虽然应用化学杀菌剂在一定程度上可控制病害的发生，但目前已有越来越多的化学杀菌剂因“3R”现象（Resistance、Resurgence、Residue）而被禁止用于果蔬采后处理。因此，迫切需要寻求新的安全高效的防腐技术以逐步取代化学杀菌剂在果蔬防腐上的使用[1]，因而研究无公害采后病害防治措施势在必行。大量研究表明，植物内生菌除可以给植物提供所需要的营养物质及一些激素外，还参与植物的防卫功能，增强植物抗逆境、抗病害、抗动物危害的能力[2～4]。利用内生菌防治植物病害是个尚待开发的微生物新资源，植物学家、植物病理学家、微生物学家、生态学家及药物学家对此广泛关注和重视。黄皮[Clausena lansium（Lour.）Skeels]属芸香科（Rutaceae）亚热带常绿果树。原产华南，有1500多年栽培史。果实酸甜可口，风味独特，营养价值高且具有保健及药用价值，是深受人们喜爱的特产果品[5]。近年来，我国黄皮栽培面积不断扩大，产量逐年提高。但黄皮果实采后极不耐贮藏，在自然条件下极易变软腐烂，其中炭疽病是造成采后腐烂的重要原因之一，而极大地制约了黄皮果实的销售[6～8]。本研究拟对黄皮果实炭疽病病原菌的鉴定，并对无病果实果皮中存在的拮抗内生菌进行分离筛选，为黄皮果实炭疽病的生物防治打下基础。黄皮果实：黄皮病果来自院校市场，无病果实采自中国热带农业科学院试验场五队。1.2.1 黄皮果实炭疽病病原菌分离鉴定1.2.1.1 黄皮果实炭疽病病原分离、纯化与形态学观察 采用组织分离法对典型黄皮果实炭疽病病果进行病原菌分离、纯化，获得菌种，并进行单胞分离、纯化、保存备用。将纯化的菌种移至PDA平板上28℃恒温培养，记录病原菌的培养性状，显微观察菌丝体形态、孢子形态大小等。1.2.1.2 黄皮果实炭疽病病原致病性测定 将上述纯化的病原菌随机选取10个菌株在PDA培养基上培养7天后，采用刺伤和无伤两种方式进行致病性测定。每菌株刺伤和无伤接种时均接种5个果实，以无菌PDA培养基块接种为对照，重复3次，接种点用湿脱脂棉保湿24h后，将接种的病原菌和培养基清除，逐日观察发病情况。1.2.1.3 黄皮果实炭疽病病原菌鉴定 经分离纯化后获得的病原菌进行显微观察和采用病组织切片直接显微观察病原菌的形态特征，根据形态学鉴定其种类[6]。1.2.2 黄皮果实炭疽病拮抗内生菌筛选1.2.2.1 黄皮果实内生菌的分离纯化 将无病黄皮果实果皮剪成若干小块，经表面消毒与无菌水漂洗后，一部分组织块直接接种于PDA、NA和GSA培养基上，取剩余的材料1g加入10ml灭菌水研碎混匀，用50μl分别涂布于NA和GSA培养基上，28℃下恒温培养，逐日观察内生菌的生长情况，将不同形态的菌落及时转接到相应的斜面培养基上，并统一编号后于4℃保存备用。1.2.2.2 拮抗菌筛选 采用平板对峙法[9]进行对黄皮果实炭疽病病原菌具有拮抗活性的内生菌筛选。将培养7天的病原菌菌丝块（Φ=5mm）接种于PDA平板中央，采用十字交叉法在离菌块中心40mm处接种分离获得的内生菌，每菌株接种4点，以接种纯PDA培养基或NA培养基为对照，28℃下恒温培养3天后，分别测量对照及接种内生菌后的病原菌菌落直径、接种内生菌后的抑菌带宽度、显微观察接种内生菌后的病原菌边缘菌丝体及孢子的变化，计算平均抑菌率及平均抑菌带宽度、显微观察病原菌有无变化。1.2.3 拮抗菌鉴定 对5株具有强拮抗活性的内生菌进行鉴定。内生菌的培养特征、形态特征及生理生化特性测定采用东秀珠[10]的方法进行测定，试验结果参考《伯杰细菌鉴定手册》（第八版）[11]及《常见细菌系统鉴定手册》[10]鉴定其种类。2.1.1 黄皮果实炭疽病症状 黄皮果实感病初期，果皮出现水渍状褐色小点，后扩展为圆形、稍凹陷的褐腐状病斑，湿度大时病部表面产生橘红色孢子堆，果汁从病部裂口处溢出。2.1.2 病原菌培养特征及形态特征 经分离纯化，从病健交界处分离获得的病原菌基本表现一致的培养特征，在PDA平板培养基上，菌落初为白色，后变为灰白色，气生菌丝绒毛状，后期产生橘红色黏孢团。直接从黄皮果实病部的橘红色孢子堆镜检观察，分生孢子盘内产生大量褐色有隔刚毛，产孢细胞圆筒形，无色，分生孢子无色单胞，圆筒形，两端钝圆，内含物颗粒状，对分离纯化培养的病原菌进行镜检，菌丝无色，有隔，分生孢子无色，单胞，圆筒形，两端钝圆，大小9.5～16.7（13.6）μm×3.2～5.5（4.2）μm，具1～2个油球。分生孢子萌发后遇硬物则在芽管端部产生一褐色、近圆形或不规则形附着胞。2.1.3 病原菌鉴定 根据病原菌的形态特征、培养特性和致病性测定结果，参考有关文献[8，12～13]，将引起黄皮果实炭疽病的病原菌鉴定为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）。先后12批次从健康黄皮果皮组织上分离获得内生菌532株，其中真菌169株，占总分离物的31.77%；细菌363株，占总分离物的68.23%；但在整个试验中，未分离获得放线菌（见表1）。123456789101112合计百分比（%）内生真菌1212139181814171713101616931.77内生细菌35295616212828314323223136368.23内生放线菌00000000000000合计474169253946424860363247532表1 不同批次分离的内生菌数量2.2.1 拮抗内生菌的筛选 根据平均抑菌率及平均抑菌带宽度、显微观察病原菌菌丝体及孢子有无变化的测定结果看，分离获得的169株内生真菌对黄皮炭疽病病原菌均无拮抗作用，对内生真菌与病原菌交界处的病原菌进行观察，未发现病原菌菌丝体或分生孢子有异常变化。而在分离获得的363株内生细菌中，105株对黄皮炭疽病病原菌有不同程度的拮抗作用，占内生细菌的28.93%（见表2）。对峙培养3天后，5株内生细菌的平均抑菌率大于80%或抑菌带宽度大于10mm，分别为B98、B131、B232、B247和B294。拮抗活性无拮抗活性弱拮抗活性中度拮抗活性强拮抗活性菌株数25852485比例（%）71.0714.3313.221.38表2 内生细菌对黄皮炭疽病菌的拮抗活性5株内生细菌的菌落形态及经染色后观察的菌体形态见表3，生理生化特征见表4。依据参考文献《伯杰细菌鉴定手册》（第八版）[11]和《常见细菌系统鉴定手册》[1]，5菌株初步鉴定为：B98为荧光假单胞杆菌Pseudomonas fluorescens Migula，B131、B232、B247和B294均为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（Ehrenberg）Cohn。菌株菌落特征形状颜色边缘表面透明度可溶性色素革兰氏染色形态鞭毛染色芽孢运动性B98圆形淡黄色整齐光滑不透明黄绿荧光色素-杆状单根极生-+B131圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B232圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B247圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++B294圆形白色不整齐粗糙不透明-+杆状多根周生++表3 黄皮拮抗内生菌的培养特性及形态学菌株厌氧生长氧化酶接触酶明胶液化淀粉水解碳源利用D-葡萄糖L-阿拉伯糖D-木糖D-甘露糖柠檬酸盐葡萄糖产酸B98-+++-+++-++B131--+++++++++B232--+++++++++B247--+++++++++B294--+++++++++石蕊牛奶丙酸盐硝酸盐甲基红V-P反应pH值5.745℃生长吲哚产生H2S产生7%NaClB98还原、胨化++--+--++B131还原、胨化-+-+++--+B232还原、胨化-+-+++--+B247还原、胨化-+-+++--+B294还原、胨化-+-+++--+表4 黄皮拮抗内生菌的生理生化特征通过对病害症状的观察、病原菌的分离纯化、形态学鉴定及致病性进行测定，确定引起黄皮果实炭疽病的病原菌为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），该病原菌是造成黄皮果实腐烂的主要原因之一。通过对无病黄皮果实果皮组织中的内生菌研究表明，果皮中存在丰富的内生菌资源。大量的内生菌与黄皮的生长发育、抗病性等之间的关系有待进一步研究。通过对分离获得的内生菌与黄皮果实炭疽病病原菌（C.gloeosporioides）进行对峙培养，28.93%的内生细菌具有拮抗作用，可见在黄皮果实组织中存在对该病原菌有抑制作用的拮抗菌具有多样性，这可能是黄皮果实抗病力较强的重要原因之一，为开辟黄皮炭疽病的生物防治提供了重要的原材料，为黄皮的无公害生产打下了基础。

