核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）是一种世界性分布的重要真菌病害，能够侵染75个科450多种的植物。核盘菌在作物的各个生长期都能引起发病，并造成严重危害。2006年，核盘菌已经完成了全基因组测序，但是由于缺乏一个高效的遗传转化体系，其分子生物学方面的研究仍然十分滞后。Jeffery等（2001）利用PEG介导的方法对核盘菌的原生质体进行了转化，并获得成功，而其他人在重复试验时未得到结果。Richard等（2006）利用农杆菌介导对核盘菌的子囊孢子进行转化，开辟了核盘菌介导转化的新途径，但是在实验室里诱导产生子囊孢子十分困难，限制了这种转化方法的使用。江明等（2006）报道用核盘菌菌丝为材料，建立了农杆菌介导转化核盘菌技术体系，但该方法转化效率低，整个操作过程易被杂菌污染。为此，我们对此方法进行了改进，获得了较理想的效果，并降低了污染频率，现简要报道如下：将核盘菌在PDA平皿上活化，移至新PDA平皿上培养2天，用打孔器（φ 6mm）于菌落边缘打取菌丝块。将菌丝块与带有转化载体的农杆菌置于铺有玻璃纸的共培养基上于20℃培养室黑暗培养2天。将菌丝块移走后，将带有菌丝的玻璃纸平铺于无菌的培养皿中，加入15～20ml含有潮霉素（30μg/ml）的PDA培养基，在乙酰丁香酮的作用下，3～4天后在培养基表面有小的菌落形。将小菌落抑制含有潮霉素（50μg/ml）的PDA培养基上进一步筛选，获得候选转化子。经PCR鉴定，证实为转化子；转化子性状稳定，在不含潮霉素的PDA培养基上继代培养6代之后仍然能保持潮霉素的抗性。这种转化方法效率较高，且结果稳定，平均每个培养皿中会有1～3个转化子。目前，正在研究通过改变乙酰丁香酮的浓度和共培养时间等条件来提高转化效率，以便得到更多的转化子，为下一步筛选表型异常的突变菌株建立平台。

柴胡（Bupleurum chinense DC.），别名北柴胡、竹叶柴胡，为伞形科多年生草本植物。野生资源主要分布于我国的华北、西北和东北，主产于陕西、山西、河南、吉林、辽宁、黑龙江等地[1]。柴胡过去多为野生，病害零星发生，随着人工抚育及栽培面积的逐年扩大，柴胡根腐病害的发生和为害程度不断增加。目前，国内外尚未见有关柴胡根腐病的系统报道，对其发生、流行规律，病原菌种类及病原菌生物学特性尚不清楚，因此生产过程中缺乏有针对性的防治手段。为了尽快明确上述问题，本研究在对柴胡根腐病病原菌进行分离鉴定的基础上，就病原菌的生物学特征进行了较为系统的研究，这为进一步开展柴胡根腐病害的防治奠定了理论基础。从北京市延庆县永宁镇和本所柴胡试验基地采集病害标样。病原菌的分离采用常规的组织分离法，具体操作参照方中达[2]编著的《植病研究方法》。观察柴胡根腐病对柴胡根部的为害症状；菌落的形状、色泽；在显微镜下观察大、小分生孢子的形状及多少，测量其大小，观察有无隔膜及隔膜的数目，观察产孢细胞的类型，厚垣孢子的有无以及着生部位和子实体类型等。1.3.1 室内离体根组织接种 选取健康无病的柴胡根组织，用无菌水清洗干净，采用针刺法接种，保湿培养。1.3.2 室内活体植株接种 将取自田间的柴胡植株移栽于室内花盆，将配好的孢子悬浮液用微孔注射器注入柴胡根部，定期观察柴胡发病情况。1.4.1 温度对菌丝生长的影响 将病原菌接种PDA培养基，分别于5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃恒温培养箱中培养，6天后测量菌落直径，每个处理重复3次。1.4.2 培养基pH值对菌丝生长的影响 培养基灭菌后，分别调节pH4、6、8、10、12，接种后于25℃恒温培养箱中培养，6天后测量菌落直径。每个处理重复3次。1.4.3 分生孢子萌发 孢子萌发试验采用载玻片孢子悬滴萌发法。每1h计数孢子萌发数量，计算孢子萌发率。1.4.4 温度对分生孢子萌发的影响 共设5℃、10℃、20℃、25℃、30℃和35℃共6个温度梯度，24h镜检记录孢子萌发数，计算萌发率。每个处理重复3次。1.4.5 pH值对分生孢子萌发的影响 用pH值分别为2、4、6、8、10、12的水溶液配制孢子悬浮液，于25℃恒温培养箱中培养，24h后测定孢子萌发率。每个处理3次重复。1.4.6 湿度对分生孢子萌发的影响 在密闭容器中分别配制（NH4）2SO4、ZnSO4、NH4H2PO4和CaSO4饱和溶液，使其相对湿度（RH，Relative Humidity）分别维持在81%、90%、93%和98%，以清水（RH=100%）作对照，于25℃下培养，24h后测定孢子萌发率。每个处理3次重复。1.4.7 不同培养基对病原菌产孢的影响 分别配制PDA和小麦汁培养基，25℃恒温箱中培养，8天后观察分生孢子的产生情况。每个处理3次重复。1.4.8 分生孢子致死温度测定 将孢子悬浮液装在200μl离心管中，在PCR仪上以温度35～70℃（温度间隔为5℃）处理10min后，于25℃恒温箱中培养24h，观察孢子萌发情况。得到分生孢子致死的大致温度范围后，再以1℃为温度间隔求得精准致死温度。2.1.1 病害症状 该病主要为害柴胡的主根，亦可为害侧根。发病初期，自根茎交界处产生黑褐色斑点，后逐渐扩大呈圆形、近圆形或不规则病斑。发病后期，根部表皮自顶端向下产生纵向干裂，裂口变褐或发黑并逐渐加宽、加深。裂口多为竖条形，椭圆形或菱形。发病初期地上部分与健株无明显区别。发病后期裂口遍及根部整个外周，病部稍膨大、变硬、变脆，裂口深及木质部并造成水分、营养运输中断，最终导致整个植株萎蔫死亡。一年生柴胡当年秋季地上部枯萎后至结冻前即有发生，来年5～8月份为病害盛发期。2.1.2 柴胡根腐病菌培养性状 自柴胡根部病组织分离的病原菌在PDA培养基培养，菌落呈乳白色，气生菌丝发达，菌落底部呈浅褐色；在麦汁培养基上培养后菌落颜色呈灰白色，气生菌丝稀少。显微镜观察发现，麦汁培养基上培养的菌丝有分生孢子梗，分生孢子大量簇生，且菌丝上直接长有大量厚垣孢子。PDA培养基上培养的菌丝中间有隔，上面无分生孢子梗，也未发现分生孢子及厚垣孢子。