20世纪80年代，美国首先掀起了研究企业文化的浪潮，并迅速波及世界，企业文化因此兴起。随着企业文化的普及，企业组织发现企业文化对管理员工只能是从精神上、思想上起作用，与此同时应制定一些相关制度来制约员工行为，此时文化和制度正式兴起。从国外企业发展态势看，企业文化和制度分成两种模式，即美国模式和日本模式。美国的发展制度和文化代表着西方企业的传统性，同时在经营管理方面形成一个共同特征，尊奉物质刺激和实施外在控制共同激励员工，日本企业所形成的是“科技文明、民主主义和传统文化制度相结合”即以西方的“自由民主”主义为基础，以日本民族的传统文化为根本。从全国范围来看，我国的企业文化建设工作仍然停留在初级阶段。从我国国情出发，我国现代企业制度的约束机制既不可能采用美国模式，也不可能采用日本模式。大多数企业的文化建设处于基本形成和酝酿探索阶段。我国现代企业文化正逐步在企业制度管理中渗透。很多企业员工存在较为严重的等级化现象，业务人员待遇偏低。应该从文化和制度两方面对员工的合法利益给予充分保障。员工的激励理论可从两方面分析，一方面是早期的激励理论，主要侧重于满足生理方面的需要。就是以金钱作为激励手段，以改善主管及员工的关系作为激励手段，以满足从生理需要到自我实现的需要作为激励手段。另一方面是现代的激励理论，主要围绕满足人人成就的需要而展开研究。需要理论是以“满足—生产效率”为依据，认为人是为了满足某种需要和动机而行动的。它是从行动的情绪方面研究动机。期望理论则是以“不满足—生产效率”为依据。只有存在需要才会产生激励。需要意味着使特定的结果具有吸引力的某种内部状态。一般来说，被激励的员工处于一种紧张状态。为缓解紧张，他们会努力工作。紧张强度越大，努力程度越高。人的行为是由需求引起的，而行为的目的是为了满足需求。如果管理者能够满足人的需要，并使人们看到满足需求的可能性，那么管理者就可以激励员工。企业文化与企业的策略、组织是不同的，策略和组织是经营者期望某种结果，为从业人员所创造出来的行为环境，而从业人员的反应与实际行为，都受到企业文化的影响和制约。可以说组织与策略是企业的硬件，企业文化是软件。企业文化又称公司文化、组织文化和管理文化。企业文化是指企业的指导思想、经营哲学和管理风貌，包括价值标准、经营风格、管理制度、思想教育、行为准则、职业道德、文化传统、风俗习惯、礼貌仪表和企业形象等多方面的内容，其实质是一种以价值观为核心，对全体职工进行企业意识教育的文化体系。企业文化可分为狭义和广义两部分。狭义是指企业经营实践形成的一种基本精神和凝聚力。广义是包括企业领导人员和员工的文化素质和文化行为。所谓现代企业制度，是能够适应市场经济体制要求的企业产权制度、组织制度、领导制度、用工制度、分配制度、财务会计制度、法律制度、管理制度、制度环境以及处理这一系列制度和在这种制度下企业与各方面关系的行为规范、行为方式、行为准则的统称。现代企业制度包括的内容比较广，但我们往往一提到制度就会想到管理制度而忽略其他方面制度。企业的制度和规范不仅仅是单纯的白纸黑字，其中的每一条都有很深刻的内涵，也都必须经过某种意义的阐释，才能被群体接受为行动的规则，企业制度是企业文化的载体。从广义上讲，激励是指激发人的行为动机的心理过程，即通过各种客观因素的刺激，引发和增强人的行为所内在的驱动力，即内驱力，使人达到一种兴奋的状态，从而把外部的刺激内化为个人的自觉的行动。从狭义上讲，激励就是一种刺激，指促进行为的手段。外部适当的、健康的刺激可以使个人完成目标的行为总是处于高度的激活状态，从而最大限度地发挥人的潜力，去实现组织的目标。人力资源是通过各种有效的激励手段，激发人的需要、动机、欲望，形成某一特定目标并在追求这一目标的过程中保持高昂的情绪和持续的积极状态，发挥潜力，达到预期的目标。对于不同员工应采用不同的激励手段。有效的激励才能吸引并真正留住人才，使员工的创造力和革新精神充分发挥出来。不断创新已成为维系企业生命的活力，而要使企业不断创新，关键要提高员工的素质，促使每一位员工在每天的工作中都有进步。而为了做到这一点，则必须对员工进行激励。激励个人发挥更大的作用有助于他们的成长。扩大他们的能力范围，给予他们发展的空间。激励作用增加了员工的积极性，促使员工努力工作，产生了工作绩效。员工的工作积极性是企业活力的源泉，它直接决定着企业的劳动生产率和经济效益水平。激励成功会提升员工积极性较稳定地向高水平方向发展。完善的激励机制必然是精神文化和物质文化的有机结合，只有这样才能留住人才。优秀的企业文化会给员工营造一个良好的氛围和环境，提高员工满意度和归属感，满足员工自我实现的愿望，可以为企业带来信誉卓越的企业形象和品牌。由于某种特殊情况存在，有时企业文化也不能起到激励作用，失去原有的意义。当员工意识到自己达不到预定的激励目标时，员工会停止努力，对工作失去兴趣，不再积极参与劳动。此时企业应采取相应制度用强硬的手段来减弱或消退一些不利于企业发展的行为发生。当企业使用惩罚的手段抑制一种行为的时候，会使部分员工心理产生恐惧，但前提是这种惩罚制度令人信服。奖励和惩罚是规范人们行为的有效杠杆，是激励员工的基本手段，但奖励和惩罚不是目的。如果奖惩之后员工积极性反而降低了，就失去了原有的目的。应从组织目标出发进行奖惩，科学的考核是奖惩的主要依据，公正和公平的奖惩必须建立在公正和公平的考核基础之上。只有奖惩适度才能服众，也只有这样才能收到激励效果。奖惩应做到及时有效，否则激励效果将大打折扣。在奖励和惩罚时，除了通过正式组织开展工作之外，还应关注非正式组织的反应，并及时开展工作，趋利避害，才会取得满意的效果。在奖惩过程中要引导员工不断提高层次，树立高尚的追求和高度的责任感。及时了解员工的需要。为了保证奖惩的有效性，就必须使得正确行为引发激励。在奖惩的实践中，要做到有主有辅、有轻有重，一般来说，应该以奖为主，以惩为辅。人的行为有两大动力系统：一是基于“自我需要”的动力系统，二是基于“超越自我”的动力系统。当管理者只重视管理制度的运用，完全靠严格的管理制度管理员工时，只能激发起员工的“自我动力”，使员工完全受“自我动力”的支配，从而使员工越来越自私。也许表面上员工很“听话”，但是，完全是出于自身利益的考虑，并没有真正考虑企业利益。企业为避免这种情况，必然又要规定更加严格的制度和进行更加严格的监督，这又使员工更小心地维护自己的利益。每个人的内在都存在懒惰和侥幸心理，一个企业单靠文化这种软制度并不能使企业发展壮大，完善的制度，才能提高企业的声誉，使员工真正地一心为企业拼搏，企业制度作为内部的硬性规定，主要是让企业内员工心中做到清楚明了。对于不同的事件企业有不同的处理方式，但对每一个人都是平等、公正的，可以使企业员工更加信任、依赖企业。因此，企业文化和制度两者是密不可分、相辅相成的，只有两者有效地结合运用才能更好地激励员工。

