植原体（Phytoplasma），原称 Mycoplasma-like Organism（MLO），是一类无细胞壁、不能人工培养、存在于植物筛管内的专性寄生菌。植原体主要依靠叶蝉等从韧皮部取食的半翅目昆虫传播，也可由菟丝子和嫁接等传播，能够引起植物丛枝、黄化、簇生、矮化、顶枯等症状[1]。我国已报道的植原体病害约有70多种，造成了巨大的经济损失[2]。传统上，主要是根据寄主的种类及其症状等生物学性状和介体昆虫的特性对植原体进行鉴定和命名。但该方法非常复杂和费力，难以鉴定多种植原体复合侵染引起的病害，经常导致片面甚至错误的结论[3]。近年来，随着分子生物学的迅速发展，核酸杂交、RFLP、PCR等技术的广泛应用极大推动了植原体分子鉴定等方面的研究。Lee等[4]根据植原体的16S rRNA基因的RFLP分析将植原体34个典型的株系划分为14个组32个亚组，其中翠菊黄化组（16SrⅠ）变异最大、分布最广。Schneider等[5]对翠菊黄化组、stolbur组和X-disease组的tuf基因进行RFLP分析，认为tuf基因可以作为划分植原体的依据，并且对植原体的检测可以达到单拷贝基因的水平。Marcone等[6]将翠菊黄化组划分为6个亚组。2004年，国际比较菌原体学研究计划署（IRPCM）将植原体划分为17个组，24个种，至少40个亚组，并制定了相应的分类标准[7]。本研究利用巢式PCR对表现丛枝症状的绣线菊和玫瑰进行植原体分子检测，并将克隆到的16S rRNA基因、延伸因子tuf基因及核糖体蛋白基因序列与已知植原体16Sr各组中植原体序列进行同源性比较分析，初步明确了两分离物的分类地位。表现丛枝、黄化、小叶和顶枯症状的绣线菊样品采自山东省青州市；表现叶片畸形、丛枝、顶枯症状的玫瑰样品采自山东省平阴县玫瑰研究所；克隆载体pMD18-T、PCR产物回收试剂盒、限制性内切酶及其他酶类等分子生物学试剂产品均购自TaKaRa公司。以有病害症状的玫瑰为接穗，通过芽接的方法嫁接到5株无症状的玫瑰上。嫁接后放置于无虫温室中，5～7周后观察症状。取表现典型症状的玫瑰韧皮部组织（2mm×2mm），放入3%戊二醛、1%四氧化锇中双重固定，乙醇（10%～70%）、丙酮（0～100%）系列脱水，Epon 812包埋，超薄切片后醋酸铀和柠檬酸铝双染色，在JEM-1200 X型透射电镜下观察。提取方法按参照文献[8]的方法进行，总DNA于-20℃保存备用。参照文献[9，10]所报道的植原体16S rRNA基因通用引物R16mF2/R16mR1进行PCR扩增，然后以此扩增产物为模板用R16F2/R16R1进行巢式PCR（表1）。以提取的玫瑰丛枝植原体的总DNA为模板，参照Schneider等[11]和Lim等[12]报道的延伸因子tuf基因、核糖体蛋白基因的引物对进行PCR扩增（表1）。引物名称Primername引物序列Primersequence退火温度TmR16mF25′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′60R16mR15′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′60R16F25′-ACGACTGCTAAGACTGG-3′55R16R15′-TGACGGGCGGTGTGTACAAACCCCG-3′55fTufu5′-CCTGAAGAAAGAGAACGTGG-3′50rTufu5′-CGGAAATAGAATTGAGGACG-3′50rpF15′-GGACATAAGTTAGGTGAATTT-3′55rpR15′-ACGATATTTAGTTCTTTTTGG-3′55Table 1 Primers used in this research to amplify 16S rRNA gene tuf gene and rp genePCR产物回收后与pMD18-T连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取筛选平板上的白色菌落培养，提取质粒，经PCR和酶切鉴定为阳性的重组质粒送上海英骏生物技术有限公司测序。将所得DNA 序列输入GenBank进行Blast检索，采用DNASTAR和MEGA3.1软件对所得到的核苷酸序列与GenBank中收录的相应基因的核苷酸序列进行比较和分析，并构建系统进化树。感病绣线菊植株表现为节间短缩，部分枝条丛生，叶片黄化、变小畸形、顶部嫩梢枯死，植株矮化。感病玫瑰植株表现典型丛枝症状，叶片变小畸形、顶部嫩梢枯死（图1）Figure 1 Symptoms of spiraea witches' broom and rose witches' broom将健康玫瑰嫁接到表现病害症状的玫瑰上，5～7周后，接穗新长出的嫩枝表现黄化、丛枝、畸形等症状。对玫瑰丛枝植原体进行电镜超微结构观察，在嫩茎韧皮部筛管中观察到典型的植原体。其主要形态为圆形和椭圆形，有明显的单位膜结构，直径为300～600nm，胞内可见核糖体蛋白体颗粒和DNA细链。以表现丛枝、叶片黄化等症状的绣线菊总DNA为模板，用巢式PCR扩增其16S rRNA基因，得到长度约为1.2kb的片段。以玫瑰丛枝植原体的总DNA为模板，用PCR扩增16S rRNA基因、tuf基因和核糖体蛋白基因，分别得到了约1.5kb、830bp和1.3kb的目的片断，与预期大小一致，表明植株中存在植原体。将此植原体分离物分别暂命名为绣线菊丛枝植原体（spiraea witches'broom，SWB）、玫瑰丛枝植原体（rose witches'broom，RWB）。通过测定2个PCR克隆到的片段的序列，确定了SWB的16S rRNA基因含有1236个核苷酸，G+C的含量为47.09%；RWB的16S rRNA基因含有1432个核苷酸。GenBank登录号分别为EF176608、EF199938。将两分离物与GenBank中17个植原体分离物的核苷酸序列进行比对和系统进化分析。从系统进化树中可以看出，两个分离物全部聚类到16SrⅠ组中，与16SrⅠ-B亚组的西方翠菊黄化植原体、马里兰翠菊黄化植原体及16SrⅠ-D亚组的泡桐丛枝植原体聚集为一簇。两个分离物与植原体16SrⅠ组中各亚组的分离物核苷酸同源性均达到99%以上，其中SWB与16SrⅠ-B亚组中的西方翠菊黄化植原体（SAY）同源性高达99.6%，与本研究的另外两个分离物RWB、PaWB的同源性为99.7%和99.8%。而RWB分离物与PaWB的同源性最高为99.9%，与植原体僵顶病组（Stolbur group）（16Sr Ⅻ）的草莓花瓣变绿症（Strawberry virescence，AY377868）植原体核苷酸的同源性为95.8%，与其他各组的核苷酸同源性为89.5%～92.8%。说明SWB、RWB分离物属于西方翠菊黄化植原体（图2）。Figure 2 Phylogenetic tree based on 16S rRNA nucleotide sequence with maximum-likelihood method in MEGA3.1 software package经序列测定，确定玫瑰丛枝植原体的延伸因子（EF-Tu）tuf基因序列长度为810个核苷酸，G+C的含量为37.5%，核糖体蛋白基因含有1174个核苷酸，G+C的含量为35.4%。将玫瑰丛枝植原体分离物与GenBank中17个植原体分离物的延伸因子（EF-Tu）tuf基因进行比对，结果表明：玫瑰丛枝植原体与植原体各个组的核苷酸同源性为70.4%～99.6%，该分离物与16SrⅠ组中各亚组的分离物核苷酸同源性为96.3%～99.6%，其中与16SrⅠ-D亚组中的泡桐丛枝（PaWB）同源性高达99.6%，该分离物与植原体其他组中的僵顶病组（Stolbur group）（16Sr Ⅻ）核苷酸同源性最高为88.6%，与其他各组的核苷酸同源性为70.4%～88.6%。将玫瑰丛枝植原体分离物与GenBank中21个植原体分离物的rp基因进行比对，结果表明：玫瑰丛枝植原体与植原体16SrⅠ组中各亚组的核苷酸同源性为96.7%～99.4%，其中与16SrⅠ-D亚组中的泡桐丛枝（PaWB）同源性最高为99.4%，从而表明该分离物属于Candidatus Phytoplasma asteris。本研究利用巢式PCR从表现丛枝症状的绣线菊中扩增到了1236bp的片段。序列测定和比较的结果表明，与这两种病害相关的植原体均为西方翠菊黄化植原体。前人对植原体侵染绣线菊研究较少，国外仅报道由植原体‘Ca.Phytoplasma pruni'引起的绣线菊矮化病[13]。我们采集了表现丛枝、顶枯症状的玫瑰和表现丛枝症状的泡桐，经PCR检测表明其病原为植原体。序列分析表明，两分离物的16S rRNA基因、延伸因子（EF-Tu）tuf基因和核糖体蛋白基因核苷酸同源性都在99.9%以上，从而确定玫瑰丛枝植原体与泡桐丛枝植原体属同一病原物，属于西方翠菊黄化植原体。尽管翠菊黄化组植原体的报道多在欧洲和美国，但本文是第一次中国关于植原体侵染玫瑰的报道。与2001年和2003年Kaminska M等[14，15]感病玫瑰表现畸形和顶枯不同的是，在本研究中的感病玫瑰表现出丛枝和顶枯的症状。有趣的是，在本研究中的玫瑰、泡桐分离物是在同一玫瑰园内得到，两者之间仅相隔数米，而在同一玫瑰园的其他地方也发现植原体侵染的玫瑰。在调查中发现感病植株多出现在新嫁接的玫瑰上，长势强的玫瑰发病较少，与表现丛枝症状泡桐较近的地块发病严重，其他地块发病较轻。在根据16S rRNA基因进行序列比对及构建系统进化树时发现，两个分离物与16SrⅠ-B亚组的西方翠菊黄化植原体、马里兰翠菊黄化植原体及16SrⅠ-D亚组的泡桐丛枝植原体在构建的系统进化树中聚集成一簇。Lee等[16]认为在基于16S rRNA基因进行序列比对时，16SrⅠ-D亚组的泡桐丛枝植原体会聚集到16SrⅠ-B亚组中，本研究结果与此相符。根据国际比较菌原体学研究计划署（2004）的建议，泡桐丛枝植原体、SAY植原体等都属于同一个种，‘Candidatus Phytoplasma asteris'。