图1 柴胡根腐病田间发病症状Figure 1 The symptom of root-rot disease in Bupleurum chinense DC.图2 柴胡根腐病菌的菌落形态Figure 2 The appearance of Fusarium solani isolated from Bupleurum chinense DC.2.1.3 病原菌鉴定 室内镜检发现大量分生孢子梗和大、小分生孢子。分生孢子梗一般簇生、直立，分隔。小分生孢子数量多，卵形、长椭圆形或短棒状，无隔膜；大分生孢子镰刀形或细长椭圆形，1～3个隔膜（3个隔膜者占到总数的96%以上）。厚垣孢子近圆形，在菌丝顶端单生。参考真菌分类相关文献，确认柴胡根腐病的病原菌为茄镰孢菌（Fusarium solani）。2.1.4 致病性测定 接种一定时期后，接种部位开始表现症状，且与田间发病症状类似。在接种病株上再次分离病原菌，经PDA培养基培养数天后，显微镜观察发现再次分离到的病原菌与接种的病原菌为同一病原菌。图3 柴胡根腐病菌孢子形态Figure 3 Fusarium solani Conidia isolated from Bupleurum chinense DC.2.2.1 温度对菌丝生长的影响 温度对病原菌菌丝的生长具有显著影响，菌丝在10～30℃范围内均能生长，25～30℃是菌丝生长的最佳温度范围。环境温度≤5℃或≥35℃均对菌丝的生长产生明显的抑制作用。2.2.2 培养基pH值对菌丝生长的影响 柴胡根腐病菌菌丝在pH值4～12的PDA培养基上均能够生长。在pH值4培养基上菌丝的生长速度较其他培养基上的菌丝慢，且菌落的背面呈红褐色，其他培养基上的菌落背面呈暗白色。2.2.3 分生孢子萌发 在20℃条件下培养，分生孢子萌发速度较快。4h萌发率达到14%，6h萌发率为46%，9h萌发率达到98%，10h后分生孢子全部萌发。图4 柴胡根腐病菌分生孢子在20℃下的萌发率Figure 4 Germinating ratio of Fusarium solani Conidia isolated from Bupleurum chinense DC.at 20℃2.2.4 温度对分生孢子萌发的影响 温度对分生孢子的萌发十分关键。由表1可以看出，20～25℃是最适宜的产孢温度，温度低于10℃，孢子不能萌发，温度高于30℃，孢子萌发率显著降低。温度（℃）Temperature（℃）分生孢子Conidia萌发率（%）Germinationrate（%）重复1Repeat1重复2Repeat2重复3Repeat3平均值Mean51020253035Ma0000Mi0000Ma0000Mi0000Ma100969898Mi80848684Ma95969395Mi90949292Ma80838181Mi40454644Ma60646262Mi10868表1 温度对镰刀菌分生孢子萌发的影响Table 1 The effect of temperature to germination of Fusarium solani conidia isolated from Bupleurum chinense DC.2.2.5 pH值对分生孢子萌发的影响 pH值对分生孢子存在显著影响，且大、小分生孢子对pH值的敏感程度也明显不同。从表2可以看出，大分生孢子在pH值2～10的范围内均能维持较高的萌发率（＞90%），pH值大于12值萌发率显著降低；而小分生孢子在pH值4～6的范围内能够维持较高的孢子萌发率（大于或接近90%），pH值小于2或大于6时，孢子萌发率均显著降低。pH值pH分生孢子Conidia萌发率（%）Germinationrate（%）重复1Repeat1重复2Repeat2重复3Repeat3平均值Mean24681012Ma90949091Mi40353737Ma100989999Mi95979495Ma100969898Mi90869289Ma100949697Mi40453639Ma90928990Mi20182421Ma60566259Mi10121011表2 pH值对镰刀菌分生孢子萌发的影响Table 2 The effect of pH to germination of Fusarium solani conidia isolated from Bupleurum chinense DC.2.2.6 湿度对分生孢子萌发的影响 研究发现，病原菌分生孢子在相对湿度≥90%的环境下均能够萌发，萌发率与相对湿度呈线性正相关，分生孢子的最适相对湿度为100%；相对湿度低于90%，分生孢子不能萌发。2.2.7 不同培养基对病原菌产孢的影响 分别用PDA和麦汁培养基培养柴胡根腐病菌。培养8天后，PDA培养基上的病菌气生菌丝发达，颜色纯白，挑取少量菌丝在显微镜下观察，未发现分生孢子；麦汁培养基上培养的病菌气生菌丝稀少，颜色发暗，挑取少量菌丝在显微镜下观察，可见大量的大、小分生孢子。2.2.8 分生孢子致死温度测定 研究发现，柴胡根腐病菌分生孢子在35～50℃之间均能够萌发，而在55～70℃均不能正常萌发。进一步研究发现，51℃为柴胡根腐病菌分生孢子的致死温度（表3）。处理时间（min）Treattime（min）温度（℃）Temperature（℃）35404550515253545560657010++++--------表3 柴胡镰刀菌分生孢子的致死温度测定Table 3 Lethal temperature of Fusarium solani conidia isolated from Bupleurum chinense DC.本研究通过对柴胡根腐病病原菌的分离鉴定、致病性测定以及病原菌的生物学特征的初步研究，得出如下结论：3.1 根据病原菌的形态特征和致病性测定结果，确认柴胡根腐病病原为镰刀菌（Fusarium solani）。3.2 实验结果表明，柴胡根腐病菌菌丝生长的最适温度为25～30℃，在pH值6～12条件下均能正常生长；分生孢子萌发的最适温度为20～25℃，最适相对湿度为100%，最适pH值为4～6。分生孢子的致死温度为51℃。3.3 柴胡根腐病早有发现，但因以前多为野生，病害只是零星发生。近年来，随着柴胡需求量的逐年提高，柴胡的人工栽培面积不断扩大，这为柴胡根腐病的发生和发展提供了便利条件，柴胡根腐病的发生逐年加重。目前，尚未见有关柴胡根腐病的发生、流行及防治策略的研究报道，开展柴胡根腐病害的侵染、流行及综合防治领域的研究工作势在必行。

毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii Briq）系唇形科鞘蕊花属植物，是一种多年生、半肉质的脆性草本药用植物。可用于治疗感冒、咳嗽等疾病，其提取物forskolin 具有降压、强心和抗炎等作用，可治疗心血管疾病、皮肤病等。同时它还可以通过激活腺苷酸环化酶而调节各种组织，是一种其他药物的活化剂。也可作为生化试剂而广泛应用。湖北通城县新磨苗圃基地从云南昆明植物所引种的毛喉鞘蕊花，最近几年连续发生严重的枯萎病，直接降低当地经济效益以及药用开发。其种植土壤为砂壤土，pH值5.5～6.5。每年7月初开始发病，7月下旬到8月初发病最严重，9月份开始减轻。阴雨连绵天气其发病程度加重。因此，自2004年起对其发生为害、病原以及防治进行研究。毛喉鞘蕊花整个生育期都可发病，但不同生育阶段为害程度有所不同，苗期表现较轻，生长中期发病较重。苗期症状表现为：下部叶片最先卷曲，而后下垂，接着整株叶片逐渐萎蔫，似缺水状，数日后叶片呈褐色干枯状，植株萎缩，严重时全株死亡；中后期发病时，接近地面的根茎最先显现症状，表皮粗糙明显变褐，接着沿着根茎向上蔓延，直至全株根茎变褐，剖开其茎部，可见其维管束腐烂呈黑褐色。阴雨天气可见病部表面有白色霉层，即病菌的分生孢子。病株采自湖北省通城县新磨苗圃基地。在发病根茎病健交界处切取小块根茎组织，按常规的组织分离法在PDA培养基上分离菌株。在菌落边缘挑取形态比较单一的小块菌丝块转移到新的平板上培养，重复纯化2～3次。最后进行单孢纯化后保存于PDA斜面上置4℃冰箱内贮存备用。采用伤根蘸孢悬液接种法进行致病性测定，接种7天后可观察到与田间病株相同的发病情况。再分离可得到与接种菌一致的分离物，说明病害即为该病原菌所致。在 PDA平板上观察培养的菌落，再根据病原菌产孢表型、分生孢子及分生孢子梗等形态特征对病原菌进行形态学鉴定。结果表明，该病原菌在 PDA 培养基上，生长3天气生菌丝茂盛，白色絮状，略带浅紫色；培养基反面菌丝呈辐射状分布，5天菌丝由浅紫色变为深紫色。产孢表型观察，气生菌丝有隔、分枝、透明，直径3～5μm，产孢细胞瓶梗状。小型分生孢子0～1 个分隔，卵形或椭圆形，假头状着生，大小为4～11μm× 1.8～4μm。大型分生孢子为典型的镰刀状轻度弯曲，向两端逐渐狭细，顶细胞渐尖并弯曲成喙状，基细胞足状，多数为3隔，少数4～7隔，大小为19～45μm× 2.5～3.5μm。菌落生长 10 天左右大量产生厚垣孢子，多数单个，球形，细胞壁粗糙，直径7～10μm。根据病原菌的形态特征将该菌鉴定为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）。在形态学鉴定的基础上，采用分子鉴定进行辅助鉴定。利用CTAB法提取菌株的DNA，以ITS1与ITS4为引物进行扩增，扩增的DNA测序结果与GenBank中的相关序列进行比对，该菌株与登陆号为DQ002550.1、DQ016211.1～DQ016203.1 Fusarium oxysporum的菌株序列达到最高的同源性，能够比对上的碱基数目最多，E-value值为最小值0。根据生物信息学同源性比对的结果再结合形态学鉴定，将该菌鉴定为尖孢镰刀菌。

肾叶打碗花[Calystegia soldanella（Linn.）R.Br.]为多年生匍匐性草本植物，地下茎较粗长，地上茎光滑，平卧，不缠绕，叶互生，肾形至近圆形，基部凹缺，边缘波状，具长柄。在我国分布于吉林、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、福建、台湾省等沿海省区的砾石海滩上，是我国沿海地带盐性砾土的指示植物，在世界各海滩也均有分布。它总是作为沙质、沙砾质、砾石质草场优势种或伴生种出现在海滨，具有很高的护滩抗风性能。由于其茎秆脆嫩、纤维素含量少，叶片肥厚，气味纯正，为多种家畜所喜食，所以是一种近海沙滩地上的好盐牧草。肾叶打碗花还具有一定的再生能力，花前期放牧或刈割，其再生草量可达第一次收草量的75%以上，这在土壤条件比较差的盐性海涂沙地上，确系一种高产牧草，因而具有很高的利用和饲用价值[1]。2006年在黄岛进行植物采样中发现肾叶打碗花上发生一种由旋花柄锈菌（Puccinia convolvuli Castagne）引起的锈病。该锈病严重的降低了肾叶打碗花的产量和饲用价值，因而本文将从该病的症状、病原菌、发病规律入手，详细报道该病的发生情况，为该病的防治提供依据。肾叶打碗花锈病标本于2006～2007年采集于山东省青岛市黄岛海滩和仰口海滩。从病叶片的正反两面用挑或刮的方法将病原菌制片，进行初步观察。为进一步观察病原菌在寄主体上的着生状况，可进行冷冻切片的制作，即将病斑从叶片上切下，约4mm×4mm大小，然后用石蜡冷冻切片机进行冷冻切片，把切好的组织用细毛刷挑在载玻片上摆放整齐，然后在体视镜下观察，将切得较好的组织用细挑针挑于另一载玻片上，在显微镜下观察、测量、描述形态特征并进行拍照。5月初至5月中旬开始发病，初期在叶片正面形成红褐色圆形病斑（图1），边缘色稍淡，性孢子器米黄色或红褐色，单生或聚生。5月中下旬在病斑背面对应性孢子器处产生淡黄色突起，后突破寄主表皮形成杯状锈孢子器（图2），淡黄色至米黄色，边缘白色。6月初至6月中旬，在叶片病斑两面产生淡褐色的疱状斑，后破裂露出褐色的粉状物，为病原菌的夏孢子（图3）。10～11月在夏孢子堆上产生肉桂褐色冬孢子堆（图4），散生或聚生，隆起，后期破裂，在叶片上及茎蔓上均可产生。