美国安保研究中心R.Munro研究员于1992年在《Policy Review》的《中国危险论》（China threat）中指出，今后中国将掌握经济、军事霸权。之后许多学者评价指出，随着冷战时代的结束中国是唯一可以与美国对抗的国家。2007年11月英国经济学家言及“2008年世界秩序将以中国为中心的Pax-Sinica登场”。CCTV的“大国崛起”专题片，传递了两种信息，一是对于资本主义国家的竞争力和制度，CCTV第一次给予了高度评价。二是给世界提出了“Pax-Americana之后将迎来怎样的时代？”的问题。对于后者，在中国共产党第17届二中全会中通过的新的国政目标中已经给出了答案，即通过中华民族复兴建立新的大国。日本经济研究中心，PWC（Price Waterhouse Coopers）预测，中国经济最早在2020年，或者最晚在2050年将达到世界第一水平。预计，2008年中国将领先于德国，GDP将达39400亿美元，占世界第三位，世界经济增长率为4.6%时中国将达10.1%。中国对世界经济的贡献首次超过美国将达25%。中国经济的另一个强势是高达19000亿美元的外汇储备。遍布全世界的华商也是一个强大的支持群体。中国早在清朝时统一了蒙古、新疆、西藏，并在1680～1770年间树立了以中国为主导的Pax-Sinica。清朝（17世纪中～18世纪末）的康熙、雍正、乾隆是把尧舜的太平时代在现实中再现的帝王。将中国引向最强国的康熙帝、与腐败斗争献出终生的雍正帝、统一现今中国的乾隆帝可以说是东方精神的原形。但这都在海上强国的英国和日本引发的鸦片战争、甲午战争下支离破碎。中国成了西方列强争夺势力的舞台。中国经历了如此惨痛的教训，不愿再经受同样的失败。中国不仅满足于只成为一个大陆国家，而且也正要大力发展其成为海洋国家的努力事实上，中国和亚洲签定了不可侵略条约，以及以促进FTA为主的友好协商条约（Treaty Amity and Cooperation）。华侨在连接中国和亚洲的过程中起到了枢纽作用。向中国投资的外资金的60%为华侨资本，包括中国和亚洲在内的华商经济圈的流动资金是33000亿美元。中国人民币已在中国香港、中国台湾、朝鲜、蒙古等地广泛通用。如果出现一个能实现孔子所说的“修己治人”的领导者，世界将会迎来继Pax-Americana后，以中国掌握世界经济霸权的Pax-Sinica的时代。随着中国对世界经济的影响，世界经济的主导权出现了偏向中国的倾向。对此美方认为有必要牵制中国，作为世界经济中心的美国担心如果不牵制中国，一不小心就会被中国夺取世界经济的主导权。掌握亚洲经济主导权的日本也不愿中国掌握世界经济主导权。也就是说日本、美国担心的是以人民币为武器快速发展的中国经济。对今后中国向Pax-Sinica的挑战，美国深知如果在初期不进行干预，今后将无从下手。下面根据孙子兵法的战略和战术，对美国金融危机实体以及中国和全球经济的未来进行分析。孙子曰：兵者，国之大事，存亡之道，不可不察也。1978年，呼吁改革开放的邓小平指出，只有国家富裕了才能登上世界舞台，以先富论为旗帜，为中国成为世界强国进行了准备工作。与孙子兵法第一篇的始计篇如出一辙：民与上同意也，即人民与领导者团结力量使国家富强。邓小平强调改革开放以后要把重点放在国家的经济发展和重建上，他早在30年前就对今日的金融危机等全球经济战争进行了对比，这就是邓小平慧眼识破敌计。孙子曰：战争决定国家存亡。意思是即使战争胜利但消耗国力，国家也不可避免灭亡。所以用兵作战贵在速胜，不宜久拖。改革开放30年的今天，中国站在世界舞台上，对世界经济的发展起着举足轻重的作用。中国政府倡导的和平崛起、大国崛起是今后中国发展经济的重要战略。孙子曰：百战百胜，非善之善者也；不战而屈人之兵，善之善者也。不战而屈人是指以外交孤立对方。不顾对方的强弱挑战不可为明智的战争。中国全球经济战略之一是，以人民币为世界经济舞台的中心轴，即建立人民币基轴。对此，美国的战略则是：因油价急涨、投机性资金活跃、流动性增长而随之出现的商品、股价泡沫现象，“热钱”进入中国股市、房地产业而生成的泡沫导致美元与人民币的对抗，从而引发货币战争。孙子曰：昔之善战者，先为不可胜，以待敌之可胜。不可胜在己，可胜在敌。美国的货币攻击开始了。以扩大大众贸易赤字为由，第一次施加了人民币上升压力，向中国宣战。之后，美国联邦储备银行（FRB）利息上涨，美元弱势加重，油价和物价暴涨，通货膨胀也在深化。但人民币高速上升，“热钱”急速被中国吸入，中国的房地产和股市也随之暴涨。但是不久之后，美国因次贷危机，本土房地产和金融界受到了冲击。这不仅影响了世界经济，也影响了中国经济。结果导致美国房地产的不景气转移为中国的房地产危机。孙子曰：善战者，求之于势，故能责人而任势。……凡战者，以正合，以奇胜。就像1929～1939年从北美和欧洲扩散到全世界产业地带的大恐慌一样，这次的美国金融危机把全球经济推向了经济衰退，不仅是美国等西方资本主义国家，中国等亚洲新兴市场国家也受到了牵连。结果是，作为世界市场经济秩序中心的美国式资本主义市场经济体系出现了问题，甚至像社会主义国家一样，进行统治和管理。如今，中国社会主义市场经济和美国资本主义市场经济的较量，将会成为全球瞩目的焦点。孙子曰：凡先处战地而待敌者佚，后处战地而趋战者劳。由美日合作的先发进攻是利用次贷危机使中国房地产、金融出现了相应的危机，但是，其实体是人民币上升的过程中日元变成弱势，这对美国来说并不是好消息，因为一直以来日本是在亚洲代替美国牵制中国的唯一国家。国际经济合作与发展组织（OECD）的相关资料显示，其主要国家的领先指标已经从2007年6月开始均下跌，日本已经从2007年初开始进入负增长，美国也从2007下半年开始进入了负增长。中国虽然维持着稳定上升的增长趋势，但从2008下半年开始下跌。中国宏观经济领先指标（1992～2008年）可以说中国经济是在美国经济衰退的情况下走低的。中国经济增长的主要核心是出口和投资。但随着出口和投资的减少，中国经济增长率5年来第一次回落到2位数。宏观经济领先指标创了14个月以来的新低点，连续6个月维持着下跌状态。美国的次贷危机、金融危机正在转移到中国实体经济当中。其代表行业是纺织、房地产、钢铁等。就分析2008年的3、4季度的业绩来看，保险、电力、汽车、食品饮料、金融等明显出现了下跌趋势。最近因股价下跌，全球股市出现了评价魅力。中国也不例外。2008年9月雷曼兄弟破产后，政府出台了利息下调等各种宏观经济政策。但实际上对实体经济波及的影响还是个未知数。所以要使用强有力的有效的对实体经济有所帮助的对策。例如：扩大公开市场的流动性，让其自然地流入股市；实现房地产商品房价的现实化，奖励老百姓贷款买房；增大QFII标准数，扩大限度，完善外国人投资的各种投资规章制度等，以便持续地吸入外资、促进内需。现在A股市结束了熊市的第一阶段，进入了第二阶段。如果外部的经济条件比市场预期好的话，不会出现熊市的第三阶段，将进入到牛市初期。中国经济正面临着产业转型，非流通主义的解禁压力将会持续3～5年。所以不存在中国股市的高价的基础。中期P/B（平均市净率）为1.5～2倍是底线区，相对指数是1200～1600点。在短期内，因各国的经济促进政策以及利息下调，不能排除中期流动性增长趋势。但如果考虑到短期有利政策和长期经济回落，市场更会考虑到后者。中国的经济问题，内部是房地产，外部是出口。其中出口是外部因素，即全球经济景气才会有好转，但实现好转需要更长时间，所以目前要抓好内部因素，防止房地产下跌的硬着陆，并扩大内需消费，激活整体经济。全球经济因美元而摇摆不定是现实。相对美元，人民币相对维持着稳定。所以我们要防止因人民币变为基轴而国内的投资资金瞬间流向国外的现象。特别要监管好“热钱”的流向，确立人民币成为稳定的全球基轴的地位。

