【症状】 黄龙病是我国南部柑橘产区毁灭性的细菌性病害。其特征性病状是初期病树出现的 “黄梢” 和叶片的黄化。“黄梢” 病状是在浓绿的树冠上出现一枝或几枝叶片黄化的枝梢。黄化是从叶片主侧脉附近和叶片基部开始黄化，黄化部分逐渐扩散形成黄绿相间的斑驳，而后全叶黄化。有的品种果蒂附近变橙红色，而其余部分仍为青绿色，称为 “红鼻子果”。黄龙病可通过嫁接、柑橘木虱等传播。【发生规律】 柑橘黄龙病全年均能发病，春、夏、秋梢都可出现症状。幼年树和初期结果树多为春梢发病，新梢叶片转绿后开始褪绿，使全株新叶均匀黄化；夏、秋梢发病则是新梢叶片在转绿过程中出现无光泽淡黄，逐渐均匀黄化。投产的成年树则表现为树冠上有少数枝条新梢叶片黄化，翌年黄化枝扩大至全株，使树势衰退。【防治方法】（1） 严格实行检疫制度，严禁从病区调运苗木和接穗。（2） 建立无病苗圃，培育种植无病毒苗木。（3） 严格防治传病昆虫——柑橘木虱。大范围叶片黄化染病后的 “红鼻子果”（4） 及时挖除病株并集中烧毁。【症状】 溃疡病是柑橘的主要病害之一，为细菌性病害，主要为害叶、枝、果实，一般以夏梢为害最重。叶部发病初期，在叶背着生黄色针头大油渍状斑点；后扩大成椭圆形、正反两面隆起、表面粗糙、中间凹陷开裂的黄褐色或灰褐色病斑，周围有黄色晕环；最后病斑木栓化。果实上病斑分散较大，硬化突起，开裂更显著。病部只限于果皮，不扩散到果肉。【发生规律】 湖南一般在4月下旬至5月上旬开始发病，直至9月中旬才逐渐减轻。高温高湿 （相对湿度80%～90%） 是适宜发病的气候条件。全年一般以夏梢受害最重，春梢次之，秋梢较轻。春梢发病高峰期在5月上旬，夏梢发病高峰期在6月下旬，秋梢发病高峰期在9月下旬，其中以6—7月夏梢和晚夏梢受害最重。气温在条件下，雨量越多，病害越重。柑橘溃疡病病叶【防治方法】 4—7 月喷药 5～8 次。防效较好的药剂有：77%可杀得可湿性粉剂600倍液，20%叶青双可湿性粉剂500倍液，53%可杀得2000型可湿性粉剂1000倍液，72%农用链霉素可溶性粉剂1000倍液+1%酒精溶液浸30～60分钟，倍量式波尔多液+1%茶籽麸浸出液等。【症状】 柑橘炭疽病为真菌性病害，主要为害叶片、枝梢、花、果实，亦为害苗木、大枝和主干。感病叶片多在叶缘或叶尖出现圆形或不规则形病斑，浅灰褐色，边缘褐色，病健部分界清晰，病叶脱落缓慢。雨后高温时也常呈急性型炭疽病，病叶多自叶尖、叶缘或沿主脉发生淡青色或青褐色如开水烫伤状的叶斑。炭疽病受害叶片炭疽病病果【发生规律】 5月中下旬，当年春叶开始发病，7月中下旬至9月下旬为当年春叶第一个发病高峰期，11月中下旬起进入第二个发病脱叶高峰期。【防治方法】（1） 加强管理。深耕改土、增施有机肥；避免偏施氮肥，适当施用磷钾肥；及时排灌、治虫、防冻，增强树势，提高树体抗病力。（2） 减少病原。结合修剪，剪除病枝叶、衰老叶、交叉枝及过密枝，将病叶、病果集中深埋或烧毁，并全面喷布0.5～0.8波美度石硫合剂一次，以减少菌源，并保持树冠通风透光。（3） 药剂防治。早春萌芽前喷0.8～1.0波美度石硫合剂1次；春芽米粒大时喷0.5%等量式波尔多液1次；5月下旬至6月上旬喷25%咪酰胺乳油500～1000倍液、10%甲醚苯环唑水分散粒剂2000～2500倍液、50%代森锰锌可湿性粉剂600倍液1～2次；9—10月喷50%代森锰锌可湿性粉剂600倍液1～2次。【症状】 柑橘疮痂病属真菌性病害，主要为害叶、果和新梢的幼嫩组织。叶片发病初期着生油渍状小点，后变为黄褐色、木栓化、圆锥状疮痂。病斑往往只有一面突起，另一面凹陷，常以叶背突起居多。果实感病后一是散生或群生突起病斑，易引起早期脱落或发育不良；二是果皮组织被害后常坏死，呈癣皮状剥落，以致病部果皮较健部为薄。柑橘疮痂病病叶【发生规律】 湖南一般4月上中旬开始发病，5月及6月上中旬为春梢和幼果发病盛期。幼果长至豆粒大小时最易感病。病菌一般只侵害幼嫩组织，以春梢及幼果受害较重。苗木、幼树因抽梢多、抽梢期长发病较重，壮年树次之，15年生以上橘树发病很轻。一般来说橘类最感病，柑、柚中度感病，甜橙、金橘抗病性较强。湖南的感病品种为建柑、酸橙、温州蜜柑、南丰蜜橘、朱红橘等。柑橘疮痂病病果【防治方法】 防治本病应采取以药剂防治为重点的综合防治措施。（1） 结合修剪，清除病枝叶，并集中烧毁。（2） 在春芽萌动至芽长2～3mm和谢花2/3时 （幼果初期）各喷1次药。如抽夏梢时遇低温阴雨，则应喷第3次药，以保护夏梢及果实。防治溃疡病的药剂均可兼治本病。此外还可选用80%代森锌可湿性粉剂 800 倍液、50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液、75%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液、80%必得利MZ-120可湿性粉剂600倍液、50%萃丰特可湿性粉剂1000倍液等。【症状】 果实染病后，出现橘黄色圆形斑。病斑在短时间内迅速扩大，使全果软腐，病部变软，果皮易脱落。后期出现白色黏状物，为气生菌丝及分生孢子，整个果实出水腐烂并发生酸败臭味。柑橘酸腐病为害果实的症状【发生规律】 病菌从伤口侵入，故首先在伤口附近出现病斑。由果蝇传播及接触传染，本病具较强的传染力。在密闭条件下容易发病。【防治方法】 参照柑橘青霉病与绿霉病的防治方法，及时清除烂果与流出的汁液。【症状】 地衣是一类菌藻共生物，呈青灰色或灰绿色的叶状体组织附生于果树的枝干上，呈圆形膏药状紧贴于枝干树皮上，不易剥离，青灰色或灰绿色。【发生规律】 地衣发生的主要因素是温度、湿度和树龄，其他如果园的地势、土质以及栽培管理等都有密切关系。在温暖潮湿的季节，繁殖蔓延快，一般在10℃左右开始发生，晚春和初夏期间 （4—6月） 发生最盛，为害最重，夏季高温干旱，发展缓慢，秋季继续生长，冬季寒冷，发展缓慢甚至停止生长。幼树和壮年树，生长旺盛，所以发生较少，老龄树生长势衰弱，且树皮粗糙易被附生，故受害严重。柚子地衣病为害枝干症状【防治方法】 加强栽培管理，采果后，清洁果园，及时修剪整枝，增强园内通风透光，降低果园湿度；科学施用肥料，增强果树长势。适度药剂防治：采用挑治法和刮疗法。于春季雨后，用竹片或削刀刮除枝干上的地衣和苔藓，然后用药治疗。刮除下来的地衣和苔藓必须收集烧毁。用10%～15%的石灰水涂刷。或用下列药剂喷施：30%氧氯化铜悬浮剂500倍液；1%～1.5%硫酸亚铁溶液；1∶1∶100等量式波尔多液。【症状】 此病因受高温和强烈的阳光照射引致果皮组织灼伤。在果实尚未成熟时，果顶受害部分黄褐色，发育停滞。在果实成熟时，受害部位果皮出现暗褐色，果皮生长停滞，表面粗糙，干疤坚硬，果形不正。果实轻度受害，灼伤部位只限于果皮；受害重的，灼伤部位的中央为木栓状，伤及汁胞，汁胞下缩、粒化，汁少而味淡，品质低劣。柑橘日灼病果实受害状【病因】 该病在高温季节、气候干燥、日照强烈时容易发生。一般于7月开始出现，8—9月发生最多，尤其是西南方向的果实和幼年结果树的顶生果实，因日照时间长，受害程度最重。西向的坡地果园或无防护林的暴露果园也较严重发生。【防治方法】 在开园种植时，应在园的西南方向营造防护林以减少烈日照射。选用发生日灼病较少的品种。种植温州蜜柑早熟品系时，宜选用软枝型品系，并适当密植。幼龄结果树在生理落果结束时促放夏梢，以梢遮果，可减轻日灼程度。温州蜜柑抹春梢保果，应适当保留部分春梢营养枝。在果园行间间种高秆绿肥，或提倡园内生草法管理，以调节果园小气候。在高温干旱期利用水源定期喷水保持土壤水分，提高相对湿度，降低气温。在8—9月检查果园，发现受害果实，可用白纸粘贴受害部位或涂石灰乳，对轻度受害的果实可恢复正常。【症状】 主要发生在果实上，初期仅发生于果皮油胞层上，以后逐渐扩展深入到果皮的白皮层，最后直至果肉，使果肉变质，发生异味。病果蒂缘下陷，褐色，果皮上出现网状、片状、点状等不规则的褐斑。病果被次生性病菌侵入后，可发生果实腐烂。柑橘果实干疤病为害果实症状【病因】 此病发生与柑橘品种有关。果皮细密光滑、柔软及蜡质层薄的甜橙类发病较严重；果皮较粗糙、蜡质层较厚的品种发病较轻。温度4～9℃时贮藏果发病重；1～3℃和10～12℃发病较。此外，果实迟采收、贮藏时二氧化碳浓度极微时此病发生多。【防治方法】 依据品种的成熟期，适当提早采收，以减少发病。控制温度。采果后果实经保鲜处理后，在常温下 “发汗”，在室温下贮藏1个月，再调控温湿度和适当提高二氧化碳浓度贮藏，可减少此病发生。保鲜处理后进行薄膜袋单果包装，也可用保鲜纸包装保湿，或用水果保鲜剂浸果，能有效降低该病的发生。【症状】 首先在果实近顶部开裂，随后果皮纵裂开口，瓤瓣亦相应破裂，露出汁胞，有的横裂或不规则开裂，形似开裂的石榴，最后脱落。柑橘裂果症状【病因】 裂果主要是由于土壤缺少水分和水分供应不均衡，久旱骤雨引起的。干旱时果皮软而收缩，雨后树体大量吸收水分，果肉增长快，而果皮的生长尚未完全恢复，增长速度比果肉慢，致使果皮受果肉汁胞迅速增大的压力影响而裂开。一般出现在9—10月，11月时有发生。【防治方法】 结合当地气候条件，选择裂果少或不裂果的品种种植。加强栽培管理，果园进行深耕改土，以施用有机肥为主，实行氮磷钾合理搭配的配方施肥和结合适量微肥，提高土壤肥力，创造密、广、深的根群，增强树体抗逆能力，减少裂果发生。8月进行树冠地面覆盖杂草绿肥，减少土壤水分蒸发；提倡生草法栽培，改善和调节土壤含水量的稳定；壮果期均衡供应水分和养分，是防止裂果的重要措施。【症状】 新梢纤细，叶片小而薄，淡绿色至黄白色，落花落果严重。严重缺氮，新梢叶片全部发黄，开花结果少或几乎不开花。植株下部老叶先发生不同程度黄化，最后全叶脱落。长期缺氮，树体矮小，枝枯，果小，果皮苍白光滑，常早熟，风味差。【病因】 土壤缺乏氮素，氮肥又施用不足；夏季降雨量大，轻沙土壤保肥力差，致使土壤氮素大量流失；果园积水，土壤硝化作用不良，致使可给态氮减少，或根群受伤吸收能力降低；施钾素过量，酸性土壤一次施用石灰过多，影响了氮素的吸收；大量施用未腐熟的有机肥，土壤微生物在其分解过程中，消耗了土壤中原有的氮素，造成柑橘吸收氮素量减少而表现暂时性缺氮。【防治方法】 经常注意施用适量的氮肥。若在结果期间缺氮，应立即使用速效氮。砂质重的土壤应多施有机肥，改良土壤，促进根系强大，提高吸收能力。在采用青料压绿改土时，应在青绿料中施入石灰粉。搞好果园排灌系统，避免雨天积水。在瘦瘠土壤开垦新园，种植前应施好基肥，并坚持年年深翻改土，增施有机质肥料，可有效避免缺氮和其他缺素症。柑橘缺氮症状【症状】 嫩叶受害，出现叶面暗褐色，叶背灰绿色近圆形的斑点，最后形成红褐色病斑，上生黑色小点；成叶受害，叶尖或叶缘出现黄褐色小圆斑，然后迅速向叶基扩展，形成大灰斑，其上有小黑点。嫩梢受害，病部呈黑褐色，严重时整条嫩枝枯死，病、健部界限明显。花枝受害，花穗变褐枯死。近成熟或采后的果实受害，果面出现黄褐色小点，后变成近圆形或不定形的褐斑，边缘与健部分界不明显，后期果实变质腐烂发酸，湿度大时在病部产生朱红色针头大液点。【病原】 主要是无性阶段为 Colletotrichum gloeosporioides P enz.，称盘长孢状刺盘孢菌，属半知菌亚门，刺盘孢属真菌。荔枝炭疽病为害叶片状【发生规律】 病菌以菌丝体在病部越冬，病害在13～30℃均可发生，最适温度22～29℃，并要求要高湿，因此在高温多雨的夏季发病特别严重。病菌靠风雨传播，树势衰弱、幼果期、嫩枝叶、果实过熟、伤口多，有利于病菌入侵，发病严重。【防治方法】 ①增施有机肥和磷钾肥，实行配方施肥，避免偏施氮肥，以增强树势，提高抗病能力。雨季果园要搞好排除积水工作。冬季清园，修剪病枯枝、扫集落叶、落果，加以烧毁或深埋。清园后喷一次0.5～0.8波美度的石硫合剂或喷一次40%灭病威悬浮剂500倍液。②喷药保护，春、夏、秋梢抽出后叶片初展时，花蕾期，幼果期 （5～10mm），每隔7～10d 喷1次，连喷2～3次，大雨后加喷1次。药剂可选用：70%甲基硫菌灵1000倍液、50%多菌灵可湿性粉剂800倍液、50%咪鲜胺锰盐 （施保功） 可湿性粉剂 1500倍液、45%咪鲜胺水乳剂1500～2000倍液、10%苯醚甲环唑 （世高） 水分散粒剂800～1000倍液、50%多菌灵加25%瑞毒霉锰锌 （1∶1） 可湿性粉剂1500～2000倍液等。荔枝炭疽病病果【症状】 幼果受害，呈水渍状，黑褐色，很快脱落。近成熟果实和成熟果实受害，多从果蒂处先出现不规则水渍状褐斑，迅速扩大到全果。天气潮湿时，长出白色霉状物，果肉糜烂发酸并有褐色的汁液渗出，病果易脱落。花穗受害后变褐腐烂，遇潮湿时也形成白色霉状物。嫩叶发病，叶面上有不规则的淡黄色或褐色的病斑，潮湿时长出白色霉状物；较老熟叶发病常在中脉处断断续续变黑，沿中脉出现褐色小斑点，后扩大为淡黄色不规则的病斑。【病原】 Peronophythora Iitchii Chen ex Ko et al，属鞭毛菌亚门，霜疫霉属真菌。荔枝霜疫霉病为害花穗荔枝霜疫霉病为害幼果状【发生规律】 病菌以菌丝体和卵孢子在病部组织或落入土壤中越冬。4—5月当温湿度适宜时，卵孢子萌发产生孢子囊，并萌发形成游动孢子，由风雨传播或直接萌发为芽管，成为病害的初次侵染源，病菌初次侵入后2～3d即可发病，病部再生孢子囊，继续为害。5—6月在果实近成熟到成熟期，遇4～5d雨天，且是南风天气，病害发生严重。凡园地低洼，土壤比较肥沃，施氮肥过多，排水不良的果园发病严重；同一株树，树冠下部阴蔽处，发病早而重；近成熟的果比不成熟的果发病较重。早、中熟种易感病。【防治方法】 ①果园要修好排灌系统，排除果园积水，降低荔枝园的湿度。采收后把病虫枝、弱枝以及过密的枝剪去，使园区通风透光良好，并清除地面上的落果、烂果、枯枝落叶，集中烧毁或深埋，防止卵孢子形成落入土中越冬，并喷 1 次0.3～0.5波美度石硫合剂或晶体石硫合剂150倍液，减少病源。3月至4月上旬在卵孢子萌发时期用1%硫酸铜溶液，也可用30%氧氯化铜300倍液喷洒荔枝园地面，并加撒石灰。②上一年发病严重的果园，在花蕾期、幼果期和果实近成熟期各喷药1～2次，特别是近熟期和成熟期，遇多雨天要抢晴天喷药保护。药剂可选用：58%瑞毒霉锰锌可湿性粉剂800倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂 1000 倍液、50%多菌灵可湿性粉剂 800 倍液、80%代森锰锌可湿性粉剂500～800倍液、75%百菌清可湿性粉剂500～800 倍液或53.8%可杀得2000 干悬浮剂900～1000倍液、25%吡唑醚菌酯 （凯润） 乳油1000～2000倍液、25%嘧菌酯 （阿米西达） 悬浮剂800～1500倍液、25%双炔酰菌胺 （瑞凡） 悬浮剂1000～2000倍液、50%烯酰吗啉 （安克） 可湿性粉剂1000～2000倍液、60%吡唑醚菌酯·代森联 （百泰） 水分散粒剂800～1500倍液。（1） 灰斑病【症状】 灰斑病又名拟盘多毛孢叶斑病。病斑多从叶尖向叶缘扩展。初期病斑圆形至椭圆形，赤褐色，后逐渐扩大，或数个斑合成不规则的大病斑，后期病斑变为灰白色，病斑产生黑色粒点 （分生孢子盘）。【病原】 Pestalotiopsis pauciseta （Speg.） Stey，半知菌亚门，拟盘多毛孢属真菌。龙眼灰斑病（2） 白星病【症状】 白星病又名叶点霉灰枯病。初期叶面产生针头大小圆形的褐色斑，扩大后变为灰白色，边缘褐色明显，斑点上面生有黑色小粒点 （分生孢子器），叶背病斑灰褐色，边缘不明显。【病原】 phyliosticta sp.，半知菌亚门，叶点霉属真菌。（3） 褐斑病【症状】 又名壳二孢褐斑病，初期产生圆形或不规则褐色小斑点，病斑扩大后，叶面病斑中央灰白色或淡褐色，边缘褐色。病、健部分界明显。叶背病斑淡褐色，边缘不明显。后期病斑上产生小黑点 （分生孢子器），常数个斑合成不规则大病斑。【病原】 Asochyta sp.，半知菌亚门，壳二孢属真菌。白星病龙眼褐斑病（4） 叶枯病【疲状】 为害成叶，多始发于叶尖，从叶顶向两边延伸，呈“V” 形，后期病斑上产生小黑点 （分生孢子器）。【病原】 Phomopsis guiyuan Zhang et Chi，及Phomopsis longa-nae Chi et Jiang，半知菌亚门，拟茎点霉属真菌。【发生规律】 病菌以分生孢子器、菌丝或分生孢子在病叶或落叶上越冬。分生孢子是初次侵染的主要来源，借风雨传播，在温湿度适宜条件下，分生孢子萌发后侵入叶片为害。此病以夏秋较多发生。严重的可引起早期落叶。老果园、栽培管理差、排水不良、树势衰弱以及虫害严重的果园容易发病。荔枝叶枯病【防治方法】 ①增施有机质肥，及时排除果园积水，提高树体抗病能力。对衰老果园要更新修剪，同时注意抓好清园，清除枯枝落叶，集中烧毁，减少病源。②对有发病史的果园，夏秋要经常检查，发现有病害发生及时喷药防治，有效药有：30%氧氯化铜悬浮剂600倍液、70%代森锰锌可湿性粉剂500～700倍液、45%三唑酮·福美双可湿性粉剂600倍液等。龙眼叶枯病【症状】 主要发生在成叶或老叶上，叶片正面多见。发病初期出现黄褐色针头大的小斑，后逐渐扩大成近圆形或不规则形黑褐色斑点，病斑上有灰绿色或黄褐色毛绒状物，是藻类的藻丝体 （营养体），后期转为锈褐色，病斑中央灰白色。嫩叶受害，叶片上密生褐色小斑，在叶片中脉常形成梭形或条状黑色斑，后期病斑中央灰白色。【病原】 Cehaleuros virescens Kunze，属藻状菌中的头孢藻。弱寄生性，以藻丝体在病叶上越冬。【发生规律】 果园郁蔽、通风透光性差，在温湿条件适宜情况下，越冬的营养体产生孢子囊和游动孢子，借雨水传播，侵入寄主内，在表皮细胞和角质层之间生长蔓延，并伸出叶面，形成新的营养体，随后再产生孢子囊和游动孢子，辗转侵染为害，使病害扩大蔓延。在多雨季节有利于藻类繁殖，病害迅速扩展蔓延。【防治方法】 ①加强果园管理，增施有机质肥，及时排除积水，合理修剪，使树体既健壮又不互相阴蔽，减少病害发生。②发病初期以及清园后喷30%氧氯化铜悬浮剂600倍液或77%可杀得可湿性粉剂600～800倍液。荔枝藻斑病龙眼藻斑病【症状】 叶片受害，初期表现出暗褐色霉斑，继而向四周扩展成绒状的黑色霉层，严重时全叶被黑色霉状物覆盖，故称煤烟病。严重的在干旱时部分自然脱落或容易剥离，剥离后叶表面仍为绿色。后期霉层上散生许多黑色小粒点 （分生孢子器）或刚毛状突起 （长型分生孢子器）。【病原】 有性阶段为子囊菌亚门，无性阶段属半知菌亚门，其种类多达10余种，其中除Meliola butleri Syd.，称小煤炱菌，为纯寄生外，其余均为寄主表面附生菌，包括 Capnodium spp.煤炱菌等。龙眼藻斑病后期症状荔枝煤烟病叶面症状【发生规律】 病菌以菌丝体和子实体在病部越冬，翌年，温湿适宜条件下，越冬病菌产生孢子，借风雨及昆虫活动而传播。由于多数煤烟菌以昆虫分泌的蜜露为养料而生长繁殖，故其发生轻重与刺吸式口器害虫的发生为害关系密切，因此，凡介壳虫、蚜虫、粉虱等发生严重的果园煤烟病发生严重。此外，花期的花蜜散布在叶片上可诱发煤烟病，阴蔽和潮湿的果园、树势衰弱的果园亦容易发生此病。龙眼煤烟病叶背症状【防治方法】 参考柑橘煤烟病防治。【症状】 香蕉枯萎病又称香蕉镰刀菌枯萎病、巴拿马病、黄叶病，是维管束受害引起的病害。发病时假茎和球茎的维管束逐步褐变，呈斑点状或线状，后期呈长条形或块状。根的木质导管变为红褐色，一直延伸到球茎内。外部症状有叶片倒垂形和假茎基部开裂形两种。前者发病蕉株下部及靠外的叶鞘先出现黄化，叶片黄化先在叶缘出现，后逐渐扩展到中脉，染病叶片很快倒垂枯萎；后者病株先从假茎外围的叶鞘近地面处开裂，渐向内扩展，层层开裂直到心叶，并向上扩展，裂口褐色干腐，最后叶片变黄，倒垂或不倒垂，枯株枯萎相对较慢。粉蕉枯萎病病叶枯黄、叶柄下垂倒挂【病原】 Fusarium oxysporum f.sp. cubense Snyder.et Hansen，称尖孢镰刀菌古巴专化型，属半知菌亚门，镰孢属真菌。本菌已知有4个生理小种，1号生理小种主要为害粉蕉、粉大蕉、龙牙蕉和西贡蕉，4 号小种已在我国台湾及菲律宾发现为害香芽蕉，列为重要检疫对象。【发生规律】 病菌从根部侵入导管，产生毒素，使维管束坏死。全株枯死后，病菌在土壤中营腐生生活几年甚至20年。蕉苗、土壤、流水、农具均可带病菌传播。有明显的发病中心。一般雨季 （5—6月） 感病，10—11月达到高峰期。排水不良及伤根会促进该病的发生。我国南方20世纪50年代引种粉蕉时发现有此病。现是粉蕉、龙牙蕉主要病害。【防治方法】 ①严格执行检疫制度。②种植无病健壮组培苗，或不带病的吸芽。③发病率高于20%，多点发生时应改种水稻等，也可改种抗病品种。应用荣宝氰氨 （石灰氮） 60kg，淋透水后覆盖地膜，消毒15d后定植。④发现零星病株时可用下列药剂淋灌根部：90%噁霉灵可湿性粉剂1000～2000倍液、23%络氨铜水剂600倍液、20%龙克菌 （噻菌铜） 悬浮剂500～600倍液。每隔5～7d淋1次，连续淋2～3次。【症状】 香蕉炭疽病主要为害成熟或近成熟的果实，尤以贮藏果受害最烈。一般果实黄熟时果皮出现褐色，绿豆大病斑，俗称梅花点，后扩大并连合呈近圆形或不规则深褐色稍下陷的大斑或斑块，其上密生黑褐色小点，潮湿时出现黏质朱红色小点。叶片受害，病斑长椭圆形，生长后期小黑点布满叶片。香蕉炭疽病【病原】 Colletotrichum musae （Berk.et Curt.） Arx，属半知菌亚门，刺盘孢属真菌。【发生规律】 病菌菌丝体和分生孢子在病部越冬。翌年分生孢子借风或昆虫传播。条件适合时分生孢子萌发芽管侵入果皮内，并发展为菌丝体。高温多雨季节发病严重。病果的病斑上长出大量的分生孢子辗转传播，不断进行重复侵染。贮藏期间，温度25～32°C时发病最为严重。香蕉炭疽病显梅花点粉蕉炭疽病【防治方法】 ①选用高产优质抗病品种。②及时清除和烧毁病花、病轴、病果，并在结果初期套袋，可减少病害发生。③香蕉断蕾后开始喷药，每隔10～15d 喷1 次，连喷2～3 次。药剂可选用；50%咪鲜胺锰盐 （施保功） 可湿性粉剂 1000～1500倍液、80%代森锰锌可湿性粉剂800～1000倍液、50%多菌灵可湿性粉剂500～800倍液。果实采收后用45%特克多悬浮剂500～1000倍液浸果1～2min，可减少贮运期间烂果。【症状】 主要为害叶片和青果。叶片发病，叶面及中脉上散生或群生许多小黑粒，后期小黑粒周围呈淡黄色，然后叶片变黄而凋萎。青果发病，初期在果指弯腹部分，严重时全果果面出现许多小黑粒，随后许多小黑粒聚集成堆，使果面粗糙。果实成熟时，在每堆小黑粒周围形成椭圆形或圆形的褐色小斑，不久病斑呈暗褐色或黑色，周围呈淡褐色，中部组织腐烂下陷，其上的小黑粒突起。【病原】 Phyllosticta musarum （Cke.） Petr.= Macrophoma musae （Cooke） Berl.et Vogl.，称香焦叶点霉菌，属半知菌亚门真菌。香蕉黑星病【发生规律】 病菌的菌丝体和分生孢子在病部和病残体越冬。翌年分生孢子借雨水溅射传播到叶片和果实上，侵入为害，产生分生孢子继续传播，进行再侵染。高温多雨季节发病严重、密植、高肥、阴蔽、积水的蕉园发病严重。香蕉高度感病，粉蕉次之，大蕉抗病。香蕉黑星病为害果指弯背部症状【防治方法】 ①经常清除病叶残株，增施钾肥与有机肥，避免多施氮肥，雨季及时排除积水，预防病害发生。②发病初期，套袋前后喷杀菌剂杀菌。药剂可选用：75%百菌清可湿性粉剂800～1000倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800～1000倍液、25%腈菌唑乳油2500～3000倍液等。③果实套袋，减少病菌感染。【症状】 香蕉冠腐病是采后的重要病害，首先蕉梳切口出现白色棉絮状霉层并开始腐烂，继而向果扩展，病部前缘水渍状，暗褐色，蕉指散落。后期果身发病，果皮爆裂，其上生长白色棉絮状菌丝体。果僵硬，不易催熟转黄，食用价值低。【病原】 导致冠腐病的真菌涉及近10个属，广东主要为镰刀菌引起，有串珠镰孢Fusaariun moniliforme Sheldon，双孢镰孢fusariun dimerun Penzig，半裸镰孢 fusariun semitectum Berk.et Rav，亚镰黏团串珠镰孢 Fusariun moniliforme var. subgiutinans Wollenw.et Rienk.，其中以串珠镰孢菌为主。均属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病原从伤口侵入，采收时去轴分梳以及包装运输时造成的伤口，在高温高湿情况下极易发病。香蕉冠腐病 （高乔婉提供）【防治方法】 ①尽量减少采收、脱梳、包装、运输各个环节的机械伤。②采后包装前要及时进行药物处理。药剂可选用：50%多菌灵600～1000倍液 （加高脂膜200倍液兼防炭疽病病）、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂1000～2000倍液以及50%双胍辛胺可湿性粉剂1000～1500倍液等。或浸果1min捞起晾干然后进行包装、贮运，减少病害发生。香蕉褐缘灰斑病又称黄叶病。【症状】 发病初期病斑短杆状，暗褐色，后扩展为长椭圆形斑，病斑中央灰色，周边黑褐色，大多单独存在，近叶缘表面病斑数量比近中脉的多。病斑上产生稀疏的灰色霉状物。大量病斑出现后，叶片迅速早衰变黄枯死。香蕉褐缘灰斑病香蕉褐缘灰斑病【发生规律】 病菌以菌丝体和分生孢子在病部或病残物上越冬。在温度适宜的高温季节，分生孢子靠风雨传播。凡排水不良、土壤潮湿以及象鼻虫严重为害的蕉园发病严重。大蕉较香蕉感病，粉蕉较耐病。【防治方法】 ①实行配方施肥，避免偏施氮肥，适当增加磷钾肥。及时排除蕉园积水，摘除下部病叶。②5—10月风雨季节及时喷药保护以防感染。药剂可选用：高效低毒或无污染的生物农药，如12.5%腈菌唑1500倍液，70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液等。隔10～15d喷1次，连续2～3次。香蕉灰纹病又称暗双孢霉叶斑病。【症状】 发病初期叶面出现椭圆形褐色小斑，然后扩大为两端略尖的长椭圆大斑。中央呈灰褐色至灰色，周边呈褐色。近病斑的周缘有不明显的轮纹，病斑外绕有明显的黄晕，病斑背面有灰褐色霉状物，即分生孢子梗和分生孢子。香蕉灰纹病【病原】 Cordancnmisae （Zimm.） V.Hohn，称香蕉暗双孢霉菌，属半知菌亚门真菌。发生规律及防治方法与褐缘灰斑病基本相同。香蕉煤纹病又称小窦氏霉叶斑病。【症状】 病斑多出现在中下部叶缘，短椭圆形，褐色，斑面明显轮纹较明显，故也称轮纹病，多发生在叶缘。病健部分界明显，潮湿时病斑背面可见许多黑色霉状物。大蕉常见典型病斑。【病原】 Deightoniella torulose （Syd.） M.B.Ellis，称香蕉小窦氏霉菌。发生规律及防治方法与褐缘灰斑病基本相同。香蕉煤纹病【症状】 主要为害幼龄植株，也为害成株与果实。幼株被害，植株初期叶片仍呈青绿色，仅叶色稍变暗无光泽，心叶黄白色，容易拔起，肉眼不易觉察。以后病株叶色逐渐褪绿变黄或变红黄色，叶尖变褐干枯，叶基浅褐色或黑色水渍状腐烂，腐烂组织变成乳酪状，病、健部交界处呈深褐色，随后次生菌入侵，组织腐烂发臭，最终全株死亡。成株被害，主要是根系变黑腐烂，心叶褪绿，较老叶片枯萎，病株果实味淡。【病原】 病原菌有多种，其中有 Phytophthora nicotianae var. parasitica （Dastur） Waterh，称寄生疫霉，属鞭毛菌亚门真菌。菠萝心腐病【发生规律】 病菌在田间病株和土壤中存活或越冬。翌年条件适宜时产生孢子囊和游动孢子，借风雨溅散和流水传播，使病害在田间迅速蔓延。高温多雨季节，特别是秋季定植后遇暴雨，往往发病严重。连作、土壤黏重、排水不良的田块较易发病。【防治方法】 ①选用无病壮苗，选排水良好的沙质壤土种植。②发病初期用50%多菌灵可湿性粉剂500～800倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂或25%甲霜灵可湿性粉剂800～1000倍液、58%瑞毒霉锰锌可湿性粉剂600～700 倍液喷洒菠萝植株，10～15d喷1次，连喷2～3次。【症状】 主要发生在成熟的果实上，被害果外观与健果难于区别，剖开果实时有两种情况，一种是小果变褐色或黑褐色，感病组织略变干、变硬，不易扩展到健康组织；另一种是近果轴处变暗色、水渍状，后变成褐色或黑色。