玉米丝黑穗病、瘤黑粉病和玉米小斑病是玉米生产中的重要病害，广泛分布各玉米产区。在我国，自20世纪70、80年代采用种植抗病品种和药剂处理种子的方法后，丝黑穗病和瘤黑粉病得到了控制，但是近些年，由于杂交品种的推广，感病品种的大面积种植和频繁交流，病害又从零星发生恢复到大面积发生的情况，对玉米的田间生产造成了严重的威胁。玉米小斑病在夏玉米产区发生为害也逐年加重，因此筛选有效的杀菌剂，对于防控病菌的传播、为害在生产中有着重要的意义。本研究分别采用3种不同的测定方法，进行了杀菌剂对3种病原菌的室内毒力测定，筛选出对病原菌生长具有明显抑制作用的杀菌剂，为构建用于以上3种病害防治的种衣剂奠定了基础。结果如下：采用菌丝生长速率法测定了7种杀菌剂对玉米小斑病菌的室内毒力测定。结果表明，阿米西达、杀毒矾对小斑病菌的抑制作用比较强，EC50分别为5.09μg/ml和1.72μg/ml；采用孢子萌发法测定了11种药剂对瘤黑粉病菌的室内毒力。试验结果表明，福美双和苯醚甲环唑对病原菌孢子的萌发具有明显的抑制作用，EC50分别为1.69μg/ml和3.97μg/ml；采用酶联板—浑浊度法进行10种药剂对玉米丝黑穗病的室内毒力。戊唑醇和福美双的抑制作用最强，EC50分别为0.038μg/ml和0.15μg/ml。根据室内毒力测定的结果，可以选择这几种对病原菌有良好抑制作用的药剂进行相互配伍，扩大其防治谱，构建出新型种衣剂用以3种病害的田间防治。

植物精油（essential oil）是存在于植物体中的一类可随水蒸气蒸馏、且具有一定香味的挥发性油状液体的总称，它是植物体内的次生代谢产物，主要由脂肪族、芳香族、萜类（单萜和倍半萜）、含氮或含硫等易挥发的成分组成。植物精油具有杀（抗）菌、杀（驱）虫、香熏治疗和多种药理作用，在香料、化妆品、食品等工业领域具有广泛的用途，是制作药品、化妆品、食品的原料或添加剂。由于精油具有无毒、无害、纯天然等特点，研究精油作为杀菌剂用于食品或果蔬的防腐保鲜和贮运，以及作为农用或医用杀菌剂，是近年来精油研究与开发的一个重要方面。由于植物精油的研究十分迅速，本文对有关植物精油的抗菌活性、作用机制和应用等方面的研究进展进行简要综述。近年来对精油抗菌活性进行研究的植物主要包括：唇形科、菊科、桃金娘科、伞形科、金丝桃科、樟科、禾本科、芸香科、马鞭草科、姜科等，估计进行过精油抗菌活性研究的植物达250余种。这些精油多分布在植物的花、果、叶、根或根茎、种子等器官中，有的也存在于植物的全草和树胶中。精油中的抗菌成分主要为：香芹酚、丁子香酚、薄荷醇、百里酚、柠檬烯、乙酸牻牛儿酯、乙酸丁子香酚酯、反-肉桂醛、桉树脑、β-月桂烯、香叶醇、对-伞花烃、γ-松树烯、香芹酮等。精油是由多种类型的化合物组成的，它们对微生物可能有多个作用位点（靶标），因此精油的抗菌作用机制比较复杂，目前对精油抗菌作用机制的了解还十分粗浅，精油对细菌作用机制的研究要比对真菌深入。由于细胞膜和线粒体膜特殊的脂质结构，精油的疏水性和分子大小使之极易穿过细胞膜或直接作用于膜结构，已有的研究证明精油对细胞结构的作用有：（1）导致细胞壁结构的降解；（2）细胞膜损伤；（3）膜蛋白损伤；（4）导致细胞内成分的外流；（5）细胞质成分凝固；（6）消耗质子流等。对病原菌有强烈抗菌作用的精油一般含有高含量酚类化合物如香芹酚、丁子香酚和百里酚等，这些酚类化合物破坏了细胞质膜、质子动力（proton motive force，PMF）、电子流、成分的主动传输和胞内成分的凝固，从而使精油具有抗菌活性。精油中的单一成分应该有其准确的作用方式，且有明显的构效关系。如乙酸牻牛儿酯较牻牛儿醇具有更好的抗细菌活性。含烯烃基团的非酚类化合物成分的抗菌活性要强于含烷烃基团的化合物，如柠檬烯的抗菌活性要强于对-伞花烃。精油中的活性成分也会影响镶嵌在细胞质膜中的蛋白质活性，它们可以在脂双分子层之间发生累积，阻止膜蛋白与底物的结合；也可能直接与膜蛋白（如ATP酶）中的疏水部分结合，使之变性。一般精油对革兰氏阳性菌的抑制作用要比对革兰氏阴性菌强，可能与革兰氏阴性菌围绕在细胞壁的外的一层隔膜阻碍了疏水性物质的扩散通过这一特性有关。精油及其成分的抗菌作用机制在许多细节上尚未完全阐明，需要进行深入的研究，为精油的应用奠定理论基础。未来一段时间，植物精油的研究领域将主要集中以下几方面：（1）精油对镶嵌在细胞质膜中的蛋白质的作用以及对膜中的磷脂的作用研究；（2）精油成分对细菌细胞的抗菌作用的研究，尤其是对一些模式细菌的作用机理研究；（3）精油成分对真菌的作用机理研究；（4）精油中抗菌活性成分的构效关系（SAR）研究，为新型杀菌剂的设计与合成提供依据，并对抗菌活性做出预测；（5）精油在抗菌活性方面的稳定性和持久性也需要更好地研究。植物精油作为杀（抗）菌剂在植物病害防治、食品和果蔬防腐保鲜，以及作为医用抗菌药物等方面具有广泛的应用前景。我国具有丰富的精油植物资源，在植物精油的理论研究和应用开发方面还比较薄弱，大多停留在精油的提取和室内的活性测定，研究的植物种类相对来说还比较少。今后可以在以下几个方面更多地开展工作：（1）进行精油植物资源的调查和活性筛选；（2）从精油中筛选高活性的抗菌化合物，为新型杀菌剂的合成提供先导结构；（3）产品的开发研究，即将植物精油加工成合适的剂型（如气雾剂、缓释剂、熏蒸剂），有效地发挥其活性。近年来，许多合成杀菌剂被限制使用，甚至禁用，因此有必要开发新的杀菌剂种类。植物精油作为杀菌剂应用在低毒、高效、维护生态平衡等各方面都是比较理想的。随着人们生活质量的提高，对环境、食品的要求也越来越高，特别是在食品、果蔬的保鲜和贮运过程中，植物精油作为抗菌药剂有着诸多的优势，越来越受到人们的青睐。这样必将加快对精油的研究，以及精油类农药的创制及其工业化的进程。