由稻瘟病菌（Pyricularia grisea Sacc.有性世代为Magnaporthe grisea）引起的稻瘟病是水稻最具毁灭性的病害之一。全球每年因稻瘟病造成的水稻产量损失达11%～30%，年平均超过1000万t[1]。我国南北各稻区每年均有不同程度的发生和流行，一般减产10%～20%，重的达40%～50%，局部田块甚至颗粒无收[2]。20世纪90年代以来，我国稻瘟病发生面积每年都在380万hm2以上，年损失稻谷达数亿千克[3]，遗传抗性、选育和利用抗病品种是最有效、最经济、对环境最友好的防治策略[5]。培育抗病品种是首要任务，在生产上一般通过化学防治和种植抗性品种来控制稻瘟病害。化学防治虽然能发挥一定的作用，但在病害流行年份收效甚微，且容易造成环境污染[4]。长期的生产实践证明，利用遗传抗性是发掘新抗源和鉴定抗性基因的重要手段，为此，世界各主要产稻国几乎都投入大量人力、物力开展稻瘟病抗性遗传研究，迄今已鉴定和定位了一大批抗瘟基因，并克隆了部分抗瘟基因，为阐明水稻抗瘟性分子基础、培育广谱或持久抗瘟水稻品种奠定了基础。但是，许多抗病品种在生产上推广几年之后就丧失了抗性，如何寻找新抗源延长品种稻瘟病的抗性周期，已成为各水稻生产国水稻改良项目中的首要问题[6]。水稻航天育种（Rice Space-flight Breeding）技术是将水稻干种子搭载返回式卫星、航天飞机、飞船或高空气球，经过空间特殊环境的诱变作用产生变异，在地面上选择有益变异培育新种质、新品种的育种方法[7]。自1987年以来，我国先后多次利用返回式卫星或高空气球搭载植物、农作物种子，进行空间诱变育种研究，并取得了一批极有价值的研究材料和成果，同时，还发掘和筛选一些罕见的具有利用价值的突变体。本研究利用返回式卫星搭载，空间诱变中感稻瘟病的优质水稻品种“中二软占”[8]，分析其3个抗病诱变品系的抗性遗传基础，为抗病育种提供新种质，同时为定位和克隆抗病突变基因打下基础。1.1.1 水稻材料 研究材料为H1、H2及H3，由“中二软占”干种子经返回式卫星搭载空间运行18天后返回地面种植，连续多代单株选择所获得的SP4代诱变品系，性状基本稳定。部分“中二软占”种子留在地面，作为非诱变原种对照。经38个稻瘟病代表性菌株测定，H1、H2及H3的苗瘟抗谱均为94.74%，原种对照为28.95%；3个诱变品系连续2次在代表性病圃的田间穗茎瘟抗性均表现高抗稻瘟病，而原种对照均表现高感稻瘟病（数据未发表）。1.1.2 稻瘟病菌株 菌株GD0193和GD3286被选择作为水稻材料抗性遗传分析菌株，采用中国7个鉴别寄主分别被鉴定为ZB13和ZA1小种，属于籼型致病小种；采用14个对广东稻瘟病菌具有较好鉴别能力的单基因鉴别寄主进行鉴定，致病型分别为I-01-04和I-02-03，其中GD0193可侵染Pi-k、Pi-kp、Pi-7（t）等8个单基因鉴别寄主，GD3286可侵染除Pi-zt外的13个单基因鉴别寄主。GD3286是一个广致病谱菌株，GD0193的致病谱也较广[9]，2个菌株均具有较好的代表性。“中二软占”对这两个菌株均高度感病。1.2.1 诱变品系H1、H2及H3对稻瘟病的抗性遗传分析 性状稳定的SP4代突变品系H1、H2及H3作为父本分别与感病亲本丽江新团黑谷（LTH）杂交，获得F1代种子，并自交获得F2代种子。F1及F2代均分成两份，一份接种稻瘟病菌GD0193，另一份接种GD3286。F1代选择抗病单株，F2代统计各个菌株对应的抗病株数和感病株数，明确抗感分离情况，采用χ2计算抗感分离比例，分析抗性遗传基础。1.2.2 接种及病情鉴定 分别于2006年4月和8月将F1及F2代种子分成2份按2cm×1.5 cm的规格播于50cm×30cm×8cm的育秧盘中，每一盘的两侧均按同样规格播种原种对照及诱变品系各一行。秧苗长至3.5～4叶时，一份接种菌株GD0193，另一份接种GD3286。采用高压喷雾接种，接种液的孢子浓度为5×104个/ml，每盘接30～40ml孢子悬浮液。接种后于25℃暗室保湿24h，然后移至22～30℃的遮阴网室，定期喷雾保湿，7天后进行病情鉴定。病级划分按全国统一的0～9级标准进行，0～3级的定为抗病，4～9级的定为感病。鉴定结果表明，3个诱变品系H1、H2及H3与LTH杂交之F1代对2个稻瘟病代表性菌株GD0193和GD3286均表现出高抗水平。可见，其对菌株GD0193和GD3286的抗性均由显性基因控制。原种对照对这2个菌株均表现出高感水平，说明空间环境对“中二软占”产生了抗瘟性诱变，可从其后代获得有益的抗病突变体。本研究中“中二软占”为籼稻，从其空间诱变后代选育出的突变品系H1、H2及H3经形态鉴定仍属籼稻，以突变品系作为父本与国际上公认的、不含任何主效抗性基因的普感稻瘟病的粳稻品种丽江新团黑谷[10]杂交，属于籼粳亚种间杂交，其F1代植株形态上介于两者之间，很容易辨别，可完全淘汰假杂株。本研究采用抗性鉴定和形态辨别相结合的方法以确保F1代植株准确无误。由表1和表2可知，非诱变原种和LTH对稻瘟病菌株GD0193和GD3286均表现感病，突变品系H1、H2及H3对两菌株均表现抗病。H1×LTH之F2代群体对两菌株的抗感植株比都符合3：1的理论比值，表明H1对两菌株的抗性分别受一对显性主效基因的控制。H2×LTH和H3×LTH的2个F2代群体对菌株GD3286的抗感植株比均符合13：3的理论比值，符合2对显性基因控制的遗传，说明H2和H3对稻瘟病菌GD3286的抗性均受两对主效基因控制，2对抗性基因之间可能存在一定的互作。H2×LTH之F2代群体对菌株GD0193的抗感植株比既不符合13：3的分离比例，更不符合3：1或15：1的理论比值，说明其对菌株GD0193的抗性遗传基础较为复杂。H3×LTH之F2代群体对菌株GD0193的抗感植株比符合3：1的分离比例，说明H3对菌株GD0193的抗性也由一对显性主效基因控制。InoculatedmaterialsDeviationofresistanttosusceptibleRSR∶SExpectationχ2χ20.05Originalvariety015Space-inducedlineH1150Space-inducedlineH2150Space-inducedlineH3150LiJiangXinTuanHeiGu(LTH)015F2(H1×LTH)3411142.99∶13∶10.0009663.84F2(H2×LTH)4411094.05∶113∶30.2134483.84F2(H3×LTH)9772004.89∶113∶31.4069803.84Table 1 The deviation of resistant to susceptible of the original variety (CK),parents and their F2 populations inoculated by isolate GD3286InoculatedmaterialsDeviationofresistanttosusceptibleRSR∶SExpectationχ2χ20.05Originalvariety015Space-inducedlineH1150Space-inducedlineH2150Space-inducedlineH3150LiJiangXinTuanHeiGu(LTH)015F2(H1×LTH)178583.07∶13∶10.00563.843∶127.5737F2(H2×LTH)320466.96∶113∶35.43483.8415∶123.8696F2(H3×LTH)3701023.62∶13∶12.71473.84Table 2 The deviation of resistant to susceptible of the original variety (CK),parents and their F2 populations inoculated by isolate GD0193稻瘟病是水稻最主要的病害，对水稻生产危害极大。稻瘟病的化学防治成本高、污染环境，所以抗病品种的培育十分重要。而生产上要得到抗病新种质十分困难，迄今已鉴定和定位50多个主效抗瘟基因和20多个QTLs位点[4]，成功地克隆了Pib、Pita、Pid2、Pi9、Pi2、Pizt和Pi-36等7个抗瘟基因[11～14]，为揭示水稻抗瘟性分子基础，以及通过分子育种手段培育广谱或持久抗稻瘟病品种奠定了基础。通过空间诱变技术培育抗病品系，挖掘抗病新种质，对农业生产意义重大[15]，可为水稻抗病育种开辟一条新的途径。空间诱变因太空特殊环境可以使植物产生罕见的突变体，为获得在地面上难以得到的新种质提供了一种快捷有效的途径，是产生新基因源的重要途径之一，因而越来越受重视。自开展空间诱变育种研究以来，有关水稻空间诱变材料性状变异的研究已有不少报道，但主要集中在重要农艺性状，如株高、分蘖、有效穗、千粒重等方面，而对空间诱变抗病性变异的研究目前尚处于起步阶段[16]。水稻空间诱变的机理是复杂的，基础理论研究十分薄弱，需系统地从不同角度和层次进行研究。本研究从表型上证实H1、H2和H3三个诱变品系对稻瘟病表现出广谱高抗水平，同时还保留了原品种优良的农艺性状（数据未发表），完全可作为新的抗病种质应用于育种实践。经遗传分析，确定突变品系H2对菌株GD0193的抗病性表现出较为复杂的遗传基础，非一两对基因能够解析，说明空间诱变对水稻基因组引起的变异效应并非单个位点的，有两个位点甚至多个位点的突变。突变品系H1对稻瘟病菌GD0193和GD3286的抗病性分别受一对主效基因控制，控制这两个菌株的抗性基因是否一致有待进一步的研究。突变品系H3中控制菌株GD0193抗性的一对主效基因与其控制菌株GD3286抗性的两对显性基因是否有一对重叠，抑或都不一样也是一个值得深究的问题。本研究表明，诱变品系H1、H2及H3均具有广谱的质量抗性，田间均达到高抗水平，深入剖析其质量抗性基因和数量抗性座位（QTLs），有助于对空间诱变抗性变异机理开展有益的探讨。在抗病育种实践中广谱的主效基因易于应用，可通过有性杂交、回交、复交等育种手段将其转育到目标品种中，同时利用与其紧密连锁的分子标记进行辅助选择可大大提高选择的效率。GD3286菌株是一个致病谱广、致病力强的稻瘟病菌株，本研究已证实广谱高抗突变品系H1对该菌株的抗性受一对主效基因控制，对该抗病基因的转育将具有较大的实用价值，因此定位该抗病基因显得尤为迫切。通过分子标记对广谱高抗突变品系的主效基因进行精细定位，一方面，通过育种手段将其转入到作物基因组中使目标性状得以表达；或者通过分子标记辅助选择，将分子生物学与传统遗传育种相结合，借助目标基因紧密连锁的遗传标记，分析基因型，鉴定分离群体中含有目标基因的个体，可以加快抗病育种进程；另一方面，对其进行精细定位为进一步克隆奠定基础，目前这方面的工作正在开展之中。