【病原】 有认为小果变黑是欧氏杆菌细菌 （ Erwinia sp.） 引起的。果轴处受害是由链格孢真菌 （ Alternaria sp.） 引起的。菠萝褐腐病小果病状【发生规律】 小果褐腐病是菠萝开花期间病菌侵入蜜腺管和花柱沟引起的。在幼果生长发育期，病菌呈休眠状，当果实进入成熟期，病菌就活跃起来，扩大侵染范围，使蜜腺管壁和花柱沟变褐色，进而使小果呈褐色或黑褐色而导致腐烂。花期遇低温多雨，易诱发病，采果和贮运过程伤口多，发病较重。广州地区8—9月菠萝果实成熟期常发生，以卡因类菠萝发生较普遍。【防治方法】 ①花前期喷50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000～1500倍液，保护发育中的花序。②收获、运输及贮藏，小心轻放，减少伤口。雨天不收果，晴天收果也不宜堆放过厚，贮藏室要通风干燥。远途运输时应采用冷藏车运输，温度保持7～8°C。菠萝褐腐病果轴病状【症状】 苗期与成株期均会受害，病斑多发生在植株中下部叶片两面，发生初为淡黄色，绿豆大小的斑点，条件适宜时扩大，中央变褐色并下陷。后期病斑椭圆形或长椭圆形，常几个小斑愈合成大斑，边缘深褐色，外有黄色晕环，中央灰白色，上生黑色刺毛状小点 （即病菌的分生孢子盘）。【病原】 Annellohcinia dinemasporioides Sutton，称痕裂盘毛孢菌，属半知菌亚门真菌。菠萝枯斑病【发生规律】 病菌和菌丝体或分生孢子盘在病叶组织内越冬，翌年温湿条件适宜时，产生分生孢子，随风雨侵入嫩叶。高温多湿天气易发病，夏秋发病较重。【防治方法】 ①加强栽培管理，不偏施氮肥，及时排除积水，可减少病害发生。②抽新叶期，隔15d喷药1次，连喷2～3次，保护新叶不受感染。药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂600倍液或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800～1000倍液。十一、菠萝凋萎病菠萝凋萎病又名菠萝粉蚧凋萎病。【症状】 发病初期基部叶片变黄发红，皱缩失去光泽，叶缘向内卷缩，以后叶尖干枯，叶片凋萎，植株生长停止，部分嫩茎和心叶腐烂。地下部根尖先腐烂发展到根系部分或全部腐烂，植株枯死。菠萝凋萎病【病原】 多数人认为是菠萝粉蚧 Dysmicoccrus brevipes Cockerell为害引起。近年国外从有粉蚧凋萎症状的病株中发现病毒，属甜菜黄化病毒组Clostero virus 2型病毒。现基本确定此病是菠萝粉蚧传播病毒引起的病毒病。【发生规律】 初侵染源是带有菠萝粉蚧 （若虫和卵） 越冬的病株。冬天粉蚧在植株基部和根上越冬。一般高温、干旱的秋季和冬季易发病。但低温阴雨的春天也常见此病。新开荒地发病少，熟地发病多。卡因种较其他品种易感病，卡因杂交种抗性较好。蛴螬、白蚁、蚯蚓等吸食地下根部会加重凋萎病发生。【防治方法】 ①选用无病苗木，采用高畦种植。②做好菠萝粉蚧和地下害虫的防治。③及时挖除病株并集中烧毁。【症状】 嫩叶受害，最初出现黑褐色、圆形或多角形或不规则形小斑，多个小斑扩大合成大枯死斑，穿孔或脱落。嫩梢受害，生黑褐色斑，扩大环绕枝一圈，病斑上部枯死，表面生褐色小粒点 （分生孢子盘）。老叶受害，多生近圆形、多角形病斑，其上散生黑色粒点。花梗受害，花序和花凋萎枯死，称“花疫”。幼果在果核未形成前染病，生小黑斑，迅速扩大引起部分果或全果皱缩、变黑、脱落。成熟果实受害，产生黑色、形状不一的病斑，略凹陷有裂纹，常多个病斑合成大斑，病部常深入果肉，致使果实在田间或贮运过程腐烂。当大量分生孢子从感病枝或花序上随雨水冲溅到果实上，果表面生成大量小斑，形成污果斑。【病原】 无性阶段为 Colletotrichum gloeosporioides Penz.=C. mangiferae，称盘长孢状刺盘孢菌，属半知菌亚门，刺盘孢属真菌。有性阶段为Glomerella cingulata （Stone.） Spauld.et Sch.，称围小丛壳，属子囊菌亚门，小丛壳属真菌。【发生规律】 病菌以分生孢子在病部越冬，翌年温湿度适宜时，靠风雨传播。发生流行要求高温 （24～30°C）、高湿 （90%以上），如嫩梢期、开花期至幼果期遇多雨季节，则此病发生严重。此病有潜伏侵染的特性，多潜在果梗处的果皮、果肉内。管理不善，偏施氮肥的果园发病较重，采收、包装、运输操作不当，贮藏条件差会加速采后果实腐烂。【防治方法】 ①搞好冬季清园，减少越冬菌源。②适时喷药保护。盛花期花开放2/3 时，是防治关键时期，应及时喷药。药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂500～600倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800～1000倍液、65%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液、80%大生M-45可湿性粉剂600倍液或10%世高水分散粒剂1000倍液或其他含苯醚甲环唑类药剂及时喷布。杧果急性炭疽病为害叶片杧果炭疽病为害叶片状【症状】 嫩叶受害从叶背开始发病，病斑由针头大小逐步扩大为突起的圆形或近椭圆形斑点。随叶片成长老熟，病斑停止扩展，形成木栓化组织，稍突起，灰色至紫褐色。发病严重时，叶片扭曲、畸形。果实受害，多为落花后的幼果开始出现黑褐色小病斑，后随果实增大，病斑逐渐扩大，中间组织粗糙，木栓化，灰褐色，严重的病斑连成一片。【病原】 有性阶段为 Elisinoe mangiferae Bilcourt et Jankins，称杧果痂囊腔菌，属子囊菌亚门，痂囊腔菌属真菌。无性阶段为 Sphaceloma mangiferae Jenk，称杧果痂圆孢菌，属半知菌亚门，痂圆孢属真菌。前者国内未发现。杧果疮痂病【发生规律】 病菌以菌丝体在病部组织上越冬，翌年靠气流与雨水传播。远距离传播是带病种苗。该病主要发生期是梢期和幼果期，果园管理差的发病严重。【防治方法】 ①加强栽培管理，施肥以有机质肥为主，合理搭配其他肥。果园要通风透光，春季排除积水，改善果园环境。②抓适期喷药防治，当谢花约70%时开始喷药，隔10～15d喷1次，连续喷药2～3次，以保护新梢及幼果。药剂可选用：0.5%等式波尔多液、53.8%可杀得2000干悬浮剂900～1100倍液、57.6%冠菌清干粒剂1000倍液、10%世高水分散粒剂1000倍液、80%大生M-45可湿性粉剂500～600倍液、70%丙森锌可湿性粉剂600倍液等。杧果疮痂病为害果实状杧果细菌性黑斑病又称细菌性角斑病。【症状】 主要为害叶片和果实。叶片受害，初期会再现许多小黑点，后发展成多角形病斑，周围有黄晕；严重时病斑合成大块坏死斑。叶柄叶脉被害，局部变黑开裂，造成大量落叶。果实受害，初期出现针头大小、水渍状、暗绿色的小斑，后发展为黑褐色，圆形或稍不规则形斑，中央常纵裂，流出胶液。大量细菌随雨水流淌，在果皮表面出现条状污斑，果实最终腐烂，腐烂速度较炭疽病缓慢。【病原】 Xanthomonas campestris pv. Mangiferae indicae，属黄色假单胞属细菌。【发生规律】 以细菌在病枝组织越冬，翌年靠风雨传播到叶片、果实为害。高温多湿条件下，特别是暴风雨后，发病严重。杧果细菌性黑斑病为害叶片杧果细菌性黑斑病杧果细菌性黑斑病为害果实状【防治方法】 ①冬季彻底清除枯枝落叶、烂果集中烧毁。②适时喷药防护。一般在3月新梢抽生期开始喷药，隔15d喷1次，连喷2～3次。可选用铜剂如77%可杀得可湿性粉剂600倍液，或用1%等量式波尔多液，也可用72%农用链霉素3000～4000倍液。③种苗可用120单位农用链霉素消毒后种植。【症状】 受害初期，无明显症状，后期果面出现近圆形的水渍状软斑，病健界限明显，果心及周围变褐色，生灰白色菌丝，果肉腐烂。【病原】 Thielaviopsis paradoxa （de Seynes） V.Hohnel.，半知菌亚门，根串珠霉属真菌。【发生规律】 病菌从伤口侵入，采前湿气大易发生此病。管理差、虫害多，采收、包装、贮运过程损伤多的发病严重。【防治方法】 ①加强栽培管理，及时除虫，特别要重视套袋前喷药保护。药剂可选用：25%施保克乳油2000倍液、10%世高水分散粒剂1000倍液、80%大生M-45可湿性粉剂500～600倍液等。枇杷心腐病【症状】 果皮裂开，出现不同程度的果肉和果核外露，感染病菌，果实变质腐烂。【发生条件】 本病主要是气候等因素引起的生理性病害。果实着色前后，遇久旱骤降大雨或连续下雨，果肉细胞吸水后迅速膨大，引起外皮破裂。【防治方法】 ①遇干旱及时灌水，雨季及时排除积水，使土壤水分保持相对均衡。②在幼果迅速膨大期，勤根外追肥，如喷0.2%的尿素、硼砂或磷酸二氢钾等。③实行果实套袋。④果皮转淡绿时，喷0.1%的乙烯利。枇杷裂果病【症状】 果皮皱缩、干瘪，病果挂在树上。【发生条件】 本病主要是气候等因素引起的生理性病害。采收前长期低温、干旱天气有利于此病发生。【防治方法】 ①增施有机肥，做好疏花疏果和剪除病枝工作。②在幼果迅速膨大期，进行根外追肥，喷水或施用叶面水分蒸发抑制剂，如ABION-207500倍液。③实行果实套袋。枇杷皱果病【症状】 早期侵染并潜伏于果实内，当果实成熟时才开始显现症状。果面初生暗褐色圆形小斑点，病斑扩大后内部组织腐烂，并发出酒味，病部发生许多朱红色小点，严重时全果腐烂。【病原】 无性阶段为Colletotrichum gloeosporioides Penz.，属半知菌亚门，刺盘孢属真菌。【发生规律】 病菌主要以分生孢子在果实上，特别是在迟熟及留在树上的病果上越冬。翌年温湿度适合时，产生分生孢子，靠风雨传播，从伤口侵入，进行初侵染和再侵染。温暖多湿的季节发病严重。采后贮运和销售过程继续为害。杨桃炭疽病杨桃炭疽病后期症状【防治方法】 ①冬季彻底清园。采果后清除遗留在树上的病果和小果以及落地果，集中深埋，减少翌年侵染源。②采果时注意不使果实受伤，防止病菌侵入。③严重发病果园，在小果期喷药保护。药剂可选用：80%炭疽福美可湿性粉剂600倍液、77%可杀得可湿性粉剂600倍液、1%等量式波尔多液、10%世高水分散粒剂1500倍液、40%多·硫悬浮剂600倍液等。【症状】 叶片受害，先出现黄褐色小斑点，后逐渐扩大为圆形或不规则形、直径3～5mm的红褐色病斑。叶缘的病斑多呈半圆形，赤色，周缘有不明显黄色晕圈。有时病斑呈赤色或紫褐色，边缘赤色，斑外有黄圈，最后灰白色，病斑坏死干枯、脱落，形成穿孔。叶上病斑多时，叶片变黄脱落。杨桃赤斑病【病原】 Cercosppora averrhoae Petch，属半知菌亚门，尾孢属真菌。【发生规律】 病叶越冬的菌丝体为初侵染源。翌年4月，温湿度适合时，产生分生孢子，靠风雨传播，引起初侵染，以后病斑又生大量分生孢子，进行再侵染。多湿的梅雨季节为发病盛期。土壤排水不良、管理不善的果园发病较重。【防治方法】 ①加强栽培管理，提高树体抗病力。雨季及时排除果园积水可减轻为害。冬季彻底清除枯枝落叶，烂果集中烧毁，减少越冬病源。②3月新梢抽生期开始喷药，隔15d再喷1次，连喷2～3次。药剂可选用铜剂，如77%可杀得可湿性粉剂600倍液、1%等量式波尔多液，也可用10%世高水分散粒剂1500倍液、25%施保克乳油2000倍液等。【症状】 主要为害果园地势平坦、水位比较高的杨桃老龄树枝干，使表皮与木质腐朽。然后长出不同形状的病原子实体，使树势衰弱，叶片发黄早落，严重时全株枯死。【病原】 担子菌亚门、木耳科等真菌。杨桃木腐病 （长出子实体）【发生规律】 地势平坦、水位比较高的老龄果园，树势较弱、雨季时间较长，容易发生此病。【防治方法】 ①挖深排水沟，雨季及时排除果园积水。②树干与主枝每年冬季要涂白，涂白剂用石灰水加硫黄合剂。③种植太密的果园要及时修剪或间伐，保持通风透光。【症状】 叶片受害，从叶片中央或叶缘开始发病，会生成圆形或半圆形灰白色病斑，有的合并成不规则形斑，大小 2～12mm，边缘水渍状，病健分界明显。叶腐，自叶尖或叶缘处开始发病，褐色腐烂，病部扩展快，病健分界不明显。叶柄受害，变褐，易产生离层，导致叶片早落，形成秃枝。枝梢受害，产生褐色凹陷近椭圆形病斑。果实受害初呈水渍状褐色小点，后为褐色病斑，潮湿时表面溢出粉红色黏质物 （分生孢子），病斑继续发展，致使果实腐烂或干缩成僵果。杨桃木腐病 （长出子实体与苔藓）【发生规律】 病菌以菌丝体和分生孢子盘在病果及带病枝梢上越冬，翌春温湿适合时，新产生的分生孢子，随风雨或昆虫传播为害。高温多雨的环境下容易发病，果园排水差，偏施氮肥，枝叶密蔽，阴雨连绵，发病较重。5—7月为发病盛期。【防治方法】 柑橘炭疽病的防治方法。黄皮炭疽病为害叶片状【症状】 幼芽、幼叶受害，变褐坏死、腐烂，潮湿时表面生大量白霉和橙红色黏孢团。顶端嫩梢受害呈黑褐色至黑色，病部干枯收缩，呈烟头状。叶片受害，叶尖、叶缘褐腐，有的扩展到叶的大部或全部，病健分界处呈深褐色波纹。枝受害，病斑褐色梭形，四周隆起，中央下凹，病斑表面木栓化，粗糙不平。果受害，病斑圆形、褐色水渍状，潮湿时生大量白霉。【病原】 Fusarium lateritium，是黄及砖红镰孢长孢变种，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体、分生孢子、厚垣孢子在病部或随病残体在土壤中越冬，土壤湿润易发病，土壤带菌率高发病重。4—8月为发病盛期，春梢发病重于秋梢。黄皮梢腐病症状黄皮梢腐病枝梢症状【防治方法】 柑橘炭疽病的防治方法。症状、病原、发生规律及防治方法见第一章第一节柑橘疮痂病。橄榄肿瘤病在福建称树瘿病。黄皮梢腐病果腐症状黄皮疮痴病【症状】 多在主干与主枝上发病，初期病部有小突起，以后患部逐渐增大，形成肿瘤，表面粗糙龟裂，严重时树势衰退，枝叶稀疏，产量低。【病原】 病原不详。【发生规律】 砧穗亲和力差的树发病严重。【防治方法】 ①种植砧穗亲和力好的种苗，耕作时尽量保护好树干，避免造成伤口，减少病菌入侵机会。②主干或主枝发现受感染，要及时刮除病部，然后涂药。药剂可用100倍液氧氯化铜浆，或用75%百菌清加50%瑞毒霉 （1∶1） 50～100倍液等。每隔15～20d涂1次，连涂3次。③加强对处理后的病树的肥水管理，做好松土培肥及根外追肥工作，使树势逐渐恢复。橄榄流胶病橄榄肿瘤病【症状】 幼果受害，一般干枯脱落或干果挂在树上。成熟果实被害，果面上出现圆形或近圆形，中央凹陷，呈褐色至暗褐色病斑，其上生粉红色至橘红色小点。新梢嫩叶受害，叶尖、叶缘焦枯脱落，严重枝梢变褐枯死，病部生黑色小点 （分生孢子器）。番石榴炭疽病【病原】有性阶段为 Glomerella cingulata （Stonem.） Spauld.et Schrenk，属子囊菌亚门，小丛壳属的围小丛壳真菌。无性阶段为Colletotrichum gloeosporioides Penz.，属半知菌亚门，盘长孢状刺盘孢真菌。发生规律及防治方法柑橘炭疽病。【症状】 成熟果实最易感病，多从两端开始发病，病斑圆形淡褐色，后期暗褐色至黑色，最终整个果实黑腐，病部长出许多小黑点 （分生孢子器）。番石榴炭疽病后期症状番石榴焦腐病【病原】 Botryodiplodia theobromae Pat.= Diplodia natalensis Pole-Evans （ Physalospora rhodina Berk.et Curt.），称可可毛色二孢，属半知菌亚门，球色单隔孢属真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体和分生孢子器在病果组织内和病枯枝上越冬，翌年春温湿度适合时，产生分生孢子，靠风雨传播。高温多雨、靠近地面的果容易发生。【防治方法】 ①加强栽培管理，增强树势，提高抗病力。剪除病枝，清除地面病果，集中烧毁。②发病初期及时喷药保护，药剂可选用：75%百菌清可湿性粉剂800～1000倍液、50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液、50%甲基硫菌灵可湿性粉剂1500～倍液等。【症状】 果实受害，果实表面生褐色、不规则形病斑，后期果面出现凹陷，表面密生小黑点，随着病斑扩大和增多，终致全果腐烂。【病原】 Phoma psidii Ahmad，属半知菌亚门，茎点霉属真菌。番石榴褐腐病【发生规律】 病菌以菌丝体和生分孢子器在病果组织上越冬，翌春温湿度适合时，新产生的分生孢子借风雨传播为害。高温多雨、排水不良的环境下容易发病，近成熟果实发病较重。【防治方法】 参考番石榴焦腐病的防治。【症状】 叶片受害生不规则形病斑，褐色、灰褐色或灰白色，边缘隆起，深褐色，与叶健部分界明显，病部中央生黑色小点 （分生孢子器）。番石榴灰斑病【病原】 Pestalotiopsis disseminatum （Thuem.） Stey.（=Pestalotia disseminatum Thuem.），称拟盘多毛孢，属半知菌亚门，拟盘多毛孢属真菌。【发生规律】 病菌以分生孢子盘或菌丝体在病部组织中或随病残体进入土中越冬，翌春温湿度适合时，越冬后的分生孢子或新产生的分生孢子，靠风雨传播从伤口侵入，引起初侵染，以后逐步蔓延。气温25～28℃，相对湿度80%～85%或遇雨易发病。【防治方法】 ①增施有机肥，提高树体抗病力。雨季及时排除果园积水可减轻为害。冬季彻底清除枯枝落叶和烂果，集中烧毁，减少越冬病源。②适时喷药防护。药剂可选用：77%可杀得可湿性粉剂600倍液、50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液、50%甲基硫菌灵可湿性粉剂1500～倍液等。【症状】 叶片受害，初生圆形病斑，中央白色至灰白色，边缘褐色，大小2～4mm。病斑多时，常相互愈合成不规则形大斑，病斑上现黑色小点 （分生孢子器），后期病斑脱落穿孔，严重时穿孔斑密布，叶片呈破烂状。番木瓜白星病【病原】 Phyllosticta caricaepapayae Allesch，称番木瓜叶点霉，属半知菌亚门，叶点霉属真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体及分生孢子器在病部越冬，翌年环境条件适宜时，分生孢子借风雨传播。温暖多雨的天气有利发病，幼株较成株叶片易发病，偏施氮肥或肥料不足、生长势差的植株易发病。【防治方法】 发病初期及早喷药防治，药剂可选用：75%百菌清可湿性粉剂600倍液、50%多菌灵·硫黄可湿性粉剂600倍液、75%百菌清+70%硫菌灵 （1∶1） 1000倍液、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂1500倍液等。番木瓜白星病【症状】 发病初期，在茎、叶脉及嫩叶的支脉间出现水渍斑，随后在嫩叶上出现黄绿相间或深绿与浅绿相间的花叶状。嫩茎及叶柄水渍状斑，逐渐合并成水渍状条纹，新长出的叶也成花叶。感病果实表皮上也出现水渍状圆斑，几个圆斑可联合成不规则形。为害严重时，病株结小果，品质差。病株1～3年内死亡。【病原】 Papaya ringspot virus （PRSV），称番木瓜环斑病毒，马铃薯Y病毒属。【发生规律】 自然传播媒介为桃蚜和棉蚜，且传播率非常高。摩擦非常容易传毒，田间病株叶片与健株叶片进行接触摩擦，便可传染。温暖干燥年份有利于蚜虫的发育和迁飞，该病发生严重。番木瓜环斑病病株症状番木瓜环斑病果实症状【防治方法】 ①选择种植耐病品种。现有栽培品种中，穗中红48、蜜红3号和6号具较高的耐病性。②改变耕作方式。改秋植为春植，当年收果，当年砍伐，以保产量。③及时挖除病株。发现病株应立即挖除，并用生石灰消毒。④消灭病源，适当隔离。老果园在种植前应清除病株，新果园距离老果园2000 m以上。避免与瓜类蔬菜间作，应远离瓜类蔬菜种植。⑤嫩芽、嫩叶期以及蚜虫迁飞高峰期，特别是在干旱季节应及时防治蚜虫，并注意清除果园周围蚜虫喜欢栖息的杂草。药剂可用：10%的吡虫啉 1500～2000倍液与病毒必克、病毒宁、菌克毒克等混用。番木瓜环斑病番木瓜环斑病【症状】 叶片变小，叶柄缩短，幼叶叶尖变褐枯死，叶片可卷曲、脱落，雌花可变雄花，花常枯死。染病果实很小时就大量脱落。留下的果实在幼果期乃至成熟初期均有乳汁流出的症状，且多在果实向阳面流出，流出汁液后果皮会慢慢溃烂、变软，溃烂部分会变褐色，没有溃烂的果实会有瘤状突起，凹凸不平。严重的病果种子退化败育，幼嫩白色种子变成褐色坏死。番木瓜瘤肿病【发病原因】 主要由土壤缺硼引起，属生理性病害。【防治方法】 可进行土壤施硼或根处施硼，选用硼酸或硼砂。在植株旁挖一小穴，每穴施2～5g硼砂，或施3g硼酸，施1～2次。根外施硼可喷0.2%硼酸水，每隔1 周喷1 次，共喷2～3次。施放硼砂或硼酸应在番木瓜植株现蕾时完成。【症状】 果实受害，一般从蒂部开始发病，初为水渍状小圆点，后扩大为褐色圆斑，后期果实腐烂，果实外部木栓化变成黑褐色，然后落果，或变成僵果挂在树上。叶片受害，导致变褐，腐烂落叶。枝梢受害，变褐干枯，呈典型的梢枯状。幼苗受害似青枯病。番荔枝黑腐病【病原】 无性阶段为Botryodiplodia theothromae Pat.，称可可球二孢菌，属半知菌亚门真菌。有性阶段为 Botryosphaeria rhodina （Cke.） Arx，称柑橘葡萄座腔菌，属子囊菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体和分生孢子在病部越冬，翌春温湿度适合时，越冬后的分生孢子或新产生的分生孢子，靠风雨传播引起初侵染，以后逐步蔓延。喜高温高湿，菌丝最适温度32℃。土壤排水不良、管理不善的果园发病较重。【防治方法】 ①增施有机肥，提高树体抗病力。雨季及时排除果园积水可减轻为害。冬季彻底清除枯枝落叶、烂果，集中烧毁，减少越冬病源。②一般在新梢抽生期或谢花坐果期喷药保护，隔15d喷1次，连喷2～3次。药剂可选用：77%可杀得可湿性粉剂600倍液、1%等量式波尔多液、10%世高水分散粒剂1500倍液等。【症状】 叶片受害，初期在叶面上出现针头大小的紫红色小点，以后逐渐扩大为圆形或不规则形病斑，中央呈浅红褐色或灰白色，边缘褐色，直径4～8mm。后期在病斑中央长出黑色小点，是病菌的子囊果。当叶片上有较多病斑时，病叶即干枯脱落。受害严重时全树叶片落光，仅剩秃枝，直接影响树势、产量和品质。杨梅褐斑病叶片症状【病原】 Mycosphacrcalla myricac Saw，属子囊菌亚门，座囊菌科的真菌。【发生规律】 病菌以子囊果在落叶或树上的病叶中越冬，翌年4月底至5月初，子囊果内的子囊孢子成熟，下雨后释放出来的子囊孢子借风雨传播蔓延。8月下旬出现新病斑，9—10月病情加剧，并开始大量落叶。该病一年发生1次，病菌在自然条件下，尚未发现无性孢子，但在P DA 培养基上很容易产生。土壤瘠薄，树势衰弱，5—6 月阴雨天多，排水不良的果园发病重。【防治方法】 ①新种植杨梅，尽量选择排水良好、光照充足的山地。种后加强管理，增施有机肥和钾肥。春季剪除枯枝，扫除落叶，减少病害传染源。②5 月下旬，果实采后喷 1 次0.5%的波尔多液，隔15d 喷1 次70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液。【症状】 有两种类型：①急性青枯型。病树初期症状不甚明显，仅在树体枯死前两个月有所表现。主要是叶色褪绿、失去光泽，树冠基部部分叶片变褐脱落。如遇高温天气，树冠顶部部分枝梢出现失水萎蔫，但次日清晨又能恢复。在6月下旬至7月下旬采果后，如气温剧升，常会引发树体急速枯死。枯死的病树叶色淡绿，并陆续变红褐色脱落，地下部根系及根颈变深褐腐烂。翌年不能萌芽生长，1～2年全株枯死。②慢性衰亡型。发病初期，树冠春梢抽生正常，而秋梢很少抽生或不抽生，地下部根系须根较少，逐渐变褐腐烂。后期病情加剧，叶片变小，树冠下部叶大量脱落。在高温干旱季节的中午，树冠顶部枝梢呈萎蔫状，最后叶片逐渐变红褐色而干枯脱落，枝梢枯死，3～4年全株枯死。【病原】 Botryosphaeria dothidea （Moug.） Ces.et De Not.，属座囊菌目，葡萄座腔菌真菌。无性阶段Dothiorella sp.，属球壳孢目，小穴壳菌真菌。【发生规律】 该病先从杨梅根群的须根上发生，后向侧根、根颈及主干扩展蔓延。在病根的横断面上可见两个褐色坏死环，即为根的形成层和木质部维管束变褐坏死的环，最后导致树体衰败直至枯死。其中急性青枯型主要发生在10～20年生的盛果树上，占枯死树的70%左右。慢性衰亡型主要发生在衰老树上，从出现病症到全树枯死，需3～4年。据调查，该病的发生与栽培管理无相关性，管理精细、生长茂盛的杨梅树也同样患病死亡。整株枯死根颈部腐烂根腐烂【防治方法】 ①增施有机肥与钾肥，增强树势，提高抗病能力。改善土壤理化性状，提高土壤通透性。遇到干旱灌水，雨季排水，防止积水。②及时挖除病株并集中烧毁，减少病源。挖除后的植穴，撒上生石灰。③初发病株，挖出侧根，剪去烂根，刮除根部病部，然后选用50%多菌灵或70%甲基硫菌灵每株0.25～0.5kg加生根粉拌土撒施，同时树冠多次喷射80%代森锰锌可湿性粉剂600倍液、50%多菌灵可湿性粉剂、75%百菌清可湿性粉剂500倍液等杀菌剂加叶面肥，促进病株恢复，但重病树无效。【症状】 果实受害，先在果实表面产生稍凹陷的红色小点，然后病斑逐渐扩大呈褐色，果面出现小黑点 （分生孢子盘）。潮湿时表面溢出粉红色黏质物 （分生孢子）。病情严重时多数病斑融合成大斑，有的破裂。枝条染病产生褐色凹陷斑、叶片染病产生黄褐色干枯小病斑，后扩大为大斑，病部也会生黑色小粒点。【病原】 Glomerella cingulata （Stonem.） Spauld.et Schrenk，称围小丛壳，属子囊菌亚门真菌。【发生规律】 莲雾染病叶片脱落后，在枯叶上产生有性态，遇水喷出子囊孢子，侵染莲雾叶片、枝条或果实，台湾南部11月至翌年4月为旱季发病较少，4—6月进入雨季，梅雨多，有利于病菌传播蔓延，发病较重。【防治方法】 参考橘炭疽病防治方法。莲雾炭疽病为害果实症状【症状】 果实受害，先在果实表面产生淡褐色稍凹陷的病斑，后期果面出现小黑点 （分生孢子盘）。潮湿时表面溢出粉红色黏质物 （分生孢子），病斑继续发展，致使果实腐烂。叶片受害，叶表面初现近圆形褐斑，病斑扩大连成不规则大斑，后期病部生小黑点，是病菌的分生孢子盘。【病原】 无性阶段为 Colletotrichun gloeosporioides Penz.，称盘长孢状刺盘孢菌。属半知菌亚门，刺盘孢属真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体与分生孢子盘在病部或随病残体遗落土壤中越冬，翌春温湿度适合时，新产生的分生孢子借风雨传播。温暖多湿的环境下容易发病，果园排水差，偏施氮肥，枝叶密蔽，阴雨连绵，发病较重。【防治方法】 参考柑橘炭疽病。青枣炭疽病为害果实状【症状】 叶片受害，初期正、反两面均可出现少量白色粉状物，然后白粉逐渐增多，严重时叶片失绿，形成淡黄褐色不规则病斑，后期白粉层颜色变为淡黄色，叶片呈黄褐色，易脱落。嫩枝受害时，严重时白色粉状物布满整个枝条，嫩枝呈黄褐色皱缩、枯死。幼果受害，果面初期出现少量白色粉状物，严重时白色粉状物布满全果，后期小果皱缩，变黄褐色而脱落。成果被害，多出现褐色病斑，果面粗糙，大大降低商品价值。【病原】 无性阶段为Oidiun sp.，为粉孢菌，属半知菌亚门真菌。青枣白粉病为害枝叶症状青枣白粉病为害叶片症状【发生规律】 果园潮湿、通风不良、树冠郁蔽的植株，发病重。台湾青枣品种群中，高朗1号、世纪枣、黄冠等抗病性强，碧云种易感白粉病。【防治方法】 加强栽培管理，增施磷、钾肥和有机肥，以增强树势，提高抗病力。采果后，对果树进行重修剪，将发病的枝条全部剪除并集中烧毁，保持果园通风透光，减少病菌的侵染来源。发病初期，及时喷药，控制病害的扩展和蔓延。药剂可选用：20%粉锈宁乳油1500～2000倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液、40%胶体硫悬浮剂250倍液、30%醚菌酯可湿性粉剂1000～2000倍液等。