猕猴桃的树形有单层和多层、单主干和多主干、双主蔓和多主蔓等多种形式，一般配合架式来定。在大棚架和 “T” 形架上，整形的方式基本相似。单主干比多主干好，结构简单，便于培养和控制。从生长、结果及修剪的方面看，以单主干双主蔓一字形为好，是目前猕猴桃生产中重点推广的树形。下面以单主干双主蔓一字形为例介绍树形及培养方法。树体结构简单，骨干枝一目了然，整形快，修剪简单，易于被果农掌握，用工量少，适于大面积推广。同时，由于树体光照条件好，架面整齐，也有利于果实品质的提高。采用单主干双主蔓一字形树形时，主干高1.7～1.8米。主干顶部分生两个永久性主蔓，水平固定在架面上，“T” 形架与行向垂直绑缚，大棚架沿行向伸展。主蔓长度根据株距和行距确定。主蔓上着生结果母蔓，每隔25～30厘米留一个，在两侧均匀分布，同侧结果母蔓间距50厘米以上。结果母蔓与主蔓垂直绑缚，呈羽状或鱼刺状排列。萌芽后抽生的结果枝，向着生母蔓的斜前方绑缚。在苗木定植后，从发出的新梢中选择一个生长最健旺的枝条作为主干培养，用竹竿固定，保证直立向上生长，当年成干。当年冬季修剪时，将主干在合适位置进行短截，其余枝条全部从基部疏除。翌年春季，从当年发出的新梢中选择两个长势健壮的，分别向两侧引缚，培养成主蔓。根据架面大小，在适当位置摘心，促发二次枝，用以培养结果母蔓。冬季修剪时，只保留主蔓及部分结果母蔓，其他枝条全部疏除。在加强肥水管理及枝梢控制的情况下，架面较小的 “T” 形架，在翌年时即可成型，第三年开始结果。架面较大的棚架，在第三年继续培养主蔓、选留结果母蔓，直至成形。采用这种技术，树体成形时间较常规管理提早2～3年，结果早，进入盛果期早，产量高。冬季修剪是从落叶以后到翌年萌发前进行的修剪，主要是利用短截、缩剪、疏剪等基本技法，使幼年树尽快成形，适期结果；成年树生长旺盛，丰产稳产；老树能更新复壮，延长结果年限。修剪时首先将各部位的细弱枝、枯死枝、病虫枝、过密的大枝蔓、交叉枝、重叠枝、竞生枝及下部无利用价值、生长不充实的发育枝等一律疏除，使生长健壮的结果母蔓均匀地分布在架面上，形成良好的结果体系，然后对不同类型的枝蓃采用不同的修剪方法。冬季修剪一般是从12 月到翌年2 月进行，但不同树龄的树应区别对待。成树、壮树不宜过早或过晚，一般在大的严寒过后至翌年树液流动前进行，以免消耗养分削弱树势。幼树、旺树可提早或延迟修剪，即落叶前或萌发后进行，以达到人为造成养分消耗、缓和生长势的目的。初结果树一般枝条数量较少，主要任务是继续扩大树冠，适量结果。冬剪时，生长在主蔓上的细弱枝应剪留2～3芽，以促使翌年萌发出旺盛的枝条；长势中庸的枝条修剪到饱满芽处，以增强长势。主蔓上的去年结果母枝如果间距在25～30 厘米，可在母枝上选择一距中心主蔓较近的强旺发育枝或强旺结果枝作更新枝，将该结果母枝回缩到强旺发育枝或强旺结果枝处；如果结果母枝间距较大，可以在该强旺枝之上再留一良好发育枝或结果枝，增加结果母枝数量。徒长性枝条主要发生于以下四个部位：一是根际萌蘖枝会扰乱树形，大量消耗树体营养，造成树冠郁闭，可多从基部删除。二是在大剪 （锯） 口下，多数删除；但是若有空间伸展，可作为预备枝，留3～4个饱满芽短截，促使翌年抽生1～2个充实的营养枝，培养成骨干枝或良好的结果母枝。三是发生于连续大量结果后，衰弱下垂的多年生侧蔓的后部背上，可作为更新枝，首先回缩掉衰老部分，再对徒长枝短截，通常保留5～7个芽。四是发生于上年修剪过量的营养枝、徒长性结果枝上，可留6芽以上短截，以降低其极性，缓和枝势 （图4-1A）。绝大多数的发育枝都可以成为很好的结果母枝。翌年会在其上抽生结果枝，若位置适当，应加以保护与利用。可根据品种长势及结果习性进行短截：中华猕猴桃、软枣猕猴桃长势较弱，一般留6～8芽短截为宜；美味猕猴桃长势较强，多留8～10芽短截。如果发育枝的数量较多，为保持翌年的产量，可将一部分枝条留3～4芽短截作为预备枝 （图4-1B）。在枝量不足的情况下，可以利用当年的二次或三次健壮的发育枝 （副梢） 作为结果母枝，不必全部疏去。各类结果母枝的剪留，要根据品种、整形方式、架式、树龄、枝条长势强弱而定。幼树枝梢较少，为扩大树冠，母枝可留长些；结果盛期树母枝宜留长；衰弱树和老龄树部分母枝应重截。一般美味猕猴桃品种结果母枝蔓修剪长度宜留长，中华猕猴桃品种修剪宜留短；中、长枝蔓结果品种 （如豫皇1 号、豫皇2号、海艳、晚红、金硕等） 宜留长，中、短枝蔓结果品种 （如湘吉红、天源红、红宝石星、翠香等） 宜留短；棚架式架面较大宜留长，架面较小的 “T” 形架或篱架树宜留短。图4-1 徒长枝和发育枝的冬季修剪方法猕猴桃树体的结果部位结果后，便成为盲节而不能继续抽生枝条，只有结果部位以上的节位才有腋芽，翌年能抽生枝条。所以，修剪时不能在结过果的节位短截。对其他已结过果的枝条和营养枝，应进行回缩或疏除，其长度以不与其他枝蔓缠绕或不垂到地面为宜。结果枝的2～7节叶腋都能坐果。从植物学角度讲，花、果是一种适于生殖的变态枝。所以猕猴桃结果枝的着花节位的芽实质上已抽生成花果，此后变为盲节。而生长健壮的结果枝，往往在盲节以上都能形成混合花芽，成为翌年的结果母枝。因此，冬剪时除对太密的 （枝间距在30 厘米以内）、衰弱的加以疏除外，保留的结果枝一般都在结果部位 （盲节） 以上留数芽进行短截，以备翌年再抽生结果枝结果。徒长性结果枝，一般在结果部位以上剪留4～5个芽；长果枝在结果部位以上剪留3～4个芽；中果枝在结果部位以上剪留2～3 个芽；短果枝留1～2个芽或不修剪，让其连续结果，哀弱后再从基部剪去 （图4-2）；而各种枯弱枝、病虫害损伤枝一律需要疏除。短截时，在剪口芽上留3～5厘米，以防止剪口芽抽干。图4-2 结果枝的冬季剪法进入结果期的植株，除基部老蔓有时抽生徒长枝外，所有新梢都很容易成花，发育为结果母枝，所以修剪时要注意控制其密度，避免负载过量。在10平方米的范围内，植株一般保留12个结果母枝，抽生54～60个结果枝，平均每个结果枝结果3个，共结果162～180个为宜。如留枝过多或不进行修剪，则所抽生的枝条节间短、叶片小，果个多、病虫重、质量差，结果部位外移，枯枝现象严重，经济效益低下；如修剪过重，则抽枝旺，成花少，产量也低。猕猴桃果实成熟脱离后，多数品种的果柄保留在结果枝上。利用这一点，可区别什么是营养枝，什么是结果枝，哪株是雌株，哪株是雄株。猕猴桃枝蔓的自然更新能力很强，从结果母枝中部或基部常会发出强壮枝条，在光照和营养等方面占据优势，使得翌年原结果母枝在此部位往上的生长势明显变弱，发出的枝条纤细，其上所结果实个小质差，甚至出现枯死现象；同时，还会出现使树体枝梢生长量加大、节间变长、结果部位外移等不良后果。如不能及时回缩更新，结果枝和发育枝会距离主蔓越来越远，导致树势衰弱、产量低、果实品质差等现象。所以，在盛果期以后及时对枝蔓进行更新修剪，是盛果期后猕猴桃冬季修剪的一项重要任务。冬剪时可将老结果枝回缩到新选留的结果母枝，达到更新的目的。若结果母枝基部有生长充实健壮的结果枝或营养枝，可将其回缩到健壮部位。若结果母枝较弱或分枝过高，则应从其基部有潜伏芽的部位剪除，剪截部位应掌握在芽上3厘米处，促使潜伏芽萌发，选择一个健壮的新梢作为翌年的结果母枝。对多年生枝蔓更新修剪时，要根据其衰老部位，采取局部或全株更新。猕猴桃从多年生枝上萌发的新梢一般当年不能结果，因此结果母枝更新量以1/4～1/3为好。长势弱的短果枝型品种，如红宝石星、天源红，结果母枝或已结过果的枝条年年更新；长势强的长果枝型品种，如海艳、金硕，结果母枝或结果枝2年更新1次。通过更新修剪，可使果树达到年年丰产、老年树复壮并延长结果年限的目的。夏季修剪要剪去徒长枝、衰弱枝、过密枝、病虫枝，适当短截长果枝，以保持果园通风透光。一般控制叶果比约为4 ∶ 1比较适合。对雌株要进行3～4次综合性的夏季修剪，对雄株进行2～3次。夏季修剪主要包括以下措施。（1） 抹芽从萌芽期开始进行。对发生部位不合理、生长不正常的的萌芽，砧木上的萌蘖等随时发现随时抹除。一个结果母蔓上每隔15～20厘米留1个结果枝，共留4～6个，多余的全部抹除。抹除架面外围所有的营养枝芽，在内膛抹除瘦弱芽、叶簇芽、过密芽。外围结果枝摘心后发出的二次枝 （芽） 也要及早抹除。（2） 疏枝抹芽未能完成的定梢工作，待新梢长至20厘米左右、花序出现后，再及时疏除细弱枝、过密枝、病虫枝、双芽枝及徒长枝等。（3） 摘心6月上中旬开始，对未停止生长、顶端开始弯曲的强旺枝进行摘心，使之停止生长，促使芽眼发育和枝条成熟。一般隔半个月左右摘心1次。预备枝摘心可稍迟，等顶端开始弯曲、生长势变弱时再摘心。（4） 绑蔓生长季绑蔓，主要是针对幼树和初结果树的长旺枝。在新梢生长旺盛的夏季，每隔2周左右就应全园进行一次，将新梢生长方向调顺，不重叠交叉，在架面上分布均匀。绑缚不能过紧，以免影响加粗生长。雄株冬季不作全面修剪，修剪一般较轻，以多留花穿，翌年花期能为雌株提供大量花粉。保留所有生长充实的枝，稍做轻短截。对留作更新的枝重短截，多年生衰弱枝进行回缩复壮。疏除细弱枯死枝、扭曲缠绕枝、病虫枝、交叉重叠枝及萌蘖徒长枝。翌年春季落花后立即修剪。选留强旺枝条用于成花，将开过花的枝条全部回缩更新，再适当疏除过密、过弱枝条，以缩小树冠，不与雌株争夺空间。