植物精油（essential oil）是存在于植物体中的一类可随水蒸气蒸馏、且具有一定香味的挥发性油状液体的总称，它是植物体内的次生代谢产物，主要由脂肪族、芳香族、萜类（单萜和倍半萜）、含氮或含硫等易挥发的成分组成。植物精油具有杀（抗）菌、杀（驱）虫、香熏治疗和多种药理作用，在香料、化妆品、食品等工业领域具有广泛的用途，是制作药品、化妆品、食品的原料或添加剂。由于精油具有无毒、无害、纯天然等特点，研究精油作为杀菌剂用于食品或果蔬的防腐保鲜和贮运，以及作为农用或医用杀菌剂，是近年来精油研究与开发的一个重要方面。由于植物精油的研究十分迅速，本文对有关植物精油的抗菌活性、作用机制和应用等方面的研究进展进行简要综述。近年来对精油抗菌活性进行研究的植物主要包括：唇形科、菊科、桃金娘科、伞形科、金丝桃科、樟科、禾本科、芸香科、马鞭草科、姜科等，估计进行过精油抗菌活性研究的植物达250余种。这些精油多分布在植物的花、果、叶、根或根茎、种子等器官中，有的也存在于植物的全草和树胶中。精油中的抗菌成分主要为：香芹酚、丁子香酚、薄荷醇、百里酚、柠檬烯、乙酸牻牛儿酯、乙酸丁子香酚酯、反-肉桂醛、桉树脑、β-月桂烯、香叶醇、对-伞花烃、γ-松树烯、香芹酮等。精油是由多种类型的化合物组成的，它们对微生物可能有多个作用位点（靶标），因此精油的抗菌作用机制比较复杂，目前对精油抗菌作用机制的了解还十分粗浅，精油对细菌作用机制的研究要比对真菌深入。由于细胞膜和线粒体膜特殊的脂质结构，精油的疏水性和分子大小使之极易穿过细胞膜或直接作用于膜结构，已有的研究证明精油对细胞结构的作用有：（1）导致细胞壁结构的降解；（2）细胞膜损伤；（3）膜蛋白损伤；（4）导致细胞内成分的外流；（5）细胞质成分凝固；（6）消耗质子流等。对病原菌有强烈抗菌作用的精油一般含有高含量酚类化合物如香芹酚、丁子香酚和百里酚等，这些酚类化合物破坏了细胞质膜、质子动力（proton motive force，PMF）、电子流、成分的主动传输和胞内成分的凝固，从而使精油具有抗菌活性。精油中的单一成分应该有其准确的作用方式，且有明显的构效关系。如乙酸牻牛儿酯较牻牛儿醇具有更好的抗细菌活性。含烯烃基团的非酚类化合物成分的抗菌活性要强于含烷烃基团的化合物，如柠檬烯的抗菌活性要强于对-伞花烃。精油中的活性成分也会影响镶嵌在细胞质膜中的蛋白质活性，它们可以在脂双分子层之间发生累积，阻止膜蛋白与底物的结合；也可能直接与膜蛋白（如ATP酶）中的疏水部分结合，使之变性。一般精油对革兰氏阳性菌的抑制作用要比对革兰氏阴性菌强，可能与革兰氏阴性菌围绕在细胞壁的外的一层隔膜阻碍了疏水性物质的扩散通过这一特性有关。精油及其成分的抗菌作用机制在许多细节上尚未完全阐明，需要进行深入的研究，为精油的应用奠定理论基础。未来一段时间，植物精油的研究领域将主要集中以下几方面：（1）精油对镶嵌在细胞质膜中的蛋白质的作用以及对膜中的磷脂的作用研究；（2）精油成分对细菌细胞的抗菌作用的研究，尤其是对一些模式细菌的作用机理研究；（3）精油成分对真菌的作用机理研究；（4）精油中抗菌活性成分的构效关系（SAR）研究，为新型杀菌剂的设计与合成提供依据，并对抗菌活性做出预测；（5）精油在抗菌活性方面的稳定性和持久性也需要更好地研究。植物精油作为杀（抗）菌剂在植物病害防治、食品和果蔬防腐保鲜，以及作为医用抗菌药物等方面具有广泛的应用前景。我国具有丰富的精油植物资源，在植物精油的理论研究和应用开发方面还比较薄弱，大多停留在精油的提取和室内的活性测定，研究的植物种类相对来说还比较少。今后可以在以下几个方面更多地开展工作：（1）进行精油植物资源的调查和活性筛选；（2）从精油中筛选高活性的抗菌化合物，为新型杀菌剂的合成提供先导结构；（3）产品的开发研究，即将植物精油加工成合适的剂型（如气雾剂、缓释剂、熏蒸剂），有效地发挥其活性。近年来，许多合成杀菌剂被限制使用，甚至禁用，因此有必要开发新的杀菌剂种类。植物精油作为杀菌剂应用在低毒、高效、维护生态平衡等各方面都是比较理想的。随着人们生活质量的提高，对环境、食品的要求也越来越高，特别是在食品、果蔬的保鲜和贮运过程中，植物精油作为抗菌药剂有着诸多的优势，越来越受到人们的青睐。这样必将加快对精油的研究，以及精油类农药的创制及其工业化的进程。

哈密瓜细菌性果斑病（Bacterial Fruit Blotch，BFB）是由Acidovorax avenae subsp.citrullii，（Aac）引起的一种毁灭性的瓜类病害，该病菌已经成为了全球瓜类生产中巨大的威胁。中国至今已有12个省相继有该病的报道。目前，该病因其无免疫品种和特效的化学农药，轮作倒茬存在局限性等原因，有效防治该病仍然是一个难题。近几年已有人报道利用生物防治BFB来改变目前防治现状，但多以生防细菌为主（卢云等，2007；Fessehaie和 Walcott，2004），利用拮抗酵母防治瓜类细菌性果斑病国内外未见有报道。2006～2007年，本实验组从湖北武汉、新疆石河子、河南信阳等地采集不同植物叶片、土壤样品进行了酵母菌的分离，获得了463菌株。通过含菌平板测定拮抗性，表明有29个酵母菌菌株对Aac有拮抗作用，占总分离酵母菌株的6.3%，抑菌圈半径大于5mm的有13个。在温室盆栽试验中，将其中的13个酵母菌菌株的菌体悬浮液（1.2×108菌体/ml）分别喷雾接种于哈密瓜苗四叶期的植株上，24h后接种Aac菌体悬浮液（1.0×108cfu/ml），处理后的瓜苗放入温棚内，棚内温度为（32±2）℃，相对湿度大于90%。接种5天后调查各处理哈密瓜苗的发病情况。试验结果表明：菌株Y06109、Y07039和Y0709在哈密瓜子叶或第一片真叶上对BFB具有显著的防治效果。3株酵母菌处理的哈密瓜子叶发病率分别为33%、33%和76%，对照为96%，防效分别为65%、65%和21%。第一真叶发病率分别为14%、17%和10%，对照为96%，防效分别为80%、84%和90%。这些研究结果表明，拮抗酵母的一些种类或菌株对BFB具有一定的生防潜力。对于筛选出的具有抑菌作用的酵母菌株，将进一步测定其田间防病效果，并对其显著防效的拮抗酵母进行种类鉴定。

