盾壳霉（Coniothyrium minitans）是核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）的重要寄生真菌，在世界范围内广泛存在，是菌核病的一种重要生防菌。本研究自盾壳霉ZS-1菌株的T-DNA标记插入突变体库中筛选到一株产孢缺陷型突变体ZS-1T16229，以之为材料进行研究。突变体ZS-1T16229与出发菌株ZS-1相比，偏向于培养基质中生长，不产孢，或产生少量的分生孢子（3.4×102个孢子/cm2），在与核盘菌对峙培养时，于两菌落融合处，突变体产生大量的分生孢子。突变体ZS-1T16229的生物产量大幅下降，在PDA培养基上培养6天、9天和12天，其生物学产量分别为8.2mg、24.2mg和58.7mg，而野生菌株ZS-1的生物学产量分别为17.4mg、39.3mg和78.8mg。突变体ZS-1T6229同时丧失了产生抗细菌物质的能力。另外，突变体ZS-1T6229的寄生致腐菌核的能力有显著的下降，用突变体的菌丝片段处理核盘菌的菌核，在沙粒上于20℃保湿培养30天，菌核腐烂指数为22%，而用野生菌株ZS-1进行相同处理，菌核腐烂指数为86%。Southern杂交证实T-DNA标记在突变体ZS-1T16229中为单拷贝插入；以ZS-1T16229为材料，采用TAIL-PCR和RT-PCR技术对T-DNA标记插入位点的基因组DNA进行了克隆，获得了大小为1527bp的DNA片段；对该基因组DNA片段进行了序列分析，并利用GenScan软件进行了阅读框（ORF）预测，结果表明该DNA片段含有一个完整的阅读框：编码508aa。对推定蛋白的氨基酸序列进行功能预测，发现该序列中含有一个保守区域，即Pex2-Pex12结构域，与其他真菌的过氧化物酶体蛋白PEX2具有极高的同源性，如与烟曲霉（Aspergillus fumigatus）的PEX2相同部位等同的氨基酸为54%，类似的氨基酸达68%。故命名该基因为CMPEX2。通过RT-PCR结果表明CMPEX2基因在突变体ZS-1T16229基因组中不表达，在出发菌株ZS-1的基因组中表达。构建了CMPEX2基因敲除载体，利用农杆菌介导转化的方法，获得了3个CMPEX2基因敲除转化子，通过PCR证实这3个转化子确实为CMPEX2基因敲除转化子。这3个转化子的表型与突变体ZS-1T16229相同。初步认为CMPEX2基因与盾壳霉产孢相关，起正调控作用。

水稻条纹叶枯病（Rice stripe virus，RSV）是一种以介体昆虫灰飞虱传播的病毒病。该病在我国最早发生于1964年。近年来由于耕作制度、气候条件、水稻品种等的变化，导致该病再次大范围流行，给水稻生产造成很大的损失。浙江省自2004年在湖州的部分晚粳稻上严重发生以来，其他地区相继发病，病情发展很快。浙江嘉兴市自2002年开始水稻条纹叶枯病零星发生，发病面积不断扩大，2004年发病面积0.33万hm2，2005年70%的乡镇发病，全市合计发病面积达1.26万hm2，占水稻种植面积的10%左右，2006年发病面积继续扩大，全市每个乡镇均有发病，发病面积达1.49万hm2，对水稻造成较大损失。目前水稻条纹叶枯病已成为浙江北部稻区影响水稻高产的主要病害之一。为此，我们从2005年起对水稻条纹叶枯病发病与产量损失的关系开展了研究，现将结果报道如下。选用目前浙江湖州、嘉兴等地种植面积较大的晚粳品种嘉991为供试品种，种子由嘉兴市农业科学院提供，试验在嘉兴市农业科学院试验田中进行。1.2.1 试验小区设置 选定3块播栽期一致、生长均匀的田块作为试验区，其中2块田作为单丛发病率测产，分别标记为A、B区；另1块田作为小区发病率测产，标记为C区。1.2.2 发病率调查 从水稻插秧后开始定期调查试验区的田间条纹叶枯病自然发病情况，直至病情稳定。病情稳定后在田间选定发病的单丛植株和小区。定点单丛试验区每个田块分别选500丛发病植株作为供试样本。调查每丛样本的病株数与总株数，计算其株发病率，对株发病率相同的样本，各测定指标计算平均值。然后比较不同株发病率下各个指标的变化趋势。并在选取发病样本的同时，每块田中分别选取20丛未发病的健康植株作为各自对照。小区发病率测产区在选定的田块上根据田间发病情况随机选取面积2～4m2的小区15个。其中13个为发病小区。统计每个发病小区内的病株数和总株数，计算每个小区发病株率；选定2个没有发病植株的小区作为对照区。1.2.3 水稻产量和经济性状考查 水稻成熟后，将选定的定点单丛和各小区样本分别收获，在实验室进行产量、秕谷率和千粒重等指标测定，定点单丛样本还进行有效穗数统计。小区样本产量统一折合成每平方米的产量，分析发病率与产量之间的关系。实验室测产结果：与对照相比，各发病样本有效穗数明显减少，且随着发病率的升高，穗数减少的比例也呈上升趋势，产量与有效穗数表现出相同的变化趋势。A、B两区的试验结果表明，单丛植株的株病率与减产率相当。其中A区的平均病株率与产量损失率之比为1：1.13，B区发病率与减产率比值为1：0.95，2区平均比值为1：1.04，株发病率与减产率接近1：1。病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）0.0010.20.0031.470.008.33101.9629.107.5312.50821.5731.300.5420.00460.7819.9036.7722.22641.1820.0036.4527.27911.7628.708.8028.575.546.0819.9036.7733.33641.1819.3338.5737.504.555.8811.7062.82表1 A区定点单丛条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）38.46731.3729.107.5340.00641.1820.8033.9141.67641.1817.8043.4442.86460.7817.0045.9844.444.555.8813.6056.7850.00370.599.4569.9757.14370.5911.6063.1483.33190.201.9093.96续表1图1 A区发病率与有效穗数的关系图2 A区有效穗数和产量损失的关系在A区，全部发病样本的平均穗数为5.4个，对照有效穗数为10.2个。与对照相比，病丛有效穗数平均减少4.8个，减少率为47.30%。该区全部发病样本平均病株率为36.73%，产量损失率为41.64%。水稻条纹叶枯病发病率与减产率关系分析表明，平均株发病率每上升1%，产量损失就会增加1.13%。图3 A区发病率与产量损失的关系通过对水稻株发病率、减产率和有效穗数减少率之间的相关性分析，建立发病率（x）与有效穗数减少率（y）的回归方程为：y=1.0618x+6.9534，r=0.8446**；有效穗数减少率（x）与减产率（y）的回归方程为：y=1.0326x-7.8186，r=0.9322**；发病率（x）与减产率（y）的回归方程为y=1.1699x-3.1764，r=0.8400**。相关回归分析表明，有效穗数的减少与产量损失之间的关系最显著，呈正相关，相关系数r=0.9322**，说明引起产量损失的直接原因是有效穗数的减少。病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）0.009023.920.008.33811.1120.5014.3011.11722.2221.1011.7914.299023.302.5920.00455.569.0062.3722.227.516.6723.053.6425.00633.3316.6030.6027.279022.207.1928.57544.4416.2032.2733.33811.1123.352.3837.50544.4412.6047.3242.865.538.8920.4014.7250.003.561.118.8063.2155.56455.5613.3044.4057.14544.449.3061.1266.67366.678.9062.7971.43366.677.3069.4975.00277.784.3082.02100.0001000.00100.00表2 B区定点单丛条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析图4 B区发病率与产量损失的关系图5 B区发病率与有效穗数的关系B区，发病样本有效穗数平均为5.3个，比对照的平均有效穗数减少3.7个，减穗率达到41.11%。所有发病样本的平均株发病率为41.46%，产量损失率为39.57%。发病率与减产率比值为1：0.95。通过对该区的样本株发病率与减产率、减穗率间进行相关性分析，结果表明，发病率（x）与减产率（y）回归方程为：y=0.9912x-1.446，r=0.8451*；发病率（x）与穗数减少（y）之间回归方程为y=0.9482x+2.2316，r=0.8726*；穗数减少（x）与产量损失（y）之间的回归方程为y=1.0278x-3.121，r=0.9531*。回归分析表明，这几个因素之间存在相关性，其中穗数减少和产量损失之间关系最密切，相关达极显著水平。通过A、B两块田的试验发现，对于单丛发病植株而言，有效穗数的减少是造成产量损失的直接原因，减穗率与减产率之间关系密切。通过对小区样本各指标的田间调查和实验室测产结果，在13个供试发病小区中，所有发病小区单位面积产量都低于对照的产量，说明发病直接导致产量下降，而且从测产结果可以看出，大部分小区产量损失随发病株率上升逐渐加重。供试小区最高病株率为7.97%，减产率为7.08%。13个发病小区平均株发病率为4.79%，减产率为3.52%，即发病率每上升1%，相应减产率增加0.73%。图6 B区有效穗数与产量损失的关系通过对小区病株率和减产率的相关性分析，株发病率（x）与减产率（y）之间呈正相关关系，建立的回归方程为：y=0.9765x-1.2647，r=0.8665*。病株率（%）产量（g/m2）减少量（g）减产率（%）千粒重（g）秕谷率（%）0.0819.40.00.0023.8319.091.48818.21.20.1521.6521.442.75811.09.41.1524.0815.062.93799.220.22.4723.8220.183.17812.37.10.8724.0017.143.65782.736.74.4822.4820.744.38769.250.26.1324.3817.174.38815.53.90.4824.0217.475.74782.536.94.5023.0419.896.00811.57.90.9624.4415.616.33782.536.94.5022.1119.176.46770.548.95.9724.1221.277.08761.458.07.0823.2719.227.97762.257.26.9823.5020.15表3 定点小区条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析水稻条纹叶枯病是由介体昆虫灰飞虱传播的病毒病，在水稻秧苗期和分蘖初期最易感染条纹叶枯病毒引起水稻发病，植株一旦发病很难恢复，因此，为害损失极大。在本试验中，初步明确了田间株发病率与产量损失之间的关系，即随着株发病率的上升，产量损失率增大。水稻单丛发病率与产量损失的试验表明，水稻有效穗数减少是导致减产的主要原因，水稻株发病率与产量减少率基本相近。但从小区发病率与产量损失率的试验中可以看出，整个小区内的产量损失率略低于其株发病率，这可能与边际植株的补偿有关。该项试验研究结果，为水稻条纹叶枯病发生为害程度分级，制定水稻条纹叶枯病防治指标提供了科学依据。图7 C区发病率与产量损失的关系