核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）是一种世界性分布的重要真菌病害，能够侵染75个科450多种的植物。核盘菌在作物的各个生长期都能引起发病，并造成严重危害。2006年，核盘菌已经完成了全基因组测序，但是由于缺乏一个高效的遗传转化体系，其分子生物学方面的研究仍然十分滞后。Jeffery等（2001）利用PEG介导的方法对核盘菌的原生质体进行了转化，并获得成功，而其他人在重复试验时未得到结果。Richard等（2006）利用农杆菌介导对核盘菌的子囊孢子进行转化，开辟了核盘菌介导转化的新途径，但是在实验室里诱导产生子囊孢子十分困难，限制了这种转化方法的使用。江明等（2006）报道用核盘菌菌丝为材料，建立了农杆菌介导转化核盘菌技术体系，但该方法转化效率低，整个操作过程易被杂菌污染。为此，我们对此方法进行了改进，获得了较理想的效果，并降低了污染频率，现简要报道如下：将核盘菌在PDA平皿上活化，移至新PDA平皿上培养2天，用打孔器（φ 6mm）于菌落边缘打取菌丝块。将菌丝块与带有转化载体的农杆菌置于铺有玻璃纸的共培养基上于20℃培养室黑暗培养2天。将菌丝块移走后，将带有菌丝的玻璃纸平铺于无菌的培养皿中，加入15～20ml含有潮霉素（30μg/ml）的PDA培养基，在乙酰丁香酮的作用下，3～4天后在培养基表面有小的菌落形。将小菌落抑制含有潮霉素（50μg/ml）的PDA培养基上进一步筛选，获得候选转化子。经PCR鉴定，证实为转化子；转化子性状稳定，在不含潮霉素的PDA培养基上继代培养6代之后仍然能保持潮霉素的抗性。这种转化方法效率较高，且结果稳定，平均每个培养皿中会有1～3个转化子。目前，正在研究通过改变乙酰丁香酮的浓度和共培养时间等条件来提高转化效率，以便得到更多的转化子，为下一步筛选表型异常的突变菌株建立平台。

柑橘优质栽培品种主要集中在宽皮柑橘、甜橙、柚及柠檬、金柑中。柑橘栽培品种有鲜食与鲜食加工兼用两大类，用途不同，其特性要求也有一些不同。其共性要求是:较好的适应性、丰产性、品质优且抗性强。品质优包括果实的品质、外观等较受消费者欢迎，耐贮运也是构成优良品种品质的一个重要属性。随着柑橘产业比较效益下降、劳动力的缺乏，耐粗放管理的品种也较受生产者喜爱。耐粗放管理与品种抗性有一定相关性。适应性主要是与环境的和谐包括气候、土壤环境等。抗性强是对冷、热、旱、涝、瘠、病和虫有一定的耐受力或免疫，易栽、易管，其优点是人力与物力投人少，且适应性强。丰产性包括产量高且稳产。特性是:鲜食品种对果实外观、内质及耐贮运性均有较有较高要求。果实的外观主要是果实的大小、形状、果皮的色泽、厚薄、果面光滑等。如脐橙果实横径在80mm、果皮橙红、圆球形或长椭圆形较受消费者喜爱；而温州蜜柑扁圆形、果实横径在50mm左右畅销。果实内质包括风味、香气和营养成分。柑橘鲜食品种理想的风味是甜酸可口、有香气。柑橘果肉要求细嫩化渣，可食率高，果汁率高，囊壁薄，易化渣。除此之外无核也是重要性状。而加工品种对果实外观要求没有鲜食品种高，但对其内质与栽培性能要求较高，要求易栽培、易达到早结果且丰产稳产、优质，少核或无核，高糖、含酸量适中，作为橙汁加工品种需出汁率高，果汁色泽鲜艳，具芳香，风味浓郁，无苦涩等异味和混浊度稳定等性状；作为橘瓣罐头加工品种要求果中大，皮薄易剥皮、囊瓣整齐易分离，汁胞结合紧密、颜色鲜艳、嫩而不软。在我国由于加工业不是很发达，加工品种一般为鲜食与加工兼用型。优良品种具有时间性与地域性。时间性是指随社会经济的发展，消费者对鲜食或加工品种的要求也在不断提高，品种需要周期性更新。地域性是指不同的产地气候、土壤环境条件不同，适宜种植的品种在一些生物学特性或/和农艺性状上可能要求不同。砂糖橘，又名十月橘，俗称沙滩橘。原产于广宁、四会一带，主产地有四会、广宁、云浮、清远、德庆、南盛、英德、清新、佛冈、郁南，是当地柑橘主栽品种之一。该橘味甜如砂糖，故名，又因其甘甜犹如在沙滩喝到甘露一样，故俗称“沙滩橘”。砂糖橘尤以四会市黄田镇出产的为正宗，唯其鲜美而极甜，无渣，口感细腻，清甜。本地早原产于浙江黄岩，又名天台山蜜橘。浙江黄岩、临海栽培较多，湖南、广东、四川、福建等省也有少量栽培。该品种树势强健，树冠高大，呈圆头形或半圆头形，且整齐，分枝多而密，枝细软；果实扁圆形，单果重约80g，色泽橙黄，皮薄；果实可食率77.1%，果汁率55%以上，可溶性固形物12.5%，糖含量9.38g/100ml，酸含量0.72mg/100ml，维生素C含量29.3mg/100ml，质地柔软，囊衣薄，化渣，品质上乘。果实种子2～3粒，10月下旬至11月上旬成熟；抗寒、抗湿，丰产、稳产，成年树每亩产量超过2500kg。果实不耐储藏。本地早可鲜食，也可加工糖水橘瓣罐头。加工罐头尤以黄岩少核本地早和福建龙岩黄斜3号本地早为宜。温州蜜柑树冠呈不整齐的圆头形，较矮小开张，枝梢长软披垂，无刺。叶较大长椭圆形或菱形，主侧脉较明显，叶柄较长，叶翼狭长。花大，达3.5cm，白色，花瓣反卷，花单生或丛生，花粉不育，单性结实。果实扁圆形，果实大小因品系而差异较大，橙黄至橙红色，油胞粗大。囊瓣8～13，易分离，囊壁较厚韧，果心空。汁胞橙黄至橙红色，排列紧密整齐，柔软多汁，风味酸甜，品质优良，9月下旬至12月下旬成熟。无核，多胚，适应性强，可耐-9℃，耐旱耐瘠，抗溃疡病性较强。生长快，结果早，产量较高。品质好，较耐贮运。适于中亚热带以北橘区栽培。除鲜食外，还是制糖水罐头的良好品种。主要产地有我国广东、福建、广西、台湾等省区。该品种树势中等，树冠圆头形，枝条细而密生。叶片狭小，长椭圆形，两端尖，叶脉不明显，翼叶小。果实高扁圆形或圆球形，重100～130g，果皮橙黄至橙红色，厚而粗糙，易剥离；果心小而充实，果肉柔软多汁，味甜，品质上等；种子极少。12月下旬至翌年1月成熟，耐贮运。该品种进入结果期早，丰产，但抗逆性较差，需肥水较多，采摘后如管理不当容易衰退。又名乳橘，我国古老品种，品系多，如黄岩乳橘、南丰蜜橘、温州土橘、日本纪州蜜橘等。其中，以南丰蜜橘浓甜而香，无核，品质最优，为推广品系。树冠中等大，半圆头形，树势强健，枝叶稠密，枝条细长开张，偶有短刺。叶小，卵状椭圆形，先端较尖，色浓绿，着生较直立。花小。果小似金钱，重25～50g，扁圆形，果蒂部核状突起，果顶部多有脐。皮薄，橙黄色，油胞小而密，平生或微凸。囊瓣7～10瓣，近肾形，囊衣薄。果心小。汁胞橙黄色，排列较紧密，柔软多汁，风味浓甜，有香气，化渣，无核或仅1～2粒，单胚，品质优良。可溶性固形物11%～14%，酸0.3%～0.4%。11月上中旬成熟。对丘陵山地适应性较强，耐寒力近似温州蜜柑。结果较早，果小，有大叶、小叶和高蒂3个品系，以大叶系为佳，易大小年结果。近年来，从南丰蜜橘中选出一系列品种如柳城蜜橘、无核南丰蜜橘及杨小等。原产于四川江津，栽培比较广泛，现选出了很多优系，国内各橘区均有栽培。该品种树势强健，树冠圆头形，枝梢开展，具短刺；叶片长卵形，先端尖长；果实长椭圆形，似鹅蛋，重150～200g，果顶平或微凹，蒂部微凹，果皮橙红色。薄而光滑，果心半充实，囊瓣半圆形或长肾形，8～13瓣。果肉橙黄色，柔软多汁，甜酸适度，风味浓，有香气，品质极上，种子数依品种不同0～8粒不等。11月下旬至12月上旬成熟，果可贮至翌年5月。该品种适于在冬春温暖湿润的地区栽培，在偏北的橘区常表现色泽不鲜艳，果皮增厚，风味变差，且易染流胶病和溃疡病，鄂甜橙1号、铜水72-1、梨橙等是综合性状较好的锦橙系品种。柳橙主要产于广东新会，福建、广西也有引种栽培。该品种树势强健，树冠半圆形，较开张，枝密细长；叶长椭圆形，边缘多呈波状，叶色浓绿；果实圆球形，果皮橙黄色，果顶有的有印环，故又名印子柑。果面自蒂部起有10余条放射沟纹，果心充实、囊瓣长梳形，10～12瓣。果肉橙黄色，脆嫩汁少，风味浓甜，品质上等，种子6～10粒，11月中旬至12月上旬成熟，耐储藏。该品种品质优良、丰产、耐储藏，适应性强。其品系有明柳、半柳、暗柳3个。果面沟纹自蒂部延伸至顶部的称明柳，只伸至果面一半的称半柳，沟纹不明显的称暗柳。以暗柳品质最好，汁多味甜，产量高，栽培较普遍。原产于地中海地区。我国四川、广东、广西和湖南等地均有栽培。该品种树势强健，树冠圆头形或半圆头形，树姿半开张。枝条细而硬，针刺极小而少；果实近圆球形或略扁，单果重135g左右，果皮鲜橙红色或紫红色，间或出现深红色相嵌纵向宽条纹，果皮较厚，略粗，脆，剥离较难，果心较小而充实，囊瓣肾形，10～14瓣，整齐。汁胞披针形成长纺锤形，呈丝状或块状血红色，脆嫩。酸甜味较浓，汁多。有香气，品质上等，种子1～3粒，果实于翌年2月成熟，丰产。果实耐储藏，贮后风味更佳。优良品种塔洛科血橙、摩洛血橙等。果实顶端有脐，果肉有重囊，一般无核。系巴西Selecta甜橙芽变的新品系，1870年输入美国定名为华盛顿脐橙(Washington Navel)，为柑橘著名品种，其他脐橙品种的来源均与华盛顿脐橙有关。华盛顿脐橙树冠半圆形，较矮而披垂。新梢短小而密，无刺或少刺。萌芽、开花期较一般甜橙稍早。叶大，广椭圆形，两端钝尖，叶厚，暗浓绿色，叶脉明显下陷，叶翼中等大，花粉极少。果实长圆形或广倒卵形，果大，重170～250g。果顶有脐，闭合或裸露。果皮橙黄至橙红色，顶部皮薄，萼部皮厚。果肉橙黄色，汁胞细长紧密，脆嫩多汁，味浓甜富香气，品质优良。可溶性固形物11%～12%，酸0.9%～1.0%，耐寒力比一般甜橙强。11月至12月上旬成熟，不耐储藏，单性结实，性喜夏干气候。华盛顿脐橙芽变频率较高，芽变系包括成熟期、果肉颜色及叶色等诸多方面。根据成熟期，华盛顿脐橙的芽变有早熟类型(即在11月前成熟)，如清家脐橙等、中熟类型(11月初至12月底前成熟)，如罗伯逊脐橙、朋娜脐橙、纽荷尔脐橙、Na-velina、Frost、Thomson和Summerfiedl脐橙等及晚熟类型(翌年成熟)，如Lanelate、Summergold、Cheslett脐橙等。Cara Cara是红肉芽变。我国从引进的脐橙中选出了很多优良芽变类型，如罗脐35号、奉节72-1及华红脐橙等，脐橙类品种为优良鲜食品种。湖南麻阳一带选出的良种。树势较弱，树冠较矮小，枝条开张披垂。叶较窄小，叶背主脉粗大，凸起明显。果近圆形，深橙黄色，光滑。果皮近萼处稍厚，近果顶部甚薄，难剥离，海绵层带黄色。果重100～150g。汁胞细长，橙黄色，排列紧密，质地脆。可溶性固形物14.5%，酸0.6%。风味浓甜清香，品质优。种子0～5粒。11月中旬成熟。汁液稍少，果大小不一，本品种不宜用枳作砧木。近年选出了很多优系，如大果型、无核类等。柚类为柑橘属中果实最大的一类，果皮厚，难剥离。由于具有单胚特性，类型较多。沙田柚原产于广西容县。广西各地区都有栽培，广东、湖南、四川、浙江、江西等地也先后引种栽培。该品种树形高大，果实呈梨形或葫芦形，果顶有金钱印，果皮油胞细小，金黄色，果肉晶莹透明、脆嫩化渣、清甜爽口、香味浓。