青枣白粉病为害幼果症状【症状】 果实受害，初期在果实表面上产生浅褐色至褐色水渍状病斑，后病斑迅速扩展，呈湿腐状，直至全果腐烂，条件适宜时在病部表面可见灰色毛绒状霉层，即为病原菌子实体。火龙果桃吉尔霉果腐病幼果症状【病原】 桃吉尔霉 Gilbertella persicaria （Eddy） Hesseltine，称桃吉尔霉，属接合菌亚门，吉尔霉属真菌。【发生规律】 病原菌以菌丝体在病部越冬，翌春条件适宜时产生分生孢子，借风雨传播，适温25～35℃，高温多雨利于病害发生流行。【防治方法】 参考溃疡病的防治。【症状】 茎干受害，初期在茎干表皮形成中央褐色、外围蜡黄色革质状的疮痂斑，圆形或不规则形，后期病斑中央褐色部分结痂状翘起或脱落，病斑上可见黑色小点 （病原菌子实体），发病重时病斑连成片，并产生黑色霉状物，形成黑斑。火龙果黑斑病初期症状【病原】 Alternaria sp.，属半知菌亚门，链格孢属真菌。【发生规律】 病原菌以菌丝体或分生孢子在病部或病残体上越冬，病菌分生孢子借风雨或昆虫传播，高温多雨有利发病。火龙果黑斑病后期症状【防治方法】 参考溃疡病的防治。【病原】 Fusarium semitectum，称半裸镰孢； F. oxysporum，称尖镰孢； F. moniliforme，称串珠镰孢。属半知菌亚门，镰孢属真菌。【症状】 茎部受害，茎组织变褐软化，严重时组织溃烂，病斑处凹陷，茎脊常见缺刻状病症，有时仅剩中央维管束组织。【发生规律】 病原菌以菌丝体、分生孢子或厚垣孢子在病部或病残体上越冬，病菌分生孢子借风雨或昆虫传播，高温多雨有利发病。【防治方法】 参考溃疡病的防治。【症状】 茎部受害，初期在棱茎表面或茎脊上形成灰褐色结痂状病斑，后期病斑中央呈灰白色，上生许多黑色小粒点 （病原菌子实体），也可造成茎干缺刻状或仅剩中央维管束组织。【病原】 Phomopsis sp.，称拟茎点霉属真菌； Septogloeum sp.，称黏隔孢属真菌。 Ascochyta sp.，称壳二孢，均属半知菌亚门真菌。 Epicoccum nigrum，称黑附球菌，属半知菌亚门，附球菌属真菌。 Botryosphaerla sp.，称葡萄座腔菌，属子囊菌亚门真菌。【发生规律】 病原菌以菌丝体、分生孢子或厚垣孢子在病部或病残体上越冬，病菌分生孢子借风雨或昆虫传播，高温多雨有利发病。【防治方法】 参考溃疡病的防治。火龙果茎斑病后期症状【症状】 叶片受害，先从叶尖、叶缘开始发病，病斑为半圆形或不规则形，褐色至暗褐色坏死。果实受害，初呈褐色小斑，后扩展成圆形或不规则形褐斑，导致果实变褐腐烂，后期在病部上长有许多小黑点 （病菌的子实体）。【病原】有性阶段为 Glomerella cingulata （Stonem.） Spauld.et Schrenk，称围小丛壳菌，属子囊菌亚门。无性世代为Colletotrichum gloeosporioides Penz.，称盘长孢状刺盘孢菌，属半知菌亚门，刺盘孢属真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体在病枝、病叶及病果上越冬。翌年越冬的病菌作为初次侵染来源，侵染嫩叶及幼果，病菌侵入后在幼果内潜伏，待果实成熟时便开始发病。一般果园田间管理不善、树势弱，病害都会较为严重。木菠萝炭疽病病果症状【防治方法】 ①农业措施：加强管理，收果后，应进行松土，增施有机肥料，尽量剪除树上的病枝叶及病果。②化学防治：花期及幼果期要喷药保护。药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂 500～600 倍液、10%世高水分散粒剂 （苯醚甲环唑） 1000倍液、40%灭病威胶悬剂500倍液、50%克菌丹可湿性粉剂500倍液、75%百菌清可湿性粉剂600～800倍液。【症状】 叶片受害，自叶缘开始，发生褐色、水渍状病斑。花受害，呈花腐。幼果受害，出现褐色、水渍状、果软腐，并长出灰色毛绒霉状物，挂在树上或脱落。木菠萝小果灰霉病症状【病原】 Botrytis cinerea Pers，称灰葡萄孢菌，属半知菌亚门，葡萄孢属真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体在病残组织中越冬。翌年春开花结果时，随气流传播，侵入寄主组织为害。开花期、幼果期遇多雨、低温、高湿容易发病。【防治方法】 ①田间病残体及时清除，集中烧毁。②花期及幼果期喷药保护。药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂500～600倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液、50%凯泽 （啶酰菌胺） 水分散粒剂1200～1500倍液、80%大生M-45可湿性粉剂600～800倍液、75%百菌清可湿性粉剂600～800倍液等。【症状】 为生理性病害。果实在接近成熟时常产生裂果，多表现为纵向开裂，少数为横向开裂。裂开的果肉初呈黄白色，稍后果肉会长出黑色霉状物而变黑甚至腐烂。木菠萝裂果症状【发病条件】 6—8月果熟期，久旱遇雨或久雨骤晴，温度和湿度剧烈变化，容易诱发裂果。【预防方法】 久旱时注意喷水和喷叶面肥。雨季注意排水，防止受涝和积水。增施有机肥和磷钾肥。【症状】 叶片受害，初期病叶面上出现黄色褪绿斑，以后逐渐变成黄褐色或褐色坏死斑，病斑多呈圆形或不规则形，后期遇潮湿天气病斑上长出黑绒球状霉丛；叶背面病斑的霉层较稀疏，以后小病斑联合成大病斑，整叶枯萎，脱落。枝蔓受害，病部表皮出现黄褐色或红褐色水渍状的纺锤形或椭圆形病斑，稍凹陷或肿胀，后纵裂呈溃疡状病斑，病部表皮或坏死组织产猕猴桃黑斑病为害状生黑色小粒点或灰色绒霉层。果实受害初为灰色绒毛状小霉斑，逐渐扩大，绒霉层脱落，形成0.2～1.0cm 的近圆形凹陷病斑，刮去表皮可见果肉呈褐色至紫褐色坏死，形成锥状硬块。果实后熟期间果肉最早变软发酸，不堪食用。【病原】 有性阶段为称小球腔菌，属子囊菌亚门真菌。无性阶段为Pseudocercospora actinidiae Deighton，称假尾孢菌，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体和有性子实体在枝蔓病部和病株残体上越冬。翌年条件适宜时，在枝蔓病部产生子囊孢子和分生孢子，然后再行侵染。远距离靠带病苗木传播，近距离借气流传播。阴蔽潮湿、通风透光条件差的果园发病严重。【防治方法】 ①冬季彻底清园，结合修剪，彻底清除枯枝、落叶，剪除病枝，消除病源。②春季萌芽前喷布1次3～5波美度石硫合剂。③花芽膨大至终花期进行第一次喷药，可用70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液，以后每隔15～20d喷1次，连续喷药4～5次，基本可控制此病害发生。【症状】 猕猴桃果实熟腐病又称腐烂病，在收获的果实一侧出现类似大拇指压痕斑，微微凹陷，褐色，酒窝状，直径大约5mm，其表皮并不破，剥开皮层显出微淡黄色的果肉，病斑边缘呈暗绿色或水渍状，中间常有乳白色的锥形腐烂，数天内可扩展至果肉中间乃至整个果实腐烂。猕猴桃果实熟腐病为害状【病原】 Botryosphaeria dothidea （Moug.） Ces.et De Not.，称葡萄座腔菌，属子囊菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体或子囊腔越冬。翌春气温回升后，新产生的分生孢子或子囊孢子借风雨传播，侵害花或幼果，在果内潜伏，直至果实后熟期才呈现症状。土壤排水不良、肥水不足、氮肥过多、树势衰弱的果园发病较重。【防治方法】 ①修剪的枝条和枯枝落叶，集中烧毁，减少病源。②幼果套袋：谢花后1周开始幼果套袋，避免侵染。③从谢花后两周至果实膨大期，15d喷1次药。药剂可选用：50%的多菌灵800倍液、50%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液、77%可杀得可湿性粉剂600倍液、1%等量式波尔多液等。【症状】 叶片受害，病斑多从叶片中部或叶缘开始发生，圆形或近圆形，病健交界不明显，灰褐色，具轮纹，上生灰色霉状物，病斑较大，常为1～3cm，春季发生较普遍。猕猴桃灰纹病为害叶片【病原】 Clacbsporium oxysporum Berk et Crut.，称芽枝霉菌，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝在病残组织内越冬，翌年3—4月产生分生孢子，依靠风雨传播，飞溅于叶面，在露滴中萌发，从气孔侵入为害，进而又产生分生孢子进行复侵染，直至越冬。【防治方法】 清除病叶，减少初侵染源。生长期喷洒80%代森锰锌可湿性粉剂800倍液。【症状】 根部受害，初期在根颈部出现暗褐色水渍状病斑，逐渐扩大后产生白色绢丝状菌丝。病部皮层和木质部逐渐腐烂，有酒糟气味，菌丝大量发生后经8～9d 形成菌核，似油菜籽大小，淡黄色。根系逐渐变黑腐烂。地上部叶片变黄脱落，树体萎蔫死亡。【病原】 Armillariella mellea （Vahl ex Fr.） Karst，属担子菌纲，密环菌属真菌。猕猴桃根腐病症状【发生规律】 病菌卵孢子在根部病组织皮层内越冬或随病残组织在土壤中越冬，近距离传播，靠病残体接触，或随耕作和地下昆虫传播。远距离传播，靠带病苗木。翌春气温回升，遇雨开始发病，气温达25℃时，进入发病高峰期。高温高湿季节，果园积水，施肥距主根较近或施肥量大，翻地时造成大的根系损伤，栽植过深，土壤板结，挂果量大，土壤养分不足，栽植时苗木带菌，这些情况都容易引发根腐病。【防治方法】 ①雨季及时排水、及时中耕除草，避免肥害和大的根系损伤，促进根系生长。②药物防治：成株发病，在早春和夏末进行扒土晾根，刮治病部或截除病根，然后用30%DT（琥胶肥酸铜） 悬浮剂100倍液、70%霉灵可湿性粉剂2000～3000倍液、40%的多菌灵悬浮剂500 倍液灌根，药用量0.3～0.5kg/株。并喷施叶面肥。受害严重的病株，及时挖除。【症状】 主要为害根系，受害嫩根上产生大小不等的圆形或念珠状的根瘤，数个愈合成根结团。根瘤初期白色，后变为浅褐色，再变为深褐色，最后变成黑褐色。受根结线虫为害的植株根系发育不良，长势不旺，叶发黄，提早落叶，结果少，果小品质差。重病树常突然萎蔫枯死。【病原】 Meloidogyne javanica、 Meloidogyne incognita，本病属垫刃目，垫刃亚目，根结科，根结线虫属。由爪哇根结线虫和南方根结线虫组成的混合种群，但以爪哇根结线虫为优势种。猕猴桃线虫病症状【发生规律】 以成虫、幼虫和卵在土壤中或受害根部越冬。远距离传播，靠带病苗木。带病土壤和病根，是主要初侵染来源。翌年借雨水传播，以二龄幼虫侵染新根辗转为害。雌成虫产卵于体末端胶质囊内或土壤中，卵经一段时间孵化为幼虫。适温 （20～25℃）、有一定湿度，利于幼虫侵入根部和繁殖。沙质土壤发病较重。【防治方法】 ①引进种苗应严格检疫。定植地及苗圃地避免原来种过猕猴桃、葡萄、番茄的地块，最好采用水旱轮作地作苗圃地和定植地。要重视植株的整形修剪，合理密植，改善园内通风透光条件。一经发现病苗及重病树要挖出烧毁。②药剂防治：患病轻的种苗可先剪去发病的根，然后将根部浸泡在0.5%阿维菌素溶液中1h。对有根结线虫的园地定植前每667m2用10%噻唑膦颗粒剂3～5kg，进行沟施，然后翻入土中。猕猴桃园中发现轻病株可在病树冠下5～10cm的土层撒施10%噻唑膦颗粒剂 （每 667m2撒入 3～5kg），施药后浇水，也有防治效果。【症状】 叶片受害，背面初生黄白色至黄褐色小疱斑，后疱斑表皮破裂，散出锈褐色粉状物，即夏孢子堆和夏孢子。严重时病斑融合呈块斑，造成叶片卷缩、焦枯或脱落。无花果锈病叶面症状无花果锈病叶背症状【病原】 Phakopsora fici-erectae Ito et Otani，称天仙果层锈菌，属担子菌亚门，层锈菌属真菌； Uredo sawadae Ito，属担子菌亚门，夏孢锈菌属真菌。无花果锈病叶背后期症状【发生规律】 以菌丝体和夏孢子堆在病部越冬，夏孢子借气流传播。7—8月条件适宜时开始侵染，主要发生在8—9月。降雨日多、降水量大，以及偏施氮肥的植株发病重。【防治方法】 ①修剪过密枝条，以利通风透光。雨后及时排水，严防湿气滞留。冬季注意清除病叶，集中深埋或烧毁。②发病初期喷药保护，药剂可选用：25%粉锈宁可湿性粉剂1000～1500倍液、20%三唑酮乳油2000倍液、25%敌力脱乳油3000倍液等。【症状】 初期出现褐色小点，后逐渐扩大为近圆形或不规则形褐色病斑，稍凹陷，中间转为灰褐色。病健分界清楚。【病原】 Gloeosporium sp.，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体和分生孢子在病残组织中越冬。以分生孢子借风雨传播，进行初次侵染与再次侵染。温暖潮湿的天气或通透性差的果园容易发病。无花果炭疽病病果【防治方法】 参考木菠萝炭疽病的防治。【症状】 果实受害，初期果面出现油渍状小斑，后逐渐扩展为淡褐色圆斑，边缘水渍状，后期病斑色泽转深，其上长出黑色小点 （分生孢子器）。叶片受害，症状与果实相似。【病原】 Phomopsis passiflorae Lue et Chi，属半知菌亚门，拟茎点霉属真菌。【发生规律】 以分生孢子器在病部越冬，翌春散出分生孢子，借风雨传播侵入果实、叶片为害。【防治方法】 ①冬季清园，扫除枯枝落叶，集中烧毁，减少病源。②化学防治。生长季节和开花2/3时开始喷药保护。药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂800倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液、53.8%可杀得2000干悬浮剂900～1000倍液或1∶1∶100波尔多液等。西番莲褐斑病病叶初期症状西番莲褐斑病病果初期症状【症状】 叶片受害，表现皱缩、畸形、花叶，有鲜艳的黄色斑驳。果实受害，果面有圆形环斑，外果皮变厚、变硬、木质化、畸形。全株生长不良，结实率明显下降。【病原】 Passion fruit virus （PFV），称西番莲病毒。【发生规律】 蚜虫及嫁接等方式传毒。【防治方法】 ①严格检疫，发现病苗及时烧毁。②培育和种植无病苗。③及时防治蚜虫。西番莲病毒病初期症状西番莲病毒病皱缩畸形症状【症状】 幼果被害，果面呈暗褐色，发育停滞，萎缩硬化。稍大的果实发病，初生淡褐色水渍状斑点，以后逐渐扩大，呈红褐色，圆形或椭圆形，稍凹陷，病斑上有橘红色的小粒点（分生孢子盘） 长出。被害的幼果，除少数干缩成为僵果，留在枝上不落外，大多数都在5 月间脱落。果实将近成熟时染病，开始在果面产生淡褐色小斑点，逐渐扩大，成为圆形或椭圆形的红褐色病斑，显著凹陷，其上散生橘红色小粒点，并有明显的同心环状皱纹。最后病果软化腐败，多数脱落。叶片受害，产生近圆形或不规则形淡褐色的病斑，病、健分界明显，后病斑中部有橘红色至黑色的小粒点长出。桃果实炭疽病【病原】 无性世代为Colletotrichum gloeosporioids Penz.，异名Gloeosporium laeticolor Berk，称盘长孢状刺盘孢，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体在病梢组织内越冬，也可以在树上的僵果中越冬。翌年春季形成分生孢子，借风雨或昆虫传播，为害幼果及新梢，为初次侵染。以后于新生的病斑上产生孢子，引起再次侵染。雨水是传病的主要媒介。桃树开花期及幼果期低温多雨，有利于发病。果实成熟期，则以温暖、多云、多雾、高湿的环境发病严重。【防治方法】 ①冬季或早春剪除病枝梢及残留在枝条上的僵果，并清除地面落果。适当增施磷、钾肥，促使桃树生长健壮，提高抗病力。②早春桃芽刚膨大尚未展叶，喷洒2次3～4波美度石硫合剂混合0.3%五氯酚钠。落花后7～10d喷1次，连喷4～5次。药剂可选用：70%甲基硫菌灵超微可湿性粉剂1000倍液、10%苯醚甲环唑水分散粒剂 （世高） 1000～1500倍液、25%阿米西达悬浮剂 （嘧菌酯） 1000～1500倍液等。【症状】 果实受害，最初在果面产生褐色圆形小病斑，如环境适宜，病斑在数日内便可扩及全果，果肉也随之变褐软腐烂，后在病斑表面生出灰褐色绒状霉丛，常呈同心轮纹状排列，病果腐烂后易脱落，但不少失水后变成僵果，悬挂枝上经久不落。花部受害，自雄蕊及花瓣尖端开始，先发生褐色水渍状斑点，后逐渐延至全花，随即变褐而枯萎。天气潮湿时，病花迅速腐烂，表面丛生灰霉，若天气干燥时则萎垂干枯，残留枝上，长久不脱落。嫩叶受害，自叶缘开始，病部变褐萎垂，最后病叶残留枝上。【病原】 Sclerotinia fructicola （Wint.） Rehm.，称果生核盘菌，属子囊菌亚门真菌。无性阶段为Monilia fructicola P oll.，称果生丛梗孢。【发生规律】 病菌以菌丝体或菌核在僵果或枝梢的溃疡部越冬。翌年春季形成分生孢子，借风雨或昆虫传播，引起初次侵染。以后于新生的病斑上产生孢子，引起再次侵染。桃树开花期及幼果期如遇低温多雨，果实成熟期逢温暖、多云多雾、高湿度的环境条件，发病严重。前期低温潮湿容易引起花腐，后期温暖多雨、多雾则易引起果腐。桃褐腐病为害果实后期症状【防治方法】 ①消灭越冬菌源。②及时防治害虫：如桃象虫、桃食心虫、桃蛀螟、桃樁象等虫害，减少伤口。③桃树发芽前喷布5波美度石硫合剂或45%晶体石硫合剂30倍液。落花后10d左右喷布65%代森锌可湿性粉剂500倍液、50%多菌灵1000倍液、70%甲基硫菌灵800～1000倍液等。桃黑星病又称疮痂病。【症状】 果实受害，多在肩部产生暗褐色圆形小点，逐渐扩大至2～3mm，后呈黑色痣状斑点，严重时病斑聚合成片。病菌扩展一般仅限于表皮组织。当病部组织坏死时，果实仍继续生长，病斑处常出现龟裂，呈疮痂状，严重时造成落果。枝梢发病，病斑暗绿色，隆起，常发生流胶，病健组织界限明显。叶片受害，开始于叶背，形成不规则多角形灰绿色病斑，以后病斑干枯脱落，形成穿孔，严重时引起落叶。桃黑星病为害果实症状【病原】 Fusicladiun carpophilum （Thum） Oud.，称嗜果枝孢菌，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体在枝梢的病部越冬。翌年4月下旬至5月中旬形成分生孢子，成为初次侵染来源，经风雨传播，病菌侵染果实时潜育期可达40～70d，侵染新梢和叶片为25～45d。4—6月多雨潮湿发病重。地势低洼潮湿、栽植过密或树冠郁闭利于病害的发生。【防治方法】 ①冬剪，剪除病枝梢，集中烧毁，减少越冬病源。重视夏剪，加强内膛修剪，促进通风透光，降低果园湿度。②药剂防治参见桃褐腐病。【症状】 叶片受害，初现近圆形或不定形的白色霉点，后霉点逐渐扩大，发展为白色粉斑，粉斑可互相连合为斑块，严重时叶片大部分乃至全部为白粉状物所覆盖，恰如叶面被撒上一薄层面粉一般。被害叶片褪黄，甚至干枯脱落。桃白粉病为害叶片桃白粉病为害叶片症状【病原】 Podosphaera tridactyla （Wallr.） de Bary.，属子囊菌亚门，叉丝单囊壳属；另一种Sphaerotheca pannosa var. persicae Woron.，属子囊菌亚门，桃单壳丝菌。两个菌属的无性阶段均为Oidiun spp.，半知菌亚门的粉孢属真菌。【发生规律】 在广东，桃白粉病菌以无性态的分生孢子作为初次侵染和再次侵染的接种体，借气流传播侵染致病，完成病害周年循环，病害越冬期也不明显。在长江流域和长江以北的桃产区，白粉病初侵染接种体为子囊孢子，再次侵染接种体为分生孢子，以菌丝体和闭囊壳越冬。在这些病区，桃白粉病的病征，前期为粉状物，后期为小黑粒 （闭囊壳）。桃白粉病为害叶果症状【防治方法】 药剂防治可选用：50%三唑酮硫悬浮剂1000～1500倍液、70%硫菌灵可湿性粉剂800倍液、45%晶体石硫合剂300倍液、40%多硫悬浮剂600倍液、40%三唑酮多菌灵可湿性粉剂1000倍液、30%醚菌酯可湿性粉剂1500～2000倍液，连喷2～3次。【症状】 新枝受害，以皮孔为中心树皮隆起。出现直径1～4mm的疣状物，其上散生针头状小黑点，即病菌分生孢子器。大枝及树干受害，树皮表面龟裂，粗糙，后瘤皮开裂陆续溢出树脂，透明、柔软状，树脂与空气接触后，由黄白色变成褐色、红褐色至茶褐色硬胶块。病部易被腐生菌侵染，使皮层和木质部变褐腐朽，树势衰弱，叶片变黄，严重时全株枯死。果实受害，由果核内分泌黄色胶质，溢出果面，病部硬化，有时龟裂，严重影响桃果品质和产量。桃侵染性流胶病为害主干症状【病原】 Botryosphaeria ribis Tose Grossenb.et Duggar，属子囊菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体和分生孢子器在被害枝干部越冬，翌年3月下旬至4月中旬产生分生孢子，通过风、雨传播，从皮孔、伤口侵入。1年中有两个发病高峰，分别在5、6月间和8、9月间。当气温15° C左右时，病部即可渗出胶液，随气温上升，树体流胶点增多。一般直立生长的枝干基部以上部位受害严重，侧生枝干向地表的一面重于向上的部位，枝干分杈处受害亦重；土质瘠薄，肥水不足，负载量大，均可诱发该病。黄桃系统较白桃系统感病。【防治方法】 ①结合冬剪，彻底清除被害枝梢；桃树萌芽前，用抗菌剂402100倍液涂刷病斑，杀灭越冬病菌，减少初侵染源。②加强桃园管理，增强树势。低洼积水地注意开沟排水，增施有机肥及磷、钾肥，合理修剪，控制树体负载量，以增强树势，提高抗病力。③在桃树生长期喷药，每隔15d 喷1 次，药剂可选用：0.3波美度石硫合剂、65%代森锌可湿性粉剂500倍液、50%混杀硫悬浮剂500倍液、50%甲基硫菌灵或50%硫黄悬浮剂800倍液等。桃侵染性流胶病为害严重，胶掉落满地桃侵染性流胶病为害主枝症状【症状】 桃非侵染性流胶病又称生理性流胶病。主干和主枝受害，初期病部稍肿胀，早春树液开始流动时，从病部流出半透明黄色树胶，尤其雨后流胶现象更为严重。流出的树胶与空气接触后，变为红褐色，呈胶胨状，干燥后变为红褐色至茶褐色的坚硬胶块。病部易被腐生菌侵染，使皮层和木质部变褐腐烂，严重时枝干或全株枯死。果实受害，果核内分泌黄色胶质，溢出果面，病部硬化，严重时龟裂，不能生长发育，无食用价值。【发生规律】 一般4—10月，雨季特别是长期干旱后骤降暴雨，树龄大的桃树发病严重，幼龄树发病轻。果实流胶与虫害有关，椿象为害是果实流胶的主要原因。沙壤和砾壤土栽培流胶病很少发生，黏壤土和肥沃土栽培流胶病易发生。【防治方法】 ①加强桃园管理，增强树势。增施有机肥，少施或不施氮肥，低洼积水地注意排水，酸性土壤应适当施用石灰或过磷酸钙，改良土壤。修剪在休眠期进行，减少枝干伤口。②防治桃树上的害虫如介壳虫、蚜虫、天牛等。冬春季树干涂白，预防冻害和日灼伤。③发芽前喷5波美度石硫合剂。桃非侵染性流胶病 （雨后流胶）【症状】 叶片受害，叶片上出现水渍状小点，逐渐扩大呈紫褐色至黑褐色病斑，周围呈水渍状黄绿晕环，随后病斑干枯脱落形成穿孔，引起大量早期落叶和枝梢枯死。【病原】 Xanthomonas campestris pv. pruni （Smith） Dye，异名Xanthomonus pruni （Smith） Dowson.，属黄单胞杆菌属细菌。桃非侵染性流胶病 （缺硼流胶）桃非侵染性流胶病【发生规律】 病原菌主要在枝梢的溃疡斑内越冬，翌年春随气温上升，从溃疡斑内流出菌液，借风雨和昆虫传播，经叶片气孔和枝梢皮孔侵染，引起当年初次发病，一般3月开始发病，10—11月多在被害枝梢上越冬。温度适宜、雨水频繁、多雾季节、土壤瘦瘠、排水不良、偏施氮肥、果园郁闭发病较重。桃细菌性穿孔病为害症状【防治方法】 ①注意开沟排水，达到雨停水干，降低空气湿度。增施有机肥和磷钾肥，避免偏施氮肥。②适当增加内膛疏枝量，改善通风透光条件，促使树体生长健壮。③冬季清园修剪，彻底剪除枯枝、病梢，及时清扫落叶、落果等，集中烧毁，消灭越冬菌源。④发芽前喷5波美度石硫合剂，或用1∶1∶100倍式波尔多液铲除越冬菌源。发芽后喷10%农用硫酸链霉素可湿性粉剂1000倍液。幼果期喷代森锌600倍液，或用10%农用硫酸链霉素1000倍液，6月末至7月初喷第1次，15～20d喷1次，共喷2～3次。【症状】 叶片受害，初生圆形、紫色或紫红色小斑，逐步扩大呈褐色近圆形或不规则形，大小2～6mm，后期病斑上长出灰褐色霉状物，中部干枯脱落，形成穿孔，穿孔的边缘整齐，穿孔多时叶片脱落。新梢、果实染病，症状与叶片相似。桃真菌性穿孔病为害症状【病原】 Clasterosporium carpophihim （Lev.） Aderh，称嗜果刀孢菌，属半知菌亚门真菌，异名Coryneun beyerinckii Oud；另一种Cercospora circumscissa Sacc.，称核果尾孢霉，属半知菌亚门真菌，异名Cercospora cerasella Sacc.。【发生规律】 病菌以菌丝体在病部越冬。翌春条件适宜产生分生孢子，借风雨传播，适温25～28℃，低温多雨利于病害发生和流行。【防治方法】 ①及时剪除病枝，彻底清除病叶，烧毁或深埋。桃树萌芽前，喷施1次80%五氯酚钠300倍液。如需防治越冬害虫，可加进3～5波美度石硫合剂混合使用。喷药时间桃芽鳞片膨大，但尚未露出绿色细嫩组织时最好。②于早春喷洒50%甲基硫菌灵可湿性粉剂500倍液、70%代森锰锌干悬粉500倍液、50%苯菌灵可湿性粉剂1500～2000倍液、1∶1∶ （100～160） （硫酸铜∶石灰粉∶水） 波尔多液等。【症状】 主要为害枝干心材，使木质腐朽。然后长出不同形状的病原子实体，使树势衰弱，叶发黄早落，严重时全株枯死。【病原】 真菌，担子菌亚门层菌纲的几种菌：①伞菌目彩绒革盖菌 Coriolus versicolar Quel，②伞菌目裂褶菌 Schizophyllum commune Fr.，③非裕菌目暗黄层孔菌 Fomes fulvus （Scop.） Gill.，称暗黄层孔菌，属担子菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体在病部越冬。在被害部产生子实体，形成担孢子，借风雨传播，通过锯口或虫伤等伤口侵入。老树、病虫弱树及管理不善的桃园常发病严重。桃木腐病长出子实体【防治方法】 ①加强果园管理，及早铲除病残株烧毁，对衰弱树增施肥料。②伤口涂药保护，伤口可用1%硫酸铜液消毒，再涂波尔多浆或煤焦油等保护。③随时检查，刮除病部子实体，清除腐朽木质，用煤焦油消毒保护，以消石灰与水和成糊状堵塞树洞。【症状】 为害果实和叶片。叶片染病时，先出现橙黄色、稍隆起的近圆形斑点，后病部扩大，病斑颜色变深，出现深红色的小粒点。后期病斑变成红黑色，正面凹陷，背面隆起，上面出现黑色小点。发病严重时，病叶干枯卷曲，引起早期落叶。果实受害，果面产生橙红色圆形病斑，稍凸起，边缘不明显，初为橙红色，后变为红黑色，散生深色小红点。李红点病为害叶片初期症状【防治方法】 在李树开花末期至展叶期，喷施下列药剂：1∶2∶200倍式波尔多液；50%琥胶肥酸铜可湿性粉剂500～600倍液；14%络氨铜水剂300～500倍液。从李树谢花至幼果膨大期，连续喷施下列药剂：65%代森锌可湿性粉剂500～600倍液+50%多菌灵可湿性粉剂500倍液；80%代森锰锌可湿性粉剂500倍液+50%异菌脲可湿性粉剂8000倍液；李红点病为害叶片后期症状75%百菌清可湿性粉剂1000 倍液+40%氟硅唑乳油5000倍液；70%代森锰锌可湿性粉剂800倍液+10%苯醚甲环唑水分散粒剂2500倍液等，间隔10天左右，遇雨要及时补喷，可有效防治李树红点病。【症状】 主要为害果实，也为害叶片、枝干。在落花后即显症，初呈圆形或袋状，后变狭长略弯曲，病果表面平滑，浅黄至红色，失水皱缩后变为灰色、暗褐色至黑色，冬季宿留树枝上或脱落。病果无核，仅能见到未发育好的雏形核。叶片染病，在展叶期变为黄色或红色，叶面肿胀皱缩不平，变脆。枝梢受害，呈灰色，略膨胀，弯曲畸形、组织松软；病枝秋后干枯死亡，发病后期湿度大时，病梢表面长出一层银白色粉状物。第二年在这些枯枝下方长出的新梢易发病。