链霉菌（Streptomyces sp.）是产生天然生物活性物质的重要微生物类群，利用链霉菌及其代谢产物防治植物病害，在生防研究领域向来受到重视。本研究从健康水稻植株上分离到一株放线菌菌株F-1。通过形态观察初步将其鉴定为链霉菌（Streptomyces sp.），并与普特拉链霉菌种（Streptomyces platensis）的形态学特征与培养性状相似。经16S rDNA方法鉴定，菌株F-1与普特拉链霉菌高度同源，置信度达100%。由此将菌株F-1定名为普特拉链霉菌F-1（Streptomyces platensis F-1）。菌株F-1产生的抗菌物质对水稻纹枯菌（Rhizoctonia solani Kühn）具有抑制作用。在离体条件下，将菌株F-1与纹枯菌对峙培养，可形成明显的抑菌带，与F-1对峙培养的纹枯菌菌丝顶端肿胀、扭曲。将菌株F-1液体发酵物滤液按10%比例与PDA混合制备平板，再接种纹枯菌。结果表明：纹枯病菌菌丝生长的抑制率为56%。在离体水稻叶片上进行的防效试验表明：经菌株F-1的液体发酵滤液处理的水稻叶片，其病害等级与无菌水对照相比明显降低（P<0.05）。菌株F-1孢子液对水稻纹枯病也具有较好的防效，表明孢子液中也存在抗菌物质。活体防效结果表明，经链霉菌菌株F-1发酵滤液处理的水稻植株，其病情指数与清水对照相比显著降低（P<0.05），生防效率达到60%。抑菌谱表明，菌株F-1产生的抗菌物质除对水稻纹枯菌外，还对稻瘟菌（Pyricularia grisea）、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）、灰霉菌（Botrytis cinerea），小麦赤霉菌（Fusarium graminearum）、棉炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）等多种重要病原菌有显著的拮抗作用，而对小麦纹枯菌（Rhizoctonia cerealis）、棉枯萎菌（Fusarium oxysporium）、西瓜枯萎菌（Fusarium oxysporum）和链格孢菌（Alternaria）等病原菌没有显著的拮抗作用。说明F-1抗真菌作用具有选择性。进一步研究表明，菌株F-1产生的抗菌物质不耐高温，100℃处理10min后，基本失去抑菌活性。F-1产生的抗菌物质可经硫酸铵饱和沉淀分离。纯化工作正在进行之中。链霉菌菌株F-1在液体和固体培养条件下，均可产生芳香气味。我们推测F-1可能产生挥发性物质。因此，作者对菌株F-1产生的挥发性物质是否具有抑菌活性和防病潜力进行了测定。结果表明，菌株F-1产生的挥发性物质对引起草莓灰霉病的灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea Pers.）有显著的抑制作用，抑菌率达50%。在离体草莓果实上进行的防效试验结果表明，菌株F-1所产生的挥发性物质对草莓灰霉病有显著防效。接种8天后，经挥发性物质处理的草莓，基本没有发病（病害等级0级）或仅有轻微症状出现，病害等级1～2；而接种和没有接种灰霉病菌的两个对照组，草莓果实已经腐烂，表面长满灰霉或腐霉等杂菌，病害等级达到顶级8级。此外，链霉菌菌株F-1产生的挥发性物质对引起油菜菌核病的核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）也有显著的抑制作用。离体试验表明，抑菌率可达53%。在油菜苗期进行的活体试验结果表明，菌株F-1产生的挥发性物质对油菜菌核病的生防效率达57%。试验表明，菌株F-1产生的挥发性物质对多数病原菌均有显著的抑制作用，抑菌具有广谱性。这为将来利用其防治温室、大棚病害和果蔬储藏期病害研究提供了试验依据。目前正在准备采用顶空固相微萃取（HS-SPME）-气相色谱/质谱法（GC/MS）对链霉菌菌株F-1产生的挥发性物质成分进行测定。综合以上分析，我们认为链霉菌菌株F-1产生的抗菌物质及挥发性物质均具有明显的防病效果，值得对其进行深入研究。

所谓企业人力资源，是指企业可以控制和利用的、能够为实现企业目标而服务的全部人力资源的总和。企业人力资源管理，是指企业为了实现既定目标，通过招聘、甄选、培训、报酬等形式，运用计划、组织、控制、指挥、激励等现代化的科学方法和管理手段，对企业内外相关的人力资源进行充分开发和有效运用所进行的一系列活动的总称，企业人力资源管理的对象是企业员工。人力资源管理是现代商业企业提高竞争能力和管理水平的重要环节，是企业打开成功之门的钥匙。随着我国经济的不断发展，现代商业企业作为传统行业，所面临的市场竞争和各种挑战更加激烈，在克服各种激烈挑战和应对商业现代化的进程中，作为生产要素之一，人力资源的重要性日益突出。在人类所拥有的一切资源中，人力资源乃第一宝贵的，资源是现代企业管理的核心。管理大师彼得·德鲁克曾经说过：“企业只有一项真正的资源——人。管理就是充分开发人力资源以做好工作”。人力资源在组织发展中起着越来越重要的作用，甚至是关键之所在，“以人为本”的人力资源管理理念也造就了一个又一个成功的企业。在当今知识经济时代，企业的核心能力是企业内部经过整合了的知识和技能，而知识和技能的创造者和唯一载体就是企业的人力资源，做好人力资源的招聘与管理也就保证了企业创新和发展的动力之源。因此，招聘工作在企业管理中具有极为重要的作用，企业必须加强招聘管理工作，努力把合适的应聘者招聘到企业中来，并把他们安置到合适的工作岗位上去。建立一支高质量的员工队伍是企业招聘工作的根本任务。人力资源招聘作为人力资源管理的重要环节，它服务于企业人力资源总体战略目标。企业进行人力资源招聘的目的，就是为企业发展提供符合生产、经营需要的各方面人员，提高员工专业素质和业务技能，最大限度地发掘出每个员工的能力和潜力，调动他们的工作积极性和主动性，以满足企业当前生存及未来发展之需要，实现企业既定目标，并保留住那些适合企业发展的人员，帮助员工实现个人职业发展需求。招聘作为企业人力资源管理非常重要的环节，是一个企业不断从组织外部吸纳人力资源的过程。商业企业人力资源招聘的一般流程是：在招聘开始之前，需要确定拟招聘的岗位、数量、任职条件、时限要求等，并据此选择招聘途径，发布招聘信息，组织人员招聘；在收到应聘人员求职简历和相关资料以后，需要进行初步筛选，根据工作岗位所需要的某一个或几个关键性特征进行快速而粗略的挑选，并依初选结果再组织相关人员对应聘者进行面试；面试和录用环节需要对应聘者进行比较全面的考察，并进行必要的专业技术考试、心理测试、背景调查、政审等，以保证组织源源不断的人力资源需求。招聘工作是一个企业人力资源管理中最基础性的工作。