番茄被认为是蔬菜中的一种重要的健康食品。它含有丰富的营养，不仅含有丰富的纤维素，而且不含胆固醇，脂肪的含量也较低。近来培育的鲜食品种之一——樱桃番茄，兼有水果和蔬菜的特点，尤其受到人们的青睐。其风味独特，果汁富含甘汞，对肝病有良好的治疗效果，并有利尿、保肾等功能；果皮茸毛能分泌路丁，可降血压、预防动脉硬化和脑溢血，还有杀菌、美容、解毒等作用。由于自身的生物特性等原因，番茄果实在果实采前，采收期以及在果实采后的贮存和运输过程中容易受到多种病原真菌的侵染，从而导致采后病害的发生。其中灰霉病（Botrytis cinerea）是采后的主要病害，常在贮藏期以及货架期引起果实腐烂，造成较大的经济损失。目前番茄采后病害仍主要采用化学杀菌剂来防治，如使用多菌灵或扑海因浸泡果实，速克灵或农灵利喷洒果实等。化学药剂控制采后病害有良好效果；但是，长期使用化学农药导致病原菌产生抗药性而降低防效；同时，农药在果实上的残留量增加而威胁人类健康，并造成环境污染。生物防治作为一种更加安全有效的防治果实采后病害的新技术已引起人们的广泛关注，并成为研究热点。枯草芽孢杆菌C27（Bacillus subtilis strain C27）是由中国农业大学植物病理学系植物细菌及病害生物防治实验室分离得到的一株生防细菌。前期研究发现，其对番茄苗期和成株期灰霉病有良好的防治效果。本研究探索了C27菌株用于采后番茄果实灰霉病的防治。结果表明，在离体条件下，C27代谢液能明显抑制病原菌Botrytis cinerea的孢子萌发和菌丝生长，在25°C和2°C下对番茄果实灰霉病均有明显的防治效果。与不刺伤和刺伤接种无菌水的对照相比，C27处理在25°C和2°C下均能提高番茄果实内多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）的活性以及增加果实的总酚含量（TPC）。C27菌株对番茄果实灰霉病具有明显的防治效果，其防效在于对病原菌的直接抑制作用以及对果实抗病防御反应的诱导作用。

为了减少化学杀菌剂对环境的污染和在农产品中的残留，对环境友好的生防微生物制剂受到普遍重视。在已经研究的生防菌中，木霉属下的若干种因适应能力强、抗病谱广、拮抗机制多样化而被广泛用于防治植物病害。研究发现木霉对病原菌的作用机制是多种多样的，主要包括抗菌、溶解、竞争、重寄生等，目前还发现木霉制剂除具有直接抑菌功能外，还具有一定的诱导作物产生抗性的作用，这对提高木霉防病的持效性和稳定性具有重要意义。我们从土壤中筛选分离出一株具有很强生长势的木霉，经鉴定为绿色木霉Trichoderma viride，通过体外拮抗试验，证明该菌具有极明显的竞争优势，能快速地占据生长空间、获取营养，对灰葡萄孢霉、立枯丝核菌、瓜果腐霉、茄链格孢等均有强烈的抑制效应，盆栽接种和温室防治试验试验表明对立枯丝核菌所致茄子立枯病和灰葡萄孢霉所致番茄灰霉病均具有明显的防治效果。因此，有可能发展成为一种纯生物的植物病害防治剂。作为一类重要的自然资源，木霉已引起国内外研究者的广泛关注。因此，木霉的培养及发酵条件是工业化大批量生产木霉菌制剂的前提。本文主要对我们筛选出的生防有效菌绿色木霉的放大发酵培养条件进行了研究，其结果对于绿色木霉和多功能生物制剂的工业化生产具有一定的指导意义。绿色木霉Tr9701（Trichoderma viride），由天津植保所病害室筛选、鉴定、保存菌株。1.2.1 不同培养基与绿色木霉生长和孢子形成、萌发的关系 将绿色木霉菌丝块（直径5mm）分别置于MA培养基、小麦粉培养基、豆粉浸出液培养基、PDA培养基、PSA培养基、土壤浸液琼脂培养基、水琼脂培养基、CA培养基等上，在25℃下培养，每处理重复4皿，24h、48h、72h、96h、7天后测量菌落直径，观察菌落生长和孢子着生情况。将木霉菌孢子在1%葡萄糖营养液、1%蔗糖营养液、10%土壤浸出液和蒸馏水中，25℃培养，0h、4h、6h、24h后调查孢子萌发情况。1.2.2 温度与绿色木霉菌丝生长及孢子形成的关系 将菌块移入PSA平板培养基上（定量为12ml），置于10～35℃共6个温度梯度内培养，分别于培养24h、48h、72h、96h、7天后测量菌落直径，比较不同温度下菌丝生长差异，并观察各处理中产孢情况。同时将试管斜面上培养4天的木霉菌分别放入温度为35℃、45℃、55℃、65℃的水浴锅内，每温度放4个试管，分别在5min、10min、15min、20min各取1管，在无菌条件下将菌丝挑入PSA平板上，于25℃温箱内培养，观察木霉菌生长情况，明确持续高温对绿色木霉菌丝伸长、孢子着生的影响。1.2.3 pH值与绿色木霉菌丝生长及孢子形成的关系 将灭菌后的PSA培养基，用HCl和NaOH调节其pH值分别为1、2、3、4、6、7、8、9、10、11、12、13，在不同pH值培养基上接种菌块，25℃恒温培养，24h、48h、72h、96h、7天后观察pH值对绿色木霉菌丝伸长、孢子着生的影响。1.3.1 固体发酵基质原料的确定及培养基的优化 试验设计的培养基配方由固定成分和附加成分组成，固定成分以小麦全麦为主，附加部分黄豆粉、糖类和酵母浸膏（具体见表7）。利用设计的配方培养绿色木霉（接种浓度5×106个孢子/ml，基质：菌液=10：1），观察不同配方培养下绿色木霉菌丝和产孢量的情况，确定利于绿色木霉培养的固体发酵基质配方。1.3.2 固体发酵基质中含水量的确定 由筛选获得的固体发酵基质配方中，加入不同比例的水分。