近些年，由于多种原因的影响，小麦黑胚病发生日趋严重，已经成为生产上的重要问题。由于该病危害，导致小麦籽粒质量和等级下降，影响种子出苗和幼苗生长，已成为小麦生产亟待解决的问题之一[1～5]。一些研究报道，黑胚病的主要病原菌链格孢（Alternaria alternata）可以产生致病毒素，甚至能够引起食道癌变，对人类健康有很大的威胁[6]。虽然一些学者对小麦黑胚病的发病规律、品种抗性、防治技术以及黑胚籽粒对小麦出苗和生长的影响做了不少研究工作，但关于黑胚病菌链格孢的致病机制尚不清楚，对该病原菌的致病毒素未见报道[7～9]。对于毒素的致病机理，一些研究认为，是毒素造成了寄主植物某些生理生化方面的异常从而引起了病害症状[10～17]。本研究的目的是弄清小麦黑胚病优势病原菌链格孢所产毒素的生物活性和基本性质，了解病菌的致病机理，为进一步研究工作奠定基础。1.1.1 供试小麦品种 抗病品种：豫麦47、豫优1号、科优1号；感病品种：豫麦18、豫农9901、漯麦4号；种子由国家小麦工程技术中心和河南省农业科学院小麦所提供。1.1.2 供试菌株 小麦黑胚病菌链格孢（Alternaria alternata），由本实验室分离鉴定和保存。1.2.1 粗毒素的制备 转接黑胚病菌菌种于PDA 培养基上培养7d，然后取直径为6.5mm 大小的菌丝块，接种到150ml pH4的PSK液体培养基中（250ml三角瓶），每瓶一块，在25℃、110r/min恒温摇床上培养10～15天，至菌丝变黑。将培养液用滤纸过滤，滤液经高速离心，取上清液用0.45μm 微孔薄膜过滤，得无菌滤液。采用种子萌发和根长抑制法进行毒素生物活性测定。1.2.2 生物学活性测定1.2.2.1 病菌毒素对种子萌发的作用 选取饱满的小麦种子，用0.1%HgCl2进行表面消毒3min，然后用无菌水冲洗干净并用灭菌的滤纸将种子表面的水吸干。取直径9cm的培养皿，放入一张灭菌的滤纸，用5ml无菌滤液、1/4的稀释液、1/2的稀释液和2倍浓缩液的无菌滤液分别浸泡小麦种子，放置在（25±1）℃的培养箱中，3天后记载种子萌发率，以根长超过种子直径者计为萌发，计算种子萌发率和抑制率。抑制率（%）=（清水对照种子萌发率—处理种子萌发率）/清水对照种子萌发率×1001.2.2.2 病菌毒素对种子根生长的作用 选取饱满的小麦种子，加水浸泡12～24h时，倒掉水并用无菌水冲洗3遍后再放到25～26℃恒温条件下催芽。待主根长约2mm时，将种子胚向下摆在事先已铺有毒素浸湿的纱布（或滤纸）的培养皿内，再在种子上覆盖二层同样处理的滤纸，置25～26℃黑暗下培养48h，测定主根长度，并计算抑制百分率。1.2.2.3 病菌毒素滤液对小麦籽粒黑胚率和千粒重的影响 制备病菌孢子悬浮液（10×10倍显微镜下，20～30个孢子/视野）和粗毒素滤液，在扬花后5天、10天和15天分别喷洒到扬花前已套袋的小麦穗上，并在接种后再次套袋。选取3个感病品种和3个抗病品种，每品种每次接种20穗。收获后调查籽粒黑胚率及千粒重。1.2.3 病菌毒素的理化性质测定1.2.3.1 毒素粗提物中蛋白与非蛋白部分的活性测定 在培养滤液中加入2倍体积的甲醇，随后将该培养滤液于10℃下3000r/min离心20min，得到含蛋白质的沉淀（即蛋白部分）和不含蛋白质的上清液（即非蛋白部分）。用蒸馏水将蛋白部分稀释至原培养液体积，非蛋白部分用旋转蒸发仪于60℃下减压蒸发充分除去甲醇后，也用蒸馏水稀释至原培养液体积，分别检测其生物活性，每处理3次重复，以未经处理的培养滤液和清水为对照。1.2.3.2 毒素的酸碱稳定性测定 将毒素培养滤液的pH值用1mol/L NaOH和HCl分别调至3、4、5、6、7、8、9、10。于常温下放置24h后，再调回原值，在60℃水浴中浓缩至原体积，进行活性检测。每处理2次重复，以未经处理的培养滤液和清水为对照。1.2.3.3 毒素的热稳定性测定 将无菌滤液分别于60、80和100℃水浴中处理20min、30min、40min、50min和60min，或于121℃高压灭菌处理20min，用无菌蒸馏水补足损失水分后，检测其生物活性。每处理2次重复，以未经处理的无菌滤液和清水为对照。1.2.4 毒素提取物对小麦种子几种酶活性的影响 选取饱满的小麦种子，表面消毒后置于培养皿中，用浓缩2倍后的无菌滤液处理种子，分别在处理前，处理后3h、6h、12h、24h、36h和48h取样进行酶活测定。1.2.4.1 多酚氧化酶（PPO）提取与活性测定 称取材料0.2g，冰浴研磨成匀浆。加入2ml 0.02mol/L的磷酸缓冲液（pH6.8），于4℃下4000r/min离心15min，上清液即为PPO粗提液。取粗提液100μl，加入pH6.8磷酸缓冲液1.5ml，混匀后于30℃水浴中保温10min。然后加入0.02mol/L邻苯二酚1.5ml，立即计时，于分光光度计398nm下测其3min内OD变化值，以每分钟增加0.01个OD值定义为一个酶活性单位（U），对照为3ml的磷酸缓冲溶液。各样品均重复测定3次。1.2.4.2 过氧化物酶（POD）提取与活性测定 取材料0.2g，冰浴研磨成匀浆。加入2ml 0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH6.0），于4℃下4000r/min离心15min，上清液即为POD粗提液。采用愈创木酚法，在470nm波长下测定吸光值，然后以每分钟每克鲜重OD值变化1.0所需的酶量为一个酶活单位（U），对照为3ml的磷酸缓冲液。各样品均重复测定3次。1.2.4.3 SOD酶活性测定 取材料0.2g，冰浴研磨成匀浆。取4ml的SOD反应液与小烧杯中，加入50μl酶提取液，在加200μl核黄素，混匀（以pH7.8磷酸缓冲液代替酶液作为对照）。在光下反应10min，黑暗终止反应，与560nm下测吸光值。测定结果表明，病菌培养滤液对种子萌发和小麦根系的生长都有明显的抑制作用。培养滤液原液种子根伸长抑制率高达90.18%，对种子萌发抑制率也达到65.0%。浓缩两倍的培养滤液对种子萌发抑制率高达100%，种子根生长抑制率达到99.27%。随着培养滤液浓度的降低，对种子萌发和根系生长抑制率也逐渐下降（表1）。培养滤液浓度平均种子萌发率（%）平均种子萌发抑制率（%）平均根长（cm）平均根长抑制率（%）培养滤液2倍浓缩液0e100.000.02c99.27培养滤液原液35.00d65.000.27c90.18培养滤液1/2稀释液70.00c30.001.18b57.09培养滤液1/4稀释液87.50b12.502.74a0.27清水对照100.00a—2.75a—表1 链格孢毒素培养滤液对小麦种子萌发和根系生长的影响利用病菌孢子悬浮液和病菌毒素滤液分别接种处理小麦穗部，在收获后统计籽粒黑胚率，结果发现病菌孢子悬浮液和病菌毒素滤液处理籽粒黑胚率均比清水对照显著提高，其中病菌孢子悬浮液接种黑胚率高于毒素滤液处理，且扬花后5天和10天接种病原菌发病较厉害。（表2）。处理处理时间（天）感病品种抗病品种漯麦4号豫农9901豫麦18豫麦47豫优1号科优1号CK（套袋）—2.41f3.77e2.35e2.87f0.78e0.79e毒素滤液扬花后5天3.00e6.28d4.24d6.78e2.13c0.95e扬花后10天4.81c15.61c8.53b10.44c2.71b1.51c扬花后15天3.85d6.63d2.82e9.57cd1.60d1.19d孢子悬浮液扬花后5天10.00a19.71a13.61a16.40b2.76b3.03a扬花后10天3.93d15.33c5.86c8.72d2.88b1.54bc扬花后15天6.69b18.28b7.80b18.42a4.36a1.76b表2 链格孢毒素滤液和孢子悬浮液处理后小麦籽粒黑胚率 （%）利用病原菌孢子悬浮液和毒素培养滤液分别处理6个小麦品种的麦穗，发现有些品种籽粒千粒重明显下降，损失率最高达到32.27%，与清水对照差异十分显著。而且，用毒素处理的小麦籽粒千粒重的影响还要大于接种病原菌孢子悬浮液的影响（表3）。处理处理时间（天）感病品种抗病品种漯麦4号豫农9901豫麦18豫麦47豫优1号科优1号CK（套袋）—48.17a47.85a48.28a48.03a47.57a42.32a毒素滤液扬花后5天46.70b36.65d42.83c32.53e41.33c35.37cd扬花后10天36.53c41.20b42.53c34.23d39.39d36.75c扬花后15天46.39b38.58cd40.55d35.01d33.72e33.83e孢子悬浮液扬花后5天46.79b40.11bc44.74b42.98c43.22b35.37cd扬花后10天47.11ab42.76b42.98c45.50b38.28d40.03b扬花后15天46.40b40.39bc41.39cd45.26b33.73e34.33e表3 链格孢毒素滤液和孢子悬浮液处理后千粒重2.4.1 病菌培养滤液中蛋白与非蛋白部分的活性测定 由实验结果可以看出，培养滤液中蛋白等大分子物质部分对种子萌发没有抑制作用说明该部分无致病活性，而非蛋白部分队种子萌发抑制率则与培养滤液原液相似，说明其保留了病原菌培养滤液的致病活性（表4）。处理滤液蛋白部分滤液非蛋白部分培养滤液原液清水对照平均种子萌发率（%）98.3a47.33b46.67b100.00a平均种子萌发抑制率（%）1.7052.6753.330表4 小麦黑胚链格孢代谢物中蛋白部分和非蛋白部分的活性2.4.2 毒素的酸碱稳定性 测定结果表明，用不同pH值处理链格孢培养滤液24h后，其生物活性几乎不受影响，对种子萌发的抑制率都达到50%以上，与培养滤液原液没有明显差异，说明小麦黑胚病链格孢毒素具有较强的酸碱稳定性（表5）。滤液pH值345678910原液清水对照平均种子萌发率（%）46.67b50.00b48.33b45.00b45.00b48.33b45.00b46.67b46.67b100.00a平均种子萌发抑制率（%）53.3350.0051.6755.0055.0051.6755.0053.3353.33—表5 不同pH处理后链格孢培养滤液对种子萌发的活性2.4.3 毒素的热稳定性 由表6可以看出，小麦黑胚病菌培养滤液于60、80和100℃水浴中处理20min、30min、40min、50min和60min处理后活性与没有处理的对照几乎没有差异，而且在121℃下处理20min仍不失活，说明其热稳定性较强。温度处理（℃）处理时间（min）203040506012158.33a———10050.00a51.67a51.67a51.67a51.67a8051.67a55.00a53.33a53.33a51.67a6050.00a53.33a51.67a50.00a51.67a常温55.00a50.00a51.67a50.00a51.67a表6 不同温度处理后链格孢培养滤液对种子萌发的抑制率 （%）链格孢毒素对小麦种子多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）的影响见表7。测定结果表明，随着时间的延长，不论是感病品种还是抗病品种在毒素滤液处理后PPO、POD和SOD的活性均下降，且抗病品种较感病品种下降慢。从3种酶活性测定结果来看，SOD活性在毒素滤液处理后下降更为明显。时间（h）PPOPODSOD豫优1号豫农9901豫优1号豫农9901豫优1号豫农9901028.0031.8323.5022.17214.04181.61328.8326.1722.0020.67204.10143.82623.0024.0018.8319.33198.70136.381222.0022.8317.6718.67179.67124.482420.1719.3317.3317.67154.9894.263619.0017.6718.0016.33115.4589.734817.1716.5017.0016.83112.1192.06表7 毒素滤液处理对小麦种子酶活性的影响 （单位：U/min·g）初步研究结果表明，小麦黑胚病菌可以产生致病毒素，该毒素能够抑制小麦种子萌发和根的伸长，并能加重黑胚病的发生，而且能够降低籽粒千粒重，初步结果表明病菌的致病作用与其产生的毒素有关，但是其机制有待进一步研究。对毒素基本性质的研究是进行纯化的基础。虽然本实验研究的毒素是未经提存的粗毒素，但是能够揭示其一般的特性。本实验结果表明，小麦黑胚病链格孢毒素为非蛋白类物质，而且是一种热稳定性及酸碱稳定性均较高的物质。这为以后研究和利用毒素提供了理论依据。SOD、POD、PPO这三种酶是存在于膜系统中的一种抵御活性氧伤害的保护酶，寄主在与病原菌或毒素的相互识别斗争过程中，会产生高出正常水平的活性氧，干扰正常的代谢功能，在正常情况下，活性氧都保持在一个动态平衡状态[11～12]。毒素处理小麦种子之后PPO、POD、SOD的活性均降低，可能由于毒素造成了活性氧清除系统中这三种酶系统的破坏，活性氧过量积累，细胞受到伤害，从而也抑制了种子的萌发。小麦黑胚病菌链格孢毒素的致病作用可能是一个比较复杂的过程，除了本实验研究的几种酶的作用外，还需对其他一些相关酶、细胞膜透性、酚类代谢、氧化磷酸化、细胞器结构等很多理化机制和细胞学结构变化等进行深入研究。同时，也要加强对毒素纯化和结构分析等方面的工作，为进一步研究毒素的性质和作用机理奠定基础。