【防治方法】 掌握李树开花发芽前，可喷洒下列药剂：李袋果病为害果实初期症状李袋果病为害果实后期症状3～4波美度石硫合剂；1∶1∶100等量式波尔多液；77%氢氧化铜可湿性粉剂500～600倍液；30%碱式硫酸铜胶悬剂400～500倍液；45%晶体石硫合剂30倍液，以铲除越冬菌源，减轻发病。自李芽开始膨大至露红期，可选用下列药剂：65%代森锌可湿性粉剂400 倍液+50%苯菌灵可湿性粉剂1500倍液；70%代森锰锌可湿性粉剂500倍液+70%甲基硫菌灵可湿性粉剂500倍液等，每10～15天喷1次，连喷2～3次。【症状】 主要为害枝干。一年生嫩枝染病，初产生以皮孔为中心的疣状小凸起，渐扩大，形成瘤状凸起物，其上散生针头状小黑粒点，即病菌分生孢子器。被害枝条表面粗糙变黑，并以瘤为中心逐渐下陷。严重时枝条凋萎枯死。多年生枝干受害产生 “水泡状” 隆起，并有树胶流出。李侵染性流胶病为害枝干初期症状李侵染性流胶病为害枝干后期症状【防治方法】 加强果园管理，增强树势。增施有机肥，低洼积水地注意排水，改良土壤，盐碱地要注意降盐排盐，合理修剪，减少枝干伤口。预防病虫伤口。药剂防治可参考桃树侵染性流胶病。【症状】 主要为害果实，亦为害枝梢和叶片。果实发病初期，果面出现暗绿色圆形斑点，逐渐扩大，至果实近成熟期，病斑呈暗紫或黑色，略凹陷。发病严重时，病斑密集，聚合连片，随着果实的膨大，果实龟裂。新梢和枝条被害后，呈现长圆形、浅褐色病斑，继后变为暗褐色，并进一步扩大，病部隆起，常发生流胶。病健组织界限明显。叶片受害，在叶背出现不规则形或多角形灰绿色病斑，后转色暗或紫红色，最后病部干枯脱落而形成穿孔，发病严重时可引起落叶。李疮痂病为害果实症状【防治方法】 早春发芽前将流胶部位病组织刮除，然后涂抹45%晶体石硫合剂30倍液，或喷3～5波美度石硫合剂加80%的五氯酚钠原粉200～300倍液，或用1∶1∶100等量式波尔多液，铲除病原菌。李树腐烂病为害枝条症状生长期于4月中旬至7月上旬，每隔20天用刀纵、横划病部，深达木质部，然后用毛笔蘸药液涂于病部。可用下列药剂：70%甲基硫菌灵可湿性粉剂600～800倍液+50%福美双可湿性粉剂300倍液；80%乙蒜素乳油50倍液；1.5%多抗霉素水剂100倍液处理。症状、病原、发生规律及防治方法见本节桃真菌性穿孔病。梅真菌性穿孔病【症状】 叶片受害，产生圆形或近圆形病斑，边缘有2～3圈红褐色轮纹，中间灰白色，后期病斑出现黑色小点，即病菌的分生孢子盘。梅轮纹病为害叶片症状【病原】 Pestalotiopsis adusta （Ell.et Ev.） Stey.，称茶褐斑拟盘多毛孢，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌主要以分生孢子在叶上病斑组织中越冬，翌春条件适宜产生分生孢子，借风雨传播。【防治方法】 参考桃炭疽病。【症状】 果实受害，初期果面出现深褐至黑褐色斑点，逐渐扩大形成近圆形深色凹陷病斑，病斑中部密生灰色至黑色隆起小点，略呈同心轮纹状排列，即病菌的分生孢子盘，潮湿时涌出粉红色黏质分生孢子团。病菌深入扩展，果肉形成黑硬结块，一个病果常发生1～2个病斑，多者达10多个。新梢受害，发生黑色小圆斑，病斑渐扩大，呈长椭圆形，褐色，凹陷，纵裂，长10～20mm，并产生黑色小点。病部木质腐朽，易折断。叶片受害，先自叶脉、叶柄变黄，后变黑，叶片病斑呈不规则形。【病原】 Glomerella cingulata （Stonem.） Spauld.et Schrenk，称围小丛壳菌，属子囊菌门真菌。柿炭疽病为害果实症状【发生规律】 病菌主要以菌丝体在枝梢病斑组织中越冬，也可在叶痕、冬芽、病果中越冬。翌年初夏，越冬病菌产生新的分生孢子，随风雨传播，侵害新梢和果实。病菌从伤口侵入其潜育期为3～6d，穿过表皮直接侵入其潜育期为6～10d。在北方柿区，枝梢在6月上旬开始发病，到雨季进入发病盛期，后期继续侵害秋梢。果实从6月下旬至7月上旬开始发病，7月中旬开始落果。多雨年份发病严重。【防治方法】 ①清除侵染源发芽前剪除病枝，烧毁或掩埋。②6月上中旬和7月中下旬至8月上旬喷药保护，药剂可选用：1∶5∶ （400～600） 的波尔多液、70%甲基硫菌灵超微可湿性粉剂1000倍液、10%苯醚甲环唑水分散粒剂 （世高） 1000～1500倍液、50%甲基硫菌灵可湿性粉剂500～1000倍液、50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液、42%噻菌灵可湿性粉剂1000倍液等。【症状】 叶片受害，初期在正面出现黄绿色病斑，形状不规则、边缘较模糊，斑内叶脉变黑色，随病斑的扩展，颜色逐渐加深，呈浅黑色，以后中部颜色褪为浅褐色。由于病斑扩展受到叶脉的限制，形状变为多角形，其上密生黑色绒状小粒点，病斑背面开始呈淡黄色，后颜色逐渐加深，最后成为褐色或黑褐色，亦有黑色边缘，但不及正面明显，黑色小粒点也较正面稀少。柿蒂染病，由蒂的四角开始向内扩展，形状不定，病斑两面都产生黑色绒状小粒点。【病原】 Cercospora kaki Ellis et Everh，称柿尾孢菌，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 角斑病菌以菌丝体在病蒂及病叶中越冬，挂在树上的病蒂是主要的初侵染来源和传播中心，一般5—8月雨日多，雨量大，降雨早有利于分生孢子的产生和侵入，发病早而重，越靠近君迁子的柿树发病越重。柿角斑病为害叶面与叶背症状【防治方法】 ①清园时清除挂在树上的病柿蒂，减少病菌来源。②加强栽培管理，增施有机肥，降低果园湿度，创造不利于病菌繁殖的条件。③发芽前喷3～5波美度石硫合剂，落花后20～30d，喷2～3 次药预防。药剂可选用1∶1∶100 的波尔多液、50%甲基硫菌灵可湿性粉剂500～1000倍液、70%代森锌可湿性粉剂500～600倍液等。柿角斑病为害叶面症状柿角斑病为害叶片后期症状【症状】 叶片受害，初期产生圆形小斑点，正面浅褐色，无明显边缘，以后病斑渐变为深褐色，中心色浅，外围有黑色边缘，在病叶变红的过程中，病斑周围出现黄绿色晕环，后期在病斑背面出现黑色小粒点。发病严重时，病叶在5～7d内即可变红脱落，仅留柿果，接着柿果也变红、变软、脱落。柿蒂上的病斑圆形，褐色，出现时间晚于叶片，病斑一般也较小。柿圆斑病为害叶片症状【病原】 Mycosphaerella nawae Hiura et Lkata，称柿叶球腔菌，属子囊菌门真菌。【发生规律】 病菌以未成熟的子囊果在病叶上越冬，此病无再侵染现象，一般来说，上一年病叶多，当年6—8月雨水多时，树势衰弱，发病较重。【防治方法】 参考柿角斑病的防治。【症状】 叶片受害，发病初期在叶片背面产生圆形、椭圆形或不规则形黄白色病斑，病斑沿叶脉扩展，产生黑色霉状物，发病严重时整个叶背面，甚至叶正面布满黑霉，叶片枯黄，早期脱落。果实受害，初期出现淡黄色圆形或不规则形斑点，后病斑木栓化，坚硬、凹陷并龟裂。果实成长期，则在果面生大小不等的圆形黑色病疤，病斑硬化，表面粗糙，开裂，果实不畸形。成熟果实受害，果面形成淡黄绿色病斑，稍凹陷，病斑上产生稀疏的霉层。【病原】 Venturia nashicola Ttanaka et Yarnamoto，称纳雪黑星菌，属子囊菌亚门真菌。【发生规律】 病菌的分生孢子或菌丝体在腋芽的鳞片内，或枝梢病部，或以未成熟的子囊壳在落叶上越冬，翌年春季一般在新梢基部最先发病，病梢是重要的侵染中心。病梢上产生的分生孢子，通过风雨传播到附近的叶、果上，病菌也有可能通过气流传播。当环境条件适宜时，孢子萌发后可直接侵入。病菌最适温度11～20℃。以后病叶和病果上又能产生新的分生孢子，陆续造成再次侵染。由于气候条件不同，梨黑星病在各地发生的时期也不一样。地势低洼、树冠茂密、通风不良、湿度较大的梨园，以及树势衰弱的梨树，都易发生黑星病。梨黑星病为害果实状【防治方法】 ①秋末冬初清扫落叶和落果，早春梨树发芽前结合修剪清除病梢、叶片及果实，集中烧毁，减少病菌侵染源。加强果园管理，合理施肥，合理灌水增强树势，提高抗病力。②幼叶幼果期、果实加速生长、接近成熟的果实，易感染黑星病，必须在发病初期抓紧药剂防治。药剂可选用：40%氟硅唑（福星） 乳油4000～5000倍液、10%苯醚甲环唑 （世高） 水分散颗粒剂2000～2500倍液、80%大生M-45可湿性粉剂800倍液、80%代森锰锌可湿性粉剂800倍液等。【症状】 叶片受害，产生近圆形或不规则形褐色病斑，直径0.5～1.5mm，后出现轮纹，病部变灰白色，并出现黑色小点，叶片上发生多个病斑时，病叶往往干枯脱落。果实受害，多在近成熟期和贮藏期，初以皮孔为中心形成褐色水渍状斑，渐扩大，呈暗红褐色至浅褐色，具清晰的同心轮纹，病果很快腐烂，发出酸臭味，并渗出茶色黏液。有的病果渐失水成为黑色僵果，表面布满黑色粒点。梨轮纹病为害叶面梨轮纹病为害叶背梨轮纹病为害果实【病原】 有性阶段为Botryosphaeria berengerianade Not，属子囊菌亚门真菌。无性阶段为Macrophoma kawatsukai Hara，称轮纹大莲点菌，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌于枝干病斑中越冬。分生孢子翌年2月底在越冬的分生孢子器内形成，借雨水传播。轮纹病的发生和流行与气候条件有密切关系，温暖、多雨发病重。【防治方法】 ①秋冬季清园，清除落叶、落果，剪除病梢，集中烧毁。②加强栽培管理，增强树势，提高树体抗病能力。③生长期喷药防治。药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂800倍液、50%克菌灵可湿性粉剂500倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液、70%代森锰锌可湿性粉剂900～1300倍液、30%碱式硫酸铜胶悬剂 （绿得保） 400～500倍液、80%大生M45可湿性粉剂600～1000倍液或1∶1∶100波尔多液。④果实套袋，保护果实。【症状】 主要为害叶片、新梢和幼果。叶片受害，叶正面形成橙黄色圆形病斑，并密生橙黄色针头大的小点 （性孢子器）；潮湿时，溢出淡黄色黏液，后期小粒点变为黑色；病斑对应的叶背面组织增厚，并长出一丛灰黄色毛状物，毛状物破裂后散出黄褐色粉末。果实、果梗、新梢、叶柄受害，初期病斑与叶片上的相似，后期在病斑的表面产生毛状物。梨锈病为害状梨锈病叶面症状【病原】 Gymnosporangium haraeanum Spd，称梨胶锈菌，属担子菌亚门真菌。病菌在整个生活史上可产生4 种类型孢子：性孢子器 （性孢子，受精丝）、锈孢子、冬孢子、担孢子。梨锈病叶背症状梨锈病为害幼果【发生规律】 病菌以多年生菌丝体在转主寄主桧柏枝上形成菌瘿越冬，翌年3月形成冬孢子角，遇雨萌发形成担子和担孢子，担孢子经风雨传播至梨树上，后期形成的锈孢子不再为害梨树，而随气流转至转主寄主上越夏和越冬。病害发生的轻重与转主寄生的多少、距离的远近直接有关。此外，还与梨树萌芽展叶期降水量的多少和品种的抗病性有关。【防治方法】 ①清除梨园周围5km以内的桧柏、龙柏等转主寄主，是防治梨锈病最彻底有效的措施。在新建梨园时，应考虑附近有无桧柏、龙柏等转主寄主存在，如有应全部清除，若数量较多，且不能清除，则不宜作梨园。②掌握在梨树萌芽期至展叶后25d内，即担孢子传播侵染的盛期喷药保护。药剂可选用：20%粉锈宁乳油1500～2000倍液，隔10～15d再喷1次。若防治不及时，可在发病后叶片正面出现病斑 （性孢子器） 时，喷20%粉锈宁乳油1000倍液。【症状】 初在叶背面产生白色粉状霉斑，严重时布满叶片，相应的叶正面为黄色病斑。后期在霉部上产生黄褐色至黑色的小粒点 （闭囊壳）。秋季，在梨树的基部叶片背面产生大小不一、数目不等的：圆形褐色病斑，常扩展到全叶，病斑上形成灰白色粉层 （分生孢子梗和分生孢子）。后期在病斑上产生小粒点 （为病菌的闭囊壳）。闭囊壳初期黄色，后变为褐色至黑褐色。病害严重时可造成早期落叶。梨白粉病【病原】 有性阶段为Phyllactinia pyri （Cast.） Homma，属子囊菌亚门的真菌梨球针壳。【发生规律】 病菌以子囊壳在病叶病枝上越冬。翌年条件适宜时，子囊壳破裂，散发出子囊孢子，随风雨传播，落到梨树叶片上进行初侵染。当年老熟的菌丝体产生分生孢子，进行再侵染。越冬子囊壳6—7月成熟，7月开始发病，秋季为发病盛期。密植和树冠郁闭的梨园易发病，排水不良和偏施氮肥的梨园发病重。【防治方法】 ①加强栽培管理，增施有机肥，避免偏施氮肥，疏除过密枝条。冬季清除园内落叶、枯枝，集中烧毁或深埋减少病源。②初发病开始喷药。药剂可选用：20%粉锈宁乳油1500～2000倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液。【症状】 灰斑病多发生于生长中后期。病斑初期近圆形、淡灰色，后发展为圆形或不规则形，银灰色，病健交界处有一微隆起的褐色线纹；后期，病斑表面可散生许多小黑点。【病原】 Phyllostica pirina Saccardo，称梨叶点霉菌，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌主要以菌丝体或分生孢子器在病落叶上越冬，翌年产生分生孢子，通过风雨传播为害，7—8月为发病盛期。多水年份发病重，多雨季节发病快。梨灰斑病为害叶片【防治方法】 ①加强栽培管理，增强树势，提高树体的抗病能力。彻底清除落叶，减少病源。②发病严重果园，在7—8月喷药防治。药剂可选用：80%大生M-45可湿性粉剂800～1000倍液、70%代森锰锌水分散粒剂1000～1200倍液、50%多菌灵可湿性粉剂或胶悬剂800～1000倍液、25%苯菌灵乳油1000～1500倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000～1200倍液及1∶1∶100波尔多液等。【症状】 叶片受害，叶片上初发生圆形或近圆形的褐色病斑，以后逐渐扩大。发病严重的叶片，往往有病斑数十个，多数病斑合并，形成不规则形褐色斑。病斑后期边缘褐色，中间呈灰白色，密生黑色小点。梨褐斑病为害叶片【病原】 有性阶段为Mycosphaerella sentina （Fr.） Schrot，称梨球腔菌，属子囊菌亚门真菌。无性阶段为 Septoria piricola Desm.，称梨生壳针孢，属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病菌以分生孢子器及子囊壳在落叶的病斑上越冬。翌年春季通过风雨传播分生孢子或子囊孢子，孢子沾附在新叶上，环境条件适宜时，发芽侵入叶片，引起初次侵染。在梨树生长期中，病斑上能形成分生孢子器，其中成熟的分生孢子，可通过风雨传播，再次侵害叶片，陆续引起叶片发病。在5—7月，多雨、潮湿，发病重。树势衰弱、排水不良的果园，发病也多。【防治方法】 ①冬季扫除落叶，集中烧毁，或深埋土中病源。②加强梨园管理，增施有机肥，促使树势生长健壮，提高抗病力。雨后注意园内排水，降低果园湿度，以防病害发展蔓延。③早春在梨树发芽前，结合梨锈病防治喷药保护，药剂可选用：0.6%石灰倍量式波尔多液。落花后，当病害初发时，4月中下旬喷第二次药，药剂及浓度同上。在天气多雨，有利于病害盛发的年份，可于5月上中旬再喷射0.6%波尔多液1次。一般喷药2～3次，即能达到良好的防治效果。【症状】 主要发生在果实上。染病的幼果，初期仅在向阳面变红，果肉逐渐木质化，后致果实开裂，裂口处果肉干缩变黑，湿度大或多雨时，病菌乘机从伤口侵入，引致果腐。梨裂果病【发病条件】 属生理病害。多认为是水分供应不均匀引起的。树势衰弱或染有腐烂病、黑星病的发病重。【防治方法】 ①加强梨园管理，做到水肥均衡供应，科学修剪，如疏剪或缩剪，调节坐果率。②及时防治腐烂病、黑星病、日灼病。【症状】 叶片上病斑不规则形至圆形，褐色或暗褐色，常有红褐色的细边缘，上生许多小黑点。芽被害后，病部发褐腐烂，新梢最终枯死。小枝被害，易遭风折。栗蓬受害，于基部出现褐斑。栗果受害，在种仁上发生近圆形、黑褐色或黑色的坏死斑，后果肉腐烂、干缩，外壳的尖端常变黑。板栗炭疽病为害叶片【病原】有性阶段为Glomerella cingulata（Stonem.）Spauld.et Schrenk，称围小丛壳，属子囊菌亚门，小壳属真菌。无性阶段为Colletotrichum gloeosporioides Penz.，称盘长孢状刺盘孢，属半知菌亚门刺盘孢属真菌。【发生规律】 以菌丝体在病芽、病枝梢组织内越冬。或在感病栗蓬上越冬。翌春条件合适时产生分生孢子，借风雨传播，为害幼芽和新梢，经皮孔或自表皮直接侵入，并于病部产生大量分生孢子，辗转为害嫩叶与栗蓬。管理粗放、缺肥、枝梢纤弱、栗瘿蜂等害虫较多的果园发病较重。【防治方法】 ①冬季清园，剪除病枯枝，集中烧毁。②清园喷1次50%多菌灵可湿性粉剂600～800倍液。4—5月和8月上旬，各喷1次下列药剂：0.2～0.3波美度石硫合剂、0.5%石灰半量式波尔多液、65%代森锌可湿性粉剂800倍液。【症状】 叶片受害，初期在叶缘、叶脉处形成近圆形或不规则的橘红色病斑，边缘褐色，中央散生黑色小粒。随着病斑的扩大，叶面病斑连在一起，看上去像 “半叶枯”，引起叶片提前大量脱落。板栗赤斑病为害叶片【病原】 Phyllosticta castaneae Ell.et Ev，称叶莲点霉菌。属半知菌亚门真菌。【发生规律】 病原菌以分生孢子在落叶病斑上越冬，为翌年初侵染的病源，翌年春季板栗叶片展开时分生孢子随风、雨、昆虫传播到新叶上，从伤口或气孔处侵入叶内扩展蔓延。6—7月出现大量落叶、落果。【防治方法】 ①冬季将落叶及修剪的病枝枯叶集中烧毁，消灭越冬病源。②春季在栗树展叶期用1∶1∶160波尔多液进行预防。发病初期可用70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液、50%多菌灵可湿性粉剂600～800倍液、40%退菌特可湿性粉剂1000倍液等。【症状】 该病主要为害板栗叶片和幼苗。发病初期，叶背散生淡黄绿色小点，后逐渐长出黄褐色突起 （夏孢子），后期表皮破裂，散出黄粉；叶面相对应位置，现褪绿小点，边缘不规则，后变为黄色或暗褐色，无光泽。冬季孢子在叶背面着生，黄色或黄褐色，后期表皮不破裂。板栗锈病病叶初期症状板栗锈病病叶中期症状【病原】 Pucciniastrun castaneae Diet，称栗膨痂锈菌，属担子菌亚门，膨痂锈菌属真菌。【发生规律】 以冬孢子堆在落叶上越冬。6月中下旬开始发病，8—9月为发病盛期，9月下旬出现冬孢子堆。干旱、气温高的年份以及较郁闭的栗园，发病严重。【防治方法】 ①清除枯枝落叶，减少病源。②喷药保护，在栗树萌芽前，用3波美度石流合剂喷一次，发病初期，喷0.3波美度石流合剂或25%粉锈宁可湿性粉剂1500～2000倍液。夏季气温高，喷粉锈宁可湿性粉剂容易发生药害，可改用20%萎锈灵乳油800倍液。【症状】 果实受害，初为圆形深褐色小斑点，后扩大，中央凹陷，呈灰白色，外部仍为深褐色，而周缘紫褐色，似 “鸟眼”状。多个病斑可连接成大斑，后期病斑硬化或龟裂。病果小而酸，失去食用价值。空气潮湿时，病斑上出现乳白色的黏质物，此为病菌的分生孢子团。叶片受害，开始出现针头大小的黑褐色斑点，周围有黄色晕圈，后病斑扩大呈圆形或不规则形，中央灰白色，稍凹陷，边缘紫褐色至黑褐色，直径l～4mm。干燥时病斑自中央破裂穿孔，但病斑周缘仍保持紫褐色的晕圈。叶脉被害，病斑呈梭形、凹陷、灰色或灰褐色，边缘暗褐色，后由于组织干枯，常使叶片扭曲、皱缩。新梢、蔓、叶柄或卷须果梗和穗轴等处的症状与新梢相似。【病原】 无性阶段为Sphaceloma ampelium （de Bary），称葡萄痂圆孢菌，属半知菌亚门，痂圆孢菌属真菌。【发生规律】 病菌主要以菌丝体潜伏于病蔓、病梢等组织越冬，也能在病果、病叶痕等部位越冬。翌年春条件适宜时产生分生孢子，借风雨传播。孢子发芽后，芽管直接侵入幼叶或嫩梢，引起初次侵染。侵入后，菌丝主要在表皮下蔓延。以后在病部形成分生孢子盘，突破表皮，在湿度大的情况下，不断产生分生孢子，进行再侵染。病菌远距离的传播则依靠带病的枝蔓。果园低洼、排水不良、枝叶郁闭、遇多雨高湿，发病严重。【防治方法】 ①冬季修剪时，剪除病枝梢及残存的病果，刮除病、老树皮，彻底清除果园内的枯枝、落叶、烂果等，然后集中烧毁，减少病源。②种植抗病品种。③化学防治：芽鳞膨大，但尚未出现绿色组织时喷3～5波美度的石硫合剂。开花前后各喷1 次1∶0.7∶250 的波尔多液或10%世高水分散粒剂2000～3000倍液、52.5%抑快净水分散粒剂2000～3000倍液、50%苯菌灵可湿性粉剂1500～1600倍液、50%多菌灵可湿性粉剂600倍液等。葡萄黑痘病嫩枝嫩叶症状葡萄黑痘病卷须症状葡萄黑痘病蔓上症状葡萄黑痘病叶片症状葡萄黑痘病果实症状【症状】 叶片被害，初生淡黄色水渍状边缘不清晰的小斑点，以后逐渐扩大为褐色不规则形或多角形病斑，数斑相连变成不规则形大斑。天气潮湿时，于病斑背面产生白色霜霉状物，即病菌的孢囊梗和孢子囊。发病严重时病叶早枯落。嫩梢受害，形成水渍状斑点，后变为褐色略凹陷的病斑，潮湿时病斑也产生白色霜霉。病重时新梢扭曲，生长停止，甚至枯死。卷须、穗轴、叶柄有时也能被害，其症状与嫩梢相似。幼果被害，病部褪色，变硬下陷，上生白色霜霉，很易萎缩脱落。果粒半大时受害，病部褐色至暗色，软腐早落。果实着色后不再侵染。【病原】 Plasmopara viticola （Berk.et Curt.） Berl.et de Toni，称葡萄霜霉菌，属鞭毛菌亚门，单轴霉属真菌。葡萄霜霉病症状【发生规律】 葡萄霜霉病菌以卵孢子在病组织中越冬，或随病叶残留于土壤中越冬。翌年在适宜条件下卵孢子萌发产生芽孢囊，再由芽孢囊产生游动孢子，借风雨传播，自叶背气孔侵入。华东地区5月开始发生，6—7月和9月为发病盛期。广东5月下旬开始发生，7月为发病盛期。冷凉潮湿，多雨多露，易引起病害流行。果园地势低洼、架面通风不良、树势衰弱，有利于病害发生和流行。葡萄霜霉病后期症状【防治方法】 ①秋季彻底清扫果园，剪除病梢，收集病叶，集中深埋或烧毁，减少菌源。②加强果园管理，及时夏剪，引缚枝蔓，改善架面通风透光条件。注意除草、排水、降低地面湿度。适当增施磷钾肥，对酸性土壤施用石灰，提高植株抗病能力。③选用无滴消雾膜做设施的外覆盖材料，并在设施内全面积覆盖地膜，降低其空气湿度和防止雾气发生，抑制孢子囊的形成、萌发和游动孢子的萌发侵染。④化学防治，芽前地面喷1次3～5波美度的石硫合剂。发芽后每10d左右喷1次杀菌保护剂，药剂可选用：1∶0.7∶200 的波尔多液、69%代森锰锌·烯酰吗啉可湿性粉剂800倍液、72%霜脲氰·代森锰锌可湿性粉剂750倍液、58%雷多米尔锰锌可湿性粉剂600倍液、64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液等。【症状】 南方葡萄产区重要病害之一。叶片被害，初期叶面出现零星单个小黄点，周围水渍状，之后叶片背面形成橘黄色夏孢子堆，逐渐扩大，沿叶脉处较多。夏孢子堆成熟后破裂，散出大量橙黄色粉末状夏孢子，布满整个叶片，致叶片干枯或早落。秋末病斑变为多角形灰黑色斑点，形成冬孢子堆，表皮一般不破裂。偶见叶柄、嫩梢或穗轴上出现夏孢子堆。【病原】 Phakopsora ampelopsidis Diet.et Syd.，称葡萄层锈菌，属担子菌亚门真菌，属复杂生活环锈菌。葡萄锈病初期症状【发生规律】 病菌以冬孢子越冬。翌春初侵染后产生夏孢子，夏孢子堆裂开散出大量夏孢子，通过气流传播。叶片上有水滴及温度适宜时，夏孢子长出芽孢，通过气孔侵入叶片。菌丝在细胞间蔓延，以吸器刺入细胞吸取营养，后形成夏孢子堆。生长季节，条件适宜多次进行再侵染，至秋末又形成冬孢子堆。高湿利于夏孢子萌发，光线对萌发有抑制作用，因此夜间的高温成为此病流行必要条件。生产上有雨或夜间多露的高温季节利于锈病发生，管理粗放且植株长势差易发病重。【防治方法】 ①加强葡萄园管理。入冬前施足有机肥，果实采收后仍要加强肥水管理。发病初期清除病叶，既可减少田间菌源，又有利于通风透光，降低葡萄园湿度。②化学防治。发病初期喷洒0.2～0.3波美度石硫合剂或45%晶体石硫合剂300倍液、20%三唑酮 （粉锈宁） 乳油1500～2000倍液、20%三唑酮·硫悬浮剂1500 倍液、40%多·硫悬浮剂400～500 倍液、25%敌力脱乳油3000倍液等。隔15～20d喷1次。葡萄锈病中期症状葡萄锈病后期症状【症状】 叶片受害，叶表面产生一层灰白色粉质霉，逐渐蔓延到整个叶片，严重时病叶卷缩枯萎。新枝蔓受害，初呈灰白色小斑，后扩展蔓延使全蔓发病，病蔓由灰白色变成暗灰色，最后变为黑色。果实受害，先在果粒表面产生一层灰白色粉状霉，擦去白粉，表皮呈现褐色花纹，最后表皮细胞变为暗褐色，受害幼果容易开裂。【病原】 Uncinula necanor （Schw.） Burr，称葡萄钩丝壳菌，属子囊菌亚门，钩丝壳属真菌。无性阶段称托氏葡萄粉孢霉，属半知菌亚门，粉孢属真菌。【发病规徘】 病菌以菌丝体在被害组织内或芽鳞间越冬。翌年条件适宜时产生分生孢子，分生孢子借气流传播，侵入寄主组织后，菌丝蔓延于表皮外，以吸器伸入寄主表皮细胞内吸取营养。分生孢子萌发的最适温度为25～28° C，空气相对湿度较低时也能萌发。一般在6月中下旬开始发病，7月中旬渐入发病盛期，9—10月停止发病。夏季干旱和温暖而潮湿或闷热多云的天气有利于病害发生。栽植过密、枯叶过多、通风不良时利于发病。葡萄白粉病症状葡萄白粉病前、中、后期症状【防治方法】 ①秋后剪除病梢，清扫病叶、病果及其他病残体，集中烧毁。②加强栽培管理。及时摘心绑蔓，剪除副梢及卷须，保持通风透光。雨季注意排水防涝，喷磷酸二氢钾等叶面肥和根施复合肥，增强树势，提高抗病力。③化学防治。参考葡萄锈病的化学防治。【症状】 只为害葡萄叶片，有大褐斑病和小褐斑病两种。大褐斑病初在叶面长出许多近圆形、多角形或不规则形的褐色小斑点。以后斑点逐渐扩大，直径达3～10mm。病斑中部呈黑褐色，边缘褐色，病、健部分界明显。叶背病斑呈淡黑褐色。发病严重时，一张叶片上病斑可多达数十个，常互相愈合成不规则形的大斑，后期在病斑背面产生深褐色的霉状物，即病菌的孢梗束及分生孢子。严重时病叶干枯破裂，以至早期脱落。小褐斑病在叶片上呈现深褐色小斑，中部颜色稍浅，后期病斑背面长出一层较明显的黑色霉状物，病斑直径2～3mm，大小比较一致。葡萄小褐斑病症状葡萄大褐斑病症状【病原】 Pseudocercospora vitis （Lev.） Speg，属半知菌亚门真菌。【发病规律】 病菌以菌丝体和分生孢子在落叶上越冬，翌年初夏长出新的分生孢子梗，产生新的分生孢子，新、旧分生孢子通过气流和雨水传播，引起初次侵染。分生孢子发芽后从叶背气孔侵入，发病通常自植株下部叶片开始，逐渐向上蔓延。病菌侵入寄主后，经过一段时期，环境条件适宜时，产生第二批分生孢子，引起再次侵染，造成陆续发病。【防治方法】 ①秋后彻底清扫果园落叶，集中烧毁或深埋，以消灭越冬菌源。②在发病初期结合防治黑痘病、炭疽病等，药剂可选用：0.5%石灰半量式波尔多液、70%代森锰锌可湿性粉剂500～600倍液、75%百菌清可湿性粉剂600～700 倍液等。每隔10～15d喷1次，连续喷2～3次，有良好的防治效果。葡萄炭疽病是在葡萄近成熟期引起果实腐烂的重要病害之一，在我国各葡萄产区均有分布，长江流域及黄河故道各省市普遍发生，南方高温多雨的地区发生最普遍。高温多雨的地区，早春也可引起葡萄花穗腐烂，严重时可减产30%～40%。【症状】 主要为害果粒，造成果粒腐烂。严重时也可为害枝干、叶片。果实着色后、近成熟期显现症状，果面出现淡褐或紫色斑点，水渍状，圆形或不规则形，渐扩大，变褐色至黑褐色，腐烂凹陷。天气潮湿时，病斑表面涌出粉红色黏稠点状物，呈同心轮纹状排列。病斑可蔓延到半个至整个果粒，腐烂果粒易脱落。嫩梢、叶柄或果枝发病，形成长椭圆形病斑，深褐色。果实近成熟时，穗轴上有时产生椭圆形病斑，常使整穗果粒干缩。卷须发病后，常枯死，表面长出红色病原物。叶片受害多在叶缘部位产生近圆形或长圆形暗褐色病斑。空气潮湿时，病斑上亦可长出粉红色的分生孢子团。【防治方法】 春季幼芽萌动前喷洒3～5波美度石硫合剂加0.5%五氯酚钠。在葡萄发芽前后，可喷施1∶0.7∶200倍式波尔多液、80%代森锰锌可湿性粉剂300～500倍液、波美3度石硫合剂+80%五氯酚钠原粉200倍液。