苹果是我国种植面积最大的水果，目前全国苹果种植面积达190万hm2以上，产量达2110万t，居世界前列[1]。近几年来，苹果腐烂病在我国尤其是冀北地区，连续多年中偏重到大发生，已成为对苹果生产影响最大的病害，严重制约着我国苹果产业的健康发展。虽然目前针对苹果腐烂病的研究较多，但始终未能找出解决问题的根本措施，致使该病发生势头有增无减，蔓延十分迅速，甚至在新栽果园内都能找到大量病株。因此对该病的流行原因进行系统分析、对防治关键技术进行深入探讨势在必行。苹果腐烂病又称串皮湿、臭皮病、烂皮病，是一种发生范围广、为害程度重、损失极大的苹果树病害，全国各苹果产地均有发生，尤其是近10多年来在全国各地蔓延较迅速。该病轻者造成枝干枯死、结果能力锐减、产量和品质下降、结果年限缩短，重者可导致整树枯死，甚至毁园。据笔者近5年来调查，冀北地区苹果园苹果腐烂病感染率几乎达到100%，成龄果树病株率35%以上，严重的果园达到80%以上，幼树病株率也有10%左右，目前已有20%苹果园因此病而毁园。通过对产量损失率的调查，仅该病就达到20%左右，占苹果树整个病虫损失率的50%以上。苹果腐烂病的病原物是苹果黑腐皮壳，属子囊菌亚门真菌。苹果腐烂病菌是一种寄生性很弱的兼性寄生菌，具杀生寄生性。该病侵入寄主后，先处于潜伏状态，不立即致病，当树体或局部组织衰弱，或果树进入休眠期，生理活动减弱、抗病力降低时，病菌才由侵入部位向外扩展，进入致病状态[2]。因此，苹果树本身的抵抗能力强弱是该病能否发生的前提条件。2.1.1 施肥水平明显不足 据调查，20世纪80年代和90年代初期，苹果是冀北地区许多农户的主要收入来源，因此管理比较精细，平均每年每株果树施优质农家肥50 kg以上，夏季还要进行压青草、扩水盘、改良土壤、追施肥料等措施，冬季一般都要进行树干涂白。另外在病虫防治上，也基本上做到了及时防治、统一防治。因此，果树树势较强，各种病害发生均较轻。20世纪90年代后期尤其是近5 年以来，随着果品价格下降，果农积极性下降，管理比较粗放。据调查，目前有90%以上的苹果树不施用有机肥，50%以上的苹果树不追施肥料，20%以上的苹果树不施任何肥料，即使是施肥的，也多是在春季每株基施磷酸二铵等0.5 kg左右，不但养分含量单一，而且施肥量明显不足。2.1.2 掠夺式生产现象比较严重 大多数果农只追求眼前利益，一是不舍得疏花疏果，使果树负担过重，大小年现象严重，使树体过早衰弱，抵抗力下降；二是为了争取多挂果，普遍采取环剥措施，尤其是主干环剥现象还比较常见，造成环剥就有花芽、不环剥就没有花芽的恶性循环，不但造成树体衰弱、抵抗力下降、各种病害泛滥，而且使果树结果高峰期明显缩短。另外，近几年天气干旱，有的果园不能及时灌水，也是粗放管理的一个重要方面。防治不当主要表现在5个方面：一是施药次数不足。部分果农对苹果树重视不够，有的全年只施一、两次药，甚至有的果农完全不施药，也不进行其他管理，早期落叶病、瘤蚜等病虫害发生严重，造成树势极度衰弱，进而促使腐烂病大发生，提供了充足菌源，也危及到了整个果园；二是施药时期把握不好。苹果腐烂病萌芽前用药消灭枝干上的菌源十分重要，许多果农不重视此次施药，萌芽后刮除病斑必须进行，而多数果农到了花期以后病斑明显时才刮除，病斑扩展迅速，还会使病原菌大量传播；三是病斑刮除不彻底。发现病斑后，应刮除至木质部，边缘要超过病部1cm左右，而有的果农刮得浅或刮得范围小，造成病斑复发率较高，还有的果农不将刮下的病皮带走，再次形成侵染源；四是药剂选择不合理。目前用于防治腐烂病的药剂较混乱，许多果农选择不当，也是造成防治效果不好的重要原因；五是不注重夏秋季施药。多数果农只注重春季涂药，不注重夏秋季喷药保护和秋季涂药保护，形成新增病斑。20世纪80年代之前，冀北地区苹果主要品种是国光，其次是金冠、元帅、红星、白龙、倭锦、鸡冠等，苹果腐烂病很少发生，但随着品种间异地交流的广泛进行，富士等新品种开始传入，腐烂病也开始迅速发生。随着果农不断栽植和对老树进行改接换头，几乎所有果园均有外来接穗不断引入，目前这些已成为当地的主栽品种，在一定程度上造成菌源的不断传入，因此，品种间异地交流是苹果腐烂病发生的原因之一。苹果腐烂病的防治必须贯彻以加强栽培管理为中心内容的“预防为主、综合防治”的方针。健身栽培是指在苹果生产过程中，利用农业和物理等措施促进植株生长，增强植株对病虫的抵抗能力，减少病虫害的发生率，从而增加苹果的产量，提高品质。健身栽培是目前生产无公害苹果最有效、最根本、最安全、最经济的手段，也是防治苹果腐烂病的最重要手段。3.1.1 加强水肥管理，提高树势 在秋季落叶后至早春萌芽前，增施以有机肥为主，N、P、K、微肥配合的基肥，适时追肥，叶面喷施氨基酸叶肥、沼渣沼液等，要根据不同树龄、不同土壤条件、不同时期采取平衡施肥措施，通过增施有机肥和磷钾肥、补充叶肥等手段，增强树体对腐烂病的抵抗能力；萌芽前、春梢生长期、果实膨大期、采果后和封冻前要及时根据灌水指标灌水，保证土壤的田间持水量，尤其要防止春旱，但也要注意雨季及时排水，保证树体含水量正常，降低病菌扩展能力，促进伤口愈合。3.1.2 及时修剪，合理负担 大小年现象是造成树势衰弱的重要原因，因此要通过疏花疏果、修剪等措施，合理负担，避免树体消耗过大；适时冬剪和夏剪还可剪去病虫枝、枯死枝、内膛过密枝，改善树体通风透光条件，以减轻其他病虫害的为害，从而提高树势。3.1.3 及时清理病虫及残体，减少菌源 病枝、病树皮中有大量的腐烂病菌，因此要及时剪除病枝和病果、及时清理将刮下的树皮，带出园外深埋或焚烧处理，防止孢子飞散传播。3.1.4 减少环剥，避免树势衰弱 环剥在一程度上可以提高花芽分化率，从而增加挂果量，但也会造成树势衰弱，尤其是主干环剥，后果更严重，因此，应优先选用施沼渣沼液、喷芸薹素内酯等植物生长调节剂、涂抹促花剂等方法，尽量少环剥。3.1.5 增加保护，防止冻害发生 冻害是诱发腐烂病的重要因素，在冬季温度较低的地区，要通过树干涂白等措施，防止冻害发生。苹果腐烂病刮除病斑工作应根据其发生规律，及时进行。当春季气温回升后，树液开始流动，营养向生长点转移，造成树体枝干营养水平相对较低，导致抗病能力迅速降低，病菌则乘机扩展蔓延，形成春季发病高峰。另外，秋季果实迅速膨大，营养向果实大量转移，也会造成树体枝干营养相对缺乏，形成秋季发病高峰。因此，刮除病斑应在每年春、秋季分别进行。通过实践表明，每年进行3次比较合适，第一次在萌芽期，此时病斑尚未蔓延；第二次在苹果花期，尤其是降过一场春雨过后，此时病斑最容易辨别，可及时发现第一次未发现的病斑；第三次是在9月份，此时是该病蔓延的另一个高峰。刮病斑时，要刮至露出木质部，边缘要超过病部1cm左右，刮好后及时涂药保护。通过笔者调查和试验，目前防效较好的涂抹药剂有：3.315%甲硫·萘乙涂抹剂（灭腐新）原液、2.12%腐殖酸铜水剂（腐烂净）原液、4%腐殖酸铜水剂（843康复剂）原液、21%过氧乙酸水剂（果富康）5倍液、精制木酢液原液、40%氟硅唑（杜邦福星）15倍液等，一般防治效果可达80%～90%。病斑涂药保护时，有一些不易发现的病斑往往被忽略，造成年年涂药年年有新发病斑。因此，全树喷药防治是必不可少的措施，可有效消灭树皮浅层病菌，预防发病。可在萌芽前、谢花后2～4天、落皮层形成期（7月份）、果实生长中后期（8月下旬～9月上旬）各喷一次药，尤其是萌芽前施药尤为重要，可有效消除树体上潜伏的病菌。萌芽前喷施药剂可选用18%过氧乙酸水剂200倍液、石硫合剂5波美度、2.12%腐殖酸铜水剂100倍液、45%代森铵（施纳宁）水剂300～400倍液等；萌芽后喷施药剂可选用18%过氧乙酸水剂500倍液以及腐殖酸铜水剂等；秋季涂抹药剂可选用3.315%甲硫·萘乙涂抹剂（灭腐新）原液、腐殖酸铜类药剂等。另外，在苹果腐烂病发生高峰期，还可用21%的过氧乙酸200倍液进行树干淋洗或3～5倍液涂刷树干及骨干枝、45%代森铵（施纳宁）水剂100～200倍液涂刷树干及骨干枝，可收到很好的效果。在5～9月份，其中以5～6月份最好，用锋利的刀将所有的病皮、粗翘皮全部刮除，露出白绿或黄白色皮层为止，不要触及形成层，皮层中若有坏死病斑也一律刮除。重刮皮可将多年积累的各种类型病变组织和侵染点彻底清除，且可刺激树体产生愈伤组织，增强抗病力。对于主干上病疤较大、为害较严重的果树，要及时采取桥接或脚接的方式，促进树势恢复。

高分辨熔解曲线 （High Resolution Melting，HRM） 分析技术是近年来国际上兴起的一种最新的应用于基因突变检测和 SNP 分析的方法。因为所用的荧光染料只能嵌入并结合到双链 DNA 上，因此利用实时 PCR 技术，就能通过实时检测双链DNA 熔解过程中荧光信号值的变化，将 PCR 产物中存在的差异以不同形状熔解曲线的方式直观地展示出来，并且可以借助于专业的分析软件对测试群体实现基于不同形状熔解曲线的基因分型或归类 （殷豪等，2011）。高分辨熔解 （HRM） 曲线分析技术具有三个突出的优势：一是高通量、高灵敏度、高特异性、低成本且不受检测位点的限制；二是操作简单、快捷、节省时间成本；三是闭管操作，无污染且 DNA 不受损伤，熔解分析后还可以进行凝胶电泳或测序分析。在 LightCycler ? 480分析仪上一次可以完成96个或348个样本的分析，从反应开始到数据生成仅需要90～120 min。目前HRM技术在果树的种质鉴别和基因分型研究中已有应用。吴波等 （2012） 引入高分辨率熔解曲线分型技术对柑橘进行SNP 分型；Ganopoulos等 （2013） 利用 HRM 技术对9个甜樱桃基因上的 SNP 位点进行分析，成功的实现了对21 个甜樱桃品种的鉴别，准确率达到 99.9%；Distefano 等 （2013） 第一次将HRM技术应用于对柑橘品种 SNP 及 InDel的检测，并利用21 个 SNP标记实现了对柑橘不同品种的区别。分子标记辅助选择育种 （marker assisted selection，MAS） 作为一种高效的现代分子育种技术，已被广泛应用于作物品种选育和遗传改良。它是利用与目标基因紧密连锁的分子标记，来鉴定不同个体的基因型，从而进行辅助选择育种。与通过表现型间接对基因型进行选择的传统育种方法相比，MAS具有更大的信息量，能有效结合基因型与表型鉴定结果，更加高效和准确，避免选育过程中的盲目性和不可预测性，能够将育种时间从传统的十几年缩短到几年时间，从而显著提高育种效率。分子标记对目标性状鉴定的准确性是影响分子标记辅助选择效率的一个重要条件。本试验利用HRM分析技术对上一章节所开发的SNP 和InDel标记进行筛选和验证，以获得与抗炭疽菌叶枯病基因 R gls位点紧密连锁的SNP 及InDel标记，对抗病基因进行精细定位，缩小抗性基因位点的区域范围，为基因克隆提供数据。同时利用筛选出的4 个与 R gls基因位点紧密连锁的分子标记对50 个苹果栽培品种和品系进行准确性鉴定，以验证分子标记的可靠性。选择青岛农业大学苹果试验基地 （山东省胶州市） 2009 年种植的，经过人工离体接种鉴定的 ‘金冠’ב富士’ 的F1 杂交群体207株实生树为材料用于验证 SNP、InDel标记及进行抗炭疽菌叶枯病基因的精细定位。所用群体与第三章SSR标记的开发与遗传定位为同一群体。选择该试验基地栽培的 50 个田间栽培品种和品系做为试材，经人工离体接种鉴定并提取DNA，用于分子标记准确性的验证。同第三章。用于引物设计的SNP 和 InDel位点来源于第四章中所筛选出的位于第15条染色体上3.9～4.9 Mb候选区域的18 个 SNP 位点和30 个InDel位点。从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus_x_domestica/下载位于SNP 和InDel位点上游150 bp和下游150 bp距离内的contig 序列用于引物设计。引物设计的主要参数为：产物大小60～150 bp；引物退火温度 （Tm） 在 55～65℃，且上、下游引物 Tm相差不大于 2℃；引物 GC （%） 含量为 45%～55%，引物大小在60～160 bp。引物序列 （附表 5-1）。所有引物由生工生物工程 （上海） 股份有限公司合成。PCR扩增和高通量熔解曲线分析在 LightCycler ? 480Ⅱ荧光定量PCR 仪 （Roche） 上进行。反应试剂来自 LightCycler ? 480 High Reso-lution Melting Master试剂盒。反应体系为15 μl，内含10 ng/μl的基因组 DNA 1.0 μl，1×Master Mix 7.5 μl，2.0 mmol/L MgCl2 1.5 μl，左右引物为 0.2 μmol/L各0.5 μl。PCR扩增程序为95℃预变性10min，然后按95℃变性10min，55℃退火15s，72℃延伸10s的程序进行45个循环。在PCR循环结束后，立即对扩增产物进行HRM检测，程序为：95℃1min，40℃1min，65℃1s，在65℃升温至95℃的过程中，以25次/℃的频率收集荧光信息，最后降温至40℃。高分辨率熔解曲线分析用LightCycler?480的Gene Scanning软件（1.5version）进行。用18对 SNP 及30对InDel引物在亲本和抗感基因池中筛选，将出现不同分型的引物在分离群体上进行验证，以确定该标记是否与目的基因连锁。将筛选的多态性标记在重组个体上的基因型表现与重组个体的抗病表型进行统一分析，对抗炭疽菌叶枯病基因 R gls位点进行精细定位，缩小抗性基因位点的范围。为后续的候选基因筛选及图位克隆提供准确的信息。将进一步缩小的R gls位点区域内的基因进行统计并进行同源比对和GO功能富集分析，以筛选该区段内可能与抗病相关的候选基因。SSR标记的PCR产物利用3.5%的琼脂糖凝胶电泳进行标记基因型鉴定。SNP 和InDel标记利用HRM技术进行基因分型鉴定。通过对设计的引物进行 BSA 筛选，获得了与 Rgls基因位点连锁的6个SNP 及5个 InDel标记，分别为 SNP3955、SNP4236、SNP4257、SNP4299、SNP4336、SNP4432 和InDel4199、InDel4227、InDel4254、InDel4305、InDel4334。在6个SNP 位点中有A/G、G/A、T/C和C/G四种变换形式，其中发生A/G转换的占50.0%，发生G/A转换，T/C转换，C/G颠换的各占16.7%（表5-1）。