。经过SM-8保鲜剂处理过的果实可贮藏160天，好果率达90%，果肉仍保持鲜绿，而且色、香、味俱佳。是目前果蔬贮藏的一种较好的贮藏方式。作为存贮果品的采收指标一般以果肉的可溶性固形物含量6.5%～8.0%时采果较为适宜，过早或过晚采收都对贮藏不利。采收后应立即进行初选分装，伤残果、畸形果、病虫果和劣质果都不得入库贮藏。从采收到入库降温一般不超过 48小时。最适贮藏温度一般在0℃左右，在果品入库之前库温应稳定控制在0℃左右。一次入库果品不宜过多，一般以库容总量的10%～15%为好，这样不致引起库温明显升高，有利于猕猴桃的长期贮藏。适合猕猴桃贮藏的相对湿度为90%～98%。冷库内果实通过呼吸作用释放出大量二氧化碳和其他有害气体，如乙烯等，当这些气体积累到一定浓度就会促使果实成熟衰老。因此，必须通风换气，降低气体的催熟作用。一般通风时间应选在早晨，雨天、雾天外界湿度大时，不宜换气。果实入库后要经常检查果品质量、温度和湿度变化、鼠害情况以及其他异常现象等，并做好记录，出现问题及时处理。在冷库贮藏的基础上加装1台乙烯脱除器，将库内乙烯浓度降低至阀值 （0.02 毫克/千克） 以下，为低乙烯冷库，可以更好的保持果实外观鲜艳饱满，风味正常。是在冷藏的基础上，把果蔬放在特殊的密封库房内，同时改变贮藏环境气体成分的一种贮藏方法。在贮藏过程中适当降低温度，控制相对湿度、减少氧气含量、提高二氧化碳浓度，可以大幅度降低果实的呼吸强度和自我消耗，抑制催熟激素乙烯的生成，延缓果实的衰老，达到长期保鲜贮藏的目的。目前国际市场上的优质猕猴桃鲜果几乎全都采用了气调保鲜技术。一般每袋贮果5～10千克，薄膜厚0.03～0.05毫米，比较适合个体户少量贮藏。方法是选择成熟度适中的无伤硬果放入袋内，置于阴凉处、过夜降温后放入少量乙烯吸收剂，扎紧袋口放在低温处贮藏。也可选用0.03～0.05毫米厚的聚乙烯薄膜自行加工保鲜袋，方法与硅窗袋相似。猕猴桃果实的商品化处理有一系列的处理措施，其流程如图7-3所示。图7-3 猕猴桃果实的商品化处理流程合理的包装是果实商品化、标准化、安全运输和贮藏的重要措施。科学的包装可减少果实在搬运、装卸过程中造成的机械损伤，使果实安全运输到目的地。同时，还可减少果实腐烂程度，延长贮藏寿命。因此，合理的包装处理在果实贮运中起着重要的作用。包装材料质地要坚固、轻便，容器大小、重量要适合，便于运输和堆码；容器内部要光滑，以避免刺破内包装和果品；容器不要过于密封，应使内部果品与外界有一定的气体和热量交换。包装容器要美观、方便，对顾客有一定吸引力。目前我国生产上一般采用硬纸盒、硬纸箱包装，也有用木条箱和塑料箱等。在箱底铺垫柔软的纸张或辅以P E、P VC塑料保鲜膜贮藏。国家农产品保鲜工程技术研究中心 （天津） 研制生产的P E、P VC防结露保鲜膜，具有良好的透气性、透湿性，对猕猴桃的贮藏保鲜作用效果良好。果实收获后，除极少数就地供应销售外，大量的需要转运至贮藏库、加工厂、人口集中的城市、工矿区及集市贸易中心进行贮藏、加工和销售。运输的基本要求如下。果实采摘后应及时装运，尽量缩短产品在产地和运输途中的滞留时间。猕猴桃含水量高、组织脆嫩、遭受损伤易腐烂，在装卸过程中要加强管理，严格要求，必须做到轻装轻卸，精细操作，确保果实完好无损。保鲜贮运的适宜温度为0～2℃，冰点在-2℃左右。研究表明，猕猴桃果实品种之间耐贮性差异很大。耐贮性好的品种一般可以贮藏4～5个月，最长可达半年以上。猕猴桃贮藏的适宜温度0～1℃，相对湿度90%～95%，气调时氧含量为2%～4%、二氧化碳含量为5%。发生在果实后熟期。果实内部发生软腐，失去使用价值，常造成很大的经济损失。（1） 症状。果实后熟末期，果皮出现小指头大小的凹陷。剥开凹陷部的表皮，病部中心部呈乳白色，周围呈黄绿色，外围深绿色呈环状，果肉软腐 （图7-4）。图7-4 猕猴桃软腐病（2） 防治。彻底清园，缩短后熟期，后熟期温度尽量控制在15℃以下。从5月下旬开花期开始到7月下旬，喷施70%甲基硫菌灵可湿性粉剂2000 倍液3～4 次，有良好的防治效果，并可兼治灰霉菌引起的花腐病。是贮运期常见病害，在0℃时也可出现腐烂。（1） 症状。初期感病果实表面出现水渍状斑，褐色软腐，3天后其上长出白色霉层，随着白色霉层向外扩展，病斑中间生出黑色粉状霉层。（2） 防治。轻拿轻放，减少果面损伤；应用仲丁胺防腐剂，效果较好。猕猴桃软化是影响贮藏的主要问题之一，也是引起果实腐烂的因素。其防治方法如下。1.采后及时预冷猕猴桃采后最好能及时预冷，预冷分为强风冷却、冰水冷却和真空预冷却等方式。在采后8～12小时内用强制冷却的方式，将果实温度降至0℃，并在包装前维持恒温。运输时应采用机械冷藏车和保温车，这是延缓果实软化最有效的方法。2.小包装箱内衬聚乙烯膜袋经预冷的猕猴桃以小包装的形式 （木箱或瓦愣纸箱，箱壁打孔，每箱10～15千克），内衬聚乙烯 （0.04～0.07毫米） 薄膜或用硅窗气调保鲜袋单层包装，可保持高湿和5%左右二氧化碳浓度，这样有利于快速降温和长期贮藏。3.放置乙烯吸收剂猕猴桃对乙烯极敏感，在乙烯浓度极低 （0.2 毫克/千克）的情况下，即使在0℃条件下冷藏，也会加快果实软化，促使猕猴桃成熟与衰老。因此，在装有猕猴桃的聚乙烯薄膜袋内加入一定量 （0.5%～1%） 的乙烯吸收剂，可延缓猕猴桃的衰老。

The small brown planthoppers(Laodelphax striatellus)is an important pest in single late rice seedling stage in Zhejiang province and also the vector of the rice stripe virus,threatened paddy rice production.Through the investigation of transplanting time of rice seeding,occurrence quantity and carriage rate of overwinter and the first generation of the small brown planthoppers in wheat field and weed at the beginning of 2007,the small brown planthoppers mainly immigrated Early Sowing single late rice seedling from wheat field and weeds.The generation of the small brown planthoppers is the most serious in sowing single late rice seedling,and easily arouse the outbreak of the rice stripe virus.Currently,control strategy of the rice stripe virus is"cut off a poisonous chain,cure insect to control the disease".During the last years,by investigating the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and adopting chemistry prevention at different number of times to control it,we research the relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and the incidence of the rice stripe virus for explicating the affection of insect quantity in rice seedling stage and chemistry prevention to incidence of the rice stripe virus.Now we report the result as follows.Agent:40%Chlorpyrifos(zhejiang xinnong chemical company limited).Experimental field is in the experimental area of Shuangqiao academy of agricultural science in Xiuzhou district of