洪素娣洪素娣，（1971～ ），女，江苏省丹阳市植保站站长，高级农艺师，长期从事农作物病虫害测报和防治工作，电话：0511-6541975，E-mail：hsd8597@163.com。（江苏省丹阳市植保植检站 江苏丹阳 212300）摘要：当前农作物病虫害的发生随着栽培制度、用药水平、田间管理等技术的进步在不断的演变，给测报工作也提出了更高的要求。近年来测报工作虽然取得了长足的进步，但是也面临着一系列的问题，例如队伍不稳定、测报数据采集范围不广等。笔者在多年的测报工作中也取得了一些经验和体会。关键词：病虫测报；病虫演变；存在问题；对策建议农作物病虫害预测预报工作是指导好病虫害防治的重要手段，它为各级领导正确指导农业生产提供科学依据。丹阳市有数据资料记载的病虫害预测预报工作从20世纪60年代末开始。几十年来，丹阳市的病虫发生情况发生了一系列的演变，测报工作开展的过程中也面临着一些问题，也给测报技术人员带来了一些体会与思考。1 病虫演变情况由于气候的逐渐变化、生产方式的转变以及防治水平的提高，近30年来病虫害的发生种类和程度也发生了一些演变。从20世纪70年代末年到80年代初，丹阳市水稻种植模式以双季稻和杂交稻为主，小麦以宁麦品种为主，发生的主要病虫水稻以纹枯病、稻瘟病、螟虫、飞虱、纵卷叶螟等为主，小麦以蚜虫、粘虫、赤霉病、白粉病为主，当时小麦粘虫也是测报的重点。进入90年代以后，小麦粘虫的种群数量明显下降，到21世纪初小麦粘虫已不再作为重点对象进行监测。20世纪90年代末到21世纪初由于沙蚕毒素类农药的长期使用，螟虫对其产生了明显的抗性，一度造成二化螟、三化螟大发生，但由于三唑磷等药剂的使用，种群数量很快得到了控制。但从2002年开始，纵卷叶螟等迁飞虱害虫在丹阳市已连续多年达偏重至大发生程度。值得一提的是褐飞虱从2005年大发生以后，也是连续几年在水稻穗期出现“翘尾”现象。病害方面，由于21 世纪初开始种植的小麦品种以扬麦系列为主，白粉病、锈病等不再是小麦上的主要病害；水稻上由于粗秆大穗型品种的种植以及单产水平的提高，氮肥的使用量较大，从20世纪90年代后期开始，稻曲病也成了水稻上的主要病害之一。随着农业生产的发展、产业结构调整以及农业生态环境的变化，病虫种群也在不断变化，一些次要病虫害上升为主要病虫害，同时原先的一些主要病虫害演变为零星发生，例如水稻稻曲病、水稻条纹叶枯病等已成为近年来丹阳市水稻上的主要病害，而30年前发生较重的小麦粘虫近年来却是零星发生。由于病虫的演变，以往的测报方法与手段也很难适应当前防治工作的需要。为了搞好测报工作，更好地指导大面积上开展防治，根据多年在测报工作中遇到的问题作了初步的思考，以不断完善测报方法，提高测报质量，更好地为农业生产服务。2 测报工作面临的问题2.1 乡镇测报技术人员面临断档2.1.1 乡镇机构改革造成从2001年以来，丹阳市乡镇已经过了2～3次撤并，由于每次乡镇机构改革时，对乡镇事业编制人员都要定员定岗，原有的人员超过一般会编制人数，各乡镇为了减少改革中的矛盾，往往都是在年龄上实行“一刀切”。于是部分乡镇技术人员在经验和精力都很充足的时候就办理了提前退养，而后乡镇安排的植保员往往缺乏相应的技术和经验。2010年又面临着新一轮的乡镇机构改革，虽然目前各乡镇的改革措施还没有出台，但是仍有部分乡镇存在“超编”，人员又面临新一轮的“精简”。2.1.2 人员主观原因造成相对于其他行业来说，从事植保工作往往要付出更多的勤劳与汗水，虽然现在的测报手段有了较明显的改善，但是还没有根本改变植保技术人员社会地位不高这样一种形象。所以虽然目前丹阳市有50%的乡镇植保员年龄在40岁以下，但是这部分人员往往吃苦精神不足，不愿从事田间的基础调查和测报，对市县级组织的培训也不是很重视，往往只是走走过场，主观上造成技术断档。2.1.3 领导不重视造成丹阳市处于经济较发达地区，农业所占乡镇经济比重小，乡镇领导主要精力都放在抓工业经济，对农业不是很重视。往往农业条线上出现了一个好的苗子就调整到其他部门去了。这也是造成农业技术人才断档的一个重要原因。2.2 病虫害预测预报数据采集范围不广由于丹阳市地理条件较为特殊，兼具有宁镇扬丘陵、洮鬲平原、孟河平原和沿江圩区等多种不同的地理特点，病虫害的发生种类和程度也存在一定的差异，但是在实际的病虫害监测过程中，特别是田间调查时很难做到面面俱到，病虫害预测预报数据采集不是十分规范和到位，数据的代表性不是很强、准确性也不很高，对局部地区突发性的病虫预警还没有完全到位。3 对测报工作的几点体会与建议病虫测报工作是植保工作的基础，病虫预报准确与否直接关系防治效果。病虫测报工作又是一项公益性事业，必须争取领导重视，加大国家及地方投入，增强植保防灾、减灾的应变能力，最大程度发挥预测和防治的生态效益、经济效益和社会效益。3.1 体会3.1.1 稳定的技术队伍是做好测报工作的前提测报工作既要求有较高的专业知识，又要求具有一定的经验积累，和其他行业相比，更需要有从事多年该方面工作经验的人。由于测报工作主要是为农民服务，体现社会效益，是一种纯公益性质的工作，苦劳多于功劳，因此需要国家对该行业进行重点扶持和支持。在机构改革中，笔者认为该行业的人员不能减少，一定要保持测报队伍的稳定性。同时要采取一些激励政策来调动测报工作人员的积极性。因为相对于其他行业来说，测报人员从事的是野外作业，付出了比其他行业人员多得多的勤劳和汗水。而且病虫害发生的差异性和不确定性也较大，相对于其他行业来说承受的压力也大得多。因而经费上应该向该行业有所倾斜，要切实解决好测报人员工作、生活等实际困难，调动测报人员的工作积极性和责任心，防止测报人员流失，使所有的测报人员主动、愉快地做好本职工作，提高对农民、对农业的服务水平。3.1.2 规范调查是做好测报工作的基础首先，掌握好主要农作物病虫害和重点监测对象的调查技术规范，记住各阶段的重点调查内容，其次，要了解主要农作物病虫害的种类和重点监测对象，熟悉主要病虫害在本地的发生规律，结合好部省市各时段的重点汇报内容，安排好调查种类和日程，并计划好全年准备发布病虫信息的大致时段，做好病虫发生程度的中长期预测，制定好防治预案。特别是主要农作物在5～9月重点病虫的主要发生时期，每月初还要制定月度工作计划和调查内容。做到及时调查，不漏调查，确保测报工作有序开展。另外，乡镇测报点的选择要有代表性。丹阳市乡镇测报点的选择几乎涵盖了所有的典型区域，既有代表丘陵地区的、也有代表平原区和沿江圩区的测报点，保证了病虫监测数据的代表性。3.1.3 加强测报技术研究是做好测报工作的有效手段一是加快监测设备的更新换代。丹阳市从2005年开始对所有测报灯进行了更换，结合“农作物有害生物预警与控制区域站”项目建设，到2007年丹阳市测报点已由白炽灯全部更换为佳多牌自动虫情测报灯。既减轻了劳动强度，又杜绝了原先的“毒瓶”对环境的污染和对测报技术人员的为害。监测数据与原先的普通白炽灯相比也更加有代表性。例如丹阳市2005年在练湖农场同时点了两盏不同的测报灯进行数据的采集，结果表明，智能灯诱集的稻飞虱虫量是普通白炽灯的6.5 倍，纵卷叶螟的诱集量是普通白炽灯的18.4倍，二化螟的诱集量是普通白炽灯的6.8倍。数据的代表性和准确性更高。二是充分利用现代网络设施提高信息的传输速度。除了利用电视和报纸作为信息发布的平台外，由于当前我国城乡已普及网络，要充分利用现在的网络设备传输病虫的信息。再者我国的手机普及率已超过50%，通过手机短信平台发布预报信息已成为当前最有效也是最直接的信息传播方式。