葡萄炭疽病为害情况葡萄落花期，病害发生前期，可喷施下列药剂：50%多菌灵可湿性粉剂600～800倍液；80%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液；70%丙森锌可湿性粉剂600～800倍液等。6月中旬葡萄幼果期是防治的关键时期，可用下列药剂：2%嘧啶核苷类抗生素水剂200倍液；1%中生菌素水剂250～500倍液；35%丙环唑·多菌灵悬浮剂1400～2000倍液；25%咪鲜胺乳油800～1500倍液；40%腈菌唑可湿性粉剂4000～6000倍液；40%氟硅唑乳油8000～10000倍液；40%克菌丹·戊唑醇悬浮剂1000～1500倍液；葡萄幼果期炭疽病发生前期症状50%醚菌酯干悬浮剂3000～5000倍液；43%戊唑醇悬浮剂2000～2500倍液；60%噻菌灵可湿性粉剂1500～2000倍液；5%己唑醇悬浮剂800～1500倍液；6%氯苯嘧啶醇可湿性粉剂1000～1500倍液等，喷施，间隔10～15天，连喷3～5次。灰霉病是一种严重影响葡萄生长和贮藏的重要病害。目前，在河北、山东、辽宁、四川、上海等地发生严重。春季是引起花穗腐烂的主要病害，流行时感病品种花穗被害率达70%以上。成熟的果实也常因此病在贮藏、运输和销售期间发生腐烂。【症状】 主要为害花序、幼果和已成熟的果实，有时亦为害新梢、叶片和果梗。花序受害，似热水烫状，后变暗褐色，病部组织软腐，表面密生灰霉，被害花序萎蔫，幼果极易脱落。新梢及叶片上产生淡褐色，不规则形的病斑，亦长出鼠灰色霉层。花穗和刚落花后的小果穗易受侵染，发病初期受害部呈淡褐色水渍状，很快变暗褐色，整个果穗软腐，潮湿时病穗上长出一层鼠灰色的霉层。成熟果实及果梗被害，果面出现褐色凹陷病斑，很快整个果实软腐，长出鼠灰色霉层，果梗变黑色，不久在病部长出黑色块状菌核。葡萄灰霉病为害幼果症状葡萄灰霉病为害果实症状【防治方法】 春季开花前，喷洒1∶1∶200 等量式波尔多液、50%多菌灵可湿性粉剂500倍液或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂600倍液等，喷1～2次，有一定的预防效果。葡萄灰霉病为害花序症状4月上旬葡萄开花前，可喷施下列药剂进行预防：80%代森锰锌可湿性粉剂600～800倍液；50%多菌灵可湿性粉剂800～1000倍液；在病害发生初期，可用下列药剂：葡萄灰霉病为害初期症状40%嘧霉胺悬浮剂1000～1200倍液；50%嘧菌环胺水分散粒剂625～1000倍液；40%双胍三辛烷基苯磺酸盐可湿性粉剂1000～1500倍液；40%双胍辛胺可湿性粉剂1000～2000倍液；25%咪鲜胺乳油1000～1500倍液；60%噻菌灵可湿性粉剂500～600倍液；50%异菌脲可湿性粉剂1000～1500倍液；50%苯菌灵可湿性粉剂1000～1500倍液喷施，间隔10～15天，连喷2～3次。【症状】 花受害，病菌从将开放的花侵染，使花呈浅褐色坏死腐烂，产生灰色霉层。叶片受害，多从基部老黄叶边缘侵入，形成 “V” 形黄褐色斑，其上有不甚明显的轮纹，上生较稀疏灰霉。果实受害，多从残留的花瓣或靠近或接触地面的部位开始，也可从早期与病残组织接触的部位侵入，初呈水渍状灰褐色坏死，随后颜色变深，果实腐烂，表面产生浓密的灰色霉层。草莓灰霉病【病原】 Botrytis cinerea Pers，属半知菌亚门，灰葡萄抱真菌。【发生规律】 病菌以菌丝体、分生孢子随病残体或菌核在土壤内越冬。条件适宜时产生分生孢子，借气流传播，进行初次侵染和再次侵染。空气湿度大，有利此病的发生与发展。【防治方法】 ①收获后彻底清除病残落叶。②采用高垄地膜覆盖或滴灌节水栽培。③化学防治。移栽或育苗整地前用65%甲霉灵可湿性粉剂400倍液，或用50%多霉灵可湿性粉剂600倍液，或用50%敌菌灵可湿性粉剂400倍液，对棚膜、土壤及墙壁等表面喷雾，消毒灭菌。在结果期有发病中心出现，要及时喷药防扩散，药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂800倍液、75%百菌清可湿性粉剂600～800倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液等。【症状】 果实受害，变褐软腐，淌水，表面密生白色绵毛，上有点点黑霉，即病原菌的孢子囊。果实堆放，往往发病严重。【病原】 Rhizopus stolonifer （Ehrenb.ex Fr.） Vuill.，属接合菌亚门，接合菌纲中的匍枝根霉真菌。曾有研究用11种根霉接种草莓，结果都能为害，但主要是匍枝根霉。草莓软腐病【发生规律】 病菌广泛存在于土壤内、空气中及各种残体上。自伤口侵入，匍枝根霉的孢子萌发后，并不直接侵染，而必须生长一定量后才能为害寄主。通常先在接触土壤的果实为害，潮湿情况下产生大量孢子囊，经风雨、气流扩散，进行再侵染。贮藏期间继续接触，振动传病。由于病菌的菌丝体分泌果胶酶溶解细胞间的果胶层，结果组织崩溃，细胞间隙积聚了果汁，最终造成淌水。温度较高或相对湿度低都不利于病害发生。【防治方法】 ①果实接近成熟时避免积水。②发病初期喷药防治，药剂可选用：50%多菌灵可湿性粉剂800倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液等。

由RSV引起的水稻条纹叶枯病最早于1897年在日本关东发现，后在朝鲜、乌克兰均有发生。1962年我国在江苏、浙江首先发现RSV。目前该病已经在全国16个省、市、自治区发生，在云南、辽宁、北京、河南、山东、江苏、上海十分常见，特别是云南的保山、楚雄、昆明，北京的双桥，河南原阳，山东济宁及江苏北部的姜堰、洪泽等地，发生更为普遍严重。RSV由介体灰飞虱（Laodelphax striatellus Fallen）传播，灰飞虱的带毒虫量是水稻条纹叶枯病发生流行的主要影响因子。因此，建立一种快速灵敏检测灰飞虱带毒率的方法对于预测水稻条纹叶枯病的流行及病害防治十分必要。目前国内外用于检测灰飞虱带毒率的方法主要有ELISA、RT-PCR和Northern杂交等。但RT-PCR和Northern杂交成本高，不适于大批量检测样品。用斑点免疫结合（DIBA）法检测快速灵敏，简单易行，适用于大批量检测，并且适合于基层工作人员直接检测灰飞虱携带的病毒，从而为病害的流行预测提供依据。为此，我们利用斑点免疫结合（DIBA）检测RSV的方法对浙江部分市县的灰飞虱进行了水稻条纹叶枯病毒带毒率测定，并与采用生物法测定的灰飞虱传毒率进行了比较。现将研究结果报道如下：1.1.1 供试虫源、水稻品种 2006年供试虫源为采自浙江长兴和嘉兴两地的灰飞虱虫源，2007年供试虫源为浙江湖州和嘉兴海盐、桐乡、秀洲等县区提供的灰飞虱。供试水稻植株为苗龄15天的嘉991和秀水110两个水稻品种，由嘉兴市农业科学院提供。1.1.2 供试抗体 RSV抗体由江苏省农业科学院植物保护研究所和浙江大学共同研制，效价为1：5000～10000；酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG，由Sigma公司生产（PN为A4416），效价为1：5000～10000。1.2.1 生物法测定灰飞虱传毒率 选用长度15cm、直径2cm、两端开口的玻璃管，首先用纱布罩住管口一端。将事先育好的供试水稻秧苗置于其中，每管一株，然后接入一头供试灰飞虱，再用纱布罩上玻璃管的另一端。将玻璃管竖直放入盛有清水的育苗盘中，保证秧苗根部朝下刚好浸入水中。对每个玻璃管做好标记，记录灰飞虱采集地，并对每株秧苗进行编号。2006年供试水稻秧苗数量和灰飞虱虫量均为257，其中长兴虫源104头供试虫全部接在嘉991品种上，嘉兴市新丰虫源中73头供试虫接于嘉991品种上，80头供试虫接于秀水110品种上。2007年测定了湖州和嘉兴市海盐、桐乡、秀洲共4个不同地区的灰飞虱传毒率。其中湖州和桐乡供试虫口为123头和132头，均接于嘉991秧苗上取食；海盐和秀洲供试虫口分别为159和167头，接于秀水110秧苗上取食。待该批灰飞虱在供试秧苗上取食24h后，将活的灰飞虱按编号回收冷冻备用。同时将已被取食的供试秧苗按编号移栽到观测圃中，观察并记录回收活虫对应的植株发病情况。1.2.2 斑点免疫结合（DIBA）法测定灰飞虱带毒率 将生物测定法中收回的供试灰飞虱单头置于100μl碳酸盐包被缓冲液（0.05mol/L，pH值9.6）中，用木质牙签捣碎，5000r/min离心3min后取上清液作为待测样品备用。在NC膜方格上，每格加入3μl待测样品后在室温下晾干；将干燥的膜正面朝上浸入5%封闭液中，置于37℃水浴锅中30min后，用PBST洗涤3次，浸入用封闭液稀释1000倍的单抗液中置于37℃水浴锅中1.5h；用PBST洗涤3次后，将膜浸入用封闭液稀释5000倍的辣根过氧化物酶标记的二抗中，置于37℃水浴锅中1.5h，洗涤后加入固体显色底物液，置于37℃水浴锅中30min（参见马占鸿等的方法）。随后晾干，统计NC膜上显色格的数量，计算所检测灰飞虱的带毒率。在生物法测定灰飞虱传毒率的试验中，被取食供试苗最早于接虫后13天初见发病症状，首先从水稻叶脉附近出现褪绿的斑点，并且斑点排成和叶脉平行的直线，随后病斑逐渐增多，连成互相平行的多条病斑，最后整个叶片发黄直至卷曲。35天后供试苗不再出现新的发病植株。2006年利用生物法测定传毒率时观察秧苗发病率发现，供试的257株秧苗中有11株发病，发病率为4.28%，其中长兴虫源取食的104株供试苗中有7株发病，即有7头灰飞虱传播病毒，传毒率为6.73%；嘉兴新丰虫源在嘉991和秀水110上取食后的发病植株分别为2株，灰飞虱在嘉991和秀水110上的传毒率分别为2.74%和2.50%。各地平均传毒率为3.99%。2007年利用生物法测定传毒率观察秧苗发病率时发现，所测4个地区供试的581株秧苗中共有25株发病，发病率为4.30%，其中湖州虫源的传毒率最高，为6.50%；海盐、桐乡和秀洲3个地区的灰飞虱传毒率差异不大，分别为3.77%、3.79%和3.59%，各地平均传毒率为4.41%。利用在生物测定法中回收的供试虫源样本，在实验室采用斑点免疫结合（DIBA）法测定灰飞虱带毒率，试验发现采用斑点免疫结合（DIBA）法测定的灰飞虱带毒率要高于在生物测定法中的传毒率（秧苗发病率）。2006年采用斑点免疫结合（DIBA）法测定的供试样本平均带毒率为6.15%，其中取自长兴的104头灰飞虱中，检测发现其中11头呈阳性反应，带毒率为10.58%。采自嘉兴的虫源在取食嘉991和秀水110两个品种中分别回收活虫73头和80头，各有3头在检测中发生呈阳性反应，带毒率分别为4.11%和3.75%。对生物学和快速检测法检测结果比较发现，采用斑点免疫结合（DIBA）法检测的带毒率高于生物法测定的传毒率，两者之比平均为1：0.65，幅度为1：0.64～0.67，见表1。虫源地带毒率测定（DIBA测定）发病率观察（生物法测定）供试虫数反应点带毒率（%）对应检测株反应株传毒率（%）传毒率/带毒率长兴（秀水110）1041110.5810476.730.64嘉兴（嘉991）7334.117322.740.67嘉兴（秀水110）8033.758022.500.67各地平均6.153.990.65表1 2006年生物法测定结果与DIBA法测定结果比较2007年采用斑点免疫结合（DIBA）法测定的供试样本平均带毒率为8.68%，其中湖州和嘉兴秀洲虫源的带毒率最高，分别达到了13.01%和11.38%；海盐和桐乡带毒率也较高，分别为5.03%和5.30%。对生物法和快速检测法测定结果比较发现，采用斑点免疫结合（DIBA）法检测的带毒率高于生物法测定的传毒率，两者之比平均为1：0.57，幅度为1：0.32～0.75，见表2。虫源地带毒率测定（DIBA测定）发病率观察（生物法测定）供试虫数反应点带毒率（%）对应检测株反应株传毒率（%）传毒率/带毒率湖州（嘉991）1231613.0112386.500.50海盐（秀水110）15985.0315963.770.75桐乡（嘉991）13275.3013253.790.72秀洲（秀水110）1671911.3816763.590.32各地平均8.684.410.57表2 2007年生物法测定结果与DIBA法测定结果比较通过对不同地区虫源在两个不同水稻品种上的试验发现，在浙江嘉兴和湖州采集的灰飞虱供试虫源中均有一定数量的灰飞虱携带病毒并有传毒能力。通过2006年、2007年两年利用斑点免疫结合法和生物法对灰飞虱带毒率和传毒率检测试验表明，灰飞虱带毒率高于传毒率，而且传毒率与带毒率之比相对较为稳定，两年平均为0.61，其中2006年灰飞虱传毒率与带毒率之比为0.65，2007年灰飞虱传毒率与带毒率的比值为0.51。以上结论初步明确了浙江嘉兴、湖州两地越冬代灰飞虱体内水稻条纹叶枯病带毒率与传毒率之间的关系，为两种检测方法数值转换和病害预测提供科学依据，但其他世代灰飞虱带毒率与传毒率之比是否与此一致尚有待进一步研究。

朱槿（Hibiscus rosa-sinensis Linn.）又称扶桑、火红花、假牡丹和大红花等，属锦葵科黄槿属常绿灌木，原产于我国云南、广东及南美，也是马来西亚国花和我国南宁市市花。该植物在华南地区几乎可终年开花，是重要的园林花卉植物。但近期广东部分地区的朱槿植株表现曲叶或黄化曲叶症状，该症状与烟粉虱传双生病毒侵染植物引起的症状十分相似。为了明确其病因，作者对其开展了分子检测与鉴定。对广东各地朱槿进行调查，包括朱槿被为害情况、症状表现、介体烟粉虱发生情况等。在各病区随机采集表现为曲叶或黄化曲叶症状的朱槿病样5～10个，带回室内用于检测。用NaOH法提取病样总DNA[1]，并做适当改进，即：取待检病叶片100mg，在灭菌的研钵中加液氮速冻研磨成粉末，解冻前加入1ml 0.5N NaOH提取液，并在提取液使用前加入巯基乙醇（0.5%）；8000g×离心5min，上清液用0.1 mol/L Tris缓冲液（pH值7.0）稀释100倍，用作PCR模板。应用烟粉虱传双生病毒通用简并引物AV494 [2]和DeP3（也即CoPL[3]）对上述采集于各地的朱槿曲叶病样进行PCR检测。PCR扩增结束后，取10μl反应产物进行电泳，以检测PCR扩增结果。调查结果表明，目前仅在广州和佛山发生朱槿曲叶病，其他地方暂时还未发现该病害。病株典型症状为植株明显矮化，全株叶片向上卷曲、叶脉肿大明显、有耳突、叶质脆硬，随着病情的发展，病叶缘开始褪绿黄化，最终叶片大部分甚至整片叶黄化（图1）。植株感病后不再开花，或即使开花，花朵不正常。人工修剪后，病株难以长出新叶，或虽长出新叶，叶数量少、叶小且严重卷曲。自然界朱槿曲叶病扩散速度较快，短时间内会使较大范围内朱槿很快都被传染感病，完全失去园林和绿化价值。另外，朱槿上烟粉虱发生普遍。Figure 1 Symptoms of Hibiscus rosa-sinensis leaf curl disease in Guangdong对广东各地朱槿曲叶病样进行PCR检测，结果显示：从这些病样本中均能扩增出1条570bp特异片段，而健康的朱槿对照未扩增出任何条带，图2是其中1次的检测结果。这些检测结果说明，朱槿曲叶病样中存在烟粉虱传双生病毒。Figure 2 The result of the PCR with AV494 and DeP3对分离物G6 PCR扩增的特异片段进行克隆及序列测定，结果表明，该片段长为570bp；BLAST结果显示，与该片段有较高同源率的均为双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）病毒，与木尔坦棉花曲叶病毒（Cotton leaf curl Multan virus，CLCuMV）各分离物的同源率均大于95%，其中与CLCuMV分离物Okra（Genbank登陆号：AJ002459）序列同源率最高，为97%。刚刚完成的广州朱槿曲叶病毒分离物G6全基因组克隆结果显示，该病毒分离物与CLCuMV分离物62的序列同源率高达96.1%（另文发表），说明G6应该是CLCuMV的一个分离物。朱槿属多年生灌木，由于绿化和观赏需要，在广东省每年都要对其修剪1至多次。目前，在广州、佛山等地均有朱槿曲叶病发生。朱槿感病后，全株叶片即会卷曲，植株生长衰退；人工修剪后，病株难以长出新叶，或虽然长出新叶，叶数量少、叶小且严重卷曲，完全失去绿化价值。因此，该病害对市政园林绿化影响很大。应用先前建立的烟粉虱传双生病毒PCR检测技术[4～5]，从广东各地采集的朱槿曲叶病样中均能检测到该类病毒；而新近完成的朱槿曲叶病毒G6分离物基因组序列分析结果表明，其是CLCuMV一个分离物。因此，本研究初步表明，朱槿曲叶病可能是由CLCuMV侵染引起的，但还需要做更进一步深入研究加以验证。CLCuMV最先发现于巴基斯坦为害棉花，由烟粉虱传播，已给该国棉花生产造成了巨大的经济损失。该病毒也是我国的一个外检对象，但目前仅在广东朱槿上发现该病毒，应引起我们的重视。

RNA介导的病毒抗性主要是基于转录后基因沉默（Post-transcriptional gene silencing，PTGS）作用，在真菌、植物和动物中有PTGS相关的基因存在，这些基因沉默现象可统称为RNA干扰现象（RNA interference，RNAi）。许多证据表明，RNA沉默是由双链RNA（dsRNA）所引发的，且需要细胞内的多种酶参与。基于dsRNA在RNA沉默中的诱导作用，构建能转录后形成dsRNA的载体，转化植物后可有效诱发基因沉默。苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）是苹果、梨和多种核果类果树上发生普遍的一种病毒，可降低树势和影响果实品质。本研究根据GeneBank上已登陆的ACLSV序列设计合成了一对引物，根据载体pDS1301的限制性内切酶图谱，在引物的两端分别引入了两个不同的限制性内切酶识别位点。以总RNA或dsRNA为模板，通过RT-PCR扩增获得来源于砂梨的2个ACLSV分离物的大小为358bp的片段，该片段位于ACLSV cp基因高度变异区。将扩增片段克隆到载体pMD18-T，筛选阳性克隆后提取质粒，经Kpn I/Bgl II和Spe I/Sac I分别对目标片段及载体pDS1301酶切后，在T4连接酶作用下，将克隆片段以正向和反向方式分别插入植物表达载体pDS1301一内含子两端的多克隆位点，构建了可转录后形成dsRNA的载体pDR358-SMJ和pDR358-HH。将重组质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞后，采用叶盘共培养的方法转化5～6叶期的健康西方烟叶片，经潮霉素抗性筛选获得转基因西方烟植株。从获得的转基因西方烟植株提取总DNA，根据载体pDS1301多克隆位点两侧的序列合成特异引物，采用 PCR方法对这些植株进行了鉴定，已得到了转R358-SMJ的西方烟49株、转R358-HH的西方烟12株（图1）。图1 部分转基因西方烟的PCR鉴定

苹果茎痘病毒（Apple stem pitting virus，ASPV）是侵染苹果和梨树的主要病毒之一，可导致苹果和梨的生长势下降，并影响其果实产量和品质。本研究在生物学、血清学和分子生物学鉴定的基础上，筛选出侵染砂梨的APSV毒源材料。参照已报道的ASPV全基因组核苷酸序列设计合成引物，以来源于砂梨（6-1-13）ASPV的 dsRNA为模板，RT-PCR扩增获得大小为1328bp特异性扩增条带，并对扩增产物进行纯化、克隆和序列测定。序列分析结果表明，其核苷酸序列与国外在GenBank上登录的14个ASPV分离株的同源率为82%～88%。将克隆获得的目的基因与pET28c连接得到原核表达载体pET28c-ASPV cp，并在大肠杆菌BL21（DE3）中成功诱导该基因表达，表达蛋白大小约44kDa。将表达正义链和反义链的该病毒分离物cp基因cDNA分别与植物表达载体pCAMBIA1301连接，转化大肠杆菌DH10B的感受态细胞，经过PCR和双酶切鉴定和筛选阳性克隆，成功构建了ASPV cp基因的正义链和反义链植物表达载体pCAMBIA1301-ASPV cp+和pCAMBIA1301-ASPV cp-。将重组质粒转化根癌农杆菌EHA105感受态细胞后，采用叶盘共培养的方法转化5～6叶期的健康西方烟叶片，经潮霉素抗性筛选和PCR鉴定，获得88株西方烟转化植株，其中ASPV cp基因正义链的西方烟植株68株，表达cp基因反义链的西方烟植株20株。

多数苹果属植物野生种或栽培种的花和果都具有观赏价值，在观赏园艺花卉树木中占有重要地位。20世纪以来，国外植物学家从我国引种并进行了大量杂交选育工作，培育了一系列具观赏用途的海棠品种，统称为观赏海棠（Malus spp.）。近年来，国内学者从国外引进的观赏海棠品种几十个，它们姿态各异，色彩斑斓，大量果实点缀枝头直到深冬，丰富了景观内容。但是，这些观赏海棠不少品种的植株枝干上往往产生大量轮纹状、马鞍形的瘤状突起，严重时，病斑相连，导致树皮粗糙，严重影响树势甚至引起枝干坏死。本研究对其病原进行了初步研究，以期为进一步研究其发生发展规律和防治技术奠定基础。观赏海棠（M.spp.）植株为山东省泰安市区栽植树种。在6月份从病树上采集病斑，显微切片观察其病原形态，并对其大小进行测定。按常规方法，进行分离培养并纯化。观察其培养性状和产孢特征。在6月底，将分离纯化的病原菌分别采用烫伤接种法、针刺接种法、喷雾接种法对健康的海棠枝条进行接种，定期观察其发病情况，确定其致病性。设置不同温度条件（5℃、15℃、25℃、28℃、37℃、40℃）、不同pH值条件（pH值4.0、5.0、6.0、7.0、8.0）、不同培养基条件（琼脂、蛋白胨、LB、BPY、PMA、PSA、PDA），用菌碟法分别测定不同条件下病原菌的菌丝生长状况；并在以上不同温度、不同pH值条件以及不同营养条件（0.5%、1%、2%葡萄糖，0.5%、1%、2%蔗糖）下，采用凹穴法测定病原菌孢子萌发情况。受害海棠枝干从皮孔开始发病，以皮孔为中心形成近圆形斑点，暗褐色，凹陷，边缘稍隆起；随后病斑中央突起，呈瘤状，质地坚硬，成为灰白色；病健交界处发生龟裂，病皮翘起，有点呈马鞍状，或呈轮纹状；病斑表面产生黑色的小粒点。严重时，病斑相连，病皮粗糙，导致部分枝干死亡。对病斑上黑色粒点切片镜检，发现：子座扁球形，其上分生孢子器1～3个，分生孢子器扁圆形或椭圆形，大小为（142～284）μm×（162～289）μm；内壁密生分生孢子梗，分生孢子梗棍棒状，单胞，顶端着生分生孢子；分生孢子单细胞，无色，纺锤形或长椭圆形，一端钝圆，一端截平，大小为（20.1～32.9）μm×（7.6～9.8）μm。从发病枝干上分离培养获得病原菌纯培养，菌落初灰白色，逐渐呈灰黑色，气生菌丝浓密，呈絮状隆起，后期菌落中产生灰黑色子座。对病原菌进行致病性测定，通过不同方法对海棠进行接种试验，发现烫伤接种法和针刺接种法处理的海棠发病率为100%，而喷雾接种法处理的海棠则几乎没有发病。其症状表现为，伤口先凹陷变黑，后形成褐色小突起。同时发现，在山东省泰安市，在6月底接种，该病原菌侵染的潜伏期为7～10天。经鉴定，认为该病害的病原为Botryosphaeria berengeriana，病害为观赏海棠轮纹病。25～28℃、pH值4.0～7.0、BPY和PDA培养基等条件，最适合菌丝生长，菌落生长快，且菌丝白色浓密呈絮状隆起，易产生黑色分生孢子器。28℃、pH值7.0、1%蔗糖条件最适合病原菌分生孢子萌发，12h观察孢子萌发率能达到80%左右，孢子萌发芽管较短、粗，多数两端萌发。观赏海棠轮纹病发病严重，目前对其病原鉴定方面未见报道。本研究初步确定其病原为Botryosphaeria berengeriana，并测定了其部分生物学特性。结果也显示该病原菌从形态和生物学特性上与引起苹果轮纹病的病原菌[1]和梨轮纹病[2，3]的病原菌有一定的差异。该菌的寄主范围、对苹果属、梨属植物的致病性、ITS的序列测定等工作正在开展中，这些信息对于该菌分类地位的进一步确定有重要价值。