引物名称引物序列序列长度参考碱基突变碱基位置SNP3955R：CCCTTAAAAGCCATGGAAGAGF：GTTCTGCATAAAAACCTCGCA133AGchr15∶3，955，630-3，955，763SNP4236R：GCTTATCATAAAAAGCAAGACCACF：ATCATATAATTGTGTAATTTAGTAGAACA114AGchr15∶4，236，220-4，236，353SNP4257R：GGAGTCATAAGCCACAACGAGF：TCAGCTTTGAAGCATCCAATT145GAchr15∶4，257，141-4，257，286SNP4299R：GGTTATACATAGAGGCACTTAGAGCF：GCACAAAACTTAGATCAAAGATGAG135TCchr15∶4，299，179-4，299，314表5-1 SNP、InDel引物筛选引物名称引物序列序列长度参考碱基突变碱基位置SNP4336R：AGTTCGTTCTTTTCCGTTGCTF：GCGGTCCTGATTCAGGTACAG133CGchr15∶4，336，382-4，336，515SNP4432R：CGAGGAGCAAACGATAGTCAGF：ATTGGTCTCCGAATTAGAAGTCC137AGchr15∶4，432，529-4，432，666indel4199R：ATTGTGAAACCTTGATTGGGF：GAGATTATCCTTATTTTGTGGG156AAAGchr15∶4，198，916-4，199，072indel4227R：AGCGTTGCTATGCTTCTAATGF：AAGATGGAAATGGTATGTGAT81TTCchr15∶4，227，569-4，227，650indel4254R：ATAAAGTCACTTCTAGCACAAATAF：CGAAAAACGCTTTACTTAGG119GGCchr15∶4，254，896-4，255，015indel4305R：GTAAACTCATTAAATTATGCTTGF：TGCTTTACTCCGATTCTTC134CCCAchr15∶4，305，342-4，305，476indel4334R：ATACTATGAGGTGAAGGATTTAAF：GTATCTTCTACATTATCTTTCGTG115TTAchr15∶4，334，597-4，334，712表5-1 SNP、InDel引物筛选（续）-1将获得的11个标记在207 株 F1 群体上检验其与抗炭疽菌叶枯病基因的连锁情况，结果表明，这11 个标记的扩增子熔解曲线形状明显不同，可据此区分抗病型和感病型植株 （附图5-1）。将从全基因组重测序中筛选出并经群体验证的与 R gls位点紧密连锁6个SNP 及4个InDel标记 （InDel4305标记在染色体上的物理位置与遗传位置不符，未用于精细定位分析），加上1 个 SSR标记，共11个标记与重组个体基因型及表型进行分析。结果显示，InDel4227、SNP4236和InDel4254标记与基因Rgls位点共分离，没有重组个体。标记InDel4199有一个重组个体 S29 和标记 SNP4257 有两个重组个体R16和R31，这三个关键的重组个体将基因 Rgls位点定位于 InDel4199和SNP4257 两标记之间，物理距离由 500kb 缩小为 58kb （附图5-2）。按照基因位置信息从蔷薇科基因组网站 GDR下载基因组15 号染色体4.1～4.3 Mb内基因45个。通过perl脚本整理基因组GFF文件，BLAST同源比对NR数据库，选取最优比对结果。获得目的区段内的45个基因，其中5 个基因功能未知，2 个为转录因子，另外40 个基因均有明确的注释信息 （表5-2）。序号MDP号码同源基因1MDP0000180944生长素诱导蛋白15A2MDP0000205434非病原性诱导蛋白3MDP0000148158生长素诱导蛋白15A4MDP0000177664蛋白酶体beta亚基5MDP0000177665转录共抑制因子LEUNIG6MDP0000215349转录共抑制因子LEUNIG7MDP0000664885抗烟草花叶病毒蛋白N8MDP0000877582抗烟草花叶病毒蛋白N9MDP0000200748转录因子10MDP0000481972抗烟草花叶病毒蛋白N11MDP0000481973抗烟草花叶病毒蛋白N12MDP0000381897转录因子13MDP0000297052抗烟草花叶病毒蛋白N14MDP0000700563黄瓜素15MDP0000242744阳离子运输调控蛋白216MDP0000551192阳离子运输调控蛋白217MDP0000242745转录因子18MDP0000153007来自转座子TNT1-94的反转录病毒Pol多肽蛋白19MDP0000130036未知功能转录因子20MDP0000199184未知功能转录因子21MDP0000489432三角状五肽链重复包含蛋白22MDP0000318360类LRR丝氨酸/苏氨酸受体蛋白激酶23MDP0000247898类LRR丝氨酸/苏氨酸受体蛋白激酶表5-2 区段内基因同源比对结果序号MDP号码同源基因24MDP0000811774核糖核酸酶H2亚基B25MDP0000309446未知功能线粒体蛋白26MDP0000272143单尿苷绑定蛋白1B；与mRNA3’-UTR绑定27MDP0000871880脱水响应蛋白RD2228MDP0000272145酪蛋白激酶Idelta小体29MDP0000167752结构域包含蛋白3430MDP0000167753核糖核酸酶H2亚基B31MDP0000596125核细胞溶解酶TIA-1小体32MDP0000201427拓扑异构酶I33MDP0000149447脱水响应蛋白RD2234MDP0000596128酪蛋白激酶Ideta小体35MDP0000201428UDP-糖转运蛋白36MDP0000201429环核苷酸离子通道蛋白1437MDP0000255274环核苷酸离子通道蛋白1438MDP0000120033丝氨酸精氨酸富集剪接因子。39MDP00001695343-酮脂酰-CoA合酶640MDP0000203647细胞分裂素-O-葡糖基转移酶341MDP0000864010鼠李糖生物合成酶142MDP0000279973肌氨酸氧化酶43MDP0000178030未知蛋白44MDP0000289536肌氨酸氧化酶45MDP0000272940转录因子WRKY11表5-2 区段内基因同源比对结果（续）-1为了对基因功能做进一步分析，提取区段内基因的 GO （gene on-tology） 信息，采用基因功能GO分类网站WEBGO （ http：//wego.ge-nomics.org.cn/cgi-bin/wego/index.pl） 进行基因分类。结果显示，这40个基因在细胞组成上涉及到4 个 GO 分类，包括细胞、细胞组分、细胞器组成以及大分子复合体的组成；在分子功能方面，该区段内基因涉及到电子传递、转运蛋白、水解、绑定、催化以及物质传递6 个GO分类；在生物过程方面，该区段内基因涉及到免疫过程、生物调控过程、细胞过程、色素沉着过程、程序性死亡过程、代谢过程、响应刺激过程、定位以及定位确立9个生物过程 （附图5-3）。经离体接种鉴定，50 个作为分子标记准确性鉴定材料的品种（系） 中有33 个抗病品种 （系） 和17 个感病品种 （系）。从与抗炭疽菌叶枯病基因紧密连锁的分子标记中挑选出4 个有代表性意义的分子标记SSR标记S0405127，S0304673，SNP 标记 SNP4236，InDel标记InDel4254作为鉴定标记。其中SSR标记 S0405127 与基因 Rgls位点的遗传距离为 0.5cM，S0304673 的遗传距离为 0.9 cM （见第三章），标记SNP4236和 InDel4254与目的基因共分离。鉴定结果显示，SSR标记 S0405127，S0304673，SNP 标记 SNP4236，InDel 标记 In-Del4254 鉴定抗感品种 （系） 的准确率分别为 90.0%，94.0%，98.0%，96.0%。在基因型与表型鉴定结果中，不相符的个数分别为5个，3个，1个，2 个。这 4 个分子标记鉴定结果的准确率均达到90%以上，可以应用于田间栽培品种、品系、种质资源以及杂种后代幼苗对炭疽菌叶枯病抗性的鉴定 （表5-3）。序号品种/系表型S0405127S0304673SNP4236InDel42541海棠RRSRR2斗南RRRRR3福丽RRRRR4福艳RRRRR5红勋1号RRRRS6华帅RRRRR7鲁加1号RRRRR8鲁加2号SSSSS9鲁加4号RRRRR10鲁加6号RRRRR11旭RRRRR12早杂1号RRRRR13威赛克旭RRRRR14五月金RRRRR15早翠绿RRRRR表5-3 四个分子标记对苹果栽培品种和品系的抗病性的鉴定结果序号品种/系表型S0405127S0304673SNP4236InDel425416国光RRRRR17霞光RRRSS18烟富1RRRRR19福早红SSSSS20嘎拉SSSSS21金冠SSSSS22秦冠SSSSS23华硕RSRRR24瑞丹SSSSS25乙女RRRRR26王林RSRRR27青农红SSSRR28秦冠SSSSS29瑞红SSSSS30赛金RSRRR31红肉1号RRRRR32双阳红SSSSS33望山红RRRRR34新红星RRRRR35青冠RRRRR36弘前富士RRRRR37富士RRRRR387C-102RRRRR39N2SSSSS40PinavaRRRRR417C-35SRRSS4295-161RRRRR4395-231RRRRR4495-232SSSSS4595-32RRRRR4695-93RRRRR477C-104SSSSS487C-105SSSSS497C-106SRRSS507C-107SSSSS表5-3 四个分子标记对苹果栽培品种和品系的抗病性的鉴定结果（续）-1精细定位通常采用的方法是侧翼分子标记法，对于有参基因组植物来说，就是根据对目的基因的初步定位结果，选择位于目的基因两侧的分子标记之间的碱基，用于设计合适的分子标记。筛选出的与目的基因连锁的分子标记，通过鉴定更大的群体来确定发生交换的重组单株，最终找到与目的基因紧密连锁的分子标记，从而实现对目的基因的精细定位。精细定位是图位克隆策略中重要的一步，可以通过开发新的分子标记，整合原来已有的遗传图谱来进行图谱加密，以实现对目的基因的精细定位。本研究利用全基因组重测序技术开发出的 SNP 及 InDel标记，结合Rgls基因初步定位结果，选出在 Rgls基因两侧的 SSR 标记 S0304673和S0405127之间的SNP 和InDel标记，通过HRM曲线分析技术对18个SNP 位点和30 个 InDel位点进行了分析，筛选出6 个 SNP 及5 个InDel标记与Rgls基因位点紧密连锁。并选择其中的10 个标记用于Rgls基因位点的精细定位。标记InDel4227、SNP4236和 InDel4254表现出与R gls基因位点共分离。由于所用群体规模的限制，所以筛选出的SNP 及InDel标记仍无法对R gls基因位点进行真正意义上的精细定位。由于现有的金冠苹果基因组数据库中可能存在组装错误，所以在对定位区域内的基因进行分析中，扩大 R gls基因位点区域。对苹果第15条染色体4.1～4.3 Mb距离内的基因进行统计分析，结果表明在该区段存在40个有功能注释的基因，涉及到细胞组成方面，分子功能方面，生物过程方面共18个GO分类。在细胞组成层面上，参与细胞组成的基因，一般是由主效基因或寡基因控制的质量性状，是个体保持组成性抗性的基础，影响着品种的垂直抗性。在分子功能层面上，植物个体抗性与电子传递、转运蛋白、水解、绑定、催化以及物质传递等生物过程密切相关。例如，植物受到病原菌侵染后，体内会产生并积累一些次生代谢物质，如植保素、酚类、木质素、菇类等化合物，对病原菌产生抵抗作用 （Pirie and Mullins，1976）。植物次生代谢途径尤其是苯丙烷类代谢途径是与植物抗病性密切相关，许多抗菌物质 （包括酚类、类黄酮、绿原酸、酮类等） 的生物合成都是通过这条途径完成的 （RalPhL，1992；Cole R.A，1985）。在生物过程层面上，程序性死亡过程，响应刺激过程以及免疫过程与抗病机制密切相关。细胞程序性死亡 （programmed cell death，PCD） 是细胞死亡的两种基本类型之一，是细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后主动发生的由基因调控的死亡过程。植物与病原菌互作过程中发生的过敏性反应 （hypersensitive reaction，HR） 是PCD 的重要表现形式之一，是植物抵抗病原菌入侵的早期重要抗性反应，对植物抗病性有着重要意义。在该区域内存在着4个编码WRKY转录因子的基因MDP0000272940、MDP0000242745、 MDP0000381897、 MDP0000200748 以及5 个 TIR-NB-LRR 家族基因 MDP000066488、 MDP0000877582、 MDP0000481972、MDP0000481973、 MDP0000297052。许多研究结果表明，当植物受到病原菌入侵或植食性昆虫取食植物后，植物体内的一些WRKY 转录因子的表达水平会随之发生改变 （Hui et al.，3003；Zhao et al.，2007）。Huang等 （2002） 研究了一个茄科植物的 WRKY 蛋白 STHP-64，发现其在低温胁迫下表达增强，Rizhsky 等 （2004） 发现拟南芥的 At-WRKY25蛋白与氧化胁迫下胞液抗坏血酸过氧化物酶的表达有关。Li等 （2006） 通过对WRKY70蛋白过表达的转基因植株和变异植株的研究，证明过表达拟南芥 WRKY70 蛋白的转基因植株能提高水杨酸（SA） 介导的抗病性，但降低茉莉酸 （JA） 介导的抗病性。2006 年Ryu等对水稻WRKY 转录因子在不同生物胁迫下的表达量变化进行了研究。结果显示在45 个水稻 WRKY 转录因子中有15 个 WRKY 转录因子可以被稻瘟病病菌 （ Magnaporthe grisea） 诱导表达，其中12个可以同时被水稻白叶枯菌 （ Xanthomonas oryzae Dowson） 诱导表达。在对防御反应相关的信号分子对 WRKY 转录因子的影响的研究中发现OsWRKY10、OsWRKY82和OsWRKY85可以在经过茉莉酸诱导的叶片中表达，OsWRKY45 和 OsWRKY62 可以在经过水杨酸处理的叶片中诱导表达，OsWRKY30 和 OsWRKY82 可以同时被水杨酸和茉莉酸诱导表达，这说明WRKY 转录因子参与了植物的诱导防御反应。抗性基因 （R gene） 编码的蛋白大部分是 NB-LRR 蛋白，不同类别的 NB-LRR蛋白可以直接或间接的识别不同来源的病原菌效应子，从而激发相似的防御反应。这9个基因是人们重点关注的基因。进一步的基因功能研究及苹果与炭疽叶枯菌的分子互作机制研究将围绕着SNP 定位的5个候选基因及该区段内的相关基因展开。随着分子生物学技术的快速发展，特别是以DNA多态性为基础的分子标记技术在苹果育种中的应用，大大提高了目标性状早期选择的效率，缩短了育种周期，加快了新品种选育的速率。Tartarini 等（2000） 报道了利用获得的与抗苹果黑星病的显性单基因Vf紧密连锁的RAP D标记测验了携带该基因个体，淘汰错误率为3%，保留错选率仅为 0.02%。