水稻条纹叶枯病（RSV）是由灰飞虱（Laodelphax cstriatellus Fallen）传播的一种病毒病，严重发生时可造成大面积减产，甚至绝收。近几年来浙江省北部水稻条纹叶枯病发生面积逐年扩大，发病程度明显加重。目前，该病已成为嘉兴市水稻生产上的主要病害，并成为制约水稻生产的关键因素之一。水稻条纹叶枯病的发生程度与介体灰飞虱的虫量高低密切相关，而秧田期是条纹叶枯病感染的敏感期，秧田期灰飞虱虫量的高低与发病关系密切。为探明水稻播种迟早对灰飞虱发生量、条纹叶枯病发生流行的影响，我们于2006年、2007年对水稻不同播种时期灰飞虱发生量与条纹叶枯病发病程度的关系进行了研究，分析了水稻播种期、灰飞虱虫量及条纹叶枯病病情之间的相关性，现将结果报道如下：试验在嘉兴市农业科学院试验园区内进行。试验田前茬为水稻，土壤为青紫泥土，水肥条件良好。供试水稻品种为嘉991，种子由嘉兴市农业科学院提供。1.2.1 种子处理 每期播种前均对种子进行药剂处理，浸种时将供试水稻种子用2000倍液的402浸72h，然后将其从药液中取出，用流水冲洗以除去多余的药液，再置于37℃的恒温箱中催芽2天后播种。1.2.2 试验设计 2006年分3期播种，每隔15天播种一期，播种日期分别为：5月10日、5月25日和6月9日；2007年分4期播种，每隔10天播种一期，播种日期分别为5月10日、5月20日、5月30日和6月9日。每期播种时田间分3个小区，每小区面积3m2。各期秧田水肥等田间管理相同，除最后一期在25天秧龄移栽，其他各期均在30天秧龄时移栽。1.2.3 秧田灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率调查 各期播种后，从水稻出苗开始定期调查秧田灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病情况。每期每小区调查3个点，每点0.11m2，记录每个样点上的灰飞虱虫量。将移栽前最后一次调查的灰飞虱虫量作为秧田虫量结果，并换算成每667m2虫量；同时统计每期调查的秧苗总数和发病株数，计算发病率。分析比较各播期处理区灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率的关系。1.2.4 大田发病率调查 各播期的秧苗在移栽后，每周调查一次田间条纹叶枯病发病率，直至不再出现病株为止。每次调查分别记录调查株数和发病株数，统计发病率，并将病情稳定时的发病率作为大田发病率，比较各期发病率差异。2006年调查结果表明，播期不同，田间灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率存在很大差异。5月10日、5月25日和6月9日3个时期播种的水稻秧田灰飞虱虫量分别为114.4万头/667m2、56.6万头/667m2和6.82万头/667m2；秧田发病率分别为3.13%、1.2%和0.23%，大田发病率分别为8.63%、4.19%和2.80%。比较各播种期处理区田间虫量和发病率关系，随着播种时间的推迟，灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率均明显下降。水稻播种期从5月10日推迟至5月25日，秧田灰飞虱每667m2虫量减少为57.8万头，秧田和大田发病率也分别下降了1.93%和4.44%；播期从5月25日推迟至6月9日，田间虫量继续减少，每667m2虫量减少为49.78万头，秧田和大田发病率下降为0.23%和2.80%，见表1。播种期（月/日）秧田发病率调查总株数病株数发病率（%）田间虫量（万头/亩）大田发病率调查总株数病株数发病率（%）5/1053761683.13114.401054918.635/254992601.2056.601121474.196/95265120.236.821072302.80表1 水稻不同播种期灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率调查 （浙江嘉兴，2006）从图1看出，秧田灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率存在密切关系，随着播种时间的推迟，田间虫量表现出近乎直线的下降趋势，随着虫量的减少，秧田发病率和大田发病率都随之下降。图1 水稻不同播种期田间灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率关系通过对各播期秧田灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率之间的相关回归分析，二者呈密切的相关性，秧田条纹叶枯病发病率（y）与灰飞虱虫量（x）的关系式为y=0.027x-0.088（r=0.989**）；大田发病率（y）与灰飞虱虫量（x）的关系式为y=0.055x+1.959，r=0.969**。2007年的试验，田间灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率明显高于2006年。5月10日播种的处理区，秧田虫量高达253.6万头/667m2，秧田发病率达到6.1%，后期大田发病率高达21.47%；5月20日播种的，虫量稍有降低，为203.3万头/667m2，但仍维持很高水平，秧田和大田发病率分别为4.02%和17.66%，发病严重；5月30日播种的，田间虫量下降，为66.6万头/667m2，秧田和大田发病率也随之下降，发病率分别为0.97%和6.33%；6月9日播种，秧田虫量很低，为7.72万头/667m2，条纹叶枯病发病率也低，秧田和大田发病率分别为0.21%和2.12%，见表2。播期（月/日）秧田发病率调查总株数病株数发病率（%）田间虫量（万头/亩）大田发病率调查总株数病株数发病率（%）5/1054633336.10253.60133228621.475/2053732164.02203.30128522717.665/305235510.9766.601311836.336/95655120.217.721367292.12表2 水稻不同播种期灰飞虱虫量与条纹叶枯病发病率调查 （浙江嘉兴，2007）通过对秧田灰飞虱虫量与秧田发病率、大田发病率作图比较分析，播种期从5月10日推迟至5月20日，秧田灰飞虱虫量开始下降，减为50.3万头/667m2，减少19.83%；而播期从5月20日推迟至5月30日，每667m2虫量下降为136.7万头，减少67.24%；从5月20日推迟至6月9日播种，虫量继续大幅下降，减少为7.72万头/667m2。在播期逐渐推迟的过程中，随着虫量的大幅减少，条纹叶枯病发病率也表现出了明显的下降趋势，见图2。图2 水稻不同播种期田间灰飞虱虫量和条纹叶枯病发病率比较通过对2007年调查的灰飞虱虫量与秧田和大田发病率的相关性分析，两者呈密切的相关性，秧田发病率（y）与灰飞虱虫量（x）之间关系式为y=0.023x-0.294，r=0.987**；大田发病率（y）与灰飞虱虫量（x）关系式为y=0.080x+1.314，r=0.999**。综合分析2006年、2007年试验结果可以看出，5月上中旬播种，秧田期灰飞虱虫量保持在一个很高的水平，导致秧田和大田条纹叶枯病发生相当严重；而在5月下旬以后播种的，则田间虫量明显减少，随之条纹叶枯病发生也明显减轻。两年试验结果表明，水稻播种期对秧田灰飞虱虫量、条纹叶枯病发病率有明显影响。5月上中旬播种，田间灰飞虱虫量大，导致秧田和大田条纹叶枯病发病严重。水稻播期推迟至5月下旬至6月上旬播种，秧田灰飞虱数量明显减少，条纹叶枯病发病明显减轻。分析其原因，主要是由于播种早的田块，杂草及大、小麦田中的灰飞虱集中迁入水稻秧田，从而导致秧田虫口基数大。适当推迟播期，则避开了灰飞虱迁移和传毒高峰，发病减轻。通过两年试验和大田调查结果，认为在嘉兴地区将水稻播种期适当推迟至5月下旬或6月上旬，使一代灰飞虱成虫传毒高峰与水稻大田秧苗感病期错开，可有效控制条纹叶枯病的发生为害。