经测定，可食部分达47.7%以上，可溶性固形物高达13.7%，含糖量12.4%，含酸量0.36%，100g果汁含维生素C 111.7mg，含氨基酸739.4mg。果肉白色，汁多味甜微酸，种子多，10—11月成熟。琯溪蜜柚原产于福建平和县。主产地为福建南部和广东。四川、广西、湖南、重庆等地也有引种栽培，发展很快，是栽培柚类的名品。该品种树势强，枝叶茂密。果大，1.5～2kg，长卵形或梨形；果面淡黄色、光滑，皮较薄；果心大而空，囊瓣14～16瓣；果肉质地柔软，汁多化渣，酸甜适中，种子少或无，品质上等。果汁含可溶性固形物11%、糖9%～9.8%、酸0.8%～1.0%，可食率60%～70%。9月下旬至10月上旬成熟。丰产，幼树3～4年挂果，4年生树株产68个果。易裂果裂瓣。近几年福建又从中选育出红肉、黄肉、红皮红肉芽变，品质更优。优良品种有红玉、汤普森、邓肯葡萄柚等。自20世纪80年代以后，美国推出了“Oroblanco”和“Melogold”两个二倍体优良葡萄柚品种，在欧洲市场极受欢迎。星路比(Star Ruby)也是外形美观、果肉深红色、无核、品质上等的优良葡萄柚品种。火焰山葡萄柚(Flame)是Henderson实生优系，内膛结果能力强，果皮有暗红色条纹，果肉深红色，但酸度高。鸡尾葡萄柚(Cocktail)果大，肉白色，酸度低，有香味，比较适合东方消费者群体。与柚类品种近似，在生产上有一定推广面积的新优品种如下。(1)金柚。俗称胡柚。原产和主产浙江常山，是柚与宽皮橘天然杂种。(2)HB柚。系柚与葡萄柚的杂种，由华中农业大学从美国引进的株系中选出。美国原产。树冠圆头形，披散，枝条零乱粗壮，少针刺。叶大，深绿色，叶缘具宽疏浅齿。早结丰产，有树冠外围结果和结果球的倾向。果实椭圆或倒卵形，先端有乳突，表面粗糙，熟时黄色，油胞凹入。囊瓣9～10个。果肉淡黄色，汁多，酸味强，含酸6%～7%，香气浓，品质优。种子0～7粒。多次开花，以2—3月开花结果最多。花后6～8个月即可采果催色，9—11月是主产期。耐贮，可制汁或外销。不耐寒。现已选出了Eureka Variegated (杂色花叶)柠檬和Variegated Pink Flesh Eureka (杂色花叶粉红果肉)柠檬等类型。抗霜、抗热、抗风性和适应性均比尤力克强。树势强盛，枝叶茂密、多刺。始果期稍迟，但丰产。树冠内部结果多。果顶端乳突基部有不规则的环沟，往往一侧较深。汁多，清澄，酸强，香气浓，品质优。种子数粒或无。现已选出了无籽等类型。著名柠檬品种:意大利的Femminello、Villafranca；西班牙的Vema、Mesero及Volckamer等。别名金柑，是圆金柑和金枣的杂种，是金柑属中果实品质最好、产量较高、果形较大、经济价值较高、栽培最广泛的一个品种，较耐寒。树冠圆头形，灌木，叶阔披针形，稍厚。枝梢密生，少刺或无刺。果纵径约3.5cm，横径2.7cm，倒卵形或倒卵状椭圆形，果皮厚光滑，金黄色，囊瓣5～7，少数8瓣，果肉及果皮均甜，有香气，种子4～9粒，11—12月成熟。优良品种有宁波金弹、融安金柑、蓝山金柑和遂川金柑等。树直立，枝叶稠密，叶似橘，叶缘有波状锯齿，翼叶狭小。果橙色或浓橙色，有小凹点。果形扁圆或圆，常偏斜不正，果顶常有小印圈，油胞密，平生或凸出瓣，酸，不堪生食，可代绿檬用，有观赏价值。种子多胚，胚绿色。

苹果至今已有2000多年的栽培历史。苹果外观艳丽，营养丰富、供应期长、耐储藏，又有较广泛的加工用途，能满足人们对果品的多种需求。根系分布受砧木和土壤理化性状的影响。乔化砧木根系分布在15～60cm的土层内，矮化砧分布在15～40cm的土层内。土温达3℃时开始生长，7℃时生长加快，20～24℃最适合根系生长。苹果根系一年有3次生长高峰。土壤含水量达到田间持水量的60%～80%最适合苹果根系生长。苹果的芽按性质分为叶芽、花芽两种。苹果的花芽为混合芽。叶芽萌发要求的平均温度为10℃左右。花芽是8℃以上时开始萌动。枝一年有两次明显的生长高峰，称为春梢和秋梢。苹果的花芽分化，多数品种都是从6月上旬(短果枝和中果枝停止生长)开始至入冬前完成。花序为伞房状聚伞花序。每花序开花5～8朵，中心花先开，边花后开，以中心花的质量最好，坐果稳，结果大，疏花疏果时应留中心花和中心果。苹果树长、中、短果枝均能结果，盛果期以短果枝结果为主。苹果是异花授粉植物，大部分品种自花不能结实。苹果一般有4次落花落果。第一次在末花期，称为落花。原因是未能受精的花。第二次在落花后2周左右，子房略见增大，可持续5～20d,称为前期落果，原因是受精不完全。第三次在第二次落果后的2～4周，北方的物候期发生在6月，故称“6月落果”，新梢生长与果实生长竞争养分。第四次在果实采收前3～4周，落下成熟或接近成熟的果实，故称采前落果。苹果的果实是由子房和花托发育而成的假果。果实的发育只有一次生长高峰。呈单“S”形生长曲线。生长过程分为果肉细胞分裂期和细胞体积膨大期。苹果属低温干燥的温带果树，要求冬无严寒，夏无酷暑。适宜的温度范围是年平均气温9～14℃,年平均温度在7.5～14℃的地区，都可以栽培苹果。苹果需要土壤深厚，排水良好，含丰富有机质，微酸性到微碱。适宜的pH值为5.7～7.5。土壤含水量达到田间持水量的60%～80%为宜。生长后期维持在50%左右。苹果是喜光树种，光照充足，才能生长正常。日照不足，花芽分化少，营养贮存少，开花坐果率低，果实含糖量低，着色差。我国引进和选育的栽培品种有250个，用于商品栽培的主要品种只有20个左右。早熟品种主要有：早捷、藤牧1号、新嘎啦、珊夏等，阴历5月中旬成熟。中熟品种有：美国8号、元帅系、津轻、金冠、新乔纳金等，阴历8月初成熟。晚熟品种主要有：着色富士系、王林、澳洲青苹、短枝富士等，阴历9月上中旬成熟。以上品种分矮化和长枝两种，密植高产，果形果色优良，甜度高，季节性强，正规管理当年培养花芽，可二年结果，三年大幅增产。苹果对土壤适应性较强，要求土层深厚、肥沃、富含有机质、排水良好的微酸性至中性地块建园。苹果植地选好后，在建园时，要重视修建排灌水沟，使到旱天有水可灌，雨季涝能排。种植前要做好深耕细耙，碎土，去除杂草，接着进行挖穴，穴深80cm,直径100cm,挖好后，待土壤熟化，就进行回土入穴，在回土前要在穴内放入厩肥50kg,并将厩肥与土混合，待以栽植。秋栽有利苗木伤根恢复，成活率高，恢复生长早。对于肥沃园地每667m2栽植28株，一般园地栽植32株，而瘠薄园地栽植50株即可。(1)萌芽前整地、中耕除草。全园喷1次杀菌剂，可选用10%果康宝、30%腐烂敌或腐必清、3～5波美度石硫合剂或45%晶体石硫合剂。(2)花芽膨大期，对花量大的树进行花前复剪；追施氮肥，施肥后灌一次透水，然后中耕除草。丘陵山地果园进行地膜覆盖穴贮肥水。(3)花序伸出至分离期，按间距法进行人工疏花，同时，疏去所留花序中的部分边花。全树喷50%多菌灵可湿性粉剂(或10%多抗霉素、50%异菌脲)加10%吡虫啉。上年苹果棉蚜、苹果瘤蚜和白粉病发生严重的果园，喷一次吡虫啉加硫磺悬浮剂。(4)随时刮除大枝、树干上的轮纹病瘤、病斑及腐烂病和干腐病病皮，并涂腐植酸铜水剂(或腐必清、农抗120、843康复剂)杀菌消毒。(1)人工辅助授粉或果园放蜂传粉，蜜蜂授粉。(2)盛花期喷1%中生菌素加300倍液硼砂防治霉心病和缩果病；喷保美灵、高桩素以端正果形，提高果形指数；喷稀土微肥、增红剂1号促进苹果增加红色；花量过多的果园进行化学疏花。(3)对幼旺树的花枝采用基部环剥或环割，提高坐果率。(1)花后及时灌水1～2次。结合喷药，叶面喷施0.3%尿素或氨基酸复合肥、0.3%高效钙2～3次。清耕制果园行内及时中耕除草。(2)花后7～10d,喷1次杀菌剂加杀虫杀螨剂。可选用50%多菌灵可湿性粉剂(或70%甲基硫菌灵)加入四螨嗪或三唑锡。花后10d开始人工疏果，疏果需在15d内完成。疏果结束后，果实套袋前2～3d,全园喷50%多菌灵可湿性粉剂(或70%代森锰锌可湿性粉剂、50%异菌脲可湿性粉剂)加入25%除虫脲或25%灭幼脲。施药后2～3d红色品种开始套袋，同一果园在1周内完成。监测桃小食心虫出土情况，并在出土时地面喷布辛硫磷等药液。(3)夏季修剪。应及时疏除萌蘖枝及背上枝。对果台副梢和结果组中的强枝摘心，对着生部位适当的背上枝、直立枝进行扭梢。(1)采用1∶2∶200波尔多液、多菌灵、甲基硫菌灵、代森锰锌等杀菌剂交替使用。防治轮纹病、炭疽病，每隔15d左右喷药1次，重点在雨后喷药。斑点落叶病病叶率30%～50%时，喷布多抗菌素或异菌脲。未套袋果园视虫情继续进行桃小食心虫地面防治，然后在树上卵果率达1%～1.5%时，喷联苯菊酯或氯氟氰菊酯或杀铃脲悬浮剂，并随时摘除虫果深埋。做好叶螨预测预报，每片叶有7～8头活动螨时，喷三唑锡或四螨嗪。腐烂病较重的果园，做好检查刮治及涂药工作。(2)春梢停长后，全园追施磷钾肥，施肥后浇水，以后视降水情况进行灌水。覆盖制果园进行覆盖，清耕制果园灌水后及时中耕除草，生草制果园刈割后覆盖树盘。晚熟品种在果实膨大期可追一次磷钾肥，并结合喷药叶面喷施2～3次0.3%磷酸二氢钾溶液。(3)提前进行销售准备工作。早熟品种及时采收并施基肥。(4)继续做好夏季修剪工作。(5)山地果园进行蓄水，平地果园及时排水。(1)采收前20～30d红色品种果实摘除果袋外袋，经3～5d晴天后摘除内袋。同时采前20d全园喷布生物源制剂或低毒残留农药，如1%中生菌素或百菌清或27%铜高尚悬浮剂，用于防治苹果轮纹病和炭疽病。树干绑草把诱集叶螨。果实除袋后在树冠下铺设反光膜，同时进行摘叶、转果。秋剪疏除过密枝和徒长枝，剪除未成熟的嫩梢。(2)全园按苹果成熟度分期采收。采前在苹果堆放地，铺3cm细沙，诱捕脱果做茧的桃小食心虫幼虫。采后清洗分级，打蜡包装。黄色品种和绿色品种可连袋采收。(3)果实采收后(晚熟品种采收前)进行秋施基肥。结合施基肥，对果园进行深翻改土并灌水。检查并处理苹果小吉丁虫及天牛。拣拾苹果轮纹病和炭疽病的病果。(4)落叶后，清理果园落叶、枯枝、病果。土壤封冻前全园灌防冻水。(1)根据生产任务及天气条件进行全园冬季修剪。结合冬剪，剪除病虫枝梢、病僵果，刮除老粗翘皮、枝干残留的病瘤、病斑，将树下的病残组织及时深埋或烧毁。然后全园喷1次杀菌剂，药剂可选用波尔多液、农抗120水剂、菌毒清水剂、3～5波美度石硫合剂或45%晶体石硫合剂。(2)进行市场调查。制定年度果园生产计划，准备肥料、农药、农机具及其他生产资料，组织技术培训。