目前商业企业人力资源招聘管理中存在的主要问题是人员招聘形式简单，重复性大，技术含量低。大部分商业企业仍然沿用传统的招聘方式，手段单一，导致招聘工作的质量和水平降低，重复性增加，对于所需要的专业技术人员和管理人员，还仍然在以传统的选拔和鉴别手段对应聘者进行挑选、面试、考核和政审、录用等，导致出现新进人员与工作岗位不相匹配、核心员工流失严重等诸多问题。针对上述问题，笔者介绍以下商业企业人力资源招聘解决方案。人员招聘工作是一个有计划的管理过程，岗位分析与岗位评价为企业人员招聘提供了基本条件。企业招聘到适合的员工是企业成功的首要条件，所以企业人力资源管理人员应充分重视人员招聘工作。而招聘平台的选择非常重要。通常，商业企业人员的招聘途径有招聘会、校园招聘、职业介绍服务机构、广告媒体等，通过这些途径基本能够实现招聘计划的目标。招聘途径是决定招聘效果的重要因素，不同的招聘途径有着不同的效果，人力资源管理人员需要根据公司具体的招聘需求进行选择。总的来说，在选择招聘途径时，要在“快、准、省”三方面下功夫。招聘程序对招聘效果也有重要影响，科学、合理的招聘程序能够大大提高招聘工作的质量和效率，一般由招聘需求确认、招聘范围选择、招聘信息发布、招聘人员甄选和人员录用等工作程序构成。在招聘过程中应注意以下方面：——重视网络招聘。网络招聘速度快，效率高，覆盖面广，且费用相对较低。网络招聘主要有两种形式：一是通过专业招聘网站组织招聘，如智联招聘、前程无忧、中华英才网等专业网站，各职业介绍服务机构和人才市场建立的网站等；二是利用公司自己的网站进行招聘，现在越来越多的公司建立了自己的网站，并在公司主页上设有招聘链接，方便求职者发送电子求职简历。随着互联网的进一步发展，这一招聘形式会逐步成为主流，作为人力资源管理人员对此一定要给予高度关注和足够重视。——利用好职业介绍服务机构。社会上的职业介绍服务机构有很多，他们拥有大量的人员信息，覆盖面广，服务到位，工作时间集中，并能够按照企业提出的要求和标准公正地挑选应聘者。职业介绍服务机构基本都建有求职人员电子信息库，方便企业根据自己的要求查询登记人员信息，挑选出合适的应聘者。——灵活运用各种招聘途径。不同的招聘途径各有利弊，人力资源管理人员在进行招聘途径设计时，要结合所招聘人员的具体情况选择招聘途径，充分发挥各种招聘途径的优势。可以对需要招聘的岗位进行归类整理，将普通员工与技术、管理人员分开安排，对于需求量大、上岗时间集中的普通员工，可以利用大型招聘会或专场招聘会等途径招聘，广泛收集各方信息；对于技术、管理等人员，可以通过人才市场，以及内部推荐、广告媒体、网络招聘等形式招聘。——注重招聘流程设计。事先设计一个合理的招聘流程能够大大提高招聘工作的质量和效率。比如某公司的人才招聘程序是根据公司年度工作计划，由各部门分解工作任务，人力资源部与用人部门共同确定出该部门人员编制计划；人力资源部收集、汇总后，编制出公司年度人员编制计划和招聘计划并报批（对于临时出现的人员招聘，由用人部门提交申请，人力资源部审核并报批），如期安排人员招聘；人力资源部制作招聘启事，说明岗位名称、工作职责、任职标准、资质要求及招聘数量等，并征求各用人部门意见；在招聘会、广告媒体上发布招聘信息，收集并整理应聘者的个人简历及资料，在规定的时间内挑选出适合岗位要求的求职者，并在征求用人部门意见后，确定面试的时间、地点及岗位技能考试题；通知应聘者前来面试，并携带相关证书、资料等，人力资源部和用人部门共同组成面试小组（个别特殊岗位人员的招聘需要公司领导参加），面试应聘者，组织专业测试（或笔试）并评判成绩，审查相关证书、资料等；整理面试记录，确定最终入选人员名单，并完成报批，然后对入选人员进行政审，并通知本人到疾病预防控制中心体检，对政审、体检均合格者，电话约定具体上岗时间；办理新员工的入职手续，签订劳动合同，进行入职培训，转移人事档案、社会保险及住房公积金等，并组织新员工到用人部门报到。——做好自行登门应聘者的接待工作。目前，就业形势比较严峻，有相当一部分人员处于失业或半失业状态。虽然自行前来应聘的人员多半并不是本单位所急需的，但笔者认为让他们填写应聘人员登记表，并问明应聘者相关情况是很有必要的，以备将来需要时所用，况且商业企业人员流动量大，人力资源部也需要有一定数量的人员储备；同时，作为人力资源管理人员，要学会换位思考，要给每一位前来求职的人员以足够的尊重和理解，对于他们提出的问题，也要给予耐心、细致的回答，以体现用人单位对招聘工作的重视；同时，人力资源部也是窗口部门，商业企业有一个理念就是“进门的都是客”，做好每一个应聘人员的接待工作，也有利于宣传本单位的企业文化和服务理念，在社会上树立本企业的良好形象。如何才能招聘到能够胜任岗位工作要求的核心员工呢？应该使用哪些方法来鉴别员工是否符合工作岗位所要求的素质和能力呢？这里给大家介绍一种方法——基于胜任能力模型。基于胜任能力模型是从知识、岗位素质、个人行为三个方面对应聘者进行评价。具体而言，知识体系主要考核员工的知识层面，重点是每个岗位需要哪些知识，与通常考试不同的是，它更偏重于企业实际工作，有许多是从企业实际中延伸出来的具体课题；岗位素质测评需要根据岗位的具体职责与工作内容来进行分析，以确定岗位需要哪些素质和能力，如商业企业中的销售人员需要有良好的沟通能力，招商经理要有较强的说服力和对他人的影响力，专业技术岗位需要有良好的技术创新能力，然后再对这些素质模型通过具体的测量进行评估；行为评价是基于人的行为（表现方式）的一种评价形式，通过能力测验、“MBTI”性格测验、兴趣测验、面谈、无领导小组讨论、公文筐作业等方式对员工的表现进行评价，了解其工作态度、工作风格、工作愿望、工作能力和工作潜力等，同时也能考察出他们的组织领导能力、处理问题能力、表达沟通能力以及对待工作压力的态度等。从人事管理学会统计得出的结果来看，人才招聘中不同方法的使用对人才的预测信度和效度也不同，面谈只有14%～21%的可预测性，参考以往工作经验的数据为25%～28%，推荐为30%～36%，一般性的测评为46%～52%，基于胜任力的人才测评对应聘者的可预测性高达81%～89%。美国电话电报公司利用人才测评技术对几百名初级管理人员进行了评价，然后将评价结果封存起来，8年以后证实，80%被提升到中级管理职位的人，当时对他们的评选鉴定被证明是正确的；在未被提升的人中，有90%的人员早就预测到了。近几年测评技术不断发展，既包括了传统的纸笔考试方式，也包括情景摸拟、人机测评、专家面谈、投射测评、背景调查、评价中心技术等方式。这些测试方法对招聘人员的专业素质提出了更高要求。目前，作者正在积极尝试应用其中的某些测评技术与方法，包括运用基于胜任能力模型对核心员工进行招聘的选拔与甄别；同时，也在积极寻求与专业人才测评机构合作，以提高人力资源招聘工作的效率与质量。做好企业人力资源招聘工作，需要用新的运营管理方式和科学技术手段来开发和管理人力资源，需要各部门管理者和人力资源管理部门通力合作与密切配合，需要结合企业实际制定科学的、合理的、人性化的管理制度和工作流程，只有这样，现代商业企业才能在激烈的市场竞争和各种挑战中不断取得成功！主要参考文献1.秦志华.企业人力资源管理基础.北京：清华大学出版社，20082.张一驰.人力资源管理教程.北京：北京大学出版社，19993.廖泉文.人力资源管理.北京：高等教育出版社，2003