图1 叶片正面的性孢子器；图2 叶片背面的杯状锈孢子器； 图3 叶片上的夏孢子堆； 图4 叶片上的冬孢子堆；图5 性孢子器（白箭头）及锈孢子器（黑箭头）； 图6 锈孢子；图7 夏孢子；图8～9 冬孢子堆；图10 冬孢子性孢子器黑色，球形，80～100μm（图5）；锈孢子器杯状，336～432μm×250～384μm（图5），锈孢子无色，但内部具黄色的内容物，因而稍显淡黄色，双壁，不光滑，具细刺，圆形至不规则形，17.5～20μm×12.5～5μm（图6）；夏孢子褐色，圆形或卵圆形，双层壁，较厚，壁光滑或有细刺，25.0～30.0μm×22.5～27.5μm（图7）；冬孢子双胞，具柄，淡黄色至黄褐色，25～42.5μm×15.3～25μm（图8～图10）。经查阅资料并进行鉴定，肾叶打碗花锈病的病原菌为旋花柄锈菌（P.convolvuli Castagne）。经过观察和鉴定，肾叶打碗花锈病的病原菌是柄锈菌属旋花柄锈菌（P.convolvuli Castagne）。通过对病原菌在寄主上的生长状况的观察，发现其为单主寄生全锈型锈菌，在叶片正面产生性孢子器，背面产生杯状的锈孢子器，在叶片两面产生夏孢子堆和冬孢子堆[2]，对于担孢子未进行冬孢子的萌发观察。旋花柄锈菌（P.convolvuli Castagne）仅在我国旋花科6属9种植物上引起锈病[3～6]，如头花银背藤[Argyreia capitata（Vah.）Arn.ex Choisy]，打碗花（Calystegia hederacea Wall.ex Roxb.）、鼓子花[C.sepium auct.non（L.）R.Br.]、肾叶打碗花[C.soldanella（Linn.）R.Br.]、田旋花（Convolvulus arvensis L.）、圆叶牵牛[Pharbitis purpurea（L.）Voigt]、牵牛花[P.nil（L.）Choisy]、甘薯（Ipomoea sp.）、鳞蕊藤[Lepistemon binectariferum（Wall.ex Roxb.）O.Kuntze]。肾叶打碗花锈病仅在山东烟台地区报道过[3]，而在我国其他地区未见报道。此次为该病在青岛地区的首次报道。致谢：感谢青岛农业大学孙丽娟老师和植保专业2003级学生韩建强帮助采集肾叶打碗花病害标本。

内生真菌是指那些生活在植物组织内的真菌，用以区分生活在植物表面的真菌。对植物内生真菌的研究可追溯至19世纪末，在100多年的研究中取得了丰硕的成果[1～3，7～9]。内生真菌与植物之间存在密切的互利共生关系，对植物的生理代谢调控和生长发育有较大的影响，目前还未发现不存在内生真菌的植物种类。我国也从大量的植物中报道了内生真菌的存在，寄主种类涉及林木、蔬菜及花卉植物[10～16]，但还有相当数量的植物内生菌没有被研究过，进一步深入开展植物内生菌的研究，对于丰富各类菌物的生物多样性知识和植物内生菌资源的应用开发具有十分重大意义。辣椒是国民经济中重要的蔬菜作物，但发生在辣椒上的病害较多，对辣椒的生产带来了不利的影响，在内生真菌表现巨大生防潜力的前提下，未见到辣椒内生真菌的报道，因而开展辣椒内生真菌的研究，以期从中筛选出有生防价值的内生真菌，必将会促进辣椒的生产并带来不可估量的经济和生态效益。山东省莱阳市莱阳农学院园艺系蔬菜大棚种植干制椒型辣椒。选择生长性良好、无病虫害症状的健康辣椒植株的叶片、茎秆及果实，分别于发芽期、幼苗期、开花坐果期和结果期采样。植株采下后装入无菌塑料袋中，带回实验室立即进行分离。1.2.1 内生真菌的组织分离法 所有的叶片和茎秆样品在蒸馏水冲洗2次，然后浸没在70%酒精1min，3%次氯酸钠4min，然后再在70%酒精中浸没30s，灭菌水中洗3次，每次洗1min。经过表面消毒的组织，切成5～7mm的组织块，无菌操作下转移至PDA培养基（pH值6.8，马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂15g；121℃灭菌15min）上，倒平板前加入100μg/ml的土霉素以抑制细菌的生长，取最后一次冲洗组织的灭菌水倒于平板上，以检查表面消毒是否彻底。1.2.2 内生真菌的稀释分离法 组织表面消毒的方法同1.2.1，将经过表面消毒的叶片和茎秆在灭菌的研钵中研碎，加入等体积的灭菌水稀释，然后用移液器吸取1ml组织悬浮液转于PDA培养基（加入100mg/ml的土霉素）上，然后用灭菌玻棒涂平。1.2.3 种子内部真菌的分离 将种子用70%酒精浸泡30s，很快放入无菌水中冲洗3次，然后置于铺有灭菌滤纸的培养皿内，并加入少量灭菌水，加入的量以润湿滤纸为佳，每皿中放入5粒种子。1.2.4 内生真菌的培养、纯化、保藏及计数 为了便于分离生长缓慢的真菌和产孢能力低的真菌的生长，将一半平板放入26℃培养箱中培养，另一半平板放入37℃中培养。每天进行检查，一直到30天后，将长出的真菌及时进行分离、纯化及保藏（4℃，PDA斜面）以便进一步进行鉴定，并记录不同部位分离出的菌株数。1.2.5 内生真菌的鉴定 从培养的菌落上挑取菌丝制成临时玻片进行观察，如果观察的菌丝及分生孢子梗大量聚集在一起，不易看清结构，则应先将菌丝置于滴有1滴70%酒精的载玻片上10s，然后将玻片倾斜倒去酒精，并用吸水纸将酒精彻底吸净后，再在菌丝及分生孢子梗上滴1滴水制成临时玻片放在光学显微镜下观察，拍照，测量孢子大小，并记录形态特征，所有鉴定的菌种均以在PDA培养基上生长的特性为标准，参考有关书籍进行鉴定[4～6]。采用不同的分离方法得到的菌株数不同，稀释分离法得到的菌株数较多，而经组织分离法得到的菌株数少（表1），但稀释分离法得到的菌株不易纯化，而组织分离法得到的菌株易纯化。从种子中分离得到的内生真菌数量较少，仅占到总分离菌株数的7.8%；叶片和茎秆上分离到的菌株数无多大差别。