含水量试验设计为麦粒：水比例1：0.6、1：0.8、1：1、1：1.2、1：1.4，利用设计的不同含水量配方培养绿色木霉（接种浓度5×106个孢子/ml，基质：菌液=10：1），观察不同含水量下培养绿色木霉菌丝和产孢量的情况，确定利于绿色木霉培养的固体基质中含水量。1.3.3 培养时间对绿色木霉产孢的影响 以筛选获得的固体基质配方作为木霉菌发酵基质培养绿色木霉（接种浓度5×106个孢子/ml，基质：菌液=10：1），观察发酵过程中木霉菌在培养基质中的种群密度变化，定时取样，以血球计数板计数培养物中绿色木霉孢子着生量。1.3.4 利用食用菌废料的固体发酵基质原料的确定及添加成分、比例的优化 首先通过可行性试验明确食用菌废料是否能够提供木霉菌繁殖的基本营养。配方筛选试验设计的培养基配方由固定成分和随机成分组成，固定成分以食用菌废弃培养料（自然风干）为主，附加部分麦麸和无机营养元素；随机成分有酱油渣、玉米芯、黄豆渣、锯木屑、稻杆等（自然风干）废弃物。以食用菌废料、麦麸、无机盐为固定成分分别与其他废弃物按照一定的比例称量350g，料：水为1：1，放在广口玻璃瓶中，灭菌后接种木霉孢子悬浮液（接种浓度5×106个孢子/ml，35ml/瓶），设4次重复，25℃恒温培养，6天后调查结果。用不同培养基25℃培养绿色木霉，生长速度测定结果见表1。由结果可知，绿色木霉菌在供试的几种培养基上均能生长。从生长速度上看，以小麦粉和豆粉浸出液培养基上生长速度最快，是其生长的最适培养基，菌丝培养72h即长满全皿，且菌丝浓密；PDA、PSA、CA培养基相对次之，三者之间生长速度无明显差异；绿色木霉在水琼脂培养基上7天可以长满全皿，但菌落极为稀疏；以MA培养基、土壤浸出液培养基上生长速度最慢，25℃培养7天菌落直径分别为26.00mm和26.25mm。培养基菌落直径（mm）24h48h72h96h7天MA培养基5.258.1310.5013.7526.00小麦粉培养基14.2558.50满豆粉浸出液15.2550.50满PDA10.5041.7579.25满PSA11.0037.7568.50满土壤浸出液5.007.3811.3815.5026.25水琼脂5.5022.5040.2557.50满CA培养基13.0041.0068.75满表1 绿色木霉不同营养条件下菌落生长速度用不同培养基培养观察其孢子着生情况（结果见表2）。由结果可知，该菌在几种培养基上均能产生孢子，从孢子形成的速度和数量上看，以小麦粉和PDA培养基孢子生成的速度最快，产生的孢子数量最多；其次是豆粉浸出液、PSA和CA培养基；以MA培养基、土壤浸出液和水琼脂3种培养基上孢子生成速度最慢，产生量最低。培养基孢子分布直径（mm）24h48h72h96h7天附注MA培养基005.885.886.00+小麦粉培养基0034.25满++++豆粉浸出液0022.2561.00满+++PDA014.6330.25满+++PSA07.0023.7565.00满+++土壤浸出液00008.5+水琼脂0000满+CA培养基07.2519.0061.00满++表2 绿色木霉不同营养条件下培养孢子着生情况由绿色木霉分生孢子在不同营养液中萌发试验可知（结果见表3），其分生孢子在几种营养液中均可萌发，但以1%葡萄糖溶液中萌发效果最好，24h萌发率为30%，48h萌发率为95.5%；10%土壤浸出液中萌发效果最差，24h萌发率为1.5%，48h萌发率为45%；其他几种液体中孢子萌发率24h为4.00%～5.67%之间，48h为76.0%～78.2%。营养液孢子萌发率（%）0h4h6h24h48h1%葡萄糖00030.0095.51%蔗糖0004.0076.010%土壤浸出液0001.5045.0蒸馏水0005.6778.2表3 绿色木霉不同营养液中孢子萌发情况绿色木霉于不同温度下培养，测量其生长速度结果见表4。由结果可知，绿色木霉在10～35℃均能生长，25℃时72h内就能长满培养皿，20℃、30℃时需要96h，15℃时则需要7天，10℃、35℃时第7天仍未长满全皿。20～30℃为绿色木霉的生长适温，25℃为生长最适温度。培养温度（℃）菌落直径（mm）24h48h72h96h7天106.256.317.759.6338.35158.7510.0627.1344.50满2013.5045.3879.83满2519.6358.50满3018.8855.1377.67满3511.3112.2512.5013.7516.5表4 绿色木霉不同温度下菌落生长速度将绿色木霉于不同温度下培养，观察其孢子着生情况、测量其孢子蔓延速度，结果见表5。从结果显示，绿色木霉在15～30℃均能形成分生孢子，其中适宜适温为20～30℃，温度在20℃以下和30℃以上能产生分生孢子但速度减慢，如25℃时96h内产生的分生孢子就能布满培养皿，20℃、30℃时需要7天，15℃时第7天分生孢子仍未布满全皿。因此，25℃为绿色木霉的分生孢子形成的最适温度。培养温度（℃）孢子分布直径（mm）24h48h72h96h7天100000015000066.50200017.7576.5满2506.543.00满300047.2584.5满3500000表5 绿色木霉不同温度下孢子着生情况绿色木霉在不同pH条件下培养，结果见表6。由结果可明显看出，pH值在5～9环境下培养，绿色木霉可以生长，其中pH在5.5～6间生长最适，pH值在8以上生长较为缓慢，由此可见绿色木霉喜好在中等偏酸性条件下生长。