土壤线虫具有丰富的生物多样性。多数土壤线虫生态学者将土壤线虫按照取食习性分成植物寄生线虫、食细菌类线虫、食真菌类线虫、捕食类或杂食类线虫、以基质为食的线虫和取食单细胞的线虫等[1]。植物寄生线虫可以通过取食植物根部，直接影响植物的营养状况或通过取食活动造成的伤口，引起与其他植物病原物的复合侵染。植物寄生线虫大多数属于垫刃目、少数是矛线目长针科和膜皮亚目毛刺科；捕食性线虫通常是以捕食土壤中的线虫、菌物、藻类及其他微动物为生，多为单齿目线虫。捕食性线虫属于自由生活线虫，通常生活周期长、繁殖能力低和对环境干扰敏感。一般不是土壤中的优势种群，但能更好地指示土壤状况的较长期变化[2]。捕食性线虫作为植物寄生线虫的捕食者具有较好的生防潜力[3，4]。对于捕食性线虫群体动态变化的研究有限，Azmi和Das&Mukhopadhyay[5，6]报道了捕食性线虫群体随着被捕食线虫的种类和密度变化而变化。Choudhury[7]对泰米尔某地的捕食性线虫Mylonchulus minor在不同深度土壤中的分布和随季节的动态变化做了研究。为了深入了解捕食性线虫对土壤健康状况的指示作用，明确在耕作土壤中捕食性线虫与植物寄生线虫的关系，本试验研究了不同耕作制度大豆田中捕食性线虫种群多样性以及捕食性线虫与植物寄生线虫种群密度动态变化关系做了详细的研究。供试作物：大豆（Glycine max），辽豆11为感染大豆胞囊线虫的品种。1.2.1 田间设计 试验于2006年在辽宁省沈阳市汪家乡养竹村。定点选取连作、轮作、水稻田改旱田和撂荒4种耕作方式下的大豆田进行研究。连作3～4年，轮作方式为水稻―大豆―玉米―大豆，水稻田改旱田前茬为水稻，撂荒地为以前未种过大豆的荒地（但有野生大豆生长）。播前大豆无任何处理，分别在播种期（5月7日）、苗期（6月7日）、开花期（7月10日）、结荚期（8月7日）和成熟期（9月6日）进行取样。1.2.2 土样采集方法 每一种耕作制度采用五点法取样，去掉5cm表土挖取300g根际土壤，封口，记好标签，带回实验室及时分离。1.2.3 线虫的分离、杀死和固定 每个土样称取鲜土200g，采用淘洗—过筛—重糖离心法分离；水浴60℃，10min杀死；采用TAF固定液固定。1.2.4 土壤含水量测定 土壤含水量采用烘干法测定，烘箱设置80℃、12h烘干。1.2.5 线虫的计数 将每份标样摇匀后，用带刻度的吸管吸取1/3，在显微镜和体视解剖镜下进行科属鉴定并计数，然后依据测得的土壤水分将土壤线虫种群折算成100g干土中含有的线虫条数。1.2.6 线虫群落分析方法 根据线虫的取食习性和食道特征确定线虫所属类群（Yeates等，1993）。生态指数和计算方法如下：丰度（Abundance）=100g干土中土壤线虫的数量相对丰度（Relative Abundance）RA=丰度/线虫总数2.1.1 捕食性线虫种群的多样性 从各个时期的土样中，分离鉴定出捕食性线虫共2个目4个属。各属的形态特征如下：（1）孔咽属线虫Aporcelaimus spp.分类地位：矛线目，矛线亚目，矛线总科，矛线科。形态特征：食道前部细长，后部扩大呈圆筒形或梨形，口腔内常有1个轴针或壁齿。虫体大，通常大于4mm。体表由微弱棕纹和交织纹，偶尔也有横环纹。唇区突出，唇片分离。齿针粗，开口大于齿针1/2。侧器由中央支撑。食道在中部扩大。背食道腺与开口间距离大。有贲门盘。雌虫卵巢1对，阴门横裂。雄虫有矛线形交合刺，有侧引带，中腹生殖乳突数个或多个。尾短，圆锥形或半球形，雌雄尾形相似。（2）前矛线属Eudorylaimus spp.分类地位：矛线目，矛线亚目，矛线总科，矛线科。形态特征：口腔内常有一个轴针或壁齿，口腔壁无角质化或肋围绕着轴针，食道前部细小，后部扩大成圆筒形或梨形，食道后部扩大部等于或大于1/3食道长，口针较短，延伸部简单，无凸缘或基部球，咽具有一轴针，口针周围无角化板，食道前部正常肌肉质，唇区不开阔，口针导环明显，无导鞘，内环乳突不在头部外侧，两性尾部皆为丝状。（3）锉齿属线虫Mylonchulus spp.分类地位：单齿目，锉齿科，锉齿属。形态特征：食道呈圆筒形，基部稍宽，口腔壁角化，至少有1个粗大的背齿。背齿位于口腔前部向前指，相对位置上有2列边缘齿。经温和热杀死后向腹面弯曲，唇区分开，口囊腹壁小齿6排，雌虫双卵巢，尾短，圆锥形，在尾近中部突然向腹面弯曲。（4）单齿属线虫Mononchus spp.分类地位：单齿目，单齿科。形态特征：虫体长1～6mm。食道呈圆筒形，基部稍宽，口腔壁角化，至少有1个粗大的背齿。口腔卵圆形。背齿大，位于口腔前部1/3，齿尖向前，无亚腹齿。背齿相对处亚腹侧口腔壁有2道横肋。卵巢1对，偶单个。雄虫常见，交合刺细长。生殖附器10～47个不等。雌雄尾形相似。尾腺和尾腺管明显。在分离鉴定的4个属线虫中，孔咽属在土壤线虫总数中占优势，属于亚优势属。在连作田和撂荒田中仅发现了孔咽属；在水改旱中捕食性线虫的种类最多，4个属的线虫均有出现，其中孔咽属和锉齿属为常见属，前矛线属和单齿属为一般属。轮作中没有发现单齿属线虫，而其他3属线虫均存在，但孔咽属明显少于其他3种耕作方式。不同耕作方式大豆田中，捕食性线虫的种类和数量均有差异（表1）。OrderGeneraContinuouscroppingRotationPaddy-uplandFallowDorylaimidaAporcelaimus9.51%b1.40%c4.48%c6.84%bProdorylaimus0.01%d0.27%dMononchidaMylonchulus0.02%d1.10%cMononchus0.07%dTable 1 The genus, relative abundance and dominance of predatory nematode in four tillage practice2.1.2 植物寄生线虫种群的多样性 本试验共分离鉴定出植物寄生线虫1个目15个属（详见表2）。各耕作方式中植物寄生线虫都是大豆田中线虫的优势种群。不同耕作方式中植物寄生线虫的各属分布情况不同，连作中的种类最多，轮作其次，而撂荒中植物寄生线虫的种类最少。螺旋属在各种耕作方式中均占有优势地位，在轮作中相对丰度高达90.55%。