Cheng等 （1996） 利用与控制果色的Thd01基因紧密连锁的RAP D标记，在苹果实生苗发育早期进行了标记筛选，实现了对果色这一特定性状的早期选择，大大减少了人力物力的浪费。苹果柱型性状有利于形成集约高效的现代苹果栽培模式，能够降低生产成本，提高产量。Moriya等 （2012） 所得到的 3个与控制苹果柱型性状Co基因共分离的标记 Mdo.chlO.12、Mdo.chlO.13 和 Mdo.chlO.14，对于柱型苹果杂交育种中对群体材料的早期选择、基因的克隆及转化有着重要意义。王彩虹 （Wang caihong，et al.，2011） 通过SCARs标记和SSR标记对控制梨矮生性状基因 PcDw 进行了基因定位，对梨矮化育种有着重要的意义。随着不同果树基因组测序的完成，在果树方面陆续开展了相关 SNP 芯片研发和利用。Chagne等 （2012） 对27 个苹果品种进行低深度重测序检测并确认全基因组范围的 SNP，开发了苹果 8 K 的 SNP 芯片，可用于苹果幼苗大规模检测，这将会促进标记—位点—性状之间关联性的发现，进一步阐明质量性状的遗传结构特性，推动遗传变异研究。本实验利用四个紧密连锁的分子标记 S0405127、S0304673、SNP4236和 InDel4254对50个田间栽培品种和青岛农业大学选育出的优系进行了抗炭疽菌叶枯病的基因型鉴定，并结合其抗病的表型鉴定对四个标记的准确性进行了分析。结果表明四个标记的准确率分别为90.0%，94.0%，98.0%和96.0%，可以有效的应用于分子标记辅助育种。在第三章的研究结果中，SSR标记S0405127 与基因Rgls位点的遗传距离为0.5cM，而S0304673 的遗传距离为0.9 cM，理论上标记S0405127与抗性基因位点连锁的更紧密，准确性应该更高，而在品种群体验证中，标记 S0304673 鉴定抗感品种 （系） 的准确率为94%，而标记S0405127的准确率为90%。在利用重组个体对基因Rgls位点进行精细定位中，SNP4236 和 InDel4254 标记与目的基因共分离，在品种的群体验证中应该显示100%的准确性，但实际上还是有1～2个表型鉴定与基因型鉴定不符的个体。这种现象存在的原因一是可能由于用于鉴定的品种或品系数量有限，导致了结果的偏离。二是标记S0405127的条带显示为有和无的差异，在电泳时有可能存在读带误差。三是在对做图群体进行表型鉴定中，可能存在表型鉴定误差，导致遗传距离计算的偏差。四是在精细定位中，需要应用更大的群体筛选重组的单株以完成对目标基因的精细定位。而由于实验材料的限制，所用群体规模不是很大，所以可能导致定位结果的误差。这些问题尽管在实验中是不可以避免的，但是在以后进行更精细的遗传定位研究中，以更大规模的群体和更严谨的实验操作来进一步验证，可以减少这些误差的产生，提高遗传作图的精度。

常见的果实贮藏方式，按贮藏原理大体可分为低温贮藏和气调贮藏两大类，其中低温贮藏包括利用自然冷源贮藏的沟藏、窖藏、通风库储运和人工降温的冷库贮藏等；气调贮藏包括气调冷库贮藏、塑料薄膜封闭贮藏等。按储运设施不同可分为简易贮藏、通风库贮藏、冷库贮藏、气调贮藏和其他贮藏方式。(1)简易贮藏。简易贮藏是为调节果品供应期所采用的一类较小规模的贮藏方式，它不能人为地控制储温，而是根据外界温度的变化来调节或维持一定的贮藏温度。这类传统的贮藏方式历史悠久，大多来自民间经验的不断积累和总结。其贮藏场所形式多样，其中以堆藏、沟藏、窖藏颇具代表性。此类方式一般不需要特殊的建筑材料和设备，结构简单，具有利用当地气候条件、因地制宜的特点。由于其贮藏方式主要依靠自然温度的调节作用来维持一定的贮藏环境，故在使用上受到一定程度的限制。尽管如此，由于其简便易行，仍然是目前我国农村普遍采用的主要贮藏方式。①沟(埋)藏。沟藏是将水果堆放在田间挖的沟或坑内，达到一定的厚度时，用土覆盖。沟藏保温性、保湿性较好。在农村，板栗、核桃、山楂等多用此法保藏。苹果等水果也有采用此法贮藏的。由于沟藏受气温的影响很大，初期高温不易控制，贮藏期不便检查，故在使用上受到一定的限制。此法一般适宜于在较温暖地区的晚秋、冬季及早春贮藏，在寒冷地区只做秋冬时的短期贮藏，而在气温较高的地区则不宜使用。②窖藏。窖藏方法很多，有棚窖、窑洞、井窖等。多根据当地自然地理条件的特点建造。窖藏既能利用变化缓慢而稳定的土温，又能利用简单的通风设备来调节窖内的温度和湿度。果品可以随时入窖、出窖，也可较方便、及时地检查贮藏情况。因此，此法在我国南方北方都有较广泛的应用。③棚窖。棚窖是临时性贮藏所，是在地面挖一长方形窖身，窖顶用木料、秸秆、土壤等做棚盖，根据入土深浅可分为半地下式和地下式两类。较温暖地区或地下水位较高处多用半地下式，一般入土深1～1.5m,地上堆土墙高1～1.5m。较寒冷地区多用地下式，即窖身全部在地下，入土深2.5～3m,仅窖顶露出地面。④井窖和窑窖。在地下水位低、土质黏重的地区可修建井窖，井窖的窖身深入地下3～4m,再从井窖向四周挖数个窑洞，窑洞顶呈拱形，井筒口围土做盖，四周挖排水沟，有的在井盖处设通风口。窑窖是在土质坚实的山坡或山丘挖窑洞，窖口设门或挂帘。窖藏在我国农村运用较广。但除棚窖以外的其他窖型一般通风较差，尤其春季土温回升到一定程度时，窖温不能靠通风来降低。(2)简易贮藏的管理。由于简易储运受外界的影响很大，因此，在管理上应根据各种储运形式的特点和性能，结合各地气候条件，土壤条件，果品种类、品种，储期长短，数量多少，质量好坏等予以适当的管理。①场地选择。简易贮藏的地点应选在地势平坦、干燥、土质较黏重、地下水位低、排水良好、交通便利处。②沟、窖的方向。在寒冷地区，可采用南北朝向，以减少冬天的迎风面，使两侧受直射的阳光一致，内部温度较均匀。在冬季不太寒冷的地区，则可采用东西朝向，以增大迎北风面，提高初期的降温效果。在设置阴障或风障时，一般选择东西朝向。③产品的挑选与入储。简易贮藏的果品，一经入储，多数不易进行检查、挑选，如果与有病、伤、烂的混在一起，则会相互污染加重损失。所以，入储前必须严格挑选，凡不适合贮藏的病、虫、伤产品都应及时挑出，不得入储。不同的品种，应分门别类，分开储运，而成熟度不一致的，最好也能分开储运。适期入储在简易储运中十分重要。入储过早，由于较高的气温和地温，果品温度难以降下来，易腐烂变质；入储过晚，则果品在田间易受冻害。具体入储时间，应视各地的具体情况，尤其是应根据气候及各类果品的生物学特性来决定。④温度管理。温度管理的原则是在不受冻害的条件下，迅速达到低温状态，并在整个储运期使这种状态得以稳定地保持。在生产上，这一目的是通过有规律的分层覆盖与通风措施来实现的。通风库是窖藏的发展，主要是在有良好隔热保温性的库房内，设置良好的通风系统，利用昼夜温差，通过导气设备，将库外低温空气导入库内，再将库内的热空气、乙烯等不良气体排出库外，从而保持适宜的储运环境。通风储运库有地下式、半地下式、地上式三种类型。在冬季较温暖地区，则采用半地下式；在温暖地区，采用地下式；在地下水位较高的低洼地区，可采用地上式通风储运库。(1)通风库的建筑形式①小型通风贮藏库。这种库通常以一栋库房为建筑单位，建造时，在库墙的上、下部及库顶分别设置通风设备，使空气对流加快，这时储运效果较好。②二层楼式通风贮藏库。在小型通风库上再建一层库房成二层楼式，可充分利用空间，增加使用面积，又可使下层库顶避免日照，提高保温隔热性能。上层库房一般用来堆放包装容器，或作为临时储运所，果品在下层库房贮藏。③窑洞式通风贮藏库。这种库房一般建成地下式或半地下式。(2)通风库的管理。通风库的一般温、湿度管理与土窑洞类似，库房的消毒可用1%～2%福尔马林或漂白粉喷布，或按每立方米库体5～10g的用量燃烧硫黄熏蒸。也可用臭氧(含量为40mg/m3)，兼有消毒和除异味作用。进行消毒时可将容器、架杆等一并放在库内，密闭24～48h,再通风排尽残药。库墙、库顶等用石灰浆加1%～2%硫酸铜刷白。用5ml/L的仲丁胺熏蒸24～48h后通风12h，也有良好的灭菌效果。非一次性的菜筐、果箱等，应及时洗净，再用漂白粉或2%～5%硫酸铜浸渍，晒干备用。冷库贮藏是指机械制冷贮藏。因此，冷库贮藏需要永久性库房、机械制冷装置和绝缘隔热设备。有这些配套设施，用机械设备制冷后，可实现对果实的低温贮藏。根据所储果实的种类和品种的不同，进行温度调控，从而达到长期贮藏的目的。气调贮藏就是把果实放在一个相对密闭的环境中，同时调节环境中氧气、二氧化碳和氮气等气体成分的比例，并使这一比例稳定在一定范围内的贮藏方法。主要有以下几种形式。(1)气调冷藏库。除具有冷藏库的功能外，还有能降氧的氮气发生器、二氧化碳脱除器等设备，并具有较高的气密性，以维持气调库所需的气体浓度。气调结合冷藏，能抑制果品的呼吸强度，延缓生理性和传染性病害，延长储运保鲜期。同时，还能克服常规冷藏难以克服的许多问题。因此，它被认为是当前国内外现代化的贮藏方法。(2)塑料封闭气调法。塑料封闭气调法是在库内地面挖深、宽各10cm左右的小沟，扫净地面后，将塑料薄膜帐的帐底平铺地面，再将果筐堆成长方形果垛，将大帐扣在果垛上，大帐的下面与帐底四边用土埋入小沟内，并覆土、压实，以防漏气。另一种方法是将塑料薄膜制成袋，将果实装入后扎紧袋口即可。塑料袋可直接堆放于冷库或通风库内，也可将袋放入筐(箱)内，再堆码成垛贮藏。还可将果筐(箱)装入塑料袋内，再扎紧袋口，放入库内贮藏。目前，果品加工制品的种类主要有:果品干制品、果品罐藏制品、蔬菜腌制品、果品糖制品、果品汁制品、果品速冻制品、果酒和果酱酿造等。果品原料的种类即原料的特性决定着加工制品的种类。不同的原料加工成不同的制品，不同的制品需要不同的原料(表23-1)。加工制品种类加工原料特性果品原料种类干制品干物质含量较高，水分含量较低，可食部分多，粗纤维少，风味及色泽好的种类和品种枣、柿子、山楂、龙眼、杏、胡萝卜、马铃薯、辣椒、南瓜、洋葱、姜及大部分的食用菌等罐藏制品、糖制制品、冷冻制品肉厚、可食部分大、耐煮性好、质地紧密、糖酸比适当，色香味好的种类和品种一般大多数的果品均可进行此类加工制品的加工果酱类含有丰富的果胶物质、较高的有机酸含量、风味浓、香气足水果中的山楂、杏、草莓、苹果等，蔬菜类的番茄等果品汁制品、果酒制品汁液丰富，取汁容易，可溶性固形物高，酸度适宜、风味芳香独特，色泽良好及果胶含量少的种类和品种葡萄、柑橘、苹果、梨、菠萝、番茄、黄瓜、芹菜、大蒜、胡萝卜及山楂等表23-1 原料选用加工制品种类加工原料特性果品原料种类腌制品一般应以水分含量低、干物质较多、内质厚、风味独特、粗纤维少为好原料的要求不太严格，优良的腌制原料有芥菜类、根菜类、白菜类、榨菜、黄瓜、茄子、蒜、姜等表23-1 原料选用（续）-1通常将水果的成熟度分为3个阶段，即可采成熟度、加工成熟度和生理成熟度。可采成熟度是指果实充分膨大长成，但风味还未达到顶点。这时采收的果实，适合于贮运，经后熟方可达到加工的要求。加工成熟度是指果实已具备该品种应有的加工特征，又可分为适当成熟与充分成熟。根据加工类别不同而要求成熟度也不同。如制作果汁、果酒，要求原料充分成熟，色泽好，香味浓，酸低糖高，榨汁容易，吨耗率低。若用生的果品，则制品色淡，味酸，不易榨汁，澄清较困难。生理成熟度是指果实质地变软，风味变淡，营养价值降低，一般称这个阶段为过熟。这种果实除了可做果汁和果酱外，一般不适宜加工其他产品。另外，蔬菜收获期也要适时，收获太晚，蔬菜组织疏松，粗纤维增多，水分含量高，可溶性固形物含量下降。收获过早，组织太细嫩，营养物质积累不多，且影响产量。加工原料越新鲜，加工的品质越好，损耗率也越低。因此，从原料采收到加工时间应尽量缩短，这就是加工厂要建在原料基地附近的原因。果品蔬菜多属于易腐农产品，某些原料如葡萄、草莓及番茄等，不耐重压，易破裂，极易被微生物侵染，给以后的消毒杀菌带来困难。这些原料在采收、运输过程中，极易造成机械损伤，若及时进行加工，尚能保证成品的品质，否则这些原料严重腐烂，导致失去加工价值或大量损耗。如蘑菇、芦笋要在采后2～6h内加工；青刀豆、蒜薹不得超过1～2d；大蒜、生姜采后3～5d；甜玉米采后30h，就会迅速老化，含糖量下降近50%，淀粉含量增加，水分也大大下降，影响加工品的质量。而水果如桃采后若不迅速加工，果肉会迅速变软，因此要求在采后1d内进行加工;葡萄、杏、草莓及樱桃等必须在12h内进行加工;柑橘、梨、苹果应在3～7d内进行加工。总之，果品蔬菜要求从采收到加工的时间尽量短，如果必须放置或进行远途运输，则应采用一系列的贮藏措施。以各种新鲜果品蔬菜为原料，制成各种各样的加工制品，虽然不同的加工制品有不同的制作工艺，但在各类果品加工制品中对原料的选剔分级、洗涤、去皮、去心、破碎等处理方法，均有共同之处，可统称为常规处理法。另外，根据加工原料的特性不同和制品的特殊要求不同在制作工艺中通常还采用热烫处理、硬化处理、护色处理等方法。原料进厂后首先要对原料进行分类分级，即要剔除霉烂及病虫害果实，对残、次及机械损伤类原料要分别加工利用。然后再按形态的大小、成熟度及色泽等标准进行分级。原料的合理分级，不仅便于操作，提高生产效率，更为重要的是可以保证提高产品质量，得到均匀一致的产品。目的是洗去果品蔬菜表面附着的灰尘、泥沙和大量的微生物及部分残留的化学农药，保证产品清洁卫生。洗涤用水，除制果脯和腌渍类原料可用硬水外，其他加工原料最好使用经软化后的水。水温一般是常温，有时为增加洗涤效果，可用温热水，但温热水不适宜柔软多汁、成熟度高的原料。原料如有残留农药，还须用化学药剂洗涤。一般常用的化学药剂有0.5%～1.5%盐酸溶液，0.1%高锰酸钾或600mg/kg漂白粉液等。在常温下浸泡数分钟，再用清水洗去化学药剂。洗涤根据各种原料被污染程度、耐压耐摩擦的程度，以及表面形状的不同，采用不同的洗涤方法，有人工洗涤方法和机械洗涤方法。果品去皮是一个细致的工艺操作，其常用方法主要是手工法、半机械法，另外还有碱液法、热力法和真空去皮法、酶制剂去皮法、冷冻去皮法等。(1)手工去皮。手工去皮法应用较广泛，操作简单、细致、彻底，但效率低。(2)半机械去皮。对有一定强度并且外观呈圆形状的原料，大批量的生产常用旋皮机，将待去皮的原料插在能旋转的插轴上，靠近原料的旁边安上一把刀口弯曲的刀，刀柄由弹簧(或手)控制，使刀口紧贴在果体面上，插轴旋转时，刀就从旋转的果体表面上将皮削去。旋皮机的转动有手摇的、足踩的和电动的。去皮效率虽较快，但去皮不完全，还需加以修整，去皮损失率也较高。(3)碱液去皮。将果品在一定浓度和温度的强碱液中处理适当的时间，果皮即被腐蚀，取出后立即用清水冲洗或搓擦，果皮即脱落，并洗去碱液。此法适用于桃、李、杏、梨、苹果等去皮及橘瓣脱囊衣。常用的碱液为氢氧化钠或氢氧化钾溶液，亦可用碳酸钠加石灰的办法制成碱液。(4)热力去皮。果品在高温短时间的作用下，使其表面迅速受热，果皮膨胀破裂,果皮和果肉之间的果胶失去胶凝性，果皮与果肉分开。此法用于桃、杏、枇杷、番茄等薄皮果实的去皮。热去皮要求果实的成熟度要高。(5)冷冻去皮。