番茄灰霉病（Botrytis cinerea Pers）是保护地番茄的重要病害之一，主要为害花和果实，尤以青果受害最重，大幅度降低番茄的产量和品质。近几年来，番茄灰霉病为害越来越严重，轻者减产10%～20%，重者达30%以上[1]，而病原物极易对化学农药产生抗药性，因此化学防治用药量大、防效差、污染重，严重威胁着人们的身体健康。植物源农药可在环境中迅速分解，在植物体内也几乎没有残留，是符合人们对绿色农产品要求的。瑞香狼毒（Stellera chamejasme L.），又名断肠草、红狼毒，为瑞香科，狼毒属植物，是当前中国草地上危害较严重的毒草之一，但是瑞香狼毒又具有可利用的一面，其根是传统中药狼毒的基质，有逐水、祛痰、破积、杀虫之功效[2]。目前国内外对其化学成分、杀虫活性、抗癌活性都有了深入的研究和报道。有文献表明瑞香狼毒对于植物病原菌也有较好的抑制作用[3]。本试验就瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病抑制作用进行了室内测定，旨在为开发出一种经济，安全，有效的新型杀菌剂提供理论依据。1.1.1 供试样品 试验所用瑞香狼毒采自山西怀仁金沙滩，将采集的植物材料洗净后充分阴干，放入恒温箱内（40～45℃）烘干，粉碎后过60目筛备用。1.1.2 供试菌种 番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers）均由山西农业大学农学院植物病理实验室提供。1.2.1 瑞香狼毒提取液的制备 称取瑞香狼毒根部粉末50g，装入500ml广口瓶内，加入干粉5倍量的有机溶剂甲醇浸泡3～5天后，过滤并浓缩至稠膏状。取适量瑞香狼毒甲醇提取物，加入少量甲醇溶解并配成60mg/ml溶液，备用。1.2.2 抑菌活性测定 采用生长速率测定法[4～6]测定瑞香狼毒提取液对黄瓜枯萎病菌菌丝生长抑制作用，具体操作如下：取60mg/ml瑞香狼毒提取物溶液配制成60mg/ml，30mg/ml，15mg/ml，7.5mg/ml，3.75mg/ml的溶液，制作平板时，在一个培养皿中加入2ml，再加入13ml培养基，摇匀，凝固后即为全药平板培养基。每一处理做5个重复并标记；另取3个培养皿分别加入2ml蒸馏水、13ml PDA培养基作为对照。将供试菌种用6mm打孔器打出菌饼，用接种针小心地将供试菌饼置于平板培养基上（菌丝面朝下，每皿一块，放于中央），置光照培养箱中培养（上述一系列操作必须在严格无菌条件下进行）。48h后，用十字交叉法测每个菌落的直径（每一天测一次，连测两次），以下式求菌丝生长抑制率：瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌作用结果如表1和表2。浓度（mg/ml）72h96h菌落直径（cm）ColonyRadius抑制率（%）Inhabitingrate菌落直径（cm）ColonyRadius抑制率（%）Inhabitingrate81.8078.181.9579.4542.0374.002.2175.4923.0256.003.4756.3214.0337.644.5739.570.55.3713.276.3812.02CK6.107.17表1 不同浓度瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhabiting of the different concentration of the extracts of Stellera chamaejasme against Botrytis cinerea Pers时间Time毒力方程RegressiveequationEC50?相关系数r95%置信限Confidencelevel72hY=4.5546+1.5754x1.920.97251.61～2.6896hY=4.5519+1.6433x1.870.96741.58～2.22表2 瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌的毒力Table 2 Virulence of the extracts of Stellera chamaejasme against Botrytis cinerea Pers从表1可以看出，瑞香狼毒甲醇提取液对番茄灰霉病菌菌丝生长有一定的抑制作用，并且提取液浓度越大，抑菌作用越明显，即在5个不同浓度稀释液中，8mg/ml的效果最好，接近80%。从表1的数据可以看出：8mg/ml、4mg/ml、2mg/ml的提取液对番茄灰霉病菌的抑菌率都在50%以上，1mg/ml、0.5mg/ml的提取液对番茄灰霉病菌的抑菌率在50%以下，这说明瑞香狼毒中含有的一些活性物质能够很好地抑制黄瓜枯萎病菌菌丝的生长。从表2可以看出瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病菌的毒力EC50在72h、96h分别为1.92mg/ml、1.87mg/ml。本试验表明，瑞香狼毒甲醇提取物对番茄灰霉病有一定程度的抑制作用，而且瑞香狼毒在我国资源丰富，有望开发成一种生物农药，具有良好的前景。虽然本试验做出一定的结果，但是也有一些不足之处：（1）试验中只是做了室内测定，没有做室外试验，在室外是否也有如此好的效果不能确定；（2）试验中只做了生长速率法像其他方法，如孢子萌发法没有做，它对孢子有什么样的效果也不知道；（3）试验只对瑞香狼毒植株进行粗提取并不确定其有效的活性成分为什么物质。以上问题需在以后的实验中着手解决。目前国内青海省天然草地上生长的瑞香狼毒面积达73.3万hm2，密度为每百平方米350株丛，最多可过1998～5000株丛[7]。海北洲海晏县青海湖乡每百平方米有狼毒400～1400株丛，盖度为20%～40%。另据不完全统计，内蒙古泽里木盟阿鲁旗已经形成了以瑞香狼毒为主要植物群落的草场约4万hm2，有瑞香狼毒生长的草场约13.3万hm2以上，占全旗104万hm2草场面积的28%。在内蒙古乌兰察布干草原，狼毒已成为退化草地的景观植物[8]。因此，在山坡或沟谷，劳力充足的地区，春秋季可进行人工采挖，收集瑞香狼毒的根，既可作到清除狼毒，保护草原，又可“化害为利”，获得经济效益和社会效益的双赢。

烟草病毒病有“烟草癌症”之称，一旦发生和蔓延，就难以控制，严重制约烟草的正常生长。目前发生最普遍、危害最严重的是烟草花叶病毒（TMV），其发生范围遍及各烟区，不仅造成烟草产量的损失，而且使烟草品质严重下降，降低烟草的烟叶等级，严重影响烟叶的经济性状。化学药剂所造成的病原物抗性和环保问题，使其应用受到较多限制；由于植物病毒系活体寄生物，侵入寄主细胞后的增殖需借助寄主的代谢，因此至今尚无安全、有效的治疗药剂。而诱导抗性作为对植物病害的诱导应答减少了植物在抗病方面所付出的种种代价，因此是较为经济有效的抗病策略，并在作物可持续病害防治中具有十分广阔的应用前景。本文着重研究寡聚半乳糖醛酸诱导烟草抗烟草花叶病毒的能力，以期为寡聚半乳糖醛酸用于农业生产提供科学依据。1.1.1 供试药剂 寡聚半乳糖醛酸以及壳寡糖，由中国科学院大连化学物理研究所研制。20%病毒A可湿性粉剂（黑龙江省齐齐哈尔四友化工实业有限公司，市购）。1.1.2 供试植物 枯斑三生烟（Nicotiana tobacum L.SamSun NN）。1.1.3 供试毒源 烟草花叶病毒（TMV），本实验室保存于普通烟上。接种病毒汁液为每克含TMV的烟草病叶，加入5倍体积0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），在研钵中研磨后纱布过滤。1.2.1 试验处理 供试药剂寡聚半乳糖醛酸设浓度为50μg/ml喷雾；浓度为75μg/ml喷雾；浓度为100μg/ml喷雾。病毒A稀释700倍喷雾。清水对照。共5个处理。1.2.2 试验实施 试验设在海南试验地中，土壤为红土。试验每个处理15株长势大小一致的6～8叶期的烟草，叶面喷雾施药。24h后汁液摩擦接种TMV病毒。在病毒汁液中加入少量石英砂，用毛笔蘸取汁液摩檫接种。枯斑三生烟苗采用半叶法接种，每株接4片叶。接种后每天观察发病情况。待全面发病后，调查病斑数。1.3.1 试验方法 选取大小一致、6～8叶期的烟草植株，均匀喷洒供试药剂寡聚半乳糖醛酸50μg/ml。处理24～96h不同时间后，进行接毒试验。采用半叶法摩擦接种。接种7天后，统计叶片上的病斑数。试验重复3次计算防效。抑制率（%）=[（对照叶片病斑数-处理叶片病斑数）/对照叶片病斑数]×100%1.4 抗性相关酶的测定1.4.1 超氧化物歧化酶（SOD）活性 取样叶1.4g，10.0ml 含5mmol/L巯基乙醇的硼酸缓冲液（0.05mol/L，pH 8.8），加入0.5g PVP和石英砂在研钵中研磨，在冰水中研磨成浆。10000r/min 4℃离心10min，上清液即为酶液。3ml反应体系中含50mmol/L磷酸缓冲液，13mmol/L甲硫氨酸，75μmol/L氮蓝四唑（NBT），100nM EDTA，4μmol/L核黄素，加入50μl粗酶，在日光下反应，以黑暗终止反应，立即在560nm下比色。以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活单位。以不加酶液的光照管为对照。以磷酸缓冲液调零。1.4.2 过氧化氢酶（CAT）活性 3ml反应体系中含50mmol/L pH 7.0 PBS1.9ml，45mmol/L H2O2（2%）1.0ml和0.1ml酶液。连续记录240nm吸光度的变化。以每分钟变化0.01为一个酶活单位。试验结果表明，壳寡糖、寡聚半乳糖醛酸50μg/ml，75μg/ml，100μg/ml，以及病毒A稀释700倍都对烟草花叶病毒侵染烟草产生枯斑有抑制效果。其中寡聚半乳糖醛酸50μg/ml抑制效果最好，抑制率为52.8%，略高于阳性对照壳寡糖（49.7%）以及病毒A（31.8%）。寡聚半乳糖醛酸75μg/ml以及100μg/ml，抑制率分别为49.7%和37.9%，都高于病毒A稀释700倍。寡聚半乳糖醛酸浓度在50～100μg/ml之间是随浓度的增加，抑制率有所降低。取田间试验诱抗效果最好的寡聚半乳糖醛酸浓度50μg/ml进行温室试验，试图寻找诱抗效果最好的时间点。试验结果表明（3次重复），喷施寡聚半乳糖醛酸96h时，随着时间的延长诱抗效果越明显，枯斑产生的抑制率为62.2%，但是差异不显著，说明96h内寡聚半乳糖醛酸诱导效果基本维持稳定。处理斑点数抑制率（%）寡聚半乳糖醛酸50μg/ml92±40?52.875μg/ml98±47?49.7100μg/ml121±4337.9病毒A稀释700倍133±4031.8壳寡糖50μg/ml98±32?49.7CK195±48—表1 寡聚半乳糖醛酸不同浓度喷施对烟草花叶病毒病的防效（P处理斑点数抑制率（%）寡聚半乳糖醛酸24h89±35?37.648h91±61?36.872h80±35?44.396h54±21?64.4CK143±64—表2 寡聚半乳糖醛酸喷施不同时间对烟草花叶病毒病的防效（P2.3.1 超氧化物歧化酶（SOD）活性变化 寡聚半乳糖醛酸处理烟草植株后SOD的活性变化如图1所示。处理烟草15m～12h的时间内，SOD酶活性升高，均高于对照。其中处理1h内就达到一个峰值。8～12h达到第二个峰值。推测寡聚半乳糖醛酸诱导烟草首先能够产生一个快速的SOD活性升高的反应，然后在8～12h时能诱导另外一个途径使SOD酶活升高。图1 寡聚半乳糖醛酸诱导烟草不同时间后SOD酶活2.3.2 过氧化氢酶（CAT）活性变化 寡聚半乳糖醛酸处理烟草植株后，CAT活性明显高于对照，处理15m～2h即达到峰值。在处理后的148h内，CAT均可保持较高的活性。说明寡聚半乳糖醛酸在2h内可以快速诱导CAT的活性，并且可以在较长时间保持诱导烟草植株CAT的活性。图2 寡聚半乳糖醛酸处理烟草不同时间后CAT活性变化目前，对于寡聚半乳糖醛酸作为植物诱导子的研究比较多，但是对于诱导烟草抗烟草花叶病毒的研究较少，本实验室研究了寡聚半乳糖醛酸诱导烟草抗性的最佳浓度为50μg/ml，96h以内的诱导抗性不依赖于诱导时间的长短。本实验室也检测了诱导时间长达25天的诱抗效果，诱导抗性随时间的延长而先增加后降低，在16天达到最高。植物体在抵抗病原菌侵染的过程中，有些保护反应是在酶催化下完成的。许多研究结果表明，植物在逆境条件下，其膜系统的受损与生物氧自由基有关，超氧化物歧化酶SOD被认为是细胞膜的保护酶。酶活性愈高，消除氧自由基的能力越强。植物的抗逆性也愈强[1]。抗病毒剂VA诱导枯斑三生烟后，叶片中SOD活性增加，推测VA诱导枯斑三生烟对TMV的抗性可能与活性氧代谢有关，即可减少活性氧对植物的毒害作用[2]。另外，其他的能够诱导烟草抗TMV的诱导子如VFB[3]以及落葵提取液4]，均可诱导烟草中SOD酶活性的增加。本文寡聚半乳糖醛酸能够诱导烟草抗病毒，并且也伴随着SOD酶活性的升高，间接说明SOD酶活性的升高与植物抗病毒有关系。过氧化氢酶（CAT）是植物细胞内重要的活性氧清除剂，其生理作用是将H2O2还原为H2O和O2。CAT活性升高或H2O2含量降低意味着活性氧对植物细胞伤害程度的降低。病原菌侵染烟草后，总体上看，抗病品种CAT活性高于感病品种[5]。孔凡明等通过烟草与TMV不同互作体系的研究表明，接种后CAT活性均升高，在非亲和性互作的早期，CAT活性显著高于亲和性互作[6]。因此，我们推测，寡聚半乳糖醛酸诱导烟草植株CAT活性的升高，有利于提高植物抗病毒的能力。但是对于诱导烟草抗性的具体机理还有待于进一步的研究。