3.1.4 广泛联系是做好测报工作的根本方法一是与周边地区和历年数据联系。在测报工作开展的过程中，既要有自已的监测数据也要做好纵向和横向的联系，特别是在“两迁”害虫的测报上，在6月下旬纵卷叶螟迁入期，往往全市6个测报点只有一、两个调查点有明显的虫迁入，其余的调查点却不见虫，这时就要及时与周边地区进行联系和沟通，同时与历年的发生情况作比对，来确定发生量和可能的为害程度，从而做出准确预报，及时发布预报信息。二是要与相关行业人员联系。由于病虫害的发生程度与栽培方式、苗情、水浆管理、施肥水平、气候条件等存在密切的关系，因而也要与相关行业人员进行联系和沟通，综合考虑各种因素的影响，对病虫害的发生程度做出更加准确的预测。3.2 建议3.2.1 早列计划，做好基础性调查工作，并适时调整病虫害测报工作虽然有一定的规律性，但是不同时期有不同调查内容和测报重点，调查内容纷繁而复杂，而且年度之间也存在着较大的差异。因而列计划就显得尤为必要。一般在年初就应该列一个全年的调查和测报计划。例如根据丹阳市农作物病虫发生大致情况，各主要阶段的工作重点大致如下：3月上旬结合部省市的预测趋势发布全年病虫发生的中长期趋势预测，并制定每月工作计划，制定全年测报工作方案和病虫发布的方案。3月中下旬重点开展油菜菌核病和小麦纹枯病的测报工作。4～5月主要针对小麦赤霉病、蚜虫、螟虫越冬基数、灰飞虱冬后基数和麦田一代发生情况开展调查和预测。5～9月是全年病虫测报的关键时期。水稻生产是丹阳市粮食生产的重中之重，也是多种病虫发生为害的主要时期。从5月初开始我市开始点灯诱虫，一般到9月底结束。这一时期，本站一般3天左右开展一次系统调查，4～5天一次大田普查，遇到病虫发生量大的情况，还要适当增加调查次数。10～12月份主要是针对秋播作物进行田间的调查和对秋熟作物进行全年病虫发生程度的考察和汇总工作。3.2.2 普查时，要多记录相关内容、技术要素，多收集信息除了记录调查的主要内容，还应该记录农作物当前栽培管理情况、生育期、作物品种、当天气候条件及其他相关数据，并常联系其他条线的技术人员，还要注意收集周边县市病虫害发生发展状况更加明确病虫的发生发展状态，做到“胸有成竹”。3.2.3 做个有心人，养成一个好的记录习惯，注意观察周边环境在调查过程中要注意观察周边事物，例如一方田的四周种的是什么植物，往往某种植物会对主要农作物的病虫害发生存在一些直接或间接的影响。同时要注意资料的积累和归类、存档，为提高测报工作水平打基础。

美国白蛾周氏啮小蜂Chouioia cunea，属膜翅目Hymenoptera小蜂总科Chalcidoidea姬小蜂科Eulophidae啮小蜂亚科Tetrastichinae周氏啮小蜂属Chouioia，是杨忠歧等在1985年调查美国白蛾天敌昆虫时发现，并于1989年记述发表的一个新属新种。成虫 雌成虫体长1.1～1.5mm。红褐色稍带光泽，但头部、前胸及腹部色深；触角各节褐黄色；上额、单眼褐红色；3对足及下额、下唇复合体均为污黄色。头部正面观宽大于高（24：19），触角窝中部位于复眼下缘的连线上。前胸背板后缘有1排鬃毛，其他部分也生有较密的黑色短毛。中胸背片中叶及侧叶上的刚毛较密，但三角片上无毛。中胸小盾片略呈八边形，有比较明显的网状刻纹，在中部处刻纹明显较密且小，似乎形成1纵线。前翅长为宽的2倍，翅面被毛。3对足的腿节外方、胫节及跗节上生有密的刚毛，这些刚毛比雄性的短。雄成虫体长1.4mm左右，近黑色略带光泽，胸腹节色较淡，腹柄节、腹部第1节基部为淡黄褐色，触角及2分裂的唇基片黄褐色，足除基节色同触角外，其余各节均为污黄色。头部正面观宽显著大于高（22：14），在两触角窝之间的脸部的倒“V”字形缺口两侧各着生相向生长的刚毛5根；2唇基裂片外侧、颜面端部与上颚前端部形成的半圆形凹入部处的缘部生有很密的刷状毛。腹部背观卵圆形，背面及腹面均生有密毛，宽度与长度都比胸部显著为小。卵 初产时白色，半透明，牡蛎形，长0.054～0.065mm，大的一端宽0.021～0.033mm。幼虫 蛆形，无头无足，自由生活于寄主蛹内。蛹 蛹长1.2～1.7mm，体白色，腹部收缩，体色逐渐由白色变为浅黄色，腹部微呈黑色。周氏啮小蜂一年可发生4～7代。以老熟幼虫在美国白蛾蛹中越冬，翌年4月下旬5月初成蜂羽化。周氏啮小蜂发育起点温度为6.14℃，有效积温为（365.12±15.56）日·度。在温度为30℃，相对湿度为85%时，一世代发育时间为15.7天。周氏啮小蜂雌成虫在羽化后的当天即可产卵。既可咬破美国白蛾蛹体外的薄茧将卵产于蛹体上，也可找到美国白蛾的老熟幼虫，爬附于幼虫体上，用产卵器刺蜇寄主，注入毒液，促使其提前化蛹。化蛹时将雌蜂也包在茧内，一旦寄主化蛹完成，雌蜂即开始产卵，产卵时间可长达6～10小时。卵产于寄主体内的组织中，一头雌蜂最多能产卵680粒。产卵后2～3天，孵化为幼虫。幼虫以寄主的血淋巴器官组织为食。经7～8天后，幼虫开始化蛹。周氏啮小蜂的蛹为裸蛹，蛹期约5～6天。雌蜂在羽化后12～24小时即可交配，1头雄蜂可和多头雌蜂交配，雌蜂一生只交配1次，无重复交配现象。待一个寄主蛹内所有的雌蜂均与雄蜂交配后，咬开一不规则的圆孔爬出寄主体外。雌成虫在饥饿条件下可存活8天以上。人工繁育周氏啮小蜂的主要设施有：寄主冷藏库、成品蜂冷藏库、接种室、寄生暗室、培养室、暖蜂室、选蜂室、贮物室，此外，还应有办公室、实验室等。主要设备有：空调、冰箱、冰柜、加湿器、操作台、恒温恒湿箱、消毒设备、解剖镜、显微镜、电脑、打印机等。常用工具有：接种箱、玻璃试管、削茧刀、镊子、剪刀、软毛刷、棉花、胶带、消毒药液等。周氏啮小蜂虽然在自然界中寄主的种类很多，不仅可寄生美国白蛾，还可寄生油松毛虫、赤松毛虫、天幕毛虫、榆毒蛾、舞毒蛾、侧柏毒蛾、杨雪毒蛾、银杏大蚕蛾、野蚕、柞蚕、亚洲玉米螟、菜粉蝶、卫茅巢蛾、国槐尺蛾、卫茅尺蛾、大袋蛾、杨扇舟蛾及桃剑纹夜蛾等多种昆虫的蛹，也可重寄生于寄生蝇的幼虫或蛹，但在大规模人工繁育生产中，以柞蚕蛹为寄主为好。主要是因为柞蚕蛹容易被周氏啮小蜂寄生、个体大、繁殖系数高，且资源丰富，成本低，易于获得，能终年大量供应。柞蚕蛹宜在入冬前大量准备，收购回的柞蚕蛹应进行低温贮藏，温度控制在-2～2℃。贮藏时，将茧装入竹筐或塑料筐中，交错摆放，不宜过密，保持通风，防止受热。寄主的健康状况是繁蜂成败的关键，接蜂时必须剔除死亡、感病及不健康的蛹，只选用健康的柞蚕蛹作为繁育寄主。接蜂前，将柞蚕茧外面的浮丝剥去，首先在带有茧蒂的一侧削开一口，观察蛹的颅顶板。若颅顶板发白、且色泽新鲜则为健康蛹，如果颅顶板发黄或色泽发污，则为死蛹或不健康蛹。然后，再于茧的另一端削开一口，并用刀尖挑出柞蚕化蛹时的蜕皮。削茧时应掌握好下刀的深度，避免削到蛹体，两端的开口为直径约1.5～1.8cm的圆形或椭圆形。削好的茧既可直接用于接蜂，也可放回冷藏室贮藏备用。人工繁育周氏啮小蜂所用的种蜂，主要采用人工野外采集获得。在冬季，到美国白蛾的老发生区，人工野外采集美国白蛾蛹，以获得自然寄生于美国白蛾蛹中的周氏啮小蜂。将采回的美国白蛾蛹放入指形管或矿泉水瓶中，视指形管及矿泉水瓶的大小，装入约1/3的美国白蛾蛹，用棉花或黑布将口封好，放在22～26℃的暗室内或培养箱中培养，约10～15天，便可从白蛾蛹中羽化出周氏啮小蜂。从野外采集的种蜂数量是有限的，大规模人工繁育时，可根据防治需要再进行1～2次扩繁，从扩繁的种蜂中淘汰弱蜂，选择体壮、个体大、活动能力强的蜂作为种蜂进行成品蜂繁育生产。将削好的茧蛹放入繁蜂箱中，摆放最多不超过2层，按1头柞蚕蛹接65～75头雌蜂的比例将周氏啮小蜂接入繁蜂箱中，及时用胶带将箱缝密封。