将果品与冷冻装置的冷冻表面接触片刻，使其外皮冻结于冷冻装置上，当果品离开时，外皮即被剥离。冷冻装置的温度在-28～-23℃,这种方法可用于桃、杏、番茄等去皮。体积较大的果品原料在罐藏、干制、果脯、蜜饯加工及蔬菜腌制时，为加工成适当的形状，需要进行切分，切分的形状则根据原料自身的形态和产品的标准而定。核果类加工前需去核，仁果类需去心。枣、梅等加工蜜饯时为了煮透需划缝、刺孔。罐藏加工时为了保持良好的形状外观，需对果块在装罐前进行修整。热烫处理通常又称为烫漂。除供蔬菜腌制的原料外，供作糖制、干制、罐藏、制汁及冻藏等原料，大多需要进行烫漂处理。所谓烫漂就是已切分的新鲜原料在温度较高的热水、沸水或常压蒸汽中加热处理。一般所用的水温为沸点或接近沸点，个别组织很嫩的蔬菜如菠菜，为了保持其绿色可采用76℃的温度。烫漂时间随原料的种类而异，一般为2～10min。烫漂后必须立即用冷水浸漂，以防止余热持续作用。所谓硬化处理是指一些果品制品，要求具有一定的形态和硬度，而原料本身又较为柔软、难以成形、不耐热处理等，为了增加制品的硬度，常将原料放入石灰、氯化钙等稀溶液中浸泡。因为钙、镁等金属离子，可与原料细胞中的果胶物质生成不溶性的果胶盐类，从而提高制品的硬度和脆性。硬化剂的用量要适当，过少起不到硬化作用；过多则会使产品粗糙，质量低劣。常用的硬化剂有石灰水和氯化钙。一般进行石灰水处理时，其浓度为1%～2%，浸泡1～24h;用氯化钙处理时，其浓度为0.1%～0.5%。经过硬化处理的果品，必须用清水漂洗6～12h。果品原料去皮和切分之后，放置于空气中，很快会变成褐色，这一现象称之为褐变。发生褐变不仅影响外观，也破坏了产品的风味和营养价值，而且是加工品败坏不能食用的标志。一般护色措施均从排除氧气和抑制酶活性两方面着手，主要的处理方法如下。(1)热烫。将去皮切分的原料，迅速用沸水或蒸汽热烫3～5min，从而达到抑制酶的活性，即可防止酶褐变。热烫后取出迅速冷却，热处理的最大缺点是可溶性物质的损失，一般损失10%～30%，蒸汽处理损失较小。(2)食盐水。食盐溶于水中后，能减少水中的溶解氧，从而可抑制氧化酶系统的活性，食盐溶液具有高的渗透压也可使细胞脱水失活。食盐溶液浓度愈高，抑制效果愈好。工序间的短期护色，一般采用1%～2%的食盐溶液即可，浓度过高，会增加脱盐的困难。为了增进护色效果，还可以在其中加入0.1%柠檬酸。食盐溶液护色常在制作水果罐头和果脯中使用。同理，在制作果脯、蜜饯时，为了提高耐煮性，也可用氯化钙溶液浸泡，因为氯化钙既有护色作用，又能增进果肉硬度。(3)酸性溶液。酸性溶液既可降低pH值、降低多酚氧化酶活性，又使氧气的溶解度较小而兼有抗氧化作用，从而抑制氧化酶的活性。而且，大部分有机酸还是果品的天然成分，所以优点甚多。常用的酸有柠檬酸、苹果酸或抗坏血酸等。生产上多采用柠檬酸，浓度在0.5%～1%。(4)亚硫酸溶液。二氧化硫能与有机过氧化物中的氧化合，使其不生成过氧化氢，从而使过氧化酶失去氧化作用。浸泡溶液中二氧化硫含量为1×10-6mg/kg时，能降低褐变率20%，二氧化硫含量为10×10-6mg/kg时，完全不变色。此法对于各种加工原料工序间的护色都适用。(5)抽真空处理。某些果品如苹果、番茄等内部组织较疏松，含空气较多(表23-2)，对加工特别是罐藏或制作果脯不利，需进行抽真空处理，即将原料在一定的介质里置于真空状态下，使内部空气释放出来，代之以糖水或无机盐水等介质的渗入。从而抑制氧化酶的活性，防止酶褐变。常用的介质有糖水、食盐、柠檬酸等。种类含量（%，以体积计）种类含量（%，以体积计）桃3～4梨5～7番茄1.3～4.1苹果12～29杏6～8樱桃0.5～1.9葡萄0.1～0.6草莓10～15表23-2 几种果品组织中的空气含量

三月红、白蜡、冰糖荔、水东黑叶等。禾荔、黑叶、钦州红荔、糯米荔大造等。灵山香荔、桂味、糯米糍等。荔枝栽培适宜在年平均温度18～20℃的地区，1月平均温度10～17℃,绝对温度-2℃以上为宜。年雨量在1200mm以上，花期、小果期少雨。荔枝生长旺盛期和采果前，应无风害。对山地红壤、黄壤、平地沙壤、黏土、冲积土适应性较强。一般采用空中压条和嫁接。嫁接一般选用当地酸荔枝作糯米糍、妃子笑、大红袍的砧木。在4—5月进行嫁接。嫁接速度是影响嫁接成活的主要因素。一般选择土层深厚、疏松肥沃的山坳谷地及山地建园。一般选择春植(2—5月)和秋植(9—10月)。以选择在春季进行为佳，因为此时气温逐渐回升，雨水充足，日照又不太强，有利于苗木发根萌芽，成活率较高。其次是秋植，此时雨水少，气候干燥，必须注意淋水。定植规格可依据园地环境条件、栽培管理水平确定，一般株行距(4～5)m×(5～6)m；每667m2栽22～55株；配置授粉树。在定植前2个月左右挖好深宽各0.8～1m的定植穴，穴底填入绿肥或草皮20kg、厩肥30kg、过磷酸钙1kg及石灰0.5kg混合堆沤，使之在定植前腐解沉实。(1)保持土壤湿润，在定植1个月内，晴旱天气要经常淋水，一般3～7d淋一次。雨多时要注意排除树盘积水，特别要注意因穴土下沉而造成的植穴内积水。(2)在风大的地方宜用竹子或树枝支撑果苗，以防风吹摇动伤根而影响成活。(3)植后30d，可检查植株成活情况，未成活的及时补种。(1)中耕除草。每年中耕除草2～3次。第一次在采果前或采果后结合施肥进行，可促发新梢、加速树势恢复，宜浅耕10～15cm。第二次在秋梢老熟后进行，深可15～20cm，以切断部分吸收根、减少根群吸水能力、利于抑制冬梢萌发。第三次在开花前约1个月进行，宜浅，深约10cm。可疏松土层、促进根系的生长和吸收。(2)培土客土。在秋、冬季结合清园进行。于树冠下土面培泥，厚6～10cm。切忌堆积过厚，以防生根和土层积水缺氧伤根。(3)深翻改土。于树冠外围土层挖沟，深0～70cm，分层压入杂草、绿肥、垃圾，以改善土壤理化性状，促进根群生长。水分是荔枝生长发育过程中必不可少的，在抽梢的时候，施肥往往要结合灌溉，以促进根系的吸收，但在控梢的季节，不仅要控制水分的供应，而且还要通过翻土来达到控制水的目的，因为控制水分的供应，可以使枝梢生长缓慢或停止，以利于花芽分化。在1—2月，花芽形态分化期，若遇干旱，要灌水促花芽抽出。(1)修剪。采果时要一果两剪，先把果穗连同结果枝基部、甚至结果母枝下面的枝梢基部一起剪下，然后才剪下果穗。果穗下面的枝梢回缩多长，取决于结果母枝枝梢生长的好坏，生长好的回缩短些，生长差的回缩长些。采果施肥后立即进行修剪，剪去病虫枝、阴蔽枝、交叉枝、重叠枝、回缩衰退枝。修剪后，荔枝留枝梢20～25条为宜。(2)清园。修剪后在树冠滴水线下挖两个长1m，深、宽各30～40cm的坑，把修剪下来的枝叶和园内杂草埋入坑底，然后撒石灰0.5kg，上层用猪粪5～10kg、生物有机肥3～5kg、钙镁磷肥0.5～1kg拌表土将坑填至高出地面10～15cm，最后在地面撒石灰粉消毒。(3)杀虫。全园全面喷一次农药防治病虫害。可用10%吡虫啉3000倍液加64%杀毒矾600倍液等。(4)衰弱树更新。视衰退程度进行回缩修剪。衰退程度轻的剪除衰弱枝，平施肥料；衰退程度重的要回缩到较大的侧枝甚至主枝，同时进行根系更新，重施有机肥。(1)采果前肥。在采果前7～10d施下，作用是采果后加快恢复树势、促发秋梢、培养健壮结果母枝、奠定翌年丰产基础，此期以氮为主，磷、钾配合，氮施用量占全年施肥量45%～55%,磷、钾占30%～40%。应重视有机肥的使用，在秋季采果后和末春初施入。荔枝以土壤施肥为主，并根据各物候期的实际需要，辅以叶面喷肥。如用0.3%～0.4%尿素，0.3%～0.4%磷酸二氢钾，0.03%～0.05%复合型核苷酸，0.05%～0.1%硼酸，0.02%～0.05%硼砂，0.3%～0.5%硫酸镁。(2)适时放梢。健壮的秋梢是荔枝龙眼优良的结果母枝。通过科学的肥水管理，合理留果，修剪疏芽等综合措施，培养健壮的结果母枝。严格掌握放梢时间，使结果母枝能适时抽出，适时老熟，正常进入花芽分化。要根据不同品种、树龄、树势、挂果量、管理水平和气候特点，灵活安排采后留梢时间及次数。一般适龄树留梢二次，以秋梢作结果母枝；壮龄树留一次秋梢。在广西壮族自治区较适宜的荔枝结果母枝抽生时间是：早熟品种黑叶、香荔、糯米荔、桂味在9月中下旬；妃子笑和迟熟品种禾荔在9月下旬至10月上旬。常用的控梢促花技术除上述培养适时健壮的秋梢外还可采取断根、环割、环剥、摘除冬梢、喷施生长抑制剂等方法。(1)断根。在末次梢充分老熟后，结合施基肥，在树冠滴水线外挖浅沟压绿或施入有机肥，如果树势较旺，估计可能抽出冬梢的，可在整个树盘翻土锄断细根。(2)环割。多用于青壮年树，一般在11—12月进行，最好在直径6～10cm的大枝上环割，不要割树干，同时要注意掌握环割的深度，以刚达到木质部为准。(3)螺旋形环剥。对壮旺幼年结果树，可以使用螺旋形环剥。在末次梢老熟时可使用剥口宽0.2～0.3cm的环剥刀环剥1～1.5圈，深度以刚达到木质部为准，环剥部位从离地面25cm以上8～10cm粗的主干、主枝或分枝。(4)使用化学调控技术。使用化学药剂进行控梢促花，目前生产上采用的“荔枝专用促花剂”和“花果灵”等荔枝生长调节剂，经过多年多地区大面积使用，对提高荔枝花的质量，缩短花穗，提高雌花雄花的比例，提高坐果率和产量，均取得较显著效果。(1)施壮花肥。壮花肥一般在花穗抽出见到花蕾时施用(又称见花施肥)。施肥量视成花量及树势而定，一般每结果50kg的树面，施复合肥1kg加尿素0.2～0.5kg，或施尿素、过磷酸钙、氯化钾各0.5kg。另外，在开花前20d左右叶面喷施0.3%的磷酸二氢钾，或绿旺1号(高钾)1000倍液加0.05%的硼砂，可促进花穗发育。(2)合理控穗。生产实践表明，一般抽生早的花穗以及过长的花穗花质差，雌花比例低，坐果率低，特别是花穗大的品种(如妃子笑)，要合理调节和控制花量，以提高坐果率。1）人工短截花穗。短截花穗可减少花量，提高花质。花穗短截的轻重要视品种而定，对花穗再生能力强、易抽二次花穗的品种如妃子笑、三月红可重些。2）用于控穗的药物有荔枝丰产素、乙烯利等控制花穗。(3)防治病虫害。为害荔枝花穗的主要病虫害有荔枝椿象、荔枝瘿螨、尺蠖、蚜虫及荔枝霜疫霉病。可用克螨特、吡虫啉、灭百可、蚜力克和瑞毒霉锰锌、杀毒矾、大生M-45、甲霜灵等药物防治。(1)放蜂授粉。一般要求每3～5亩放一箱蜂。(2)人工辅助授粉。常用的人工辅助授粉的方法是：用湿毛巾在刚开放的雄花花穗上来回轻轻摇动，收集花粉，然后将毛巾置于清水中，反复多次，使花粉悬浮液呈淡黄色的混浊液，即喷洒到雌花上。人工授粉注意事项：一是应选择气温在16℃以上的晴天进行；二是配制的花粉液放置时间不能超过20min，否则花粉失去活力，影响授粉效果。(1)施壮果肥。花谢花后10～15d施壮果肥，作用是及时补充开花时的消耗、保证果实生长发育所需养分、减少第二次生理落果、促进果实增大、并避免树体养分的过度消耗、为秋梢萌发打下良好基础，此次以钾为主，氮磷配合，钾占全年施肥量40%～50%,氮、磷占30%～40%。要注意根外追肥。(2)环割。对生长壮旺的树进行，雌花谢花后10～15d开始割，在4～6cm粗的大枝上进行，割一圈，深至木质部。弱树不割。(3)应用植物生长调节剂。在果实绿豆大时用20mg/L赤霉素保果。(4)加强水分管理。干旱时要灌水，高温、日照强时，要对树冠喷水，雨多积水时要及时排水。(5)及时防治病虫害。荔枝果实发育期主要病害有荔枝霜疫霉病、荔枝煤烟病、荔枝炭疽病，主要虫害有荔枝蒂蛀虫、荔枝椿象、荔枝小灰蝶等。

猕猴桃果实细嫩多汁，清香鲜美，酸甜宜人，营养极为丰富。它的维生素C含量高达100～420mg/100g，比柑橘、苹果等水果高几倍甚至几十倍，同时还含大量的糖、蛋白质、氨基酸等多种有机物和人体必需的多种矿物质。(1)根。猕猴桃的根为肉质根，外皮层较厚，老根表层龟裂状剥落。主根不发达，侧根和须根多而密集，须根状根系。根系在土壤中的垂直分布较浅，而水平分布范围广，成年树根系垂直分布在40～80cm的土层中，一般根系的分布范围大约为树冠冠幅的3倍，猕猴桃的根系扩展面大，吸收水分和营养的能力强，植株生长旺盛。(2)枝。猕猴桃的枝属蔓性，在生长的前期，蔓具有直立性，先端并不攀援；在生长的后期，其顶端具有逆时针旋转的缠绕性，能自动缠绕在他物或自身上。枝蔓中心有髓，髓部大，圆形；木质部组织疏松，导管大而多。新梢以黄绿色或褐色为主，密生绒毛，老枝灰褐色，无毛。当年萌发的新蔓，根据其性质不同，分为生长枝和结果枝。生长枝：根据生长势的强弱可分为徒长枝(多从主蔓上或枝条基部潜伏芽上萌发而来，生长势强，长达3～5m,间长，牙较小，组织不充实)和营养枝(主要从幼龄树和强壮枝中部萌发，长势中等，可成为翌年的结果母枝)。结果枝：雌株上能开花结果的枝条叫结果枝。雄株的枝只开花不结果，称为花枝。结果枝一般着生在1年生枝的中、上部和短缩枝的上部。根据枝条的发育程度，结果枝又分为：徒长枝结果枝，长度为1.5cm以上；长果枝，长度为1.0m;中果枝，长度为0.3～0.5m;短果枝，长度为0.1～0.3m。(3)叶。叶为单叶互生，叶形有圆形、卵形、椭圆形、扇形、披针形等。叶长5～10cm,宽6～18cm,叶片大而较薄。基部呈楔形、圆形或心脏形。叶面颜色深，叶背颜色浅，且有绒毛。(4)芽。芽分为叶芽和花芽。芽为鳞芽，鳞片为黄褐色毛状；复芽，且有主副之分，1～3芽的叶腋，中间较大的芽为主芽，两侧为副芽，呈潜伏状；主芽易萌发成为新梢，副芽在主芽受伤或枝条被修剪时才能萌发。猕猴桃萌发率较低，一般为47%～54%。(5)花。猕猴桃为雌雄异株植物，雌花、雄花分别在雌株、雄株上。雌花、雄花在形态上都是两性花，但在功能上雄花的雌蕊败育，因此都是单性花。雌性植株的花多数为单生，雄性植株的花多呈聚伞花序，每一花序中花朵的数量在种间及品种间均有差异。(6)果实。为圆形至长圆柱形，是中轴胎座多心皮浆果，可食部分为中果皮和胎座。果皮黄色、棕色、黄绿色等，果皮较薄，果点多数明显，果面无毛或被绒毛、硬刺毛。果肉多为黄色或翠绿色，也有红色的，呈放射状。果实大小差异大，一般为20～50g,果实最大的是中华猕猴桃和美味猕猴桃，大的可达200g以上。中华猕猴桃的初花期多在4月下旬。从现蕾到开花需要25～40d。每个花枝开放的时间，雄花5～8d,雌花3～5d。全株开放时间，雄株7～12d，雌株5～7d。雄花的花粉可通过昆虫、风等自然媒介传到雌花的柱头上进行授粉，也可人工授粉。猕猴桃花芽容易形成，坐果率高，落果率低，所以丰产性好。中华猕猴桃、美味猕猴桃主要以短缩果枝、短果枝结果为主。结果母枝一般可萌发3～4个结果枝，发育良好的可抽8～9个。结果母枝可连续结果3～4年。结果枝通常能坐果2～5个，因品种而有差异。猕猴桃从终花期到果实成熟，需120～140d,在此期间，果实经过迅速生长期、缓慢生长期和果实成熟期3个阶段。土壤以深厚、排水良好、湿润中等的黑色腐质沙质壤土，pH值为5.5～7的微酸性土壤为佳。年平均温度11.3～16.9℃，极端最高温度不超过42.6℃，极端最低温不低于-15.8℃,≥10℃有效积温4500～5200℃，无霜期160～240d，年日照时数1300～2600h。