培育抗病品种是一种经济有效的手段，成为解决苹果炭疽菌叶枯病的首选。传统的抗病育种主要依赖于植株的表现型选择 （P he-notypical selection），但是由于环境条件、基因间互作、基因型与环境互作等多种因素大大影响表型选择效率。如抗病性的鉴定就受发病的条件、植株生理状况、评价标准等条件的影响。一个优良抗病品种的培育往往需要花费7～8年甚至十几年时间。随着分子生物技术的快速发展，以DNA多态性为基础的分子标记技术以其表现稳定、数量多、多态性高等优点已被广泛的运用于植物遗传图谱的构建、控制重要农艺性状基因的标记遗传定位、种质资源的遗传多样性分析以及品种指纹图谱的绘制等方面，尤其是分子标记辅助选择 （molecular marker-assisted selection，MAS） 育种，相较传统育种能极大地提高育种的选择效率与育种预见性，受到人们的高度重视。简单重复序列 （simple sequence repeats，简称 SSR） 又称微卫星（microsatellite） 广泛地分布于果树基因组的不同位置。SSR位点多态性的形成是基于基本单元重复次数的不同。由于每个SSR位点两侧一般都具有相对保守的单拷贝序列，所以可以根据此特点在SSR两侧序列设计一对特异引物来扩增 SSR 序列。通过对 PCR 产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳来显示不同 SSR 标记的分子多态性。由于SSR标记具有大量的等位差异、多态性好、操作简便、稳定等特点，已被广泛应用于作物的遗传图谱构建、指纹图谱绘制、目标性状基因的标记定位、物种起源进化及品种纯度鉴定等 （Hemmat，1994）。本试验利用SSR标记与集团分离分析法BSA （bulk segregant anal-ysis） 相结合，快速有效地寻找与质量性状遗传的目标基因紧密连锁的SSR标记，用于分子标记辅助育种及抗病性的早期鉴定。本试验选择青岛农业大学苹果试验基地 （山东省胶州市） 2009年种植的，经过室内离体接种鉴定的 ‘金冠’ב富士’ 的207 株F1杂交群体实生树为材料，于2015 年4 月底，每株采摘幼叶 5～6 片，用液氮处理后，置于-70℃冰箱保存。参考Doyle和Doyle （1987） 及 Cullings （1992） 提取基因组DNA的CTAB法，并加以改进 （附录一）。（1） 利用1%琼脂糖凝胶电泳检测。取 4μl DNA 样品与 2μl 6×Lodding buffer 混匀，在 1%浓度的琼脂糖凝胶中电泳 （120V，30min），最后在紫外凝胶成像系统中成像并记录保存。若成像为一条整齐、单一、清晰的 DNA 条带，且点样孔没有亮光，则表明所提样品较纯；若条带不清晰、拖尾或出现涂抹带，则表明 DNA 发生了降解，降解严重会看不到条带；若在胶片下部有弥散的荧光区出现，则表明样品中存有 RNA 杂质；若点样孔处有明显的亮光，则说明样品中含蛋白质和大分子杂质。琼脂糖凝胶电泳检测方法见附录二。（2） 分光光度计检测。运用分光光度计NanoDrop 2000 进行 DNA纯度及浓度的量化测定。若 OD260/OD280 值在 1.8～2.0，并且 OD260/OD230 值大于2.0，则表示此样品DNA纯度适宜。将提取、纯化的基因组 DNA，稀释到浓度为10ng/μl。根据该组合群体的离体接种鉴定结果，将杂交后代单株分为抗病和感病两大类型。按照BSA分析方法的要求，选取 10 份高抗单株 （无任何病斑）的DNA，等量混合构建DNA抗池；选取10份高感单株 （病斑个数大于20） 的DNA等量混合构建DNA感池。两个基因池用于筛选与目标基因连锁的分子标记。从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus_x_domestica/下载目标区域的 contig 序列，然后通过网站 http：//archive.gramene.org/db/markers/ssrtool搜索该区域碱基序列中所有的 SSR 位点。搜索参数设置为：碱基重复单位为 2、3、4、5、6 个碱基，相应的重复次数依次为 8 次、6 次、4 次、3 次、3 次。利用 Primer 3.0 P lus软件设计SSR引物，引物设计时应注意：引物与SSR位点间的距离一般大于50 bp 个碱基序列。引物 GC 含量为40%～70%，最适值为50%；引物长度在18～24 bp；退火温度50～65℃，左右引物退火温差小于 5℃；扩增产物片段大小在 150～350 bp。引物的评估利用Oligo软件进行，避免引物二聚体、发夹结构和错配等情况的发生。引物序列 （附表1）。所有引物由生工生物工程 （上海） 股份有限公司合成。SSR反应体系为15 μl，内含10 ng/μl基因组DNA 2 μl，1×Master Mix 7.5 μl，0.2 μmol/L左右引物各0.8 μl。进行初步筛选时的 PCR扩增程序为：94℃预变性 5min，然后按 94℃变性 30 s，55℃退火40 s，72℃延伸30 s的程序进行 10 个循环，每个循环的退火温度降低0.5℃，然后按94℃变性30 s，50℃退火40 s，72℃延伸30s的程度进行25个循环，最后72℃延伸8 min，筛选能扩增出有差异条带的SSR引物。最终筛选的 PCR 扩增程序为：94℃预变性 5min，然后按94℃变性30 s，相应的退火温度40 s，72℃延伸30 s的程序进行35个循环，最后72℃延伸8 min，4℃保存。PCR产物使用3.5%的琼脂糖凝胶电泳，或者聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法见附录三。从 HiDRAS 网站 （http：//www.hidras.unimi.it/） 和 GenBank （http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank） 网站下载了 300 对均匀分布于苹果17条染色体上的已发表的 SSR 引物，在亲本及抗感池中进行初步筛选，选出在抗亲、抗池与感亲、感池中有多态性条带的引物，然后在207个做图群体上进行筛选。最终选出与抗性基因位点连锁的标记，根据所筛选出的SSR标记的已知信息，确定其所在的染色体，然后将 SSR 标记序列与苹果基因组数据库 （http：//www.rosaceae.org） 进行BLAST比对，将其定位在染色体的具体位置上。初步定位后，从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus x domestica/下载与目标基因位点连锁的 SSR 标记间的 contigs序列，根据SSR标记设计的方法，设计了 276 对新引物。这些引物首先在抗亲、抗池与感亲、感池中进行筛选，将产生多态性条带的引物再进行群体验证。对检测群体中各单株的 SSR 标记基因型分别赋值并记录，与抗池带型相同的记为 “A”，与感池带型相同的记为 “B”。将这些SSR标记在群体上的基因型数据进行孟德尔1R∶1S遗传符合度的卡方检验。并将表型抗性鉴定结果与标记基因型数据相结合，采用 JoinMap 4.0软件，对标记及抗性基因 R gls位点的连锁关系进行分析。利用软件中的Kosambi函数功能将重组率转化为遗传距离，其他参数设置为默认值。将筛选获得的与抗性基因 R gls位点最近的两个 SSR 标记，在两个亲本上进行PCR扩增。将差异片段进行胶回收。回收产物连接到载体pMD-19T simple，然后转化到大肠杆菌进行扩繁。将菌液PCR检测为阳性的克隆送生工生物工程 （上海） 股份有限公司测序。每个样挑取3个单菌落作为测序重复。测序结果用 DNAMAN 软件进行比对分析。具体操作方法见附录四。用CTAB法提取的苹果叶片基因组 DNA经1%的琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，DNA条带清晰，完整无降解 （附图3-1）。可以用于后续的研究。从 HiDRAS 网站 （http：//www.hidras.unimi.it/） 下载的 300 对均匀分布于苹果17条染色体上的已发表的 SSR 引物在亲本及抗感池中进行初步筛选，选出54 对在抗亲、抗池与感亲、感池中有多态性条带的引物。再将这54 对引物用于作图群体的207 个单株以筛选与抗性基因位点连锁的 DNA 标记。最终筛选出2 个可以清晰区分抗感双亲、抗感池和杂交群体抗感单株的 DNA 标记，CH01d08 和CH05g05。引物序列如表3-1中所示，因为这两个标记已被报道位于苹果15号连锁群上 （Liebhard et al.，2002），所以将苹果炭疽菌叶枯病抗性基因 （命名为Rgls） 位点定位于15号连锁群上。连锁分析表明这两个标记分别位于Rgls基因位点两侧，通过 BLAST算法与苹果基因组数据库 （http：//www.rosaceae.org） 进行比对，SSR 标记 CH01d08位于15 号染色体的 Contig MDC021953.346 上，标记 CH05g05 位于MDC016699.237 上，物理位置分别位于染色体的 2343 kb 和13699 kb处，两个标记覆盖了染色体上11.3Mb区域 （表3-1）。根据苹果基因组 CH01d08 和 CH05g05 标记之间的核苷酸序列，自行设计了276对SSR引物。按照上述方法进行筛选，最终筛选出9对引物能够扩增出清晰稳定的多态性条带的引物 （附图3-2、附图3-3），分别为 S0607039、S0607001、S0506206、S0506001、S0506078、S0405195、S0405127、S0304673、S0304011 （表3-1）。连锁分析表明，标记S0405127和S0304673与Rgls基因位点的距离最近，位于该基因两侧，分别存在2个、4个重组个体。通过对这11个SSR标记在做图群体上的基因分型比例分析，符合 1R∶1S 的理论比值， P 值大于0.05 （表3-2）。