接蜂后的繁蜂箱，放入恒温箱或暗室中，在暗光条件下，周氏啮小蜂在柞蚕蛹上产卵寄生。暗室的温度控制在23～25℃，相对湿度保持在50%～70%。36小时后，打开繁蜂箱，将繁蜂箱转入培养室中培养，培养室的温度控制在23～28℃，相对湿度保持在40%～60%。7～10天后，蛹体内的啮小蜂进入老龄幼虫期，这时便可进行被寄生柞蚕蛹的挑选。被寄生柞蚕蛹可通过颅顶板或蛹体腹部的节间处看到蛹体内寄生的小蜂幼虫。健康的柞蚕蛹，周氏啮小蜂寄生率可达90%以上，单蛹出蜂量在4000～8000头，平均5000头，最多的可达10000头以上。将被寄生的柞蚕蛹挑选出后，装入筐中，放入15℃左右的过渡室中2～3天后便可转放6～10℃的冰箱或冷藏室中贮藏，贮藏时间以不超过30天为宜。出蜂时间应与美国白蛾老熟幼虫期和化蛹初期吻合，放蜂防治时间确定后，应将冷藏的成品蜂提前10～15天取出，放在暖蜂室进行升温。暖蜂温度应逐渐升高，每2～3小时升高5℃，1天后温度控制在24～26℃，相对湿度保持在60%～70%，并应注意通风。出蜂前1～2天即可进行林间释放。在恒温条件下人工繁育周氏啮小蜂多代后，产生蜂种会产生退化，影响繁蜂质量和防治效果。蜂种退化现象表现为同一批蜂出现羽化不整齐、羽化率低、体型变小、飞翔能力弱、寿命短、群体雄蜂数显著增多。为了防止蜂种退化，应在人工繁殖5～6代后进行蜂种复壮。利用自然界的蜂种进行复壮是一个有效措施，由于其已有相当长一段时间的自然锻练，故生命力旺盛。每年繁育周氏啮小蜂的种蜂应来自于野外采集的美国白蛾越冬蛹。冬季在上年放蜂地点或美国白蛾老发生区大量采集美国白蛾蛹，将采集回的美国白蛾蛹放入培养室中培养出蜂，然后，收集培养出的周氏啮小蜂进行种蜂扩繁，根据当年的繁蜂计划数量，将种蜂扩繁2～3代。繁育用于防治的成品蜂时，应采用扩繁的种蜂进行接蜂，不得用繁育的成品蜂作种蜂，尽量减少蜂的代数，控制退化现象的发生。周氏啮小蜂可以爬附在美国白蛾的老熟幼虫体上刺蛰，促其提前化蛹，然后产卵于美国白蛾蛹中，也可在美国白蛾蛹期直接在蛹体上产卵寄生。因此，放蜂防治的最佳时期是美国白蛾化蛹初期。由于美国白蛾的发育常常很不整齐，化蛹期持续时间较长，因此，1个世代应放蜂2次，才能达到较好的防治效果。一次在首批美国白蛾老熟幼虫期或化蛹初期，第二次放蜂应在第一次放蜂7～10天进行。也可将不同发育期的周氏啮小蜂（相差3～7天）混合，一次性放蜂。在自然环境中，周氏啮小蜂一年可繁殖4～7代，因此，为提高放蜂效果，放蜂应尽量在美国白蛾的第1代和第2代进行，第3代美国白蛾蛹期，很快就进入冬季休眠期，放蜂的利用率较低。释放周氏啮小蜂应选择风和日丽的晴天进行，阴雨和大风天气放蜂效果差。放蜂时最好选择下午日落之前和日出之前，这一段时间气象因子较为稳定，无风，空气湿度较为适宜。如果放蜂量较大时，放蜂时间可选择在5：00～9：00时和17：00～20：00进行。炎热的中午时段，不适合放蜂作业。在美国白蛾发生的林中，如果树冠较低或树干上有细枝条，可将小细枝折断，将寄生有周氏啮小蜂的柞蚕茧蛹从削口处挂在树枝上即可。如果树冠较高或树干上没有细枝条，则可用大头针将茧蛹固定在树干上。根据美国白蛾的发生情况，可采用逐株放蜂，也可只在有美国白蛾发生的树上放蜂。一般情况下，1头周氏啮小蜂雌蜂可以寄生1头美国白蛾。如果将自然界中的多种不利因素考虑在内，放蜂量应适当加大。放蜂量可根据美国白蛾虫口密度的调查结果，按蜂虫比（3～5）：1的比例计算。每个网幕美国白蛾按300头幼虫计算，每个柞蚕蛹出蜂量按5000头计算。天敌防治不同于一般药物防治，周氏啮小蜂放蜂后，具有在自然环境中多次繁殖、多次寄生的作用，所以防治效果调查应在放蜂后的各代美国白蛾蛹期进行调查，并以一年内总的寄生率来评价放蜂防治效果。寄生率调查，在放蜂后10～12天便可进行。分别在放蜂区和未放蜂区采集美国白蛾蛹，调查寄生情况，并计算出寄生率和防治效果。放蜂寄生率（%）=被寄生蛹数/调查总蛹数×100放蜂防治效果（%）=（放蜂区寄生率-对照区寄生率）/（1-对照区寄生率）×100%周氏啮小蜂在自然界中可以寄生多种鳞翅目害虫的蛹，这些害虫的蛹期相互衔接，为周氏啮小蜂在自然界中的生存提供了非常有利的条件。我们释放周氏啮小蜂防治美国白蛾时，周氏啮小蜂不仅可以寄生美国白蛾的蛹，而且，在两代美国白蛾蛹期之间，小蜂可以在其他害虫的蛹上寄生，等到下一代美国白蛾蛹期时，又可转到美国白蛾的蛹上寄生，从而达到持续控制美国白蛾的效果。利用周氏啮小蜂进行生物防治，不仅能有效地控制美国白蛾的危害，而且对其他害虫也有很好的控制作用，收到“一虫多治”的效果。

营销的“推”主要是指主动推介销售，是销售人员主动寻找客户，把企业的产品和服务“推”出去。也就是说，“推”的战略主要是借助于强有力的销售队伍，在各种促销措施的支持下，将产品推向各种销售渠道，推上经销商的货架。从这个意义上说，它是指产品销售网络的渗透。营销的“拉”主要是指企业制定一些营销手段、策略让顾客自动发出回馈，形成互动，找上门来，这样的营销战略就是网络营销的“拉式”策略。也就是说“拉”的战略主要是围绕如何将顾客“拉”进销售点，并鼓励消费者从货架上将商品“拉”走。它往往是通过大量的广告宣传来烘托企业和产品品牌形象，从而创造出新的客户需求。网络营销的“推”主要是指网络销售，是网络销售人员主动的寻找客户，把企业的产品和服务“推”出去。网络营销的“拉”主要是指企业制定一些网络营销手段、策略让顾客自动找上门来，这样的网络营销战略就是网络营销的“拉式”策略。网络营销的“拉式”策略，是网络营销者应该主要应用的策略。网络营销的“拉式”策略的手段也是比较多的。比如可以采用搜索引擎优化、博客营销、互动营销、病毒式营销、网络炒作和网络视频营销等。总之，网络营销“拉式”与“推式”策略，网络营销公司在选择的时候根据实际情况灵活地选择并应用就可以达到网络营销的真正目的。渠道、终端之间进行很好地协调和联动，形成分销推力和零售终端的无形拉力，才会使分销及零售覆盖达到一个新的标准。在分销管理中，依靠有限的分销商来完成市场的零售终端覆盖总是显得力量比较单薄，需要厂家评估机制，先入为主施加压力。作为销售代表，可能会有一种企业在求经销商的感觉，经销商经常压着企业，给销售代表很大的压力。实际上反而需要给经销商增加压力，因为没有压力就没有动力。根据每个经销商的具体表现以及不同地区市场变化状况，各销售代表要定期地分析现有的渠道是否能满足终端零售覆盖的需求，是否需要开发新的渠道，或增加渠道中的个别经销商，乃至调整整个销售渠道结构等。定期评估该地区的覆盖率，对没有按照合同要求完成零售覆盖的，要求给予正式书面指正，并协助商议解决办法，对于连续多次没有达到零售覆盖标准的，可进行调整。将经销商当作合作伙伴对待，多帮助经销商收集与其自身有关的信息，经常交流，从而拉近与经销商之间的距离，消除猜忌和隔阂。销售渠道差异化：了解竞争对手与本企业所使用的销售渠道的差异，并进行比较；对于主要竞争对手，企业要进行销售渠道差异分析，以了解本企业在业界所处的地位。经营管理专业化：不定期协助经销商开展促销活动；对经销商进行销售管理知识培训，如进行商品陈列、销售技巧、店面管理、库存管理、订货系统等方面的培训。竞争对策有效化：竞争对手开辟了哪些新的渠道，实施了哪些新的销售策略，企业必须根据竞争对手的情况提出应对之策。因为在经销商面前，利益和优惠政策是最有说服力，也是最有效的。渠道信息规范化：销售渠道的一个重要功能就是信息传递功能，企业要通过销售渠道不断地收集和反馈市场信息。