Rice stripe virus(RSV)is a kind of virus disease which spread through vector of planthoppers L.striatellus.It is hard to prevent and control once rice is infected with RSV,and suffer a great loss of rice yields.In recent years,the incidence rate of RSV in north Zhejiang province is speeding up because of altering of cropping system and fitness of climate.Such as in Jiaxing city,disaster area reached to 17600 hectare in 2007 and became one of the cities which were heavily infectious with RSV.Therefore,the epidemic pattern of RSV and its control countermeasures had been investigated for several years.An integrated control of RSV was established on the basis of optimizing single control method and extended application for other paddy fields,which efficiently prevent and control incidence and spreading of RSV.The results of investigation and research were summarized as bellows.1.1.1 Continuous enlargement of disaster region and area It can be concluded from research on disaster region of RSV in Jiaxing,Zhejiang province that RSV was only infected in few paddy fields of Haiyan county and Xiouzhou district in 2002,and incidence rate of small towns was just 8.3%;but incidence rate increased quickly,and increased to 65%in 2004 and about thirty-nine towns were invaded by RSV;and till 2006,the rice of all the small towns were infected by RSV and incidence rate increased to 100%.And today,RSV has been spreading to each town in Jiaxing,Zhejiang province.In terms of disaster area,only few places were infected in 2002;but raised greatly in 2004 and reached to 12600 hectare in 2005,which was about 9.94%of late rice field;andreached to 17600 hectare in 2007,which was about 13.9%of total rice area.1.1.2 Peak period of diseases incidence in field It was observed that initial period of RSV incidence was mid June,and about twenty to twenty five days after rice sowing,and had two incidence peaks in single cropping rice:the first peak was in mid July and another was in mid August.The two incidence peaks were resulted from RSV transmitted by the first and second generation of L.striatellus respectively,and the first peak was higher than the second,and disaster incidence became stable after mid August.According to investigation on early rice fields in 2006,the diseased-hill and diseased-tiller rates of first incidence peak reached 18.5%and 3.77%respectively,and became 4.23%and 1.58%at the second incidence peak,which was resulted from different numbers of L.striatellus of two peaks.Because of fitness of temperature and host(such as wheat field and weeds),number of first generation L.striatellus was larger and easily transmitted RSV,which caused higher disaster incidence.However,because of higher temperature,number of second generation L.striatellus was smaller and uneasily transmitted RSV,which resulted lower disaster incidence.1.1.3 Early rice field heavier than late rice field Damage intensity extent of RSV was closely related with the sowing period,earlier sowing usually caused heavier disaster incidence.From investigation of different sowing time in 2006,the average diseased-hill and diseased-tiller rates of rice fields sowing in 15th May was 16.3%and 4.05%respectively,which increased about 65.8%and 59.4%over that in 20th May(9.89%and 2.54%),about 81.59%and 94.8%over that in 29th May(3%and 0.81%),and about 94.9%and 94.81%over that in 6th June(0.83%and 0.21%).According to investigation in 2007,the diseased-tiller rate of rice fields sowing in 16th May,23rd May,30th May and 6th June was 5.18%,7.31%,7.90%and 0.70%respectively.There existed significant difference of disaster incidence of different sowing time.The heavily disease infected rice fields usually concentrated in sowing in mid May,which was higher than that sowing in late May and mid June,and nearly had no infection of RSV in rice fields sowing after mid June.1.1.4 Transplant rice field heavier than direct seeded rice field RSV incidence in transplant rice field was obviously heavier than direct seeded rice field based on general investigation of Jiaxing