绿色木霉孢子着生也表现相似规律，pH值在5～8环境下孢子均可着生，以pH在5.5～6间最适。pH菌落直径（mm）孢子分布直径（mm）24h48h72h7天24h48h72h7天100000000200000000300000000400000000512.0036.0063.38满0015.560.05.52163.38满0033.5满621.6366.38满06.242.0满79.5030.5054.00满0028.2满807.7515.5045.75005.549.25907.008.0022.0000001000000000110000000012000000001300000000表6 pH值对生防木霉菌菌丝伸长、孢子着生的影响不同固体发酵基质原料培养绿色木霉效果见表7。由结果可以看出，在以小麦粒为主的固定成分中加入糖类和酵母浸膏，菌丝量和产孢量最高，如果在发酵过程多次搅拌，可保证整个基质内、外表充满黄绿色孢子。在加入其他成分的配方中菌丝、产孢量均不及前者多，因此通过试验获得的绿色木霉固体发酵基质原料配方为：小麦粒+葡萄糖+酵母浸膏。配方菌丝生长量孢子产生量说明全麦粉+黄豆粉+葡萄糖+酵母浸膏++仅表面分布黄绿色孢子通气性较差全麦粉+葡萄糖+酵母浸膏+仅表面分布黄绿色孢子通气性较差全麦粉+黄豆粉++仅表面分布黄绿色孢子通气性较差小麦粒+黄豆粉+葡萄糖+酵母浸膏++麦粒表面密生黄绿孢子麦粒和豆粉附着性稍差小麦粒+葡萄糖+酵母浸膏+++麦粒表面密生黄绿孢子适宜木霉菌生长小麦粒+黄豆粉++麦粒表面密生黄绿孢子麦粒、豆粉附着性稍差表7 绿色木霉孢子发酵配方筛选试验将固体发酵基质中加入不同比例水培养绿色木霉效果见表8。由结果可以看出，在以小麦粒为主的固定成分中加入不同水量，其对绿色木霉的菌丝量和产孢量影响较大，以固麦粒和水比例为1：0.8～1：1.0的菌丝、产孢量最多，如果在发酵过程多次搅拌，可保证整个基质内、外表充满黄绿色孢子。处理含水比例菌丝生长量孢子产生量说明麦粒：水1∶0.6++菌丝着生处生长黄绿色孢子含水量过低菌丝少麦粒：水1∶0.8+++整个料体着生黄绿色孢子适宜木霉菌生长麦粒：水1∶1+++整个料体着生黄绿色孢子适宜木霉菌生长麦粒：水1∶1.2++孢子主要在上半层分布基料下层含水量较高麦粒：水1∶1.4+孢子着生较少含水量过高表8 绿色木霉固体发酵基质中含水量试验以筛选获得的固体发酵基质配方作为木霉菌发酵基质培养绿色木霉，发酵过程中木霉菌在培养基质中的种群密度变化结果见表9，接种48h后，内部有菌落产生，第3～4天，整个基质全部被白色菌丝覆盖，随后，料体表面有黄绿色孢子大量产生，随着时间的推移，绿色木霉的孢子量增长迅速，到第6天培养料中孢子量达332.4×106个/g，以后孢子量增长缓慢。因此为了缩短发酵时间，降低发酵成本，发酵6天就能达到预期的要求。重复孢子密度计数（×106个孢子/g）2天3天4天6天8天平均8.3351.798.9332.4357.4表9 不同时期绿色木霉孢子种群密度变化为进一步降低生产成本，本试验设计以食用菌废弃培养料为主，附加部分麦麸和无机营养元素；随机成分有5种废弃物。配方设计及其培养木霉孢子效果见表10。由结果可以看出，在以食用菌废料为主的固定成分中加入黄豆渣，菌丝量和产孢量最高，整个基质外表充满黄绿色孢子，内部由于光照不充足产孢量较少，如果在发酵过程搅拌1～2次，可以促进产孢。在加入其他成分的配方中菌丝、产孢量均不及前者多，因此通过试验获得的最佳配方为：食用菌废料+麦麸+黄豆渣+无机营养元素。配方菌丝生长量孢子产生量食用菌废料+麦麸+无机营养元素+酱油渣++上表面零星分布黄绿色孢子食用菌废料+麦麸+无机营养元素+玉米芯++上表面零星分布黄绿色孢子食用菌废料+麦麸+无机营养元素+黄豆渣+++料体整个表面有黄绿色孢子食用菌废料+麦麸+无机营养元素+锯木屑+几乎没有黄绿色孢子产生食用菌废料+麦麸+无机营养元素+稻杆++上表面零星分布黄绿色孢子表10 木霉菌利用食用菌废料等的发酵配方筛选以筛选获得的食用菌废料培养基作为木霉菌发酵基质培养木霉菌，发酵过程中木霉菌在培养基质中的种群密度变化结果见表11，接种48h后，内部有菌落产生，第3～4天，整个基质全部被白色菌丝覆盖，随后，料体表面有黄绿色孢子大量产生，随着时间的推移，绿色木霉的孢子量增长迅速，到第6天培养料中孢子量达248×106个孢子/g，以后孢子量增长缓慢。因此为了缩短发酵时间，降低发酵成本，发酵6天就能达到预期的要求。重复孢子密度计数（×106个孢子/g）2天3天4天6天8天平均7.153.899.8248.7259.3表11 不同时期绿色木霉孢子种群密度变化迄今为止，利用木霉菌防治植物病害的研究已有近60年的历史，并且研究工作大多集中于木霉菌资源的筛选和作用机理方面，在木霉菌人工发酵方面的报道较少。我们通过对生防木霉菌培养条件的研究，进一步获得了其以麦粒为主及食用菌废料为主的固体发酵技术，可以用于绿色木霉的人工发酵，这将为绿色木霉菌产品的制剂化的生产提供技术支持。