利益冲突最小化：销售渠道之间存在利益冲突，这是在所难免的，企业不能视而不见，必须通过有效的管理与控制手段，解决销售渠道间的冲突。可能选定的大多数分销商不能完成对所在区域的整个零售终端的零售覆盖，要达到原先的终端规模和数量就必须牢牢抓住县、镇一级二批商，只有通过他们自身固有的渠道才能完成对乡镇一级零售终端的覆盖问题。如果对一些已经停止合作的经销商采取了不理不睬的态度，加上又不直接供货后，经销商存在的抵触情绪，将会使销售代表望而却步。这样与这些经销商的关系就处理的不是很融洽。所以销售代表对二、三级批发商也要与直供的经销商同样的态度和热情对待，帮助他们完善网络，整合渠道，通过交流和沟通，消除误会，共同将本区域市场销售稳定和持续发展。二、三级批发商的选择应注意网络覆盖情况、渠道管理理念及发展状况、及资金信誉状况。建立二批商进行网络延伸将我们初步选定的二、三级批发商名单交给分销商，与分销商沟通，说服分销商与其接触并建立良好的合作关系，同时也要考虑到分销商自身的网络下线经销商，如果符合条件，也考虑作为我们的二批商。在选择好二、三级批发商后，就立刻着手进行谈判，可以由经销商负责谈判工作，主要针对价格、回款状况。销售代表走访终端，实现销量及销售四项基本原则（分销、货架陈列、助销、价格管理）；树立二批商经营我们产品的信心；帮助二批商制定出一个月的销售计划；把二批商（经销商）当做以前我们公司来作，帮助经销商建立下属终端的资金和信誉调查表，同时设计出经销商送货路线图；对经销商经营我们产品的利润和附带的其它产品所带来的额外利润的经营观念进行引导；让二批商印出名片，名片内容包括经营产品名单和价格单；和二批商一起商量订单设计和送货路线及送货时间、频率；销售代表在定期走访终端时收集订单，订单不光是我们的产品信息还可以收集其它品牌的信息，最后进行订单的归纳整理；对发展前景比较好的二批商，并且对我们公司政策比较支持的要加以引导。对于“推”与“拉”战略的应用，不同企业之间有不同的取向。实际上，“推”和“拉”常常是构成企业营销战略中的相互作用、不可或缺的两个要素。大量的广告（拉）将会促进产品的销售，而这反过来又会使到销售人员更加卖力地推销产品（推）。必须看到，要想取得长期的市场成功，仅靠推或拉是不够的。任何一个产品在市场上的成功往往取决于一个平衡的市场营销组合。同样地，如果产品已经渗透到各种不同的营销渠道，消费者也被广告吸引到销售点，但缺乏营销组合中的其它要素的支持，如价格太高或销售服务太差等，也可能使消费者对购买该产品望而却步。因此，如果要取得长期的市场成功，企业为客户提供的产品（或服务）必须与广告促销中的许诺相吻合。否则，消费者只会购买一次他认为是差的产品。“推”与“拉”是营销战略的两个基本取向，两者并无优劣之分。在实际运作中如果能够巧妙地把握两者之间的平衡，同时又注意到与其它营销要素的搭配使用，成功的希望就更大一些。营销的太极——“推”与“拉”，就是营销过程中的一张一弛，张弛有力有度，方可达到营销艺术的最佳境界。

民营企业创业初期，找到挣钱的项目后，企业飞速发展的表象掩盖了内部经营管理不足的问题，但高利润期是不可能永久持续的，进入平缓期要求企业必须向规模化发展。此时，企业引入专业化管理人才，希望借助其丰富的管理知识和管理经验，带领企业走向辉煌成为必然趋势。民营企业职业经理人就应运而生。于是，通过朋友的介绍、从同行业中挖取墙角或者猎头公司为中介，成为民营企业老板谋求职业经理人的几大手段。然而，这些并未真正解决企业发展中心诸多“瓶颈”，因为职业经理人自产生起就存在方方面面的问题，因此，如何正确引进和运用职业经理人成为目前民营企业的必修课。企业发展到一定的规模之后，企业家的管理半径不能辐射到整个企业，管理就出现了漏洞和空白区，前期发展过程中潜伏的问题和危机就会逐渐浮出水面。在文化背景上，民营企业家大多文化水平相对较低，尤其是一些家族式的民营企业。而职业经理人文化水平普遍较高，很多还接受过西方教育，熟悉西方的管理理念。由于文化背景的差异，在企业内往往带来一些管理上、机制上的矛盾。目前，中国民营企业老板和职业经理人都普遍缺乏良好的职业道德。企业老板在保持自己对整个企业的掌控权时，要求职业经理人在短期内带来丰厚的利润。而职业经理人又习惯了公众对他们的仰视，他们的不足愈发加重了他们的生存压力以及对资本意志的屈服。他们对未来普遍有一种难以把握的恐惧，这就不可避免地造成职业经理人对老板的戒备，而这种戒备与恐惧心态的极端表现促使其职业行为的严重扭曲。没有良好的管理环境：由于中国市场还不规范，特别是法制环境不健全，道德环境不成熟，现阶段中国还不具备形成职业经理人阶层的条件。特别是管理不成熟，缺乏运作平台，造成职业经理人需要付出更多的艰辛和更大的代价，既要谙熟企业规则和技巧，又要积极适应中国企业的现状。一些民营企业的企业主不愿以股权或期权作为有效的激励机制，甚至降低已约定的工资报酬，奖励机制不能真正到位，造成职业经理人的波动与流失。而职业经理人方面，经理人一碰到不如意、遭遇企业低潮，或者竞争对手高价招手，就拍屁股走人，损害了原企业形象和客户关系，造成民营企业的资产流失。企业主和职业经理人之间这种信托关系会因多种因素的影响而使私营企业主与职业经理人之间产生差异，导致二者互不信任。民营企业想要持久发展，走向良性发展的道路，不解决经营权和所有权的问题，实现职业经理人制度，就无法实现真正的专业管理，企业最终还是难以突破管理瓶颈。所以，企业需要解决以下现实问题：一是是否需要引进职业经理人。要根据公司规模、机制的成熟度、对职业经理人的认识程度，来思考是否聘用以及聘用什么样的职业经理人。如果企业的内部管理体系本来就不成熟，存在着先天的或者是由于客观原因造成的严重得难以克服的问题，在这样的情况下，即使聘用职业经理人也无法力挽狂澜。二是以正确的态度对待职业经理人。职业经理人可以为企业带来新的思维方式、新的管理理念和先进的信息资源。他们多数时候可以将企业的具体经营战略付诸实施并取得实效，但有时也不可避免一些决策失误和重大偏差。而应该抱着宽容客观的态度，辅之以必要的约束和防范机制，让职业经理人在心灵深处建立以事业为目标、以诚信为纽带、以发展为动力、以共创辉煌为企盼的与企业同生共荣的信念，避免因缺乏沟通造成反目为仇的结果，给企业酿造无穷的危机。三是民营企业应注重自身的人才培养。目前，国内的职业经理人阶层还有待形成，企业应该充分发挥自身的作用，注重自身的人才培养的投入，重视人力资本的比较优势，从而在其职权范围内，按照企业的战略发展目标，肩负起领导和设计本组织许多变革和改革的重要任务，有效避免因决策不当而造成财力和人力资本的浪费。四是建立有效的激励机制。对职业经理人的激励可以分为短期激励、长期激励和特殊激励。短期激励是指根据职业经理人当年业绩目标的完成情况和能力发挥情况的综合考核，每年按年度兑现的激励；长期激励是指公司为实现既定的长期战略目标对优秀职业经理人未来若干年安排的激励措施，以吸引优秀的职业经理人长期工作，避免流失。特殊激励就是实行合伙制，公司股东会对于特别优秀的、做出巨大贡献的职业经理人，邀请他们成为新股东，作为合伙人，共享企业发展的美好明天。这个问题看似不难，但很多企业的老板一开始并不知道自己的真正需求是什么？譬如公司产品的销量和利润都下降了，市场管理出现问题了，这看上去好像只要一个营销总监就可以了。但真实的情况往往不是这样的，要仔细深挖下去，找到出现问题的真正原因，然后才能确定是不是需要引进这么一个营销管理高手来解决企业的问题，也可能有些表面上的营销问题，其实是内部管理体系的混乱引起的。