city,which resulted from rice field was apt to suffering of L.striatellus and spreading RSV because of early sowing time,such as in Xiuzhou distinct,the average diseased-tiller rate of transplant rice fields sowing in mid May was 3.86%,but direct seeded rice field sowing in late May was only 0.71%.From 2005 to 2007,we investigated disease incidence after inoculation of RSV to planthoppers with no control of planthoppers in Xiuzhou distinct,Jiaxing.The result was that there was no viruliferous planthopper,disease incidence was lower,the diseased-tiller rate of early and mid sowing rice fields was 3.1%and 1.2%respectively,and there was no disease incidence in late sowing rice fields in 2005.In 2006,rate of viruliferous planthopper was 2.01%,and the diseased-tiller rate of early,mid and late sowing rice fields was 18.5%,10.1%and 1.16%respectively.In 2007,rate of viruliferous planthopper was 3.68%,and the diseased-tiller rate of early,mid and late sowing rice fields was 21.5%,19.5%and 2.7%respectively.It was concluded from the above investigation that rate of viruliferous planthopper was closely related with disease incidence,and the formeracted an important role to the latter.Based on general investigation on disaster incidence of major rice varieties planted in Jiaxing,Xiuyu5 was the most infective,the average diseased-tiller rate was about 3.78%,about 90%rice fields were infected and the highest diseased-tiller reached 11.2%.The other major rice varieties,such as Jia991,Xiushui110 and Xiushui09 were also heavily infective,and the average diseased-tiller rate was over 1%,but Jiahua1 and Jialeyou2 were slightly infective and the average diseased-tiller rate was about 0.89%and 0.31%respectively.The incidence of RSV was mainly determined the number of viruliferous planthopper,fitness of peak of viruliferous planthopper with rice sowing,climate and different disease-resistance of rice species,which were also the main parameters of disease monitoring.From analysis of RSV rising,spreading and extending in north Zhejiang,we can conclude the below reasons.First was the large number of viruliferous planthopper.In recent years,population quantity of L.striatellus was keeping on rising,which increased the incidence of RSV.One of the reasons was high population density of planthopper during late rice heading period.Based on investigation of Jiaxing Station of Disease and Pest Monitoring in min October from 2005 to 2007,most L.striatellus concentrate and did harm to the rice heading,and there was about four million planthoppers per 667m2 rice fields and the heavily infected rice fields reached over five million per 667m2.Another reason was high population density of spring wheat field.From investigation on numbers of planthoppers in wheat fields before harvesting,there was about 2981000 planthoppers per 667m2 wheat fields and the heavily infected wheat fields reached over 10000000 per 667m2.Many hibernacles were also the reasons of the large number of viruliferous planthopper.L.striatellus can hibernate in many places,such as Gramineae seeds in side of agriculture lands and ditches,and there was about 5454000 planthoppers per 667m2 seed fields according to investigation in mid May,2007.Second was high rate of viruliferous planthopper.It was resulted from bio-assay of RSV in Jiaxing Academy of Agricultural Sciences from 2005 to 2007 that viruliferous planthoppers were widely distributed and rate of viruliferous planthopper was high.Among the detected samples from seven counties in Jiaxing from 2006 to 2007,all of the samples were infected with RSV,but just two of four countries samples in 2005 detected RSV.Rate of viruliferous planthopper in 2005,2006 and 2007 was about 1.47%,3.25%and 2.86%respectively.Based on research of Japanese scientist,RSV can be prevalent when rate of viruliferous planthopper was over 3%,RSV will be much prevalent if rate of viruliferous planthopper reached 12%.Third was weakness of rice disease-resistance.Based on investigation,major late rice varieties in keng rice region of north Zhejiang were absent of disease-resistance,such as Xiushui09,Xiushui110,Jia991 and Xiuyou5,which increased prevalence of RSV.county200520062007Haiyan3.462.272.62Nanhu2.432.400.67Xiuzhou0.02.013.68Jiashan0.02.032.03Pinghu—6.730.99Haining—3.372.22Tongxiang—3.933.79average1.473.252.86Table 1 Bio-assay result of rate of viruliferous hibernating planthoppers from 2005 to 2007 in Jiaxing, ZhejiangFour was fitness of variety and cultivation condition.The expanding areas of wheat,the rising areas of winter-fallow