The small brown planthoppers(Laodelphax striatellus)is an important pest in single late rice seedling stage in Zhejiang province and also the vector of the rice stripe virus,threatened paddy rice production.Through the investigation of transplanting time of rice seeding,occurrence quantity and carriage rate of overwinter and the first generation of the small brown planthoppers in wheat field and weed at the beginning of 2007,the small brown planthoppers mainly immigrated Early Sowing single late rice seedling from wheat field and weeds.The generation of the small brown planthoppers is the most serious in sowing single late rice seedling,and easily arouse the outbreak of the rice stripe virus.Currently,control strategy of the rice stripe virus is"cut off a poisonous chain,cure insect to control the disease".During the last years,by investigating the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and adopting chemistry prevention at different number of times to control it,we research the relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and the incidence of the rice stripe virus for explicating the affection of insect quantity in rice seedling stage and chemistry prevention to incidence of the rice stripe virus.Now we report the result as follows.Agent:40%Chlorpyrifos(zhejiang xinnong chemical company limited).Experimental field is in the experimental area of Shuangqiao academy of agricultural science in Xiuzhou district of Jiaxing City;rice variety is Jia 991 and is offered by Jiaxing academy of agricultural science.1.2.1 Seed treatment May 10 in 2007,rice seed is immersed in 2000 times'402 liquid over72h.May 13,we took it out and flushed with the clear water,then put it in the thermostat in 37℃ in order to pregerminate and seeded on May 15.1.2.2 Experimental design The rice seedling bed is divided into 15 small areas that is 2m2 and each small area stays the partition of 30cm.Each small area is sowed seeds quantity homology.15 small areas are divided into 5 processing and the everywhere manages 3 small areas.5 processing differences expect:no application,once application,2 times application,3 times application and 4 times application in the rice seedling stage.Application of time is such as the table 1.The agent of prevention chooses to 40%Chlorpyrifos that diluted to 500 times liquids to spray.ApplicationtimeApplicationnumberoftimes0times1times2times3times4times5/24√√√√6/1√√√6/8√√6/15√Table 1 Different application number of times and time1.2.3 Investigation of the small brown planthoppers quantity in rice seedling stage and incidence of the rice stripe virus We have investigated the small brown planthoppers quantity of every small area in rice seedling bed before application since May 24.The small area is investigated in 3 point and everywhere is 0.11m2,and we statistics the average of insect quantity in each point and compare with the quantity in different processing.We statistics the amount of rice seedling and the number of infected plants in every small area on June 20 when the rice seedling transplanted to the field,and computed the incidence of the rice stripe virus in each area.1.2.4 Incidence of the rice stripe virus in the field After investigating incidence of the rice stripe virus in rice seedling stage,we transplanted the rice seedling from 5 processing area including no preventing,preventing once,2 times,3 times,4 times into the field,and periodical investigated the