深耕结合施用有机质肥料，可以有效地达到改良土壤的目的。深翻时期与深翻时间以采果后结合秋施基肥 （10—11 月）进行效果最佳，此期深翻改土，既节约了劳动力，又由于此时地温较高，伤根易愈合，尚可发新根，有利于年生长，结果，有益无害，且由于结合施基肥，有利于树体贮藏营养的积累，从而促进猕猴桃根系的活动及树体的生长发育。若劳力不足，深翻也可在冬季封冻前及早春解冻后萌芽前及早进行。但春季风大干旱又无灌溉条件的果园，不宜在春季进行。深翻的深度常以主要根系分布层为准。一般60～80 厘米。幼树定植后，可逐年深翻，深度逐年增加。开始深翻40厘米，然后60厘米，最后到80厘米深。1.扩穴 （放树窝子）对于挖定植穴栽植的园地，幼树定植2～3年后，原有的定植穴已不能满足逐年扩大的根系生长的需要，因此宜用此法扩大根系生长范围。即每年或隔年从原来的定植穴向外扩大，挖深60～80厘米的沟，一般挖环状沟，沟宽度视劳力而定。扩穴需逐年连续进行，直至株、行间全部翻遍为止。此法每次深翻范围小，适于劳力少的园地。2.隔行深翻密植园每年隔一行翻一行，稀植成年树可每年深翻树盘的一侧，即在株间或行间撩通壕，每四年深翻一遍。第一次梯田可先翻株间 （株间也可同时翻两侧），第二次翻内侧，第三次翻外侧。此法伤根少，便于机械化操作。1.深翻时要注意改变树苗栽在穴里伸展不开的状况扩穴时一定注意要与原来定植穴打通，不留隔墙，打破“花盆” 式难透水的穴，隔行深翻宜注意使定植穴与沟相通。对于撩壕栽植的猕猴桃园，宜隔行深翻，且应先于株间挖沟，使扩穴沟与原栽植沟交错沟通，并与坎下排水沟沟通，彻底解决原栽植沟内涝问题，对于黏重土果园尤为重要，以达到既深翻改土又治涝的目的。2.深翻一定结合施有机肥深翻时，将地表熟土与下层的生土分别堆放，回填时须施入大量有机物质和有机肥料。一般将生土与碎秸秆、树叶等粗有机物质分层填入底层，并掺施适量石灰；熟土与有机肥、磷肥等混匀后填在根系集中层，每翻1立方米土加施有机肥20～40千克。3.深翻深度应视土壤质地而异黏重土壤应深翻，并且回填时应掺沙；山地果园深层为沙砾时宜翻深些，以便拣出大的砾石；地下水位较高的土壤宜浅翻，以免使其与地下水位连接而造成为害。4.深翻时尽量减少伤根，以不伤骨干根为原则如遇大根，应先挖出根下面的土，将根露出后随即用湿土覆盖。伤根剪平断口，根系外露时间不宜过长，避免干旱或阳光直射，以免根系干枯。5.使土壤与根系密切接合深翻后必须立即浇透水，使土壤与根系密切接合，以免引起旱害。成年园土壤耕作宜进行3～4次。第一次在秋季落叶前后，结合施基肥进行。深耕深度在靠主干处稍浅，一般为5～10 厘米，株行间可较深，常在20～30厘米。在营养生长期中，视猕猴桃园土壤板结及杂草生长情况中耕2～3次，深度5～10厘米。发芽前 （3月上中旬），结合追肥松土一次。5月上中旬果实迅速生长期，结合除草追肥松土一次。对幼年园，可结合间作的管理，多次进行清除树盘杂草的工作，以保持无杂草疏松的土壤环境。夏季进行树盘覆盖是防止土壤干旱的措施之一。树盘覆盖可以降温保湿，盛夏可降低地表温度6～10℃，有利于根系生长；防止土壤水分蒸发，保湿抗旱，覆草后，10厘米土层含水量比清耕提高11%～12%；防止杂草生长；覆盖物翻入土中，可增加土壤有机质，提高土壤肥力；减少地表径流，防止土壤冲刷和水土流失。树盘覆盖方法是利用稻草、杂草、山青、秸秆、锯木屑、塘泥等材料，在旱季前中耕后覆盖于树盘。厚度20厘米，近主干处留空隙。旱季过后，要及时翻入土中。丘陵山地猕猴桃园土层薄，水土流失严重，易使根部裸露。大量须根露出土面，夏季雨后天晴高温时，易造成大量须根死亡、枝叶萎蔫现象。因此，采用培土和客土是果园土壤改良及保护根系的一项有效措施，可起到增厚土层、改良土壤结构、保肥保水的作用。培土或客土多在晚秋或初冬进行。培用土壤根据果园土质情况而定，一般就地取材，黏重土壤培沙性土，沙性土壤培黏性土。山地果园宜就近挑培腐殖质土，丘陵和平地果园可结合冬季清园、整修梯田和清理沟渠，挑培草皮土、沟泥、塘泥等。沟泥、塘泥等湿土，必须风干捣碎后再培。一般每株培土150～250千克，但培土厚度以5～10厘米为宜，培土前，必须先耕松园土，然后耕耙或浅刨，使所培土与原来土壤掺混，切忌形成两层皮，即原有土层与新培土分开。也可于秋末初冬将所培 （客） 土置于树盘周围分散堆放，经冬季冻融松散后，翌春萌芽前将其与原土均匀混合，覆盖在树盘附近。国外果园普遍采用生草法，使土壤有机质含量大大提高。草的种类主要是豆科与禾科牧草。猕猴桃园种植绿肥，具有很多优点。果园种植豆科绿肥，如三叶草，以每公顷产鲜草30吨计，则每公顷可增加氮素112.5～187.5千克，相当于225～375千克尿素所含氮素。钱粮湖农场种植的白三叶草，每公顷产鲜草达60多吨。新鲜绿肥中含有10%～15%的有机物，压入土中后，可以成为腐殖质，使土壤形成团粒结构，从而改良土壤理化性质。高温季节，种植绿肥作物的土壤表面温度要比土壤清耕的低9～16℃。园内种植绿肥投资少，收效大，不需修筑梯田，水土保持效果好。1.幼年园定植1～3年内的幼树，根系少而嫩，分布浅，吸肥量不大。为促使多次新梢生长，迅速形成树冠，早日进入结果期，根据“少吃多餐” 的施肥原则，在3—8月追施速效氮肥3～4次，11月施一次基肥。基肥中除速效肥外，还要有厩肥、堆肥等，以增加树体养分积累。2.成年园（1） 基肥。基肥最好在秋末冬初，猕猴桃采收后，全部落叶以前，结合深翻改土进行。施入量为全年用量的60%～70%。用沟施方法，在藤蔓周围交叉开沟，每年在对侧方向的沟内施肥，2～3年后藤蔓周围可以轮施一遍。（2） 萌芽催梢肥。萌芽前使用，时间在2月下旬至3月上旬。春季枝梢抽发量大，是早形成结果枝及下一年结果母枝的主要时期。此次施肥宜早不宜迟。以速效氮肥为主，一年2/3的氮肥在早春以前施入。磷钾肥也可于2—3月一次施入。（3） 壮果肥。5月上旬至6月是果实迅速生长期，又是新梢生长旺盛期，此期根系吸收力强。此时的肥料具有加速果实生长，提高果实品质及促进新梢生长的作用，对提高当年产量、打下明年丰产基础影响极大。壮果肥以有机肥或氮、磷、钾复合肥为主。后期尽量少施氮肥。猕猴桃生长迅速，枝叶繁茂，叶大而肥厚，其枝梢生长量远比一般果树大，同时其结实多，挂果时间长 （一般达150～180天），故树体养分消耗量大，需肥量较多，且养分种类要全面，不仅需注意氮、磷、钾肥的施用，而且宜适时补充微肥。猕猴桃施肥量取决于树龄、树势、结果多少、土壤肥力状况与土壤保肥性，各地施肥量有所差异。新西兰幼龄猕猴桃园的经验施肥量为：第一年，全年株施纯氮14克 （相当于尿素30 克），从4 月至8 月 （北半球，下同） 分3～4次施入，施入范围1～2平方米。翌年，3月株施纯氮55克 （尿素120克），施入范围3～4平方米，4—8月补施3次追肥，每次施纯氮28克 （尿素60克）。第三年，3月全园普施纯氮115千克/公顷，5月补施纯氮55千克/公顷。新西兰成年猕猴桃园施肥量：3 月全园普施纯氮113千克/公顷，纯磷56千克/公顷，纯钾100～150千克/公顷，5月补施纯氮57千克/公顷。适量补施钙、镁、硼肥。我国猕猴桃幼年园经验施肥量一般为每株施基肥腐熟厩肥50千克或饼肥0.5千克，全年追肥每株施尿素300克，分3～4次施下。成年园则每株每年施入厩肥或堆肥、人粪尿、猪粪尿等农家肥料50～70千克，草木灰1.5～2.5千克，硫酸铵0.3～0.5千克，过磷酸钙0.5千克，硫酸钾0.3～0.5千克，或者每株施入农家肥50千克，混入磷、钾肥各1.5千克。如陕西省周至县秦美丰产园施肥经验为：冬季每株施菜枯饼1.5千克，桐油渣0.5千克，磷肥0.5千克，鸡粪1千克。展叶期每株施碳酸氢铵或尿素0.5千克，花后一周施氮磷钾复合肥0.5千克。我国猕猴桃施追肥多采用穴施或撒施。（1） 穴施。即在树盘外缘 （树冠滴水线稍外沿处） 挖4～6个长、宽各为 20～30 厘米，深 15～20 厘米的洞穴，将肥料施入。（2） 撒施。幼年园多在树盘内撒施，成年园由于根系已布满全园，应行全园撒施。将肥料均匀撒入土面，结合浅耕或挖园，将肥料锄入 （翻入） 土中，施后灌水。也有施肥 （多为化肥） 后不锄土，直接灌水即可。国外追肥多结合灌溉，将肥料溶于水中，随喷灌或滴灌施入土中。施基肥主要采用环状沟施肥和条沟状施肥，环状沟施肥是以树干为中心，距干60厘米左右 （依树冠大小而变动） 挖一条环状沟，沟深40～50厘米，宽20～30厘米，施肥入沟，拌匀肥料后盖土。以后随树龄与树冠的扩大，环状沟逐年向外扩展。条沟状施肥是在距树干30厘米左右 （树冠滴水线外） 的株间或行间两边各挖一条深40～50厘米、宽30～40厘米的条状沟，隔年交替更换开沟方向与位置。对于已封行的猕猴桃园，特别是水平棚架园地，可采用全园施肥，即将肥料均匀撒入园地，再结合深耕翻入土中。注意在土壤有墒时施入，或施后灌水。但长期采用全园撒施，则施肥浅，易导致根系上浮，降低根系抗逆性，故需与条沟施肥交替配合使用。根外追肥就是用猕猴桃生长所需的某些营养元素，以适当的浓度喷布叶片，使叶片直接吸收养分。其优点是吸收养分快，可及时满足猕猴桃树的急需，用肥量少，肥料利用率高。但由于施肥量有限，起作用的时间不长，只能作为一种辅助追肥的方法。根外追肥使用的肥料种类与浓度一般为：尿素 0.3%～0.4%，磷酸二氢钾0.3%～0.4%，过磷酸钙浸出液0.5%～1%，硫酸亚铁 0.05%～0.1%，腐熟人尿 10%～20%，硼砂0.05%～0.1%。进行根外追肥时应注意几个问题。（1） 掌握好浓度。根据天气，树龄、叶龄，决定合适的浓度，最好先做个小试验。（2） 注意喷布天气。以阴天或傍晚喷施效果好。（3） 喷布要均匀、周到。叶面尤其是叶背要喷到、喷匀。猕猴桃对各类营养元素的需要量较大，而且从萌芽以后，至开花和果实发育的不同时期，对各种营养元素的吸收量具有差异。