年降水量1000mm左右；相对湿度70%以上。目前，猕猴桃属在全世界共发现66个种，其中，62个种原产于我国。分布在北纬23°～34°的暖温带与亚热带山地，其中，栽培最广泛的2个种中华猕猴桃、美味猕猴桃都以长江流域为分布中心。供鲜食和加工的主要有5个种。分布最广，集中于秦岭和淮河流域以南。其果实近球形或圆柱形，果面光滑无毛，果皮黄褐色至棕褐色，果20～120g。主要品种有：园艺16A、魁蜜、红阳、庐山香、金丰、早鲜等优良品种。目前，为我国栽培面积最大、产量最高的种类。分布于黄河以南地区。果皮绿色至棕色，果重30～200g,果肉绿色，汁多味浓，具清香。主要品种：海沃德、布鲁诺、徐香、金魁等优良品种。分布于长江以南各地，其代表品种有福建的沙农18号，中国科学院武汉植物研究所以种间杂交(中华×毛花)培育出的重瓣、满天星、江山娇等观赏新品种。果实重约30g，果肉翠绿色，多汁微酸。如浙江的华特。主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、河北、山西等地，黄河以南也有分布。其代表种有吉林选育的魁绿。该种类是我国耐寒性强、适应性广、综合利用价值较高的猕猴桃种类。主要分布于我国广西壮族自治区（全书简称广西）、广东、云南、贵州、湖南、四川、湖北、江西、浙江、安徽、台湾等地，果实以富含维生素C而闻名于世，维生素C最高含量可达2140mg/100g。猕猴桃的繁殖方法，常用播种、扦插、嫁接等方式。(1)播种。采集优良母株上充分成熟的果实，自然存放，变软后立即洗种，阴干。播种前进行层积处理，以提高种子发芽率，沙藏时间为40～60d。主要培养实生苗。(2)扦插。猕猴桃扦插因产生大量愈伤组织，消耗过多养分，并在愈伤组织表面形成木栓层，影响插条对养分和水分的吸收，使生根更加困难。实践证明，利用当年生新梢即嫩枝扦插生根比较容易。插穗准备：绿枝蔓插穗选用生长健壮、组织较充实、叶色浓绿厚实、无病虫害的木质化或半木质化新梢蔓。绿枝蔓插穗不贮藏，随用随采。为了促进早生根，可用生长素类处理下部剪口。常用药剂及处理浓度有：吲哚丁酸(IBA)100～500mg/L处理0.5～3h,或3～5g/L速蘸；萘乙酸(NAA)200～500mg/L,处理3h，ABT生根粉蘸下剪口等。绿枝扦插方法：为了减少水分散失，可将叶片剪去1/2～2/3,弥雾的次数及时间间隔以苗床表土不干为度，弥雾的量以叶面湿而不滚水即可。过干会因根系尚未形成，吸不上水而枯死，过湿会导致各种细菌和真菌病害发生蔓延。绿枝蔓扦插的喷药次数较多，大约1周1次。多种杀菌剂交替使用，以防病种的多发性，确保嫩枝蔓正常生长。在建立猕猴桃生产基地时，应选择水源、交通较方便的地方。猕猴桃园宜建立在海拔较高的山区，但不宜超过海拔1000m。丘陵地土层深厚、排水良好，是猕猴桃较适宜的栽培区。但一定要有水源，以防夏秋高温干旱。山地生态条件非常适宜，但要注意坡度、坡向与坡位的选择。一般尽量选择15°以下的缓坡地或较平坦地段。宜选择南向或东南向的向阳避风坡，忌选北向。不宜选择山顶或其他风口(特别是生长季节的风向)处建园。猕猴桃土壤要求土层深厚、疏松肥沃、排水性能良好，又有适当保水能力的微酸性土壤。避免在黏重土壤中栽植。猕猴桃抗风力差，春季大风常折断新梢，损伤叶片及花蕾；夏季干热风降低空气湿度，引起土壤水分大量蒸发而干旱，叶片焦枯，生长受阻；秋季大风，擦伤果实，影响商品价值。因此，建园前就要建造防风林。防风林树种应选择女贞、杉木、湿地松、柳杉、水杉、杨树、樟树、枇杷、冬青、枳壳等，实行常绿与落叶、乔木与灌木相配合，并以常绿树种为主，以预防4—5月的风害。(1)整形。依据不同品种和不同树龄植株生长发育规律，将各种枝蔓合理地分布于架上，协调植株生长和结果之间的平衡，以达到高产、高效的生产目的。篱架的整形：苗木定植后，留3～5个饱满芽短截，春季可萌发2～3个壮梢，冬季修剪时留下健壮的枝条作为主蔓，并在50～60cm处短截。“T”形架的整形：在主干高达1.7m左右，新梢超过架面10cm时，对主干进行摘心，摘心后主干顶端能抽发3～4条新梢，选择2条健壮枝梢作主蔓培养，其余的疏除。平顶棚架的整形：主干高达1.7cm左右，新梢生长至架面10～15cm时，对主干进行摘心或短截，使其促发2～4个大枝，作永久性主蔓。(2)冬季修剪。冬剪最佳时期是冬季落叶后两周至春季伤流发生前两周。过迟修剪容易引起伤流，影响树体。冬季修剪的重点是在整形的基础上，对营养枝、结果枝、结果母枝进行合理的修剪。具体方法是：对生长健壮的普通营养枝，剪去全长的1/3～1/2，促其转化为翌年的结果母枝；徒长形枝对其进行轻剪，促进枝条的充实，以便成为结果母枝；其他的枝条如细弱枝、枯枝，病虫枝、交叉枝、重叠枝、下垂枝均应从基部剪除。对结果母枝的修剪应根据品种特点进行，如金魁的结果母枝抽生结果枝的节位比较高，在第11～13节尚能抽发结果枝，故对粗壮结果母枝可采用长梢轻剪，中等健壮的可留7～8节短截。(3)病虫害防治。树盘表土深翻15cm左右，消灭越冬象甲、金龟子和草履蚧卵块。结合冬剪，清洁果园。及时喷施5波美度的石硫合剂。(1)整形修剪。及时抹除砧木的萌蘖，主干、主蔓上长出的过密芽，直立向上徒长的芽，结果母枝或枝组上密生的、位置不当的、细弱的芽，双生、三生芽(只留1个)，然后确定结果枝留量，新梢长到30～40cm长时开始绑枝，开花前10d进行摘心，徒长枝如作预备枝留4～6叶摘心，可促发二次枝；发育枝可留14～15叶摘心；结果枝常从开花部位以上留7～8片叶摘心。摘心后的新梢先端所萌发的二次梢一般只留1个，待出现2～3片叶后反复摘心，或在枝条突然变细、叶片变小、梢头弯曲处摘心。(2)肥水管理。叶片展开时，喷施1～2次0.3%的尿素，花前灌一次水。(3)病虫害防治。黑光灯、糖醋液等诱杀金龟子等害虫。防治花腐病、干枯病、溃疡病、褐斑病等病害，防治介壳虫、白粉虱、小叶蝉等害虫。(1)疏花蕾。侧花蕾分离后2周开始疏蕾，强壮长果枝留5～6个花蕾，中庸果枝留3～4个花蕾，短果枝留1个花蕾。疏除时应保主花疏侧花。(2)花期放蜂。人工授粉，15%以上雌花开放时，每667m2可设置蜂箱1～2个。(3)肥水管理。开花期喷施0.5%硼砂加0.5%磷酸二氢钾。(4)病虫害防治。防治金龟子、白粉虱、小叶蝉等害虫；防治花腐病、黑星病、褐斑病等病害。(1)疏果。坐果后1～2周内完成。一般短缩果枝上的果均应疏去，中、长果枝留4～5个。使叶果比达到(5～6)∶1。(2)整形修剪。5—6月对结果枝和生长中庸健壮的营养枝摘心，生长瘦弱的营养蔓和向下萌发的枝、芽应及时抹除。7月上、中旬对二次梢再次摘心，同时疏除荫蔽枝、纤细枝、过密枝，并结合修剪进行绑蔓。8月中、上旬对三次枝梢摘心。(3)肥水管理。在落花后20～30d施硫酸钾每667m2 30～40kg,9月中、上旬追施纯钾肥或磷钾复合肥每667m2 30kg，施肥后灌水。果实膨大期每3d喷0.3%～0.5%磷酸二氢钾1～2次。(1)采收。采用树体喷布50mg/L的乙烯利催熟。可溶性固形物含量在12%～18%时采收，用于及时出售；9%～12%时采收，可用作短期贮藏；6.1%～7.5%时采收，用于贮藏。(2)催熟。采后用400倍液的乙烯利喷布果实，或贮藏前用500倍液乙烯利浸果数分钟，晾干后贮存。(3)肥水管理。采果后结合深翻改土施入有机肥，根据果园土壤养分情况可配合施入磷、钾肥，每株幼树施有机肥50kg,加过磷酸钙和氯化钾各0.25kg;成年树进入盛果期，每株施厩肥50～75kg,加过磷酸钙1kg和氯化钾0.5kg。施肥时，离主干50cm处开20cm深沟，施后覆土，并及时灌水。

猕猴桃细菌性溃疡病是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭性病害，被列为全国森林植物检疫对象。此病来势凶猛，流行年份致使全园濒于毁灭，造成重大经济损失。猕猴桃细菌性溃疡病不仅可造成产量降低，而且导致果皮变厚、果味变酸、果实变小、果形不一、品质下降、商品价值降低。（1） 枝干症状。病菌能够侵染至木质部造成局部溃疡腐烂，影响养分的输送和吸收，造成树势衰弱，流出白色至红褐色菌脓，严重时可环绕茎秆引起，形成龟裂斑，甚至致使树体死亡（图9-1）。（2） 叶部症状。在新生叶片上呈现褪绿小点，水渍状，后发展成不规则形或多角形、褐色斑点，病斑周围有较宽的黄色晕圈。在连续低温阴雨的条件下，因病斑扩展很快，有也不产生黄色晕圈。严重时，叶片卷曲成杯状 （图9-2）。猕猴桃细菌性溃疡病的病菌从气孔、水孔、皮孔、伤口（虫伤、刀伤、冻伤等） 等进入植株体内裂殖。传播途径主要是借风、雨、嫁接等活动进行近距离传播，并通过苗木、接穗的运输进行远距离传播。猕猴桃细菌性溃疡病病菌对高温适应性差，在气温5℃时开始繁殖，15～25℃是生长最适宜温度，在感病后7天即可见明显病症，30℃时短时间也可繁殖。所以容易在冷凉、湿润地区发生并造成大的为害。2月初在多年生枝干上出现菌脓白点，自粗皮、皮孔、剪口、裂皮等伤口溢出，并迅速扩散变乳白色，然后变红褐色。3月末以后，溢出的菌脓增多，病部组织软腐变黑，枝干出现溃疡斑或整株枯死，成熟新叶出现褐色病斑，周围组织有黄色晕圈。6月后发病减轻，夏、秋、冬季处于潜伏状态。图9-1 猕猴桃溃疡病图9-2 叶片溃疡病染病状态（1） 叶片发病规律。叶部感病，先形成红色小点，外围有不明显的黄色晕圈。后扩大为不规则的暗绿色病斑，叶色浓绿，黄色晕圈明显。在潮湿条件下迅速扩大成水渍状大斑，受叶脉限制呈多角形。秋季产生的病斑呈暗紫色或暗褐色，晕圈较窄（图9-3）。（2） 枝干发病规律。溃疡病多从茎蔓的幼芽、皮孔、落叶痕、枝条分叉部开始，初呈水渍状，后病斑扩大，色加深，皮层与木质部分离，手压感觉松软。后期病部皮层呈纵向线状龟裂，流出青白色黏液，后转为红褐色。病斑绕茎迅速扩展，病茎横切面可见皮层和髓部变褐色，髓部充满白色菌脓 （图9-4）。受害茎蔓上部枝叶萎蔫死亡。图9-3 猕猴桃细菌性溃疡病叶部发病规律（1） 病斑处理。此技术主要针对猕猴桃植株的主杆上的溃疡病病斑，目的是减少溃疡病活菌数量及清除发病部位的腐烂组织。①用具与药剂。工具：小刀、酒精瓶 （内装75%酒精）、无菌塑料布条、毛笔等工具；药液：72%的硫酸链霉素可溶粉剂稀释100～200倍液、3%中生菌素可湿性粉剂50～100倍液、6%春雷霉素可湿性粉剂50～100 倍液、1%申嗪霉素悬浮剂100～150倍液等。②实施方案。时间：每年冬季、春季，树干出现病斑、流脓等症状的时期；方法：用消毒后的小刀，刮除猕猴桃树干病斑，包括发病表皮、变色木质部和距病斑边缘0.5厘米左右的健康表皮，选取上述药液涂抹在刮除部分，然后用无菌塑料布包好。③注意事项。小刀用完后及时消毒，避免交叉传染；刮除的病部组织要及时带出园区，集中烧毁。图9-4 猕猴桃细菌性溃疡病白色菌脓（2） 涂干。此技术主要是针对猕猴桃植株冬季越冬制定的。①用具与药剂。工具：水桶、刷子等；药剂：涂白剂可自行配制，生石灰10 份、石硫合剂2 份、食盐1～2 份、黏土2份、水35～40份，也可选商品制剂。②实施方案。时间：每年采果后对树体进行保护，在11月初至12月初进行，猕猴桃植株涂干技术的应在冬季修剪、清园后进行；方法：将调制好的涂白剂用刷子均匀地涂抹在冬剪后主干和主蔓上，以覆盖全部主干和主蔓为准，特别是一些树缝隙处。本方法既可防止病菌浸入树干，又可预防树干冬季冻害。（3） 灌根。①用具与药剂。工具：水桶、量杯、玻璃棒等；药液：72%的硫酸链霉素可溶粉剂稀释500～1000倍液、3%中生菌素可湿性粉剂200～500倍液、6%春雷霉素可湿性粉剂200～500倍液、36%三氯溴异氰尿酸可湿性粉剂300～500倍液、1%申嗪霉素悬浮剂500～1000倍液、荧光假单胞杆菌500倍液等。②实施方案。时间：猕猴桃溃疡病重点发生期，4月初至6月；方法：选取以上药剂两种以上，复配制成上述浓度药液。按每棵猕猴桃树3～5升的施药量进行灌根施用，以湿润猕猴桃根系附近土壤为准，发生严重的果园，每15天施用1次。③注意事项。选择药剂时应选择内吸性较好的药剂，药剂需要交替使用和混合施用。猕猴桃褐斑病又称叶斑病，主要为害叶片和枝干，是猕猴桃生长期严重的叶部病害之一。严重时导致叶片大量枯死或提早脱落，影响果实产量和品质。发病初期，多在叶片边缘产生近圆形暗绿色水溃状斑，在多雨高湿的条件下，病斑迅速扩展，形成大型近圆形或不规则形斑。后期病斑中央为褐色，周围呈灰褐色或灰褐相间，边缘深褐色，其上产生许多黑色小点 （图9-5）。图9-5 猕猴桃褐斑病——叶部病斑在多雨高湿条件下，病情发展迅速，病部由褐色变成黑色，引起霉烂。严重时，受害叶片卷曲破裂，干枯易脱落 （图9-6、图9-7）。病菌可以在病残体上越冬，翌年春季萌发新叶后，借助风雨飞溅到嫩叶上，一年内可多次发病。5—6月为病菌侵染高峰期，病菌从叶背面入侵。7—8月为发病高峰期。高温高湿易发此病。图9-6 猕猴桃褐斑病图9-7 猕猴桃褐斑病严重时期（1） 农业防治。加强果园管理，清沟排水，增施有机肥，适时修剪，清除病残体。（2） 化学防治。发病初期使用75%百菌清500倍液、25%嘧菌酯1500倍、68%精甲霜锰锌400倍液，隔5～7天喷1次，连喷2～3次。发病中期使用30%苯甲丙环唑2000倍液，32.5%苯甲嘧菌酯1500倍液。在采果前30天，用56%嘧菌·百菌清1000倍液喷1～2次，可延长叶片寿命，提高果实品质。用70%代森锰锌400～800倍液叶面喷施，要均匀周到片片见药或喷洒猕杀粉剂600～800倍液，如发现园内叶片有红蜘蛛，可在药液中加入阿维菌素或阿维甲氰1500～2000倍液，兼杀红蜘蛛。猕猴桃黄叶病在各地普遍发生，造成严重为害，尤其在地下水位较高的湿地，发病率较高，发病株率占到栽培总株数的20%左右，严重田块发病株率高达30%～50%。发生黄化病的叶片，除叶脉为淡绿色外，其余部分均发黄失绿 （图9-8），叶片小，树势衰弱。严重时叶片发白，外缘卷缩、枯焦，果实外皮黄化，果肉切开呈白色，丧失食用价值，长时间发病还会引起整株树死亡。图9-8 猕猴桃黄叶病叶部症状发病原因发病严重的有5种情况。（1） 进入盛果期的老果园因结果负载量大而发病严重。（2） 以往的上浸地和无法浇灌的干旱果园。（3） 不注意氮、磷、钾及微量元素平衡配套施肥的果园。（4） 忽视防治线虫病、根腐病为害的果园。（5） 管理粗放的果园。以上几种情况都从根本上导致树势衰弱，根系吸收、输送能力下降而发生黄叶病。（1） 农业防治。结合修剪抹芽、疏花疏果，剪除病枝蔓，抹掉病弱芽，合理留花留果，以免果树负载量过大，造成树势衰弱，降低自身抗病能力；注意平衡施肥，结合浇水，在施足氮、磷 （磷肥不宜施用过量） 肥料的同时注意增施氯化钾或硫酸钾，盛果园每亩7千克。（2） 化学防治。中草药保护性杀菌剂靓果安和叶面肥沃丰素配合使用。靓果安重点使用时期：萌芽展叶期、新梢生长期各喷施1次 （4—5月）、果实膨大期6—8月，每个月全园喷施靓果安效果佳。沃丰素重点使用时期：新梢期、花后、果实膨大期使用，按500～600 倍液 （每350 毫升对水200 千克使用）各时期喷施1次。