paddyfields and wasteland were apt to hibernating and propagation of L.striatellus.The earlier sowing in some single cropping rice fields,especially rice fields sowing in mid and late May,when rice seedling was in coincidence with peak rate of viruliferous planthopper,easily caused concentrated transmission of RSV and caused heavier disaster incidence.Control of RSV should be based on prevention,take measures of"kill pests and control disease,cut the chain of spread,and adopt integrated control of RSV"with a thought"control wheat field and protect rice field,control prophase and protect anaphase,control this year and protect next year",and integrate"resisting,avoiding,cutting,controlling,supplying,altering"into management countermesures.Resisting:introduction and extension of disease-resistance rice species.Main rice species planted in Jiaxing were disease-sensitive species,such as Xiushui09,Jiahe128,Jiahua1,Jia991 and Xiushui110.In order to better control disaster incidence,we should decrease the sowing areas of disease-sensitive species,and introduce and extend disease-resistance rice species,such as Jialeyou2,which had good resistance to RSV.Avoiding:delaying sowing time and avoiding peak rate of viruliferous planthopper.The top number of the first generation of L.striatellus occurred in mid and late May,which was in accordance with high rate of viruliferous planthopper and caused rice to be heavily infected.Therefore,delaying sowing time and homochronous sowing were advocated on agricultural production.Such as,the sowing areas were diminished to 25700 hectare in Jiaxing before June,which was about 20.3%of the total rice fields in 2007.But sowing during first twenty days in June reached 97600 hectare,which was about 77.1%of the total rice fields in 2007.Cutting:worsening the condition of L.striatellus.One was to cut weeds and clean fields.Weeds in agricultural lands,field ridge,pitch ridge and side of road were the important breeding place of planthoppers.Therefore,we should try our utmost to clear weeds and cut the chain of host.Another was plowing five days before sowing or transplanting.Controlling:carrying out chemical control during proper period.(1)Control of L.striatellus inspring wheat field and seeds.RSV is a kind of virus disease which spread through vector of planthoppers L.striatellus.RSV can be prevented by the control of planthoppers.The planthopper population in spring wheat field and seeds will directly affect RSV incidence of the whole year.Therefore,to diminish the planthopper population and gain the active control,planthoppers of wheat field and seeds should be completely controlled one time in mid April.The method was to spray 100~120ml of 40%durshan per 667m2.(2)Treatment of rice seeds.Seed treatment is a better way to control disease transmission of early rice seedling.The method is to immerse dry rice seeds into 10%imidacloprid or 5%fipronil for 48 hours and then accelerate germination.(3)Strengthen control of planthopper during rice seedling(early time of direct seeded rice field).After rice seed sprouting,adult planthoppers immigrate to rice fields,which meet the peak period of RSV transmission and will increase the rate of disaster incidence.The method was to spray 100~120ml of 40%durshan per 667m2 and repeated spraying after eight days.(4)Control of planthoppers during the growth period.Growing period in paddy field was the key point of control,the top population of planthopper nymph of second generation occured from mid and late June to early July,and these period was the best time to control planthopper.After mid July,L.striatellus of third and forth generation can be controlled along with Nilaparvata lugens and Sogatella furcifera.The biggest population of L.striatellus occurred from late September to mid October,and could be controlled in main spike and decreased the hibernation number of planthoppers and lessened the control pressure of next year.Supplying:In rice fields where rice had been infected with RSV the disease plant was to pull out in time and break the chain of disease,and prevent transmission of RSV again.To improve ability of disease-resistance and lessen rate of disaster incidence,2%ningnamycin can be integrated into control.Altering:For the rice field where the diseased-tiller rate was over 70%,we should plough and alter planting in according to the principle of fitness of planting rice or vegetable and reasonably arrange the shifts of rotation.Adjust planting structure of crop was also adopted to control disaster incidence and increase income of farmer.