根据新西兰有关叶分析资料表明，春季萌芽至坐果这段时期内，氮、钾、锌、铜在叶片中积累的数量为全年总量的80%以上。磷、硫的吸收也主要在春季。钙、镁、铁、硼和锰的积累在整个生长季节是基本一致的。猕猴桃坐果以后，钾、氮、磷等营养元素已逐渐从营养器官向果实转移。根据分析还发现，猕猴桃对氯的需要量比一般作物大得多，一般作物为0.025%，而猕猴桃却含有0.8%～2%，尤其是在钾的含量不足时，对氯的需要量更大。各类矿质营养元素供应均衡而适量时，则猕猴桃树体生长结果良好。但当某种营养元素过多或不足时，会造成树体生长发育不良，表现出中毒或缺素症状。猕猴桃抗旱性和耐溃性均弱，需经常保持土壤湿润，但又不能渍水。排水是猕猴桃园管理工作中一项非常重要的措施。首先，园地不要建在低洼、地下水位高的地方。由于南方各省春季多雨，因此要在地块周围及行间开好排水沟，疏通沟渠，使排水通畅。特别对于质地黏重或地下水位较高的平地果园，或者是红壤丘陵果园的低洼地带，在4—6月梅雨季节内，往往雨水过多，造成果园积水而诱发黄叶病，甚至引起根系腐烂、整株死亡。故雨季及时清沟排水特别重要，至少要求土层深度0.8米以下无积水现象。高温干旱季节经常性地灌水，此时要注意掌握灌水时间，做到速灌速排，否则极易发生涝害。因猕猴桃园的不同类型，所处地带，灌水的方法、时期及灌水量有所不同。在海拔500～1000米的低山、中山区，7—9月气温普遍比丘陵、平地低，7 月平均气温、雨量条件下，一般极少出现大旱。因此这种类型的猕猴桃园，应以排水防洪为主，开设洪水沟、排水沟等。园内多挖山塘、水池，将雨水截留下来，供干旱时使用。建在丘陵、山地或平地的猕猴桃园，则首先要有灌溉条件。采用何种方式灌溉，需视水源条件、果园地形地势、投资力量而定。地面灌水简单易行，投资少，但耗水量大，土壤易板结，不便于果园操作机械化，管理不好，易发生涝害，可采用沟灌、穴灌等。进行地面灌水要特别注意，一次灌水不能太多，要少量多次，随灌随排，防止造成涝害。切忌漫灌。地面灌水适用于盛夏气温不太高、水源充足、土块平整、投资不足的园地。喷灌是近年来发展较快的一种先进灌溉方法，尤其适用于高温干旱地区及地形复杂的丘陵山地猕猴桃园，可分为高喷、高微喷、低微喷。喷灌能调节猕猴桃园小气候及生态环境，在高温季节 （7—8月） 进行喷灌不仅及时补充了土壤水分，而且在喷灌当天及第二天内，明显地提高空气相对湿度7%～32%，降低园内气温3.5～8.5℃，降低土表温度1.6～3℃，降低叶温和果温3～11℃。同时喷灌省水、省工、保土、保肥，不占用土地面积，与沟灌相比，不但节约用水约60%，而且可以提高肥料利用率25%～45%，且喷后不致造成土壤板结和过湿，保持土壤良好的通透性能。对地形复杂的丘陵山地缺水果园更为适用。喷灌时期要根据气候条件、猕猴桃生长情况及土壤条件等正确掌握。南方地区喷灌时期主要在7—9月高温干旱期。盛夏时，高喷、微喷的轮喷周期分别为4～6天和2～3天。以土壤湿润深度20～40厘米 （猕猴桃根系密集层） 为度，保持田间最大持水量的60%～80%。滴灌是将水沿着安装在园内的低压管道系统运到滴头，然后一滴一滴地经常不断地浸润到猕猴桃根系分布的土层，使土壤处于湿润状态，保持适宜于猕猴桃生长的含水量。滴灌具有省水、省肥、不板土等优点，适用于丘陵山区缺水果园。据报道，滴灌一季用水量相当于喷灌一次用水量。在缺乏灌溉条件的丘陵山地果园，应在修筑高质量梯田的基础上，切实做好保水防旱工作。目前，一般采用地面覆盖的方法保水。这种方法的原理是使土壤中的气态水，在地表冷凝而不致大量蒸发损失掉。具体做法是在4—5月间就地割刈枝叶及幼嫩的山青，覆盖于树盘周围，厚度是15～20厘米，行间空地任其自然生草；7—8月旱季来临之前，进行第二次覆盖，并将行间杂草就地割刈，自然摊放；果实采收后的10月间结合施用基肥，进行全园翻耕，并将覆盖的有机物翻入土中作肥料，然后再割刈梯壁杂草覆盖地面。这样，既能全年保持树盘土壤疏松湿润，起到良好的保水防旱作用，又能增加土壤肥力。

番茄营养丰富、酸甜可口、人们喜食、用途多、产量高，已成为蔬菜的主要品种。它的丰产与歉收，直接影响着市场的供需。近10年来由于保护地栽培，发展很快，引进番茄品种种类繁多，种植技术不断改进，生态环境也随之发生变化，促使新的病虫害种类不断出现，给番茄生产带来了新的问题。在2002～2003年，在北京的密云、延庆和大兴县大棚种植的番茄上发生了一种新的病害，受害番茄植株呈现失水萎蔫，后期植株干枯死亡，纵剖受害植株主茎，髓部呈现褐色腐烂坏死，导致全株凋萎干枯死亡。该病2002～2003年冬季在密云县发生，有212个大棚发病，品种为加西亚，平均受害株率达到100%，造成拔园毁种、绝产无收，给生产带来了惨重的损失。该病已经成为番茄生产上的一种潜在危险性病害。按Koch法则，从接种病株上，分离到原始接种细菌菌株。依此确认，该病是一种细菌性病害，暂称为番茄茎髓黑腐病。该病害与国内已知有发生记载的6种番茄细菌性病害：番茄青枯病[7]（Pseudomonas solamaearum）、番茄溃疡病[7]（Clavibacter michigabensis subsp.michigabensis）、番茄疮痂病[7，8]（Xanthomonas campestris pv.vesicatoria）、番茄斑点病[9]（Pseudomonas syrimgae pv.tomato）、番茄软腐病[7]（Erwinia carotovora subsp.carotovora）和番茄髓部坏死病[10]（Pseudomonas corruga）的受害症状和菌落形态特征不同。故认为该病是一种新的细菌性病害，本文对获得的22个菌株进行了病原菌的鉴定，结果报道如下：1.1.1 供试菌株 供试的22个菌株是2002～2003年从北京市的密云、延庆、大兴等地番茄上分离并纯化后获得的（表1），对照菌株为绿黄假单胞菌典型菌株PDDCC2848[Pseudomonas viridiflava（Burkholder；1930；Dowson 1939）]和边缘假单胞菌边缘致病变种典型菌株PDDCC3553[P.marginalis pv.marginalis（Brown）Stevens 1925]。1.1.2 供试植物 番茄品种加西亚和中蔬四号、烟草、马铃薯。1.1.3 培养基制备 KB固体培养基[1]、牛肉汁固体培养基[1]。1.2.1 病原菌的分离[4] 用灭菌解剖刀切取病株茎部，用75%酒精消毒2min，经无菌水冲洗后取髓部病组织置于小瓷皿中研磨，加无菌水浸泡10min，然后用接种环蘸取该组织液在KB培养基上划线。长出单菌落后用该培养基再划一次线使细菌纯化。纯化后用于致病性测定和病原菌的鉴定。1.2.2 烟草过敏反应[11，12] 将从各地分离获得的22个菌株和对照菌株（表1）在KB培养基上培养24h，以无菌水配制成细菌悬浮液，浓度为1×108cfu/ml，用注射针将细菌液从烟草下表皮注入叶肉细胞间[2]。选用未开花的烟草植株，用灭菌水作阴性对照。接种后，保持在25～28℃，相对湿度85%，日照16h条件下。24h后，调查过敏性反应。菌株号No.strain致病性Pathogenicity采集地点Location分离时间Timeisolated烟草过敏TobaccohypersensitivityPnt1+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt2+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt3+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt4+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt6+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt8+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt9+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt10+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt11+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt12+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt13+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt14+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt15+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt18+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt19+北京密云（Miyun）2003-1-28-Pnt23+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt24+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt27+北京延庆（Yanqing）2003-6-9-Pnt20+北京大兴（Daxing）2003-5-20+Pnt21+北京大兴（Daxing）2003-5-20-Pnt30+北京延庆（Yanqing）2003-9-2+Pnt31+北京延庆（Yanqing）2003-9-2-表1 番茄茎髓黑腐病菌株及致病性和烟草过敏1.2.3 马铃薯腐败[1] 选取新鲜无病而且较大的马铃薯块茎，将其表面洗净，在无菌条件下，用75%酒精表面消毒，超净工作台上风干。