胞囊属在各种耕作土壤中也均有分布，在连作和撂荒中为优势属，在轮作中为常见属，水改旱中则属于一般属。其他各属多为一般属。OrderGeneraContinuouscroppingRotationPaddy-uplandFallowTylenchidaHelicotylenchus30.42%a90.55%a71.45%a41.53%aPararotylenchus0.04%d—0.01%d0.17%dScutellonema0.09%d——Criconemella—0.01%d——Hoplolaimus0.01%d0.01%d——Pratylenchus—0.42%d——Paratylenchus0.06%d0.01%d—0.07%dHeterodera35.47%a1.09%c0.14%d26.34%aXiphinema0.15%d——Neothada—0.01%d—0.01%dTylenchus0.19%d—0.54%d—Filenchus0.37%d0.53%d0.11%d—Psilenchus0.13%d0.43%d0.50%d—Boleodorus0.07%d—1.07%c—Basiria0.19%d0.01%d0.16%d0.30%dTable 2 The genus, relative abundance and dominance of plantparasitic nematodes in four tillage practice试验结果显示，随着大豆生育期的变化，不同耕作方式下大豆田植物寄生线虫变化基本一致，均是在大豆播种期、苗期和开花期线虫的数量变化有逐渐减少的趋势，到结荚期线虫的数量明显增多，成熟期达最大。轮作中植物线虫总量远高于连作、水改旱和撂荒，变化最明显，其次是水改旱和撂荒。在4种耕作方式中，连作的每个时期（除播种期外）植物线虫数量都为最少，到成熟期数量增长也不显著，变化最平稳。大豆田中捕食性线虫数量比植物寄生线虫的数量少近50倍，不是土壤中的优势种群，但对环境变化较为敏感。不同耕作方式下捕食性线虫随大豆生育时期变化的趋向不同。连作和轮作中捕食性线虫变化的曲线大致相同，从播种期到成熟期先减少后增多。水改旱地块中前3个时期捕食性线虫的数量几乎没有变化，结荚期和成熟期急剧增加达到群体数量最大。撂荒地中捕食性线虫的数量在播种期最多，而到苗期、开花期则减少到几乎没有，结荚期时的数量又上升到4种耕作方式中的最高值，到成熟期又有所降低（图1）。不同生育期植物寄生线虫和捕食性线虫的变化曲线基本一致，从播种期到苗期、开花期缓慢减少，从开花期到成熟期逐渐增多，成熟期达到最大（图3）。从图中曲线可看出捕食性线虫的变化较植物寄生线虫有些迟滞，说明捕食性线虫的数量有可能是随着植物寄生线虫数量的增减而变化，这与土壤中线虫食物链有一定的关联性。Figure 1 Changes in numbers of plant-parasitic nematode and predatory nematode during soybean period in different tillage practicesFigure 2Figure 3 Dynamic change of plant-parasitic nematode and predatory nematode in soybean period本研究仅在大豆田发现了4属的捕食性线虫，其中孔咽属为亚优势属，存在于4种耕作方式中，而一般属锉齿属和单齿属仅存在于水改旱和轮作中；植物线虫类群中螺旋属在4种耕作方式中均为优势属，胞囊属在连作和撂荒中为优势属，在轮作和水改旱中则属于一般属；但植物线虫总数在轮作中最多，水改旱其次，撂荒和连作最少。在农田生态系统中，捕食性线虫的生育周期长而且繁殖速度慢，受到人为扰动后群体数量恢复较慢，因此该类线虫中的某些种类可以作为生物指示剂指示土壤的健康情况。本研究同一种作物在不同的耕作方式下，植物线虫和捕食性线虫的种群多样性主要体现在种属分布不同，数量的多寡不同。在水改旱和轮作中的捕食性线虫的种类比连作和撂荒中的丰富，而且胞囊线虫的相对丰度也很低，仅在1%左右。胞囊线虫作为大豆的重要病原物起着指示大豆胞囊线虫病害发生严重度的作用。因此，研究认为，植物线虫类群中的胞囊属和捕食性线虫类群中的锉齿属和单齿属对土壤的扰动较为敏感，能很好地反映土壤发病和健康状况的变化，可作为土壤中重要的指示生物。本文的研究显示在大豆不同生育期，捕食性线虫的种群数量随着植物寄生线虫的增加而增加。植物寄生线虫会追随植物的生长发育而大量繁殖自身，因此在植物生育末期种群数量一般会增殖到最大，而捕食性线虫以土壤中线虫或其他生物为食，因此也会随植物线虫群体数量的增大而增加。Das等人通过对耕作田和草坪土壤中植物寄生线虫、捕食性线虫和自由生活线虫种群密度动态变化的研究中发现捕食性线虫的动态变化依赖于被捕食线虫种群多样性和密度[6]。Azmi和Choudhury分别通过对捕食性线虫Iotonchus monhystera和Mylonchulus minor种群动态的研究得出上述结论[5，7]。因此，植物寄生线虫作为捕食性线虫的一个重要的食物来源，在一定程度上影响其种群密度的变化。

水稻条纹叶枯病（Rice stripe virus，RSV）是一种以介体昆虫灰飞虱传播的病毒病。该病在我国最早发生于1964年。近年来由于耕作制度、气候条件、水稻品种等的变化，导致该病再次大范围流行，给水稻生产造成很大的损失。浙江省自2004年在湖州的部分晚粳稻上严重发生以来，其他地区相继发病，病情发展很快。浙江嘉兴市自2002年开始水稻条纹叶枯病零星发生，发病面积不断扩大，2004年发病面积0.33万hm2，2005年70%的乡镇发病，全市合计发病面积达1.26万hm2，占水稻种植面积的10%左右，2006年发病面积继续扩大，全市每个乡镇均有发病，发病面积达1.49万hm2，对水稻造成较大损失。目前水稻条纹叶枯病已成为浙江北部稻区影响水稻高产的主要病害之一。为此，我们从2005年起对水稻条纹叶枯病发病与产量损失的关系开展了研究，现将结果报道如下。选用目前浙江湖州、嘉兴等地种植面积较大的晚粳品种嘉991为供试品种，种子由嘉兴市农业科学院提供，试验在嘉兴市农业科学院试验田中进行。1.2.1 试验小区设置 选定3块播栽期一致、生长均匀的田块作为试验区，其中2块田作为单丛发病率测产，分别标记为A、B区；另1块田作为小区发病率测产，标记为C区。1.2.2 发病率调查 从水稻插秧后开始定期调查试验区的田间条纹叶枯病自然发病情况，直至病情稳定。病情稳定后在田间选定发病的单丛植株和小区。定点单丛试验区每个田块分别选500丛发病植株作为供试样本。调查每丛样本的病株数与总株数，计算其株发病率，对株发病率相同的样本，各测定指标计算平均值。