营销高手来了可能也解决不了实际问题。人品绝对比专业能力更重要，这个问题无可非议。要了解一个人的人品可以通过他（她）原先的工作单位及同事进行调查获得；同时要仔细查明对方看中的是高薪水？还是企业的前途？或者老板的个人魅力？是不是有其他的想法？有的职业经理人口头表达能力高于实际工作技能，面试时有意隐藏自己的真实意图，这就使选择者会作出错误的选择。能力有多方面的，在弄清楚前两个问题之后，其实很容易查明对方的工作能力，譬如人力资源总监人选，除了专业学历以外，一定要调查他以前工作的单位领导和员工对他的评价，他本人在这方面的观点以及某些成功的案例。假如是营销总监人选，除了要看他的理论素养和实战能力以外，还要看他的综合协调能力、跟上下级的沟通能力以及带队伍的能力。把合适的人放在合适的岗位，这是许多老板都懂的道理。但事实上我们做起来往往不能尽如本意。有的老板，因为过度信任而把公司的全部权力交给经理人一个人掌握，导致其能力的局限而出现管理问题。所以，经理人上任以后，要明确他的职权利，规定他的管理范围，同时建立与老板的定期沟通机制和汇报总结制度，使经理人自己的工作有明确的方向，也不至于完全失控。企业应从内部着手强化委托代理的约束和激励机制，实现委托代理机制和民营企业的有效融合，努力降低委托代理机制的运行成本，使其成为一项内生性制度安排。具体而言，就是要让委托代理机制的设计既使职业经理人的个人利益与民营企业利益的战略选择趋同上发挥其应有的激励约束作用，又从制度和具体的管理措施上有效防范职业经理人阶层的道德风险问题。建立章程约束、合同约束、组织机构约束、法律约束、道德约束等。综上所述，民营企业想要走向良性发展的道路，应实现职业经理人制度，企业对经理人信任，经理人对企业忠诚。作为一段历史的进程，将来，我们一定会欣喜地看到职业经理人与中国民营企业密切合作的双赢局面。

玉米是世界第三大粮食作物，在农业生产中占有重要的地位；也是我国北方和西南山区及其他干旱地区栽种的主要粮食作物之一。玉米生长过程中易受多种病虫为害，其中玉米丝黑穗病、瘤黑粉病和小斑病是广泛流行于各玉米产区的3种主要病害，近年来有不断传播蔓延的趋势。种子带菌是病害传播和流行的重要途径之一，了解北京地区玉米主栽品种种子带菌情况，以及种子带菌量和病害发生的关系，对防控这3种病害有着重要的实际意义。本研究以玉米种子为研究对象，筛选出适合检测3种病原菌的检测方法，检测了北京地区玉米主栽品种的带菌情况，并通过温室盆栽试验，初步研究了种子表面携带3种病原菌的负荷量和病害发生情况的关系。本研究比较研究了洗涤法、滤纸法、冷冻滤纸法和PDA培养法5种种子检测方法。结果表明，洗涤法适用于检测种子表面携带的玉米丝黑穗病菌和瘤黑粉病菌冬孢子；冷冻滤纸法和PDA培养法可以用以检测玉米小斑病菌。采用上述方法检测了北京地区7个玉米主栽品种的带菌情况，其中在京科25、农大3138、中糯301和高油4515这4个品种种子表面检测到了黑粉菌的孢子，不同品种的带菌率有所差异，高油4515携带瘤黑粉菌的菌量达到了421.1个/粒种子，丝黑穗菌的菌量为168.4个/粒种子；中糯301和高油4515还检测出带有玉米小斑病菌，带菌率分别为1.4%和1.0%，寄藏部位为胚乳；种子携带的其他真菌主要有镰刀菌属、链格孢属、枝孢霉属、曲霉属、青霉属和根霉属。在检测中我们发现，镰刀菌是种子携带的主要真菌，其中昌甜100（正交），高油4515品种中镰刀菌的携带量达到了105个/粒种子。已有相关研究报道表明，镰刀菌的携带量与种子的活力有关系，因此对于玉米种子携带镰刀菌的风险需要引起重视。选择感、抗和高抗3种抗性水平的玉米品种，采用浸种法在种子表面分别接种10个/粒、102个/粒、103个/粒、104个/粒和105个/粒5个浓度的3种病原菌孢子，温室条件下进行盆栽试验，结果表明，不同抗性的玉米品种接种系列浓度的病原菌孢子后发病情况不同：接种瘤黑粉病菌的处理中，感病品种中糯301在接种量为103个/粒时，抗病品种农大108在接种量为105个/粒时，而高抗品种郑单958在接种量为106个/粒时才分别开始发病；接种丝黑穗病菌孢子的处理与上述结果相近，感病品种中糯301在接种量为103个/粒时、抗病品种农大108接种量为106个/粒时开始发病，而高抗品种郑单958在所有接种量均未发病。接种小斑病菌的各处理没有病害发生，分析原因应该与病害的发生规律有关，小斑病是一个典型的气传病害，种子带菌不容易直接导致病害的发生，但是种子带菌会有增加田间初侵染的来源，同样有造成病害流行的风险。

晚疫病是露地、保护地及南方山区蔬菜基地番茄的重要病害，由致病疫霉[Phytophthora infestans（Mont）De Bary]侵染所致，是一种毁灭性的世界性蔬菜病害[1]。南方4～5月，北方6～7月，南方山区7月前后的阴天多雨天气及保护地秋末和早春棚室温度达16℃时均易发生。病害流行性强，年度间病情差异大，一些地方称为“疫病”、“怪病”、“过火风”[2]。晚疫病在番茄的整个生育期均可发生，主要为害茎、叶和果实，发生普遍，蔓延速度快，严重田块可减产70%以上，甚至绝收，严重制约了番茄生产的进一步发展[3]。目前生产中存在的主要问题是选药不当、错过防治适期，致使该病蔓延成灾。鉴此，笔者征集了部分国内外杀菌剂品种，试图通过室内毒力测定和田间药效试验，筛选出对番茄晚疫病菌抑菌效果显著的杀菌剂，为田间防治番茄晚疫病提供参考。1.1.1 培养基和菌株 黑麦蔗糖琼脂培养基（Rye sucrose agar）用于番茄晚疫病菌的分离、培养及测定对杀菌剂的敏感性。配备抗菌素母液，称取2.0g氨比西林（氨苄青霉素ampicillin），1.0g制霉菌素（Nystatin）和0.2g利福霉素（利福平Rifamycin）加入到100ml二甲基亚砜中[DMSO，（CH3）2SO]；待基础培养基冷却至大约50℃，立即在每100ml培养基中加入1ml抗菌素母液。混匀，倒平皿。本研究是采用番茄晚疫病菌的菌株为F1。真菌菌株在PDA培养皿培养，在PDA试管斜面上保存。1.1.2 杀菌剂 50%烯酰吗啉（dimethomorph）可湿性粉剂（德国巴斯夫股份有限公司生产）、25%甲霜灵（metalaxyl）可湿性粉剂（江苏宝灵化工股份有限公司生产）、64%杀毒矾（oxadixyl mancozeb）可湿性粉剂（瑞士先正达作物保护有限公司生产）和75%百菌清（chlorothalonil）可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司生产），72%霜脲·锰锌（mancozeb+cymoxanil）可湿性粉剂（北京华戎生物激素厂生产）。1.1.3 供试作物和品种 番茄，品种为“合作903”。1.2.1 室内毒力测定 采用生长速率法[6]，将供试杀菌剂稀释成不同浓度梯度，浓度梯度由试验测定。最后计算抑制生长率，求出毒力回归方程，计算EC50和EC95。根据预备试验结果，确定各个供试杀菌剂的系列剂量分别为：50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂和64%杀毒矾可湿性粉剂的浓度梯度均为10μg/ml，5μg/ml，2.5μg/ml，1.25μg/ml，0.63 μg/ml；75%百菌清可湿性粉剂100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml，72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的浓度梯度为25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、1.5625μg/ml。