主要步骤如下。（1） 将 800 μl 提取缓冲液 CTAB buffer （内含 2%CTAB、100 mmol/L Tris-HCl pH值8.0、20 mmol/L EDTA、1.4 mol/L NaCl、2%PVP30、1%的β-巯基乙醇） 加入2 ml的离心管内65℃预热。（2） 从-70℃超低温冰箱中取0.2 g ‘富士’ 和 ‘金冠’ 及其杂交群体单株的嫩叶，放入研钵中，加入液氮迅速研磨成粉末状，并迅速转移到装有预热的提取缓冲液的离心管内，并上下颠倒混匀。（3） 65℃水浴中保温3 min，数次颠倒使内含物充分混匀。（4） 将离心管取出，加800 μl氯仿∶异戊醇 （体积比为24∶1）。颠倒充分混合，温和震荡2～3 min。（5） 在高速离心机上离心10 min （14000 r/min），将上清液转移到1.5 ml离心管中。（6） 加入6 μl RNase （10 mg/ml） 充分混匀，在37℃恒温箱内温育1 h，再用氯仿∶异戊醇抽提1次。（7） 加500 μl 事先在-20℃冰箱内预冷的异丙醇，上下颠倒混匀后，于4℃冰箱中沉淀 DNA 10～25 min。（8） 在高速离心机上 14000 r/min 离心 3 min，然后弃掉上清，得到沉于离心管底部的DNA。（9） 用500 μl 75%乙醇洗 DNA沉淀两次。倒掉乙醇，注意不要将DNA倒出。（10） 在超净工作台上干燥 DNA 2 h。（11） 将吹干的DNA溶于100 μl超纯水中。1.缓冲液的的制备取适量50×TBE缓冲液配制成1×TBE稀释缓冲液，待用。2.胶液的制备称取1 g琼脂糖，置于锥形瓶中，加入 100 ml 1×TBE 稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，制成1%琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。3.胶板的制备待凝胶温度稍低后加入5 μl EB （溴化乙锭），混匀，然后倒入模具中 （注意不要有气泡），加上合适的梳子形成加样孔，梳子的位置应该在托盘底面上0.5～1.0 mm。4.待胶完全凝固后拔出梳子注意不要损伤梳底部的凝胶，将模具放入电泳槽内并加入1×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。5.加样取10 μl DNA稀释液，用微量移液枪小心加入样品槽中。每加完一个样品要更换 tip 头，以防止互相污染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。6.电泳加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。DNA 应该向阳极泳动，用120 V电压电泳15～30 min，停止电泳。1.6%非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法（1） 胶板的制备。先用水将平板和耳朵板冲洗干净，将其平放在桌面上，用餐巾纸将其擦干之后，用 95%酒精擦洗 2 次，待其干后，将0.5%的 Banding silane 溶液均匀的倒在平板上，用餐巾纸迅速将其涂匀，待其晾干，然后将洗干净的梳子和压条整齐的摆在平板之上，将2%的 Repel silane溶液均匀的涂在耳朵板上 （此项操作应在通风橱中进行），待其晾干后，将其整齐摆放在平板之上，用夹子将其夹好。（2） 凝胶的制备。取50%的PA胶50 ml，加入60 μl的TEMED，120 μl 10%的过硫酸铵 （APS），温和混匀。（3） 灌胶。将混合好的胶沿着玻璃板的灌胶口缓缓灌入，注意使灌入的胶基本上沿着一条直线灌入，如不整齐，可用手轻轻拍打胶板，使胶保持同一直线灌入，避免气泡的产生。胶灌入到底部之后，迅速将梳子平面插入到两玻璃板之间，插好梳子之后，用夹子夹好，让其聚合1h后用于电泳。（4） 电泳。加入电极缓冲液lxTBE，50 W恒功率，预电泳10 min后，清除气泡，插入梳齿，将扩增好的 PCR 产物，加入6 μl的溴酚蓝，混匀95℃变性5 min，之后用微量加样器取6 μl，进行电泳1 h左右 （根据分子量的大小调整电泳时间）。2.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染方法 （体积100 ml）（1） 固定。在磁盘中加入 10%的乙醇和 500 μl 冰乙酸，摇匀后加入凝胶，再平行摇动3～5 min。（2） 染色。在固定液中加入 1 ml 20%AgNO3 储备液后，平行摇动 5～8 min。（3） 漂洗。倒掉定影液，加入蒸馏水漂洗 2～3 次，洗净后，倒掉蒸馏水。（4） 显色。在磁盘中加入 100 ml 3%NaOH 溶液和 500 μl 甲醛，迅速振荡，使显影液均匀作用，然后平行摇动，直至显影。（5） 洗涤。清楚显影后，倒掉显影液，用自来水清洗凝胶 1～2次，彻底去掉显影液，以免保存时变色。1.胶回收（1） 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。（2） 在紫外灯下切出含有目的片段 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的片段 DNA 部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高 DNA 回收率。胶块超过 300 mg时，使用多个 Column 进行回收，否则严重影响回收率。注：切胶时注意不要将 DNA 长时间暴露于紫外灯下，以防 DNA损伤。（3） 切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤 6 的胶块溶解时间，提高 DNA 回收率。（4） 称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以 1 mg=1μl 进行计算。（5） 向胶块中加入胶块溶解液 Buffer GM，Buffer GM 的加量如下表。凝胶浓度BufferGM使用量1.0%3个凝胶体积量1.0%～1.5%4个凝胶体积量1.5%～2.0%5个凝胶体积量（6） 将不溶解液与胶块充分混合后，15～25℃溶解胶块 （胶浓度较大或比较难溶时可以在 37℃加热）。间断振荡混合，使胶块充分溶解 （5～10 min）。注：胶块一定要充分溶解，否则将会严重影响 DNA 的回收率。高浓度凝胶可以适当延长溶胶时间。（7） 当凝胶完全溶解后，观察溶胶液的颜色，如果溶胶液颜色由黄色变为橙色或粉色，向上述胶块溶解液中加入 3M 醋酸钠溶液（pH值5.2） 10 μl，均匀混合至溶液恢复黄色。当分离小于 400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为 20%的异丙醇。（8） 将试剂盒中的 Spin Column 安置于 Collection Tube 上。（9）将上述操作步骤7的溶液转移至Spin Column中，12000r/min离心1min，弃滤液。注：如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高 DNA 的回收率。（10）将700μl的Buffer WB加入Spin Column中，室温12000r/min离心30s，弃滤液。注：确认Buffer WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。（11） 重复操作步骤 10。（12） 将Spin Column安置于Collection Tube上，室温12000 r/min离心1 min。（13） 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Col-umn膜的中央处加入 30 μl 灭菌蒸馏水或 Elution Buffer，室温静置1 min。注：将灭菌蒸馏水或 Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。（14） 室温12000 r/min离心1 min洗脱DNA。2.大肠杆菌感受态的制备（1） 取大肠杆菌DH5α 在 LB 培养基上划线，37℃培养箱内过夜培养，长出单菌落。（2） 挑取单菌落，接种于4 ml不含抗生素的LB培养基上，37℃振荡 （轻摇） 培养过夜。（3） 过夜培养的菌液与 LB 培养基按 1∶50 的比例转入三角瓶，37℃振荡培养 （约3 h），至OD600=0.4～0.6。（4） 4℃，5000 r/min离心5 min，轻轻倒掉上清，用5 ml （1/5体积） 预冷的0.1 mol/L Mgcl2悬浮细胞 （0.95 g/100 ml）。（5） 4℃，5000 r/min 离心 5 min，轻轻倒掉上清，用 12.5 ml （1/2体积） 预冷的 0.1 mol/L CaCl2悬浮细胞，冰浴放置 20 min（1.1 g/100 ml）。（6） 4℃，5000 r/min离心5 min，轻轻倒掉上清，用2.5 ml预冷的 0.1 mol/L CaCl2 （含 10%的甘油） 悬浮细胞，分装，每管120 μl。（7） 液氮速冻，-80℃保存。3.目的基因连接载体pMD-19T simple 1 μl，目的 DNA 4 μl，solution Ⅰ 5 μl，混匀后于16℃金属浴中反应30 min。4.目的基因转化（1） 1.5 ml离心管中加入10 μl的连接产物和50 μl大肠杆菌感受态细胞。（2） 冰上放置30 min。（3） 42℃金属浴加热45 s 后，冰中放置1 min。（4） 加入 500 μl LB 液体培养基，37℃，200 r/min 振荡培养45 min。（5） 取100 μl菌液涂板 （LB+Amp+），37℃过夜培养。（6） 过夜培养之后，挑取单克隆菌落，加到 LB 液体培养基（Amp+100 mg/L） 中37℃，200 r/min振荡培养6～8 h。（7） 菌液PCR检测正确后，送测序。序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置1CH03g12GCGCTGAAAAAGGTCAGTTTCAAGGATGCGCATGTATTTGChr12CH05g08CCAAGACCAAGGCAACATTTCCCTTCACCTCATTCTCACCChr13Hi02c07AGAGCTACGGGGATCCAAATGTTTAAGCATCCCGATTGAAAGGChr14Hi07d08TGACATGCTTTTAGAGGTGGACGTTTGAGGGGTGTCCGTACAAGChr15Hi12c02GCAATGGCGTTCTAGGATTCGTTTCACCAACAGCTGGGACAAGChr16C10455AAGGCAATACAAGACGGACGTTCACACCGAAAGCCTCTCTChr17Hi21g05GACGAGCTCAAGAAGCGAACGTTTGCTCTTGCCATTTTCTTTCGChr18C13810CGTCCTAGATAGATGCCCCACAGGACTCTAAGGACTGCCGChr1附表1 实验所用已发表SSR引物列表序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置9C13280CTCCTCCTCCCTCAGTACCCCCTTCACTCACCTTTCTCGCChr110C16757AATGGGACCCAACTGGTACATCGACCATACAAATTGCTGCChr111C6948CTTGGAGCTGTGAGAGTCCCCAAACCTCTCATCGCAACCTChr112KA4bAAAGGTCTCTCTCACTGTCTCCTCAGCCCAACTCAAAGCCChr113CH02a04GAAACAGGCGCCATTATTTGAAAGGAGACGTTGCAAGTGGChr214CH02b10CAAGGAAATCATCAAAGATTCAAGCAAGTGGCTTCGGATAGTTGChr215CH02c02aCTTCAAGTTCAGCATCAAGACAATAGGGCACACTTGCTGGTCChr216CH02c06TGACGAAATCCACTACTAATGCAGATTGCGCGCTTTTTAACATChr217CH02f06CCCTCTTCAGACCTGCATATGACTGTTTCCAAGCGATCAGGChr218CH03d01CGCACCACAAATCCAACTCAGAGTCAGAAGCACAGCCTCChr219CH03d10CTCCCTTACCAAAAACACCAAAGTGATTAAGAGAGTGATCGGGGChr220CH05e03CGAATATTTTCACTCTGACTGGGCAAGTTGTTGTACTGCTCCGACChr221Hi02a07TTGAAGCTAGCATTTGCCTGTTAGATTGCCCAAAGACTGGGChr222Hi05g12TCTCTAGCATCCATTGCTTCTGGTTTGTGTGTTCTCTCATCGGATTCChr223Hi07d12GGAATGAGGGAGAAGGAAGTGGTTTCCTCTTCACGTGGGATGTACCChr224Hi08f05GTGTGGGCGATTCTAACTGCGTTTCCTTTATTCTAAACATGCCACGTCChr225Hi08g12AGTTCGGTCGGTTCCGTAATGTTTAGGGCAAGGGGAAAGAAGTChr226Hi22d06CCCCGAGCTCTACCTCAAACATTATGTTTCCGGTTTTTGGChr227Hi24f04CCGACGGCTCAAAGACAACTGAAAAGTGAAGGGAATGGAAGChr228AJ251116GATCAGAAAATTGCTAGGAAAAGGAGAGAACGGTGAGCTCCTGAChr229AT000400CTCCCTTTGCTCCCTCTCTTAGGATGTCAGGGTTGTACGGChr230CN444636CACCACTTGAGTAATCGTAAGAGCGTTTGCCAGTTAAGGACCACAAGGChr231CN493139CACGACCTCCAAACCTATGCGTTTATGAAAGTACGGCACCCATCChr232CN581493GCTTTTCATGGTGGAAAAACTGGTTTGACTCTCCGCTCTGATGGACChr233NH033bGTCTGAAACAAAAAGCATCGCAACTGCCTCGTCTTCCTCCTTATCTCCChr234CH03e03GCACATTCTGCCTTATCTTGGAAAACCCACAAATAGCGCCChr335CH03g07AATAAGCATTCAAAGCAATCCGTTTTTCCAAATCGAGTTTCGTTChr336MS14h03CGCTCACCTCGTAGACGTATGCAATGGCTAAGCATAChr3附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-1序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置37Hi03d06TCATGGATCATTTCGGCTAAGTTTGCCAATTTTATCCAGGTTGCChr338Hi03e03ACGGGTGAGACTCCTTGTTGGTTTAACAGCGGGAGATCAAGAACChr339Hi04c10TGCGCATTTGATAGAGAGAGAAGTTTAACAAAGAACGACCCACCTGChr340Hi05f12TTTGGGTTTGGGTAGGTTAGGGTTTGTGCAGCGCATGCTAATGChr341Hi07e08TTCGTGCTAGGGAGTTGTAGCGTTTGCCTCCATAGGATTATTTGACChr342Hi15b02TATGGTGGCAACAGTGGAGAGTTTCGCCACCTCCACTTAACATCChr343Hi15h12GAACAAGAAGGACGCGAATCGTTTGGGCCTCGTTATCACTACCAChr344AU223657TTCTCCGTCCCCTTCAACTACACCTTGAGGCCTCTGTAGCChr345HGA8bAACAAGCAAAGGCAGAACAACATAGAGAAAGCAAAGCAAAChr346GD12CTAACGAAGCCGCCATTTCTTTTTGAGGTGTTTCTCCCATTGGAChr347IPPN15AACCATGGCATTGGATTGATGAAGCACTCAATGGGGAAAAChr348NZmsCN943818TGAACAGCTCATCGTCGGTACGGGAAGAGGAAATGTGATTChr349C9312TCCACCAGTGACAAGAGCTGAGGATTCAATCAGCTACGCCChr350C6359CGGAAATGGTCACTGGAACTTGGGACGGACACACACACChr351CH01b12CGCATGCTGACATGTTGAATCGGTGAGCCCTCTTATGTGAChr452CH01d03CCACTTGGCAATGACTCCTCACCTTACCGCCAATGTGAAGChr453CH02c02bTGCATGCATGGAAACGACTGGAAAAAGTCACACTGCTCCChr454CH02h11aCGTGGCATGCCTATCATTTGCTGTTTGAACCGCTTCCTTCChr455CH04e02GGCGATGACTACCAGGAAAAATGTAGCCAAGCCAGCGTATChr456CH05d02AAACTCCCTCACCTCACATCACAATAGTCCAATGGTGTGGATGGChr457Hi01e10TGGGCTTGTTTAGTGTGTCAGGTTTGGCTAGTGATGGTGGAGGTGChr458Hi07b02ATTTGGGGTTTCAACAATGGGTTTCGGACATCAAACAAATGTGCChr459Hi08e04GCATGGTGGCCTTTCTAAGGTTTACCCTCTGACTCAACCCAACChr460Hi08h03GCAATGGCGTTCTAGGATTCGGTGGTGAACCCTTAATTGGChr461Hi23d11bGACAGCCAGAAGAACCCAACGTTTATTGGTCCATTTCCCAGGAGChr462Hi23g02TTTTCCAGGATATACTACCCTTCCGTTTCTTCGAGGTCAGGGTTTGChr463Hi23g08AGCCGTTTCCCTCCGTTTGTTTGTGGATGAGAAGCACAGTCAChr464AT000420TTGGACCAATTATCTCTGCTATTGATGTGGTCAGGGAGAGGAGChr4附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-2序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置65MSS6CGAAACTCAAAAACGAAATCAAACGGGAGAGAAACTCAAGACCChr466C12595ATGAAAACCCACAAAACCCAAAACCATACACAACGCCACAChr467C13146CTGGGAAAAATGGGGAAAATGCTTTCCCTTTCCTTCTTCAAChr468C15TTGCGAGAAAGCTAAAAACCACAGACTCTGCAACCCCTCTCChr469CH01d07AGTCGAAATCCCGAACAATCAAAATCCAGTTTTCCACCTCChr470NZ01a6TTAGACGACGCTACTTGTCCTAGGATTGCTGGAAAAGGAGGChr471GD162AAAATGTAACAACCCGTCCAAGTGGAGGCAAGTGACAAAGAAAGATGChr472NH011bTTTGCCGTTGGACCGAGCGGTTCACATAGAGAGAGAGAGChr473CH02a08GAGGAGCTGAAGCAGCAGAGATGCCAACAAAAGCATAGCCChr574CH02b12GGCAGGCTTTACGATTATGCCCCACTAAAAGTTCACAGGCChr575CH03a04GACGCATAACTTCTCTTCCACCTCAAGGTGTGCTAGACAAGGAGChr576CH03a09GCCAGGTGTGACTCCTTCTCCTGCAGCTGCTGAAACTGGChr577CH04e03TTGAAGATGTTTGGCTGTGCTGCATGTCTGTCTCCTCCATChr578CH04g09TTGTCGCACAAGCCAGTTTAGAAGACTCATGGGTGCCATTChr579CH05e06ACACGCACAGAGACAGAGACATGTTGAATAGCATCCCAAATGGTChr580CH05f06TTAGATCCGGTCACTCTCCACTTGGAGGAAGACGAAGAAGAAAGChr581Hi01c04GCTGCCGTTGACGTTAGAGGTTTGTAGAAGTGGCGTTTGAGGChr582Hi02a03GACATGTGGTAGAACTCATCGGTTTAGTGCGATTCATTTCCAAGGChr583Hi04a08TTGAAGGAGTTTCCGGTTTGGTTTCACTCTGTGCTGGATTATGCChr584Hi04d02TTCGTGGCTGAGAAAGGAGTGTTTGTACGGTGCATTGTGAAAGChr585Hi08a04TTGTCCTTCTGTGGTTGCAGGTTTGAAGGTAAGGGCATTGTGGChr586Hi08h08TGAACAAATTCCACCACGAAGTTTGCCAAGGCTACAATTTTCAChr587Hi09b04GCGATGACCAATCTCTGAAACTGGGCTTGAATTGGTGAATCChr588Hi11a03GGAATTGGAGCTTGATGCAGGTTTCATACGGAATGGCAAATCGChr589Hi15e04AAACCTCTGCATTCCGTCTCCTCATACTCCTCCCACATTGTCChr590Hi21c08TTCTTCTCCTCCACCACCTCGTTTGTCACTGAGAAGGCGGTAGCChr591Hi22a07CTCTTCCTTCTCCGCCTCTTGTTTCACTCAGAATGCCTCACAGCChr592Hi22f12GGCCTCACCCAGTCTACATTGTTTGGTGTGATGGGGTACTTTGCChr5附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-3序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置93AU223670GGACTCAATGCCTTTTCTGGAGGATGGCAGCAATCTTGAAChr594CN445599TCAAATGGGTTCGATCTTCACGTTTGCCTGGCTGTAACTGTTTGGChr595CN496002TCAGAATCTCAAGCAAGATCCTCGTTTGATTGATCGTGGCGATATGChr596CH03d07CAAATCAATGCAAAACTGTCAGGCTTCTGGCCATGATTTTAChr697CH03d12GCCCAGAAGCAATAAGTAAACCATTGCTCCATGCATAAAGGGChr698CH05a05TGTATCAGTGGTTTGCATGAACGCAACTCCCAACTCTTCTTTCTChr699Hi03a03ACACTTCCGGATTTCTGCTCGTTTGTTGCTGTTGGATTATGCCChr6100CH01b11AACCTAACCAAACACGTACGGTTCGGCTGTACTCTTTGAGChr6101Hi04d10AAATTCCCACTCCTCCCTGTGTTTGAGACGGATTGGGGTAGChr6102Hi05d10AATGGGTGGTTTGGGCTTAGTTTCTTTGGCTATTAGGCCTGCChr6103Hi07b06AGCTGCAGGTAGAGTTCCAAGGTTTCATTACCATTACACGTACAGCChr6104Hi08g03ATTCACTTCCACCGCCATAGGTTTGGAATGATTGCGAGTGAAGCChr6105CN445290TCTCAGTTGCTCTGGCTTTGGTTTGCAATCAATGCCACTCTTCChr6106U78949TTTGTCTACCTCTGATCTTAACCAACAGCATCGCAGAGAACTGAGChr6107CH04e05AGGCTAACAGAAATGTGGTTTGATGGCTCCTATTGCCATCATChr7108Hi01d05GGTATCCTCTTCATCGCCTGTTAGATTGACGTTCCGACCCChr7109Hi03a10GGACCTGCTTCCCCTTATTCGTTTCAGGGAACTTGTTTGATGGChr7110Hi12f04ATTGTCCCCACAAAATTGGATGTTCGATGTGACTTCAATGCChr7111CN444794CATGGCAGGTGCTAAACTTGAAACTGAAGCCATGAGGGCChr7112CH02b11CACAACGCAGTTCGATCACTACCTTACCTGGTAGAGAGAGAChr7113EMPc111CCGATCAGAAAGAGCTGTGAGTCAAACCTTCCAACCTCAACAATChr7114Hi05b09GTTTCTAACGTGCGCCTAACGTGAAACCCAACCCAAAGAGTGGChr7115MS06c09AATATAAGAGCCAGAGGCACTATTGGAGTAAGTCGAChr7116Z38126AAGAGGGTGTTCCCAGATCCAATTCCAATTTCAGAACAGGChr7117CH01c06TTCCCCATCATCGATCTCTCAGGAGGGATTGTTTGTGCACChr8118CH01f09ATGTACATCAAAGTGTGGATTGCAAACAAACCAGTACCGCAAChr8119CH01h10TGCAAAGATAGGTAGATATATGCCATTTTGACCCCATAAAACCCACChr8120CH02g09TCAGACAGAAGAGGAACTGTATTTGGTTTGAGTTTGATCTCCAACATTACChr8附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-4序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置121CH05a02GTTGCAAGAGTTGCATGTTAGCGTTTGAGCAGAGGTTGCTGTTGCChr8122Hi01c11TTGGGCCACTTCACAACAGGGTGCGCTGTCTTCCATAAAChr8123Hi04b12CCCAAACTCCCAACAAAGCGTTTAGTTGCTAATGGCGTGTCGChr8124Hi04e05AAGGGTGTTTGCGGAGTTAGGTTTGTCTACAACTGTCTGATGGTAGCChr8125Hi20b03AAACTGCAATCCACAACTGCGTTTAAAGGGGCCCACAAAGTGChr8126Hi22g06GAAAGGACCGAATTTCATGCGGACATGGATGAAGAATTGGAChr8127Hi23g12CCCTTCCCTACCAAATGGACCTCCCCGGCTCCTATTCTACChr8128Z71980TCTTTCTCTGAAGCTCTCATCTTTCATCTTTTGGTGCTCCCACACChr8129CH01f03bGAGAAGCAAATGCAAAACCCGGGATGCATTGCTAAATAGGATChr9130CH01h02AGAGCTTCGAGCTTCGTTTGTGATTGCCACATGTCAGTGTTChr9131CH05c07TGATGCATTAGGGCTTGTACTTGTTTACCAATTAGGACTTAAAGCTGChr9132CH05d08TCATGGATGGGAAAAAGAGGGTTTCATGTCAAATCCGATCATCACChr9133Hi01d01CTGAAATGGAAGGCTTGGAGATTTATGGTGATGGTGTGAACGTGChr9134Hi04a05GGCAGCAGGGATGTATTCTGGTTTCAAGAACCGTGCGAAATGChr9135Hi05e07CCCAAGTCCCTATCCCTCTCGCTTAATAGAAACATCGCTGAChr9136Hi23d06TTGAAACCCGTACATTCAACTCGTTTGCAGTGGATTGATGTTCCChr9137AJ320188AACGATGCTTGAGGAAGAACACCTCCCGTCTCCCACCATATTAGChr9138CN444542ATAAGCCAGGCCACCAAATCCGTTTTTGGAGCGTAGGAACChr9139NH029aGAAGAAAACCAGAGCAGGGCAGCAAAAACCACAGGCATAACChr9140CH02a10ATGCCAATGCATGAGACAAAACACGCAGCTGAAACACTTGChr10141CH02b03bATAAGGATACAAAAACCCTACACAGGACATGTTTGGTTGAAAACTTGChr10142CH02b07CCAGACAAGTCATCACAACACTCATGTCGATGTCGCTCTGTTGChr10143CH02c11TGAAGGCAATCACTCTGTGCTTCCGAGAATCCTCTTCGACChr10144CH03d11ACCCCACAGAAACCTTCTCCCAACTGCAAGAATCGCAGAGChr10145COLAGGAGAAAGGCGTTTACCTGGACTCATTCTTCGTCGTCACTGChr10146MS01a03AGCAGTATAGGTCTTCAGTGCGTAGATAACACTCGATChr10147MS02a01CTCCTACATTGACATTGCATTAGACATTTGATGAGACTGChr10148MS06g03CGGAGGGTGTGCTGCCGAAGGCCCAGCCCATATCTGCTChr10附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-5序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置149Hi01a03CGAATGAAATGTCTAAACAGGCAAGCTACAGGCTTGTTGATAACGChr10150Hi01b01GCTACAGGCTTGTTGATAACGCACGAATGAAATGTCTAAACAGGCChr10151Hi02d04TGCTGAGTTGGCTAGAAGAGCGTTTAAGTTCGCCAACATCGTCTCChr10152Hi03c04CGTAAATAGCGAATCCGATACCGTTTCAACATCTGTGGGTCATTGCChr10153Hi03f06ACGATTTGGTGATCCGATTCGTTTCGTCGCATTGTGCTTCACChr10154Hi04f08CGTGAAAACTCTAACTCTCCGTTTGAAAAGCGCATCAAAGTTCCChr10155Hi05b02GATGCGGTTTGACTTGCTTCGTTTCTCCAGCTCCCATAGATTGCChr10156Hi08g06AATCGAACCAGCACAGGAAGGTTTAGATGGAGGTCGTGGTTACGChr10157Hi08h12GAAGGAAATCATCATCAAGACGGTTTCAAGACCATGGAACAACTTGGChr10158Hi21f08GAGAAAACGCAGAAGCATTGAGTAATGATTTCATCGCGAGTCChr10159Hi22f04TCAATCCTCTGCTCTTCAAGGGTTTAATCACCTGCTGCTGCTTGChr10160AF057134ACTACCCAATGCCCACAAAGTATCCTCGCCCAAAAGACTGChr10161AU223548ACCACCACTGCAGAGACTCAGACGCACCCATTCATCTTTTChr10162CH02d08TCCAAAATGGCGTACCTCTCGCAGACACTCACTCACTATCTCTCChr11163CH02d12AACCAGATTTGCTTGCCATCGCTGGTGGTAAACGTGGTGChr11164CH03d02AAACTTTCACTTTCACCCACGACTACATTTTTAGATTTGTGCGTCChr11165CH04a12CAGCCTGCAACTGCACTTATATCCATGGTCCCATAAACCAChr11166CH04d07TGTCCTCCAATCTTAACCCGCACACAGACGACACATTCACCChr11167CH04d10GAGGGATCTGTAGCTCCGACTGGTGAGTATCTGCTCGCTGChr11168CH04g07CCCTAACCTCAATCCCCAATATGAGGCAGGTGAAGAAGGAChr11169CH04h02GGAAGCTGCATGATGAGACCCTCAAGGATTTCATGCCCACChr11170Hi01d06GGAGAGTTCCTGGGTTCCACAAGTGCACCCACACCCTTACChr11171Hi02a09ATCTCTAAGGGCAGGCAGACCTGACTCTTTGGGAAGGGCChr11172Hi02c06AGCAAGCGGTTGGAGAGAGTTTGCAACAGGTGGACTTGCTCTChr11173Hi04g11CAGAGGATTATCAATTGGACGCAAACTATCTCCAGTTATCCTGCTTCChr11174Hi06b06GGTGGGATTGTGGTTACTGGGTTTCATCGTCGGCAAGAACTAGAGChr11175Hi07d11CCTTAGGGCCTTTGTGGTAAGGTTTGAGCCGATTAGGGTTTAGGGChr11176Hi07g10TATTGGGTTTTGGGTTTGGAGTTTCAACCCTTTTGGTTGTGAGGChr11附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-6序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置177Hi09a01GAAGCAACCACCAGAAGAGCGTTTCCCATTCGCTGGTACTTGAGChr11178Hi16d02AACCCAACTGCCTCCTTTTCGTTTCGACATGATCTGCCTTGChr11179Hi23d02CCGGCATATCAAAGTCTTCCGTTTGATGGTCTGAGGCAATGGAGChr11180CN491050CGCTGATGCGATAATCAATGGTTTCACCCACAGAATCACCAGAChr11181CH01d09GCCATCTGAACAGAATGTGCCCCTTCATTCACATTTCCAGChr12182CH01f02ACCACATTAGAGCAGTTGAGGCTGGTTTGTTTTCCTCCAGCChr12183CH01g12CCCACCAATCAAAAATCACCTGAAGTATGGTGGTGCGTTCChr12184CH03c02TCACTATTTACGGGATCAAGCAGTGCAGAGTCTTTGACAAGGCChr12185CH04d02CGTACGCTGCTTCTTTTGCTCTATCCACCACCCGTCAACTChr12186CH04g04AGTGGCTGATGAGGATGAGGGCTAGTTGCACCAAGTTCACAChr12187CH05d04ACTTGTGAGCCGTGAGAGGTTCCGAAGGTATGCTTCGATTChr12188CH05d11CACAACCTGATATCCGGGACGAGAAGGTCGTACATTCCTCAAChr12189CH05g07CCCAAGCAATATAGTGAATCTCAATTCATCTCCTGCTGCAAATAACChr12190MS14b04CCTTAAGAATCATGTGATACTAATGGCACAAAGATTGTChr12191Hi02b07TGTGAGCCTCTCCTATTGGGTGGCAGTCATCTAACCTCCCChr12192Hi02d05GAGGGAGAATCGGTGCATAGCATCCCTCAGACCCTCATTGChr12193Hi03b03TGAATTGAGTTTGAGAATGGAATGGTTTGTCAGGACGGGTAATCAAGGChr12194Hi07f01GGAGGGCTTTAGTTGGGAACGTTTGAGCTCCACTTCCAACTCCChr12195CN496913TGCCTTTGAGAATCGAAATGTGTTTGTCAATTTCTTGGAACTCChr12196CH03a08TTGGTTTGCTAGGAAAAGAAGGAAGTTTATCGGGCCTACACGChr13197CH03h03AAGAAATCGGATCCAAAACAACTCCCTCAAAGATTGCTCCTGChr13198CH05c04CCTTCGTTATCTTCCTTGCATTGAGCTTAAGAATAAGAGAAGGGGChr13199CH05f04GATGATGGTGCTCTCGGTTATTTTATGTTGGGTAATGTCTTCCGChr13200Hi03e04CTTCACACCGTTTGGACCTCGTTTCATATCCCACCACCACAGAAGChr13201Hi04a02TTCGTGGAAACCTAATTGCAGGTTTCCTCTGCTTCTTCATCTTTGCChr13202Hi04f09ACTGGGTGGCTTGATTTGAGGTTTCAACTCACACCCTCTACATGCChr13203Hi04g05CTGAAACAGGAAACCAATGCGTTTCGTAGAAGCATCGTTGCAGChr13204Hi08e06GCAATGGCGTTCTAGGATTCGTTTGGCTGCTTGGAGATGTGChr13附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-7序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置205Hi08f06CTTAGAGCATAGATGACCTGCAAGTTTAGAAATCCAACGGCCAAAGChr13206AU223486TGACTCCATGGTTTCAGACGAGCAATTCCTCCTCCTCCTCChr13207GD147TCCCGCCATTTCTCTGCGTTTAAACCGCTGCTGCTGAACChr13208NH009bCCGAGCACTACCATTGACGTCTGTTTACCGCTTCTChr13209CH01e01GGTTGGAGGGACCAATCATTCCCACTCTCTGTGCCAGATCChr14210CH01g05CATCAGTCTCTTGCACTGGAAAGACAGAGTAAGCTAGGGCTAGGGChr14211CH03a02TTGTGGACGTTCTGTGTTGGCAAGTTCAACAGCTCAAGATGAChr14212CH03d08CATCAGTCTCTTGCACTGGAAATAGGGCTAGGGAGAGATGATGAChr14213CH03g04ATGTCCAATGTAGACACGCAACTTGAAGATGGCCTAACCTTGTTChr14214CH04c07GGCCTTCCATGTCTCAGAAGCCTCATGCCCTCCACTAACAChr14215CH04f06GGCTCAGAGTACTTGCAGAGGATCCTTAAGCGCTCTCCACAChr14216CH05d03TACCTGAAAGAGGAAGCCCTTCATTCCTTCTCACATCCACTChr14217CH05e05TCCTAGCGATAGCTTGTGAGAGGAAACCACCAAACCGTTACAATChr14218CH05g11GCAAACCAACCTCTGGTGATAAACTGTTCCAACGACGCTAChr14219MS01a05GGAAGGAACATGCAGACTTGATGTTTCATCTTTACAChr14220Hi01c09AAAGGCGAGGGATAAGAAGCGTTTGCACATTTGAGCTGTCAAGCChr14221Hi02d11GCAATGTTGTGGGTGACAAGGTTTGCAGAATCAAAACCAAGCAAGChr14222Hi08c05TCATATAGCCGACCCCACTTAGGTTTCACACTCCAAGATTGCATACGChr14223Hi21e04TGGAAACCTGTTGTGGGATTTGCAGAGCGGATGTAAGTTGChr14224Hi23b12TGAGCGCAATGACGTTTTAGGTTTCAGGCTTTCCCTTCAGTGTCChr14225AJ000761aCTGGGTGGATGCTTTGACTTTCAATGACATTAATTCAACTTACAAAAChr14226AJ000761bCCCTAAACACACAGCCTCCTGTTTCAGCATCGCAGAGAACTGAGChr14227U78948GATCGTCCGCCACCTTAATAGGGTTTTCATCATGCACATTChr14228CH01d08CTCCGCCGCTATAACACTTCTACTCTGGAGGGTATGTCAAAGChr15229CH02c09TTATGTACCAACTTTGCTAACCTCAGAAGCAGCAGAGGAGGATGChr15230CH02d11AGCGTCCAGAGCAACAGCAACAAAAGCAGATCCGTTGCChr15231CH03b06GCATCCTTGAATGAGGTTCACTCCAATCACCAAATCAATGTCACChr15232CH03b10CCCTCCAAAATATCTCCTCCTCCGTTGTCCTGCTCATCATACTCChr15附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-8序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置233CH04g10CAAAGATGTGGTGTGAAGAGGAGGAGGCAAAAAGAGTGAACCTChr15234Hi01c06TTAGCCCGTATTTGGACCAGGTTTCACCTACACACACGCATGGChr15235Hi02d02TTCCTAGGCTACCCGAAATATGGTTTCTGGCATGGACATTCAACCChr15236Hi02f06TAAATACGAGTGCCTCGGTGGCAGTTGAAGCTGGGATTGChr15237Hi02g06AGATAGGTTTCACCGTCTCAGCGACCTCTTTGGTGCGTCTGChr15238Hi03a06TGGTGAGAGAAGGTGACAGGGTTTAAGGCCGGGATTATTAGTCGChr15239Hi03g06TGCCAATACTCCCTCATTTACCGTTTAAACAGAACTGCACCACATCCChr15240Hi04c05AGGATGCTCTGCCTGTCTTCGTTTCTCACTCGCCTGCTCTATCCChr15241Hi06f09AACCAAGGAACCCACATCAGGTTTCACTTACACACGCACACACGChr15242Hi09f01CACCACCAAATTCTCCATCTTCGTTTACCGCCAAATGCTTTGTTACChr15243Hi11a01ACCGCCAAATGCTTTGTTACGTTTCCTCCATTAAACTCCTCAGTGChr15244Hi15c07TCACTTCCCATCATCACTGCGTTTCAATGTCGAGGCTGGTAATGChr15245Z71981GCACTTACCTTTGTTGGGTCACCGGCATTCCAAATGTAACTChr15246CH02a03AGAAGTTTTCACGGGTGCCTGGAGACATGCAGAATGGAGChr16247CH02d10aTGATTTCCTTTTTCGCAAGGTTCATCGTTCCCTCTCAAACChr16248CH04f10GTAATGGAAATACAGTTTCACAATTAAATGCTTGGTGTGTTTTGCChr16249CH05a04GAAGCGAATTTTGCACGAATGCTTTTGTTTCATTGAATCCCCChr16250CH05c06ATTGGAACTCTCCGTATTGTGCATCAACAGTAGTGGTAGCCGGTChr16251CH05e04AAGGAGAAGACCGTGTGAAATCCATGGATAAGGCATAGTCAGGAChr16252Hi01a08AAGTCCAATCGCACTCACGCGTAGCTCTCTCCCGATACGChr16253Hi02b10TGTCTCAAGAACACAGCTATCACCGCCGTTTCTTGGAGGCAGTAGTGCAGChr16254Hi02h08AACGGCTTCTTGTCAACACCGTTTGGCTGGGAATATATGATCAGGTGChr16255Hi04e04GACCACGAAGCGCTGTTAAGGTTTCGGTAATTCCTTCCATCTTGChr16256Hi08d09ACTCATACCCATCGTATTGGTTTACTGCATCCCTTACCACCACChr16257Hi08f12GGTTTGTAACCCGTCTCTCGGTTTCGTAGCTCTCTCCCGATACGChr16258Hi12a02GCAAGTCGTAGGGTGAAGCTCGTTTAGTATGTTCCCTCGGTGACGChr16259Hi15a13TTCTCCCCTTCTAAACCAACCGGTTTCTTGGCGTAACATTGChr16260Hi15g11TGACATGCATAGGGTTACATGCGTTTGGGTTCGTAATCGTTCTTGTGChr16附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-9序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置261Hi22f06CAATGGCGTCTGTGTCACTCGTTTACGACGGGTAAGGTGATGTCChr16262AU301431TCTTCCTCCTCCTCCTCCTCTCTTTTTCTTGGGGTCTTGGChr16263NB102aTGTTATCACCTGAGCTACTGCCCTTCCTCTTTATTTGCCGTCTTChr16264CH01h01GAAAGACTTGCAGTGGGAGCGGAGTGGGTTTGAGAAGGTTAChr17265CH02g04TTTTACCTTTTTACGTACTTGAGCGGCTTGGAAAAGGTCACTTGCChr17266CH04c06GCTGCTGCTGCTTCTAGGTTGGCAAAACTCTGCAAGTCCChr17267CH05g03GCTTTGAATGGATACAGGAACCCCTGTCTCATGGCATTGTTGChr17268Hi02f12ACATGGCCGAAGACAATGACGTTTCAACCTTTATCCCTCCATCTTTCChr17269Hi03c05GAAGAGAGAGGCCATGATACGTTTAACTGAAACTTCAATCTAGGChr17270Hi05c06TGCGTGTATGGTTGGTTTTGTGTTTTCTTTGGTTTTAGTTGGTGChr17271Hi07h02CAAATTGGCAACTGGGTCTGGTTTAGGTGGAGGTGAAGGGATGChr17272AF527800TGGAAAGGGTTGATTGACCTAACAGCGGGTGGTAAATCTCChr17273AJ001681CCTGAGGTTATTGACCCAAAACACTCAGTTGGAAAACCCTACAChr17274AT000174CGGAGGCCGCTATAATTAGGCCTGGAAAGAAAGTAAAAGGACAChr17275AY187627GAGGACTGAATTGGTTGAGGTCGTTTCTCACCCGTATATAGGCCAACChr17276CH05a09TGATTTAGACGTCCACTTCACCTTGATTGGATCATGGTGACTAGGChr17277BGA35AGAGGGAGAAAGGCGATTGCTTCATCACCGTCTGCTChr17278BGT23bCACATTCAAAGATTAAGATACTCAGCCTTTTTTTCCCACChr17279KA5CAACAACAACAAAAAACAGTAAAGCCTTAGAAATAGAAACAACAChr17280KA14ATGGCAAGGGATATTATTAGTCATTGTAGCATTTTTATTTTTChr17281KA16GCCAGCGAACTCAAATCTAACGAGAACGACGAGCGChr17282KB16GATTTTGTCCGCAGGTAAAGAACAGCAAGAACCAChr17283KU10AGTATGTGACAACCCCGATGTTAGAGTCGGTTGGGAAATGATTGChr17284NB103aTTGTAGGGAAAATGATGCCAGTGTTGATACTCTCTCTCTCChr17285NB105aAAACAACCGACTGAGCAACATCAAAATCTTAGCCCAAAATCTCCChr17286NB106aGTACGTCGACATGAGAGAGTCTCTTGTTCCTTCCTGCACChr17287NB109aATGCTCTATAAAACCCACCTACCAGAGGGACCATTGTGTTATTGTATChr17288NB110aTGATGATGTGATTTGATGGAGTGCCATTCCATTGTACGGATTChr17附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-10序号引物名称正向引物序列反向引物序列染色体位置289NB111aCCAAGCTGTGATTATAGGAAGAGGCTGAAAGATTGTAAGGTChr17290NB113aATGAAATATGTCGTGTTGCCCTTAGCCCTTCCTCAGCATGTTTCCTAGACChr17291NH007bACCTTGATGGGAACTGAACAATAGTAGATTGCAATTACTCChr17292NH019bGAGATGGAGTAGTAAAGAAGAAGGACGACATAGTGAAAACAGAAGChr17293NH020aGGATCAGCCAAGAGGAGGTGCGAGATGCAGAGGACGACGChr17294NH021aATCTCAATTTTCTCGGTAACCACTGATATCTCTCTGCACTCCCTChr17295NH022aCATGAAGTGCGTAGAAGTTGGTGTCCCAATAATGATAAGTTCCCAAAGChr17296NH023aGATGCTAGAAGGAAGGAATGATGGCTTTTCAACCCCTTCACCTTCTCChr17297NH024bACCAAAAGTAGAGAGAGAGACCCAACCAGACTAAAAGAGAChr17298NH025aCTGGACACAAACATTCAAGAGGGCACACCAGAAACTCCAAAACAGGChr17299NH027aTAATGTGTTGGGGAGAGAGAGGCTCTTGTTCCTTGCTCCTAAChr17300NH030aGCAACAGATAGGAGCAAAGAGGCTCCAAAGTTCAAChr17附表1 实验所用已发表SSR引物列表（续）-111.基因MDP0000686092编码的氨基酸序列MSDDKMAHDIEXQLDNLSGLSPERCIYRVPERLRQVNEKAYTPQVV XVGPLHHGNGPLKAMEEHKLRYLKHFLSKTKVKLSDCLQKIQEQXKELR GFYAEPIXFDKGEFVRIVSVDAAFVIDLLLRFEVVNYREDEDDYIFSKPTM KSDVIRDLQLLENQLPFFILQDLFKLIPPQLQLQLPSLLEISYNFFQSXIDSE VKXEKFNKISSSGVEVKHFVDLIRILYLPLEPKXKPKTTATPKTRDXPNVT ELHQAGAKFKVGKGSSLFDIKFSCGILKIXKLRVDDTTDLKLRNLLAFEQC HHRKEEEDXLANYVFLMKRLAKTREDVQLLVEKGIIENWLGDTQKISNLL HDLGTGMIVDDWYYAPHXEKLIEYRXVLCRGWMVILKQKYFNTPWSTIS VAAAVILLILTLIQTACSYKSVPLL*2.基因MDP0000205432编码的氨基酸序列MAIEGRFNWSRTSHSFSALCKNRKAATLSRRNLRRESPPQPCKKTGI KSVGLKPTWSFSLLASCCCWTIGRAMRGLEETTCRWRRGGRKMKRKDY EELDDDFFSPSSKSRRLDAGLFATLNEDQSSAAQVFDEKPAPETSVVMQT DDLPTDPLPSGDEXALVLYNPTNTRIFKAPDSQDFSVIVNSDLIPGLREDX GSDEENKEVSNRCMAVVPWVAPNFPPASRDETQAASQSESMEVEMMDT DDNGYNGAEASGFGGTMMEGPGGIQYWQQQQLRWMEPQLFQNNITPVT3.基因MDP0000120033编码的氨基酸序列KNNWRVELSHNSRGGGGGRGGGGRGRSGGSDLKCYECGEPGHFAR ECRLRGGGGGGGGGGRRRSRTPPRYRRSPSYGRRSYSPRGRSPRRRSLT PRGNSRSRSPPYRGREELPYANGMTFHLIHAMMQWSEGSPPKQELRSAY MATWRCFRRYTGIKCCLVCLDISTTMFKLGDALSLYCLSDLVKFLPFLTLA GFIYLCKIGVGIRILKVSSASSASLVLFFCTPLAPGIFVLHYCPALGSSILNGC RSQPARASILCFCTLPGISSLPCYWDLQFXIVVDPSLLSAELLFSLNFVGSN APPSNYYSXICLIEQWVTPRMFLFYRSWRFGSDNRFSDPTPIFLPLIFNWIQ KYRNKFGSKGNLDHTETLTPCFVVG4.基因MDP0000864010编码的氨基酸序列MESEGTPYAPKSILITGAAGFIGSHVTNRLIKNYPSYKIVALDKIDYCS SFKNLRPCRSSPNFKFVKGDIACADLINHLLIADEIDTIMHFAAQTHVDNSF GNSFEFTNNNVYGTHVLLEACKVTQRVKRFIHVSTDEVYGETDMETNIGN PEASQLLPTNPYSATKAGAEMLVMAYHRSYGLPTITTRSNNVYGPHQYP EKLIPKFSLLAMKGEKLPIHGNGSNVRSYLYCDDVAEAFDVILHKGVIGH VYNIGTKKERSVLNVAEDICKMIGLNSKEAITFVQDRPFNDQRYFLDDQK LKRLGWDVRTSWEEGLKLTTEWYTKHADWWGDVSAALHPHPSFAVISR PNDDSWFFEYGFTRLSRTCNEGSNSSELKFLIYGRTGWIGGLLGKLCKGEG IXFEYGKGRLEDRKSLLEDITRVQPTHVFNAAGVTGRPNVDWCEXHKAQ TIRTNVAGTLNLADVCKDQGLLMMNFATGCIFEYDKEHPLGSGIGFKEED NPNFTGSFYSKTKAMVEELLKEYDKVCTLRVRMPISSDLSNPRNFITKIAR XDKVVNIPNSMTVLDELLPISIEMARRNCRGIWNFTNPGVISHNEILEMYR DYIDPKLKWQNFDLEEQAKVIVAPRSNNELDASKLKKEFPELLSIKDSIIK YVFEPIKKT*5.基因MDP0000945764编码的氨基酸序列MDVLVGPTFSLDVSSYGPAPTQDNRNRGGLYLNQDRGAAVAEEASS DSSSSIGVPDDSEEEEDSKGDNGDEVQSKFNGGGGGGLGSLGSFGSLEDSL PIKRGLSNYFSGKSKSFASLSEVSSTVSSVKEVEKQDNPFNKRRRVLIASK WSRRSSSSSSLYNWPNPKSMPLLALAEDGDEDDDEHDRDREGEGENASS EQSSSDEKEDQERRRXPQKLLDRRLKSFKSKSCYCLSDLQEHDEQ*引物名称正向引物序列反向引物序列SNP4970R：TGGACAAACAGGAAGCACGF：CAGCGACAGTGGCGACAASNP4236R：GCTTATCATAAAAAGCAAGACCACF：ATCATATAATTGTGTAATTTAGTAGAACASNP4257R：GGAGTCATAAGCCACAACGAGF：TCAGCTTTGAAGCATCCAATTSNP4336R：AGTTCGTTCTTTTCCGTTGCTF：GCGGTCCTGATTCAGGTACAGSNP3955R：CCCTTAAAAGCCATGGAAGAGF：GTTCTGCATAAAAACCTCGCASNP4094R：GGGTTTTGTGAGGAGGAGGAGF：CGAAGATTGCGACGGGATAGSNP3969R：CTCGTTAGGCCAAGACAAGCF：TTCAAAGAGTAGGTAGGAAGGGT附表2 SNP、InDel引物设计引物名称正向引物序列反向引物序列SNP4137R：GCACGAGTATGATGTTGCTAATGF：CCATCTTATGTCCCCAATTTGTAGSNP42992R：GGTTATACATAGAGGCACTTAGAGCF：GCACAAAACTTAGATCAAAGATGAGSNP42994R：TCAACTCATGTGCAGGAATTGGF：GCTGTGACATAAACCAGGTGAGASNP4376R：GTTTGCTGAGAAATTGATTGGAF：CCATTTCTCCTGGGGCATAGSNP4390R：AGGGCTTGGCTCACAATACTCF：TCAGGTCACAGTTGTTTTGGCSNP4432R：CGAGGAGCAAACGATAGTCAGF：ATTGGTCTCCGAATTAGAAGTCCSNP4782R：GGAGAGCGATTTATTCTACCCTACF：AGACGAAGAAAGCAACGAAAGASNP4842R：GGTCAAAATTGTCCTAGCCTATTTCF：TCCCTCATTTCCTCTTTTTACCTACSNP4878R：GAAGCAGCAGTGCAGGATGAGF：CCATAGCCCTTTGCTCTATTTGTSNP4903R：CTAGGCAAATTTAGGTAAATTTCTTAF：GACAGGTTATCAGTTTATAGCATCAAGSNP4960R：TGAGGCTATCACATTTCCAACGF：GGTTAGATGCAGCCCGATTTindel4199R：ATTGTGAAACCTTGATTGGGF：GAGATTATCCTTATTTTGTGGGindel4209R：ATGGAACGTAAGAACAAGGAF：TTGCTGAGAAGAGTACAAGTGindel4225R：AGGCGCGGTGTTGTCTAAF：CCTCAGGTGCAATAATCATCAindel4227R：AGCGTTGCTATGCTTCTAATGF：AAGATGGAAATGGTATGTGATindel4229R：AACAGAAACATTCGAGGCGTAF：TCCTTGAACTTCGTCGGTAGCindel4235R：GTGTGAAAGCTCAACTCTCCF：CAGCCTTCTCATCGGGTAGindel4246R：GGTAGCACATGCATACTGACAF：CGTTTTGGTAACTAAATCTCCindel4247R：ATGAATGTTTCGCCGAGCF：GTTCAACCATTTTATTGGATTTTindel4254R：ATAAAGTCACTTCTAGCACAAATAF：CGAAAAACGCTTTACTTAGGindel4268R：TCCACAGAAAACAACTAAAAAF：GTTTGCCAATGGGAATGindel42686R：GGCATGAATAGTTTCCACAGAF：TTTGCCAATGGGAATGTTTindel4273R：GAATGTAAGCCATGCCCTCTF：TTCCTACCATTTGTTGCCTCindel4273aR：AATGAAGAGGCAACAAATGGF：TTTTTTATCAAATCCAAATGTGindel4273bR：GTGGTTAAAGGGATTATGTCTF：TGCGAATAGGATTGAGGTindel4274R：TTGAGGGAATGAAATATGCTAF：TTGTTTATCGAATTGGGTTTindel4305R：GTAAACTCATTAAATTATGCTTGF：TGCTTTACTCCGATTCTTCindel4305aR：GTTACTTGGGCTTCCAGACAF：CCCCCAGAGAAATAGAGAGTTindel4307R：AGAAATCCGATCCTTACCACF：TGTTATCCCGTGGGTCTTindel4311R：AAACTGATAAACTTGGAGATTGF：GACGCCTACCGAACTACAindel4334R：ATACTATGAGGTGAAGGATTTAAF：GTATCTTCTACATTATCTTTCGTGindel4336R：CTCGTCGTCTATCGGTGTTF：GGGGTTTACTTGATTGGGA附表2 SNP、InDel引物设计（续）-1引物名称正向引物序列反向引物序列indel4341R：AGTCGGAAAATTCATTCATATF：GAGCTTACAGTTTTTGGTTTTindel4346R：GTTCACGGGATTAAGTCATGF：CAACGGCAAAAAATTATTATAindel4348R：GCTTATGCTCAGGGTCGTF：TTTTGATTTAAGTTATTATTTTCCAindel4349R：CAATCCATTTCAATTTTTCTGF：TTATTTTACCCCTACCCCATindel4362R：TTGAGGTTCGTTTTGGTATF：TTCAATTTTATCTCTTGGTCCindel4362aR：ACAAGTTAACAGATTTTCAAAGTF：GCTTGTAATTTGTTTTTTATGAAindel4371R：TTATTGTGTTTCTGTGCGTACF：CCAAATTATCGTTCACTGCTndel4372R：TTTGAAAACACCCTTGAATGF：TGGTTCCTGAGTGGGTAAAGindel4374R：TCAGTGACTTCGGCGTATTF：AGTTCAATCAATCTCCCAAA附表2 SNP、InDel引物设计（续）-2