为了减少化学杀菌剂对环境的污染和在农产品中的残留，对环境友好的生防微生物制剂受到普遍重视。在已经研究的生防菌中，木霉属下的若干种因适应能力强、抗病谱广、拮抗机制多样化而被广泛用于防治植物病害。研究发现木霉对病原菌的作用机制是多种多样的，主要包括抗菌、溶解、竞争、重寄生等，目前还发现木霉制剂除具有直接抑菌功能外，还具有一定的诱导作物产生抗性的作用，这对提高木霉防病的持效性和稳定性具有重要意义。我们从土壤中筛选分离出一株具有很强生长势的木霉，经鉴定为绿色木霉Trichoderma viride，通过体外拮抗试验，证明该菌具有极明显的竞争优势，能快速地占据生长空间、获取营养，对灰葡萄孢霉、立枯丝核菌、瓜果腐霉、茄链格孢等均有强烈的抑制效应，盆栽接种和温室防治试验试验表明对立枯丝核菌所致茄子立枯病和灰葡萄孢霉所致番茄灰霉病均具有明显的防治效果。因此，有可能发展成为一种纯生物的植物病害防治剂。作为一类重要的自然资源，木霉已引起国内外研究者的广泛关注。因此，木霉的培养及发酵条件是工业化大批量生产木霉菌制剂的前提。本文主要对我们筛选出的生防有效菌绿色木霉的放大发酵培养条件进行了研究，其结果对于绿色木霉和多功能生物制剂的工业化生产具有一定的指导意义。绿色木霉Tr9701（Trichoderma viride），由天津植保所病害室筛选、鉴定、保存菌株。1.2.1 不同培养基与绿色木霉生长和孢子形成、萌发的关系 将绿色木霉菌丝块（直径5mm）分别置于MA培养基、小麦粉培养基、豆粉浸出液培养基、PDA培养基、PSA培养基、土壤浸液琼脂培养基、水琼脂培养基、CA培养基等上，在25℃下培养，每处理重复4皿，24h、48h、72h、96h、7天后测量菌落直径，观察菌落生长和孢子着生情况。将木霉菌孢子在1%葡萄糖营养液、1%蔗糖营养液、10%土壤浸出液和蒸馏水中，25℃培养，0h、4h、6h、24h后调查孢子萌发情况。1.2.2 温度与绿色木霉菌丝生长及孢子形成的关系 将菌块移入PSA平板培养基上（定量为12ml），置于10～35℃共6个温度梯度内培养，分别于培养24h、48h、72h、96h、7天后测量菌落直径，比较不同温度下菌丝生长差异，并观察各处理中产孢情况。同时将试管斜面上培养4天的木霉菌分别放入温度为35℃、45℃、55℃、65℃的水浴锅内，每温度放4个试管，分别在5min、10min、15min、20min各取1管，在无菌条件下将菌丝挑入PSA平板上，于25℃温箱内培养，观察木霉菌生长情况，明确持续高温对绿色木霉菌丝伸长、孢子着生的影响。1.2.3 pH值与绿色木霉菌丝生长及孢子形成的关系 将灭菌后的PSA培养基，用HCl和NaOH调节其pH值分别为1、2、3、4、6、7、8、9、10、11、12、13，在不同pH值培养基上接种菌块，25℃恒温培养，24h、48h、72h、96h、7天后观察pH值对绿色木霉菌丝伸长、孢子着生的影响。1.3.1 固体发酵基质原料的确定及培养基的优化 试验设计的培养基配方由固定成分和附加成分组成，固定成分以小麦全麦为主，附加部分黄豆粉、糖类和酵母浸膏（具体见表7）。利用设计的配方培养绿色木霉（接种浓度5×106个孢子/ml，基质：菌液=10：1），观察不同配方培养下绿色木霉菌丝和产孢量的情况，确定利于绿色木霉培养的固体发酵基质配方。1.3.2 固体发酵基质中含水量的确定 由筛选获得的固体发酵基质配方中，加入不同比例的水分。含水量试验设计为麦粒：水比例1：0.6、1：0.8、1：1、1：1.2、1：1.4，利用设计的不同含水量配方培养绿色木霉（接种浓度5×106个孢子/ml，基质：菌液=10：1），观察不同含水量下培养绿色木霉菌丝和产孢量的情况，确定利于绿色木霉培养的固体基质中含水量。1.3.3 培养时间对绿色木霉产孢的影响 以筛选获得的固体基质配方作为木霉菌发酵基质培养绿色木霉（接种浓度5×106个孢子/ml，基质：菌液=10：1），观察发酵过程中木霉菌在培养基质中的种群密度变化，定时取样，以血球计数板计数培养物中绿色木霉孢子着生量。1.3.4 利用食用菌废料的固体发酵基质原料的确定及添加成分、比例的优化 首先通过可行性试验明确食用菌废料是否能够提供木霉菌繁殖的基本营养。配方筛选试验设计的培养基配方由固定成分和随机成分组成，固定成分以食用菌废弃培养料（自然风干）为主，附加部分麦麸和无机营养元素；随机成分有酱油渣、玉米芯、黄豆渣、锯木屑、稻杆等（自然风干）废弃物。以食用菌废料、麦麸、无机盐为固定成分分别与其他废弃物按照一定的比例称量350g，料：水为1：1，放在广口玻璃瓶中，灭菌后接种木霉孢子悬浮液（接种浓度5×106个孢子/ml，35ml/瓶），设4次重复，25℃恒温培养，6天后调查结果。用不同培养基25℃培养绿色木霉，生长速度测定结果见表1。由结果可知，绿色木霉菌在供试的几种培养基上均能生长。从生长速度上看，以小麦粉和豆粉浸出液培养基上生长速度最快，是其生长的最适培养基，菌丝培养72h即长满全皿，且菌丝浓密；PDA、PSA、CA培养基相对次之，三者之间生长速度无明显差异；绿色木霉在水琼脂培养基上7天可以长满全皿，但菌落极为稀疏；以MA培养基、土壤浸出液培养基上生长速度最慢，25℃培养7天菌落直径分别为26.00mm和26.25mm。培养基菌落直径（mm）24h48h72h96h7天MA培养基5.258.1310.5013.7526.00小麦粉培养基14.2558.50满豆粉浸出液15.2550.50满PDA10.5041.7579.25满PSA11.0037.7568.50满土壤浸出液5.007.3811.3815.5026.25水琼脂5.5022.5040.2557.50满CA培养基13.0041.0068.75满表1 绿色木霉不同营养条件下菌落生长速度用不同培养基培养观察其孢子着生情况（结果见表2）。由结果可知，该菌在几种培养基上均能产生孢子，从孢子形成的速度和数量上看，以小麦粉和PDA培养基孢子生成的速度最快，产生的孢子数量最多；其次是豆粉浸出液、PSA和CA培养基；以MA培养基、土壤浸出液和水琼脂3种培养基上孢子生成速度最慢，产生量最低。培养基孢子分布直径（mm）24h48h72h96h7天附注MA培养基005.885.886.00+小麦粉培养基0034.25满++++豆粉浸出液0022.2561.00满+++PDA014.6330.25满+++PSA07.0023.7565.00满+++土壤浸出液00008.5+水琼脂0000满+CA培养基07.2519.0061.00满++表2 绿色木霉不同营养条件下培养孢子着生情况由绿色木霉分生孢子在不同营养液中萌发试验可知（结果见表3），其分生孢子在几种营养液中均可萌发，但以1%葡萄糖溶液中萌发效果最好，24h萌发率为30%，48h萌发率为95.5%；10%土壤浸出液中萌发效果最差，24h萌发率为1.5%，48h萌发率为45%；其他几种液体中孢子萌发率24h为4.00%～5.67%之间，48h为76.0%～78.2%。