各个杀菌剂的最高浓度配制方法分别为：50%烯酰吗啉可湿性粉剂称取1.0g溶于50ml水中，然后稀释100倍；25%甲霜灵可湿性粉剂称取1.0g溶于25ml水中，然后稀释100倍；64%杀毒矾可湿性粉剂称取1.0g溶于64ml水中，然后稀释100倍；75%百菌清可湿性粉剂称取1.0g溶于75ml水中，然后稀释10倍；72%霜脲·锰锌可湿性粉剂称取1.0g溶于72ml水中，然后稀释40倍。再倍半稀释至所需浓度。用取液器量取上述配好的溶液（每个剂量）3ml，加入事先溶化好的27ml黑麦培养基，充分混匀后倒在3个直径为9cm的灭过菌的培养皿中，凝固后在培养皿正中间接入直径6mm的番茄晚疫病菌饼。以上操作均在无菌操作台进行。置（18±0.5）℃、光照14h和黑暗10h的培养箱培养。当空白对照菌落扩展到整个培养皿时，测量各皿的菌落直径，取平均值后计算抑制率（%）。生长抑制率（%）=[（A-B）-（C-B）]/（A-B）×100%，其中A为对照菌落直径，B为菌饼直径，C为处理菌落直径。将抑制率转化为几率值，将剂量取对数，算出剂量—反应曲线方程，进一步算出EC50值和EC95值。1.2.2 田间药效试验 经室内毒力测定结果表明，25%甲霜灵WP，64%杀毒矾WP，50%烯酰吗啉WP室内测定的毒力均较高，为在田间进一步验证其防效，特进行田间药效试验。试验地位于武汉市洪山区青菱乡长江村，近几年每年都有番茄晚疫病发生，所有试验小区的栽培条件均匀一致。于2006年5月13日、19日晚疫病发生初期喷雾施药，试验期间共施药两次，此时为番茄结果期。通过预备试验，设置杀菌剂浓度25%甲霜灵WP稀释800倍（每亩制剂量93.75g），64%杀毒矾WP稀释800倍（每亩制剂量93.75g），50%烯酰吗啉WP稀释3000倍（每亩制剂量25g），以75%百菌清WP稀释600倍（每亩制剂量125g）作为对照药剂，另设清水对照。小区面积15m2，4次重复，随机区组排列，用水量75kg/667m2。试验期间气温21.93～33.86℃。第2次施药后7天调查各处理发病情况，每小区按对角线5点取样，每点2株，每株分上、中、下共调查10片叶，以每株每一叶片上的病斑面积占整个叶面积的百分率来分级，计算病指与防效。分级标准：0级，无病斑；1级，病斑面积在5%以下；3级，病斑面积占整个叶面积的6%～10%；5级，病斑面积占整个叶面积11%～20%；7级，病斑面积占整个叶面积21%～50%；9级，病斑面积占整个叶面积50%以上[8]。试验结果见表1。5种杀菌剂50%烯酰吗啉可湿性粉剂、25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂的EC50值分别为2.24μg/ml、1.83μg/ml、2.05μg/ml、21.33μg/ml和5.33μg/ml，EC95值分别为9.76μg/ml、7.76μg/ml、8.71μg/ml、85.60μg/ml和27.77μg/ml。按毒力高低排列分别为25%甲霜灵可湿性粉剂＞64%杀毒矾可湿性粉剂＞50%烯酰吗啉可湿性粉剂＞72%霜脲·锰锌可湿性粉剂＞75%百菌清可湿性粉剂。25%甲霜灵可湿性粉剂、64%杀毒矾可湿性粉剂、50%烯酰吗啉可湿性粉剂室内测定的毒力显著高于75%百菌清可湿性粉剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂，可以为田间防治番茄晚疫病提供一定依据。杀菌剂剂量-反应曲线概率P值EC50（置信限）（μg/ml）EC95（置信限）（μg/ml）50%烯酰吗啉WPY=2.57x-0.900.242.24（1.99，2.53）9.76（7.87，12.91）25%甲霜灵WPY=2.62x-0.690.471.83（1.62，2.06）7.76（6.31，10.15）64%杀毒矾WPY=2.63x-0.820.312.05（1.82，2.32）8.71（7.06，11.41）75%百菌清WPY=2.72x-3.620.2221.33（19.05，23.94）85.60（69.82，111.11）72%霜脲·锰锌WPY=2.29x-1.670.205.33（4.67，6.07）27.77（21.77，38.20）表1 5种杀菌剂对番茄晚疫病室内毒力测定结果试验结果见表2，两次施药后的病指和防效，64%杀毒矾WP 800倍液为8.9和75.1%，25%甲霜灵WP 800倍液为9.9和72.5%，50%烯酰吗啉WP 3000倍液为10.6和70.4%，3种杀菌剂对番茄晚疫病有较好的控制作用，均显著高于对照农药75%百菌清WP 600倍液的防效，其差异均达极显著水平，是防治番茄晚疫病的有效杀菌剂。处理重复与防效ⅠⅡⅢⅣ平均防效（%）平均病指差异显著性5%1%64%杀毒矾WP800倍75.474.574.775.675.18.9aA25%甲霜灵WP800倍75.171.969.673.372.59.9ab50%烯酰吗啉WP3000倍70.870.669.670.870.410.6bA75百菌清WP600倍49.254.655.960.755.116.0cB表2 几种杀菌剂对番茄晚疫病的防治效果室内毒力测定结果仅说明该杀菌剂对番茄晚疫病菌在离体条件下的直接活性，田间的防治效果受到的影响因素很多，因此，室内的毒力测定结果需要在田间做进一步验证。田间试验结果表明，64%杀毒矾WP 800倍液，25%甲霜灵WP 800倍液，50%烯酰吗啉WP 3000倍液3种杀菌剂田间防治番茄晚疫病均有较好的防治效果。这几种杀菌剂对番茄无不良反应，不产生药害，建议在田间推广使用，推荐剂量64%杀毒矾WP 62.5～75ml/667m2，25%甲霜灵WP 62.5～75ml/667m2，50%烯酰吗啉WP 16.7～20ml/667m2。在实际应用中，应在病害流行之前，即发病初期开始用药，当气候条件有利于病害发生流行时，每隔7～10天后进行下一次施药，连续喷药2～3次，使用浓度以推荐浓度为宜，并注意不同杀菌剂的交替使用，以达到更好的防治效果。

灰霉病（gray mold）是番茄生产中一种重要的气传病害，其病原为灰葡萄孢属（Botrytis cinerea）真菌，寄主范围广，再侵染频繁，为害严重。化学防治仍是目前生产中防控该病害的主要手段，其中以甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂为代表的呼吸作用抑制剂近年来在灰霉病防治实践中显现出了良好的防效，而线粒体作为真核细胞呼吸作用的主要场所，在线粒体上合成的ATP提供了细胞生命活动所需的大部分能量。为此，进行高纯度线粒体的分离对于开展呼吸抑制剂类杀菌剂的作用机制研究[1～5]具有十分重要的意义。至今，从病原真菌中分离获得高纯度线粒体的方法尚不成熟，国内外一般采用从动物或高等植物中分离得到的线粒体作为替代品来进行研究。本研究拟借鉴相关研究[6～7]方法，采用机械破壁及差速离心的方法从番茄灰霉病菌中分离获得线粒体，并对其进行呼吸测定，以确证获得的线粒体是否具备完整的结构和功能。现将研究结果报道如下。1.1.1 番茄灰霉病菌（B.cinerea）菌株NJ-9，由中国农业大学植物病理学系种子病理学和杀菌剂药理学实验室提供。