incidence of the rice stripe virus in the field.Each small area is chose 5 points while investigating,and investigated 250 stubs on each point and computed incidence in every small area.2.1.1 The small brown planthoppers quantity in rice seedling stage Investigate a result on May 24,The small brown planthoppers all is longwing adults in each small rice seedling area,and the insect quantity is 138 in each 0.11m2;amount of insect in the field has a little bit decrease on June 1;on June 8 it obviously reduces and the number of egg and low instar nymphst increases gradually;until June 15 it has been basically low instar nymphst.The result of investigation indicates,from June 1 to May 24,the insect quantity of every processing area presents to a descend trend,but the decrease range of the insect quantity in applicationarea is higher than in no application;From June 1 to June 15,the insect quantity of no and once application area increases gradually,which are higher than the cardinal number of ex-experiment,but the amount of insect in the other application areas have gradually decrease,see table 2,figure 1.Date(month/day)0time1time2times3times4times5/241381451621431526/11191121251161206/8211175142122986/152471991398465Rateofincreasesordecrease(%)78.9937.24-14.20-41.26-57.24Table 2 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing areas of rice seedlingFigure 1 Investigation of the small brown planthoppers quantity in different processing aras of rice seeldingWith the insect quantity of ex-application in each small area for cardinal number,compared with the amount of the last investigation,the insect quantity in no and once application area increased by 78.99%and 37.24%respectively,but it in 2 times,3 times and 4 times application area reduced by 14.20%,41.26%and 57.24%respectively.Experiment indicates,application inrice seedling bed can effectively repress the small brown planthoppers quantity in the field,and with application number of times increasing,which restraint effect is strengthen and amount of insect in small area reduces 57.24%with 4 times application.2.1.2 Investigation of the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed The investigation of incidence of the rice stripe virus on that day when the rice seedling was transplanted to the field,there is all discovered diseased plants in each small areas,but which number in the small area of no application is obviously more than the application area.The incidence of no,once,2 times,3 times and 4 times application areas respectively is 5.53%,3.90%,2.27%,1.50%and 1.36%,see table 3.Experiment enunciation,application in the rice seedling bed is not only lower amount of the small brown planthoppers in the field,but also ease occurrence of rice stripe in rice seedling bed.ApplicationtimesInriceseedlingbedDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofriceseedling(%)InthefieldDiseasedplantAmountIncidence(%)Reductionrateofthefield(%)0time993179655.530237129618.2901time719184293.9029.48170113814.9418.322times404178302.2758.95116102011.3737.833times270180211.5072.887311016.6363.754times247181541.3675.416114234.2976.54Table 3 The investigation of incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed(Jiaxing,2006)Seen from the investigation of the incidence of rice stripe virus with the different processing,the incidence in rice seedling bed of no application is lowered by 29.48%compared with once time application;compared with 2 times,the incidence is lowered by 29.47%with once application,and it is descended by 13.19%compared 2 times with 3 times;but compared 4 times application with 3 times,the incidence in rice seedling bed is only lowered 2.53%.This is because of the rice stripe virus has an incubation stage in rice plant after infection,and there is 12 days at least from infecting to outbreak;than the outbreak of rice stripe virus in rice seedling bed is on June 20.So that ex-3 times