受害叶背面生出许多点状、团块状至不规则形，黑褐色或灰黑色厚而密的扩散霉层。叶片初期生褪绿的黄色小点，后扩大成圆形至不规则形的黄褐色至深褐色病斑，其上依稀可见许多近黑色小点，一片叶子上有数个或数十个病斑，病斑上有黑色小霉点 （图9-9），后期融合成大病斑 （图9-10）。严重时叶片变黄早落，影响产量。图9-9 猕猴桃黑斑病叶部症状图9-10 猕猴桃黑斑病中期叶背病斑病菌在叶片病部或病残组织中越冬，翌年春天猕猴桃开花前后开始发病。进入雨季病情扩展较快，有些地区有些年份可造成较大损失。栽植过密、棚 （篱） 架低矮、枝叶稠密或疯长而通风透光不良的果园极利于病害的发生与流行。（1） 农业防治。建园时选用抗病品种，如梅沃德、建宁79D-13等品种 （株系）；生产管理上除做好冬剪、夏剪、落叶后清园外，还应注意防止病菌传入。（2） 化学防治。对发病植株，在发病初期、中期对全植株喷洒70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液，或25%多菌灵可湿性粉剂500倍液，或20%三环唑可湿性粉剂1000倍液。主要为害叶片，7—8月发生。叶上初生黄褐色小点，后扩展成枯斑，边缘褐色，中部灰褐色，有较明显轮纹。病部生有黑色小粒点 （图9-11）。图9-11 猕猴桃轮纹斑病病菌在叶片等病残体上越冬，翌年6—8月高温多雨季节进入发病盛期。品种间抗病性有差异。（1） 农业防治。重病区选用抗病品种；发病初期，于5—6月及时剪除发病枝条；秋冬认真清园，结合修剪，彻底清除枯枝、落叶，剪除病枝，集中烧毁病残体，消除病源。（2） 化学防治。春季萌芽前喷布1次3～5波美度的石硫合剂。发病初期喷施25%苯菌灵乳油700倍液或50%甲基硫菌灵可湿性粉剂900～1000倍液、12%松脂酸铜乳油600倍液。为害症状一般从猕猴桃叶片边缘开始，初呈水溃状，后变为褐色不规则形病斑。病健交界处明显。病斑后期中间变为灰白色，边缘深渴色。受害叶片边缘卷曲，干燥时叶片易破裂，病斑正面散生许多小黑点 （图9-12、 图9-13）。图9-12 生长期果实炭疽病图9-13 成熟果实炭疽病病菌主要以菌丝体或分生孢子在病残体或芽鳞、腋芽等部位越冬。病菌从伤口、气孔或直接侵入，病菌有潜伏侵染现象。（1） 农业防治。注意及时摘心绑蔓，使果园通风透光，合理施用氮、磷、钾肥，提高植株抗病能力，注意雨后排水，防止积水；结合修剪、冬季清园、集中烧毁病残体。（2） 化学防治。在猕猴桃生长期，果园初次出现孢子时，3～5天内开始喷药，以后每10～15天喷1次，连喷3～5次。使用药剂有 （1 ∶ 0.5 ∶ 200） 波尔多液，0.3波美度的石硫合剂加0.1%洗衣粉，50%甲基硫菌灵可湿性粉剂 800～1000 倍液，65%代森锌可湿性粉剂500倍液，50%代森铵水剂800倍液。猕猴桃灰斑病一般从叶片叶缘开始发病，叶片上有灰色病斑，初期病斑呈水渍状褪绿褐斑，随着病情的发展，病斑逐渐沿叶缘迅速纵深扩大，侵染局部或大部叶面。叶面的病斑受叶脉限制，呈不规则状。病斑穿透叶片，叶背病斑呈黑褐色，叶面暗褐至灰褐色，发生较严重的叶片上会产生轮纹状灰斑。发生后期，在叶面病部散生许多小黑点。严重时可造成叶片干枯、早落，影响正常产量 （图9-14）。图9-14 猕猴桃灰斑病病菌在病残体上越冬，在春芽萌发展叶后，随风雨传播到嫩叶背面进行潜伏侵染，在叶片坏死病斑上，进行再次侵染。5—6月，病菌开始入侵。到7—8月叶部症状明显，开始是小病斑，之后逐步扩大，叶片后期干枯，大量落叶。到8月下旬开始大量落果。10月下旬至11月开始进入越冬期。被侵染的叶片，抗性减弱，该病原常发生再侵染，所以有时在同一叶片上出现两种病征。（1） 农业防治。加强果园管理，合理施肥灌水，增强树势，提高树体抗病力；科学修剪，剪除病残枝及茂密枝，调节通风透光，保持果园适当的温湿度；冬季彻底清园，将地面落叶和枝条清扫干净，集中烧毁。（2） 化学防治。翻土后喷5～6波美度石硫合剂于枝蔓。5月是最佳保护预防期，开花前后各喷1次药会减少初侵染。7—8月，用代森锰锌1000倍液、甲基硫菌灵800倍液进行树冠喷雾，进行2～3次即可。在叶面、枝梢上形成黑色小霉斑，后扩大连片，使整个叶面、嫩梢上布满黑霉层。由于煤烟病病菌种类很多，同一植物上可染上多种病菌，其症状上也略有差异。呈黑色霉层或黑色煤粉层是该病的重要特征 （图9-15）。病菌在病部及病落叶上越冬，翌年孢子由风雨、昆虫等传播。寄生到蚜虫、介壳虫等昆虫的分泌物及排泄物上，或植物自身分泌物上，或寄生在寄主上发育。高温多湿，通风不良，蚜虫、介壳虫等害虫发生多且分泌蜜露，均加重发病。图9-15 煤烟病（1） 农业防治。植株种植不要过密，适当修剪，温室要通风透光良好，以降低湿度，切忌环境湿闷。（2） 化学防治。植物休眠期喷施3～5波美度的石硫合剂，消灭越冬病源；该病发生与分泌蜜露的昆虫关系密切，喷药防治蚜虫、介壳虫等是减少发病的主要措施，防治介壳虫还可用松脂合剂10～20倍液、石油乳剂等；在喷洒杀虫剂时加入紫药水10000倍液防效较好；对于寄生菌引起的煤烟病，可喷用代森铵。主要为害猕猴桃的花蕾、花，其次为害幼果和叶片，引起大量落花、落果，还可造成小果和畸形果，严重影响猕猴桃的产量和品质。受害严重的猕猴桃植株，花蕾不能膨大，花萼变褐，花蕾脱落，花丝变褐腐烂；中度受害植株，花能开放，花瓣呈橙黄色，雄蕊变黑褐色腐烂，雌蕊部分变褐，柱头变黑，阴雨天子房也受感染，有的雌花虽然能授粉受精，但雌蕊基部不膨大，果实不正常，种子少或无种子，受害果大多在花后一周内脱落；轻度受害植株，果实子房膨大，形成畸形果或果实心柱变成褐色，果顶部变褐腐烂，导致套袋后才脱落。受花腐病为害的树挂果少、果小，造成果实空心或果心褐色坏死脱落，不能正常后熟 （图9-16、 图9-17）。图9-16 猕猴桃花腐病引起的果实病斑图9-17 猕猴桃花腐病为害花蕾 （左） 和花 （右）受害严重的猕猴桃植株，花蕾不能膨大，花萼变褐，花蕾脱落，花丝变褐腐烂；中等受害植株，花能开放，花瓣呈橙黄色，雄蕊变黑褐色腐烂，雌蕊部分变褐，柱头变黑，阴雨天子房也受感染，有的雌花虽然能授粉受精，但雌蕊基部不膨大，果实不正常，种子少或无种子，受害果大多在花后一周内脱落。（1） 农业防治。加强果园土肥管理，提高树体的抗病能力，秋冬季深翻扩穴，增施大量的腐熟有机肥，保持土壤疏松，春季以速效氮肥为主，配合速效磷钾肥和微量元素肥施用，夏季以速效磷钾肥为主，适量配合速效氮肥和微量元素肥；适时中耕除草，改善园地环境，特别在平坝区5—9月要保持排水沟渠畅通，降低园地湿度。（2） 化学防治。冬季用5波美度石硫合剂对全园进行彻底喷雾，在猕猴桃芽萌动期用3～5波美度石硫合剂全园喷雾，展叶期用65%的代森锌可湿性粉剂500倍液或50%退菌特可湿性粉剂800倍液或0.3波美度的石硫合剂喷洒全树，每10～15天喷1次。特别是在猕猴桃开花初期要重防1次。在收获的果实一侧出现类似大拇指压痕斑，微微凹陷，褐色，酒窝状，直径大约5毫米，其表皮并不破，剥开皮层显出微淡黄色的果肉，病斑边缘呈暗绿色或水渍状，中间常有乳白色的锥形腐烂，数天内可扩展至果肉中间乃至整个果实腐烂（图9-18）。该病菌靠风、雨、气流传播，从修剪造成的枝条伤口感染。图9-18 熟腐病（1） 农业防治。谢花后1周开始幼果套袋，避免侵染；清除修剪下来的枝条和枯枝落叶，集中烧毁，减少病菌寄生场所。（2） 化学防治。从谢花后两周至果实膨大期 （5—8月） 向树冠喷布 50%多菌灵可湿性粉剂 800 倍液或波尔多液 （1 ∶0.5 ∶ 200），或80%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液，喷洒2～3次，喷药期间隔20天左右。受害果起初在果蒂处出现水渍状病斑，以后病斑均匀向下扩展，果肉由果蒂处向下腐烂，蔓延全果，略有透明感，有酒味，病部果皮上长出一层不均匀的绒毛状灰白霉菌，后变为灰色 （图9-19、 图9-20）。病菌以分生孢子在病部越冬，通过气流传播。图9-19 猕猴桃蒂腐病图9-20 蒂腐病在花季期的表现（1） 农业防治。搞好冬季清园工作；及时摘除病花，集中烧毁。（2） 化学防治。开花后期和采收前各喷1次杀菌剂，如倍量式波尔多液或65%代森锌可湿性粉剂500倍液；采前用药应尽量使药液喷洒到果蒂处，采后24小时内用药剂处理伤口和全果，如用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液加2，4-D 100～200毫克/千克浸果1分钟。秃斑表面若是由外果肉表层细胞愈合形成，比较粗糙，常伴之有龟裂缝；若是由果实表层细胞脱落后留下的内果皮愈合，则秃斑光滑。湿度大时，在病斑上疏生黑色的粒状小点，即病原分生孢子盘。病果不脱落，不易腐烂 （图9-21）。病菌先侵染其他寄主后，随风雨吹溅分生孢子萌发侵染。图9-21 猕猴桃秃斑病为害果实状（1） 农业防治。加强果园管理，增施钾肥，避免偏施氮肥，增强抗病力。（2） 化学防治。发病初期喷施27%碱式硫酸铜悬浮剂600倍液或50%氯溴异清尿酸水溶性粉剂1000倍液、50%咪鲜胺可湿性粉剂900倍液、75%百菌清可湿性粉剂600倍液。受病菌感染的雌花和雄花都会变成褐色枯萎状，常萎蔫下垂，难以开放。发病花器的病残组织与果实接触后可使果实感染病菌，果实受害后，果面形成下陷褐色病斑，上面覆盖白色菌丝体 （图9-22）。多雨潮湿，温度较低时，有利于菌核萌发和子囊孢子的形成。土壤黏重的地方，发病也较重。图9-22 猕猴桃果实褐腐病前期症状大量的菌丝体在受害部位变成黑硬的菌核，菌核落到果园后，病菌继续蔓延，在果园中传播。（1） 农业防治。加强果园土肥水管理，及时清除树盘周围枯枝落叶并集中烧毁。（2） 化学防治。菌核萌发期、落瓣后及采收前应喷洒0.5波美度的石硫合剂或800倍液甲基硫菌灵。展叶前后喷施50%代森锌可湿性粉剂500倍液。为害果实，多在果肩或朝上果面上发生，病斑近圆形，红褐色，较小，突起呈疱疹状，果实上许多病斑连成一片，表面粗糙，似疮痂状。病斑仅发生在表皮组织，不深入果肉，因此，为害较小，但降低商品价值。多在果实生长后期发生 （图9-23）。图9-23 猕猴桃疮痂病以菌丝体和分生孢子器随病残体遗落土中越冬或越夏，并以分生孢子进行初侵染和再侵染，借雨水溅射传播蔓延。通常温暖高湿的天气有利发病。（1） 农业防治。及时收集病残物烧毁。（2） 化学防治。结合防治其他叶斑病喷施75%百菌清可湿性粉剂1000倍液加70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍液，或75%百菌清可湿性粉剂1000倍液加70%代森锰锌可湿性粉剂1000倍液，每隔10天左右喷施1次，连续喷施2～3次。多与枝干粗皮、裂口、藤肿等症状相伴生，如膏药一样贴在枝干上。病菌表面较光滑，初期呈白色，扩展后为白色或灰色，病菌衰老时通常在枝干部发生龟裂，容易剥离，受害严重的造成树体早衰，枝条干枯 （图9-24）。图9-24 猕猴桃膏药病在患病枝干越冬，翌年春夏之交，在高温多湿条件下形成子实体。本病多出现于土壤速效硼含量偏低的猕猴桃植株及含硼较低 （10毫克/千克以下） 的两年生以上的老枝上。本病的发生是土壤和树体缺硼的生理性原因，和弱寄生菌侵染共同作用的结果。土壤施硼 （萌芽至抽梢期根际土壤每平方米1克硼砂） 和树冠喷硼，以0.2%硼砂液治粗皮、裂皮、藤肿和流胶等现象，减少弱寄生菌侵染的场所。用小刀刮除菌膜，涂抹3波美度石硫合剂或涂三灵膏 （凡士林50克，多菌灵2.5克，赤霉素0.05克调匀）。主要在树冠外围结果枝出现枝条叶片萎蔫，继而整枝失水枯死，但结果母枝正常。在一个园中，整园或整株发病较少，往往是局部园或一株上局部枝出现枝枯 （图9-25）。图9-25 猕猴桃发生枝枯病后新梢萎垂状一般发生在猕猴桃新梢迅速抽生期，即4—5月春夏交替期。此期北方地区在春旱情况下，往往是干热风盛行期，给猕猴桃这种阔叶果树带来一定影响。一般在春季持续性干旱时易诱发此病。发生的两个条件：一是春旱，二是强风。在春旱情况下，若出现6级以上强风，持续5小时以上，猕猴桃树即可发病。4年以上未遮阴封行的幼龄果树发病较重，因为该树龄的树生长势较强，对水分要求较迫切，而根系分布较浅，吸收功能有限，抗旱性相对较差，一旦强风天气出现，发病严重。（1） 早摘心。主要针对外围结果枝控制顶端优势，加速枝条木质化，减少迎风面，提高抗风性。（2） 规范绑枝。冬剪后结果母枝必须枝枝绑缚，且排列有序，杜绝交叉、重叠、拥挤，以防结果枝抽生后空间局限，密集生长，遇风移位，增大摩擦，造成伤口，抗风能力下降。（3） 注意灌水。尤其在春旱风害严重情况下，提倡灌水，以减缓强风形成的地面蒸发及叶面蒸腾对树体水分生理平衡的破坏。猕猴桃根腐病为毁灭性真菌病害，能造成根颈部和根系腐烂，严重时整株死亡。初期在根颈部出现暗褐色水溃状病斑，逐渐扩大后产生白色绢丝状菌丝。病部皮层和木质部逐渐腐烂，有酒糟气味，菌丝大量发生后经8～9天形成菌核，似油菜籽大小，淡黄色。下面的根系逐渐变黑腐烂，地上部叶片变黄脱落，树体萎蔫死亡 （图9-26）。病菌在根部病组织皮层内越冬或随病残体在土壤中越冬，病菌在土壤病组织中可存活1年以上，病根和土壤中的病菌是翌年的主要侵染源。翌年4 月开始发病，高温高湿季节发病，由病残体传播，经接触传染。水过多，果园积水，施肥距主根较近或施肥量大，翻地时造成大的根系损伤，栽植过深，土壤板结，挂果量大，土壤养分不足，栽植时苗木带菌，这些情况都容易引发根腐病。图9-26 猕猴桃根腐病（1） 农业防治。实行高垄栽培，合理排水、灌水，保证果园无积水；及时中耕除草，破除土壤板结，增加土壤通气性，促进根系生长；增施有机肥，提高土壤腐殖质含量，促进根系生长；科学施肥，合理耕作，避免肥害和大的根系损伤；控制负载量，增强树势。（2） 植物检疫。把好苗木检疫关。（3） 化学防治。在早春和夏末进行扒土晾根，刮治病部或截除病根，然后使用青枯立克300倍液+海藻生根剂——根基宝300倍液进行灌根，小树1株灌7.5～10千克，大树1株灌15～25千克。猕猴桃白纹羽病分布范围广，为害树种很多，是主要根系病害之一。其症状是多从细根开始发病，然后扩展到侧根和主根。病根皮层腐烂，病部表面缠绕有白色或灰白色丝网状物，即根状菌索。后期霉烂根皮层变硬如鞘。有时在病根木质部生有黑色圆形菌核。根际地面有菌丝膜，其上有时有小黑点即病菌的子囊壳。当病部根皮全部腐烂后，在坏死的木质部上形成大量的白色或灰白色放射状菌索。受害植株生长势逐渐衰弱，直至最后死亡 （图9-27、 图9-28）。图9-27 猕猴桃白纹羽病图9-28 受白纹羽病为害的猕猴桃树病菌以菌丝体、根状菌索和菌核随病根在土壤中越冬。温湿度适宜时，菌核或菌索长出新的菌丝，首先侵害新根的幼嫩组织，使幼根腐烂，然后逐渐蔓延到大根。病菌接触传染。（1） 农业防治。加强果园肥水管理，增强树势，提高树体抗病性。（2） 化学防治。栽植前，红心猕猴桃苗木用10%硫酸铜溶液，或20%石灰水，或70%甲基硫菌灵可湿性粉剂500倍液浸泡1小时进行消毒。