SSR编号引物序列重复基序产物长度/bp退火温度/℃位点CH01d08aF：5′-CTCCGCCGCTATAACACTTC-3′R：5′-TACTCTGGAGGGTATGTCAAAG-3′ag29056MDC021953.346chr15∶13688903..13699651CH05g05aF：5′-ATGGGTATTTGCCATTCTTGC-3′R：5′-CCTGAAGCAAGGGAAGTCATAC-3′ag14356.5MDC016699.237chr15∶2343805..2349433S0607039F：5′-AACGCACCGACCCATTTC-3′R：5′-CCAGCTCGCATAACCACC-3′ct18654MDC011529.272chr15∶6103161..6122652S0607001F：5′-ATGAAAGCGAGTCGGAGTG-3′R：5′-GGGGAGGGTTGGTGGTTA-3′caggtcaggt26956MDC004171.329chr15∶5986277..6005012S0506206F：5’-GCTGAGATTTCCCCCATT-3′R：5′-GCTGCGGACACTGCTTAG-3′ttggatgtg24354MDC007696.347chr15∶5714203..5748693S0506078F：5’-AGAAAGGCCCTCAAACAG-3′R：5′-CTGCAGAAGGTGGGTATG-3′aaaagc30455MDC002692.183chr15∶5005415..5011924S0506001F：5′-CATGAAAAGGTAGGCAGTGG-3′R：5′-GAGGTTCTTGGGCAAGTGTT-3′acaaccaa30454MDC013564.245chr15∶5006247..5017709S0405195F：5′-AGACGGGCAAATTAGTTGAGAT-3′R：5′-TCCCTTCTATGATGAATGACACC-3′tg25853MDC016041.193chr15∶4672532..4691912S0405127F：5′-GGCACAATGTAGGAGGGATA-3′R：5′-GCTATGAGGAAATTGGCTCT-3′at33055MDC043871.6chr15∶4622388..4626535S0304673F：5′-GTTTGCACATTGTAATGCTG-3′R：5′-CAGTTTTCTAGTGATGTCGTTG-3′tg（ga）33353MDC013859.580chr15∶4121053..4135560表3-1 定位在15号连锁群上与Rgls基因连锁的SSR标记序列及引物SSR编号引物序列重复基序产物长度/bp退火温度/℃位点S0304011F：5′-GCCGAATCTGCGGAATTG-3′R：5′-TCCCACTTCCTCACCGTCTC-3′ag21056MDC015994.315chr15∶3183972..3196801表3-1 定位在15号连锁群上与Rgls基因连锁的SSR标记序列及引物（续）-1SSRmarkerObservedratio(R∶S)Expectedratio(R∶S)x2PS030401184∶123103.5∶103.53.670.06Ch05g0590∶117103.5∶103.51.760.18S030467393∶114103.5∶103.51.070.30S040512791∶116103.5∶103.51.510.22S040519588∶119103.5∶103.52.320.13S050607894∶113103.5∶103.50.870.35S050600192∶115103.5∶103.51.280.26S060700188∶119103.5∶103.52.320.13S060703998∶109103.5∶103.50.290.59S050620695∶112103.5∶103.50.70.40Ch01d08104∶103103.5∶103.500.96表3-2 SSR标记在207株 ‘金冠’ב富士’ F1 群体中的分离将Rgls位点附近的11个SSR标记在 ‘金冠’ב富士’ 杂交组合F1 群体的207个单株上进行连锁分析。将表型抗性鉴定结果与标记基因型数据相结合采用 JoinMap ver.4.0软件计算出重组率和遗传距离如附图3-4 所示。连锁图谱上标记的顺序依次为 S0304011、CH05g05、S0405195、S0304673、S0405127、S0506078、S0506001、S0506206、S0607001、S0607039、CH01d08，重组率分别为：13.0%、8.7%、5.3%、1.9%、1.0%、6.8%、6.8%、7.2%、7.7%、8.7%、24.6%。遗传距离分别为15.4 cM、7.2 cM、3.1 cM、0.9 cM、0.5 cM、3.0 cM、4.8 cM、6.4 cM、8.2 cM、10.7 cM和33.8 cM。 Rgls基因被定位于 S0304673 和S0405127之间。距离目标基因最近的标记为 S0405127，在抗性基因Rgls位点与S0405127标记之间仅发现两个重组个体，遗传距离为0.5 cM。S0304673 的遗传距离为 0.9 cM。在 ‘Fiesta’בTotem’-15 （F×T） （Fernández-Fernández et al.，2008） 的遗传图谱中，SSR标记CH05g05与Ch01d08的遗传距离为33.7 cM，而在本研究中二者之间的遗传距离为41.0 cM （附图3-4）。为了确定抗性基因Rgls位点的物理位置，将11 个标记序列与金冠苹果染色体基因组序列 （http：//www.rosaceae.org） 进行 BLAST 比对，确定这些标记位于15号染色体上的2.3～13.6 Mb。 Rgls被定位于标记S0405127和S0304673之间，跨度为4.1～4.6 Mb，两标记间的物理距离为500 kb （附图3-5）。对S0304673 和 S0405127 进行测序分析。S0304673 标记能够在双亲中扩增出差异条带，而 S0405127 标记只在 ‘金冠’ 上扩增出一条带，所以对S0304673 标记在双亲中的扩增产物进行了测序，而只对S0405127标记在 “金冠” 上的扩增产物进行了测序 （附图 3-6、附图3-7）。测序结果表明，SSR标记 S0304673 和 S0405127 的扩增片段大小分别为333 bp和330 bp。标记S0304673在 ‘富士’ 中的扩增片段比在 ‘金冠’ 中的扩增片段存在三处8～10 bp的碱基缺失，分别是 CT-CAGTGTGT、AGAGAAAG、CTTCTTACTT，另外还存在着一处两个碱基差异和六处单碱基差异。在 ‘金冠’ 中的扩增片段与参考基因组序列比对发现，有两处单碱基的差异，分别为 A/T和 G/A的碱基变化。标记S0405127在 ‘金冠’ 中的扩增片段与参考基因组序列比对发现，除在参考基因组中有两未知碱基以外，其余完全一致。本次测序确定了参考基因组序列的两处未知碱基分别为G和A。集团分离分析法 （BSA法） 是分子标记研究中的最经典的研究方法之一。其最大的贡献在于能够快速、有效地检测到与目的基因相连锁的分子标记，能够在连锁图谱中标记稀疏区或末端寻找到新的标记，并以此作为侧翼标记 （flanking marker），为继续寻找更紧密的连锁标记、构建高分辨率的连锁群、物理图谱和进行基因的图位克隆奠定基础 （廖毅，2009）。其原理简单、操作方便，而且克服了许多物种没有或者难以创建近等基因系的限制，被广泛地应用于作物育种中。同时必须注意到，物种基因组大小对标记与目标基因连锁距离是有影响的，一般来说基因组大，多态性少的物种，获得与目标基因紧密连锁标记的可能性也比较小。BSA法所能检测到的分子标记与目标基因的可信遗传距离一般在 15～25 cM，所以此法并不是在每一物种上都能获得所需要的目的标记 （Mackay and Caligari，2000）。DNA池的质量对BSA法的检测效率也有很大的影响。所以在实验过程中一定要注意，一是保证DNA 的纯度和浓度。杂质会影响紫外光的吸收率，高浓度的 DNA 溶解不均匀。因此混池时，尽可能使用高纯度 DNA，并适当稀释，否则会影响分池的精确性。二是避免 DNA 池污染。DNA 污染的原因有多方面，包括基因重组率、本身的表型效应、性状鉴定误差、DNA 混合误差、PCR 效率不均等。我们可以通过减少PCR 循环次数、减少混池单株数、构建多池、重复实验等方法来降低实验误差，否则这些误差将会导致多态性被覆盖而找不到目标标记。随着分子生物学技术的快速发展，许多分子标记被成功的应用于控制农艺性状的重要基因的遗传定位及遗传图谱的构建。如 RAP D标记、RFLP 标记、SCAR 标记、CAPs 标记、SSR 标记、SNP 标记等。在这些标记中，SSR标记具有重复性好、可靠性高、共显性和适合自动化操作等优点，成为基因定位和遗传图谱构建的首选。而且，SSR标记广泛从布于整个基因组。据统计，大约有163426个 SSR 位点公布在苹果17条染色体上 （关玲等，2011）。苹果基因组序列的公布，使SSR标记的批量开发及相应引物的设计变的更加便捷 （Guan et al.，2011）。人们可以利用已有的 SSR标记对整个基因组进行筛查，快速的将目标基因所在区域进行锁定。然后在该区域查找SSR并设计合成新的引物，进一步缩小基因所在范围。在本研究中，576 个 SSR 标记，包括300对以前发表的标记和276 对新开发的标记被首次应用于抗炭疽菌叶枯病基因位点的定位。从300对已发表并定位的SSR标记中成功的获得了2 个与抗性基因 Rgls位点连锁的 SSR 标记，CH01d08和CH05g05。这两个标记被定位于 ‘Fiesta’בTotem’ 遗传图谱的第15条染色体上的基因组序列 MDC021953.346 和 MDC016699.237上，位于抗性基因 R gls位点的两侧。这一初步定位的结果为后续标记的开发提供了非常重要的信息，明确了 R gls基因所在的染色体及区域范围。随后9个位于CH01d08和CH05g05之间与Rgls位点连锁的新标记被开发出来。最近的标记与抗性基因 R gls位点间的遗传距离为0.5 cM。在前人的研究中，SSR标记 CH01d08 和 CH05g05 被定位在 ‘Fi-esta’בTotem’ 的遗传图谱中，遗传距离为 33.7 cM.而在本研究中，它们间的遗传距离为41.0 cM。这种类似的现象Paolo等 （2013）也报道过。他们在利用四个分离群体构建与柱型基因 Co位点紧密连锁的遗传图谱时发现，特定标记间的遗传距离会因不同群体，甚至同一群体不同群体大小而不同。这有可能是由于采样不同或遗传因素控制的局部的和全基因组的重组频率不同造成的 （Doligez et al.，2006；Vezzulli et al.，2008；Moriya et al.，2009）。理论上，标记在基因组上的遗传位置与物理位置应该是对应的。但是在本研究中发现，部分标记的遗传位置与物理位置并不是一一对应的。从附图3-4和附图3-5中可以看出，共有8个SSR标记的连锁图谱上的位置与在 ‘金冠’ 基因组序列中的物理位置是一致，另外3个标记，S0506078、S0405195 和 S0304011在遗传图谱上的位置与物理图谱上的位置不一致。这有可能是由于当前的苹果基因组重叠群序列产生装配错误，也有可能是苹果基因组中染色体结构的变异造成的。对引物S0405127 和 S0304673在亲本金冠的扩增片段进行测序发现，所测序列中有四处碱基与参考基因组存在差异。这四个差异碱基及上述的三个与理论顺序不符的标记有可能会纠正基因序列组装错误。在本研究中位于抗性基因 Rgls位点两侧的标记 S0405127 和S0304673间遗传距离与物理距离的对应关系显示，1.4 cM 对应着500 kb个碱基 （物理距离/遗传距离=357 kb/cM）。在对苹果抗黑星病基因Vf位点的分子标记遗传定位的研究结果中显示，每cM 的遗传距离对应423～857 kb的物理距离 （Patocchi et al.，1999）。而在对控制苹果柱型基因 Co位点的遗传定位研究中，每 cM 的遗传距离对应702 kb的物理距离 （Paolo B et al.，2013）。这与本研究中所得出的结论不相符。这有可能与研究材料的群体大小、DNA提取的纯度及表型鉴定的准确性有关。本研究中所利用的SSR标记，特别是新设计的276 对引物，有很大比例在亲本间能扩增出多态性条带，而在抗感池间无差异。虽然这部分标记与抗性基因 R gls不存在连锁关系，但仍可用于群体遗传图谱的构建，以及其他性状标记的筛选。在对PCR产物的检测中，使用了3.5%的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种方式。采用3.5%的琼脂糖凝胶电泳条带清晰，分辨率高，可以清楚的显示差异条带，而且操作简单，电泳速度快，但是存在显示的条带少的缺点。而聚丙烯酰胺凝胶电泳产生的条带很多，分辨率极高，甚至能分离1 bp的碱基差别，但是制备和操作复杂。本试验主要采用3.5%的琼脂糖凝胶电泳，所以可能会导致一些引物因产生的多态性条带间差异小，没有显示出来而被淘汰。本研究首次开展了与抗炭疽病叶枯病基因 R gls位点紧密连锁的分子标记的筛选，并构建了第一张与抗性基因 R gls位点紧密连锁的分子标记遗传图谱。通过对207株 ‘金冠’ב富士’ 杂交组合F1 群体的验证，11个与Rgls位点连锁的标记将该基因定位在苹果基因组第15条染色体上，覆盖了49.2 cM的遗传距离，标记S0405127 和 S0304673分别位于抗性基因位点的两侧，遗传距离分别为 0.5 cM 和 0.9 cM，对应于 ‘金冠’ 苹果基因组的物理距离为500 kb。这两个标记可以应用于抗炭疽菌叶枯病分子标记辅助育种，在定植前对幼苗进行抗性筛选。这将会显著的降低苹果抗炭疽菌叶枯病育种的成本，缩短育种时间。本研究结果对深入开展抗炭疽菌叶枯病的遗传机理和分子机制研究有重要的意义，并为进一步的抗性基因的图位克隆和基因功能验证奠定基础。