Jiaxing City;rice variety is Jia 991 and is offered by Jiaxing academy of agricultural science.1.2.1 Seed treatment May 10 in 2007,rice seed is immersed in 2000 times'402 liquid over72h.May 13,we took it out and flushed with the clear water,then put it in the thermostat in 37℃ in order to pregerminate and seeded on May 15.1.2.2 Experimental design The rice seedling bed is divided into 15 small areas that is 2m2 and each small area stays the partition of 30cm.Each small area is sowed seeds quantity homology.15 small areas are divided into 5 processing and the everywhere manages 3 small areas.5 processing differences expect:no application,once application,2 times application,3 times application and 4 times application in the rice seedling stage.Application of time is such as the table 1.The agent of prevention chooses to 40%Chlorpyrifos that diluted to 500 times liquids to spray.ApplicationtimeApplicationnumberoftimes0times1times2times3times4times5/24√√√√6/1√√√6/8√√6/15√Table 1 Different application number of times and time1.2.3 Investigation of the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and incidence of the rice stripe virus We have investigated the small brown planthoppers quantity of every small area in rice seedling bed before application since May 24.The small area is investigated in 3 point and everywhere is 0.11m2,and we statistics the average of insect quantity in each point and compare with the quantity in different processing.We statistics the amount of rice seedling and the number of infected plants in every small area on June 20 when the rice seedling transplanted to the field,and computed the incidence of the rice stripe virus in each area.1.2.4 Incidence of the rice stripe virus in the field After investigating incidence of the rice stripe virus in rice seedling stage,we transplanted the rice seedling from 5 processing area including no preventing,preventing once,2 times,3 times,4 times into the field,and periodical investigated the incidence of the rice stripe virus in the field.Each small area is chose 5 points while investigating,and investigated 250 stubs on each point and computed incidence in every small area.2.1.1 The small brown planthoppers quantity in rice seedling stage Investigate a result on May 24,The small brown planthoppers all is longwing adults in each small rice seedling area,and the insect quantity is 138 in each 0.11m2;amount of insect in the field has a little bit decrease on June 1;on June 8 it obviously reduces and the number of egg and low instar nymphst increases gradually;until June 15 it has been basically low instar nymphst.The result of investigation indicates,from June 1 to May 24,the insect quantity of every processing area presents to a descend trend,but the decrease range of the insect quantity in applicationarea is higher than in no application;From June 1 to June 15,the insect quantity of no and once application area increases gradually,which are higher than the cardinal number of ex-experiment,but the amount of insect in the other application areas have gradually decrease,see table 2,figure 1.Date(month/day)0time1time2times3times4times5/241381451621431526/11191121251161206/8211175142122986/152471991398465Rateofincreasesordecrease(%)78.9937.24-14.20-41.26-57.24Table 2 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing areas of rice seedlingFigure 1 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing aras of rice seeldingWith the insect quantity of ex-application in each small area for cardinal number,compared with the amount of the last investigation,the insect quantity in no and once application area increased by 78.99%and 37.24%respectively,but it in 2 