戴尔电脑以其典型的直销模式获得巨大成功；淘宝的出现让沃尔玛们紧张；京东商城成为了国美的心腹大患；衬衫直销企业PPG则颠覆了所有传统服装企业的思维；京城四分之一的儿童奶粉已经是红孩子通过目录销售出去的；当当网已经成为全国前三的图书销售企业；而通过发卡加互联网预定酒店机票的携程也成为了行业巨无霸。短短几年，一批掌握了新营销手段的企业获得了巨大成功。在这样的背景下，传统企业也纷纷跃跃欲试。然而很多传统企业在尝试这些新营销方法的时候，却走入了误区，要么片面地理解了新营销方法，要么在用传统的广告营销观念去使用新营销方法。新营销手段的核心特征均为精准、可监控、强调投入产出比，无论是电视直销、目录营销、电话营销、数据库营销等等均如此，下面以新营销手段的代表——互联网营销为例说明。中国互联网络信息中心（CNNIC）2008年7月24日发布《第22次中国互联网络发展状况统计报告》。报告显示，截至2008年6月底，中国网民人数达2.53亿，大幅超过美国跃居世界第一位。此外，根据CNNIC统计显示，我国网民中接入宽带比例为84.7%，宽带网民数已达到2.14亿人，宽带网民规模为世界第一。同时，CNNIC宣布截至2008年7月22日，我国CN域名注册量也以1218.8万个超过德国.de域名，成为全球第一大国家顶级域名。CNNIC指出，上述三项重大突破初步显示出互联网大国规模。报告也表明，我国互联网发展日趋成熟，网络媒体、网络商务等互联网深层次应用比例大幅提升。CNNIC报告显示，中国网民规模继续呈现持续高速发展的趋势。与去年同期相比，中国网民人数增加了9100万人，是历年来网民增长最多的一年，同比增长达到56.2%。仅2008年上半年，中国网民数量净增量就达4300万人，并一举超越美国成为世界上网民人数最多的国家，这意味着中国互联网已经步入一个快速增长的轨道。预计到2012年，中国将有5.9亿网络用户。尽管与美国、日本等发达国家相比，目前国内互联网发展水平仍处于初级阶段，大多数应用还停留在获取信息和娱乐方面。而在美国，互联网已经被看作美国经济的发动机。但以目前中国拥有如此大基数的网民和每年仍在不断增长的趋势看，互联网对中国经济的影响会越来越大。这是大势所趋，可以相信未来互联网将渗透到国民经济和生活的方方面面。我们可以这样设想，未来没有所谓的传统企业和互联网企业之分，几乎所有的企业都会与互联网有关。在互联网普及大势所趋的背景下，如果企业老总们依然没有把网络营销战略纳入自己企业的整体经营框架中，在未来的竞争中，就已经落后一步。但是许多企业片面地认为网络营销就是建一个网站，或者单一的就是做搜索引擎关键词排名，亦或者就是门户广告，更有甚者甚至认为网络营销与传统营销是相互独立的，亦或者认为网络营销会取代传统营销。而上海PPG（批吉）服饰有限公司和报喜鸟集团的BONO服饰公司运用网络营销使企业销售效益获得了不同结果。2007年，随着PPG衬衫铺天盖地的直销广告，PPG只用1年的时间便完成了雅戈尔用十多年才达到的销量，整个服装行业为之震惊。而随后国内服装企业报喜鸟集团，开始涉水电子商务，其子公司宝鸟服饰推出了BONO直销服装品牌。公司邀请互联网资深人士，将原计划用于传统营销的费用拆出了数千万的资金投入到包括互联网、目录数据库营销上，开始了轰轰烈烈的新营销征程。集团认为这将是公司新的爆发点，也是传统企业在尝试新营销手段时通常采取的方法。然而在半年后，公司发现PPG的直销神话似乎不是那么容易复制，巨额的投资没有换来想象中的回报，反而由于削减了的传统营销的费用而使得原有业务停滞增长，聘请的高人还没有发挥作用便挂帅而去。于是报喜鸟开始重新审视自己的营销策略，反复思索自己的营销方式到底出了什么问题？同样通过网络、目录直销，为什么结果相差这么多？说到这里我们必须先要了解一下PPG，上海PPG（批吉）服饰有限公司成立于2005年，PPG的商业模式与戴尔理念类似：按需设计，直销客户，省去中间环节。PPG掌握品牌的款型设计，生产外包，由浙江一些民营企业贴牌生产，公司通过网络直销、电话订购和产品目录邮寄的方式销售产品，而省去批发、零售等若干传统环节，使消费者购买到的商品价格低于传统方式购买的价格。PPG将生产、物流环节都外包出去，仅保留设计、质量监控和直销的功能，公司没有一家实物门店。除了将上游外包出去，PPG还开发出一套企业信息管理系统，将上游的采购、生产与下游的仓储、物流、发送都用IT系统互联互通，使信息在这个闭环的供应链里得以快速流转。市场营销理论中，这种以市场营销为核心及时调整生产的理念被称作“即时生产”。这种方式使PPG的生产周期从传统制造企业的90天节省至30天内省下大笔库存资金和流转资金，边际成本随之降低。PPG衬衫2007年上半年位居服装类报纸广告投放第7位，增长速度为TOP10品牌之首。其每天销售的服装数量超过1万件，与国内市场占有率第一的雅戈尔衬衫每天1.3万件销量相差无几。对比PPG，BONO的分量显然重得多。BONO为宝鸟服饰运作，作为报喜鸟集团的子公司，宝鸟服饰成立于2000年，在上海松江和浙江温州都有生产基地，工厂占地300余亩，厂房面积20万平方米，10条一流生产流水线，员工1500多名，年产1000多万（件）套高档服装。聘请46年专业经验的意大利工艺师乔瓦尼·内利亚先生出任首席工艺师。在此之前，宝鸟服饰一直是国内最大的定制服装生厂商，其主要客户包括国内主要的银行、汽车等企业的制服。我们对比PPG，简单进行一下BONO的SWOT分析优势（strength）服装行业的成熟经验成熟的生产加工基地劣势（weaknes）无直销经验并非为直销模式而构建的业务流程母公司为上市公司业绩压力巨大机会（opportunity）利用直销模式带来巨大增长威胁（threat）其他竞争者加入因传统行业经验造成的决策失误从表面上来看，背靠报喜鸟集团的BONO相比PPG拥有无可比拟的巨大优势——由于有自己的制造基地，其服装的成本要低于将生产外包出去的PPG，此外报喜鸟集团的仓库等各种资源也都能为其所用，进一步给BONO带来成本上的优势。同时报喜鸟集团为BONO重金聘请了包括互联网资深人士在内的豪华团队。