tissuedilutedisolationmethodtissueisolationmethodnumberofisolatesfrequenceofisolationnumberofisolatesfrequenceofisolationleaf4730.03219.1stem4023.83621.4seed——137.8Table 1 The comparison of endophytic fungi isolated by different methods经过对辣椒叶片、茎及种子823份材料中内生真菌的分离，共得到168株菌株，定殖率为20.4%，图1表明了暗色丝孢菌是最常见的分离菌。经鉴定属于14属20种真菌（表2）。其中，弯孢属Curvularia、链格孢属Alternaria、平脐蠕孢属Bipolaris、芽枝孢属Cladosporium、黑附球属Epicoccum、细基格孢属Ulocladium、皮司霉属Pithomyces、拟青霉属Paecilomyces、青霉属Penicillium、曲霉属Aspergillus、枝顶孢属Acremonium、镰刀菌属Fusarium是常见的内生真菌，而黑团孢属Periconia和矛束霉属Doratomyces是首次分离到的内生真菌，从种子中分离获得，对其形态学特征描述见2.3。大多数的菌株在28℃分离培养获得，而在37℃得到的是一些不孕性菌丝。2.3.1 小孢矛束霉（图1～图2）Doratomyces microsporus(Sacc.)F.J.Morton&G.Smith,Mycol.Pap.86:77,1963.KindsSpeciesKindsSpeciesNondemati-aceousgen-eraPaecilomycessinensisQ.D.ChenPenicilliumdigitatum(Pers.)Sacc.PenicilliumexpansumLinkAspergillusnigerTieghAspergillusochraceusG.WilhAspergillusversicolor(Vuill.)TirabAcremoniumroseogriseum(S.B.Saksena)W.GamsFusariumoxysporumvar.liniSnyder&H.N.HansenDematia-ceousgeneraCurvularialunatusR.R.Nelson&HaasisCurvulariaintermediaBoedijnUlocladiumconsortiale(Thüm.)E.G.SimmonsPithomycessacchari(Speg.)M.B.EllisAlternariaalternata(Fr.)KeisslAlternariabrassicicola(Schwein.)WiltshireAlternariatenuissima(Kunze)WiltshireBipolarisaustraliensis(Ellis)Tsuda&UeyamaCladosporiumherbarum(Pers.)LinkPericoniabyssoidesPers.SterilehyphaeEpicoccumnigrumLinkDoratomycesmicrosporus(Sacc.)F.J.MortonTable 2 Kinds of endophytic fungi from hot pepper菌落在CMA上平展，粉状，灰绿色或灰褐色，背面褐色，培养后期明显可见直立的孢梗束。菌丝体表生或大部分埋生，淡褐色或褐色，常形成菌丝束。孢梗束高100～800μm，柄部暗褐色，由紧密压在一起的分生孢子梗组成，头部圆柱形。产孢小梗多个簇生在分生孢子梗中上部。分生孢子卵形，端部多数尖，基部平钝，无色至淡棕色，聚集在一起呈暗褐色，光滑，3.5～5.5μm×2.5～4μm。2.3.2 黑团孢（图7～图8）Periconia byssoides Pers.ex Schweinitz,Persoon,syn.Meth.Fung.(G?ttingen):686,1801.Figure 1～2 Doratomyces microsporus 1.Conidiophore 2.Conidia; Figure 3 Conidia of Fusarium oxysporum var. lini; Figure 4～5 Cuvurlaria lunatus 4.Conidia; 5.Conidiophores and conidia;Figure 6 Conidiophore of Bipolaris australiensis; Figure 7～8 Periconia byssoides 7.Conidiophores; 8.Conidia; Figure 9～10 Epiccocum nigrum 9.Conidia; 10.Conidiomata菌落在CMA上絮状，稀薄，白色。菌丝体表生或埋生，无色。26℃培养1周左右，单根或2～5个簇生、直立、黑色的分生孢子梗从菌落中长出，基部暗橄榄褐色或褐色，光滑或粗糙，不分枝，梗长1.0～1.5mm，宽10～15μm，3～6隔膜，顶端为分生孢子和产孢细胞聚集形成的头部结构。产孢细胞近无色，椭圆形，产生单生或链生的分生孢子。分生孢子球形，初淡黄色，后暗褐色，粗糙，壁厚，直径15～17.5μm。本文首次研究了辣椒内生真菌的种类，共得到15属20种真菌，均属于无性态真菌。其中暗色丝孢菌数量及种类居多，与已报道的植物内生真菌种类及数量较一致[10，13～16]，但又具有一定的差异性，首次报道了黑团孢（P.byssoides）和小孢矛束霉（D.microsporus）是内生真菌，均由种子内分离得到。总结有关内生真菌的文献，发现内生真菌多数为无性态真菌，其次为子囊菌，接合菌居第三，担子菌及鞭毛菌极少存在[10，13～16]，而本次试验分离出的全部是无性态真菌，未见其他类群的真菌，这并不说明辣椒内生真菌中就不存在其他种类的真菌，下一步应改进分离培养方法并采集不同生长时期的组织和部位进行大量分离，以期全面准确地了解辣椒内生真菌的种类，并对内生真菌进行抗活性的筛选工作。组织分离是目前内生真菌分离的主要方法，简单易行，但由于有些真菌在人工基质上不能生长，因而不能得到全部的内生真菌，有很大的局限性。本文首次将组织研碎，采用稀释分离的方法分离内生真菌，获得的菌株种类上与组织分离法无多大差异，但较组织分离法获得的菌株数量多，在没有更好的内生真菌分离方法的情况下，应尝试采用多种分离方法和多种培养基进行分离，掌握合适的分离培养条件，尽可能多的得到内生真菌。