枣树实生根系有明显的主根，水平根和垂直根均很发达，一年生实生苗主根向下深达1～1.8m，水平根长达0.5～1.5m。一般在15～40cm土层内分布最多，约占总根量的75%。树冠下为根系的集中分布区，约占总根量的70%。枣芽分主芽和副芽，主芽又称正芽或冬芽，外被鳞片裹住，一般当年不萌发。主芽着生在一次枝与枣股的顶端和二次枝基部，主芽萌发可形成枣头。枣股每年生长量仅1～2cm。副芽又称夏芽或裸芽。副芽为早熟性芽，当年萌发，形成脱落性和永久性二次枝及枣吊，枣吊叶腋间副芽形成花。当年萌发发红的枝条，又叫发育枝或营养枝，由主芽萌发而成。枣头由一次枝和二次枝构成。枣头一次枝具有很强的加粗生长能力，因此能构成树冠的中央干、主枝和侧枝等骨架。二次枝既枣头中上部长成的永久性枝条。枝型曲折，呈“之”字形向前延伸，是着生枣股的主要枝条，故又称“结果枝组”。由主芽萌发形成的短缩性结果母枝，主要着生在二次枝上。枣股是枣树上最基本的结果部位，是枣树上特有的一种短缩型结果母枝。保持一定数量壮龄枣股和尽量延长壮龄枣股的结果年限，是保证枣树连年丰产稳产的关键。又称脱落性枝，枝形纤细柔软，浅绿色，每个叶腋能形成一个花序结果。秋季落叶后，这些枝条逐渐脱落，枣吊上着生叶片，每个叶片都是一个绿色小工厂，其中的叶绿素，利用根系吸收的水，矿质营养和叶片从空气中吸收的二氧化碳，在阳光的照射下，通过光合作用合成糖，所以，叶面积的大小，叶片的薄厚、颜色的深浅等，都直接影响着枣树的生长和结果。一般每个枣吊着花30～50朵，花期很长，多在30d以上。枣树与其他果树一样，要求适宜的立地条件。土壤、地势、气温、雨量及光照等，是影响枣对生长发育和结果状况的主要因素。温度是影响枣树生长发育的主要因素之一，直接影响枣树的分布，花期日均温度稳定为22℃以上、花后到秋季的日均温下降到16°C以前果实生长发育期大于100～120d的地区，枣树均可正常生长。枣树为喜温树种，其生长发育需要较高的温度，表现为萌芽晚，落叶早，温度偏低坐果少，果实生长缓慢，干物质少，品质差。因此，花期与果实生长期的气温是枣树栽种区域的重要限制因素。枣树对低温、高温的耐受力很强，在-30℃时能安全越冬，在绝对最高气温45℃时也能开花结果。枣树的根系活动比地上部早，生长期长。在土壤温度7.2℃时开始活动，10～20℃时缓慢生长，22～25℃进入旺长期，土温降至21℃以下生长缓慢直至停长。枣树对湿度的适应范围较广，在年降水量100～1200mm的区域均有分布，以降水量400～700mm较为适宜。枣树抗旱耐涝，在沧州年降水量100多mm的年份也能正常结果，枣园积水1个多月也没有因涝致死。枣树不同物候期对湿度的要求不同。花期要求较高的湿度，授粉受精的适宜湿度是相对湿度70%～85%，若此期过于干燥，影响花粉发芽和花粉管的伸长，导致授粉受精不良，落花落果严重，产量下降。相反，雨量过多，尤其是花期连续阴雨，气温降低，花粉不能正常发芽，坐果率也会降低。果实生长后期要求少雨多晴天，利于糖分的积累及着色。雨量过多、过频，会影响果实的正常发育，加重裂果、浆烂等果实病害。“旱枣涝梨”指的就是果实生长后期雨少易获丰产。土壤湿度可直接影响树体内水分平衡及器官的生长发育。当30cm土层的含水量为5%时，枣苗出现暂时的萎蔫，3%时永久萎蔫；水分过多，土壤透气不良，会造成烂根，甚至死亡。枣树的喜光性很强，光照强度和日照长短直接影响其光合作用，从而影响生长和结果。光照对生长结果的影响在生产中较常见。密闭枣园的枣树，树势弱，枣头、二次枝、枣吊生长不良，无效枝多，内膛枯死枝多，产量低，品质差；边行、边株结果多，品质好。就一株树而言，树冠外围、上部结果多，品质好，内膛及下部结果少，品质差。因此，在生产中，除进行合理密植外，还应通过合理的冬、夏修剪，塑造良好的树体结构，改善各部分的光照条件，达到丰产优质。土壤是枣树生长发育中所需水分、矿质元素的供应地，土壤的质地、土层厚度、透气性、pH值、水、有机质等对枣树的生长发育有直接影响。枣树对土壤要求不严，抗盐碱，耐瘠薄。在土壤pH值5.5～8.2范围内，均能正常生长，土壤含盐量0.4%时也能忍耐，但尤以生长在土层深厚的沙质壤土中的枣树树冠高大，根系深广，生长健壮，丰产性强，产量高而稳定；生长在肥力较低的沙质土或砾质土中，保水保肥性差，树势较弱，产量低；生长在黏重土壤中的枣树，因土壤透气不良，根幅、冠幅小，丰产性差。这主要是因为土壤为枣树提供的营养物质和生长环境不同所致。因此，建园尽量选在土层深厚的壤土上，对生长在土质较差条件下的枣树，要加强管理，改土培肥，改善土壤供肥、供水能力和透气性，满足枣树对肥水的需求，达到优质稳产的目的。微风与和风对枣树有利，可以促进气体交换，改变温度、湿度，促进蒸腾作用，有利于生长、开花、授粉与结实。大风与干热风对枣树生长发育不利。枣树在休眠期抗风能力很强，萌芽期遭遇大风可改变嫩枝的生长状态，抑制正常生长，甚至折断树枝等；花期遇大风，尤其是西南方向的干热风降低空气湿度，增强蒸腾作用，致使花、蕾焦枯，落花落蕾，降低坐果率；果实生长后期或熟前遇大风，由于枝条摇摆，果实相互碰撞，导致落果，称为“落风枣”，效益降低。枣树常用树形主要有主干疏层形、自由纺锤形、自然半圆头形和开心形。我国北方地区，冬春少雨干旱多风，容易造成剪口干旱失水，从而影响剪口芽萌发，故每年春季3—4月进行休眠期的修剪。盛果期枣树修剪以培养或更新结果枝组为重点，延长盛果期的年限，长期维持较高的产量，可采用疏枝、短截、衰老骨干枝回缩相结合的方法。春季土壤解冻后、枣树萌芽前进行追肥，目的是促进早萌芽，保证萌芽所需营养，提高花芽分化质量。此次追肥以氮肥为主，每株追施纯氮肥0.4kg，锌铁肥0.25～0.75kg,施肥后及时灌透水。灌水后根据土壤墒情及时翻耕,保持土壤疏松，促进根系生长，提高根系吸收肥水能力。萌芽后，当芽长到5cm时，及时抹去无用芽、方向不合适的芽，目的是防止嫩芽萌发形成大量的枣头，节省养分，促进枣树健壮生长和结果。摘心是摘除枣头新梢上幼嫩的梢尖。枣头一次枝摘心为摘顶心，二次枝摘心为摘边心。新梢生长期摘心可削弱顶端优势，促进二次枝生长，形成健壮结果枝组。4月下旬至5月上旬密植枣园可全园覆草，枣粮间作园可在树行内进行覆草，普通枣园可在树盘覆草。枣园覆草可减少地面60%的蒸发量，提高土壤含水量10%左右，同时长期覆草，由于覆草后经过雨季一般会烂掉，因而可有效地增加土壤有机质的含量。主要以麦秸、杂草和树叶为主，每667m2用量1500～2000kg。覆草厚度一般在15～20cm为宜，覆盖后在草上面盖一层薄土，防止火灾。

杏树是蔷薇科、李属梅亚属的一种落叶乔木，在自然生长时，树冠高达10m以上，树龄一般50～80年，如条件适合，单株寿命可达200～300年。杏是深根性果树，根系生长能力极强，侧根多呈直角着生，多数分布在10～50cm土层。根组织细胞体积小，厚壁细胞壁厚、细胞排列紧密，组织不易失水，所以杏根具有较高的抗旱力。杏树的芽属早熟性芽，很小，根据外部形态和内部构造分为叶芽和花芽两大类，叶芽瘦小，呈长三角形，内含有枝叶原始体，萌发后根据营养状况及着生的位置，成为长、中、短枝，是扩大树冠和增加结果面积的基础。杏树的花芽是纯花芽，比较肥大。杏树潜伏芽的寿命很长，20～30年后，当主枝受到强烈刺激时，仍可萌发成枝，这为进入衰老期的杏树树冠更新复壮创造了有利条件。由于杏树具有早熟性的芽，因种子实生繁殖的杏苗，一般在3～4年后开始结果、用嫁接法繁殖杏树苗第二年就可开花结果，定植后7年左右进入盛果期，以15～30年生杏树产量最高，盛果期可维持30～40年之久，如果栽培管理条件能够满足杏树生长要求，盛果期持续时间还会更长，杏的花芽多为侧芽，生长过旺的徒长枝上不易形成花芽，在生长势中庸和健壮的结果枝上，花芽形成较多。1.砧木李树栽培上应用的多为嫁接苗木，砧木绝大部分为实生苗，少数为根蘖苗。李树的根系属浅根系，多分布于距地表5～40cm的土层内，但由于砧木种类不同根系分布的深浅有所不同，毛樱桃为砧木的李树根系分布浅，0～20cm的根系占全根量的60%以上，而毛桃和山杏砧木的分别为49.3%和28.1%。山杏砧李树深层根系分布多，毛桃砧介于二者之间。2.根系活动规律根系的活动受温度、湿度、通气状况、土壤营养状况以及树体营养状况的制约。根系一般无自然休眠期，只是在低温下才被迫休眠，温度适宜，一年之内均可生长。土温达到5～7℃时，即可发生新根，15～22℃为根系活跃期，超过22℃根系生长减缓。土壤湿度影响到土壤温度和透气性，也影响到土壤养分的利用状况,土壤水分为田间持水量的60%～80%是根系适宜的湿度，过高过低均不利于根系的生长。根系的生长节奏与地上部各器官的活动密切相关。一般幼树一年中根系有三次生长高峰，一般春季温度升高根系开始进入生长高峰，随开花坐果及新梢旺长生长减缓。当新梢进入缓慢生长期时进入第二次生长高峰。随果实膨大及雨季秋梢旺长又进入缓长期。当采果后，秋梢近停长土温下降时，进入第三次生长高峰。结果期大树则只有两次明显的根系生长高峰。了解李树根系生长节奏及适宜的条件，对李树施肥、灌水等重要的农业技术措施有重要的指导意义。李树的芽分为花芽和叶芽两种，花芽为纯花芽，每芽中有1～4朵花。叶芽萌发后抽枝长叶，枝叶的生长同样与环境条件及栽培技术密切相关。在北方李树一年之中的生长有一定节奏性，如早春萌芽后，新梢生长较慢，有7～10d的叶簇期，叶片小、节间短，芽较小，主要靠树体前一年的贮藏营养。随气温升高，根系的生长和叶片增多，新梢进入旺盛生长期，此期枝条节间长，叶片大，叶腋间的芽充实、饱满，芽体大。此时是水分临界期，对水分反应较敏感，要注意水分的管理，不要过多或过少。此期过后，新梢生长减缓，中、短梢停长积累养分，花芽进入旺盛分化期。雨季后新梢又进入一次旺长期—秋梢生长。秋梢生长要适当控制，注意排水和旺枝的控制，以防幼树越冬抽条及冻害的发生。李树是喜光果树，在良好的光照条件下树势旺盛、生长健壮、叶片浓绿、产量高、品质好。若光照不足，枝条细弱，花芽少而不充实，产量低。所以，李树要通过整形修剪的办法，避免枝条重叠，使叶面积分布匀称，提高光能利用率。在李树的建园中，要特别注意选择园地，合理安排栽培密度和方式。李树对温度适应性较强，但在它的生长季节，仍然需要适宜的温度，才能使生长发育与开花结果良好。李树花期最适宜的温度为12～16℃，不同发育阶段对低温的抵抗能力不同，如花蕾期-1.1～5.5℃就会受害；花期和幼果期-0.5～2.2℃则会受害。李树的花期早，花易遭受晚霜严重冻害，为了获得李树的高产稳产，应采取有效的防霜措施。可采用树干涂白、霜前灌水及熏烟防霜法。李树对土壤水分反应敏感。在开花期多雨或多雾能妨碍授粉；在生长期，如果水分过多，能使李树的根缺乏氧气，而且土壤中还积累了二氧化碳和有机酸等有毒物质，因而影响了根系的发育，严重的可使植株窒息而死。所以，李树宜栽在地下水位低、无水涝危害的地方；在幼果膨大初期和枝条迅速生长时缺水，则严重影响果实发育而造成果实的脱落，减少产量。李树对土壤要求不严，只要土层较深、土质疏松、土壤透气良好和排水良好的平地和山地都可以种植。对低洼地必须挖深沟，起高畦种植，以利于排水防涝。杏树对环境条件的适应性极强。在我国普通杏树从北纬23°～48°，海拔3800m以下都有分布。主产区的年平均气温为6～14℃。杏树休眠期能抵抗-40～-30℃的低温，例如:龙垦1号可抵抗-37.4℃低温，但品种间差异较大。杏树的适宜开花温度为8℃以上，花粉发芽温度为18～21℃。早春萌芽后，如遇-3～-2℃低温，已开的花就会受冻，受冻的花中雌蕊败育的比例较高。在中国杏树的主产区花期经常发生晚霜为害。杏果实成熟要求18.3～25.1℃。在生长期内杏树耐高温的能力较强。杏树喜光。光照充足，生长结果良好。光照不良则枝叶徒长，雌蕊败育花增加，严重影响果实的产量和品质。杏树抗旱力较强，但在新梢旺盛生长期、果实发育期仍需要一定的水分供应。杏树极不耐涝，如果土壤积水1～2d，会导致病虫害严重，果实着色差，品质下降，发生早期落叶，甚至全株死亡。杏树对土壤要求不严，平原、高山、丘陵、沙荒、轻盐碱土上均能正常生长，但以排水良好、较肥沃的沙壤土为好。李、杏树初果期长势很旺，生长量大，生长期长。此期的修剪任务主要是尽快扩大树冠，培养全树固定骨架，形成大量的结果枝，为进入结果盛期获得丰产做好准备。李树休眠期修剪以轻剪缓放为主，疏除少量影响骨干枝生长的枝条，对于骨干枝适度短截，促进分枝，以便培养侧枝和枝组，扩冠生长。