然后比较不同株发病率下各个指标的变化趋势。并在选取发病样本的同时，每块田中分别选取20丛未发病的健康植株作为各自对照。小区发病率测产区在选定的田块上根据田间发病情况随机选取面积2～4m2的小区15个。其中13个为发病小区。统计每个发病小区内的病株数和总株数，计算每个小区发病株率；选定2个没有发病植株的小区作为对照区。1.2.3 水稻产量和经济性状考查 水稻成熟后，将选定的定点单丛和各小区样本分别收获，在实验室进行产量、秕谷率和千粒重等指标测定，定点单丛样本还进行有效穗数统计。小区样本产量统一折合成每平方米的产量，分析发病率与产量之间的关系。实验室测产结果：与对照相比，各发病样本有效穗数明显减少，且随着发病率的升高，穗数减少的比例也呈上升趋势，产量与有效穗数表现出相同的变化趋势。A、B两区的试验结果表明，单丛植株的株病率与减产率相当。其中A区的平均病株率与产量损失率之比为1：1.13，B区发病率与减产率比值为1：0.95，2区平均比值为1：1.04，株发病率与减产率接近1：1。病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）0.0010.20.0031.470.008.33101.9629.107.5312.50821.5731.300.5420.00460.7819.9036.7722.22641.1820.0036.4527.27911.7628.708.8028.575.546.0819.9036.7733.33641.1819.3338.5737.504.555.8811.7062.82表1 A区定点单丛条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）38.46731.3729.107.5340.00641.1820.8033.9141.67641.1817.8043.4442.86460.7817.0045.9844.444.555.8813.6056.7850.00370.599.4569.9757.14370.5911.6063.1483.33190.201.9093.96续表1图1 A区发病率与有效穗数的关系图2 A区有效穗数和产量损失的关系在A区，全部发病样本的平均穗数为5.4个，对照有效穗数为10.2个。与对照相比，病丛有效穗数平均减少4.8个，减少率为47.30%。该区全部发病样本平均病株率为36.73%，产量损失率为41.64%。水稻条纹叶枯病发病率与减产率关系分析表明，平均株发病率每上升1%，产量损失就会增加1.13%。图3 A区发病率与产量损失的关系通过对水稻株发病率、减产率和有效穗数减少率之间的相关性分析，建立发病率（x）与有效穗数减少率（y）的回归方程为：y=1.0618x+6.9534，r=0.8446**；有效穗数减少率（x）与减产率（y）的回归方程为：y=1.0326x-7.8186，r=0.9322**；发病率（x）与减产率（y）的回归方程为y=1.1699x-3.1764，r=0.8400**。相关回归分析表明，有效穗数的减少与产量损失之间的关系最显著，呈正相关，相关系数r=0.9322**，说明引起产量损失的直接原因是有效穗数的减少。病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）0.009023.920.008.33811.1120.5014.3011.11722.2221.1011.7914.299023.302.5920.00455.569.0062.3722.227.516.6723.053.6425.00633.3316.6030.6027.279022.207.1928.57544.4416.2032.2733.33811.1123.352.3837.50544.4412.6047.3242.865.538.8920.4014.7250.003.561.118.8063.2155.56455.5613.3044.4057.14544.449.3061.1266.67366.678.9062.7971.43366.677.3069.4975.00277.784.3082.02100.0001000.00100.00表2 B区定点单丛条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析图4 B区发病率与产量损失的关系图5 B区发病率与有效穗数的关系B区，发病样本有效穗数平均为5.3个，比对照的平均有效穗数减少3.7个，减穗率达到41.11%。所有发病样本的平均株发病率为41.46%，产量损失率为39.57%。发病率与减产率比值为1：0.95。通过对该区的样本株发病率与减产率、减穗率间进行相关性分析，结果表明，发病率（x）与减产率（y）回归方程为：y=0.9912x-1.446，r=0.8451*；发病率（x）与穗数减少（y）之间回归方程为y=0.9482x+2.2316，r=0.8726*；穗数减少（x）与产量损失（y）之间的回归方程为y=1.0278x-3.121，r=0.9531*。回归分析表明，这几个因素之间存在相关性，其中穗数减少和产量损失之间关系最密切，相关达极显著水平。通过A、B两块田的试验发现，对于单丛发病植株而言，有效穗数的减少是造成产量损失的直接原因，减穗率与减产率之间关系密切。通过对小区样本各指标的田间调查和实验室测产结果，在13个供试发病小区中，所有发病小区单位面积产量都低于对照的产量，说明发病直接导致产量下降，而且从测产结果可以看出，大部分小区产量损失随发病株率上升逐渐加重。供试小区最高病株率为7.97%，减产率为7.08%。13个发病小区平均株发病率为4.79%，减产率为3.52%，即发病率每上升1%，相应减产率增加0.73%。图6 B区有效穗数与产量损失的关系通过对小区病株率和减产率的相关性分析，株发病率（x）与减产率（y）之间呈正相关关系，建立的回归方程为：y=0.9765x-1.2647，r=0.8665*。