1.1.2 供试药剂 α-酮戊二酸，NADHNa2（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐）为Roche公司产品，ADPNa2（5′-腺苷二磷酸二钠盐）为Sigma公司产品。线粒体分离液的配制[9]：0.5mol/L 蔗糖，5mmol/L半胱氨酸，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.3%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.1mol/L（pH值7.4）磷酸盐缓冲液；线粒体保持液（洗液）的配制[9]：0.5mol/L 蔗糖，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.3%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.1mol/L（pH 7.4）的磷酸盐缓冲液；线粒体呼吸测定的反应液[9]：0.5mol/L 蔗糖，10mmol/L KCl，5mmol/L MgCl2，1mmol/L 乙二胺四乙酸二钠盐，0.1%（w/v）牛血清白蛋白Ⅴ组分，0.01mol/L（pH 7.2）的磷酸盐缓冲液。1.1.3 菌体的培养 将浓度为8×106个/ml的孢子悬浮液接种到1L的复合盐液体培养基（SSY）[9]（10g可溶性淀粉，2g KH2PO4，1.5g K2HPO4，0.5g MgSO·7H2O4，1g（NH4）2SO4，2g 酵母粉，1L去离子水，pH 6.2）中，置于23℃，150rpm条件下摇培24h。1.1.4 供试仪器 Oxytherm氧电极（Hansatech Instruments Ltd.），DHZ-D冷冻恒温振荡器（江苏太仓实验设备厂），高速低温离心机（Beckman Coulter AvantiR J-E）。1.2.1 灰霉病菌孢子的获得 将菌株NJ-9接种至MEA（麦芽糖20g，酵母粉5g，琼脂粉14g，1L去离子水）培养基上，25℃下黑暗培养5～7 天后，放置于日光灯和长波长紫外灯（黑光灯）下，12h轮流交替照射7～14天，产生大量的分生孢子，备用[8]。1.2.2 线粒体的分离 通过真空抽滤的方法收集幼嫩菌丝，依次用4℃的去离子水冲洗两次，再用线粒体分离液冲洗。随后各操作中所用的器材必须在4℃下经过预冷处理，操作过程均需在0～4℃下进行。将用线粒体分离液预洗得到的菌丝悬浮在3倍体积的分离液中，分别采用以下两种方式进行破碎细胞壁：（1）杵状玻璃匀浆器法：每30～40g菌丝用100ml的分离液悬浮，用杵摩擦20次左右，混合到匀浆物均一、平滑即可。每次时间不要超过2～3min，整个样品处理的时间不要超过30min。立即将得到的匀浆物倒入50ml的离心管中，于2000g离心25min，取上清液于7000g转速下离心20min后取上清液于12000g再次离心15min，最后小心弃去上清，沉淀即为分离到的线粒体，外观为浅黄色胶状物。将线粒体悬浮在200μl的线粒体保持液中，置于冰上备用，放置时间不能超过3～4h，避免线粒体的降解。（2）高速组织匀浆器法：采用高速组织匀浆机（恒定功率220W），破碎菌丝，每次破碎时间15s，破碎3次，中间的隔1min（防止匀将机刀口发热影响线粒体的分离，将匀浆物用双层预冷的湿纱布快速过滤，过滤的时间不要超过30s，立即将匀浆物倒入50ml的离心管中，于1200g下离心20min；取上清于6000g离心20min后再取上清于12000g离心15min，小心弃去上清，沉淀即为分离到的线粒体。1.2.3 氧消耗量的测定 采用极谱法在25℃条件下使用Oxytherm氧电极进行测定，标准反应液2ml，加入线粒体50μl（蛋白质的含量大约为0.3mg），反应液中氧饱和的最大浓度是226μmol/L，所有的底物都溶解到反应液中，依据Estabrook[10]的方法计算RCR和P/O值。提取过程保持0～4℃低温条件下，杵状玻璃匀浆、高速组织匀浆两种破壁方法均可从番茄灰霉病菌幼嫩的菌丝中分离得到紧密偶联的线粒体。全玻璃杵状匀浆器手工破壁操作耗费人力，需要的菌丝量较少，从10g到几十克湿重菌丝都能分离到完整的线粒体。通常60～80g湿重菌丝即可以分离得到满足试验需要的线粒体。高速匀浆器省力快速，但是在匀浆器高速转动时易产热可导致分离物的降解，操作过程中持续时间不能过长，必要时应使用循环冷却水降温或置于低温环境下操作；同时该法需要的菌丝量也较多，以50g 以上的湿重菌丝为宜，菌丝量少时容易在破碎过程中使线粒体结构受到破坏，从而影响提取效果。番茄灰霉病菌线粒体的底物利用，呼吸控制率和磷氧值测定结果见表1。当以外源的NADH和α-酮戊二酸作底物被氧化时，状态3（在线粒体中加入底物及ADP后测定的线粒体呼吸速率）的呼吸数率明显增加，反映了在ADP刺激下线粒体功能增强的程度；两种底物的呼吸控制率（RCR）值都在3.1～3.3之间，高的呼吸控制率值表明线粒体中电子传递与氧化磷酸化紧密偶联；加入NADH做外源的呼吸底物时，磷氧比值（P/O）是1.3～1.7，表明有2个氧化磷酸化位点，即ATP生成有两个部位；α-酮戊二酸的磷氧比值（P/O）是2.2～2.5，表明有3个氧化磷酸化位点，即ATP生成有3个部位。图1表示两种破壁方法获得线粒体在外援NADH电子供体下呼吸特征图。以上研究结果表明分离的高纯度线粒体具有在活细胞中对等的生物功能，可作为线粒体生物学研究的适宜材料。MethodsofdisruptionSubstratesState3respirationrates(nmolO2/min)(mgprotein)Respiratorycontrolrations(RCR)ADP/OrationsAll-glassNADH90.16±203.8±0.11.7±0.2Potter-Elvehjemhomogenizerα-ketoglutarate175.43±453.3±0.62.2±0.1AwaringNADH118.96±303.5±0.71.3±0.1blendorα-ketoglutarate198.17±653.1±0.52.5±0.2Table 1 Respiration properties of mitochondrial isolated from mycelia of Botrytis cinereaaFigure 1 oxidation of NADH and α-ketoglutarate by mitochondrial isolated from mycelial of B.cinerea, Concentration of substrates were 10mmol/L α-ketoglutarate,2mmol/L NADHNa2, the ADP concentration was 200μmol/L and reaction were carried with 0.2~0.4mg mitochondrial protein本研究获得以下结论：（1）采用杵状玻璃匀浆器和高速组织匀浆机两种机械力可以有效破碎番茄灰霉病菌的细胞壁，借助梯度离心可以实现番茄灰霉病菌线粒体的有效分离；（2）使用本方法获得的番茄灰霉病菌线粒体结构完整、功能齐备，具有在活细胞中对等的生物功能，可作为线粒体生物学研究的适宜材料。