application depressed the cardinal number of the small brown planthoppers,and reduced the infection and the incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed.But it is not obviously influencing for the incidence in rice seedling bed with the 4th time application on June 15.The result that we periodic investigate the rice stripe virus in the field,the incidence in the field is basically stability after transplanting 40 days,and no longer appear a new disable plant.Because on the rice seedling stage we adopted the chemistry prevention with different number of times,the incidence of the rice stripe virus exists difference after the rice seedling transplanted to the field.The incidence is the tallest in no application small area and lowest in 4 times application small area.Along with the increment of application number of times,the incidence presents to obviously descend trend.With no,once,2 times,3 times,4 times application the incidence is in order to 18.29%,14.94%,11.37%,6.63%and 4.29%in the field.It is shown that application in the rice seedling bed depressed the small brown planthoppers quantity,and the function is very obviously for ease the occurrence of the rice stripe virus.Analyzed the incidence of the rice stripe virus in various processing,it in the field with once and two times application distinctly descend 18.23%and 37.83%compared with no application;but when with the application number of times increase to 3 times,the descends range of the incidence is 63.75%and prevent effect is obviously higher than that with 2 times application,than after 4 times application the incidence descend to come to 76.54%.The relationship between the small brown planthoppers quantity in rice seedling bed and incidence of rice stripe in rice seedling bed and field analytical,such as table 4,figure 2 shown.The relativity analyzes indicated,the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in rice seedling bed(y)relation type is y=0.03 x+2.89,related coefficient r=0.99**;the small brown planthoppers quantity(x)and incidence of rice stripe in the field(y)relation type is y=0.10x+11.03,related coefficient r=0.98**.The relationship between the small brown planthoppers quantity and incidence of rice stripe virus in rice seedling bed and field present positive correlation.ApplicationtimesChangerateofthequantity(%)Incidenceinriceseedlingbed(%)Incidenceinthefield(%)0time78.995.5618.292times37.243.8914.943times-14.202.2711.375times-41.261.506.636times-57.241.364.29Table 4 The investigation of the small brown planthoppers quantity and incidence of the rice stripe virus(Jiaxing,2006)It is very obvious that preventing the small brown planthoppers in rice seedling bed for controlling the occurrence of the rice stripe virus.The result of adopting the different application times indicates,that is repressed growth of the small brown planthoppers quantity,and also eased the occurrence of the rice stripe virus with increasing the application number of times.As the result of the test shows,there is the forward relationship between the range of incidence and application times;through investigating the incidence in the field,we can confirm that reasonable application is effectively to controlling the occurrence of the rice stripe virus.Moreover analysis of the relationship between the small brown planthoppers quantity,incidence of the rice stripe virus in rice seedling bed and it in the flied,there have a positive correlation.Experiment shows,the reasonable and multiple application in rice seedling bed is the effective means to reduce the small brown planthoppers quantity and controlling the rice stripe virus.The controlling effect of the rice stripe virus is reached 70%with application 3 or 4 times on rice seedling stage.Therefore we suggest that we should pay attention to controlling the small brown planthoppers of the rice seedling bed at the rice stripe virus heavier region or age,especially in the rice seedling bed where sow seeds early and easily cause the small brown planthoppers centralize immigration.In order to prevent effectively,we should increase the number of application times to lower the small brown planthoppers quantity in the field,and control the harm of the rice stripe virus.Figure 2 Relationship between the small brown planthoppers quantity andin cidence of rice stripe virus in different prevention of rice seedling bed