营养液孢子萌发率（%）0h4h6h24h48h1%葡萄糖00030.0095.51%蔗糖0004.0076.010%土壤浸出液0001.5045.0蒸馏水0005.6778.2表3 绿色木霉不同营养液中孢子萌发情况绿色木霉于不同温度下培养，测量其生长速度结果见表4。由结果可知，绿色木霉在10～35℃均能生长，25℃时72h内就能长满培养皿，20℃、30℃时需要96h，15℃时则需要7天，10℃、35℃时第7天仍未长满全皿。20～30℃为绿色木霉的生长适温，25℃为生长最适温度。培养温度（℃）菌落直径（mm）24h48h72h96h7天106.256.317.759.6338.35158.7510.0627.1344.50满2013.5045.3879.83满2519.6358.50满3018.8855.1377.67满3511.3112.2512.5013.7516.5表4 绿色木霉不同温度下菌落生长速度将绿色木霉于不同温度下培养，观察其孢子着生情况、测量其孢子蔓延速度，结果见表5。从结果显示，绿色木霉在15～30℃均能形成分生孢子，其中适宜适温为20～30℃，温度在20℃以下和30℃以上能产生分生孢子但速度减慢，如25℃时96h内产生的分生孢子就能布满培养皿，20℃、30℃时需要7天，15℃时第7天分生孢子仍未布满全皿。因此，25℃为绿色木霉的分生孢子形成的最适温度。培养温度（℃）孢子分布直径（mm）24h48h72h96h7天100000015000066.50200017.7576.5满2506.543.00满300047.2584.5满3500000表5 绿色木霉不同温度下孢子着生情况绿色木霉在不同pH条件下培养，结果见表6。由结果可明显看出，pH值在5～9环境下培养，绿色木霉可以生长，其中pH在5.5～6间生长最适，pH值在8以上生长较为缓慢，由此可见绿色木霉喜好在中等偏酸性条件下生长。绿色木霉孢子着生也表现相似规律，pH值在5～8环境下孢子均可着生，以pH在5.5～6间最适。pH菌落直径（mm）孢子分布直径（mm）24h48h72h7天24h48h72h7天100000000200000000300000000400000000512.0036.0063.38满0015.560.05.52163.38满0033.5满621.6366.38满06.242.0满79.5030.5054.00满0028.2满807.7515.5045.75005.549.25907.008.0022.0000001000000000110000000012000000001300000000表6 pH值对生防木霉菌菌丝伸长、孢子着生的影响不同固体发酵基质原料培养绿色木霉效果见表7。由结果可以看出，在以小麦粒为主的固定成分中加入糖类和酵母浸膏，菌丝量和产孢量最高，如果在发酵过程多次搅拌，可保证整个基质内、外表充满黄绿色孢子。在加入其他成分的配方中菌丝、产孢量均不及前者多，因此通过试验获得的绿色木霉固体发酵基质原料配方为：小麦粒+葡萄糖+酵母浸膏。配方菌丝生长量孢子产生量说明全麦粉+黄豆粉+葡萄糖+酵母浸膏++仅表面分布黄绿色孢子通气性较差全麦粉+葡萄糖+酵母浸膏+仅表面分布黄绿色孢子通气性较差全麦粉+黄豆粉++仅表面分布黄绿色孢子通气性较差小麦粒+黄豆粉+葡萄糖+酵母浸膏++麦粒表面密生黄绿孢子麦粒和豆粉附着性稍差小麦粒+葡萄糖+酵母浸膏+++麦粒表面密生黄绿孢子适宜木霉菌生长小麦粒+黄豆粉++麦粒表面密生黄绿孢子麦粒、豆粉附着性稍差表7 绿色木霉孢子发酵配方筛选试验将固体发酵基质中加入不同比例水培养绿色木霉效果见表8。由结果可以看出，在以小麦粒为主的固定成分中加入不同水量，其对绿色木霉的菌丝量和产孢量影响较大，以固麦粒和水比例为1：0.8～1：1.0的菌丝、产孢量最多，如果在发酵过程多次搅拌，可保证整个基质内、外表充满黄绿色孢子。处理含水比例菌丝生长量孢子产生量说明麦粒：水1∶0.6++菌丝着生处生长黄绿色孢子含水量过低菌丝少麦粒：水1∶0.8+++整个料体着生黄绿色孢子适宜木霉菌生长麦粒：水1∶1+++整个料体着生黄绿色孢子适宜木霉菌生长麦粒：水1∶1.2++孢子主要在上半层分布基料下层含水量较高麦粒：水1∶1.4+孢子着生较少含水量过高表8 绿色木霉固体发酵基质中含水量试验以筛选获得的固体发酵基质配方作为木霉菌发酵基质培养绿色木霉，发酵过程中木霉菌在培养基质中的种群密度变化结果见表9，接种48h后，内部有菌落产生，第3～4天，整个基质全部被白色菌丝覆盖，随后，料体表面有黄绿色孢子大量产生，随着时间的推移，绿色木霉的孢子量增长迅速，到第6天培养料中孢子量达332.4×106个/g，以后孢子量增长缓慢。因此为了缩短发酵时间，降低发酵成本，发酵6天就能达到预期的要求。重复孢子密度计数（×106个孢子/g）2天3天4天6天8天平均8.3351.798.9332.4357.4表9 不同时期绿色木霉孢子种群密度变化为进一步降低生产成本，本试验设计以食用菌废弃培养料为主，附加部分麦麸和无机营养元素；随机成分有5种废弃物。配方设计及其培养木霉孢子效果见表10。由结果可以看出，在以食用菌废料为主的固定成分中加入黄豆渣，菌丝量和产孢量最高，整个基质外表充满黄绿色孢子，内部由于光照不充足产孢量较少，如果在发酵过程搅拌1～2次，可以促进产孢。在加入其他成分的配方中菌丝、产孢量均不及前者多，因此通过试验获得的最佳配方为：食用菌废料+麦麸+黄豆渣+无机营养元素。配方菌丝生长量孢子产生量食用菌废料+麦麸+无机营养元素+酱油渣++上表面零星分布黄绿色孢子食用菌废料+麦麸+无机营养元素+玉米芯++上表面零星分布黄绿色孢子食用菌废料+麦麸+无机营养元素+黄豆渣+++料体整个表面有黄绿色孢子食用菌废料+麦麸+无机营养元素+锯木屑+几乎没有黄绿色孢子产生食用菌废料+麦麸+无机营养元素+稻杆++上表面零星分布黄绿色孢子表10 木霉菌利用食用菌废料等的发酵配方筛选以筛选获得的食用菌废料培养基作为木霉菌发酵基质培养木霉菌，发酵过程中木霉菌在培养基质中的种群密度变化结果见表11，接种48h后，内部有菌落产生，第3～4天，整个基质全部被白色菌丝覆盖，随后，料体表面有黄绿色孢子大量产生，随着时间的推移，绿色木霉的孢子量增长迅速，到第6天培养料中孢子量达248×106个孢子/g，以后孢子量增长缓慢。因此为了缩短发酵时间，降低发酵成本，发酵6天就能达到预期的要求。重复孢子密度计数（×106个孢子/g）2天3天4天6天8天平均7.153.899.8248.7259.3表11 不同时期绿色木霉孢子种群密度变化迄今为止，利用木霉菌防治植物病害的研究已有近60年的历史，并且研究工作大多集中于木霉菌资源的筛选和作用机理方面，在木霉菌人工发酵方面的报道较少。我们通过对生防木霉菌培养条件的研究，进一步获得了其以麦粒为主及食用菌废料为主的固体发酵技术，可以用于绿色木霉的人工发酵，这将为绿色木霉菌产品的制剂化的生产提供技术支持。