（3）B.cinerea在培养液中生长很缓慢，选取生长代谢最旺盛的菌丝，有利于线粒体的分离。目前常用的破碎细胞方法包括传统的机械法（如匀浆、研磨、压榨、研磨、超声等）和非机械法（包括酶溶、冻融、化学等），都有其适用范围和优缺点，选择的原则是该方法不影响目标蛋白和产物的结构和功能。本文除采用上述两种机械破壁方法外，也曾尝试过超声波破壁方法以及采用蜗牛酶和纤维素酶进行酶解处理以获得原生质体的方法，但均没有获得理想的结果，推测可能与真菌细胞壁较厚，或使用的降解酶的降解特点有关。有关线粒体生物学和呼吸动力学的研究报道[9]表明，RCR 比ADP/O比值更能反映线粒体功能的完整性和氧化磷酸化的效率，ADP/O值是指线粒体每吸收一克原子氧的同时，生成ATP 的克分子数的比值，它反映线粒体的能量转化效率。RCR是表征线粒体结构、功能完整性及氧化磷酸化效率的指标。本文研究表明外源的NADH仅有2个氧化磷酸化位点，即只能生成2个ATP，然而，有文献报道[11]灰霉病菌的线粒体在氧化NADH的电子传递链中有3个磷酸化位点。因此，需要进一步研究不同的呼吸抑制剂和氧化磷酸化抑制剂在灰霉菌线粒体的电子传递链的各种抑制效果。

白粉病是我国小麦、蔬菜及花卉等作物上的一种常见重要病害。气候适宜时，该病在湖北麦区以及大棚瓜类蔬菜上分别造成小麦白粉病和瓜类白粉病流行，损失严重[1～2]。三唑酮、烯唑醇、福美双、氟化硅等是我国防治白粉病的常用药剂，而一些研究表明，在某地区已发现白粉病对这些药剂防效有所降低，已产生一定程度的抗药性[3～5]。随着人们对可持续发展和环境污染的高度重视，开发对环境友好且又能延缓抗药性产生的杀菌剂成为农药研究的一个新方向。为寻找和开发替代三唑酮的高效、无公害的杀菌剂，由本课题组和内蒙古清源保科技有限公司联合研制了用于防治植物白粉病的植物源提取物Vegard（0.5%大黄素水剂），该制剂对黄瓜白粉病和小麦白粉病室内活性明显，为明确该药剂的田间效果，对该制剂进行了防治小麦和甜瓜白粉病的试验，现将结果报道如下。0.5%Vegard水剂，内蒙古清源保科技有限公司生产；15%三唑酮可湿性粉剂，江苏利民化工有限公司生产；共设6个处理：①Vegard 500倍液；②Vegard 200倍液；③Vegard 100倍液；④Vegard 50倍液；⑤15%三唑酮可湿性粉剂1000倍液；⑥ 清水对照。小麦白粉病防治试验设在湖北省农业科学院南湖试验农场进行。小麦品种为“郑98”，高感白粉病，条播，试验每个处理3次重复，小区面积30m2，小区随机区组排列，亩施5kg尿素作拔节肥。甜瓜白粉病试验在湖北省农业科学院新科源温室内进行，供试甜瓜为感白粉病品种“金红”，营养钵育苗后移植至温室，行距1m，株距0.5m，小区面积15m2，每个处理3次重复，随机排列。分别在小麦始见零星白粉病斑期和甜瓜白粉病发病初期分别进行施药，施药量为小麦每亩对水50kg，甜瓜每亩对水60kg喷雾，喷药时尽量做到叶面均匀喷透。喷雾器械为426-8型压缩式喷雾器。对于小麦白粉病，药前调查病情基数，药后14天作最终病情结果调查，各小区对角线五点法取样，每点定15株，采用0～9级分级标准，每株调查上3叶。对于甜瓜白粉病，每小区对角线五点法取样，每点取2株，采用0～9级分级标准，调查每株上所有叶片的病情（每小区约调查80～100片叶），调查时期分别为药前，药后7天、10天和14天。病情分级标准、病指、药效的计算方法参照《农药试验田间药效准则》进行，并对防效进行平均值的多重比较（SSR法）。从表1可以看出，Vegard对小麦白粉病具有明显的保护效果，采用该药剂50～500倍液，于始见病期施药1次即可达到76.2%～94.2%的效果，其中该制剂200倍液、100倍液和50倍液药液的防效间差异不显著，该制剂100倍液和50倍液处理的防效与对照药剂15%三唑酮可湿性粉剂1000倍液的防效相当。结果表明，Vegard 50倍液和100倍液两个浓度处理的防效在用药后7天、10天、14天均在90%以上；200倍液处理在用药后7天和10天调查的防效分别为89.9%和89.1%，14天后的防效也达80%以上；500倍浓度在施药后7天和10天的防效分别为84.0%和83.6%，14天的防效下降为77.8%（表2）。三唑酮对甜瓜白粉病防效不理想，该药剂在药后7天、10天、14天的防效为79%、66%和30%，明显低于Vegard的防效。Vegard对瓜类白粉病具有良好的防治效果且残效期较长。500倍浓度的残效期为10天，比常规药剂三唑酮的残效长3～4天。100倍液和50倍液处理药后14天绝对病情指数未有发展，表明在这两个浓度下其残效长于14天。处理Treatment稀释倍数Dilution药前病指Diseaseindexbeforeapplication药后14天病指Diseaseindexafterapplication14days防效（%）Effect显著性Significant0.5%Vegard水剂0.5%vegard500倍500×0.221.6476.2c200倍200×0.241.3383.6bc100倍100×0.220.5592.2a50倍500×0.160.3194.2a15%三唑酮可湿粉15%triadimefon1000倍1000×0.160.2495.8a空白对照Watercontrol—0.248.32——表1 Vegard防治小麦白粉病试验结果Table 1 Effect of Vegard on wheat powdery mildew处理Treatment稀释倍数Dilution药前病指Diseaseindexbeforeapplication药后7天病指Diseaseindexafterapplication7days防效（%）Effect药后10天病指Diseaseindexafterapplication10days防效（%）Effect药后14天病指Diseaseindexafterapplication14days防效（%）Effect0.5%Vegard水剂0.5%vegard500倍500×7.7011.5584.0c13.2383.6c20.4377.8c200倍200×8.037.5589.9b9.2589.1b16.1383.2bc100倍100×7.053.5594.6a6.5091.5b8.5390.0ab50倍50×7.983.3595.5a3.0096.5a4.9894.7a15%三唑酮可湿粉剂15%triadimefon1000倍1000×7.6014.5379.1d27.3366.0d63.1830.1d空白对照Watercontrol—7.6071.63—81.20—91.63—表2 Vegard防治甜瓜白粉病试验结果Table 2 Effect of Vegard on melons powdery mildew随着人们对环保意识的高度关注，无公害农药的研制成为农药开发领域的一个新方向。本课题组和内蒙古清源保科技有限公司联合开发的无公害植物源提取物Vegard田间防治小麦和甜瓜白粉病效果明显。在发病初期喷施，Vegard 200倍液对小麦白粉病可达83.6%的效果，100倍液和50倍液防效可达90%以上的效果，其防效与15%三唑酮1000倍液的防效相当。该制剂对瓜类白粉病防效亦突出，且防效明显超过三唑酮常规用量的防效，持效期长。从防治成本考虑，在防治小麦白粉病和瓜类白粉病上可选用Vegard 100～200倍液在发病初期喷施，10～12天用药1次，则可取得理想的效果。