2006年10月以来，温州市乐清、瑞安、苍南、瓯海、龙湾等地设施栽培的番茄上相继发生了一种新的严重为害蔬菜的病毒病——番茄曲叶病毒病。在各县有关部门的大力协助下立即从5个不同地点采集了病症表现典型的番茄植株样本，送到浙江大学生物技术研究所鉴定，经该研究所对病样用超薄切片电镜观察、酶学检测（ELISA）、分子检测，确认为台湾番茄曲叶病毒（Tomato leaf curl Tanwan virus，TLCV）。该病毒在温州市系首次发现，经检索国内未见报道。番茄曲叶病毒病是一种毁灭性的病害，是世界许多地区番茄生产上的重要限制因素，各地务必引起高度重视。据调查，2006年12月在苍南县灵溪镇河口叶村蔬菜基地、瑞安市梅屿乡外三甲村蔬菜基地、瓯海区新桥、娄桥街道蔬菜基地、乐清市虹桥镇武宅村，秋季定植的越冬番茄病毒病的株发病率为3%～30%；龙湾区天河镇蔬菜示范园区、乐清市蒲岐镇东门外村番茄受害最重，许多田块株发病率高达95%以上，农民已基本放弃管理或拉秧改种。据初步统计，2006年初冬温州各县（市、区）番茄病毒病的发生面积约3000亩，其中株发病率＞50%的田块面积约300亩，给当地的番茄生产造成了惨重损失。染病番茄植株矮化，生长缓慢或停滞，顶部叶片多稍褪绿发黄、变小，叶片边缘上卷，叶片增厚、叶质变硬，叶脉常呈紫色。早期染病的植株常严重矮缩，开花结果异常，后期染病的植株仅上部叶和新芽表现症状，结果减少、果实变小，成熟期果实着色不均匀（红不透），基本失去商品价值。该病病原为Tomato leaf curl Tanwan virus，属烟粉虱（Bemisia tabaci）传染类双生病毒，种子和土壤均不传毒。该病毒只能经由烟粉虱传播。温州地处亚热带地区，气候温暖，阳光充足，雨量充沛，降雨集中在春季和夏季，秋季较为干爽（年平均气温19.3℃，最热的7～8月平均气温29.1℃）。2006年7～11月，温州市天气总体上呈高温干爽天气，对虫媒烟粉虱的发生、繁衍十分有利，这可能是该病严重发生的诱因之一。据初步调查，2006年9～10月，秋番茄育苗时，烟粉虱发生普遍，经检测以B型为主。烟粉虱发生数量大、活动频繁是导致该病流行的重要原因。据初步调查，目前温州生产上推广的大多数番茄品种如红梅王、FA-189、516、托马雷斯、合作903等对该病毒的抗病性较差。据本所研究，B型烟粉虱在温州地区每年发生10～11代，在温室内无明显的越冬现象，十分适宜在当地生长、繁衍。预计今后该病很有可能会随着带毒烟粉虱的扩展而迅速蔓延开来，应立即采取积极有效的措施进行防控。防治病毒病的关键措施之一是选育抗病品种，抓紧引进、筛选抗耐病的优良品种是当前的重要任务。（1）育苗床与大田生产要分开；（2）使用40～60目防虫网隔离育苗，避免苗期感染；（3）苗床悬挂粘虫色胶板（本所研制）诱杀烟粉虱，减少传毒媒介。（1）加强肥水管理，增强植株抗病能力；（2）地膜覆盖，去除边际杂草；（3）及时去除植株下部烟粉虱虫、卵枝叶；（4）收获后及时清洁棚室和周围环境。及时、及早防治烟粉虱以控制病毒病的发生。从烟粉虱零星发生开始，交替使用99.9%绿颖农用矿物油200～300倍稀释液、20%啶虫脒（兰宁）可溶性液剂3000倍稀释液、25%扑虱灵可湿性粉剂1000～1500倍稀释液、25%阿克泰水分散粒剂2000～3000倍稀释液、2.5%天王星乳油2000～3000倍稀释液、1.8%阿维菌素1500倍稀释液、1%甲胺基阿维菌素2000倍稀释液等药剂喷雾防治烟粉虱。绿野牌即开式环保型高效粘虫色胶板系列产品是温州市农业科学院生态环境研究所（植物保护开发研究中心）最新研制成功的一种工厂化生产的绿色植保产品，现已投入批量生产。本产品根据害虫特有的生物学特性，采用特种纸胶、光技术及先进工艺制成，不含有毒物质，不污染环境，可用于监测和防治经济作物的微小害虫及畜牧场、果蔬储藏室等地的双翅目卫生害虫等。本产品是一种高效、实用的害虫无害化防治新产品，使用本产品可避免和减少施用农药给环境带来的污染及其对人体健康的危害，本产品特别适合于在无公害农产品、绿色食品以及有机食品生产中使用。1.产品特点：特定光谱，诱杀效果显著，双面诱杀，控制范围广；特种纸板，平整不卷曲；胶种防水粘度高，高温不流淌，持久耐用；携带方便，即开即用。2.产品规格：通用A型（黄色），22cm×27cm、每封12张；通用B型（黄色），12cm×15cm、每封20张。3.用途：监测和直接诱杀防治害虫。4.诱杀对象：通用A、B型板诱杀烟粉虱，白粉虱、黄曲条跳甲、潜叶蝇、蚜虫、蓟马及多种双翅目害虫等，也可防治蟑螂等害虫。5.适用场地：温室、塑料大棚、花圃苗房、果园、果蔬储藏室、畜牧场、家居等。6.适用作物：蔬菜、花卉、茶叶、中药材、果树等。7.挂板时间：用于防治时，于害虫发生初期挂；用于监测时从作物苗期开始挂；其他酌情。8.悬挂方法：低矮生蔬菜和作物胶板东西向垂直挂在底边离植株15cm处；搭架作物顺行向垂直挂在架中部（即挂在两行中间）；其他酌情。9.用量：防治用每标准大棚（6m×30m）挂A型板1～2封，其他按面积测算，每粘满虫后换一张；监测用每棚挂B型板1～2小张，或将A型板一分为二后挂。10.专利号：ZL2004 20027355.1

杨树水泡溃疡病（Botryosphaeria dothidea）是为害杨树的重要病害，影响植株生长甚至导致死亡，近年来随着杨树栽植面积的快速增大，杨树水泡溃疡病发病益显严重。目前对该病的防治对策以壮树防病结合化学药剂防治为主，鉴于人类对环境质量要求的提高，生物防治日益受到人们关注。植物内生细菌是一种重要的生物农药来源，其不仅可以抑制病原微生物的生长，还可以促进寄主的生长。因此，越来越受到植物病理学家的重视。目前国内外已有从不同植物中获得内生菌的报道，但杨树内生菌尚未见报道。我们尝试从杨树上获得内生细菌，为用于杨树病害的生物防治奠定基础。杨树水泡溃疡病（ Botryosphaeria dothidea）害标本由本实验室保存。分离材料取自山东省泰安市区和市郊绿化或用材杨树，将带杨树水泡溃疡病病斑的组织用常规稀释方法[1]，分离内生细菌。对分离得到的内生细菌进行划线培养，挑取单菌落纯化保存。将分离获得内生菌PE0704进行菌落形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色[2]，并对PE0704的16SrDNA序列进行扩增、测序和序列分析。取PE0704菌体，以对峙培养法测定其对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长的抑制作用，采用凹穴法测定其对病原菌孢子萌发的抑制作用。设置不同的发酵条件，对PE0704进行发酵培养，测定发酵液对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。不同的分离方法对杨树内生细菌的分离效果不同。尤其是组织块的破碎程度以及经消毒、破碎后的组织块是否振荡处理，对内生细菌的分离影响很大。改进的分离方法如下：首先将组织块用75%的酒精、5%的NaClO进行表面消毒，研碎，然后在25℃下振荡培养2h，取培养液，按常规稀释法稀释、涂板，置28℃下培养。利用该方法，从杨树中获得37个内生细菌菌株。经初步筛选得到了对杨树水泡溃疡病菌抑菌活性较好的内生细菌菌株，其中菌株PE0704抑菌效果表现最好。将PE0704在NB平板培养基上划线培养，培养24h时菌落表现为白色、椭圆形、边缘整齐、中央凹陷、表面干燥、粗糙、不透明。该菌体短棒形，两端钝圆，产芽孢、中生、周生鞭毛、革兰氏染色为阳性。对PE0704的16SrDNA进行扩增、测序，共获得该菌16SrDNA的全长为1500bp的部分序列，该序列通过NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）进行BLAST比对，与已报道的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的16SrDNA序列相似度高，其中与枯草芽孢杆菌（B.subtilis）（AB016721.1）等的相似度高达97%以上。结合该菌的菌体形态和染色反应结果，参照《常见细菌系统手册》（第1版）[3]，基本确定该菌株为B.subtilis。