尽管有着豪华的管理团队和强大的靠山，但BONO的直销之路却出人意料的坎坷，到现在仍然徘徊在直销的边缘，销售额甚至不如淘宝网上的皇冠级别的个人卖家。归根结底，这都是传统行业在利用新营销手段时普遍存在的误区造成的。下面就BONO服饰公司的网络营销分析主要认识误区。很多企业认为，开展网络营销就是建设一个属于自己的网站。他们认为，在网站上放置一些产品介绍和宣传的资料、图片等内容就是网络营销了。但这只是开始网络营销的第一步，下一步的工作就是宣传自己，只有让人们知道有这样一个网站的存在，浏览者才会来。网站的推广往往需要较长的时间和和较多的资金，传统企业一定要做正确的预期，这可能是一项长时间的工作。这项工作既可以采用电视、报刊、户外广告牌等传统手段进行，也可以通过搜索引擎、门户网站等做广告进行，还可以把两种手段进行结合。但最好的方式肯定还是用网络推网络。很多企业错误地认为网页浏览者越多，广告的效果也越好。BONO建立了电子商务网站，并且投放了门户广告。但是BONO并不清楚每个门户每个不同的广告位置带来的效果，这样的投放可以说是用传统的媒体思路去做的网络广告。事实上网络广告的核心则在于选择正确的媒体和进行精密的监控，通过一系列的监控工具，并且正确的分析得到的数据，可以很清晰的掌握不同广告位置会有多少人点击广告，这些人又有多少人浏览，他们都看了什么样的产品，是否产生了注册，是否产生了订单等等，这样才能真正找到对自己有效果的广告。有人访问网站只是基本要求，但让访问者变成消费者更重要的是做好网站建设和网络卖场规划。BONO在这个环节上几乎没有任何的经验，其直销网站更像是传统的企业展示网站。这一点，我们可以理解为很多成功的传统品牌零售企业都十分清楚的终端店铺、卖场和柜台货架的规划布置，销售的流程将对销售成功率起决定性作用。并会把对卖场规划作为一个非常重要的工作来不断研究和改进，并积累了大量经验定律，甚至都有具体的操作手册，其核心也是把促成顾客购买为目标，以顾客为中心，从顾客的心理出发去设计、安排和制定各种视觉表现、商品陈列和导购流程等主要内容。完全以顾客为中心进行电子商务平台的建设和规划，是电子商务营销成功的前提和基础。能否真正以顾客也就是网络广告和推广所带来的潜在购买者的视角、感受为出发点来规划网络卖场当中的各个页面和流程环节，满足和方便顾客各种浏览、查找、购买的需求，最大限度地去避免在每一个页面和每一个环节上的顾客流失。换句话说，整个卖场访客到订购成功的转化比率（提单率）优劣高低就是造成了流量引入相近但是最后成交额相差巨大的最直接原因。就如同在现实中，同一条商业街上，同享相同的客流类似业态的商场，因为商品陈列布局，购物引导服务的差异也会有巨大差异一个道理。这是传统企业最容易忽视的一点，网络直销的运营体系有不同于传统的要求，网络直销的核心之一就是建立配套的快速反应链。第一，服务环节的快速反应。互联网直销的特点，就是当广告打出去的同时，订单立刻就会产生，因此需要有相应的服务支持，比如需要规模庞大的呼叫中心，在接到客户电话的几分钟内就要成功完成销售。企业采取网络直销必须以高效率、低成本的物流体系为前提条件。物流功能的实现有两种方法：一是企业自建物流网络，这对于一个产品销售范围覆盖广大地理区域的企业来说显然在经济上是不可行的，这一方法必然带来企业物流成本急剧上升，从而使企业产品丧失价格优势；二是采用第三方物流，由第三方专业物流公司负责商品与生产企业向最终客户的配送，如何控制物流也将是企业面临的很大挑战。第二，产品环节的快速反应。比如，戴尔公司运用“按订单生产，网络直销”的经营思想，取得了PC销售全球第二的优秀业绩，可以说是网络营销取得成功的典范。戴尔的成功，除了依靠其功能强大的网络订单系统以外，其空前柔性的生产线功不可没。因此，传统企业在应用网络营销时，一定要经过仔细的思考和部署，同时，在应用网络营销时，也要和传统营销相结合，而不能单纯使用。

哈密瓜细菌性果斑病（Bacterial Fruit Blotch，BFB）是由Acidovorax avenae subsp.citrullii，（Aac）引起的一种毁灭性的瓜类病害，该病菌已经成为了全球瓜类生产中巨大的威胁。中国至今已有12个省相继有该病的报道。目前，该病因其无免疫品种和特效的化学农药，轮作倒茬存在局限性等原因，有效防治该病仍然是一个难题。近几年已有人报道利用生物防治BFB来改变目前防治现状，但多以生防细菌为主（卢云等，2007；Fessehaie和 Walcott，2004），利用拮抗酵母防治瓜类细菌性果斑病国内外未见有报道。2006～2007年，本实验组从湖北武汉、新疆石河子、河南信阳等地采集不同植物叶片、土壤样品进行了酵母菌的分离，获得了463菌株。通过含菌平板测定拮抗性，表明有29个酵母菌菌株对Aac有拮抗作用，占总分离酵母菌株的6.3%，抑菌圈半径大于5mm的有13个。在温室盆栽试验中，将其中的13个酵母菌菌株的菌体悬浮液（1.2×108菌体/ml）分别喷雾接种于哈密瓜苗四叶期的植株上，24h后接种Aac菌体悬浮液（1.0×108cfu/ml），处理后的瓜苗放入温棚内，棚内温度为（32±2）℃，相对湿度大于90%。接种5天后调查各处理哈密瓜苗的发病情况。试验结果表明：菌株Y06109、Y07039和Y0709在哈密瓜子叶或第一片真叶上对BFB具有显著的防治效果。3株酵母菌处理的哈密瓜子叶发病率分别为33%、33%和76%，对照为96%，防效分别为65%、65%和21%。第一真叶发病率分别为14%、17%和10%，对照为96%，防效分别为80%、84%和90%。这些研究结果表明，拮抗酵母的一些种类或菌株对BFB具有一定的生防潜力。对于筛选出的具有抑菌作用的酵母菌株，将进一步测定其田间防病效果，并对其显著防效的拮抗酵母进行种类鉴定。