企业年金，即企业补充养老保险，是一种由企业单位自主发起设立、企业员工自愿参加的补充养老保险。2004年5月1日，劳动和社会保障部出台《企业年金试行办法》和《企业年金基金管理试行办法》，初步确立信托型企业年金的制度框架，明确了企业年金市场化运作的大方向和规则，这是建设我国养老保障“多支柱”体系的重要战略步骤，标志着企业年金制度已经进入正轨和市场健康发展的良好开端。近年来，由于积累制个人账户式企业年金日益成为主流，精算在企业年金中的作用逐渐弱化，基金投资日益成为制度成功运行的关键因素。保险公司在基金管理方面与专门的资产管理机构相比略逊一筹。但作为企业年金市场重要的产品提供者和服务商，对中小企业有不可替代的巨大优势。在我国，保险公司通过发挥自身优势，主要通过“一站式”服务和账户管理人方式参与到企业年金市场中。保险公司通过为企业提供方案设计、账户管理、投资管理、待遇发放等一站式服务，满足企业全方位一揽子金融服务的需求。这是比较适合我国企业年金发展初期的管理模式。账户管理主要分为权益账户管理和财务账户管理。企业年金权益账户是记录计划参与人权利和利益的工具。企业年金财务账户是记录企业年金计划总资产状况和个人积累状况的工具，是基于权益账户而建立，又是权益账户的账面反映。财务账户首先由企业年金计划承办机构管理和维护，资产则由托管银行保管。鉴于保险公司的特点，在成熟的信托模式下，账户管理人的角色并不适合保险公司，银行在这些方面有天然优势。有所为有所不为，保险公司没有必要在企业年金市场中面面俱到。明确定位，发挥自身长处，才能成为市场中的有力竞争者。中国的企业年金市场是一个由银行、保险公司、证券公司、基金公司等多方介入的市场。其中，保险公司具备一定的先发优势。相对于其他金融机构，保险公司拥有完善的培训体系、代理人管理体系，而且有遍布全国的销售网络，市场覆盖率很高。保险公司还通过团体寿险业务与许多企业建立了良好的合作关系，为今后开发企业年金打下了良好的基础。精算技术作为保险公司经营企业年金的核心竞争优势，在产品设计、投资政策的设定、年金资产和负债的评估、资产负债匹配、偿付能力监控等各个运作环节中起着关键性的作用。目前，中国精算师绝大部分都在保险公司工作，为企业年金的健康经营发展提供厂技术人才保证。保险公司可以根据企业的多样化要求，提供“一站式”或分离式服务。也可以根据行业和大中型企业的某一特殊要求，单纯的提供一项或几项服务，降低企业的成本。广泛的销售渠道：相对于其他金融机构，保险公司拥有完善的培训体系、代理人管理体系，而且有遍布全国的销售网络，市场覆盖率很高。可以提供多样化的年金产品：保险公司在产品多样化方面往往非常有优势，这种多样性有利于鼓励竞争，满足客户的不同需求，提高市场效率，具体的多样化年金产品主要包括分红类年金产品、传统年金产品及丰富的领取期年金化产品。专业化资产管理：保险公司可以同做专业化的资产管理公司，进一步提高保险公司对企业年金资产的管理能力，以适应企业年金迅速发展的需要，为推进企业年金发展创造良好条件。综合服务：保险公司通过建立专业的养老保险机构提供捆绑式或分离式的服务，降低企业成本，适应企业需求。在成熟的信托模式下，投资管理人和受托人的角色并不适合保险公司，银行、证券公司和投资基金在这方面有天然优势，这些都极大地削弱了保险公司在企业年金中的作用。保险企业需要在法律规定的框架下寻找自身的定位与角色定位，发挥优势，取得竞争的主动权。资本市场火爆对资金分流的影响依然在保险业有所显现。业内人士预计，2008年保险业总资产将很快突破3万亿元，而根据10%的入市比例，2009年入市保险资金将可达到3000亿元之多，而在股市持续火爆的预期下，保险资金的入市比例还有望调高。这些都进一步拓宽了保险资金运用渠道，利于保险公司调整投资组合，更好地分散投资风险，逐步提高保险资金收益。而且货币市场和资本市场可以为保险资金运用提供丰富的投资工具，这必将提高保险业在企业年金市场的竞争力。此外，中资保险公司极有可能参与企业年金游戏规则的制订。保监会明确表示，将积极推动和鼓励保险业参与各项企业年金改革试点，包括某些特定行业年金试点或各个省市地方企业年金试点，及时总结经验，完善制度和监管。这将使保险公司在产品开发、销售渠道、客户服务等方面处于更有利的位置。首先，来自其他金融实体的挑战。企业年金市场必将是多个行业、多个主体的竞争，金融行业大行业、大企业的自我统筹管理，各种中介服务机构等，这些市场主体有的在资本实力方面具有优势，有的则擅长于账户管理，而有的在投资运营方面独具所长，这对于保险行业来说，是个巨大的挑战。其次，保险行业内的竞争压力。随着市场的进一步开放，保险主体增多，市场竞争势必激烈，企业讨价还价能力进一步增强，价格下调压力进一步加剧。如何在扩大市场份额的同时又要保持公司盈利将是各保险公司所面临的巨大挑战。最后，来自国外保险公司的挑战。从2006年起，团体险、健康险、年金险市场将对国外保险公司开放，年金是国外大型寿险公司的重头，其经验丰富，人才济济，对中资保险公司来说是很大的挑战。一是加强国家政策支持。为了使企业年金规范快速发展，政府在宏观上应进行有力的调控，一方面以法律规范企业年金，另一方面从政策上鼓励企业年金的发展。当前的基本养老保险替代率较高，应逐步降低替代率，将降低部分归人企业年金，发挥税收政策杠杆作用，支持企业建立年金制度。二是拓宽资金运用渠道。企业年金资产作为长期资产，要求有较高的投资收益，目前保险公司的投资渠道和基金、信托等行业相比还缺乏优势。政府应该在保证资金运作安全的前提下，对于寿险公司资产的投资渠道进一步放宽。三是加速自身建设。从企业年金的业务链来看，包括三个环节：销售、投资管理、行政管理和服务。