病株率（%）产量（g/m2）减少量（g）减产率（%）千粒重（g）秕谷率（%）0.0819.40.00.0023.8319.091.48818.21.20.1521.6521.442.75811.09.41.1524.0815.062.93799.220.22.4723.8220.183.17812.37.10.8724.0017.143.65782.736.74.4822.4820.744.38769.250.26.1324.3817.174.38815.53.90.4824.0217.475.74782.536.94.5023.0419.896.00811.57.90.9624.4415.616.33782.536.94.5022.1119.176.46770.548.95.9724.1221.277.08761.458.07.0823.2719.227.97762.257.26.9823.5020.15表3 定点小区条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析水稻条纹叶枯病是由介体昆虫灰飞虱传播的病毒病，在水稻秧苗期和分蘖初期最易感染条纹叶枯病毒引起水稻发病，植株一旦发病很难恢复，因此，为害损失极大。在本试验中，初步明确了田间株发病率与产量损失之间的关系，即随着株发病率的上升，产量损失率增大。水稻单丛发病率与产量损失的试验表明，水稻有效穗数减少是导致减产的主要原因，水稻株发病率与产量减少率基本相近。但从小区发病率与产量损失率的试验中可以看出，整个小区内的产量损失率略低于其株发病率，这可能与边际植株的补偿有关。该项试验研究结果，为水稻条纹叶枯病发生为害程度分级，制定水稻条纹叶枯病防治指标提供了科学依据。图7 C区发病率与产量损失的关系

水稻条纹叶枯病（RSV）是由灰飞虱（Laodelphax cstriatellus Fallen）传播的一种病毒病，严重发生时可造成大面积减产，甚至绝收。近几年来浙江省北部水稻条纹叶枯病发生面积逐年扩大，发病程度明显加重。目前，该病已成为嘉兴市水稻生产上的主要病害，并成为制约水稻生产的关键因素之一。水稻条纹叶枯病的发生程度与介体灰飞虱的虫量高低密切相关，而秧田期是条纹叶枯病感染的敏感期，秧田期灰飞虱虫量的高低与发病关系密切。为探明水稻播种迟早对灰飞虱发生量、条纹叶枯病发生流行的影响，我们于2006年、2007年对水稻不同播种时期灰飞虱发生量与条纹叶枯病发病程度的关系进行了研究，分析了水稻播种期、灰飞虱虫量及条纹叶枯病病情之间的相关性，现将结果报道如下：试验在嘉兴市农业科学院试验园区内进行。试验田前茬为水稻，土壤为青紫泥土，水肥条件良好。供试水稻品种为嘉991，种子由嘉兴市农业科学院提供。1.2.1 种子处理 每期播种前均对种子进行药剂处理，浸种时将供试水稻种子用2000倍液的402浸72h，然后将其从药液中取出，用流水冲洗以除去多余的药液，再置于37℃的恒温箱中催芽2天后播种。1.2.2 试验设计 2006年分3期播种，每隔15天播种一期，播种日期分别为：5月10日、5月25日和6月9日；2007年分4期播种，每隔10天播种一期，播种日期分别为5月10日、5月20日、5月30日和6月9日。每期播种时田间分3个小区，每小区面积3m2。各期秧田水肥等田间管理相同，除最后一期在25天秧龄移栽，其他各期均在30天秧龄时移栽。1.2.3 秧田灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率调查 各期播种后，从水稻出苗开始定期调查秧田灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病情况。每期每小区调查3个点，每点0.11m2，记录每个样点上的灰飞虱虫量。将移栽前最后一次调查的灰飞虱虫量作为秧田虫量结果，并换算成每667m2虫量；同时统计每期调查的秧苗总数和发病株数，计算发病率。分析比较各播期处理区灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率的关系。1.2.4 大田发病率调查 各播期的秧苗在移栽后，每周调查一次田间条纹叶枯病发病率，直至不再出现病株为止。每次调查分别记录调查株数和发病株数，统计发病率，并将病情稳定时的发病率作为大田发病率，比较各期发病率差异。2006年调查结果表明，播期不同，田间灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率存在很大差异。5月10日、5月25日和6月9日3个时期播种的水稻秧田灰飞虱虫量分别为114.4万头/667m2、56.6万头/667m2和6.82万头/667m2；秧田发病率分别为3.13%、1.2%和0.23%，大田发病率分别为8.63%、4.19%和2.80%。比较各播种期处理区田间虫量和发病率关系，随着播种时间的推迟，灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率均明显下降。水稻播种期从5月10日推迟至5月25日，秧田灰飞虱每667m2虫量减少为57.8万头，秧田和大田发病率也分别下降了1.93%和4.44%；播期从5月25日推迟至6月9日，田间虫量继续减少，每667m2虫量减少为49.78万头，秧田和大田发病率下降为0.23%和2.80%，见表1。播种期（月/日）秧田发病率调查总株数病株数发病率（%）田间虫量（万头/亩）大田发病率调查总株数病株数发病率（%）5/1053761683.13114.401054918.635/254992601.2056.601121474.196/95265120.236.821072302.80表1 水稻不同播种期灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率调查 （浙江嘉兴，2006）从图1看出，秧田灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率存在密切关系，随着播种时间的推迟，田间虫量表现出近乎直线的下降趋势，随着虫量的减少，秧田发病率和大田发病率都随之下降。图1 水稻不同播种期田间灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率关系通过对各播期秧田灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率之间的相关回归分析，二者呈密切的相关性，秧田条纹叶枯病发病率（y）与灰飞虱虫量（x）的关系式为y=0.027x-0.088（r=0.989**）；大田发病率（y）与灰飞虱虫量（x）的关系式为y=0.055x+1.959，r=0.969**。2007年的试验，田间灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率明显高于2006年。5月10日播种的处理区，秧田虫量高达253.6万头/667m2，秧田发病率达到6.1%，后期大田发病率高达21.47%；5月20日播种的，虫量稍有降低，为203.3万头/667m2，但仍维持很高水平，秧田和大田发病率分别为4.02%和17.66%，发病严重；5月30日播种的，田间虫量下降，为66.6万头/667m2，秧田和大田发病率也随之下降，发病率分别为0.97%和6.33%；6月9日播种，秧田虫量很低，为7.72万头/667m2，条纹叶枯病发病率也低，秧田和大田发病率分别为0.21%和2.12%，见表2。