在无菌条件下，用灭菌牙签蘸取适量在KB培养基上培养24h的细菌，插入马铃薯中，随后将其放在24℃培养箱内，并且用不接菌的马铃薯作对照，调查马铃薯腐败情况。1.2.4 番茄上致病性测定 在温室培养的加西亚和中蔬四号上接种。用灭菌牙签蘸取适量在KB培养基上培养24h的供试细菌，包括对照菌株，插入枝条和茎的交界处，置于自然条件下，调查发病情况。1.2.5 鉴定方法 细菌的形态特性、培养特性、生理生化反应及碳源利用等项实验方法，主要参照《一般细菌常用鉴定方法》[1]、《植物病害研究方法》[2]、N.W.Schaad编著的《植物病原细菌鉴定实验指南》[3]、《植物病原细菌的分类与鉴定》[4]等书中的方法进行。2.1.1 病原菌分离 共获得了22株细菌（表1），纯化后用于致病性测定和病原菌的鉴定。2.1.2 烟草过敏反应 pnt21，pnt30和对照菌株3553注射部位表现过敏性枯斑反应（HR），这证明了其对植物有致病作用。试验结果见表1。2.1.3 马铃薯腐败 供试菌株均对接种马铃薯产生不同程度的症状。其中供试菌株pnt1、pnt2、pnt13、pnt14、pnt15、pnt21、pnt30、pnt31和对照菌株2848、3553均表现出明显的腐烂症状，其余菌株所接种马铃薯都出现水浸状。2.1.4 番茄上致病性测定 致病性测定试验结果见表1。2.2.1 病原细菌革兰氏染色 所有供试菌株革兰氏染色阴性。2.2.2 培养性状 供试的菌株在KB培养基上28℃培养箱里培养48h，形成圆形菌落，全缘，不透明，表面光滑，均能产生荧光。其中菌株pnt1～pnt19的菌落绿黄色，直径1～3mm；菌株pnt20、pnt21、pnt30和pnt31产生黄色菌落，黏稠状，微隆，直径3～5mm；pnt23、pnt24和pnt27为乳黄色菌落，黏稠状，隆起，直径1～2mm。2.2.3 生理生化性状 生理生化性状试验结果见表2～表4。2.2.4 碳源利用 碳源生长利用结果见表2～表4。项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt1～pnt19对照菌株（CKstrains）28483553P.f.biovarⅠKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Starchhydrolysis-（2、8、10、12）---[5]配糖体的分解EsculinHydrolysis-（11）+-耐盐性试验Salttolerance3%（1∶5%）3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity水渍状（1、2、13、14、15：+）++表2 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt1～Pnt19）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt1～pnt19对照菌株（CKstrains）28483553P.f.biovarⅠ酪氨酸酶测定Tyrosinasetest+（6、12、18、19）+-氧化酶Oxidase+-++[5]冰核测定Icenucleationactivity-（8、12-18未做）--3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（2-11、15、19）--烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity--+苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer---甲基红测定Methylred-+-过氧化氢酶Catalase+++硝酸盐的还原Nitrateredution-（2）---[5]3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction---+[5]蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose+（6、11-14、18、19）-+果聚糖的产生Levanformation++++[5]41℃生长Growthat41℃----[5]果胶溶解Pectinaseactivity+-+H2S的产生H2Sproduction---卵磷酸酶Lecithinasetest+（1-3、12、13）+++[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（1、2、4、19）++吲哚的产生Indoleproduction---吐温80的测定Tween80hydrolysis+（6、9、10、18）+++[5]明胶液化Gelatinliquefaction++++[5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose++++[5]蔗糖Sucrose++++[5]乳糖Lactose-（2、4、11）---[5]麦芽糖Maltose-（3、11-14）---[5]鼠李糖Rhamnose+（6、12、13、19）--山梨醇Sorbitol++++[5]肌醇Insoitol+++d[5]赤藓醇Erythritol+++d[5]丙酸Propionate-（1、11）--+[5]组氨酸Histidine++++[5]L-半乳糖L-Galactose++++[5]葡萄糖Gluconate++++[4，5]甘露醇Mannit++++[5]抗坏血酸Ascorbate---柠檬酸Citricacid+++续表2项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31对照菌株（CKstrains）28483553Pv.syringaeKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Hydrolysisofstarch-（21、31）---[5]配糖体的分解Esculinhydrolysis+（20、31）+-耐盐性试验Salttolerance3%（31：5%）3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity+（20：水渍状）++-[4]酪氨酸酶测定Tyrosinasetest++-氧化酶Oxidase-（20）-+-[4，5]冰核测定Icenucleationactivity+（20未做）--+[4]3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（31）---[6]烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity+（20、31）-++[4]苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer----[6]甲基红测定Methylred++--[6]过氧化氢酶Catalase++++[6]硝酸盐的还原Nitrateredution----[4]3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction---蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose-（21、30）-+果聚糖的产生Levanformation++++[3～5]41℃生长Growthat41℃----[4，5]果胶溶解Pectinaseactivity+-++[3，4]H2S的产生H2Sproduction----[6]卵磷酸酶Lecithinasetest-++d[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（20）++吲哚的产生Indoleproduction----[6]吐温80的测定Tween80hydrolysis++++[5]明胶液化Gelatinliquefaction++++[4，5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose+++d[5]蔗糖Sucrose++++[4，5]乳糖Lactose---+[3～5]麦芽糖Maltose---表3 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt20、pnt21、pnt30、pnt31对照菌株（CKstrains）28483553Pv.syringae鼠李糖Rhamnose-（31）--山梨醇Sorbitol++++[3，4，5]肌醇Insoitol++++[3，4，5]赤藓醇Erythritol+（20）+++[3，4，5]丙酸Propionate---d[4，5]组氨酸Histidine+++d[4，5]L-半乳糖L-Galactose+++葡萄糖Gluconate+++d[4，5]甘露醇Mannit++++[3，4，5]抗坏血酸Ascorbate----[5]柠檬酸Citricacid+++续表3项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt23、pnt24、pnt27对照菌株（CKstrains）28483553P.viridiflavaKB培养基产荧光FluorescentpigmentonKB++++淀粉水解Hydrolysisofstarch+（24）---[5]配糖体的分解Esculinhydrolysis-+-耐盐性试验Salttolerance3%3%3%与氧的关系Relationtofreeoxygen好氧好氧好氧好氧[6]马铃薯腐败Potatodecaycapacity水渍状+++[4]酪氨酸酶测定Tyrosinasetest++-氧化酶Oxidase+（24）-+-[3，4，5]冰核测定Icenucleationactivity-（24未做）--3%KOH实验3%KOHtest---生长因素要求性测定Growthfacterre-quirement-（27）---[6]烟草过敏实验Tobaccohypersensitivity--++[4]苯丙氨酸脱氨酶Phenylalaninedeaminase---乙酰甲基甲醇测定Voges-Proskauer----[6]甲基红测定Methylred-（24）+--[6]过氧化氢酶Catalase++++[6]硝酸盐的还原Nitrateredution---3-酮基乳糖的产生3-Ketolactose---精氨酸双水解酶Argininereaction----[3～5]蔗糖还原物质产生Reducingsubstancesfromsucrose+（24）-+果聚糖的产生Levanformation+++-[4，5]表4 