PE0704的菌体对杨树水泡溃疡病菌的菌丝生长有较强的抑制作用，能够明显抑制菌落生长直径，并导致菌丝形态发生了显著变化。镜检发现，其菌丝细胞粗短，扭曲；菌丝顶端和中部细胞膨大成球形或椭圆形；随着时间的延长畸变程度加重，菌丝出现断裂、变成空泡。PE0704的菌体能够抑制杨树水泡溃疡病病菌的孢子萌发，并引起萌发孢子的芽管畸变、其菌丝畸形。对PE0704进行不同条件的发酵培养，结果发现，PE0704的发酵液能够抑制杨树水泡溃疡病菌的菌丝生长和孢子萌发，并引起菌丝形态异常。在几种供试培养基中，在BPY中培养获得的发酵液的抑制作用最强，振荡培养72h的发酵液开始表现明显抑菌作用，96h的抑菌作用最强。杨树中存在着对杨树水泡溃疡病菌具有抑制作用的内生细菌，本试验从杨树中获得了37个内生细菌菌株，部分具有抑菌活性。通过菌落形态观察，革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色，并经16SrDNA序列分析，确定获得的内生菌株PE0704为枯草芽孢杆菌（B.subtilis）。PE0704菌的菌体和发酵滤液对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长和孢子萌发都有较好的抑制效果，能够抑制其菌落生长，并引起菌丝形态产生畸形，能够抑制病原菌孢子萌发，并引起其芽管畸形。鉴于PE0704对杨树水泡溃疡病菌的良好作用效果，可进一步开展菌株拮抗作用机理和发酵条件的研究，为生物农药的研发提供重要依据。

辣椒病毒病又名辣椒花叶病，是辣椒生产的主要病害之一，近年来在三门峡地区发生日趋严重。发病田块一般减产10%～30%。花叶型初现明脉轻微褪绿或现浓、淡绿相间的斑驳，全株叶片褪绿，继续发展则叶面皱缩畸形，或形成线形叶，果实变小，植株严重矮化；黄化症状呈上升趋势，表现为叶色均匀黄化或黄色斑驳，植株矮化或矮化不明显；坏死型主要表现为枯顶症状，病株部分组织变褐坏死，植株生长点呈水渍状枯死，叶片黄化，随后叶片逐渐脱落，在叶片上，产生黄绿相间的斑驳或大型黄褐色环斑；畸形丛枝型的植株节间缩短，幼叶狭窄或呈线状，叶面皱缩，植株上部叶丛生，呈丛簇状，重病果面有深绿、浅绿相间的花斑和疣状凸起，果面凸凹不平，病果易脱落；易导致落叶、落花、落果，病株严重矮化，叶小而少，株小。果实常出现黄绿相间的花斑或黄色环斑、畸形，易腐生其他杂菌而烂果，严重影响辣椒的产量和品质。主要为前两种。在辣椒上，烟草花叶病毒和马铃薯X病毒引起系统花叶症状，烟草花叶病毒的不同株系分别引起系统花叶、系统环斑和条斑症状。黄瓜花叶病毒寄主范围非常广泛，毒源植物十分普遍。在田间主要靠蚜虫飞迁传毒，主要种类有桃蚜、萝卜蚜和瓜蚜等。种子和土壤中的病残体不能传播，摩擦传毒也不重要。烟草花叶病毒的主要初侵染源是土壤中的病残体，而带毒种子和卷烟或旱烟不是主要的初侵染源。在田间主要通过田间操作接触传播。马铃薯X病毒主要毒源是马铃薯，主要靠摩擦传播，不能通过蚜虫传毒，种子和土壤中的病残体也不能传播。辣椒病毒病发生及轻重与病毒类型、环境条件、栽培技术、品种抗病性有密切关系。栽植适龄壮苗，合理密植，早期防蚜等综合防治措施可以有效地减轻辣椒病毒病。在早春采用薄膜覆盖等提高地温和保湿防风的措施，秧苗健壮，抗病力增强，可使辣椒不发病或发病轻。而不覆盖的辣椒病毒病较重。定植健壮、适龄的幼苗比弱苗、老龄苗生长好，病毒病轻。重茬地发病重，轮作发病轻。辣椒病毒病的发生还与邻茬有关，辣椒地块的邻茬为番茄则发病重。植株生长茂密、徒长、通风不良的田块发病亦重；辣椒与茄科作物连作、移栽偏晚、地势低洼、土壤贫瘠、缺肥的田块，均可加重病毒病的发生。肥水充足，管理水平高，辣椒生长旺盛，病毒病发生较轻；反之发生较重。黄瓜花叶病毒、马铃薯Y病毒与蚜虫的发生情况关系密切，冬季高温干旱时，蚜虫等传毒介体发生多，扩展速度快，花叶和畸形等类型辣椒病毒病发生早，病害扩展速度快，为害严重。但枯顶型病毒病往往在田间湿度大时发生较多，传播较快；烟草花叶病毒和其他多种植物病毒可以经接触及伤口传播，通过整枝打杈等农事操作传染。新育成的品种如农大21号、农大22号、中椒5号、津椒3号均是抗病的优良品种。3.2.1 种子消毒 用10%硫酸三钠溶液浸种20～30min，洗净后催芽，可防治烟草花叶病毒感染。3.2.2 从无病株上采种，携带烟草花叶病毒的种子可用10%磷酸三钠溶液浸种30min，清水洗净后播种 育苗地要疏松肥沃，清除病残体，并适当早播和适当稀播。在满足幼苗对营养和水分等要求的前提下，实行昼促夜控的苗床温度管理，培育茎秆粗壮，具12～14片叶和50%以上植株现蕾的壮苗，并注意及时防治蚜虫。这样的适龄壮苗定植后一周即可转青，而且封垄早，生长健壮，抗病力强。3.2.3 营养钵育苗在育苗期间，采用塑料钵育苗 把调配好的营养土装入钵内，每钵播种3粒种子。保证成活两株幼苗，然后带钵土定植。这种方法一可减少分苗假植程序，节省用工；二可自种子出土后，就有充足的营养面积，保证幼苗粗壮；三可防止造成根部伤口，减少病毒入侵机会。3.2.4 苗龄不宜过长，应控制在70～80天。定植苗株高与植株横径相近，控制在10～15cm，具5～6片真叶。株高10～15cm时，茎基部直径应达0.5～0.6cm。叶片宽、厚、平、绿，茎尖嫩壮。幼小根系发达白嫩。为防止病毒病或减轻病毒病发生，将单株栽培习惯改为在分苗时就进行双株分苗假植，尔后双株定植，每亩栽种3000～3500墩。双株法是减轻病毒病的有效措施。采用大小垄密植栽培，一般大垄宽为50～53cm，小垄宽22～33cm，每亩4500～5000穴，每穴栽2株。春季气温低，垄作和小水灌溉比平畦和大水漫灌地温高，并且土壤疏松利于发根，提早封垄，雨季利于排水。夏季高温炎热，密植能够较早地遮严地面，降低地温和保持土壤水分，有利于植株生长，不利于病毒病发展。3.4.1 采用配方施肥技术，施足基肥。3.4.2 覆盖地膜，适当提早定植 要求秧苗株型矮而壮实，在第一分杈具有花蕾时定植为宜。3.4.3 与玉米、菜豆等高秆作物间作，避免强光高温，可有效防止病毒病。注意轮作换茬，精细整地，施足基肥，增施磷、钾肥。露地栽培可在定植时铺地膜或加盖小拱棚，并适度蹲苗，促进发根。生长前期避免大水漫灌，浇水后及时中耕，力争做到早定植，早生根，早结果，在发病盛期到来之前已花果满枝。结果期不能缺水缺肥，以防早衰。搞好田园卫生，及时清除田间路边杂草，如酸浆、反枝苋、刺儿菜及藜等，以减少病毒来源。3.5.1 苗期及生长期要及时喷药治蚜 可用2.5%溴氰菊酯乳剂2000～3000倍液，或20%速灭杀丁乳剂2000～3000倍液，或2.5%天王星乳油3000倍液，喷洒注意喷嘴对准叶背，将药液尽可能喷射到蚜虫体上。药剂有50%辟蚜雾可湿性粉剂或2.5%溴氰菊酯乳油2000～3000倍液等。3.5.2 应用弱毒性病毒进行人工免疫可减轻病毒病害，如烟草花叶病毒弱株系N14防烟草花叶病毒，烟草花叶病毒卫星核糖核酸制剂S52和S54防烟草花叶病毒，但必须在辣椒感染自然界强株系之前接种上弱毒性病毒。接种方法主要有两种：一种是人工摩擦或高压喷枪接种，苗龄在1～3叶期为宜；另一种是浸根接种，当幼苗2叶期进行第一次假植时，将幼苗拔出洗净根部后立即浸入疫苗液中5～10min。疫苗液的浓度一般为100倍液（S52和S54）和1000倍液（N14），详见产品说明。另外，也可喷洒NS-83增抗剂100倍液，定植前后各喷1次，还可在定植前、缓苗后及盛果期各喷1次0.1%硫酸锌溶液，都有一定的防病作用。3.5.3 发病始期喷施病毒A800倍液+高锰酸钾1000倍液+0.3%硫酸锌，或用叶康或小叶敌300倍液。注意用药时每隔7天喷1次，连喷3次，才能收到良好效果。3.5.4 设置生物屏障在进行定植的时候，有计划地栽种4行辣椒间种1行玉米，使玉米成为高温季节对辣椒进行遮光降温的生物屏障，降低病毒病的发生，并从栽培玉米中得到一定效益。3.5.5 钝化剂和微肥的应用 用500倍的AV-2或100倍的豆浆释液或100倍的豆制品浆水，从4叶期开始每隔10～15天叶面喷布1次，共喷3～5次，可有效的减轻病毒病的为害。锌对控制TMV侵染有明显效果，常规用量为1‰的硫酸锌水溶液，每亩用75～100kg稀释液喷布叶面，喷2～3次。