times,3 times and 4 times application area reduced by 14.20%,41.26%and 57.24%respectively.Experiment indicates,application inrice seedling bed can effectively repress the small brown planthoppers quantity in the field,and with application number of times increasing,which restraint effect is strengthen and amount of insect in small area reduces 57.24%with 4 times application.2.1.2 Investigation of the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed The investigation of incidence of the rice stripe virus on that day when the rice seedling was transplanted to the field,there is all discovered diseased plants in each small areas,but which number in the small area of no application is obviously more than the application area.The incidence of no,once,2 times,3 times and 4 times application areas respectively is 5.53%,3.90%,2.27%,1.50%and 1.36%,see table 3.Experiment enunciation,application in the rice seedling bed is not only lower amount of the small brown planthoppers in the field,but also ease occurrence of rice stripe in rice seedling bed.ApplicationtimesInriceseedlingbedDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofriceseedling(%)InthefieldDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofthefield(%)0time993179655.530237129618.2901time719184293.9029.48170113814.9418.322times404178302.2758.95116102011.3737.833times270180211.5072.887311016.6363.754times247181541.3675.416114234.2976.54Table 3 The investigation of incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed(Jiaxing,2006)Seen from the investigation of the incidence of rice stripe virus with the different processing,the incidence in rice seedling bed of no application is lowered by 29.48%compared with once time application;compared with 2 times,the incidence is lowered by 29.47%with once application,and it is descended by 13.19%compared 2 times with 3 times;but compared 4 times application with 3 times,the incidence in rice seedling bed is only lowered 2.53%.This is because of the rice stripe virus has an incubation stage in rice plant after infection,and there is 12 days at least from infecting to outbreak;than the outbreak of rice stripe virus in rice seedling bed is on June 20.So that ex-3 times application depressed the cardinal number of the small brown planthoppers,and reduced the infection and the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed.But it is not obviously influencing for the incidence in rice seedling bed with the 4th time application on June 15.The result that we periodic investigate the rice stripe virus in the field,the incidence in the field is basically stability after transplanting 40 days,and no longer appear a new disable plant.Because on the rice seedling stage we adopted the chemistry prevention with different number of times,the incidence of the rice stripe virus exists difference after the rice seedling transplanted to the field.The incidence is the tallest in no application small area and lowest in 4 times application small area.Along with the increment of application number of times,the incidence presents to obviously descend trend.With no,once,2 times,3 times,4 times application the incidence is in order to 18.29%,14.94%,11.37%,6.63%and 4.29%in the field.It is shown that application in the rice seedling bed depressed the small brown planthoppers quantity,and the function is very obviously for ease the occurrence of the rice stripe virus.Analyzed the incidence of the rice stripe virus in various processing,it in the field with once and two times application distinctly descend 18.23%and 37.83%compared with no application;but when with the application number of times increase to 3 times,the descends range of the