高分辨熔解曲线 （High Resolution Melting，HRM） 分析技术是近年来国际上兴起的一种最新的应用于基因突变检测和 SNP 分析的方法。因为所用的荧光染料只能嵌入并结合到双链 DNA 上，因此利用实时 PCR 技术，就能通过实时检测双链DNA 熔解过程中荧光信号值的变化，将 PCR 产物中存在的差异以不同形状熔解曲线的方式直观地展示出来，并且可以借助于专业的分析软件对测试群体实现基于不同形状熔解曲线的基因分型或归类 （殷豪等，2011）。高分辨熔解 （HRM） 曲线分析技术具有三个突出的优势：一是高通量、高灵敏度、高特异性、低成本且不受检测位点的限制；二是操作简单、快捷、节省时间成本；三是闭管操作，无污染且 DNA 不受损伤，熔解分析后还可以进行凝胶电泳或测序分析。在 LightCycler ? 480分析仪上一次可以完成96个或348个样本的分析，从反应开始到数据生成仅需要90～120 min。目前HRM技术在果树的种质鉴别和基因分型研究中已有应用。吴波等 （2012） 引入高分辨率熔解曲线分型技术对柑橘进行SNP 分型；Ganopoulos等 （2013） 利用 HRM 技术对9个甜樱桃基因上的 SNP 位点进行分析，成功的实现了对21 个甜樱桃品种的鉴别，准确率达到 99.9%；Distefano 等 （2013） 第一次将HRM技术应用于对柑橘品种 SNP 及 InDel的检测，并利用21 个 SNP标记实现了对柑橘不同品种的区别。分子标记辅助选择育种 （marker assisted selection，MAS） 作为一种高效的现代分子育种技术，已被广泛应用于作物品种选育和遗传改良。它是利用与目标基因紧密连锁的分子标记，来鉴定不同个体的基因型，从而进行辅助选择育种。与通过表现型间接对基因型进行选择的传统育种方法相比，MAS具有更大的信息量，能有效结合基因型与表型鉴定结果，更加高效和准确，避免选育过程中的盲目性和不可预测性，能够将育种时间从传统的十几年缩短到几年时间，从而显著提高育种效率。分子标记对目标性状鉴定的准确性是影响分子标记辅助选择效率的一个重要条件。本试验利用HRM分析技术对上一章节所开发的SNP 和InDel标记进行筛选和验证，以获得与抗炭疽菌叶枯病基因 R gls位点紧密连锁的SNP 及InDel标记，对抗病基因进行精细定位，缩小抗性基因位点的区域范围，为基因克隆提供数据。同时利用筛选出的4 个与 R gls基因位点紧密连锁的分子标记对50 个苹果栽培品种和品系进行准确性鉴定，以验证分子标记的可靠性。选择青岛农业大学苹果试验基地 （山东省胶州市） 2009 年种植的，经过人工离体接种鉴定的 ‘金冠’ב富士’ 的F1 杂交群体207株实生树为材料用于验证 SNP、InDel标记及进行抗炭疽菌叶枯病基因的精细定位。所用群体与第三章SSR标记的开发与遗传定位为同一群体。选择该试验基地栽培的 50 个田间栽培品种和品系做为试材，经人工离体接种鉴定并提取DNA，用于分子标记准确性的验证。同第三章。用于引物设计的SNP 和 InDel位点来源于第四章中所筛选出的位于第15条染色体上3.9～4.9 Mb候选区域的18 个 SNP 位点和30 个InDel位点。从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus_x_domestica/下载位于SNP 和InDel位点上游150 bp和下游150 bp距离内的contig 序列用于引物设计。引物设计的主要参数为：产物大小60～150 bp；引物退火温度 （Tm） 在 55～65℃，且上、下游引物 Tm相差不大于 2℃；引物 GC （%） 含量为 45%～55%，引物大小在60～160 bp。引物序列 （附表 5-1）。所有引物由生工生物工程 （上海） 股份有限公司合成。PCR扩增和高通量熔解曲线分析在 LightCycler ? 480Ⅱ荧光定量PCR 仪 （Roche） 上进行。反应试剂来自 LightCycler ? 480 High Reso-lution Melting Master试剂盒。反应体系为15 μl，内含10 ng/μl的基因组 DNA 1.0 μl，1×Master Mix 7.5 μl，2.0 mmol/L MgCl2 1.5 μl，左右引物为 0.2 μmol/L各0.5 μl。PCR扩增程序为95℃预变性10min，然后按95℃变性10min，55℃退火15s，72℃延伸10s的程序进行45个循环。在PCR循环结束后，立即对扩增产物进行HRM检测，程序为：95℃1min，40℃1min，65℃1s，在65℃升温至95℃的过程中，以25次/℃的频率收集荧光信息，最后降温至40℃。高分辨率熔解曲线分析用LightCycler?480的Gene Scanning软件（1.5version）进行。用18对 SNP 及30对InDel引物在亲本和抗感基因池中筛选，将出现不同分型的引物在分离群体上进行验证，以确定该标记是否与目的基因连锁。将筛选的多态性标记在重组个体上的基因型表现与重组个体的抗病表型进行统一分析，对抗炭疽菌叶枯病基因 R gls位点进行精细定位，缩小抗性基因位点的范围。为后续的候选基因筛选及图位克隆提供准确的信息。将进一步缩小的R gls位点区域内的基因进行统计并进行同源比对和GO功能富集分析，以筛选该区段内可能与抗病相关的候选基因。SSR标记的PCR产物利用3.5%的琼脂糖凝胶电泳进行标记基因型鉴定。SNP 和InDel标记利用HRM技术进行基因分型鉴定。通过对设计的引物进行 BSA 筛选，获得了与 Rgls基因位点连锁的6个SNP 及5个 InDel标记，分别为 SNP3955、SNP4236、SNP4257、SNP4299、SNP4336、SNP4432 和InDel4199、InDel4227、InDel4254、InDel4305、InDel4334。在6个SNP 位点中有A/G、G/A、T/C和C/G四种变换形式，其中发生A/G转换的占50.0%，发生G/A转换，T/C转换，C/G颠换的各占16.7%（表5-1）。引物名称引物序列序列长度参考碱基突变碱基位置SNP3955R：CCCTTAAAAGCCATGGAAGAGF：GTTCTGCATAAAAACCTCGCA133AGchr15∶3，955，630-3，955，763SNP4236R：GCTTATCATAAAAAGCAAGACCACF：ATCATATAATTGTGTAATTTAGTAGAACA114AGchr15∶4，236，220-4，236，353SNP4257R：GGAGTCATAAGCCACAACGAGF：TCAGCTTTGAAGCATCCAATT145GAchr15∶4，257，141-4，257，286SNP4299R：GGTTATACATAGAGGCACTTAGAGCF：GCACAAAACTTAGATCAAAGATGAG135TCchr15∶4，299，179-4，299，314表5-1 SNP、InDel引物筛选引物名称引物序列序列长度参考碱基突变碱基位置SNP4336R：AGTTCGTTCTTTTCCGTTGCTF：GCGGTCCTGATTCAGGTACAG133CGchr15∶4，336，382-4，336，515SNP4432R：CGAGGAGCAAACGATAGTCAGF：ATTGGTCTCCGAATTAGAAGTCC137AGchr15∶4，432，529-4，432，666indel4199R：ATTGTGAAACCTTGATTGGGF：GAGATTATCCTTATTTTGTGGG156AAAGchr15∶4，198，916-4，199，072indel4227R：AGCGTTGCTATGCTTCTAATGF：AAGATGGAAATGGTATGTGAT81TTCchr15∶4，227，569-4，227，650indel4254R：ATAAAGTCACTTCTAGCACAAATAF：CGAAAAACGCTTTACTTAGG119GGCchr15∶4，254，896-4，255，015indel4305R：GTAAACTCATTAAATTATGCTTGF：TGCTTTACTCCGATTCTTC134CCCAchr15∶4，305，342-4，305，476indel4334R：ATACTATGAGGTGAAGGATTTAAF：GTATCTTCTACATTATCTTTCGTG115TTAchr15∶4，334，597-4，334，712表5-1 SNP、InDel引物筛选（续）-1将获得的11个标记在207 株 F1 群体上检验其与抗炭疽菌叶枯病基因的连锁情况，结果表明，这11 个标记的扩增子熔解曲线形状明显不同，可据此区分抗病型和感病型植株 （附图5-1）。将从全基因组重测序中筛选出并经群体验证的与 R gls位点紧密连锁6个SNP 及4个InDel标记 （InDel4305标记在染色体上的物理位置与遗传位置不符，未用于精细定位分析），加上1 个 SSR标记，共11个标记与重组个体基因型及表型进行分析。结果显示，InDel4227、SNP4236和InDel4254标记与基因Rgls位点共分离，没有重组个体。标记InDel4199有一个重组个体 S29 和标记 SNP4257 有两个重组个体R16和R31，这三个关键的重组个体将基因 Rgls位点定位于 InDel4199和SNP4257 两标记之间，物理距离由 500kb 缩小为 58kb （附图5-2）。按照基因位置信息从蔷薇科基因组网站 GDR下载基因组15 号染色体4.1～4.3 Mb内基因45个。通过perl脚本整理基因组GFF文件，BLAST同源比对NR数据库，选取最优比对结果。获得目的区段内的45个基因，其中5 个基因功能未知，2 个为转录因子，另外40 个基因均有明确的注释信息 （表5-2）。序号MDP号码同源基因1MDP0000180944生长素诱导蛋白15A2MDP0000205434非病原性诱导蛋白3MDP0000148158生长素诱导蛋白15A4MDP0000177664蛋白酶体beta亚基5MDP0000177665转录共抑制因子LEUNIG6MDP0000215349转录共抑制因子LEUNIG7MDP0000664885抗烟草花叶病毒蛋白N8MDP0000877582抗烟草花叶病毒蛋白N9MDP0000200748转录因子10MDP0000481972抗烟草花叶病毒蛋白N11MDP0000481973抗烟草花叶病毒蛋白N12MDP0000381897转录因子13MDP0000297052抗烟草花叶病毒蛋白N14MDP0000700563黄瓜素15MDP0000242744阳离子运输调控蛋白216MDP0000551192阳离子运输调控蛋白217MDP0000242745转录因子18MDP0000153007来自转座子TNT1-94的反转录病毒Pol多肽蛋白19MDP0000130036未知功能转录因子20MDP0000199184未知功能转录因子21MDP0000489432三角状五肽链重复包含蛋白22MDP0000318360类LRR丝氨酸/苏氨酸受体蛋白激酶23MDP0000247898类LRR丝氨酸/苏氨酸受体蛋白激酶表5-2 区段内基因同源比对结果序号MDP号码同源基因24MDP0000811774核糖核酸酶H2亚基B25MDP0000309446未知功能线粒体蛋白26MDP0000272143单尿苷绑定蛋白1B；与mRNA3’-UTR绑定27MDP0000871880脱水响应蛋白RD2228MDP0000272145酪蛋白激酶Idelta小体29MDP0000167752结构域包含蛋白3430MDP0000167753核糖核酸酶H2亚基B31MDP0000596125核细胞溶解酶TIA-1小体32MDP0000201427拓扑异构酶I33MDP0000149447脱水响应蛋白RD2234MDP0000596128酪蛋白激酶Ideta小体35MDP0000201428UDP-糖转运蛋白36MDP0000201429环核苷酸离子通道蛋白1437MDP0000255274环核苷酸离子通道蛋白1438MDP0000120033丝氨酸精氨酸富集剪接因子。39MDP00001695343-酮脂酰-CoA合酶640MDP0000203647细胞分裂素-O-葡糖基转移酶341MDP0000864010鼠李糖生物合成酶142MDP0000279973肌氨酸氧化酶43MDP0000178030未知蛋白44MDP0000289536肌氨酸氧化酶45MDP0000272940转录因子WRKY11表5-2 区段内基因同源比对结果（续）-1为了对基因功能做进一步分析，提取区段内基因的 GO （gene on-tology） 信息，采用基因功能GO分类网站WEBGO （ http：//wego.ge-nomics.org.cn/cgi-bin/wego/index.pl） 进行基因分类。结果显示，这40个基因在细胞组成上涉及到4 个 GO 分类，包括细胞、细胞组分、细胞器组成以及大分子复合体的组成；在分子功能方面，该区段内基因涉及到电子传递、转运蛋白、水解、绑定、催化以及物质传递6 个GO分类；在生物过程方面，该区段内基因涉及到免疫过程、生物调控过程、细胞过程、色素沉着过程、程序性死亡过程、代谢过程、响应刺激过程、定位以及定位确立9个生物过程 （附图5-3）。经离体接种鉴定，50 个作为分子标记准确性鉴定材料的品种（系） 中有33 个抗病品种 （系） 和17 个感病品种 （系）。从与抗炭疽菌叶枯病基因紧密连锁的分子标记中挑选出4 个有代表性意义的分子标记SSR标记S0405127，S0304673，SNP 标记 SNP4236，InDel标记InDel4254作为鉴定标记。其中SSR标记 S0405127 与基因 Rgls位点的遗传距离为 0.5cM，S0304673 的遗传距离为 0.9 cM （见第三章），标记SNP4236和 InDel4254与目的基因共分离。鉴定结果显示，SSR标记 S0405127，S0304673，SNP 标记 SNP4236，InDel 标记 In-Del4254 鉴定抗感品种 （系） 的准确率分别为 90.0%，94.0%，98.0%，96.0%。在基因型与表型鉴定结果中，不相符的个数分别为5个，3个，1个，2 个。这 4 个分子标记鉴定结果的准确率均达到90%以上，可以应用于田间栽培品种、品系、种质资源以及杂种后代幼苗对炭疽菌叶枯病抗性的鉴定 （表5-3）。序号品种/系表型S0405127S0304673SNP4236InDel42541海棠RRSRR2斗南RRRRR3福丽RRRRR4福艳RRRRR5红勋1号RRRRS6华帅RRRRR7鲁加1号RRRRR8鲁加2号SSSSS9鲁加4号RRRRR10鲁加6号RRRRR11旭RRRRR12早杂1号RRRRR13威赛克旭RRRRR14五月金RRRRR15早翠绿RRRRR表5-3 四个分子标记对苹果栽培品种和品系的抗病性的鉴定结果序号品种/系表型S0405127S0304673SNP4236InDel425416国光RRRRR17霞光RRRSS18烟富1RRRRR19福早红SSSSS20嘎拉SSSSS21金冠SSSSS22秦冠SSSSS23华硕RSRRR24瑞丹SSSSS25乙女RRRRR26王林RSRRR27青农红SSSRR28秦冠SSSSS29瑞红SSSSS30赛金RSRRR31红肉1号RRRRR32双阳红SSSSS33望山红RRRRR34新红星RRRRR35青冠RRRRR36弘前富士RRRRR37富士RRRRR387C-102RRRRR39N2SSSSS40PinavaRRRRR417C-35SRRSS4295-161RRRRR4395-231RRRRR4495-232SSSSS4595-32RRRRR4695-93RRRRR477C-104SSSSS487C-105SSSSS497C-106SRRSS507C-107SSSSS表5-3 四个分子标记对苹果栽培品种和品系的抗病性的鉴定结果（续）-1精细定位通常采用的方法是侧翼分子标记法，对于有参基因组植物来说，就是根据对目的基因的初步定位结果，选择位于目的基因两侧的分子标记之间的碱基，用于设计合适的分子标记。筛选出的与目的基因连锁的分子标记，通过鉴定更大的群体来确定发生交换的重组单株，最终找到与目的基因紧密连锁的分子标记，从而实现对目的基因的精细定位。精细定位是图位克隆策略中重要的一步，可以通过开发新的分子标记，整合原来已有的遗传图谱来进行图谱加密，以实现对目的基因的精细定位。本研究利用全基因组重测序技术开发出的 SNP 及 InDel标记，结合Rgls基因初步定位结果，选出在 Rgls基因两侧的 SSR 标记 S0304673和S0405127之间的SNP 和InDel标记，通过HRM曲线分析技术对18个SNP 位点和30 个 InDel位点进行了分析，筛选出6 个 SNP 及5 个InDel标记与Rgls基因位点紧密连锁。并选择其中的10 个标记用于Rgls基因位点的精细定位。标记InDel4227、SNP4236和 InDel4254表现出与R gls基因位点共分离。由于所用群体规模的限制，所以筛选出的SNP 及InDel标记仍无法对R gls基因位点进行真正意义上的精细定位。由于现有的金冠苹果基因组数据库中可能存在组装错误，所以在对定位区域内的基因进行分析中，扩大 R gls基因位点区域。对苹果第15条染色体4.1～4.3 Mb距离内的基因进行统计分析，结果表明在该区段存在40个有功能注释的基因，涉及到细胞组成方面，分子功能方面，生物过程方面共18个GO分类。在细胞组成层面上，参与细胞组成的基因，一般是由主效基因或寡基因控制的质量性状，是个体保持组成性抗性的基础，影响着品种的垂直抗性。在分子功能层面上，植物个体抗性与电子传递、转运蛋白、水解、绑定、催化以及物质传递等生物过程密切相关。例如，植物受到病原菌侵染后，体内会产生并积累一些次生代谢物质，如植保素、酚类、木质素、菇类等化合物，对病原菌产生抵抗作用 （Pirie and Mullins，1976）。植物次生代谢途径尤其是苯丙烷类代谢途径是与植物抗病性密切相关，许多抗菌物质 （包括酚类、类黄酮、绿原酸、酮类等） 的生物合成都是通过这条途径完成的 （RalPhL，1992；Cole R.A，1985）。在生物过程层面上，程序性死亡过程，响应刺激过程以及免疫过程与抗病机制密切相关。细胞程序性死亡 （programmed cell death，PCD） 是细胞死亡的两种基本类型之一，是细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后主动发生的由基因调控的死亡过程。植物与病原菌互作过程中发生的过敏性反应 （hypersensitive reaction，HR） 是PCD 的重要表现形式之一，是植物抵抗病原菌入侵的早期重要抗性反应，对植物抗病性有着重要意义。在该区域内存在着4个编码WRKY转录因子的基因MDP0000272940、MDP0000242745、 MDP0000381897、 MDP0000200748 以及5 个 TIR-NB-LRR 家族基因 MDP000066488、 MDP0000877582、 MDP0000481972、MDP0000481973、 MDP0000297052。许多研究结果表明，当植物受到病原菌入侵或植食性昆虫取食植物后，植物体内的一些WRKY 转录因子的表达水平会随之发生改变 （Hui et al.，3003；Zhao et al.，2007）。Huang等 （2002） 研究了一个茄科植物的 WRKY 蛋白 STHP-64，发现其在低温胁迫下表达增强，Rizhsky 等 （2004） 发现拟南芥的 At-WRKY25蛋白与氧化胁迫下胞液抗坏血酸过氧化物酶的表达有关。Li等 （2006） 通过对WRKY70蛋白过表达的转基因植株和变异植株的研究，证明过表达拟南芥 WRKY70 蛋白的转基因植株能提高水杨酸（SA） 介导的抗病性，但降低茉莉酸 （JA） 介导的抗病性。2006 年Ryu等对水稻WRKY 转录因子在不同生物胁迫下的表达量变化进行了研究。结果显示在45 个水稻 WRKY 转录因子中有15 个 WRKY 转录因子可以被稻瘟病病菌 （ Magnaporthe grisea） 诱导表达，其中12个可以同时被水稻白叶枯菌 （ Xanthomonas oryzae Dowson） 诱导表达。在对防御反应相关的信号分子对 WRKY 转录因子的影响的研究中发现OsWRKY10、OsWRKY82和OsWRKY85可以在经过茉莉酸诱导的叶片中表达，OsWRKY45 和 OsWRKY62 可以在经过水杨酸处理的叶片中诱导表达，OsWRKY30 和 OsWRKY82 可以同时被水杨酸和茉莉酸诱导表达，这说明WRKY 转录因子参与了植物的诱导防御反应。抗性基因 （R gene） 编码的蛋白大部分是 NB-LRR 蛋白，不同类别的 NB-LRR蛋白可以直接或间接的识别不同来源的病原菌效应子，从而激发相似的防御反应。这9个基因是人们重点关注的基因。进一步的基因功能研究及苹果与炭疽叶枯菌的分子互作机制研究将围绕着SNP 定位的5个候选基因及该区段内的相关基因展开。随着分子生物学技术的快速发展，特别是以DNA多态性为基础的分子标记技术在苹果育种中的应用，大大提高了目标性状早期选择的效率，缩短了育种周期，加快了新品种选育的速率。Tartarini 等（2000） 报道了利用获得的与抗苹果黑星病的显性单基因Vf紧密连锁的RAP D标记测验了携带该基因个体，淘汰错误率为3%，保留错选率仅为 0.02%。Cheng等 （1996） 利用与控制果色的Thd01基因紧密连锁的RAP D标记，在苹果实生苗发育早期进行了标记筛选，实现了对果色这一特定性状的早期选择，大大减少了人力物力的浪费。苹果柱型性状有利于形成集约高效的现代苹果栽培模式，能够降低生产成本，提高产量。Moriya等 （2012） 所得到的 3个与控制苹果柱型性状Co基因共分离的标记 Mdo.chlO.12、Mdo.chlO.13 和 Mdo.chlO.14，对于柱型苹果杂交育种中对群体材料的早期选择、基因的克隆及转化有着重要意义。王彩虹 （Wang caihong，et al.，2011） 通过SCARs标记和SSR标记对控制梨矮生性状基因 PcDw 进行了基因定位，对梨矮化育种有着重要的意义。随着不同果树基因组测序的完成，在果树方面陆续开展了相关 SNP 芯片研发和利用。Chagne等 （2012） 对27 个苹果品种进行低深度重测序检测并确认全基因组范围的 SNP，开发了苹果 8 K 的 SNP 芯片，可用于苹果幼苗大规模检测，这将会促进标记—位点—性状之间关联性的发现，进一步阐明质量性状的遗传结构特性，推动遗传变异研究。本实验利用四个紧密连锁的分子标记 S0405127、S0304673、SNP4236和 InDel4254对50个田间栽培品种和青岛农业大学选育出的优系进行了抗炭疽菌叶枯病的基因型鉴定，并结合其抗病的表型鉴定对四个标记的准确性进行了分析。结果表明四个标记的准确率分别为90.0%，94.0%，98.0%和96.0%，可以有效的应用于分子标记辅助育种。在第三章的研究结果中，SSR标记S0405127 与基因Rgls位点的遗传距离为0.5cM，而S0304673 的遗传距离为0.9 cM，理论上标记S0405127与抗性基因位点连锁的更紧密，准确性应该更高，而在品种群体验证中，标记 S0304673 鉴定抗感品种 （系） 的准确率为94%，而标记S0405127的准确率为90%。在利用重组个体对基因Rgls位点进行精细定位中，SNP4236 和 InDel4254 标记与目的基因共分离，在品种的群体验证中应该显示100%的准确性，但实际上还是有1～2个表型鉴定与基因型鉴定不符的个体。这种现象存在的原因一是可能由于用于鉴定的品种或品系数量有限，导致了结果的偏离。二是标记S0405127的条带显示为有和无的差异，在电泳时有可能存在读带误差。三是在对做图群体进行表型鉴定中，可能存在表型鉴定误差，导致遗传距离计算的偏差。四是在精细定位中，需要应用更大的群体筛选重组的单株以完成对目标基因的精细定位。而由于实验材料的限制，所用群体规模不是很大，所以可能导致定位结果的误差。这些问题尽管在实验中是不可以避免的，但是在以后进行更精细的遗传定位研究中，以更大规模的群体和更严谨的实验操作来进一步验证，可以减少这些误差的产生，提高遗传作图的精度。