开封市为河南省历史上的重要植棉基地，1998年以来抗虫棉在开封市的大面积种植，棉铃虫的发生防治已成为开封市棉花生产的一个次要害虫，而棉花枯、黄萎病却为影响开封市棉花产量及品质的两种重要病害。特别是近年来，由于气候、栽培管理、品种等因素的综合影响，棉花枯、黄萎病在开封市的发生呈逐年上升的趋势，并严重制约着开封市的棉花的优质高产。为了克服群众在防治这两种病害的恐惧心理，甚至放弃种植的现状，我们进行了大量的发生情况调查和防治探索，为开封市在生产上找到了一些有效的防治措施和方法，并指导群众进行大面积的应用，收到了较好的效果。通过多年来的大面积调查，认为生产上导致棉花枯、黄萎病偏重发生的主要因素有3种。由于枯、黄萎病菌寄主范围广，适应性强，病原菌很难根除等特点。连作棉田，土壤中、病残体等含有大量病菌，非常有利于病害的发生。据调查，相同品种在连作2年病株率增加56.2%，死株率增加5.1%，连作3年病株率增加67.5%，死株率增加7.9%。目前开封市大面积种植的抗虫棉品种如鲁棉21、欣抗3号、欣抗4号、丰抗6号、豫棉19等对枯黄萎病都有一定的抗性，但大多品种对枯萎病抗性较好，对黄萎病抗性较差，没有一个兼抗枯黄萎病的品种。据调查，近年来开封市枯萎病为中偏轻发生，而黄萎病为中度或中度偏重发生，病株率枯萎病一般为3%～7%，而黄萎病为12%～52%。因此，根据病害的发生特点，选用抗病品种，制定合理的防治措施，是病害防治的关键。开封市大部分土壤属砂壤土，漏水漏肥现象较重。相同条件下，土壤肥力不足的地块病害明显加重，而底肥充足特别是磷钾肥充足的棉田抗病性明显增强。据调查，一般亩施优质农家肥2000kg、饼肥50kg（混合堆沤10～15天，充分腐熟），专用复合肥（其氮磷钾含量为1：1：1.5，并含有适量硼、锌肥）50kg，比单用复合肥的病株率下降30%～50%。棉花枯、黄萎病虽说是棉花上没有办法根治的两种病害，但结合影响病害发生的主要因素制定简单、合理的防治方案进行大面积推广，仍收到较好的防治效果，有效的减少产量损失。防治配套措施为：近年来，棉农很少使用硫酸脱绒，一般选用包衣种子。据调查，进行硫酸脱绒后10kg种子用25%的多菌灵粉剂0.2kg或20%的灵福合剂0.2～0.3kg加入适量的细土拌种后进行播种，比包衣种子的棉花病株率下降17%～23%。开封市秋作物主要有棉花、花生、玉米、大豆、西瓜等，我们强调以棉花—小麦—玉米的栽培模式进行轮作。据调查，比其他轮作模式病株率下降20%～40%。根据开封市病害的发生特点，在枯、黄萎病特别是黄萎病发生严重的地块，推荐种植晋棉38、欣抗3号、欣抗4号、豫棉21等，在枯、黄萎病特别是枯萎病发生较重的地块推荐使用鲁棉21、丰抗6号、豫棉19等。棉田基肥我们强烈推荐农户亩施优质农家肥2000kg与饼肥50kg（混合堆沤10～15天，充分腐熟），专用复合肥（其氮磷钾含量为1：1：1.5，并含有适量硼、锌肥）50kg，最低是饼肥50kg与专用复合肥50 kg。棉苗染病前和染病初期，喷施叶面肥，增强营养，特别是棉花的蕾铃期，要及时补充营养，可提高棉株的抗病能力。如遇大雨，要及时排涝、中耕松土，可非常有效的减轻枯、黄萎病的发生程度。枯萎病盛发期是在棉花现蕾前后即开封市的6月中下旬，可在6月上中旬用OS施特灵加3%广枯灵500倍液或40%乙蒜素20～30ml加磷酸二氢钾100g，每7～10天喷施一次，连喷2～3次；黄萎病的盛发期在7、8月棉花花铃期，由于棉株较大，防治较难，防治时机在7月中下旬，用上述药剂及方法，间隔7～10天再喷一次。

20世纪80年代，美国首先掀起了研究企业文化的浪潮，并迅速波及世界，企业文化因此兴起。随着企业文化的普及，企业组织发现企业文化对管理员工只能是从精神上、思想上起作用，与此同时应制定一些相关制度来制约员工行为，此时文化和制度正式兴起。从国外企业发展态势看，企业文化和制度分成两种模式，即美国模式和日本模式。美国的发展制度和文化代表着西方企业的传统性，同时在经营管理方面形成一个共同特征，尊奉物质刺激和实施外在控制共同激励员工，日本企业所形成的是“科技文明、民主主义和传统文化制度相结合”即以西方的“自由民主”主义为基础，以日本民族的传统文化为根本。从全国范围来看，我国的企业文化建设工作仍然停留在初级阶段。从我国国情出发，我国现代企业制度的约束机制既不可能采用美国模式，也不可能采用日本模式。大多数企业的文化建设处于基本形成和酝酿探索阶段。我国现代企业文化正逐步在企业制度管理中渗透。很多企业员工存在较为严重的等级化现象，业务人员待遇偏低。应该从文化和制度两方面对员工的合法利益给予充分保障。员工的激励理论可从两方面分析，一方面是早期的激励理论，主要侧重于满足生理方面的需要。就是以金钱作为激励手段，以改善主管及员工的关系作为激励手段，以满足从生理需要到自我实现的需要作为激励手段。另一方面是现代的激励理论，主要围绕满足人人成就的需要而展开研究。需要理论是以“满足—生产效率”为依据，认为人是为了满足某种需要和动机而行动的。它是从行动的情绪方面研究动机。期望理论则是以“不满足—生产效率”为依据。只有存在需要才会产生激励。需要意味着使特定的结果具有吸引力的某种内部状态。一般来说，被激励的员工处于一种紧张状态。为缓解紧张，他们会努力工作。紧张强度越大，努力程度越高。人的行为是由需求引起的，而行为的目的是为了满足需求。如果管理者能够满足人的需要，并使人们看到满足需求的可能性，那么管理者就可以激励员工。企业文化与企业的策略、组织是不同的，策略和组织是经营者期望某种结果，为从业人员所创造出来的行为环境，而从业人员的反应与实际行为，都受到企业文化的影响和制约。可以说组织与策略是企业的硬件，企业文化是软件。企业文化又称公司文化、组织文化和管理文化。企业文化是指企业的指导思想、经营哲学和管理风貌，包括价值标准、经营风格、管理制度、思想教育、行为准则、职业道德、文化传统、风俗习惯、礼貌仪表和企业形象等多方面的内容，其实质是一种以价值观为核心，对全体职工进行企业意识教育的文化体系。企业文化可分为狭义和广义两部分。狭义是指企业经营实践形成的一种基本精神和凝聚力。广义是包括企业领导人员和员工的文化素质和文化行为。所谓现代企业制度，是能够适应市场经济体制要求的企业产权制度、组织制度、领导制度、用工制度、分配制度、财务会计制度、法律制度、管理制度、制度环境以及处理这一系列制度和在这种制度下企业与各方面关系的行为规范、行为方式、行为准则的统称。现代企业制度包括的内容比较广，但我们往往一提到制度就会想到管理制度而忽略其他方面制度。企业的制度和规范不仅仅是单纯的白纸黑字，其中的每一条都有很深刻的内涵，也都必须经过某种意义的阐释，才能被群体接受为行动的规则，企业制度是企业文化的载体。从广义上讲，激励是指激发人的行为动机的心理过程，即通过各种客观因素的刺激，引发和增强人的行为所内在的驱动力，即内驱力，使人达到一种兴奋的状态，从而把外部的刺激内化为个人的自觉的行动。从狭义上讲，激励就是一种刺激，指促进行为的手段。外部适当的、健康的刺激可以使个人完成目标的行为总是处于高度的激活状态，从而最大限度地发挥人的潜力，去实现组织的目标。人力资源是通过各种有效的激励手段，激发人的需要、动机、欲望，形成某一特定目标并在追求这一目标的过程中保持高昂的情绪和持续的积极状态，发挥潜力，达到预期的目标。对于不同员工应采用不同的激励手段。有效的激励才能吸引并真正留住人才，使员工的创造力和革新精神充分发挥出来。不断创新已成为维系企业生命的活力，而要使企业不断创新，关键要提高员工的素质，促使每一位员工在每天的工作中都有进步。而为了做到这一点，则必须对员工进行激励。激励个人发挥更大的作用有助于他们的成长。扩大他们的能力范围，给予他们发展的空间。激励作用增加了员工的积极性，促使员工努力工作，产生了工作绩效。员工的工作积极性是企业活力的源泉，它直接决定着企业的劳动生产率和经济效益水平。激励成功会提升员工积极性较稳定地向高水平方向发展。完善的激励机制必然是精神文化和物质文化的有机结合，只有这样才能留住人才。优秀的企业文化会给员工营造一个良好的氛围和环境，提高员工满意度和归属感，满足员工自我实现的愿望，可以为企业带来信誉卓越的企业形象和品牌。由于某种特殊情况存在，有时企业文化也不能起到激励作用，失去原有的意义。当员工意识到自己达不到预定的激励目标时，员工会停止努力，对工作失去兴趣，不再积极参与劳动。此时企业应采取相应制度用强硬的手段来减弱或消退一些不利于企业发展的行为发生。当企业使用惩罚的手段抑制一种行为的时候，会使部分员工心理产生恐惧，但前提是这种惩罚制度令人信服。奖励和惩罚是规范人们行为的有效杠杆，是激励员工的基本手段，但奖励和惩罚不是目的。如果奖惩之后员工积极性反而降低了，就失去了原有的目的。应从组织目标出发进行奖惩，科学的考核是奖惩的主要依据，公正和公平的奖惩必须建立在公正和公平的考核基础之上。只有奖惩适度才能服众，也只有这样才能收到激励效果。奖惩应做到及时有效，否则激励效果将大打折扣。在奖励和惩罚时，除了通过正式组织开展工作之外，还应关注非正式组织的反应，并及时开展工作，趋利避害，才会取得满意的效果。在奖惩过程中要引导员工不断提高层次，树立高尚的追求和高度的责任感。及时了解员工的需要。为了保证奖惩的有效性，就必须使得正确行为引发激励。在奖惩的实践中，要做到有主有辅、有轻有重，一般来说，应该以奖为主，以惩为辅。人的行为有两大动力系统：一是基于“自我需要”的动力系统，二是基于“超越自我”的动力系统。当管理者只重视管理制度的运用，完全靠严格的管理制度管理员工时，只能激发起员工的“自我动力”，使员工完全受“自我动力”的支配，从而使员工越来越自私。也许表面上员工很“听话”，但是，完全是出于自身利益的考虑，并没有真正考虑企业利益。企业为避免这种情况，必然又要规定更加严格的制度和进行更加严格的监督，这又使员工更小心地维护自己的利益。每个人的内在都存在懒惰和侥幸心理，一个企业单靠文化这种软制度并不能使企业发展壮大，完善的制度，才能提高企业的声誉，使员工真正地一心为企业拼搏，企业制度作为内部的硬性规定，主要是让企业内员工心中做到清楚明了。对于不同的事件企业有不同的处理方式，但对每一个人都是平等、公正的，可以使企业员工更加信任、依赖企业。因此，企业文化和制度两者是密不可分、相辅相成的，只有两者有效地结合运用才能更好地激励员工。