作为大投入大产出的房地产业，准确的市场定位成为决定一个房地产项目是否成功的最重要因素。房地产开发企业只有做出正确的市场定位，建设出符合客户需求的楼盘，才能顺利达到回收投资、创造利润的目的，最终实现企业的经营目标。市场定位是整个房地产项目开发建设的第一步，目的就是确定项目本身的核心竞争力，创造项目自身独特的价值，让市场中一部分客户喜爱并愿意为此买单，从而占有市场，使房地产开发企业获得最大化的经济效益和社会效益。房地产项目的市场定位必须要依据详细、准确且大量的市场调研数据进行科学系统的整理分析，以此来确定精准的目标客户群体，从而确定项目在未来竞争中的战略地位和发展方向。市场定位是一门严肃的科学，它必须遵循特定的规律。房地产项目的定位，不仅要考虑市场供需、竞争关系，不仅要考虑产品与开发投资的辩证关系，还应当考虑城市发展的影响、地段价值的挖掘、文化环境、生活方式等，这与一般消费产品完全不同。笔者认为，房地产项目科学的市场定位最需要注意以下三个方面：房地产项目的市场定位必须符合企业的发展战略，体现企业的竞争优势，发挥企业的核心竞争力；在可能的情况下打造房地产企业品牌和产品品牌，使开发的项目具有延续性和持续的影响力。如深圳的金地集团，其企业口号是“科学筑家”，立足于在经济发达的城市打造高品质住宅地产。与其企业发展战略一致，金地集团在北京、武汉、宁波、沈阳等地打造了若干个豪宅产品——金地国际花园，这个项目锁定的客户是高层商务人士和喜欢都市生活的成功人士，其市场定位就是创造一个经过科学规划和精心设计的、高舒适性、高交通便利度、高服务品质、有利于商务社交的国际化生活环境。再如SOHO中国公司，其企业发展战略是打造时尚、潮流、高人气的投资类物业，在这样的战略框架下，SOHO中国在北京商务核心区打造的SOHO系列高端公寓和商铺，如建外SOHO、朝外SOHO、尚都SOHO、三里屯SOHO等，都是为财富阶层提供的升级投资产品。契合实际指的是要正确认识房地产企业自身，包括企业的资金实力、政府关系、人力资源储备、管理能力、研发能力等，做一个项目的市场定位时，要结合企业的实际开发能力和水平，不要轻易涉足陌生的领域。开发企业应根据自身现金流的测算和把握，确定项目定位追求方向。例如，就某一个地块而言，开发大众化普通住宅与开发别墅及普通住宅混合体同样可行，后者可能利润空间更大，但风险也更大。作为资金相对薄弱的企业，无疑应该考虑资金的快速回笼，而不是最大的利润空间。在项目的硬性、软性各项指标都很明确的情况下，开发企业自身优势的充分考虑是必不可少的，尤其是高端产品的开发，更需要开发企业契合实际综合考虑自身的条件。因地制宜，顾名思义，就是说要根据各地的具体情况，制定适宜的办法。房地产项目的因地制宜，就是指要仔细研究项目所在地块、区域和竞争市场的各种情况，制定出最恰当的市场定位。具体来讲，就是要深入研究项目所处的城市和区域经济、人文、消费心理、购买习惯等特征；要仔细分析项目的用地情况、规划条件、周边配套等；要分析可能的竞争对手的情况，尽量避免同质化竞争；只有对上述细节进行科学地研究和考虑，才能作出准确的市场定位，确保项目的成功。否则，将会遇到较大的市场阻力。比如著名的天津万科水晶城项目，其建设原址是天津玻璃厂的生产厂区，地块并不是完全空旷的场地，而是有很多生产车间、库房和旧食堂，还有若干铁轨及吊装构架。在做市场定位时，开发商因地制宜，充分尊重地块内的旧有建筑和元素，提出了“欧洲小城、历史庆典”的思路，将水晶城定位为历史积淀下的欧洲小城。在这一定位指导下，开发商并不是按照惯有的操作思路，将整个厂区拆掉平整后建设现代化社区，而是对玻璃厂地块的现有建筑进行有意识的筛选保留，将它们融入新社区的规划当中，像体量宏大的吊装车间、完整保留的货运铁路等，都成为了水晶城社区的标识物。旧有的树木、铁轨、建筑骨架与新景观、新建筑和谐对比、共同生长，使水晶城成为了天津人居的代表作，并先后获得“2005年詹天佑大奖”等多个奖项，获得了无数赞誉。所以，因地制宜对于市场定位是至关重要的。那么，如何正确地去进行房地产项目的市场定位呢？里斯·特劳持的《定位》一书中给予了我们非常清晰的指引，它提到了四个步骤：调研、细分市场、选择目标市场及定位。很显然，这四个步骤不是专门针对房地产提出的，但是，结合房地产企业的实际经营特点，我们可以借鉴和参照并指导我们对具体房地产项目的市场定位。首先，在市场定位之前我们必须要做详细准确的房地产市场的调查研究，而在调研中除了对区域、周边项目的调研外，最重要的是对本项目潜在客户或可能意向客户的调研，这些客户的需求是我们做市场定位最重要的依据，我们要通过问卷调研、座谈调研、街头访问、入户访问等多种形式来了解目标客户的住房现状和预期消费。其次，我们要对房地产市场进行细分，并确定细分市场的标准。以住宅为例，我们要确定是开发高层、多层，还是开发花园洋房、别墅；我们要确定是开发大户型、还是要开发中、小户型；我们要确定是开发精装房、还是毛坯房；我们要确定是开发顶级豪宅、还是普通住宅；我们要确定是开发欧美风格、还是中式风格等。有些开发商抱有一个错误的观念，认为把产品类型做多可以降低市场风险，迎合更多人群的需要，于是，一个不算太大的住宅项目里，既有超小的零居室，又有跃层的超大户型，既有独栋别墅、又有高层塔楼，结果这个项目成了品种多而产品全的大杂烩，最终并不被市场和客户认可。无数个实例证明，产品和品质纯粹的项目往往能在激烈的市场竞争中处于不败的地位。最后，细分市场确定后，我们还要结合项目实际，精准地选择目标客户群体，即我们的项目要针对哪一类的特定客户，我们的项目要具备什么相应的特色。比如我们已经确定的细分市场是精装修小户型的公寓，我们还要去研究，目标客户主要是购买来自用的年轻小白领，还是购买来出租的富足中产阶级，不同的主力目标客户群决定了不同的项目定位。如果是前者，我们的市场定位就要主打年轻、时尚、青春、活力这些概念，尽可能多地描述一种新的生活方式和感受；而如果目标客户是后者，我们的市场定位就要多一些投资、回报、保值升值的概念。选定了精准的目标客户群，就要针对性极强地进行项目的定位了。定位一方面是为了本项目在市场上和客户心里有一个非常清晰非常深刻的印象，另一方面是使本项目真正成为目标客户非常感兴趣、非常喜欢并愿意为之买单的最终消费品。从这个层面上讲，定位要涵盖本项目的市场形象、口号、品牌、总体规划、单体设计、户型、产品细节、价位等多项内容。这样就完成了市场定位的全过程。由于篇幅有限，这里不对市场定位的流程进行评述。