先为害根的外部，受害根皮层呈褐色腐烂状，病部不断扩展，最后整个根颈部环割腐烂，有酒糟味，从而导致整株死亡。树体发病后使萌芽期推迟、叶片枯萎、叶面积小、枝条干枯，为害严重时因影响水分和养分的运输而使植株死亡 （图9-29、图9-30）。图9-29 猕猴桃疫霉病形成的菌落图9-30 猕猴桃疫霉病的果实在排水不良的果园以及多雨季节，病菌通过猕猴桃根颈伤口侵染皮层而引起根腐。春天或夏天，根部在土壤中被侵染。（1） 农业防治。选择排水良好的土壤建园。防止植株创伤。（2） 化学防治。当植株感病时，在 3 月或 5 月中下旬用2500毫克/升的代森锌或100～200 毫克/升的瑞毒霉或1 ∶ 2 ∶200的波尔多液灌根部；挖出病部，刮除病部腐烂组织，并用0.1%升汞溶液消毒，后涂上波尔多液或石硫合剂原液，两个星期后再更换新土覆盖。在植株受害嫩根上产生细小肿胀或小瘤，数次感染则变成大瘤。瘤初期白色，后变为浅褐色，再变为深褐色，最后变成黑褐色。受根结线虫为害的植株根系发育不良，大量嫩根枯死，细根呈丛状，根发枝少，且生长短小，对幼树影响较大 （图9-31、 图9-32）。图9-31 猕猴桃根结线虫病（1） 线虫繁殖生长条件。土壤相对湿度40%～70%、土壤温度0～30℃、土壤pH值为4～8。（2） 其他有利条件。雨季有利于线虫孵化和侵染；地势高燥、土壤质地疏松、盐分低等利于线虫病发生。图9-32 猕猴桃根结线虫为害状（3） 自身传播。自身一年能移动1米的距离，远距离的传播主要依靠灌水、病土、带病的种子、苗木和其他营养材料及农事操作活动等传播。（1） 农业防治。猕猴桃定植地及苗圃地不要利用原来种过葡萄、棉花、番茄及其他果树的苗圃地，最好采用水旱轮作地作苗圃地和定植地，此法对防治根结线虫病效果很好。此外要重视植株的整形修剪，合理密植，改善园内通风透光条件；多施农家肥，改良土壤，提高土壤的通透性。（2） 化学防治。患病轻的种苗可先剪去发病的根，然后将根部浸泡在1%的异丙三唑硫磷、克线丹等农药中1小时。对可疑有根结线虫的园地，定植前每亩用10%克线丹3～5千克进行沟施，然后翻入土中。猕猴桃园中发现轻病株可在病树冠下5～10厘米的土层撒施10%克线丹 （每亩撒入3～5千克），施药后要浇水。苗圃地发现病株，可用1.8%阿维菌素乳油，每亩用680克对水200升，浇施于耕作层 （深15～20厘米），效果好，且无残毒遗留，对人畜安全。用3%米尔乐颗粒剂撒施、沟施或穴施，每亩用6～7千克，药效期长达2～3个月。该病主要发生在幼苗期，往往在幼苗出现2～3片真叶、根颈基部尚未木质化之前发病。苗茎部先出现浸渍状病斑 （图9-33）。图9-33 猕猴桃立枯病病苗多从上土表侵入幼苗的茎基部，发病时，先变成褐色，后成暗褐色，受害严重时，韧皮部被破坏，根部成黑褐色腐烂。此时，病株叶片发黄，植株萎蔫，枯死，但不倒伏。此病菌也可侵染幼株近地面的潮湿叶片，引起叶枯，边缘产生不规则、水渍状、黄褐色至黑褐色大斑，很快波及全叶和叶柄，造成死腐，病部有时可见褐色菌丝体和附着的小菌核。病菌在残留的病株上或土壤中越冬或长期生存。带菌土壤是主要侵染来源，病株残体、肥料也有传病可能，还可通过流水、农具、人畜等传播。菌丝呈蛛网状，围绕寄生的组织。土温在13～26℃都能发病，以20～24℃为适宜。对土壤pH值适应范围广，pH值2.6～6.9都能发病。天气潮湿适于病害的大发生，反之，天气干燥病害则不发展。多年连作地发病常较重。（1） 农业防治。严格控制苗床及扦插床的浇灌水量，注意及时排水；注意通风；晴天要遮阳，以防土温过高，灼伤苗木，造成伤口，使病菌易于侵染。（2） 化学防治。对被污染的苗床，如继续用于扦插育苗，或用于扦插的其他土壤，在扦插前，可用甲醛进行土壤消毒，每平方米用甲醛50毫升，加水8～12千克浇灌于土壤中，浇灌后隔1周以上方可用于播种栽苗，或用70%五氯硝基苯粉剂与65%代森锌可湿性粉剂等量混合，处理土壤，每平方米用混合粉剂8～10克，撒施土中，并与土拌和均匀。果实上有明显的日晒伤痕 （图9-34、 图9-35）。猕猴桃日灼病大多发生在高温季节，气候干燥、持续强烈日照容易发生，尤其是在果实生长后期的7—9月，叶幕层薄，叶片稀疏、果实裸露的发生严重。挂果幼园比老果园发生严重。弱树、病树、超负荷挂果的树日灼残果率可达15%～25%。土壤水分供应不足、修剪过重、果实遮阳面少、保水不良的地块，易发生严重日灼。图9-34 猕猴桃日灼病发病初期症状图9-35 不同程度日灼受害状（1） 夏季修剪在最顶果多留2～3 片叶，可以遮挡直射太阳光。（2） 有条件的早晚隔几天喷一次水，也可配成果友氨基酸400倍液，既可降低果园温度，又可快速供给营养。（3） 果园覆盖，可用麦糠或麦草覆盖，如眉县张江成果园直接覆盖行间，减少土壤水分蒸发。（4） 套袋果打开通气孔，通气孔小时可略剪大，利用通气，降低袋内温度，一般可降低1～2℃。

水稻条纹叶枯病（Rice stripe virus，RSV）是一种以介体昆虫灰飞虱传播的病毒病。该病在我国最早发生于1964年。近年来由于耕作制度、气候条件、水稻品种等的变化，导致该病再次大范围流行，给水稻生产造成很大的损失。浙江省自2004年在湖州的部分晚粳稻上严重发生以来，其他地区相继发病，病情发展很快。浙江嘉兴市自2002年开始水稻条纹叶枯病零星发生，发病面积不断扩大，2004年发病面积0.33万hm2，2005年70%的乡镇发病，全市合计发病面积达1.26万hm2，占水稻种植面积的10%左右，2006年发病面积继续扩大，全市每个乡镇均有发病，发病面积达1.49万hm2，对水稻造成较大损失。目前水稻条纹叶枯病已成为浙江北部稻区影响水稻高产的主要病害之一。为此，我们从2005年起对水稻条纹叶枯病发病与产量损失的关系开展了研究，现将结果报道如下。选用目前浙江湖州、嘉兴等地种植面积较大的晚粳品种嘉991为供试品种，种子由嘉兴市农业科学院提供，试验在嘉兴市农业科学院试验田中进行。1.2.1 试验小区设置 选定3块播栽期一致、生长均匀的田块作为试验区，其中2块田作为单丛发病率测产，分别标记为A、B区；另1块田作为小区发病率测产，标记为C区。1.2.2 发病率调查 从水稻插秧后开始定期调查试验区的田间条纹叶枯病自然发病情况，直至病情稳定。病情稳定后在田间选定发病的单丛植株和小区。定点单丛试验区每个田块分别选500丛发病植株作为供试样本。调查每丛样本的病株数与总株数，计算其株发病率，对株发病率相同的样本，各测定指标计算平均值。然后比较不同株发病率下各个指标的变化趋势。并在选取发病样本的同时，每块田中分别选取20丛未发病的健康植株作为各自对照。小区发病率测产区在选定的田块上根据田间发病情况随机选取面积2～4m2的小区15个。其中13个为发病小区。统计每个发病小区内的病株数和总株数，计算每个小区发病株率；选定2个没有发病植株的小区作为对照区。1.2.3 水稻产量和经济性状考查 水稻成熟后，将选定的定点单丛和各小区样本分别收获，在实验室进行产量、秕谷率和千粒重等指标测定，定点单丛样本还进行有效穗数统计。小区样本产量统一折合成每平方米的产量，分析发病率与产量之间的关系。实验室测产结果：与对照相比，各发病样本有效穗数明显减少，且随着发病率的升高，穗数减少的比例也呈上升趋势，产量与有效穗数表现出相同的变化趋势。A、B两区的试验结果表明，单丛植株的株病率与减产率相当。其中A区的平均病株率与产量损失率之比为1：1.13，B区发病率与减产率比值为1：0.95，2区平均比值为1：1.04，株发病率与减产率接近1：1。病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）0.0010.20.0031.470.008.33101.9629.107.5312.50821.5731.300.5420.00460.7819.9036.7722.22641.1820.0036.4527.27911.7628.708.8028.575.546.0819.9036.7733.33641.1819.3338.5737.504.555.8811.7062.82表1 A区定点单丛条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）38.46731.3729.107.5340.00641.1820.8033.9141.67641.1817.8043.4442.86460.7817.0045.9844.444.555.8813.6056.7850.00370.599.4569.9757.14370.5911.6063.1483.33190.201.9093.96续表1图1 A区发病率与有效穗数的关系图2 A区有效穗数和产量损失的关系在A区，全部发病样本的平均穗数为5.4个，对照有效穗数为10.2个。与对照相比，病丛有效穗数平均减少4.8个，减少率为47.30%。该区全部发病样本平均病株率为36.73%，产量损失率为41.64%。水稻条纹叶枯病发病率与减产率关系分析表明，平均株发病率每上升1%，产量损失就会增加1.13%。图3 A区发病率与产量损失的关系通过对水稻株发病率、减产率和有效穗数减少率之间的相关性分析，建立发病率（x）与有效穗数减少率（y）的回归方程为：y=1.0618x+6.9534，r=0.8446**；有效穗数减少率（x）与减产率（y）的回归方程为：y=1.0326x-7.8186，r=0.9322**；发病率（x）与减产率（y）的回归方程为y=1.1699x-3.1764，r=0.8400**。相关回归分析表明，有效穗数的减少与产量损失之间的关系最显著，呈正相关，相关系数r=0.9322**，说明引起产量损失的直接原因是有效穗数的减少。病株率（%）有效穗数减穗率（%）产量（g）减产率（%）0.009023.920.008.33811.1120.5014.3011.11722.2221.1011.7914.299023.302.5920.00455.569.0062.3722.227.516.6723.053.6425.00633.3316.6030.6027.279022.207.1928.57544.4416.2032.2733.33811.1123.352.3837.50544.4412.6047.3242.865.538.8920.4014.7250.003.561.118.8063.2155.56455.5613.3044.4057.14544.449.3061.1266.67366.678.9062.7971.43366.677.3069.4975.00277.784.3082.02100.0001000.00100.00表2 B区定点单丛条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析图4 B区发病率与产量损失的关系图5 B区发病率与有效穗数的关系B区，发病样本有效穗数平均为5.3个，比对照的平均有效穗数减少3.7个，减穗率达到41.11%。所有发病样本的平均株发病率为41.46%，产量损失率为39.57%。发病率与减产率比值为1：0.95。通过对该区的样本株发病率与减产率、减穗率间进行相关性分析，结果表明，发病率（x）与减产率（y）回归方程为：y=0.9912x-1.446，r=0.8451*；发病率（x）与穗数减少（y）之间回归方程为y=0.9482x+2.2316，r=0.8726*；穗数减少（x）与产量损失（y）之间的回归方程为y=1.0278x-3.121，r=0.9531*。回归分析表明，这几个因素之间存在相关性，其中穗数减少和产量损失之间关系最密切，相关达极显著水平。通过A、B两块田的试验发现，对于单丛发病植株而言，有效穗数的减少是造成产量损失的直接原因，减穗率与减产率之间关系密切。通过对小区样本各指标的田间调查和实验室测产结果，在13个供试发病小区中，所有发病小区单位面积产量都低于对照的产量，说明发病直接导致产量下降，而且从测产结果可以看出，大部分小区产量损失随发病株率上升逐渐加重。供试小区最高病株率为7.97%，减产率为7.08%。13个发病小区平均株发病率为4.79%，减产率为3.52%，即发病率每上升1%，相应减产率增加0.73%。图6 B区有效穗数与产量损失的关系通过对小区病株率和减产率的相关性分析，株发病率（x）与减产率（y）之间呈正相关关系，建立的回归方程为：y=0.9765x-1.2647，r=0.8665*。病株率（%）产量（g/m2）减少量（g）减产率（%）千粒重（g）秕谷率（%）0.0819.40.00.0023.8319.091.48818.21.20.1521.6521.442.75811.09.41.1524.0815.062.93799.220.22.4723.8220.183.17812.37.10.8724.0017.143.65782.736.74.4822.4820.744.38769.250.26.1324.3817.174.38815.53.90.4824.0217.475.74782.536.94.5023.0419.896.00811.57.90.9624.4415.616.33782.536.94.5022.1119.176.46770.548.95.9724.1221.277.08761.458.07.0823.2719.227.97762.257.26.9823.5020.15表3 定点小区条纹叶枯病发病率与水稻产量损失关系分析水稻条纹叶枯病是由介体昆虫灰飞虱传播的病毒病，在水稻秧苗期和分蘖初期最易感染条纹叶枯病毒引起水稻发病，植株一旦发病很难恢复，因此，为害损失极大。在本试验中，初步明确了田间株发病率与产量损失之间的关系，即随着株发病率的上升，产量损失率增大。水稻单丛发病率与产量损失的试验表明，水稻有效穗数减少是导致减产的主要原因，水稻株发病率与产量减少率基本相近。但从小区发病率与产量损失率的试验中可以看出，整个小区内的产量损失率略低于其株发病率，这可能与边际植株的补偿有关。该项试验研究结果，为水稻条纹叶枯病发生为害程度分级，制定水稻条纹叶枯病防治指标提供了科学依据。图7 C区发病率与产量损失的关系