播期（月/日）秧田发病率调查总株数病株数发病率（%）田间虫量（万头/亩）大田发病率调查总株数病株数发病率（%）5/1054633336.10253.60133228621.475/2053732164.02203.30128522717.665/305235510.9766.601311836.336/95655120.217.721367292.12表2 水稻不同播种期灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率调查 （浙江嘉兴，2007）通过对秧田灰飞虱虫量与秧田发病率、大田发病率作图比较分析，播种期从5月10日推迟至5月20日，秧田灰飞虱虫量开始下降，减为50.3万头/667m2，减少19.83%；而播期从5月20日推迟至5月30日，每667m2虫量下降为136.7万头，减少67.24%；从5月20日推迟至6月9日播种，虫量继续大幅下降，减少为7.72万头/667m2。在播期逐渐推迟的过程中，随着虫量的大幅减少，条纹叶枯病发病率也表现出了明显的下降趋势，见图2。图2 水稻不同播种期田间灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率比较通过对2007年调查的灰飞虱虫量与秧田和大田发病率的相关性分析，两者呈密切的相关性，秧田发病率（y）与灰飞虱虫量（x）之间关系式为y=0.023x-0.294，r=0.987**；大田发病率（y）与灰飞虱虫量（x）关系式为y=0.080x+1.314，r=0.999**。综合分析2006年、2007年试验结果可以看出，5月上中旬播种，秧田期灰飞虱虫量保持在一个很高的水平，导致秧田和大田条纹叶枯病发生相当严重；而在5月下旬以后播种的，则田间虫量明显减少，随之条纹叶枯病发生也明显减轻。两年试验结果表明，水稻播种期对秧田灰飞虱虫量、条纹叶枯病发病率有明显影响。5月上中旬播种，田间灰飞虱虫量大，导致秧田和大田条纹叶枯病发病严重。水稻播期推迟至5月下旬至6月上旬播种，秧田灰飞虱数量明显减少，条纹叶枯病发病明显减轻。分析其原因，主要是由于播种早的田块，杂草及大、小麦田中的灰飞虱集中迁入水稻秧田，从而导致秧田虫口基数大。适当推迟播期，则避开了灰飞虱迁移和传毒高峰，发病减轻。通过两年试验和大田调查结果，认为在嘉兴地区将水稻播种期适当推迟至5月下旬或6月上旬，使一代灰飞虱成虫传毒高峰与水稻大田秧苗感病期错开，可有效控制条纹叶枯病的发生为害。

近年来，随着城郊型农业的发展，天津市蔬菜尤其是保护地蔬菜得到很大发展，目前保护地蔬菜播种面积已超过2.5万hm2，其中又以黄瓜的栽培最为普遍，已占到保护地栽培面积的80%左右。由于保护地环境复杂多变，使得保护地黄瓜新病害不断发生，成为黄瓜生产的重要障碍，严重影响黄瓜的产量和质量，保护地黄瓜新病害的发生不仅给病害的识别和诊断带来困难，也给我们的防治策略提出新的挑战。该病害主要为害叶片，多从下部叶片向上部叶片发展。最初在叶背形成淡褐色病斑，病斑直径约为3～20mm左右，其中以8～15mm中型斑居多，病斑黄褐色，病斑中部灰白色。多数病斑的扩展受叶脉限制，呈不规则形或多角形，湿度大时病斑正、反两面均可产生稀疏灰褐色霉状物，为病菌的分生孢子梗和分生孢子，发病严重时，病斑连片，甚至引起整株枯死。发病症状易与霜霉病或炭疽病混淆。该病原菌为瓜棒孢菌[Corynespora cassiicola（Berk.&Curt.）Wei.]，属半知菌亚门真菌。湿度是诱发黄瓜褐斑病的主要因素，相对湿度达90%左右，10～35℃温度范围适宜该病侵入并引起发病。植株徒长、通风不良，或多年连作，均有利于发病。发病初期可喷施75%百菌清可湿性粉剂500倍液、50%福美双可湿性粉剂500倍液、25%咪鲜胺乳油800倍液或70%代森锰锌可湿性粉剂500倍液。多发生在大棚黄瓜生育中、后期。主要为害叶片，由下部向上部叶片发展，在叶片上产生2～50mm圆形、椭圆形或者不规则形状的浅黄褐色病斑，病健交界明显，病斑部常出现浅橙色霉状物，后期病斑处变薄容易破裂。严重时，可造成叶片大量枯死，引起化瓜。该病病原为Trichotchecium roseum（Bull.）Link，称粉红聚端孢菌，属半知菌亚门真菌。在25～30℃，湿度85%条件下，有利于发病，通风不良、光照不足时，有利于该病发生。病菌以菌丝体随病残体在土壤中越冬，翌春条件适宜时产生分生孢子，传播到黄瓜叶片上，由伤口侵入。发病后，病部又产生大量分生孢子，借风雨或灌溉水传播蔓延，进行再侵染。植株徒长、生长衰弱等原因易造成该病发生。可用64%恶霜·锰锌WP 500～600倍液或80%福·福锌WP 800倍液或25%三唑酮WP 1000～1500倍液或10%苯醚甲环唑水分散颗粒剂1000～1500倍液喷雾防治，发病初期熏百菌清烟雾剂，或喷10%百菌清粉尘剂，每1000平方米1.5kg，5～7天喷1次，连续3次，注意轮换用药。主要为害黄瓜茎蔓，也为害叶片和果实等部位。茎被害时，靠近节部呈现油渍状病斑，椭圆形或棱形，灰白色、干燥时病部干缩纵裂，表面散生大量小黑点。潮湿时病斑扩展较快，植株萎蔫枯死，病部腐烂。叶子上的病斑近圆形，有时呈“V”字形或半圆形，病斑上有许多小黑点。果实多在幼瓜期花器感染，果肉淡褐色软化，呈心腐症。该病病原为Mycosphaerella melonis（Pass.）Chiu et Walker甜瓜球腔菌，属子囊菌亚门真菌。病菌随残体在土壤中或附着在种子上越冬，成为来年的初侵染源，病菌可随风雨和灌溉水传播。病菌通过气孔、水孔或伤口侵入。土壤水分多，田间相对湿度大，都容易引起发病。瓜类重茬地，种植过密，田间通风透气不良，或肥料不足，长势衰弱都会加重病害的发生。发病初期喷洒40%百菌清悬浮剂600～800倍液；70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800～1000倍液、50%多菌灵可湿性粉剂500倍液、40%福星乳剂5000～6000倍液、50%扑海因800～1000倍液。此外，还可以用上述药剂的50～100倍液涂黄瓜茎上的病斑。每隔4～5天喷一次，连续2～3次。黄瓜的茎、叶和果实均可染病。嫩茎染病，初现水浸状暗绿色梭型病斑，凹陷龟裂，湿度大时病斑上长出灰黑色霉层，即病菌的分生孢子梗和分生孢子；叶片染病，初为污绿色近圆形斑点，易穿孔；叶柄、瓜蔓染病，病部中心凹陷，形成疮痂状病斑，表面形成灰黑色霉层；瓜条染病，初发病时有流胶产生，后逐渐形成暗绿色凹陷斑，表面产生灰黑色霉层，形成疮痂状，病斑停止生长，形成畸形瓜。该病病原为Cladosporium cucumerinum Ell.et Arthum 称瓜疮痂枝孢霉，属半知菌亚门真菌。病菌主要以菌丝体随病残体在土壤中越冬，成为翌春初侵染源。病原菌可随种子进行远距离传播。病菌主要从叶片、果实、茎蔓的表皮直接侵入，低温高湿是该病害流行的重要条件。50%多菌灵可湿性粉剂500倍液浸种，或用0.3%的50%多菌灵可湿性粉剂拌种。发病初期喷施50%多菌灵可湿性粉剂800倍液；75%百菌清可湿性粉剂600倍液；12%腈菌唑EC 3000倍液。