苹果是我国种植面积最大的水果，目前全国苹果种植面积达190万hm2以上，产量达2110万t，居世界前列[1]。近几年来，苹果腐烂病在我国尤其是冀北地区，连续多年中偏重到大发生，已成为对苹果生产影响最大的病害，严重制约着我国苹果产业的健康发展。虽然目前针对苹果腐烂病的研究较多，但始终未能找出解决问题的根本措施，致使该病发生势头有增无减，蔓延十分迅速，甚至在新栽果园内都能找到大量病株。因此对该病的流行原因进行系统分析、对防治关键技术进行深入探讨势在必行。苹果腐烂病又称串皮湿、臭皮病、烂皮病，是一种发生范围广、为害程度重、损失极大的苹果树病害，全国各苹果产地均有发生，尤其是近10多年来在全国各地蔓延较迅速。该病轻者造成枝干枯死、结果能力锐减、产量和品质下降、结果年限缩短，重者可导致整树枯死，甚至毁园。据笔者近5年来调查，冀北地区苹果园苹果腐烂病感染率几乎达到100%，成龄果树病株率35%以上，严重的果园达到80%以上，幼树病株率也有10%左右，目前已有20%苹果园因此病而毁园。通过对产量损失率的调查，仅该病就达到20%左右，占苹果树整个病虫损失率的50%以上。苹果腐烂病的病原物是苹果黑腐皮壳，属子囊菌亚门真菌。苹果腐烂病菌是一种寄生性很弱的兼性寄生菌，具杀生寄生性。该病侵入寄主后，先处于潜伏状态，不立即致病，当树体或局部组织衰弱，或果树进入休眠期，生理活动减弱、抗病力降低时，病菌才由侵入部位向外扩展，进入致病状态[2]。因此，苹果树本身的抵抗能力强弱是该病能否发生的前提条件。2.1.1 施肥水平明显不足 据调查，20世纪80年代和90年代初期，苹果是冀北地区许多农户的主要收入来源，因此管理比较精细，平均每年每株果树施优质农家肥50 kg以上，夏季还要进行压青草、扩水盘、改良土壤、追施肥料等措施，冬季一般都要进行树干涂白。另外在病虫防治上，也基本上做到了及时防治、统一防治。因此，果树树势较强，各种病害发生均较轻。20世纪90年代后期尤其是近5 年以来，随着果品价格下降，果农积极性下降，管理比较粗放。据调查，目前有90%以上的苹果树不施用有机肥，50%以上的苹果树不追施肥料，20%以上的苹果树不施任何肥料，即使是施肥的，也多是在春季每株基施磷酸二铵等0.5 kg左右，不但养分含量单一，而且施肥量明显不足。2.1.2 掠夺式生产现象比较严重 大多数果农只追求眼前利益，一是不舍得疏花疏果，使果树负担过重，大小年现象严重，使树体过早衰弱，抵抗力下降；二是为了争取多挂果，普遍采取环剥措施，尤其是主干环剥现象还比较常见，造成环剥就有花芽、不环剥就没有花芽的恶性循环，不但造成树体衰弱、抵抗力下降、各种病害泛滥，而且使果树结果高峰期明显缩短。另外，近几年天气干旱，有的果园不能及时灌水，也是粗放管理的一个重要方面。防治不当主要表现在5个方面：一是施药次数不足。部分果农对苹果树重视不够，有的全年只施一、两次药，甚至有的果农完全不施药，也不进行其他管理，早期落叶病、瘤蚜等病虫害发生严重，造成树势极度衰弱，进而促使腐烂病大发生，提供了充足菌源，也危及到了整个果园；二是施药时期把握不好。苹果腐烂病萌芽前用药消灭枝干上的菌源十分重要，许多果农不重视此次施药，萌芽后刮除病斑必须进行，而多数果农到了花期以后病斑明显时才刮除，病斑扩展迅速，还会使病原菌大量传播；三是病斑刮除不彻底。发现病斑后，应刮除至木质部，边缘要超过病部1cm左右，而有的果农刮得浅或刮得范围小，造成病斑复发率较高，还有的果农不将刮下的病皮带走，再次形成侵染源；四是药剂选择不合理。目前用于防治腐烂病的药剂较混乱，许多果农选择不当，也是造成防治效果不好的重要原因；五是不注重夏秋季施药。多数果农只注重春季涂药，不注重夏秋季喷药保护和秋季涂药保护，形成新增病斑。20世纪80年代之前，冀北地区苹果主要品种是国光，其次是金冠、元帅、红星、白龙、倭锦、鸡冠等，苹果腐烂病很少发生，但随着品种间异地交流的广泛进行，富士等新品种开始传入，腐烂病也开始迅速发生。随着果农不断栽植和对老树进行改接换头，几乎所有果园均有外来接穗不断引入，目前这些已成为当地的主栽品种，在一定程度上造成菌源的不断传入，因此，品种间异地交流是苹果腐烂病发生的原因之一。苹果腐烂病的防治必须贯彻以加强栽培管理为中心内容的“预防为主、综合防治”的方针。健身栽培是指在苹果生产过程中，利用农业和物理等措施促进植株生长，增强植株对病虫的抵抗能力，减少病虫害的发生率，从而增加苹果的产量，提高品质。健身栽培是目前生产无公害苹果最有效、最根本、最安全、最经济的手段，也是防治苹果腐烂病的最重要手段。3.1.1 加强水肥管理，提高树势 在秋季落叶后至早春萌芽前，增施以有机肥为主，N、P、K、微肥配合的基肥，适时追肥，叶面喷施氨基酸叶肥、沼渣沼液等，要根据不同树龄、不同土壤条件、不同时期采取平衡施肥措施，通过增施有机肥和磷钾肥、补充叶肥等手段，增强树体对腐烂病的抵抗能力；萌芽前、春梢生长期、果实膨大期、采果后和封冻前要及时根据灌水指标灌水，保证土壤的田间持水量，尤其要防止春旱，但也要注意雨季及时排水，保证树体含水量正常，降低病菌扩展能力，促进伤口愈合。3.1.2 及时修剪，合理负担 大小年现象是造成树势衰弱的重要原因，因此要通过疏花疏果、修剪等措施，合理负担，避免树体消耗过大；适时冬剪和夏剪还可剪去病虫枝、枯死枝、内膛过密枝，改善树体通风透光条件，以减轻其他病虫害的为害，从而提高树势。3.1.3 及时清理病虫及残体，减少菌源 病枝、病树皮中有大量的腐烂病菌，因此要及时剪除病枝和病果、及时清理将刮下的树皮，带出园外深埋或焚烧处理，防止孢子飞散传播。3.1.4 减少环剥，避免树势衰弱 环剥在一程度上可以提高花芽分化率，从而增加挂果量，但也会造成树势衰弱，尤其是主干环剥，后果更严重，因此，应优先选用施沼渣沼液、喷芸薹素内酯等植物生长调节剂、涂抹促花剂等方法，尽量少环剥。3.1.5 增加保护，防止冻害发生 冻害是诱发腐烂病的重要因素，在冬季温度较低的地区，要通过树干涂白等措施，防止冻害发生。