市场调查包括以下四方面内容：①要了解项目所在城市的总体社会及经济发展状况，包括：项目所在城市的经济发展状况，如GDP指标、固定资产投资、消费指数、存款贷款情况等；项目所在城市的经济发展政策，如产业政策、金融政策、房地产相关政策等。②要了解项目所在城市的房地产总体市场现状及走势，包括：房地产指标分析，如房地产投资额、批准预售面积、实际成交面积、未来供应量等。房地产发展趋势预测，如市场走向、客户购买心理变化等。③要进行市场需求分析，包括：购买用途、购买时间、购买区域、购买产品类型、户型、面积、价格、环境、配套、购买原因等。④要进行竞争市场的调研和分析，包括：竞争片区选择；重要竞品选择；重要竞品分析；优劣势对比分析。客户分析就是为本项目的目标客户做一个形象的描摹，主要包括客户群体构成及特征描述（包括：客群年龄、收入、区域、行业、家庭结构、行为习惯、品质需求等），本项目目标客户需求分析（包括：目标客户购房目的、关注点、消费习惯、承受总价范围、装修要求、配套要求、信息来源、本项目买点）。项目分析包括：本项目简介，即本项目各项经济技术指标、地块现状、地块交通分析、景观分析、配套分析等。本项目SWOT分析，即优势、劣势、机会和威胁，SWOT分析将直接有助于找到本项目的核心竞争力和最适宜的发展战略。本项目发展战略建议，即对本项目的总体评价、开发战略、开发时机、开发次序、相应策略等。项目总体定位是市场定位流程中最重要的一个环节。项目总体定位包括：整体市场定位、形象定位，即案名和SLOGAN、产品定位、规划建议和价格定位。市场定位并没有一套固定的模板和程序，不同的项目也有很多不同的技巧和方法。只要遵循上述的工作流程，认真完成各项工作内容，那么就基本能做出正确的市场定位。在当今市场大环境不太理想、房地产项目间竞争越来越激烈的局面下，把第一步——市场定位做好，不失为一个确保项目成功、确保企业安全过冬的好办法。

21世纪是环保的世纪。随着环境保护呼声的日益高涨，高毒农药的大量使用对农业生态及生态环境造成的负面影响已引起世界范围的广泛关注，以高效，低毒农药逐步替代传统的高毒农药是农药发展的必然趋势。植物源农药可在环境中迅速分解，对环境无任何影响，是符合环境保护，农业持续发展方向的[1]。藜芦（Veratrum nigrum L.），问荆（Equisetum arvense）多年生草本植物，据《神农本草经》和《本草纲目》记载，全草入药，具有清热，止咳，祛痰等功效，在中药学上有广泛的用途[2～3]。黄瓜枯萎病（Fusarium oxysporan）又叫萎蔫病，属世界性病害，在黄瓜的整个生长期都可发病，轻者减产10%～20%，重者达30%以上，是保护地和黄瓜生产的重要病害之一[4]。本实验就问荆和藜芦的甲醇提取物对黄瓜枯萎病的病原菌抑制作用进行了室内测定，旨在为开发出一种经济、安全、有效的新型杀菌剂提供理论依据。1.1.1 供试样品 试验所用问荆、藜芦采自山西省庞泉沟自然保护区，将采集的植物材料洗净后在室内阴干（约25℃），放入恒温箱内（40～45℃）烘干，磨碎，过60目筛，备用。1.1.2 供试菌种 黄瓜枯萎病菌，由山西农业大学农学院植物病理实验室提供。1.2.1 问荆、藜芦提取物的制备 分别准确称取问荆、藜芦全株干粉50g，装入500ml小烧杯内，加入干粉5倍量的有机溶剂甲醇，室温下（30±2）℃浸泡3～5天后，过滤并浓缩至稠膏状，称取一定的量，并依次配成实验所需的浓度。1.2.2 抑菌活性测定 生长速率测定法[5]，用打孔器取6mm菌落边缘生长旺盛的菌种，放在加药的PDA平板上培养，以培养基内加等量无菌水作对照，每次重复3次，置25℃下培养。用十字交叉法测每个菌落的直径，以其平均值代表菌落的直径，以下式求出抑制菌丝生长率：抑制菌丝生长率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.6）×100%将问荆、藜芦甲醇提取物配制成浓度为2mg/kg的溶液进行生物活性测定（所有生物活性测定对照均为1%吐温80溶液）。由表1可以看出，两种植物的甲醇提取物对黄瓜枯萎病的病原菌均有明显的抑制作用，问荆的抑制率达到57.8%，藜芦为59.1%。同时与对照相比，处理的菌丝在培养皿中出现消减，变粗等现象。植物提取物菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate72h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate120h抑制率Inhabitingrate问荆Equisetumarvense2.4756.503.6057.804.2754.00CK4.90—7.70—8.80—藜芦VeratrumnigrumL.1.9859.102.8154.003.8151.00CK3.82—5.4—7.15—表1 问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhabiting of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporum由表1可以看出问荆、藜芦甲醇提取物对病原菌都有明显的抑制作用，为了进一步确定其生物活性，将两种植物甲醇提取物稀释成5个不同浓度（4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg、0.25mg/kg），对黄瓜枯萎病的病原菌进行测定，分别求出毒力回归方程及抑制中浓度（EC50），结果见表2、表3。两种植物提取物对黄瓜枯萎病菌的抑制作用都是随着浓度的增大，抑菌活性逐渐增强。且浓度为4mg/kg时问荆和藜芦的抑制率分别达到74.0%和79.2%，具有很强的抑菌作用。同时，随着时间的推移，抑菌效果逐渐降低。