incidence is 63.75%and prevent effect is obviously higher than that with 2 times application,than after 4 times application the incidence descend to come to 76.54%.The relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling bed and incidence of rice stripe in rice seedling bed and field analytical,such as table 4,figure 2 shown.The relativity analyzes indicated,the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in rice seedling bed(y)relation type is y=0.03 x+2.89,related coefficient r=0.99**;the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in the field(y)relation type is y=0.10x+11.03,related coefficient r=0.98**.The relationship between the small brown planthoppers quantity and incidence of rice stripe virus in rice seedling bed and field present positive correlation.ApplicationtimesChangerateofthequantity(%)Incidenceinriceseedlingbed(%)Incidenceinthefield(%)0time78.995.5618.292times37.243.8914.943times-14.202.2711.375times-41.261.506.636times-57.241.364.29Table 4 The investigation of the small brown planthoppers quantity and incidence of the rice stripe virus(Jiaxing,2006)It is very obvious that preventing the small brown planthoppers in rice seedling bed for controlling the occurrence of the rice stripe virus.The result of adopting the different application times indicates,that is repressed growth of the small brown planthoppers quantity,and also eased the occurrence of the rice stripe virus with increasing the application number of times.As the result of the test shows,there is the forward relationship between the range of incidence and application times;through investigating the incidence in the field,we can confirm that reasonable application is effectively to controlling the occurrence of the rice stripe virus.Moreover analysis of the relationship between the small brown planthoppers quantity,incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed and it in the flied,there have a positive correlation.Experiment shows,the reasonable and multiple application in rice seedling bed is the effective means to reduce the small brown planthoppers quantity and controlling the rice stripe virus.The controlling effect of the rice stripe virus is reached 70%with application 3 or 4 times on rice seedling stage.Therefore we suggest that we should pay attention to controlling the small brown planthoppers of the rice seedling bed at the rice stripe virus heavier region or age,especially in the rice seedling bed where sow seeds early and easily cause the small brown planthoppers centralize immigration.In order to prevent effectively,we should increase the number of application times to lower the small brown planthoppers quantity in the field,and control the harm of the rice stripe virus.Figure 2 Relationship between the small brown planthoppers quantity andin cidence of rice stripe virus in different prevention of rice seedling bed

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）是一种世界性分布的重要真菌病害，能够侵染75个科450多种的植物。核盘菌在作物的各个生长期都能引起发病，并造成严重危害。2006年，核盘菌已经完成了全基因组测序，但是由于缺乏一个高效的遗传转化体系，其分子生物学方面的研究仍然十分滞后。Jeffery等（2001）利用PEG介导的方法对核盘菌的原生质体进行了转化，并获得成功，而其他人在重复试验时未得到结果。Richard等（2006）利用农杆菌介导对核盘菌的子囊孢子进行转化，开辟了核盘菌介导转化的新途径，但是在实验室里诱导产生子囊孢子十分困难，限制了这种转化方法的使用。江明等（2006）报道用核盘菌菌丝为材料，建立了农杆菌介导转化核盘菌技术体系，但该方法转化效率低，整个操作过程易被杂菌污染。为此，我们对此方法进行了改进，获得了较理想的效果，并降低了污染频率，现简要报道如下：将核盘菌在PDA平皿上活化，移至新PDA平皿上培养2天，用打孔器（φ 6mm）于菌落边缘打取菌丝块。将菌丝块与带有转化载体的农杆菌置于铺有玻璃纸的共培养基上于20℃培养室黑暗培养2天。将菌丝块移走后，将带有菌丝的玻璃纸平铺于无菌的培养皿中，加入15～20ml含有潮霉素（30μg/ml）的PDA培养基，在乙酰丁香酮的作用下，3～4天后在培养基表面有小的菌落形。将小菌落抑制含有潮霉素（50μg/ml）的PDA培养基上进一步筛选，获得候选转化子。经PCR鉴定，证实为转化子；转化子性状稳定，在不含潮霉素的PDA培养基上继代培养6代之后仍然能保持潮霉素的抗性。这种转化方法效率较高，且结果稳定，平均每个培养皿中会有1～3个转化子。目前，正在研究通过改变乙酰丁香酮的浓度和共培养时间等条件来提高转化效率，以便得到更多的转化子，为下一步筛选表型异常的突变菌株建立平台。