苹果腐烂病刮除病斑工作应根据其发生规律，及时进行。当春季气温回升后，树液开始流动，营养向生长点转移，造成树体枝干营养水平相对较低，导致抗病能力迅速降低，病菌则乘机扩展蔓延，形成春季发病高峰。另外，秋季果实迅速膨大，营养向果实大量转移，也会造成树体枝干营养相对缺乏，形成秋季发病高峰。因此，刮除病斑应在每年春、秋季分别进行。通过实践表明，每年进行3次比较合适，第一次在萌芽期，此时病斑尚未蔓延；第二次在苹果花期，尤其是降过一场春雨过后，此时病斑最容易辨别，可及时发现第一次未发现的病斑；第三次是在9月份，此时是该病蔓延的另一个高峰。刮病斑时，要刮至露出木质部，边缘要超过病部1cm左右，刮好后及时涂药保护。通过笔者调查和试验，目前防效较好的涂抹药剂有：3.315%甲硫·萘乙涂抹剂（灭腐新）原液、2.12%腐殖酸铜水剂（腐烂净）原液、4%腐殖酸铜水剂（843康复剂）原液、21%过氧乙酸水剂（果富康）5倍液、精制木酢液原液、40%氟硅唑（杜邦福星）15倍液等，一般防治效果可达80%～90%。病斑涂药保护时，有一些不易发现的病斑往往被忽略，造成年年涂药年年有新发病斑。因此，全树喷药防治是必不可少的措施，可有效消灭树皮浅层病菌，预防发病。可在萌芽前、谢花后2～4天、落皮层形成期（7月份）、果实生长中后期（8月下旬～9月上旬）各喷一次药，尤其是萌芽前施药尤为重要，可有效消除树体上潜伏的病菌。萌芽前喷施药剂可选用18%过氧乙酸水剂200倍液、石硫合剂5波美度、2.12%腐殖酸铜水剂100倍液、45%代森铵（施纳宁）水剂300～400倍液等；萌芽后喷施药剂可选用18%过氧乙酸水剂500倍液以及腐殖酸铜水剂等；秋季涂抹药剂可选用3.315%甲硫·萘乙涂抹剂（灭腐新）原液、腐殖酸铜类药剂等。另外，在苹果腐烂病发生高峰期，还可用21%的过氧乙酸200倍液进行树干淋洗或3～5倍液涂刷树干及骨干枝、45%代森铵（施纳宁）水剂100～200倍液涂刷树干及骨干枝，可收到很好的效果。在5～9月份，其中以5～6月份最好，用锋利的刀将所有的病皮、粗翘皮全部刮除，露出白绿或黄白色皮层为止，不要触及形成层，皮层中若有坏死病斑也一律刮除。重刮皮可将多年积累的各种类型病变组织和侵染点彻底清除，且可刺激树体产生愈伤组织，增强抗病力。对于主干上病疤较大、为害较严重的果树，要及时采取桥接或脚接的方式，促进树势恢复。

多数苹果属植物野生种或栽培种的花和果都具有观赏价值，在观赏园艺花卉树木中占有重要地位。20世纪以来，国外植物学家从我国引种并进行了大量杂交选育工作，培育了一系列具观赏用途的海棠品种，统称为观赏海棠（Malus spp.）。近年来，国内学者从国外引进的观赏海棠品种几十个，它们姿态各异，色彩斑斓，大量果实点缀枝头直到深冬，丰富了景观内容。但是，这些观赏海棠不少品种的植株枝干上往往产生大量轮纹状、马鞍形的瘤状突起，严重时，病斑相连，导致树皮粗糙，严重影响树势甚至引起枝干坏死。本研究对其病原进行了初步研究，以期为进一步研究其发生发展规律和防治技术奠定基础。观赏海棠（M.spp.）植株为山东省泰安市区栽植树种。在6月份从病树上采集病斑，显微切片观察其病原形态，并对其大小进行测定。按常规方法，进行分离培养并纯化。观察其培养性状和产孢特征。在6月底，将分离纯化的病原菌分别采用烫伤接种法、针刺接种法、喷雾接种法对健康的海棠枝条进行接种，定期观察其发病情况，确定其致病性。设置不同温度条件（5℃、15℃、25℃、28℃、37℃、40℃）、不同pH值条件（pH值4.0、5.0、6.0、7.0、8.0）、不同培养基条件（琼脂、蛋白胨、LB、BPY、PMA、PSA、PDA），用菌碟法分别测定不同条件下病原菌的菌丝生长状况；并在以上不同温度、不同pH值条件以及不同营养条件（0.5%、1%、2%葡萄糖，0.5%、1%、2%蔗糖）下，采用凹穴法测定病原菌孢子萌发情况。受害海棠枝干从皮孔开始发病，以皮孔为中心形成近圆形斑点，暗褐色，凹陷，边缘稍隆起；随后病斑中央突起，呈瘤状，质地坚硬，成为灰白色；病健交界处发生龟裂，病皮翘起，有点呈马鞍状，或呈轮纹状；病斑表面产生黑色的小粒点。严重时，病斑相连，病皮粗糙，导致部分枝干死亡。对病斑上黑色粒点切片镜检，发现：子座扁球形，其上分生孢子器1～3个，分生孢子器扁圆形或椭圆形，大小为（142～284）μm×（162～289）μm；内壁密生分生孢子梗，分生孢子梗棍棒状，单胞，顶端着生分生孢子；分生孢子单细胞，无色，纺锤形或长椭圆形，一端钝圆，一端截平，大小为（20.1～32.9）μm×（7.6～9.8）μm。从发病枝干上分离培养获得病原菌纯培养，菌落初灰白色，逐渐呈灰黑色，气生菌丝浓密，呈絮状隆起，后期菌落中产生灰黑色子座。对病原菌进行致病性测定，通过不同方法对海棠进行接种试验，发现烫伤接种法和针刺接种法处理的海棠发病率为100%，而喷雾接种法处理的海棠则几乎没有发病。其症状表现为，伤口先凹陷变黑，后形成褐色小突起。同时发现，在山东省泰安市，在6月底接种，该病原菌侵染的潜伏期为7～10天。经鉴定，认为该病害的病原为Botryosphaeria berengeriana，病害为观赏海棠轮纹病。25～28℃、pH值4.0～7.0、BPY和PDA培养基等条件，最适合菌丝生长，菌落生长快，且菌丝白色浓密呈絮状隆起，易产生黑色分生孢子器。28℃、pH值7.0、1%蔗糖条件最适合病原菌分生孢子萌发，12h观察孢子萌发率能达到80%左右，孢子萌发芽管较短、粗，多数两端萌发。观赏海棠轮纹病发病严重，目前对其病原鉴定方面未见报道。本研究初步确定其病原为Botryosphaeria berengeriana，并测定了其部分生物学特性。结果也显示该病原菌从形态和生物学特性上与引起苹果轮纹病的病原菌[1]和梨轮纹病[2，3]的病原菌有一定的差异。该菌的寄主范围、对苹果属、梨属植物的致病性、ITS的序列测定等工作正在开展中，这些信息对于该菌分类地位的进一步确定有重要价值。