李子树一般延长枝先端发出2～3个发育枝或长果枝，以下则为短枝、短果枝和花束状果枝；直立枝和斜生枝多而壮，有适当的外芽枝可换头开张角度。杏树休眠期修剪任务主要是短截主、侧枝的延长枝，一般剪去1年生枝的1/4～1/3为宜。少疏枝条，多用拉枝、缓放方法促生结果枝，待大量结果枝形成后再分期回缩，培养成结果枝组，修剪量宜轻不宜重。在核果类果树中，杏萌芽率和成枝率较低。一般剪口下仅能抽生1～2个长枝，3～7个中短枝，萌芽率在30%～70%，成枝率在15%～60%。杏幼树生长强壮，发育枝长可达2m，直立，不易抽生副梢，多呈单枝延长。发育枝短截过重，易发粗枝，造成生长势过旺，无效生长量过大;短截过轻，剪留枝下部芽不易萌发，会形成下部光秃现象。因此，杏初果期树的延长枝短截应以夏剪为主，通过生长期人工摘心或剪截可促发副梢，加快成形。盛果期的李树，因结果量逐年增加，枝条生长量逐年减少，树势已趋稳定，修剪的目的是平衡树势，复壮枝组，延长结果年限。盛果期骨干枝修剪要放缩结合，维持生长势。上层和外围枝疏、放、缩结合。加大外围枝间距，以保持在40～50cm为宜。对树冠内枝组疏弱留强，去老留新，并分批回缩复壮。盛果期杏树产量逐年上升，树势中等，生长势逐渐减弱。修剪的主要任务是调整生长与结果的关系，平衡树势，防止大小年的发生，延长盛果期的年限，实现高产、稳产、优质。主要任务有:延长枝剪去1/3～1/2，疏除部分花束状结果枝。对生长势减弱的枝组回缩到抬头枝处，恢复生长势，改善光照条件。骨干枝衰老后，可按照粗枝长留，细枝短留原则，剪留1/3～1/2。此期的杏树，树冠内包括徒长枝在内的新梢，几乎都能着生花芽而成为结果枝，花量大，修剪时应根据预期产量、败育花率、坐果率、单果重等，在留足花芽的前提下，通过疏截过多的果枝，控制留花量，以减少养分浪费。李树、杏树定植后3～4年、树冠尚未覆盖全园时，可以间作一年生豆科作物、蔬菜、草莓、块根与块茎作物、药用植物等矮秆作物。成龄园多进行覆盖或种植绿肥及生草。覆盖有机物后，使表层土壤的温度变化减小，早春上升缓慢且偏低，有利于推迟花期，避免李、杏树遭受晚霜危害。李树、杏树追肥时期为萌芽前后、果实硬核期、果实迅速膨大期和采收后，后两次可合为一次。生长前期以氮肥为主,生长中后期以磷钾肥为主。氮磷钾比例为1∶0.5∶1，土壤及品种不同，比例有所差异。追肥量可按每667m2施尿素25～30kg、钾肥20～30kg、磷肥40～60kg的量，分次进行。除土壤追肥外，也可进行叶面喷施。如萌芽前结合喷药喷施3%～5%的尿素水溶液，可迅速被树体吸收。谢花2/3后叶面喷0.3%磷酸二氢钾+0.2%硼砂，对花粉萌发和花粉管生长具有显著的促进作用。我国李、杏树栽培区多干旱，冬春旱尤为严重，对萌芽、开花、坐果极为不利。为了果园丰产、优质，早春李园、杏园必须及时灌水。春季花前灌水会使花芽充实饱满，为充分授粉和提高坐果率打好基础。早春灌水量不宜过大，以水渗透根系集中分布层，保持土壤最大持水量的70%～80%为宜。花前灌水可结合追肥同时进行。树盘漫灌费水，沟灌、穴灌、喷灌、滴灌相对节水，可酌情采用。李树、杏树花量大，坐果多，往往结果超载。适当疏花疏果可以提高坐果率，增大果个，提高质量，维持树势健壮。疏花越早越好，一般在初花期就要疏花。疏花时先疏去枝基部花，留枝中部花。强树壮枝多留花，弱树弱枝少留花。在花后15～20d进行，但早期生理落果严重的品种，应在花后25～30d，确认已经坐住果后进行。一般进行两次，第一次先疏掉各类不良果和过于密集的果，10d以后进行定果。生产上可根据果实大小、果枝类型和距离留果。小型果品种，一般花束状果枝和短果枝留1～2个果，果实间距4～5cm;中型果品种每个短果枝留1个果，果实间距6～8cm;大型果品种，每个短果枝留1个果，果实间距10～15cm。中果枝留3～4个果，长果枝留5～6个果。要根据树冠大小、树势强弱和品种特性，确定单位合理产量，如大石早生李盛果期树产量应控制在1500～2000kg/667m2,黑宝石李盛果期树产量应控制在3000～4000kg/667m2。杏树疏果宜早不宜迟，在花后15～25d进行，最迟在硬核前完成，以利果实膨大，避免营养浪费。一般短枝留1个果，中枝留2～3个果，长枝留4～5个果。也可按距离进行，即小型果间距3～5cm,中型果间距5～8cm,大型果向距10～15cm,保证全树20片叶以上留1个果。鲜食杏的产量控制在1000～1500kg/667m2为宜。疏果时要注意疏去小果、病虫果、发育不正常果、双果中直立向上果、过大过小果、果形不正及有伤的果。

猕猴桃果脯 （图8-1） 在制作过程中，技术要求比较高，要根据当地的具体情况采取具体措施，本书介绍的方法可为生产者提供参考。图8-1 猕猴桃果脯原料分选→清洗→去皮→切片→烫漂→糖渍→糖煮→干燥→整形→包装（1） 原料分选。选用八成半成熟的果实，果实要有一定的硬度，无病虫害、霉烂变质。（2） 清洗。用流动自来水将猕猴桃表面的泥沙及污物洗涤干净。（3） 去皮。用80～90℃的浓碱液浸泡30～60秒去皮，然后迅速用自来水冲洗掉果实上的残留皮屑和碱液，并用1%的盐酸溶液浸泡以中和残留的碱液。（4） 切片。将猕猴桃果实横切成厚度为5～6毫米的薄片，并浸入1%～2%的盐水中，以抑制氧化酶的活性。（5） 烫漂。将猕猴桃片在沸水中烫漂2分钟左右，以杀灭氧化酶活性，并迅速用自来水冷却。（6） 糖渍。沥干水分的猕猴桃片，用白砂糖糖渍20～24小时，砂糖用量为称猴桃片重的40%，砂糖在上、中、下层的分布比例为5 ∶ 3 ∶ 2。（7） 糖煮。取出糖渍好的猕猴桃片，沥干糖液，在糖液内加入砂糖，使含糖量达到65%左右，煮沸后加入糖渍过的猕猴桃片，再次煮沸25～30分钟。当糖液含糖量达到70%～75%时，取出果片沥干糖液。（8） 干燥。将糖煮过的果片，放在竹筛网 （或不锈钢丝网） 上，在55℃左右的烘房内干燥24小时左右。（9） 整形包装。干燥后的果脯片需压平，然后用玻璃纸或聚乙烯薄膜包装。用猕猴桃果实制果酱的利用率高达90%以上，果酱营养丰富，甜酸适度，有良好的开胃生津效果，极受消费者欢迎。（1） 感官指标。色泽呈黄绿色或黄褐色，有光泽，均匀一致。口感具有猕猴桃酱所特有的风味，无焦煳味，无异味。形态为蒸制酱体呈胶黏状，带种子，保持部分果块，置于水面上允许徐徐流散，不得分泌汁液，无糖结晶。不允许有杂质存在。（2） 物理生化指标。每罐净重允许公差±3%，但每批平均不低于标明的净重。总糖量不低于57%（按转化糖计），可溶性固形物不低于65%（按折光计）。（3） 微生物指标。无致病病菌及因微生物作用而引起的腐败征象。（4） 罐型。旋口玻璃瓶或铁罐。选果→清洗、消毒→去皮→破碎→软化→加糖浓缩→装罐、封罐→杀菌→冷却→擦罐入库→包装→贮运（1） 原料选择。加工果酱的猕猴桃果实要求果心较小，种子较少，含有丰富的果胶物质和有机酸，果肉甜酸适度，芳香味浓，颜色一致，成熟良好。果肉颜色不同的果实，应分别进行加工。要剔除腐烂变质果、硬果及成熟过度果。（2） 原料清洗。先用1%的漂白粉溶液或0.1%的高锰酸钾溶液进行消毒处理，再用清水彻底清洗。（3） 去皮。可用人工法将果实切开，用勺子将果肉挖出；也可用化学去皮法，将10%～25%的氢氧化钠溶液煮沸，放入洗净的果实，浸泡1～2分钟，冲洗去皮以后再放入1%的盐酸溶液中，常温下处理30秒，立即用流水冲洗10分钟。（4） 打浆软化或破碎软化。①打浆软化是将果实去皮后，倒入打浆机中进行打浆。打浆机的筛板应根据留籽或去籽的加工要求进行选择。将果浆倒入夹层锅中，再加入75%的糖浆进行软化 （10～15分钟），这样可制成全泥状果酱。②破碎软化是将洗净去皮的果实，用破碎机破碎成小碎块，然后倒入夹层锅中加入糖液软化，这样可制成块状果酱。（5） 浓缩。浓缩包括常压浓缩和真空浓缩两种方法。常压浓缩是把果酱倒入夹层锅后，再加适量75%的糖液 （须先经过滤），然后加热，并不断搅拌，以便加速蒸发和避免发生焦糊。浓缩时蒸汽压力为245～294千帕，浓缩时间为30分钟左右。浓缩时间过长，易使果酱颜色变褐，凝胶能力降低，贮藏期蔗糖返沙。在有条件的厂中，可将原料用泵打入真空浓缩锅内，在减压低温条件下进行蒸发浓缩，能有效地避免养分的损失。为了提高果酱的质量，可添加适量的果胶，使色泽和风味有所提高。真空浓缩的配料为：果酱100千克、白糖100千克或75%的糖水135千克、真空浓缩锅的真空度约80千帕 （600毫米汞柱），浓缩到65%～66%（用折光计测） 出锅，再加热到100℃左右，以后保温在90℃以上。（6） 装罐。用经消毒的四旋瓶装酱，酱温不能低于86.5℃，趁热封罐，注意勿外溅污染瓶口。（7） 杀菌及冷却。玻璃瓶封口后应在100℃条件下立即杀菌20分钟，分段冷却，以防玻璃瓶炸裂。（8） 擦罐、入库。将杀菌后的玻璃瓶擦净入库。猕猴桃果汁是极受市场欢迎的保健饮料，用猕猴桃果汁还可以加工浓缩果汁、果酒、汽水、果冻、果晶等多种产品。（1） 感官指标。色泽呈黄绿色或浅黄色。口感具有猕猴桃汁特有的风味，酸甜适度，无异味。形态为汁液均匀混浊，静置后允许有沉淀，但摇动后仍呈均匀状态。不允许有杂质存在。（2） 物理生化指标。每罐净重为200克或250克，允许公差±3%，但每批平均不低于净重。可溶性固形物为11%～15%，总酸0.3%～1%（以柠檬酸计），原果汁含量不低于40%。（3） 微生物指标。无致病病菌及因微生物作用而引起的腐败征象。（4） 罐型。采用QB 221—1976马口铁罐型规格系列标准。选果→清洗、消毒→去皮→破碎、打浆→榨汁→过滤→调配→加热→装罐→封罐→杀菌→冷却→擦罐入库包装→贮运（1） 原料选择。要求果实成熟度达八九成，新鲜完好，色泽正常，无病虫果和烂果。（2） 原料清洗。先用1%漂白粉溶液或0.1%的高锰酸钾溶液进行消毒，清除虫卵及微生物，再用清水清洗几次。（3） 去皮。可用人工法将果实切开，用勺子将果肉挖出；也可用化学去皮法，将10%～25%的氢氧化钠溶液煮沸，放入洗净的果实，浸泡1～2分钟，冲洗去皮以后再放入1%的盐酸溶液中，常温下处理30秒，立即用流水冲洗10分钟。（4） 破碎、打浆。将去皮的果实在破碎机中破碎或在打浆机中打浆。（5） 榨汁。把破碎成浆的果实加热到60～65℃，放入榨汁机中榨汁 （立式压汁机），榨汁时如果在果浆中加入适量的果胶分解酶可使出汁率由55%提高到60%。（6） 过滤。在过滤机中过滤或用平板布过滤，把果汁中的残籽或果肉滤出。这时果汁混浊，若在低温下冷冻，吸取上清液便得到澄清果汁。若需制混浊果汁，则把滤出的混浊果汁在真空脱气罐中进行脱气，使果汁色泽不变，然后用高压均质机进行均质，使果汁中的细小颗粒进一步细碎，促使果汁溶出，使果胶与果汁亲和，保持果汁的混浊度。（7） 调配。按原果汁含量的40%加白砂糖配成可溶性固形物为35%以上的果汁。（8） 加热。将调配好的果汁通过灭菌器加热。（9） 装罐。当果汁温度在70～80℃时，应当迅速装入罐或瓶 （罐、瓶必须提前清洗干净和消毒）。（10） 封罐。趁热将罐封口，真空度要求46.7 千帕 （350毫米汞柱） 以上，要封口良好。（11） 杀菌及冷却。装罐密封后立即杀菌 8～15 分钟（100℃），杀菌后冷却到40℃时取出。（12） 擦罐、入库。冷却后将罐擦干净入库。原料选择→清洗→去皮→修整→预煮→装罐→排气→密封→杀菌→冷却→检验→贴标→成品（1） 原料选择与清洗处理。选用七八成熟、果实个体大小较均匀的中等果实为原料，剔除烂果、过大过小果、病虫果、机械伤及畸形果。品种以老皮绿肉为好，用清水清洗干净，晾干备用。（2） 去皮、修整。将清洗干净的果实投入煮沸的烧碱溶液（10%～15%） 中浸泡2～3分钟，待果皮由黄褐变黑并产生裂缝时，用笊篱捞出。戴上橡皮手套，用双手轻轻搓去果皮，然后置于清水中不断清洗，除去碱味。用不锈钢刀挖去花萼、果蒂，去除残余果皮及斑疤，并按色泽和大小分级。（3） 预煮。将去皮修整后的果肉放在沸水中预煮3～4 分钟，捞出后迅速冷却。（4） 糖水配制。65升清水加35千克白糖，加热煮沸后用绒布或4层纱布过滤。用柠檬酸调 pH 值为4，糖水温度保持在80℃以上。糖水随用随配，不得积压。（5） 装罐。选色泽一致、大小均匀的果块装罐，然后加入糖水，罐内留2～3毫米的顶隙，罐盖与胶圈须用100℃热水烫煮消毒 5 分钟。装罐后，放入排气箱内进行排气，蒸汽温度98～100℃，排气10～12分钟，至罐中心温度达到80℃以上时封盖。如无排气箱，也可用蒸锅代替。排气温度和排气时间要妥善掌握。封盖后立即杀菌，即5分钟内使杀菌锅内的温度上升到100℃，并在此条件下保持18分钟。猕猴桃果酒，是一种低度酒，一般酒精度为12°左右，较甜，具有猕猴桃特有的果香和醇香，是老少皆宜的产品。选果→清洗、消毒→破碎→主发酵→压榨分离→后发酵→陈酿→调配→过滤→装瓶→成品（1） 原料选择。原料需要充分成熟发软且有猕猴桃浓香味的果实，剔除腐烂变质、病虫果及未熟果。（2） 清洗。用清水洗去果实上的泥沙、虫卵及其他杂质。（3） 破碎。将洗净的果实在破碎机内破碎成浆状或糊状。（4） 主发酵。把已破碎的果浆，倒入或泵入经过消毒的发酵池或缸内，加入5%的酒母糖液，搅拌均匀，发酵温度维持在25～28℃，每天搅拌2次 （上、下午各1次），使发酵均匀。当残糖下降到1%时，即可进行压榨分离。（5） 压榨。主发酵结束后进行压榨，使皮渣与酒液分离。压榨后的皮渣，还可进行2次发酵，蒸馏白酒或称 “白兰地”。（6） 后发酵。酒液转入后发酵，当酒度达到12°时，再加入适量砂糖，在20～25℃条件下，进行30天左右的后发酵，之后可转入陈酿。（7） 陈酿。后发酵结束后酒液不清，不容易沉淀，此时可将酒液倒入池或缸中，调整酒度到16°左右，置于15～18℃的室温下进行陈酿，翌年2月进行倒池或倒缸，年底即可调配成成品酒。（8） 调配过滤。调配酒度可按12°～16°调配，经过滤后，要求酒液透明。（9） 装瓶。将酒装入已经消毒好的瓶中，装后立即压盖密封。（10） 包装成品。通过检查质量合格的猕猴桃酒，贴上商标，作为成品销售。