在销售环节，保险公司有较大的优势，但银行也有众多的网点；投资管理环节，资产管理公司有较强的技术优势，而目前保险公司的资金运用还受到一定局限，银行还可以通过开拓货币和外汇市场提高资产回报率；行政管理和服务方面，虽然目前保险公司已经有部分业务，但是商业银行也可以进行托管。四是提高监管水平。在年金计划方案设计上要注意公平性监管。在资产管理上，保险公司的“一站式”服务过程没有银行托管环节，不利于外部合规性监管。在偿付能力方面，如何设立有效的监管框架和监管指标，保护计划参与人的利益，都是需要研究的问题。按世界银行预测，至2030年中国养老保险基金总规模将高达1.8万亿美元，超过第一支柱下的基本养老保险基金。但保险公司要充分认识到，一方面企业年金对于保险企业的意义不仅在于一个潜力很大的市场，对于提升保险企业的实力和在金融市场中的地位也具有积极意义。另一方面，虽然可以提供多项金融服务，企业年金的社会公益性决定企业年金不会是一个“暴利”行业。中国对于企业年金管理人收益分配又选择了国际惯例中的较低标准。这些标准决定了市场规模今后将可能是企业利润的主要决定因素，参与金融机构只承担其中某个角色则可能成本更高。由于保险公司所具有的特殊性质，具有较强的精算能力、具备产品设计和销售优势、有从事团体养老保险的经验，在养老金发放时可以提供一揽子的服务，降低企业年金的管理成本，更好地适应企业的需求。虽然目前保险公司在拓展企业年金委托投资管理业务上存在法律障碍，在成熟的信托模式下，投资管理人和受托人的角色并不适合保险公司，但是保险公司可以成立专业的养老金公司，承担受托人、账户管理人、投资管理人三位一体的角色。平安、太平人寿两家公司的养老金专业公司已经获得监管部门的许可率先正式成立。企业年金业务是专业化程度较高的业务，需要专业人员和专业公司来运作。目前，跻身于世界500强的34家股份制保险公司有80%以上采用专门的资产管理公司模式运作保险资金。对保险资金运用实行专业化管理，建立资产管理公司模式是保险资金运用改革的基本模式和方向。中资保险公司应通过不断强化保险公司资产管理公司的市场化运作能力，提高保险公司的投资回报率，以明显的投资效益吸引企业年金市场客户。保险公司应进一步加强销售能力，积极拓展企业年金业务，开发个性化年金产品，满足不同层次需求。目前，国内保险公司的企业年金产品仅有简单的几种投资连结产品和分红产品，品种较单一。保险公司应充分利用自身的精算优势及多年的产品设计经验，开发多种企业年金产品供应企业选择，或采用“量身定做”方式为不同类型，不同规模企业提供企业年金计划。保险公司需苦练内功，加速自身建设，充分发掘潜力。保险行业价值链已经由传统型的从产品开始，向客户推销无差别化产品来获取价值的模式转向从客户开始的新型价值链。行业内价值转移使保险公司必须在资金管理与运用、产品开发、保险服务与风险管理咨询服务等领域加速自身建设，充分发掘潜力。最终，保险公司应通过资本实力和风险控制能力来提升自身的品牌优势，用无形资产的价值吸引企业年金市场客户的关注目光。

在网络时代，随着市场竞争的全球化，集团企业由于跨地域、跨行业、经营多元化的特点，对采取集中式管理，优化内外部资源以增强综合竞争实力提出了更高的要求。众所周知，采购职能在企业管理的各项职能中占据着非常重要的位置，采购成本的高低直接影响企业的利润，这使得更多的企业关注采购管理，关注如何降低企业的采购成本。本文下面对化工行业集团的战略采购实践中采取的步骤与方法进行讨论。一般的分类方法可以按照采购原材料和物资的属性（名称）、规格、供应商、或数量来建立不同的采购类别，同一采购类别内的各种物资应具有类似的供应商、类似的生产流程、类似的内部使用、类似的规格等。通过采购类别分析可以发现价值实现的机会，例如，同一类别的物资供应商是否过于分散，是否存在集中采购的机会。某大型化工行业集团业务范围涉及石化、农化、精细化工等行业，根据化工行业特点，采购原料依据特性及用途可划分为油气能源、矿产资源、化工基础原料、金属及制品、备品备件、服务类等大类，然后对每个大类划分其中子类别，比如能源类中包含原油、燃料油、石脑油等。划分类别之后，根据所采购产品的重要程度划分为战略物料与一般物料。战略物料，是对企业发展有着至关重要影响的物料，此类物料占支出比例较大，企业需要对其进行重点分析研究从而制定战略采购措施，一旦采购策略成功实施会给企业带来明显的收益，从而实现集团综合成本节省的目标。战略物料一般可以依据以下条件来界定：采购金额达到一定的额度；集团内不同企业之间的同类物料有集中整合采购的机会；集团内不同企业间有原料互供的机会。一般物料，由于其所占总采购支出的比例相对较小，采购地区分散，对总成本利润的影响表现不会非常突出，因此在可以将其列为次一级集中管控物资，暂且维持原有各企业分散采购的模式。此类物料的管理可以从采购流程上使其规范优化来实现管控。正确的运用分类，可以有助于区分有限级顺序，用更有效和更有条理的方法接近市场。通过实施面向市场的类别管理结构，使企业有针对性地从供应市场获取最佳价值。在采购类别划分完毕后，需要针对不同的采购类别产品进行深入的内外分析。这一阶段，要求类别经理对所管理的产品类别相关产业链，从上游供应市场、供应商，到自身企业状况以及下游产品市场有一个清晰的了解，从而做到知己知彼，制定出适应现实要求又能顺应市场趋势变化的战略采购实施策略。内部分析是通过历史采购清单，对采购类别进行点、量、价分析，以发现改进空间。外部分析是运用产业集中度、产品—供应商矩阵、波特五力模型等分析方法评估外部市场，以开发潜在供应商库。在内外分析的基础上，针对不同采购类别制定不同的采购策略。茫茫信息的海洋，需要有一个明确的目标范围与工作方法，对所需要的信息内容事前计划，才不会花费了大量的时间精力，却迷失在信息的海洋里。收集信息阶段主要包括以下工作内容：①鉴别目前和潜在的供应商：列出类别采购市场中的主要供应商，这些供应商采用的策略。了解供应商的业务概况，衡量供应商能力的诸多信息，这些分析能帮助我们对供应商的评估与选择提供许多启示。