番茄茎髓黑腐病病原细菌生理生化性状试验结果（Pnt23、pnt24、pnt27）项目测定Characteristics供试菌株（Strains）Pnt23、Pnt24、Pnt27对照菌株（CKstrains）28483553P.viridiflava41℃生长Growthat41℃----[3～5]果胶溶解Pectinaseactivity+-+H2S的产生H2Sproduction----[6]卵磷酸酶Lecithinasetest-+++[5]葡萄糖酸氧化Gluconateoxidation+++葡萄糖氧化发酵试验OFtestOOO脱氮反应Denitrification----[5]尿素测定Ureasetest+（24）++吲哚的产生Indoleproduction----[6]吐温80的测定Tween80hydrolysis+++-[5，6]明胶液化Gelatinliquefaction++++[4，5]NH3的产生Ammoniaproduction-（23）-+碳源利用Carbonsourcesusedforgrowth木糖Xylose+++d[5]蔗糖Sucrose++++[4，5]乳糖Lactose---麦芽糖Maltose---鼠李糖Rhamnose-（27）---[3，5]山梨醇Sorbitol++++[3～5]肌醇Insoitol++++[5]赤藓醇Erythritol+（23）+++[5]丙酸Propionate---d[5]组氨酸Histidine++++[5]L-半乳糖L-Galactose+++葡萄糖Gluconate+++d[5]甘露醇Mannit++++[3，5]抗坏血酸Ascorbate---柠檬酸Citricacid+++续表4从表2～表4可以看出，供试菌株和对照菌株的试验结果存在不一致性。但在如下的试验中表现出相同的结果，超过41℃不能生长，严格好氧，对葡萄糖能氧化（OF试验）不能发酵，3%KOH拉丝，不产生吲哚，不产生硫化氢，在pH值5.0和pH值7.0下果胶凹陷，明胶液化、过氧化氢酶（接触酶）和葡萄糖酸氧化均为阳性；乙酰甲基甲醇测定（V.P.试验）、3-酮基乳糖的产生、苯丙氨酸脱氨酶和脱氮反应均为阴性。在淀粉水解、配糖体的分解、酪氨酸酶测定、耐盐性测验、甲基红测定、氨气的产生、尿素的测定、生长因素要求性的测定、氧化酶反应、冰核测定、卵磷酸酶测定等生理生化试验项目中结果不同。由表2～表4可知，各菌株均能利用木糖、葡萄糖、山梨醇、肌醇、甘露醇、组氨酸、柠檬酸、L-半乳糖、蔗糖；不能利用抗坏血酸。只有pnt1和pnt11能利用丙酸，试验各菌株对乳糖、麦芽糖、鼠李糖和赤藓醇利用结果不一致。根据上述致病性试验结果，供试的22个菌株和对照菌株PDDCC2848，PDDCC3553分别接种番茄品种中蔬四号和加西亚后，均表现发病症状。细菌学特性鉴定结果表明，供试番茄菌株为革兰氏阴性，接触酶（过氧化氢酶）阳性，对葡萄糖不能厌气发酵产酸，不产生吲哚，不产生硫化氢，乙酰甲基甲醇测定为阴性，据此可确定该病属于假单胞属（Pseudomonas）[5]。供试的22个菌株在各试验项目上表现出不同的结果，综合各个试验结果，可大致将供试菌株分为三类，其中pnt1、pnt2、pnt3、pnt4、pnt6、pnt8、pnt9、pnt10、pnt11、pnt12、pnt13、pnt14、pnt15、pnt18和pnt19可归为一类，记为A类；pnt23、pnt24和pnt27可归为一类，记为B类；pnt20、pnt21、pnt30和pnt31可归为一类，记为C类。A类菌株在KB培养基上产生绿色荧光素，可确定为腐生荧光假单胞类群[4，5]。氧化酶测定、明胶液化、过氧化氢酶试验结果均为阳性；甲基红测定、吲哚的产生、硫化氢的产生等试验结果均为阴性；能利用葡萄糖、蔗糖、肌醇、山梨醇、甘露醇、组氨酸、赤藓醇、L-半乳糖、木糖，据此可初步确定A类菌株属于荧光假单胞生物变种Ⅰ（Pseudomonas fluorescens biovarⅠ），但在鼠李糖和麦芽糖的利用、淀粉水解、生长素要求性的测定、吐温80的测定、卵磷酸酶测定等试验上存在差异。Saygili H[11]报道该病菌可以侵染番茄。B类菌株能利用组氨酸、肌醇、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、木糖，不能利用蔗糖、抗坏血酸和鼠李糖；耐盐性测验3%、无冰核活性，在吐温80的分解、酪氨酸酶测定的试验结果中呈阳性，与对照菌株2848完全相同；在氧化酶测定、淀粉水解、卵磷酸酶测定、配糖体的分解、尿素测定、生长素要求性的测定等试验上略有差异，据此初步确定该菌类属于绿黄假单胞菌（Pseudomonas viridiflava）。Alippi A.M.（2003）[12]报道该病菌可以侵染番茄。对于C类，在卵磷酸酶测定、氨气的产生试验结果中呈阴性；在吐温80的分解、酪氨酸酶测定、甲基红测定的试验结果中呈阳性；根据LOPAT试验，从蔗糖形成果聚糖（Levan formation），氧化酶反应（Oxidase），马铃薯软腐试验（Potato decay capacity），精氨酸双水解酶（Arginine reaction），烟草过敏反应（Tobacco hypersensitivity）的结果；不能利用鼠李糖，能利用木糖、葡萄糖、山梨醇、肌醇、甘露醇、组氨酸、赤藓醇；葡萄糖酸氧化呈阴性反应，可以初步确定属于丁香致病变种（P.syringae pv.syringae）。近年来番茄发生茎髓黑腐病，分析其原因，一是可能与品种有关，即引进的番茄品种不抗细菌病害；二是与栽培有关，发病的番茄大棚前茬栽培过芦荟，有线虫为害，可能是线虫为害番茄造成了伤口使得细菌侵入，鉴定出的3种细菌均是弱寄生菌，也正说明了这一点，它们可以侵染生长势弱的番茄。

毛喉鞘蕊花（Coleus forskohlii Briq）系唇形科鞘蕊花属植物，是一种多年生、半肉质的脆性草本药用植物。可用于治疗感冒、咳嗽等疾病，其提取物forskolin 具有降压、强心和抗炎等作用，可治疗心血管疾病、皮肤病等。同时它还可以通过激活腺苷酸环化酶而调节各种组织，是一种其他药物的活化剂。也可作为生化试剂而广泛应用。湖北通城县新磨苗圃基地从云南昆明植物所引种的毛喉鞘蕊花，最近几年连续发生严重的枯萎病，直接降低当地经济效益以及药用开发。其种植土壤为砂壤土，pH值5.5～6.5。每年7月初开始发病，7月下旬到8月初发病最严重，9月份开始减轻。阴雨连绵天气其发病程度加重。因此，自2004年起对其发生为害、病原以及防治进行研究。毛喉鞘蕊花整个生育期都可发病，但不同生育阶段为害程度有所不同，苗期表现较轻，生长中期发病较重。苗期症状表现为：下部叶片最先卷曲，而后下垂，接着整株叶片逐渐萎蔫，似缺水状，数日后叶片呈褐色干枯状，植株萎缩，严重时全株死亡；中后期发病时，接近地面的根茎最先显现症状，表皮粗糙明显变褐，接着沿着根茎向上蔓延，直至全株根茎变褐，剖开其茎部，可见其维管束腐烂呈黑褐色。阴雨天气可见病部表面有白色霉层，即病菌的分生孢子。病株采自湖北省通城县新磨苗圃基地。在发病根茎病健交界处切取小块根茎组织，按常规的组织分离法在PDA培养基上分离菌株。在菌落边缘挑取形态比较单一的小块菌丝块转移到新的平板上培养，重复纯化2～3次。最后进行单孢纯化后保存于PDA斜面上置4℃冰箱内贮存备用。采用伤根蘸孢悬液接种法进行致病性测定，接种7天后可观察到与田间病株相同的发病情况。再分离可得到与接种菌一致的分离物，说明病害即为该病原菌所致。在 PDA平板上观察培养的菌落，再根据病原菌产孢表型、分生孢子及分生孢子梗等形态特征对病原菌进行形态学鉴定。结果表明，该病原菌在 PDA 培养基上，生长3天气生菌丝茂盛，白色絮状，略带浅紫色；培养基反面菌丝呈辐射状分布，5天菌丝由浅紫色变为深紫色。产孢表型观察，气生菌丝有隔、分枝、透明，直径3～5μm，产孢细胞瓶梗状。小型分生孢子0～1 个分隔，卵形或椭圆形，假头状着生，大小为4～11μm× 1.8～4μm。大型分生孢子为典型的镰刀状轻度弯曲，向两端逐渐狭细，顶细胞渐尖并弯曲成喙状，基细胞足状，多数为3隔，少数4～7隔，大小为19～45μm× 2.5～3.5μm。菌落生长 10 天左右大量产生厚垣孢子，多数单个，球形，细胞壁粗糙，直径7～10μm。根据病原菌的形态特征将该菌鉴定为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）。在形态学鉴定的基础上，采用分子鉴定进行辅助鉴定。利用CTAB法提取菌株的DNA，以ITS1与ITS4为引物进行扩增，扩增的DNA测序结果与GenBank中的相关序列进行比对，该菌株与登陆号为DQ002550.1、DQ016211.1～DQ016203.1 Fusarium oxysporum的菌株序列达到最高的同源性，能够比对上的碱基数目最多，E-value值为最小值0。根据生物信息学同源性比对的结果再结合形态学鉴定，将该菌鉴定为尖孢镰刀菌。