1.症状识别发病初期，幼苗茎基部产生椭圆形，暗褐色病斑，病株停止生长，叶片失水，萎蔫下垂。以后病斑绕茎一周扩展，缢缩、干枯，根部变黑直立枯死。潮湿条件下，病部有褐色菌丝体和土粒状菌核。2.病原幼苗立枯病立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn，属半知菌亚门、丝核菌属真菌。3.发病特点以菌核在土壤中和病残体上越冬。病菌在土壤中能够长期存活，在适宜的环境条件下，从伤口或表皮直接侵入为害。病菌可借雨水、农具等传播。苗床高湿，播种过密，光照不足，通风条件差，均有利于发病。4.防控技术（1） 选择土质疏松、排水良好的地段种植。（2） 实行轮作，合理密植。（3） 盆栽植株，雨后要排出盆中积水。（4） 定植后每隔10d喷施1次50%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液，或用50%福美双可湿性粉剂500倍液，或用70%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液防控。1.症状识别幼苗猝倒病发病初期幼苗茎基部呈水渍状斑，后逐渐变为淡褐色，并凹陷缢缩。病斑迅速绕茎基部一周，幼苗倒伏，幼叶依然保持绿色。最后病苗腐烂或干枯。当土壤湿度较高时，病苗及附近土表常有白色絮状物出现，即菌丝体。2.病原由多种真菌引起，其中最主要的是瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum （Eds.） Fitzp.，属鞭毛菌亚门、腐霉属。病菌腐生性较强，能在土壤中长期存活。3.发病特点病菌以卵孢子在土壤或病残体上越冬。在适宜的环境条件下，卵孢子萌发，产生孢子囊或游动孢子，借气流、灌溉水和雨水传播，也可由带菌的播种土和种子传播，引起幼苗发病和蔓延。育苗土湿度大、播种过密，有利于猝倒病的发生。连作或重复使用病土，发病严重。4.防控技术（1） 选择排水较好、通风透光的地段育苗。（2） 苗期要控制浇水量，土壤不宜过湿，播种不宜过密。（3） 病害严重的地区，避免连作，或播种前对土壤进行消毒，使用50%多菌灵可湿性粉剂，或用50%福美双可湿性粉剂600～1000倍喷施，用塑料布覆盖7d左右，1周后方可播种。（4） 发病初期，使用25%甲霜灵可湿性粉剂800倍液，或用40%乙磷可湿性粉剂200～400倍液，或用75%百菌清可湿性粉剂600倍液喷雾。1.症状识别主要发生于植株主干基部，有时也发生于根颈或侧根上。发病初期病部产生乳白色或肉色肿瘤，逐渐变成褐色或深褐色，圆球形，表面粗糙，凹凸不平，有龟裂。根系发育不良，细根极少，地上部生长缓慢，树势衰弱，严重时叶片黄化、早落，甚至全株枯死。根癌病2.病原根癌土壤杆菌 Agrobacterium tumefacins（Smith et Towns） Conn.，属细菌界，薄壁菌门、土壤杆菌属细菌。3.发病特点病菌在寄主癌瘤组织皮层内和土壤中越冬。病菌可随癌瘤组织在土壤中存活几个月到1年左右。病菌通过伤口侵入寄主，侵入后刺激细胞加速分裂，产生大量分生组织，从而形成癌瘤。苗木带菌是病害远距离传播的重要途径。呈碱性而潮湿的土壤，伤口多的寄主，发病严重。4.防控技术（1） 严格检疫，有肿瘤的苗木必须集中销毁。（2） 苗木栽种前用1%硫酸铜液浸5min，用水洗净后栽植。（3） 挖除病根后，周围的土壤用硫磺粉50～100g/m2消毒。（4） 苗圃应设在无根癌病的地区，如病区可实行2年以上轮作。果树根结线虫病种类很多，常危害果树根部及球茎等，导致地上部生长发育不良，叶片发黄，严重时可造成全株萎蔫枯死。1.症状识别根结线虫病线虫为害根部，在幼根上产生许多小根结，长大后似绿豆大小，近圆形，上生有细根毛。地上部长势衰弱，新生叶片尖、缘皱缩，呈黄白色，后渐变枯黄，提早落叶，严重者全株死亡。2.病原有北方根结线虫Meloidogyne hapla Chitwood、南方根结线虫Meloidogyne incognita （Kofoid et White） Chitwood等。属动物界，线虫门，根结线虫属。可为害多种蔬菜、果树及观赏果树。3.发病特点以卵和幼虫在根结和土壤中越冬。翌年春天，土壤中幼虫开始侵染新的须根，并借土壤、灌溉水等不断传播、繁殖、危害。4.防控技术（1） 加强检疫，勿栽植带线虫的苗木。（2） 发现病根及时处理，在病株周围穴施或沟施98%棉隆微粒剂30～40g/m2 ，或施用10%福气多颗粒剂2kg/667m2 ，或用1.8%阿维菌素乳油2500倍液灌根，用药后盖土。（3） 实行轮作，及时清除紫花地丁等野生寄主，减少病源。（三） 白纹羽病1.症状识别主要为害果树根部和根颈部。发病初期，病部皮层组织松软，出现近圆形褐色病斑。以后病部呈水渍状腐烂，深达木质部，并有黄褐色汁液渗出。后期病部组织干缩纵裂，木质部枯朽，表面有白色柔嫩的根状菌索缠绕，后转变为灰褐色或棕褐色。树势衰弱，叶片自上而下变黄凋萎，枝条干枯，最后全株枯死。2.病原树木白纹羽病褐座坚壳菌 Rosellinia necatrix （Hart.） Berl.，属子囊菌亚门、褐座坚壳属。可为害多种果树及观赏果树。3.发病特点病菌以菌核和菌索在土壤或病残体上越冬。当菌丝体接触到寄主果树时，菌丝体即从根部表面皮孔侵入。根部死亡后，菌丝穿出皮层，在表面缠结成白色或灰褐色菌索。菌索可以蔓延到根际土壤中，或铺展在树干基部土表。一般从3月中、下旬开始发生，6—8月为发病盛期，10月以后停止发生。4.防控技术（1） 严格实行苗木检疫制度，对可疑苗木用1∶1∶100倍波尔多液浸根1 h，或用1%硫酸铜液浸根3 h，或用2%石灰水浸根0.5 h，浸后用清水洗净栽植。（2） 选用无菌土壤和肥料栽培。（3） 重病区应实行轮作。（4） 加强栽培管理，促使植株根系发达，生长旺盛，提高植株抗病力。（5） 轻病株应刮去病部腐烂变色的组织或切除腐朽的根并销毁，对伤面可用70%酒精消毒，然后再涂以5%硫酸铜。亦可在病穴内灌70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液或用50%代森铵水剂400倍液防控。对重病株应及时挖除，集中销毁，并用20%石灰水进行土壤消毒处理。果树根部害虫又称地下害虫，是指生活于土壤中，主要以成、幼 （若） 虫为害果树的地下部分 （如种子、地下茎、根等） 和近地面部分的一类害虫，造成死株缺苗，是果树害虫中的一个特殊生态类群。我国已知地下害虫320多种，主要包括地老虎类、蝼蛄类、蛴螬类、金针虫类、蟋蟀类、地蛆类。地老虎属鱗翅目，夜蛾科，是重要的地下害虫。地老虎的种类很多，为害果树严重的有小地老虎 Agrotis ypsilonRottemberg、大地老虎A. tokionis和黄地老虎A. segetum等。其中小地老虎分布于全国各地，为害茄科、豆科、十字花科、葫芦科、百合科蔬菜、果树、花卉、苗木等100 多种果树。地老虎低龄幼虫昼夜活动，取食子叶、嫩叶和嫩茎，3龄后昼伏夜出，可咬断近地面的嫩茎，造成缺苗断垄甚至毁种。1.形态识别小地老虎大地老虎成虫黄地老虎成虫2.防控技术（1） 设置灭虫灯，或糖酒醋毒液诱杀成虫。（2） 清除苗圃杂草，减少着卵量及恶化低龄幼虫食料条件。（3） 泡桐树叶诱集，或清晨于断苗周围人工捕杀幼虫。（4） 在低龄幼虫期，叶面喷施50%辛硫磷乳油1000倍液，或用2.5%溴氰菊酯乳油3000倍液。防控3龄后的幼虫用青草拌90%晶体敌百虫毒饵诱杀，或用50%辛硫磷乳油1000倍液灌根。蝼蛄，俗称土狗、地狗、拉拉蛄等，属直翅目，蝼蛄科。常见的有东方蝼蛄 Gryllotalpa orientalis Burmeister、华北蝼蛄G. unispina Saussure两种。东方嵝蛄几乎遍及全国，但以南方为多。华北蝼蛄主要分布于北方。蝼蛄食性很杂，为害菊花、一串红、翠菊等多种花卉和草坪草。以成虫、若虫在土中为害多种果树种子、幼根、幼苗、茎、块根，块茎，被害处呈乱麻状。此外，蝼蛄在表土层活动时，造成纵横隧道，拱倒幼苗，使幼苗根部与土壤分离，因失水而枯萎，造成缺苗断垄。1.形态识别东方蝼蛄成虫华北蝼蛄成虫2.防控技术（1） 施用厩肥、堆肥等有机肥料要充分腐熟，减少蝼蛄产卵机会。（2） 灯光诱杀成虫。在闷热天气或雨前的夜晚在19：00—22：00时开灯诱杀。（3） 鲜草或鲜马粪诱杀。在苗床的步道上每隔20 m左右挖一小土坑，将鲜草、马粪放入坑内，次日清晨捕杀，或施药毒杀。（4） 毒饵诱杀。用炒香的麦麸、豆饼等加90%晶体敌百虫30倍液拌匀，于傍晚撒施，诱杀成虫及若虫。（5） 在蝼蛄产卵盛期，挖产卵洞 （洞口下5～10 cm） 捕杀卵及成虫。（6） 灌药毒杀。在受害植株根际或苗床浇灌50%辛硫磷乳油1000倍液毒杀成虫和若虫。金龟甲类害虫的幼虫统称蛴螬，属鞘翅目，鳃金龟科。为害果树严重的有铜绿丽金龟Anomala corpulenta Motschulsky、黑绒鳃金龟Serica orientalis Motschulsky等。金龟甲类害虫广泛分布于全国各地。成虫咬食樱花、梅花、桃花、海棠、月季、木槿、金橘、榆、刺槐、唐菖蒲、大丽花、杨、柳、柿、葡萄、桑等果树叶片，造成不规则缺刻，严重时，食尽叶片，仅剩叶柄。或将花瓣、雄蕊、雌蕊吃光。幼虫咬食果树根部，影响果树正常生长，甚至枯萎。1.形态识别铜绿丽金龟黑绒鳃金龟2.防控技术（1） 人工捕杀，或设置灭虫灯诱杀成虫。（2） 深耕土壤，促进幼虫、蛹、成虫死亡。（3） 成虫为害期喷施90%晶体敌百虫800倍液，或用40%乐斯本乳油1000倍液杀成虫。在幼苗生长期用90%晶体敌百虫30倍液拌于豆饼、油饼上，撒施于土穴 （沟） 中，诱杀幼虫。是用3%辛硫磷颗粒剂施于土中，也可用50%辛硫磷乳油1000倍液灌根杀幼虫。叩头甲类害虫的幼虫统称金针虫，俗名铁丝虫。在我国为害果树的主要有沟金针虫和细胸金针虫两种。细胸金针虫分布广泛，主要是幼虫咬食果树的种子和幼芽，也能咬食幼茎，受害部分不完全被咬断，切口不整齐。幼苗长大后，便蛀入根茎内取食，也能蛀入大粒种子及薯块内为害，被害严重时，果树逐渐枯黄而死。1.形态识别沟叩头甲细胸叩头甲2.防控技术（1） 成虫盛发期，在田埂上堆青草，诱集成虫，清晨捕杀。（2） 冬季翻地灭幼虫。（3） 用3%辛硫磷颗粒剂施于土中，或用40%辛硫磷乳油对水灌根杀灭幼虫。（4） 毒饵诱杀。用90%晶体敌百虫1 份，拌和豆饼碎渣、麦麸等16份，制成毒饵，用量为15～25 kg/hm2。蟋蟀类属直翅目，蟋蟀科。以大蟋蟀分布较广，为害严重。成虫和若虫均可为害多种果树幼苗，是重要的苗圃害虫。1.形态识别成虫体长40～50mm，黄褐色或暗褐色，头较前胸宽。前胸背板中央有1纵线，其两侧各有1个颜色较浅的楔形斑块。后足胫节具2列4～5个刺状突起。若虫外形与成虫相似。大蟋蟀2.发生特点1年1代，以3～5龄若虫在洞内越冬。翌年3—4月开始活动，6—7月成虫盛发，9月开始出现若虫，12月初若虫开始越冬。大蟋蟀为穴居昆虫，昼伏夜出，常在洞口附近觅食，除就地取食外，常将嫩茎切断拖回洞中。通常5～7d才出穴1次，但在交尾盛期外出较频繁，晴天闷热无风或久雨初晴的夜晚，出穴最多。此虫多发生于沙壤土，沙土，植被稀疏或裸露、阳光充足的休闲地，荒芜地或全垦林地等，潮湿壤土或黏土很少发生。3.防控技术（1） 毒饵诱杀。用敌百虫、辛硫磷等拌炒过的米糠、麦麸或炒后捣碎的花生壳，或切碎的蔬菜叶，施于其洞口附近，或直接放在苗圃的株行间，诱杀成虫或若虫。用毒饵诱杀，在播种前或者苗木出土前进行，效果较好。（2） 白天寻找大蟋蟀洞穴，拨开洞口封土，用80%敌敌畏乳油1000倍液或1%灭虫灵乳油2000～3000倍液灌入洞内，使其爬出或死于洞中。地蛆又名根蛆，是对为害果树地下部分蝇类幼虫的统称。国内分布广泛，为害严重的有种蝇和韭蛆等。种蝇属双翅目，花蝇科，分布于全国各地，为害白菜、甘蓝、萝卜、瓜类、豆类、葱蒜类等多种果树。1.形态识别种蝇2.防控技术（1） 合理施用充分腐熟的有机肥。（2） 冬灌或春灌可消灭部分幼虫，减轻为害。（3） 成虫发生期，用糖醋毒液诱杀。（4） 及时清除受害植株，集中处理。（5） 成虫羽化盛期，用 10%菊马乳油 3000 倍液，或用2.5%溴氰菊酯、20%氰戊菊酯乳油3000倍液，或用50%辛硫磷乳油1000倍液等喷雾防成虫；在幼虫危害盛期，用50%辛硫磷乳油1000倍液，或用2.5%功夫乳油1500～2000倍液灌根。