重寄生菌盾壳霉（Coniothyrium minitans）是核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）的一种重要生防菌。这种生防菌在其自然生境—土壤中寄生致腐核盘菌菌核，从而达到阻断核盘菌侵染循环及防治核盘菌的目的。为了充分挖掘盾壳霉的防病潜力，必须了解盾壳霉在土壤中的扩散规律。在以前的研究中，获得了一株对杀菌剂农利灵表现高度抗性的突变菌株SV-5-2，以之为基础，建立了一种选择性分离盾壳霉的方法（Yang等，2007）。本研究采用选择性分离的方法探讨了盾壳霉在5种不同土壤（黄棕壤、红壤、潮土、黑土、沙子）中的垂直扩散和水平扩散的动态规律。垂直扩散的研究结果表明：盾壳霉的分生孢子可以随水分在5种不同土壤中垂直扩散到20cm深处。盾壳霉的种群数量随深度的增加而呈数量级减少。例如，在40%含水量黄棕壤中扩散24h后，土壤表层（0～2cm）盾壳霉的数量为4.0×107cfu/g干土，而底层盾壳霉的数量为（16～20cm）则为0.6×103cfu/g干土。研究还发现：盾壳霉在沙子中的垂直扩散效果最好。这可能与土壤中的含沙量、黏性和吸附性有关。同时盾壳霉在40%和60%含水量（绝对含水量）的土壤中的垂直扩散没有显著差异（P>0.05）。水平扩散的研究结果也表明：盾壳霉的分生孢子可以随水分在4种不同的土壤（黄棕壤、红壤、潮土、黑土）中水平扩散距离为10cm，在沙子中水平扩散距离为20cm。盾壳霉的种群数量随距离的增加而呈数量级减少。例如，在黄棕壤中，距离接种点0～5cm处盾壳霉的数量为为4.4×106cfu/g干土，在5～10cm距离中下降到1.3×104cfu/g干土，超过10cm距离的土壤中检测不到盾壳霉。盾壳霉在沙子中的水平扩散效果明显好于其他4种土壤（黄棕壤、红壤、潮土、黑土），这可能与土壤中的含沙量、黏性和吸附性有关。盾壳霉能随水分垂直扩散20cm深，水平扩散10cm远，基本覆盖了土壤的耕作层和油菜种植的行间距。这为田间通过浇水使用盾壳霉孢子进行土壤处理来寄生核盘菌菌核，从而防治菌核病提供了理论依据。

虽然应用化学杀菌剂在一定程度上可控制病害的发生，但目前已有越来越多的化学杀菌剂因“3R”现象（Resistance、Resurgence、Residue）而被禁止用于果蔬采后处理。因此，迫切需要寻求新的安全高效的防腐技术以逐步取代化学杀菌剂在果蔬防腐上的使用[1]，因而研究无公害采后病害防治措施势在必行。大量研究表明，植物内生菌除可以给植物提供所需要的营养物质及一些激素外，还参与植物的防卫功能，增强植物抗逆境、抗病害、抗动物危害的能力[2～4]。利用内生菌防治植物病害是个尚待开发的微生物新资源，植物学家、植物病理学家、微生物学家、生态学家及药物学家对此广泛关注和重视。黄皮[Clausena lansium（Lour.）Skeels]属芸香科（Rutaceae）亚热带常绿果树。原产华南，有1500多年栽培史。果实酸甜可口，风味独特，营养价值高且具有保健及药用价值，是深受人们喜爱的特产果品[5]。近年来，我国黄皮栽培面积不断扩大，产量逐年提高。但黄皮果实采后极不耐贮藏，在自然条件下极易变软腐烂，其中炭疽病是造成采后腐烂的重要原因之一，而极大地制约了黄皮果实的销售[6～8]。本研究拟对黄皮果实炭疽病病原菌的鉴定，并对无病果实果皮中存在的拮抗内生菌进行分离筛选，为黄皮果实炭疽病的生物防治打下基础。黄皮果实：黄皮病果来自院校市场，无病果实采自中国热带农业科学院试验场五队。1.2.1 黄皮果实炭疽病病原菌分离鉴定1.2.1.1 黄皮果实炭疽病病原分离、纯化与形态学观察 采用组织分离法对典型黄皮果实炭疽病病果进行病原菌分离、纯化，获得菌种，并进行单胞分离、纯化、保存备用。将纯化的菌种移至PDA平板上28℃恒温培养，记录病原菌的培养性状，显微观察菌丝体形态、孢子形态大小等。1.2.1.2 黄皮果实炭疽病病原致病性测定 将上述纯化的病原菌随机选取10个菌株在PDA培养基上培养7天后，采用刺伤和无伤两种方式进行致病性测定。每菌株刺伤和无伤接种时均接种5个果实，以无菌PDA培养基块接种为对照，重复3次，接种点用湿脱脂棉保湿24h后，将接种的病原菌和培养基清除，逐日观察发病情况。1.2.1.3 黄皮果实炭疽病病原菌鉴定 经分离纯化后获得的病原菌进行显微观察和采用病组织切片直接显微观察病原菌的形态特征，根据形态学鉴定其种类[6]。1.2.2 黄皮果实炭疽病拮抗内生菌筛选1.2.2.1 黄皮果实内生菌的分离纯化 将无病黄皮果实果皮剪成若干小块，经表面消毒与无菌水漂洗后，一部分组织块直接接种于PDA、NA和GSA培养基上，取剩余的材料1g加入10ml灭菌水研碎混匀，用50μl分别涂布于NA和GSA培养基上，28℃下恒温培养，逐日观察内生菌的生长情况，将不同形态的菌落及时转接到相应的斜面培养基上，并统一编号后于4℃保存备用。1.2.2.2 拮抗菌筛选 采用平板对峙法[9]进行对黄皮果实炭疽病病原菌具有拮抗活性的内生菌筛选。将培养7天的病原菌菌丝块（Φ=5mm）接种于PDA平板中央，采用十字交叉法在离菌块中心40mm处接种分离获得的内生菌，每菌株接种4点，以接种纯PDA培养基或NA培养基为对照，28℃下恒温培养3天后，分别测量对照及接种内生菌后的病原菌菌落直径、接种内生菌后的抑菌带宽度、显微观察接种内生菌后的病原菌边缘菌丝体及孢子的变化，计算平均抑菌率及平均抑菌带宽度、显微观察病原菌有无变化。