植物提取物浓度（mg/kg）Concentration菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate72h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate120h抑制率Inhabitingrate问荆Equisetumarvense藜芦VeratrumnigrumL.4.0001.0274.001.9572.202.6570.12.0001.6257.702.9857.103.8056.81.0002.1244.203.8045.104.8344.90.5002.5732.004.7031.205.6335.70.2502.8324.904.8529.706.5525.1CK3.75—6.87—8.72—4.0001.7279.201.8873.502.4769.702.0001.9059.702.7555.503.4553.901.0002.3246.603.3543.104.3539.300.5002.4343.203.6037.904.7233.300.2502.6037.903.9530.605.0827.50CK3.82—5.43—6.78—表2 不同浓度问荆、藜芦甲醇提取物对枯萎病菌菌丝生长的抑制作用Table 2 Inhabiting of the different concentration of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporan处理Treatment毒力方程RegressiveequationEC??50相关系数r问荆EquisetumarvenseY=1.6167+1.0975X1.2100.9918藜芦VeratrumnigrumL.Y=2.0920+0.9915X0.8750.9644表3 问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌的毒力Table 3 Virulence of the extracts of Equisetum arvense and Veratrum nigrum L.seeds against Fusarium oxysporan抑菌剂主要是通过抑制微生物细胞膜的膜透性或某些酶作用从而抑制代谢过程发挥作用的。具体来说，是抑制新陈代谢中某些酶或蛋白质的合成或活性发挥，或者抑制核酸的合成，也有的是通过改变细胞透性，如干扰细胞壁的组成物质合成等，也有许多抑菌剂则是作为代谢拮抗物影响代谢的进行而发挥抑菌作用的，一般说来抑菌剂的分子结构特征与生物膜脂分子结构特征愈相似，则愈易进入菌体从而更易发挥抑菌作用[6～7]。许多植物组织具杀菌或抑菌作用的可挥发性物质，如单萜、倍半萜、醛类、酯类、酸类、醇类和一些芳香类物质。它们几种或多种共同作用使得植物组织具有较强抵御病菌侵入能力[8]。本实验研究表明问荆、藜芦甲醇提取物对黄瓜枯萎病菌确实有较好的抑制作用，其抑制中浓度EC50分别为1.21mg/ml，0.857mg/ml。从保护环境的角度出发，问荆、藜芦作为一种生物农药，具有良好的开发前景和应用价值。至于问荆、藜芦粗提物对其他病菌的活性，及其对病原菌的作用方式和作用机制均有待于进一步的探讨。

杨树水泡溃疡病（Botryosphaeria dothidea）是为害杨树的重要病害，影响植株生长甚至导致死亡，近年来随着杨树栽植面积的快速增大，杨树水泡溃疡病发病益显严重。目前对该病的防治对策以壮树防病结合化学药剂防治为主，鉴于人类对环境质量要求的提高，生物防治日益受到人们关注。植物内生细菌是一种重要的生物农药来源，其不仅可以抑制病原微生物的生长，还可以促进寄主的生长。因此，越来越受到植物病理学家的重视。目前国内外已有从不同植物中获得内生菌的报道，但杨树内生菌尚未见报道。我们尝试从杨树上获得内生细菌，为用于杨树病害的生物防治奠定基础。杨树水泡溃疡病（ Botryosphaeria dothidea）害标本由本实验室保存。分离材料取自山东省泰安市区和市郊绿化或用材杨树，将带杨树水泡溃疡病病斑的组织用常规稀释方法[1]，分离内生细菌。对分离得到的内生细菌进行划线培养，挑取单菌落纯化保存。将分离获得内生菌PE0704进行菌落形态观察、革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色[2]，并对PE0704的16SrDNA序列进行扩增、测序和序列分析。取PE0704菌体，以对峙培养法测定其对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长的抑制作用，采用凹穴法测定其对病原菌孢子萌发的抑制作用。设置不同的发酵条件，对PE0704进行发酵培养，测定发酵液对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。不同的分离方法对杨树内生细菌的分离效果不同。尤其是组织块的破碎程度以及经消毒、破碎后的组织块是否振荡处理，对内生细菌的分离影响很大。改进的分离方法如下：首先将组织块用75%的酒精、5%的NaClO进行表面消毒，研碎，然后在25℃下振荡培养2h，取培养液，按常规稀释法稀释、涂板，置28℃下培养。利用该方法，从杨树中获得37个内生细菌菌株。经初步筛选得到了对杨树水泡溃疡病菌抑菌活性较好的内生细菌菌株，其中菌株PE0704抑菌效果表现最好。将PE0704在NB平板培养基上划线培养，培养24h时菌落表现为白色、椭圆形、边缘整齐、中央凹陷、表面干燥、粗糙、不透明。该菌体短棒形，两端钝圆，产芽孢、中生、周生鞭毛、革兰氏染色为阳性。对PE0704的16SrDNA进行扩增、测序，共获得该菌16SrDNA的全长为1500bp的部分序列，该序列通过NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）进行BLAST比对，与已报道的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的16SrDNA序列相似度高，其中与枯草芽孢杆菌（B.subtilis）（AB016721.1）等的相似度高达97%以上。结合该菌的菌体形态和染色反应结果，参照《常见细菌系统手册》（第1版）[3]，基本确定该菌株为B.subtilis。PE0704的菌体对杨树水泡溃疡病菌的菌丝生长有较强的抑制作用，能够明显抑制菌落生长直径，并导致菌丝形态发生了显著变化。镜检发现，其菌丝细胞粗短，扭曲；菌丝顶端和中部细胞膨大成球形或椭圆形；随着时间的延长畸变程度加重，菌丝出现断裂、变成空泡。PE0704的菌体能够抑制杨树水泡溃疡病病菌的孢子萌发，并引起萌发孢子的芽管畸变、其菌丝畸形。对PE0704进行不同条件的发酵培养，结果发现，PE0704的发酵液能够抑制杨树水泡溃疡病菌的菌丝生长和孢子萌发，并引起菌丝形态异常。在几种供试培养基中，在BPY中培养获得的发酵液的抑制作用最强，振荡培养72h的发酵液开始表现明显抑菌作用，96h的抑菌作用最强。杨树中存在着对杨树水泡溃疡病菌具有抑制作用的内生细菌，本试验从杨树中获得了37个内生细菌菌株，部分具有抑菌活性。通过菌落形态观察，革兰氏染色、芽孢染色、鞭毛染色，并经16SrDNA序列分析，确定获得的内生菌株PE0704为枯草芽孢杆菌（B.subtilis）。PE0704菌的菌体和发酵滤液对杨树水泡溃疡病菌菌丝生长和孢子萌发都有较好的抑制效果，能够抑制其菌落生长，并引起菌丝形态产生畸形，能够抑制病原菌孢子萌发，并引起其芽管畸形。鉴于PE0704对杨树水泡溃疡病菌的良好作用效果，可进一步开展菌株拮抗作用机理和发酵条件的研究，为生物农药的研发提供重要依据。