在授粉前2～3天，选择比主栽品种花期略早、花粉量多、与主栽品种亲和力强、花粉萌芽率高、花期长的雄株，在傍晚和清晨采集铃铛花或半开放的雄花 （图6-1）。采集量按每亩雌株需求量不低于1000朵雄花计算，约重1.2千克。图6-1 雄花将釆集到的雄花用手在2～3毫米孔径的筛子或铁丝网上摩擦使花药脱离，或用小型电动粉碎机在低转速下进行粉碎，再过筛剔除花瓣和花丝，收集花药。将花药在牛皮纸或开药器上平摊成薄层，自然阴干后散粉。或在22～25℃、湿度50%的干燥箱中放置一昼夜，即可散粉。散粉后，过100～120目筛，收集纯花粉，放入干燥、清洁的瓶内备用。采集到的花粉最好及早使用。若需贮藏的，可放入家用冰箱4℃冷藏箱里，能够保存8～10天。简易的人工授粉法有花对花法、吹风授粉法及用毛笔、棉球、香烟过滤嘴等进行的点授法。操作简单，但只能用于小规模少量授粉。大量授粉采用的主要是喷粉法和液体授粉法。喷粉法是将花粉与滑石粉、淀粉、脱脂奶粉等按1 ∶ 50的比例混合均匀，用电动喷粉器喷花进行授粉。添加剂不能对花粉有伤害。如果花粉与添加剂混合不均匀，一般要补充授粉一次。液体授粉时，要配制花粉溶液，按蔗糖10%+硼砂0.1%+花粉2%，用清洁的水配制。花粉溶液要随配随用，要求在2小时内用完。授粉时，以全树25%左右的花开放时为宜。最好在晴天无风的上午，用雾化良好的喷雾器，对着雌花啧，一般喷一次即可。授粉后3小时内遇雨或在雨停后进行授粉的，要隔天再喷1次。用多个雄性品种 （株系） 的花粉，进行混合授粉，效果会更好。在花芽形成后，确保在正常的开花、结果的情况下，采取人为辅助措施，促使其充分授粉受精，提高坐果率，形成果大质优的果品。具体措施如下。保证花芽形态分化的顺利完成。其中主要是温度，如初冬大幅度快速降温与早春倒春寒，常造成花芽受冻，产生畸形果，甚至冻死花芽，可采取树体上喷水加植物防冻剂或园内熏烟，提高温度，使园内温度维持在0℃以上。最适宜猕猴开花坐果的花期气候条件是：温度20～25℃，风力1～3级，空气相对湿度70%～75%和良好的微环境如叶幕层厚度、雌雄株距离等。但在我国南方猕猴桃花期易遇低温多雨潮湿天气，北方易遭高温干旱大风气候。可于花前7天左右，进行一次复剪，疏除过多的徒长枝蔓、发育枝蔓、结果枝蔓和发育不好的花蕾，并对留下枝蔓进行摘心以控制营养生长，集中养分促进生殖生长，增加冠内通透性，利于昆虫、风媒的访花、传粉活动。并注意花期排水，防止根系渍水。若遇花期高温干燥、风大的地区，则进行花前灌水，提高土壤和空气湿度，增加花粉活性。猕猴桃是虫媒花，主要靠昆虫传粉，据花期观察，有150多种昆虫在猕猴桃花上活动，但主要靠蜜蜂和熊蜂传粉。风也可传粉，较强的风下，雌花可接受花粉4.2～12.3粒/分钟。但无风条件下，只有20%的雌花接受花粉2粒/分钟。国内外很多研究表明，猕猴桃果实大小和质量与果内种子数目密切相关。美味猕猴桃果实大小与种子数量的相关系数为0.87，中华猕猴桃为0.81。据测定，猕猴桃要达到商品 （出口） 重量标准70g以上的果实，需要520～740粒种子/个果。因此必须要有大量花粉授粉后才能得到预期重量的商品果，只有通过蜜蜂传粉或人工辅助授粉才能显著提高坐果率和果实大小。由于猕猴桃为雌雄异株异花植物，人工栽培时为获得单位面积较高的产量，雌雄配搭时加大了雌株比例，蜜蜂传粉时采集雄株花粉的机遇相对减少。而雌、雄花均产生花粉，又只有雄花花粉才有生活力，因此蜜蜂即使全在猕猴桃植株上飞，所采的花粉有好大部分也是无效花粉，加之猕猴桃的花粉无蜜腺不产生花蜜，对蜜蜂的吸引力不大。如果附近或园内种有其他蜜源植物，如柑橘、绿肥 （三叶草、毛苕子等） 等花期与猕猴桃相同，柑橘等植物花香，又产花蜜，对蜜蜂的吸引力比猕猴桃大，蜜蜂飞到猕猴桃植株上的机遇少。因此，放蜂时必须采取措施：一是加大蜂群，据国内外调查研究，每1～2亩最好能达到一箱；二是提早在开花前几天或最迟必须在雌花有10%～15%开花时将蜂箱放到果园内，放在向阳、温暖并稍有遮阴的地方，一般都在主防风林带附近。同时，在喂养蜜蜂的蜂蜜中加入猕猴桃的花粉，让花粉的香气刺激蜜蜂的条件反射，可增加蜜蜂对猕猴桃花的访花次数。此外，对于花期与猕猴桃花期相同的间作物，如三叶草、苕子、月季、枸杞、刺槐等，在猕猴桃花期前提前刈割，以增加蜜蜂专访猕猴桃花的机会。蜜蜂不喜在厚厚的叶幕层中采粉，喜欢在阳面采粉。因此，在不影响产量前提下尽量减少叶幕层，或通过整形修剪改善树体的通风透光条件，既利于蜜蜂传粉，也利于光合作用和减少病虫害。在放置蜜蜂的果园绝对不能用药剂防治病虫害，只有将蜜蜂搬走后才能喷洒农药，以免伤害蜜蜂。据研究，猕猴桃每朵雄花约需2500粒花粉，而蜜蜂每次只能传送900粒花粉，因此必须多次传粉才能授粉受精良好。此外蜜蜂常沿树行活动，不太喜欢在树行之间串行，建园配置授粉树时最好每一行里都应合理分布，才能充分保证蜜蜂传粉。猕猴桃的花多集中在5—8时开放，并释放花粉，至13—14时达到顶峰，雄花在开放后5天内都能释放花粉。据研究，雄花花粉的发芽力 （生活力） 在室温下能保持3～5天。若保藏在5℃以下低温可保持10天左右。猕猴桃的花期一般6～8天。但无论雌花或雄花，其单花开放时间一般为2～4天。花期的长短主要与温度、湿度有关。如果花期遇到低温阴雨天气致使昆虫活动受到限制，或雌、雄株花期不遇时，应进行人工辅助授粉，以保证正常结果。人工授粉主要有以下几种方式。先从雄株上采集即将开放的雄花，带回室内用镊子取出花药 （或去掉花瓣） 置于培养皿内 （或放于纸上），在25℃的恒温箱 （或20～25℃的室温下，翻动干燥） 使花药开裂散出花粉，筛去杂物，贮藏于低温干燥的瓶内备用。待雌花开放时 （1～2天内），于8—10时用小毛笔或铅笔的橡皮头粘花粉点于正开放的雌花柱头上即可。如有条件，最好有多种雄花的花粉混合使用，更利于选择授粉提高受粉率；亦可采用花对花的方法，即于8—12时摘取正在开放的雄花，花药对准雌花的柱头，轻轻将花粉粘于雌花的柱头上，可随采随对，一般1～2朵雄花可授粉约10朵的雌花。手工授粉时，动作要轻，切不可损伤柱头。将备用的花粉按1份花粉、10份蔗糖、89份水重量比的比例配成悬浮液，用干净的喷雾器 （或授粉器） 于9—11时喷到当天开放的雌花柱头上即可。花粉必须随用随配，以免影响生活力。喷时雾点要细，因猕猴桃雌花开放持续时间较长，花期需喷3～4次才能满足授粉需要，因此所采集的花粉当天用不完可贮藏于5℃的低温下保存，以供手工或机械授粉用。各地亦有用生长调节剂处理雌花或小果，以促进坐果率。但不环保，不提倡。猕猴桃花量大，在适宜的条件下，坐果率高，每一个花序都具有结三个果子的潜力，基本上没有生理落果。但坐果太多，势必给树体造成沉重负担，造成小果。而果实的大小，又是猕猴桃生产中一个重要的质量指标。若单株留果越多，在同等条件下，果个越小，并削弱营养生长，造成树体生长势减弱连续生产能力下降，易出现大小年现象，使果实大小不整齐，品质差，商品价值低，树势易早衰。为了均衡树势，达到丰产、稳产、优质、高效，防止早衰，延长结果年限，必须进行疏花疏果。疏花疏果应根据品种特性，管理水平和当时的气候因素来确定其强度和时间。一般讲疏果不如疏花，疏花不如疏蕾。因此一般在现蕾的时候就可开始进行。猕猴桃的雌花有单花和聚伞花序两种。从一个花序来看，一般主花的位置好，生长势强，容易授粉受精，结出的果子生长发育好，个头大，而侧花则相对差。在蕾期先疏除侧蕾，保主花蕾，并剪除位置不好、荫蔽严重、纤细果枝的花序，以减少养分消耗，促进枝梢生长。为了避免疏花过量或花期遇雨授粉不良，影响当年产量，保留的花数应比预留的果数多20%～30%。一般健壮果枝留花5～6朵，中等果枝3～4朵，弱者1～2朵。疏果应在谢花后开始，一般在谢花后60天内。幼果的体积和鲜重增长最快，可增至其成熟时的70%～80%。因此疏果越早越好，一般应在谢花后20天内完成，以节约树体的养分，促进果实迅速膨大，提高产量和质量。疏果时主要疏除畸形果、伤果、病虫果、侧生果、果枝基部果。因基部果个小质差，先端果次之，枝蔓中部花序坐的果个大质优，故应尽量留中部花序坐的果。原则上按短果枝留果一个，中果枝留果2～3个，长果枝留果4～5个进行。亦可按植株的叶果比留果，即按 （4 ∶ 1）～（6 ∶ 1） 进行疏花疏果。叶果比大时，果实品质好，比值小时产量高。猕猴桃喜半阴环境，属中等喜光性果树，不少栽培地区常因夏季高温干旱以及强光直射造成落叶，果实产生日灼，严重时造成落果，使产量下降，果实品质降低，耐贮性差，严重损害其经济效益。高温干旱和强光是通过影响果园叶幕层微气候环境，抑制光合作用等生理过程，破坏叶片细胞膜的结构及功能等方面来影响猕猴桃的正常生长发育。生产上采取的种植防护林，遮阴等措施就是缓解这一为害的有效途径。近年来，也主张在猕猴桃上套袋，以减轻高温、干旱和强光对果实的为害。猕猴桃果实套袋后，能减轻日灼病，防止果面污染，改善果实外观，避免吸果夜蛾及果实病害的侵袭，提高果实品质，降低果实农药残留量，从而大大提高果实商品性和经济效益。但套袋后果实中的糖分、维生素等含量有所减少，果实风味变淡，且费工。因此亦可从栽培技术上防止日灼害果，如从幼果开始就对果实遮阴，整形修剪中尽量不要将果实暴露在阳光直射的部位，应叶里藏果。猕猴桃套袋的适宜时间是6月上旬至6月中旬，套袋前应根据当地病虫害发生情况全面喷1～2次药，然后及时选择生长正常、健壮的果实进行套袋，纸套应选用抗风吹雨淋、透气好的专用纸套，套袋后并于采果前10～15天去除。猕猴桃在接近成熟时，由于品种及栽培管理的原因，容易造成采前落果，给生产造成很大损失。采前落果的严重程度，首先是由品种的特性决定的。多数品种都有一定的采前落果现象，但有些品种则较少，如魁蜜。土壤水分失调是影响猕猴桃采前落果的重要因素。长期干旱、果园积水或土壤忽干忽湿，都会加重采前落果。因此，要采取措施，维持土壤湿度的相对稳定。例如实行果园秸秆覆盖，采用节水灌溉，浇水时少灌勤灌等。在发生采前落果的时期，要加强新梢摘心，控制营养生长，促进营养多分配于果实生长，可适当减少采前落果。