RNA介导的病毒抗性主要是基于转录后基因沉默（Post-transcriptional gene silencing，PTGS）作用，在真菌、植物和动物中有PTGS相关的基因存在，这些基因沉默现象可统称为RNA干扰现象（RNA interference，RNAi）。许多证据表明，RNA沉默是由双链RNA（dsRNA）所引发的，且需要细胞内的多种酶参与。基于dsRNA在RNA沉默中的诱导作用，构建能转录后形成dsRNA的载体，转化植物后可有效诱发基因沉默。苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）是苹果、梨和多种核果类果树上发生普遍的一种病毒，可降低树势和影响果实品质。本研究根据GeneBank上已登陆的ACLSV序列设计合成了一对引物，根据载体pDS1301的限制性内切酶图谱，在引物的两端分别引入了两个不同的限制性内切酶识别位点。以总RNA或dsRNA为模板，通过RT-PCR扩增获得来源于砂梨的2个ACLSV分离物的大小为358bp的片段，该片段位于ACLSV cp基因高度变异区。将扩增片段克隆到载体pMD18-T，筛选阳性克隆后提取质粒，经Kpn I/Bgl II和Spe I/Sac I分别对目标片段及载体pDS1301酶切后，在T4连接酶作用下，将克隆片段以正向和反向方式分别插入植物表达载体pDS1301一内含子两端的多克隆位点，构建了可转录后形成dsRNA的载体pDR358-SMJ和pDR358-HH。将重组质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞后，采用叶盘共培养的方法转化5～6叶期的健康西方烟叶片，经潮霉素抗性筛选获得转基因西方烟植株。从获得的转基因西方烟植株提取总DNA，根据载体pDS1301多克隆位点两侧的序列合成特异引物，采用 PCR方法对这些植株进行了鉴定，已得到了转R358-SMJ的西方烟49株、转R358-HH的西方烟12株（图1）。图1 部分转基因西方烟的PCR鉴定

朱槿（Hibiscus rosa-sinensis Linn.）又称扶桑、火红花、假牡丹和大红花等，属锦葵科黄槿属常绿灌木，原产于我国云南、广东及南美，也是马来西亚国花和我国南宁市市花。该植物在华南地区几乎可终年开花，是重要的园林花卉植物。但近期广东部分地区的朱槿植株表现曲叶或黄化曲叶症状，该症状与烟粉虱传双生病毒侵染植物引起的症状十分相似。为了明确其病因，作者对其开展了分子检测与鉴定。对广东各地朱槿进行调查，包括朱槿被为害情况、症状表现、介体烟粉虱发生情况等。在各病区随机采集表现为曲叶或黄化曲叶症状的朱槿病样5～10个，带回室内用于检测。用NaOH法提取病样总DNA[1]，并做适当改进，即：取待检病叶片100mg，在灭菌的研钵中加液氮速冻研磨成粉末，解冻前加入1ml 0.5N NaOH提取液，并在提取液使用前加入巯基乙醇（0.5%）；8000g×离心5min，上清液用0.1 mol/L Tris缓冲液（pH值7.0）稀释100倍，用作PCR模板。应用烟粉虱传双生病毒通用简并引物AV494 [2]和DeP3（也即CoPL[3]）对上述采集于各地的朱槿曲叶病样进行PCR检测。PCR扩增结束后，取10μl反应产物进行电泳，以检测PCR扩增结果。调查结果表明，目前仅在广州和佛山发生朱槿曲叶病，其他地方暂时还未发现该病害。病株典型症状为植株明显矮化，全株叶片向上卷曲、叶脉肿大明显、有耳突、叶质脆硬，随着病情的发展，病叶缘开始褪绿黄化，最终叶片大部分甚至整片叶黄化（图1）。植株感病后不再开花，或即使开花，花朵不正常。人工修剪后，病株难以长出新叶，或虽长出新叶，叶数量少、叶小且严重卷曲。自然界朱槿曲叶病扩散速度较快，短时间内会使较大范围内朱槿很快都被传染感病，完全失去园林和绿化价值。另外，朱槿上烟粉虱发生普遍。Figure 1 Symptoms of Hibiscus rosa-sinensis leaf curl disease in Guangdong对广东各地朱槿曲叶病样进行PCR检测，结果显示：从这些病样本中均能扩增出1条570bp特异片段，而健康的朱槿对照未扩增出任何条带，图2是其中1次的检测结果。这些检测结果说明，朱槿曲叶病样中存在烟粉虱传双生病毒。Figure 2 The result of the PCR with AV494 and DeP3对分离物G6 PCR扩增的特异片段进行克隆及序列测定，结果表明，该片段长为570bp；BLAST结果显示，与该片段有较高同源率的均为双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）病毒，与木尔坦棉花曲叶病毒（Cotton leaf curl Multan virus，CLCuMV）各分离物的同源率均大于95%，其中与CLCuMV分离物Okra（Genbank登陆号：AJ002459）序列同源率最高，为97%。刚刚完成的广州朱槿曲叶病毒分离物G6全基因组克隆结果显示，该病毒分离物与CLCuMV分离物62的序列同源率高达96.1%（另文发表），说明G6应该是CLCuMV的一个分离物。朱槿属多年生灌木，由于绿化和观赏需要，在广东省每年都要对其修剪1至多次。目前，在广州、佛山等地均有朱槿曲叶病发生。朱槿感病后，全株叶片即会卷曲，植株生长衰退；人工修剪后，病株难以长出新叶，或虽然长出新叶，叶数量少、叶小且严重卷曲，完全失去绿化价值。因此，该病害对市政园林绿化影响很大。应用先前建立的烟粉虱传双生病毒PCR检测技术[4～5]，从广东各地采集的朱槿曲叶病样中均能检测到该类病毒；而新近完成的朱槿曲叶病毒G6分离物基因组序列分析结果表明，其是CLCuMV一个分离物。因此，本研究初步表明，朱槿曲叶病可能是由CLCuMV侵染引起的，但还需要做更进一步深入研究加以验证。CLCuMV最先发现于巴基斯坦为害棉花，由烟粉虱传播，已给该国棉花生产造成了巨大的经济损失。该病毒也是我国的一个外检对象，但目前仅在广东朱槿上发现该病毒，应引起我们的重视。