②了解供应市场的情况：信息包括历史、规模、动态因素（政治、经济、社会、技术、环境、法律等因素）、推动因素、潜在市场机会、主要参与者、供应链、财务状况等。③成本分析：这是对采购物料的综合成本进行分解，其各个组成部分如原料、人力、物流、部件、税费、管理费、利润等在价格中所占比例，以便对不同方案中的潜在收益进行评估，提供预期成果来支持决策的制定，也能为采购假设提供证据，证明其是否可行。④明确业务需求：就是使用QCLDM方法明确自身业务需求。QCLDM是指质量（Quality）、成本（Cost）、物流（Logistics）、开发（Development）和管理（Management）五方面。Q（Quality）指质量的规格、绩效水平、适宜性、服务间隔等。C（Cost）指成本的目前支付价格、建议成本降低、发票准确性等。L（Logistics）指物流的交付绩效、准时性、完整性、准确性等。D（Development）指开发的新想法、创新层次、技术进步、根据未来需求变化的适应性等。M（Management）指管理方面的汇报机制、有效订货流程、客户服务级别、文化和沟通等。QCLDM的方法要求根据不同时间计划如短期（0.5～1年）、中期（1～3年）、长期（3～5年）列出相关的需求，并对其跟踪管理，用以对客户进行沟通配合。QCLDM要求其供应商和客户有很强的，实实在在的承诺，从而确保工作有效完成。基于已经收集到的信息，我们可以借助系统的分析工具将信息归类整理从而研究出最佳的战略采购策略。这些工具主要有：波特五力分析——针对行业环境的分析。基于物料和所处行业从波特五力的角度进行分析，即供应商的讨价还价能力、购买者的讨价还价能力、潜在竞争者进入的能力、替代品的替代能力、行业内竞争者五个角度来而分析行业的基本竞争态势。PESTEL分析——针对供应市场外部因素的分析。即影响供应市场的政治因素、经济因素、社会因素、环境因素、法律因素。通过对这些外部因素的掌握，能够对供应市场现状及趋势有一个比较清晰敏锐的认识。SWOT分析——针对采购企业的内外部优劣势的分析。采购企业从SWOT角度进行分析，即优势、劣势、机遇和挑战，从而对企业内外部条件各方面内容进行综合和概括，分析组织的优劣势、面临的机会和威胁。组合分析——就是从述某种产品获取的难易程度和支出金额大小两个维度进行对比的简单工具。它能够表示出企业与供应商的关系，也使企业更清楚在供应商眼中的位置，能够帮助企业根据产品所在象限采取相应的策略制定采购战略。制定采购方案的目的是为了实现采购收益，具体的方法有：在对信息的收集整理过程中可以发现及开发集团内部上下游产业链中的互供机会，加强内部互供有利于降低集团综合采购总成本。主要方式包括多业务单元的采购量整合、减少供应商数量、重新分配向各供应商采购的数量、联合同类企业的采购数量、将原材料或零部件的规格标准化等。单纯的采购量集中未必能实现采购价值，关键是寻求双方的利益共同点。例如集团内某进口材料的采购由各下属单位分别进行，供应商分布全国各地达10家之多，即使是同一个时间段的成交价格也相差很大。虽然将采购量集中起来，并与国外厂家直接协商，但厂家以各种理由拒绝达成期望的协议。经过研究发现，该供应商在国内的主要目标是拓展市场份额，并雇佣大批销售人员进行点对点销售，销售成本居高不下。因此在新一轮谈判中，强调达成长期合作对其拓展同行业市场的示范作用，并承诺简化交易和结算流程，展示的测算结果显示，这样的合作为其带来的收益和成本节约远远超出其付出的代价，最终一举达成降价20%的采购目标，并获得厂家提供技术解决方案的承诺。在将“采购量”和“供应商”数量这两个硬的客观影响采购成本因素进行优化之后，进一步成本降低空间转向软的管理优化方面。例如：通过招投标方式引入竞争，充分发挥公开招标中供应商之间的博弈机制，科学公正的选择最符合自身成本和利益需求的供应商；通过电子化采购方式降低采购处理费用；通过科学的经济批量计算合理安排采购频率和批量降低采购费用和仓储直接和间接成本；以及对供应商提供的服务和原料进行有选择的购买。充分考虑采购、制造、储运等环节的运作成本，提高原料、工艺和服务的标准化程度，减少差异性带来的后续成本。这是技术含量更高的一种战略采购，是整体供应链优化的充分体现，技术可行性是成功的关键。主要手段包括全球采购、寻找并尝试新型供应商、利用汇率波动、利用贸易政策优惠研究互补贸易等。可能的手段包括重新定位采用自主生产或采购的战略决策、前向一体化整合、与领先的专业供应商建立合资企业、运用战略联盟/伙伴关系等。首先，建立供应商评估体系。筛选与评定供应商级别的指标体系包含以下要素：质量水平、交货能力、价格水平、技术能力、售后服务、人力资源、现有合作状况等。具体筛选与评价供应商时，应根据形成的指标体系，给出各指标的权重和打分标准。其次，实施供应商关系管理。采购问题的产生很多情况下与供应商基础有关，没有供应商的合作也无法实现战略采购的目标，可以说战略采购的核心是企业和供应商之间的双赢。企业与供应商之间的关系一般可分为三种：第一种是竞争关系，供需双方随市场变化进行博弈，你输我赢。实行分散采购策略的产品往往处于这种关系状态。企业与供应商的关系好坏常常取决于双方相关人员的个人交情，因此较易产生暗箱操作。第二种是长期合作关系，双方基于信任签订长期合同，并在技术、服务等方面进行比较深入的合作。这种关系使供需双方的交易成本降低，并减少了经营风险，因此很多企业将长期合作关系作为采购管理工作的重心，并取得一定的成效。第三种是双赢关系，企业能够充分利用供应商的能力，双方在合作中都能得到不断的改进，竞争力获得共同发展，从而结成战略联盟的稳定关系。例如汽车制造商与零部件供应商的战略联盟，以及优秀咨询公司与客户的合作关系。战略采购的实现途径就是通过供应商选择与评估手段，与供应商建立稳固的长期合作关系，并不断深化，向双赢发展。在采购策略实施过程中，以上的步骤是一个不断改进的过程，在以上所有工作有效开展的基础上，根据供应市场的变化不断改进评估标准，持续改进采购流程、改善采购质量、降低采购成本，建立企业强大的成本控制能力。