柑橘，主要起源于我国南方多雨森林地带，是亚热带常绿果树，性喜温暖湿润气候，不耐低温，较耐阴，根部好气好水，要求有机质含量丰富的肥沃土壤。光照，是柑橘叶片进行光合作用、制造有机养料不可缺少的条件。光照充足，有利于叶片的光合作用，形成的光合产物多，树势强健，花芽分化好，结果多，产量高，果实色泽鲜艳，而且含糖量高，果实品质优良。光照不足，树体营养差，不利于花芽分化，易滋生病虫害，果实着色差，产量低，品质下降。柑橘耐阴性较强，要求适度的光照，尤其是慢射光。日照过弱，对其生长发育不利。但光照过强，易形成日灼果，甚至伤害到树枝与树干。柑橘系亚热带常绿果树，对低温十分敏感，温度是限制柑橘分布和种植的主要因素。适宜柑橘生长的气温是年平均气温15～22℃，生长期不低于10℃的年活动积温为4500～8000℃。柑橘树体生长最适气温为23℃，其生理活动的有效温度为12.8～37℃，低于12.8℃或高于37℃都会使生理活动处于抑制状态而停止生长。根系生长要求的土温和地上部相似，但其生理活动的最适土温为17～26℃。冬季低温不低于-5℃才能安全越冬。夏季高温，影响柑橘的生长发育。当气温上升到35℃时，其光合作用就降低50%。温度过高，在水分缺乏时，易造成树体落叶，果实发生日灼。柑橘在花期和幼果期，遇到高温，尤其是在35℃以上的持续高温，加上天气干旱，会加剧花果的脱落，出现异常的落花落果现象。生产上应采取树盘覆盖，并结合灌溉，防止高温干旱造成的落果，对保果意义重大。昼夜温差大，有利于柑橘品质的提高。水分是柑橘生命活动中必不可少的物质，柑橘在生长发育过程中，需要大量的水分，如光合作用、呼吸作用和物质的吸收过程等，与水分关系密切。一般枝、叶的含水量为50%左右，果实为85%以上，茎尖和根尖的含水量可高达80%～90%。水分也是柑橘生长发育不可缺少的因素，当水分不足，生长停滞，从而引起枯萎、卷叶、落叶与落花落果，产量下降，并影响到果实品质。当土壤水分过多，造成积水，土壤中氧含量下降，根系进行无氧呼吸，无氧呼吸所积累的有毒物质，引起根系毒害，形成黑根烂根现象，根系生长缓慢，甚至停止生长，也会引起落叶落果。在年降水量1200～2000mm的地区，且降水比较均匀有利于柑橘的生长。在雨量不足或分布不均的地方，种植时要有水源和灌溉设施。空气湿度对柑橘生长也有很大的影响。例如，空气过于干燥或湿度过低，都不利于柑橘的生长结果，落花落果严重。空气湿度在80%左右时，有利于柑橘的生长。在雨水充足的地区或多雾地区，栽种柑橘，由于空气湿度较高，生产的果品，表现为果形大而均匀，果皮薄而光滑，色泽鲜艳，果汁多，风味佳，落果少，产量高而且稳定。柑橘园应保持适量的土壤水分，通常要求土壤田间持水量保持在60%～80%，这对于枝叶生长、果实发育、花芽分化及产量提高，都极为有利。土壤是柑橘生长的基础。确保土壤的肥沃、深厚和疏松，是柑橘栽培的关键。通常要求土层厚度不少于50cm，有机质丰富，土壤pH值在5.5～7.5，土壤以沙壤土、壤土和轻壤土最佳。含沙质多的土壤，柑橘产量低，果实小，果汁少，风味淡，品质差，而土壤黏重时，则果实偏酸，因此，在瘠薄地建园时，宜行深耕，翻压绿肥，增施有机肥料，提高土壤肥力，为柑橘的生长发育创造一个良好的土壤环境条件，保证根系健壮生长，从而达到高产、优质、高效的栽培目的。风是由空气流动而产生的气流。微风能促进空气流动，调节树叶周围的二氧化碳与氧气的浓度比，加强光合作用的进行，有利于风媒传粉，提高产量，减少病虫为害，并可改善生态环境条件，因而对柑橘生长有利。但是，强风却会带来不良的影响，轻则吹落花果，折枝碎叶，影响植株的正常生长；若风速大于10m/s时，则常使枝干折断，果实脱落，甚至拔树毁园。早春及春夏之交，大风，尤其是狂风暴雨，对柑橘造成很大的危害。若伴随冰雹发生，则受灾更重，影响柑橘的正常生产。此外，冬季大风常伴随着低温寒冷，低于-3℃的低温易出现冻害。因此，在有风害的地方种植柑橘时，必须营造防风林带。一般柑橘土壤有机质含量为1%左右。生产实践证明，柑橘园土壤有机质含量在3%～5%时有利于柑橘生长，这是土壤肥沃度的重要指标。因此，增施有机肥料是改良土壤的主要措施。柑橘寿命长，产量高，种类、品种繁多(脐橙、甜橙、金柑、椪柑、蜜柑、柚类、柠檬等)。柑橘喜冬暖夏凉，性不耐寒，要求年平均温度为16～22℃。喜漫射光，较耐阴。喜湿润环境(一般甜橙类对水敏感，不耐旱，柑和橘类次之，枳和酸橙耐旱性较强)。(1)特早熟品种。生长周期为120～150天。(2)早熟品种。生长周期为150～180天。(3)中熟品种。生长周期180～240天。(4)晚熟品种。生长周期240天以上。柑橘主要通过嫁接繁殖，砧木则以实生繁殖，实生砧木的主根和侧根构成根系的骨架。侧根上分生出大量的须根，须根是根系吸收营养水分及合成活性物质的活跃部分。须根有生长根和吸收根。每年吸收根多的柑橘树，生长健壮、产量稳定、树体营养状况好。柑橘的根系主要依靠菌根吸收水分和养分，丰富的有机质及土壤中充足的氧气有利于菌根的繁殖与活动。根系对柑橘的生长发育有重要的影响。柑橘根系分布依种类、品种、繁殖方法、树龄大小、土层深浅、地下水位的高低和中耕施肥、土壤含氧量等条件不同而有差异。如柚、酸橙、枳橙等根系分布较深，枳、橘等根系较浅；蜜柑、柚子为网状型横生根，栊柑为网状型竖生根。实生苗根系深，而压条、扦插苗根系较浅。实生砧木常有主根入土较深，空中压条苗木或扦插繁殖的砧木，无真正的主根入土较浅。根据根系在土壤中分布的方向不同，将根系分为水平根和垂直根。垂直根分布的范围决定了根系分布的深度；水平根分布的范围决定了根系分布的宽度。柑橘根系的分布，在土层深厚的情况下，根系发达，常具层性。通常有三层，以最上面第一层根系最发达，第二层和第三层根系依次减少。整个根系呈圆锥状，与树冠上部呈对称状态。当土温在12℃左右时，柑橘根系开始生长，通常是先长枝后长根。柑橘的根系在一年中通常是与枝梢交替生长。在土壤水分适宜的条件下根系在2—11月连续生长，根系生长是周期性的，一年内有4～5次生长高峰，并且在枝梢生长期内，根系生长量缓慢、总数降低。在枝梢生长停顿时，根系的生长量增加。因此，在土壤温度和含水量不受限制时，枝梢生长是控制根系生长强度的主要限制因子。在土壤含水量明显降低，如土壤水势达到-0.05Pa时根系的生长受到抑制。根系开始生长的土温为12～13℃，适宜生长的土温为23～31℃，土温37℃以上即停止生长。根系生长适宜的土壤湿度，一般为土壤田间最大持水量的60%～80%。土壤的透气性对根系生长极为重要，因根系的生长及吸收通过呼吸才可以取得能量。柑橘新根的生长要求土壤孔隙含氧量在8%以上；当土壤孔隙含氧量低于4%时，新根的生长缓慢；含氧量低于1.5%时，不但新根不可能正常生长，原有根系也将腐烂。因此，土壤积水或板结时，根系生长减弱，叶片黄化，产量降低，甚至不能正常开花结果。芽是柑橘树冠形成、恢复及生长发育与繁殖的重要器官。柑橘的芽是混合芽，既有花原始体也有叶原始体，先萌芽后开花。柑橘芽为裸露的复芽，每一叶腋内着生2～4个芽，分主芽和侧芽。通常只在枝梢上部2～3个叶腋中的主芽萌发新梢。如果抹除早发的芽，可刺激同一叶腋的副芽或附近节位的芽萌发，柑橘的“抹芽放梢”就是利用这一特性。柑橘的芽具有早熟性，一年可多次发生；同时，顶端优势不强，枝梢上部或顶端几个芽往往一齐萌发生长，因此易形成丛生枝。柑橘的叶芽有很强的潜伏能力，可长期不萌发而保持活力，这是柑橘容易更新复壮的生物学基础，可利用老枝或主干上潜伏芽进行树冠更新。根据新梢在生长结果中的作用，可将其分为营养枝与结果枝两类。营养枝指当年不开花结果的枝梢，包括发育枝、徒长枝、纤弱枝等。结果枝指由枝梢顶端一至数个芽萌发、着生花果的枝梢。柑橘结果枝分为叶结果枝和无叶结果枝两大类。萌发结果枝的枝条称结果母枝。柑橘一年内能抽3～4次新梢，有春梢、夏梢、秋梢、冬梢的区别。幼树一年多次抽梢，随树龄增大，二次和三次梢逐年减少，春、秋二次梢是良好的结果枝。枝梢是树冠的主要组成部分，结果枝与营养枝可以转化。春梢:指立春至立夏前抽生的枝梢。由于气温较低，枝梢生长缓慢，所以，春梢节间短，叶片较小且先端尖，叶色浓、叶脉不明显、翼叶小。发枝量大且抽生较整齐，在中亚热带以北地区是翌年最主要的结果母枝。春梢能继续抽生夏梢、秋梢，结果部位便上移到夏、秋梢部分，是一年中最重要的枝梢。夏梢:指立夏至立秋前抽生的枝梢。因处在高温多雨季节，枝条生长快，节间长，但夏梢抽生不整齐。叶色浓绿，肥大而厚，先端微尖、翼叶最大。幼树和生长势旺的树抽生夏梢多，常利用夏梢做骨干枝，使树冠迅速扩大。秋梢:指立秋至霜降前抽生的枝梢。此时气温虽高，但雨水较少，昼夜温差大，枝梢一般比夏梢充实，枝梢粗而节间较短，叶片较春梢大，较夏梢狭长先端较钝微凹。秋梢多在春梢上发生，即春秋二次梢，幼树则有一定数量的春、夏、秋三次梢。生长充实的早秋梢是翌年良好的结果母枝。幼树秋梢结果母枝较成年多，如5年生大红甜橙幼树，夏梢进行摘心，秋梢结果母枝多的达37%，而成年树一般秋梢结果母枝较少。在柑橘栽培的北缘地带要避免9月以后抽发秋梢。冬梢:指立冬后抽生的枝梢。在初冬气温较低的地区，冬梢无利用价值，要避免抽发。由于柑橘一年多次抽梢，据其在同一枝上连续抽发的次数，可以分为一次梢、二次梢、三次梢等。从上一年的枝上抽发一次的即为一次梢。从春梢上再抽夏梢或秋梢即为夏秋梢、春秋梢，都是二次梢。以此类推三次梢即春夏秋梢。在四川盆地，二次梢是甜橙和宽皮柑橘的重要结果母枝，春梢是主要结果母枝。柑橘新梢生长到一定长度以后，前端数节则停止生长，经1～2天，在靠近顶端1～4节处，产生离层而脱落，这种现象称为自剪。在下一个季节或翌年，断口下一个或几个叶腋的侧芽代替顶芽生长，形成假轴分枝的特性。由于假轴反复继续分枝，没有明显的主干，树冠的形状多为圆头形或近似圆头形。柑橘的分枝角度因品种和树势不同会有差异，像橘类直立性较强，而温州蜜柑则相对开张。柑橘枝梢生长也具有垂直优势。柑橘直立枝优势强，不利于花芽形成，横生枝和下垂枝有利于营养积累形成花芽。柑橘枝干忌阳光直射。强光暴晒枝干发生日灼。因此，柑橘的修剪不宜过重，要注意枝干的荫蔽。柑橘叶的形状是区别种和品种的重要形态标记。柑橘的叶仅有枳一个种为三出复叶，其余皆为单身复叶。叶身与翼叶之间有节，保留着复叶的痕迹。生产中利用的多数柑橘叶柄有翼叶。柚类的叶片最大，金柑的最小，甜橙与宽皮柑橘居中。同一品种又以夏梢叶片最大，春梢叶最小。叶是储藏养料的重要器官，丰富的碳水化合物都存积于叶片中，储藏的氮素占全树总氮量的40%以上。磷在叶中含量仅次于花，钾在叶中含量仅次于果。一般在正常落叶前养分回流树体，如提早落叶，氮素和其他营养成分损失很大。因此，栽培上要保护叶片的正常生长发育，防止过早落叶才能获得高产。叶片的颜色和矿质元素的含量反应树体的营养和健康状况。如缺铁叶肉失绿而叶脉仍为绿色为网纹状失绿，这是形态诊断的依据。柑橘类除枳为落叶性、枳橙为半落叶性之外，其余均为常绿性。实际上柑橘的叶片不像落叶果树那样在休眠之前集中落叶，而是一年中陆续发生新叶，陆续脱落老叶从而显示出常绿的特性。柑橘叶片的寿命为12～24个月或更长。1～2年生叶片是叶幕构成主体，叶片寿命的长短与树体的营养状况和栽培条件密切相关。低温、营养或水分不佳，根腐病或叶螨为害等伤害叶片的诸多因素均可导致叶片的异常脱落，严重的异常落叶导致树势衰弱，畸形花增多和花果脱落。通常认为丰产园叶面积指数以4～6为宜。(1)花芽分化。当树体具备成花条件时，营养枝上的某些叶芽分化成花芽。柑橘的花芽为混合芽，花芽萌发，抽出新梢，在新梢上开花结果。花芽分化的时期因种类、品种与产地气候条件的不同而异。亚热带地区的大多数柑橘种类是在冬季果实成熟前后开始形态分化，至翌年春季萌芽前花芽内各部发育完成。在同一植株上以春梢分化较早，夏梢及秋梢次之，有时秋梢分化期比春梢晚1个月左右，但可较快地完成整个分化过程。据在重庆地区观察，甜橙在10月大部分进入生理分化初期，2月中旬开始形态分化，3月中旬分化完毕。在同一植株上，各个时期可能重叠。如2月中旬，分化期、花萼期、花瓣期与雄蕊期4个时期同时存在。影响花芽分化的因素包括如下内容。①环境条件:在亚热带地区秋冬季2～4个月的冷凉气温是柑橘成花的主要诱导因素；在热带地区生长的柑橘，由于不存在低温条件，其成花的主因是干旱。广州地区，人们为了在春节观赏到金柑和四季橘的金黄果实，最常见的技术就是控水促花。②营养物质:在柑橘的栽培过程中有利于贮存糖类的措施，就有利于促进花芽分化。小年树积累的糖类多，分化花芽多，翌年为结果大年。栽培中常采用的环剥或环割、疏果等技术，能促进分化花芽，都与增加树体内糖类的积累有关。③生长调节剂:在花芽生理分化期喷布赤霉素，会抑制花芽分化。相反，喷布PP333、CCC等拮抗赤霉素的生长调节剂，能明显地促进花芽分化。柑橘的花为雌雄同花，多单生或丛生，为完全花，能自花授粉结实。有些柑橘品种能单性结实或自花授粉不亲和，例如，温州蜜柑的雄蕊常退化，花药缺乏花粉；南丰蜜橘的雌雄蕊也有退化现象，两者都能单性结实产生无核果实。(2)果实发育。柑橘是由子房发育而成的柑果，连接果柄的部分称为果蒂，近果蒂的一端称为果基，与果基相对的部分为果顶。果实由果皮、果肉和种子三部分组成。果皮由外果皮和中果皮组成，外果皮即油胞层，中果皮即白皮层。果肉由子房内壁发育而成，称囊瓣，内含汁胞或种子。囊瓣壁上的维管束称橘络。中心柱为果实中心的海绵柱状维管束。柑橘果实发育过程分3个时期:一是细胞分裂期，即自开花至第二次生理落果结束间的时期。在此期内果实各组织如果皮、砂囊细胞反复分裂以增大果实。二是细胞增大期，即自第二次生理落果结束起，至果实开始着色为止。这个时期果实各部分的细胞迅速增大，果实体积增长较快。此时期与夏梢生长存在养分竞争，同时，对水分的需求比较明显。三是果实成熟期，即从果实开始着色到完全成熟的过程。这一时期果实将发生一系列的明显变化如果皮着色、组织软化、可溶性固形物和糖增加，酸减少，果实风味逐渐变浓并表现出特有的外观和内质。