1.2.3 拮抗菌鉴定 对5株具有强拮抗活性的内生菌进行鉴定。内生菌的培养特征、形态特征及生理生化特性测定采用东秀珠[10]的方法进行测定，试验结果参考《伯杰细菌鉴定手册》（第八版）[11]及《常见细菌系统鉴定手册》[10]鉴定其种类。2.1.1 黄皮果实炭疽病症状 黄皮果实感病初期，果皮出现水渍状褐色小点，后扩展为圆形、稍凹陷的褐腐状病斑，湿度大时病部表面产生橘红色孢子堆，果汁从病部裂口处溢出。2.1.2 病原菌培养特征及形态特征 经分离纯化，从病健交界处分离获得的病原菌基本表现一致的培养特征，在PDA平板培养基上，菌落初为白色，后变为灰白色，气生菌丝绒毛状，后期产生橘红色黏孢团。直接从黄皮果实病部的橘红色孢子堆镜检观察，分生孢子盘内产生大量褐色有隔刚毛，产孢细胞圆筒形，无色，分生孢子无色单胞，圆筒形，两端钝圆，内含物颗粒状，对分离纯化培养的病原菌进行镜检，菌丝无色，有隔，分生孢子无色，单胞，圆筒形，两端钝圆，大小9.5～16.7（13.6）μm×3.2～5.5（4.2）μm，具1～2个油球。分生孢子萌发后遇硬物则在芽管端部产生一褐色、近圆形或不规则形附着胞。2.1.3 病原菌鉴定 根据病原菌的形态特征、培养特性和致病性测定结果，参考有关文献[8，12～13]，将引起黄皮果实炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）。先后12批次从健康黄皮果皮组织上分离获得内生菌532株，其中真菌169株，占总分离物的31.77%；细菌363株，占总分离物的68.23%；但在整个试验中，未分离获得放线菌（见表1）。123456789101112合计百分比（%）内生真菌1212139181814171713101616931.77内生细菌35295616212828314323223136368.23内生放线菌00000000000000合计474169253946424860363247532表1 不同批次分离的内生菌数量2.2.1 拮抗内生菌的筛选 根据平均抑菌率及平均抑菌带宽度、显微观察病原菌菌丝体及孢子有无变化的测定结果看，分离获得的169株内生真菌对黄皮炭疽病病原菌均无拮抗作用，对内生真菌与病原菌交界处的病原菌进行观察，未发现病原菌菌丝体或分生孢子有异常变化。而在分离获得的363株内生细菌中，105株对黄皮炭疽病病原菌有不同程度的拮抗作用，占内生细菌的28.93%（见表2）。对峙培养3天后，5株内生细菌的平均抑菌率大于80%或抑菌带宽度大于10mm，分别为B98、B131、B232、B247和B294。拮抗活性无拮抗活性弱拮抗活性中度拮抗活性强拮抗活性菌株数25852485比例（%）71.0714.3313.221.38表2 内生细菌对黄皮炭疽病菌的拮抗活性5株内生细菌的菌落形态及经染色后观察的菌体形态见表3，生理生化特征见表4。依据参考文献《伯杰细菌鉴定手册》（第八版）[11]和《常见细菌系统鉴定手册》[1]，5菌株初步鉴定为：B98为荧光假单胞杆菌Pseudomonas fluorescens Migula，B131、B232、B247和B294均为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（Ehrenberg）Cohn。菌株菌落特征形状颜色边缘表面透明度可溶性色素革兰氏染色形态鞭毛染色芽孢运动性B98圆形淡黄色整齐光滑不透明黄绿荧光色素-杆状单根极生-+B131圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B232圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B247圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B294圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++表3 黄皮拮抗内生菌的培养特性及形态学菌株厌氧生长氧化酶接触酶明胶液化淀粉水解碳源利用D-葡萄糖L-阿拉伯糖D-木糖D-甘露糖柠檬酸盐葡萄糖产酸B98-+++-+++-++B131--+++++++++B232--+++++++++B247--+++++++++B294--+++++++++石蕊牛奶丙酸盐硝酸盐甲基红V-P反应pH值5.745℃生长吲哚产生H2S产生7%NaClB98还原、胨化++--+--++B131还原、胨化-+-+++--+B232还原、胨化-+-+++--+B247还原、胨化-+-+++--+B294还原、胨化-+-+++--+表4 黄皮拮抗内生菌的生理生化特征通过对病害症状的观察、病原菌的分离纯化、形态学鉴定及致病性进行测定，确定引起黄皮果实炭疽病的病原菌为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），该病原菌是造成黄皮果实腐烂的主要原因之一。通过对无病黄皮果实果皮组织中的内生菌研究表明，果皮中存在丰富的内生菌资源。大量的内生菌与黄皮的生长发育、抗病性等之间的关系有待进一步研究。通过对分离获得的内生菌与黄皮果实炭疽病病原菌（C.gloeosporioides）进行对峙培养，28.93%的内生细菌具有拮抗作用，可见在黄皮果实组织中存在对该病原菌有抑制作用的拮抗菌具有多样性，这可能是黄皮果实抗病力较强的重要原因之一，为开辟黄皮炭疽病的生物防治提供了重要的原材料，为黄皮的无公害生产打下了基础。