葡萄的再生能力很强，枝蔓上的节或节间都可以诱发不定根。一般来说，枝蔓节间生根较少，根的发生主要集中在节部。在单芽扦插时，朝芽的一侧生根多，背芽的一侧生根少。另外，一年生的枝条生根好，多年生的枝条生根差，因此，葡萄的扦插主要用一年生的枝条。1.影响葡萄扦插生根的因素(1)温度。温度是葡萄扦插生根最主要的影响因素之一。试验表明：在25～28℃时，发芽生根率高，幼苗生长快，叶色正常，新梢粗壮；在30℃以上时，发芽生根的速度很快，但幼苗叶色较淡，枝条细弱；温度高于35℃时，发芽明显受到抑制；40℃以上时，则芽眼经过一段时间就会枯死。由此可见，葡萄扦插育苗的最适宜的温度为28℃左右。为提高葡萄的扦插成活率，在生产上常用加温催根，然后扦插到苗圃地中。需要指出的是，经过催根处理的插条，在扦插时，低温一定要达到生根的温度，否则，催根就不起作用。(2)土壤水分。土壤含水量也是影响插条生根、发芽的重要因素。含水量的高低与土壤结构密切相关，通常用来进行葡萄扦插育苗的沙壤土的含水量占土壤重量的14%左右较为适宜。(3)空气条件。空气条件对插条生根具有重要的意义。在生产中常见到植物的根在寻找空气和养分的情况。用塑料营养袋育苗，发现在不同介质中根的营养分布是不一样的。以沙土做介质的，由于紧密度较大，空气条件不如锯屑和煤渣做介质的好。前者葡萄根系仅沿着袋内边沿向下生长，袋内沙土中间无根系；而后二者袋中满布根系。因此，介质空隙度越大，根系越发达。在沙培时，如浇水量过大，扦插的芽段生根部位几乎全在沙表层。故要插条根系正常，在选择土壤或配营养土时，一定要疏松，透气性良好，同时要经常保持适宜的含水量。2.扦插育苗技术（1）插条准备。结合冬季修剪采集无病毒、节间短、髓部小、色泽正常、生长健壮、芽眼饱满、无病虫危害的枝条做插条；细弱或徒长的枝条成活率低，苗木生长不良，不宜选用。如果繁殖材料缺乏时，也可选用成熟良好的2次枝做插条。春季取出插条，按2～3个芽长度剪截。插条上端离芽眼1.5厘米处平剪，下端离芽眼0.5厘米处（芽的对面）剪成马蹄形。插条上的所有芽眼，特别是上端的1～2个芽眼要充实饱满。3芽枝扦插后，如第一芽受损害，第二芽眼容易萌发出土，有利于提高扦插成活率。(2)催根处理。春季露地扦插时，常因气温变化大，白昼气温高于地温，插条先发芽，后生根，萌发的嫩芽常因水分、营养供应不上而枯萎，降低扦插成活率。人工加温催根，目的就是创造条件使葡萄枝蔓根原体细胞旺盛活跃起来。①电热温床催根：这种方法功效高，目前在中国已被广泛应用于葡萄育苗生产中。电热温床可设置在常温室内或塑料大棚中。为保持温度，地面上先铺一层4～5厘米厚的稻草、麦秸或锯末等，其上铺塑料膜。温床两边安放拉地热线用的木条，木条上钉约3厘米长的铁钉。一条长100米、功率为800瓦的地热线，5厘米线距，形成近5平方米的床面。每平方米可插5000～8000个插条。根据苗木数量，确定布线面积。整个温床布线后，上面铺5～6厘米厚的沙，将插条一个挨一个地紧紧插入沙中，芽露沙表。插好后用喷壶或淋浴喷头喷水，使沙层湿润。通过控温仪使根际部沙温达到25℃左右。10～15天绝大部分插条产生愈伤组织，少数生根，此时即可扦插入圃。塑料营养袋育苗采用单芽芽段。为保证每个营养袋中的芽段萌发成苗，催根处理到10天左右，大部分芽段已产生愈伤组织，而芽眼少数萌发或尚未萌发时，宜在床面上铺盖塑料布，以提高芽部温度与湿度，促进发芽。其后将已萌发的芽段插入营养袋中。②火炕催根：北方葡萄产区常用家庭火炕或甘薯育苗炕进行葡萄催根。门窗朝北的土房室温低，插条顶端芽眼处在较低的温度中，火炕催根效果好。火炕上先铺5厘米的锯末或沙，顶端芽眼露在外面。插好后充分喷水，使木屑湿透。生根处温度保持20～30℃，待插条绝大部分产生愈伤组织和部分生根时，即可移植苗圃或定植。③植物生长调节剂：用生长调节剂处理的插条能提高酶的活性，促进分生细胞的分裂，加速生根，以提高扦插成活率。(3)苗圃地准备。苗圃地应选择交通方便，地势平坦，向阳背风，排灌条件好的地方。在南方由于雨水多，应选排水良好的缓坡地或平原高燥地，坡度在2°～5°。平原的地下水位宜在1米以下，低洼地不宜建圃。苗圃地要求土层深厚，土质疏松肥沃，pH值以6.5～7.5为宜。酸性土壤和碱性土壤须经改良后才能利用。(4)扦插与管理①扦插：春季扦插前，北方地区于3月中、下旬，南方于2月底3月初，每公顷再施腐熟的厩肥22500～30000千克或腐熟的菜籽饼1500千克，过磷酸钙750千克，然后浅耙，整成长宽（8～10）米×1米的畦子。南方雨水多，为了排水方便畦面应高出地面20厘米。覆膜前1～2天用150倍丁草胺液喷洒畦面，以消灭杂草。扦插时期，北方在3月中、下旬，南方在2月中下旬，地温稳定在10℃以上。经过催根处理的插条，由于部分已经发芽，为避免晚霜危害，扦插时期比未催根处理的要晚一些，地温应达到15℃左右。为提高苗床温度，扦插前可覆盖黑色地膜或架设塑料小拱棚。扦插斜度以30°为宜，深度以上部芽露出2厘米为宜（图3-1）。注意防止倒插。株行距（12～15）厘米×（50～60）厘米，每公顷插12000～15000条。插后浇水。垄插是一种提高葡萄成活率较好的育苗方法。垄插将葡萄条插在垄背上，第一芽处在垄背的表土下。插后在垄沟内浇水，保持垄沟上部土壤疏松，利于插条萌芽出土。枝条下端接近浅沟面，土温高，通气性好，生根快，一般垄插比平畦扦插成活率高，在生产中多为群众所采用。图3-1 葡萄扦插②管理：北方地区春季干旱，透水性强的沙质土壤，扦插后一般7～10天浇一次水；持水性强的黏重土壤，浇水的次数不宜过多，以防降低地温或通气不良，影响生根。插条发芽后，根据土壤湿度可浇水4～5次。北方7—8月为雨季，到7月下旬至8月上旬，为了有利于枝条成熟，一般应停止浇水。南方7—8月葡萄生长中后期降雨少，需根据实际情况浇水。为了提高地温，改良土壤通气条件，降雨及浇水后要及时中耕。中耕深度开始宜浅，以后逐渐加深。南方4月下旬至6月上旬，北方6月上旬至7月上、中旬，苗木进入迅速生长期，需要大量的养分，故应追施速效性肥料2～3次。第一次以氮肥为主，第二次以磷、钾肥为主。追肥量每公顷人粪尿15000～22500千克（或硝酸铵150～225千克，磷酸二铵150～225千克），过磷酸钙225～300千克，草木灰450～525千克。7—8月，幼苗主梢长至8叶以上摘心，副梢留1～2叶摘心，3次梢同样留1～2叶摘心。幼苗基部的2～3个副梢从基部摘除，以利通风。如幼苗生长高度不够时，应适当推迟摘心时期，到8月底、9月上旬高度不够的，也应一律摘心。（1）苗地准备。由于营养袋育苗不需要利用场地的土壤，因而建大棚和阳畦时可不考虑土壤质地，但必须建在向阳、背风、有水、电条件的地方。阳畦的建造很容易，仅用砖在平地上砌成内宽130厘米，高10厘米，长度不定的畦子，用竹片扎成拱高60厘米左右的支架，上覆塑料薄膜，背面用土将膜压住，加盖草帘即可。（2）营养土配制。营养袋育苗的培养土系用土、沙、肥配制而成。土壤应富含熟化的有机质，绝对禁止使用盐碱土和老墙土；沙以较粗粒的为好，带胶泥的细沙透水性差，不宜选用；肥料宜用腐熟的农家肥为好，不可用生的农家肥。营养土配置前，土、沙、肥应过筛，按2：2：1的比例配制，均匀地混合。（3）制袋、装袋与放置。塑料袋的大小以高14～16厘米、宽8厘米、口径5厘米为宜。袋的底部中央留好直径为1厘米的排水孔。袋装满营养土后，稍微蹾实，使土面与袋口平齐。然后，将袋整齐直立，紧密地摆在温室、塑料大棚或育苗地内，每平方米内约420个左右。（4）枝条剪截与处理。将准备好的健壮枝条，剪成单芽段。在芽眼的上方1厘米平剪，芽眼的下方4～5厘米处剪成“马蹄口”。茎段剪好后，在电热温床上催根，待绝大多数茎段产生愈伤组织和部分已经生根时，即可将萌发的芽眼插入袋中。在催根时，可以加生长激素来促进发根，常使用的生长激素为萘乙酸、吲哚丁酸等，使用浓度一般为：1000毫克/千克条件下，速蘸3秒；200～300毫克/千克条件下，室温，浸泡剪口1～2厘米，8～12小时。（5）扦插与管理。营养袋育苗的时间为：北方地区一般为3月上中旬开始为宜；南部地区可适当提前。过早，由于外界温度低，温室加温的时间需提前，消耗能源多，加大成本费用，大棚或阳畦由于保温条件简单，白天吸收的热量晚间不宜保存，温度提不高，影响插条发芽与生根；过晚，幼苗生长后期气温过高，棚内、畦内温度难以控制，影响幼苗生长。扦插前，用轻喷水的方法，先将袋内的土壤慢慢地喷透，然后扦插芽段。扦插深度以芽眼与袋土表面平齐，或略高于土表面(图3-2)。扦插时苗床袋温须在10℃以上。图3-2 营养袋育苗芽段扦插后，管理方面要重点做好两方面的工作；一是掌握袋内含水量。土壤过干，轻则影响芽段生根、发芽与生长，重则使芽段或已萌发的幼苗干枯死亡；土壤过湿，芽段不生根，生了根的幼苗，也会因空气不足而死亡。由于塑料袋透气性差，在生产中易发生水量过大，导致育苗失败。扦插后，前期由于气温不高，土壤蒸发量小，每隔2～3天喷一次水。后期由于气温高，苗木大，叶片增多，蒸发量大，每隔1～2天或1天喷一次水。要根据土壤湿度及苗木的生长情况喷水，不要盲目地喷水。二要掌握好温度。早春外界气温低，要依靠加温或覆盖草帘提高温度，白天温度保持在25℃左右。晚上袋温不低于13℃。春末夏初气温转暖，此时应保持畦内温度在25～30℃，最高不超过35℃。空气湿度应保持在：前期90%左右，后期降到70%～80%。用此法育苗，当年定植，当年成园。只需二三个月，不用大的育苗场地，可培育出大批整齐一致的苗木，建立大型的葡萄生产基地。（1）苗床准备。绿枝扦插苗床一般应设置在通风良好的地方，也可设置在建筑物北侧，每日有直射光照数小时的地方。床宽1.21～1.5米，长可根据需要而定，高20厘米左右，四周用砖砌成。苗床铺1.3～1.6厘米厚的沙子。（2）插条准备。开花期后一个月内选择半木质化粗壮副梢或主梢，从芽上1厘米处平剪成双芽枝或单芽枝。如为单芽枝，可在芽下3～5厘米处剪断；如为双芽枝，可在高处芽以上1厘米处平剪。（3）扦插与管理。将剪好的插条，立即浸入水中或盖上湿布，放在阴凉处。扦插前用500～1000毫克/千克吲哚丁酸或萘乙酸、吲哚乙酸（生长素）溶液浸蘸插条基部3～5秒，取出后扦插于苗床中，株、行距10厘米×12厘米，深度以芽露出沙面1厘米为宜。插完后充分洒水并盖上塑料棚，晴天10时到16时棚外要遮阴，使光强度为自然光照的30%～50%，降低苗床温度。为保持棚内90%以上的湿度，不使枝条脱水，棚内最好安装喷雾设备。绿枝扦插最适温度为25～28℃，在18～35℃范围内也能获得较好的生根效果。绿枝扦插两周左右即可生根，成活率可达86%～100%。当幼苗具有3～5个叶片和良好发育的根系时，可进行炼苗，再后移入苗圃或定植。用来进行压条繁殖的新梢长至1米左右时，进行摘心并水平引缚，以促使萌发副梢。副梢长至20厘米时，将新梢平压于15～20厘米深的沟中，填土10厘米左右，待新梢半木质化，高度50～60厘米时，再将沟填平。夏季对压条副梢进行支架和摘心，秋季挖起压下的枝条，分割若干带根的苗木。春季萌芽前，将植株基部预留作压条的一年生枝条平放或平缚，待其上萌发新梢高度15～20厘米时，再将母枝平压于沟中，露出新梢(图3-3)。如不宜生根的品种，在压条前先将母枝的第一节进行环割或环剥，以促进生根。压条后，先浅覆土，待新梢半木质化后逐渐培土，以利于增加不定根数量。秋后将压下的枝条挖起，分割为若干带根的苗。老葡萄产区，也有用压老蔓方法在秋季修剪时进行。先开挖20～25厘米的深沟，将老蔓平压沟中，其上1～2年生枝蔓露出沟面，再培土越冬。在老蔓生根过程中，2～3次切断老蔓，促进发生新根。秋后取出老蔓，分割为独立的带根苗(图3-4)。图3-3 二年生枝压条繁殖图3-4 多年生枝压条繁殖嫁接苗是由接穗与砧木两部分组成，它兼有发挥二者特性的作用。接穗采自性状稳定的优质丰产植株，因而能保证母本的优良性状；利用砧木的抗逆性，可以加强品种的抗旱、抗涝、抗寒、抗盐碱和抗病性，以扩大葡萄的种植范围。如我国东北、内蒙古等冬季严寒地区，广泛地利用山葡萄、贝达等作为葡萄栽培品种的抗寒砧木，可以大大地提高葡萄品种的抗寒能力，提高了葡萄品种的越冬能力；在我国黄河故道地区，有大面积的盐碱地，也可以通过抗性砧木的利用，来增加葡萄品种的丰产性和葡萄果品的品质。影响嫁接成活的因素，主要决定于砧木和接穗的嫁接亲和性。葡萄嫁接时，除了亲和性外，砧木与接穗的质量同样也是很重要的。接穗必须品种纯、健壮、芽饱满、不带病毒。夏季绿枝嫁接接穗应采用当年半木质化新梢，粗度以0.4～0.6厘米为宜。硬枝接穗结合冬剪进行采集并沙藏。绿枝接穗应剪去叶片，留0.5厘米的叶柄，用湿毛巾和塑料薄膜保湿，边采集边嫁接。新梢半木质化时，芽眼易从枝条上剥取。南方在5—6月，北方在6—7月为芽接时期。葡萄芽接一般采用盾形或方块形两种方法。此两种方法均不带木质部，成活率高。盾形削芽法系用嫁接刀从芽上1厘米处横切再从芽两侧向下切成盾形切口，深达木质部。方块形削芽法在接穗芽眼上、下、左、右各切一刀同样深达木质部。将芽切成长2.5厘米、宽1.2厘米的长方形块，取下芽片。在砧木离地面20～30厘米的节上，去掉与接芽同样大小，不带木质部的长方形片，然后将接芽粘贴在砧木节上的接口处，并用塑料条绑好(图3-5)，接芽和叶柄露在外面。然后约经过10天进行检查，接活的芽，芽片新鲜，叶柄一触即脱落。15天以后，将塑料条去掉。如果当年可以成苗的，可及时在接芽的上方2～3厘米处，剪掉砧木枝条，去掉砧木上的萌蘖。当年不可以成苗的，剪砧和除萌的工作应放在秋末、冬初进行。图3-5 方块芽接法枝接法的种类主要有两种，分别为劈接和舌接。劈接又分为绿枝嫁接和硬枝嫁接。1.绿枝嫁接绿枝嫁接是葡萄育苗的重要方法之一。一般来说，嫁接的时期在5—6月，砧木和接穗的枝条都达到半木质化时进行。品种的主梢和副梢均可以作为接穗的来源。采下的绿枝应及时去除叶片，仅留1～2厘米的叶柄，并用湿布包好，以防止水分的散失。接穗可以有1～2个芽，最好是刚刚萌发尚未吐叶的夏芽(图3-6)。嫁接的时间以阴天和多云天气最好，如果是晴天，则在10时前和17时后进行较好。夏季的绿枝嫁接苗，当年秋季即可出圃。该种方法比较简单，成活率可以达到80%以上。图3-6 绿枝嫁接法2.硬枝嫁接硬枝嫁接有舌接和劈接两种方法。舌接法主要在室内进行，劈接法在室外进行。用作接穗和砧木的枝条（或苗木）应生长充实，成熟良好。接穗剪留一芽，芽上端留1.5厘米，下端4～6厘米。砧木长约20厘米。舌接法的砧木与接穗的粗度应相同，劈接法的砧木可等于或粗于接穗。舌接法是先将接穗或砧木接口处削成斜面，斜面长为枝粗的1.5～2倍；再在砧木斜面上靠近尖端1/3处和接穗斜面上靠近尖端2/3处，各自垂直向下切一刀，深1～2厘米，然后将两舌尖插合在一起(图3-7)。劈接法是先将接穗下端削成尖楔形，两边的斜面长度应相等，长约2厘米，砧木上端中央纵切一刀。然后将接穗插入砧木裂缝中，并对准形成层。劈接方法简便，但不如舌接牢固，需用塑料薄膜带等绑扎(图3-8)。生产上，劈接法也常被用来更换老品种。在北方地区，嫁接时期为葡萄伤流前或伤流期间进行，即3—4月；南方地区可以适当提前。图3-7 舌接法图3-8 劈接法为了提高穗、砧枝条接口愈合率，可在电热温床或火炕上加温处理，经15天左右，结合处已愈合，下部大多形成愈合组织或生根，此时即可定植。栽植时，接口应与地面平，以免接穗生根。由于愈合组织与砧木上的细根极易风干，栽植前嫁接好的插条应放入水中或用湿布包扎。栽植后应保持土壤湿润。葡萄起苗在秋末冬初落叶或霜后进行。起苗前应先做好准备工作。起苗后进行必要的剪根，根据苗的粗度确定留梢长度。分级要求：品种纯正、地上部成熟枝条健壮、充实，具有一定的高度与粗度，芽饱满，根系发达，须根多，无严重病虫害和机械损伤；接合部位要良好。苗木的分级标准，可以按照农业部颁布的国家行业标准(NY 469—2001)进行。表3-1、表3-2是国家颁布的农业行业标准——葡萄苗木标准。项目级别一级二级三级品种纯度≥98%根系侧根数量≥5≥4≥4侧根粗度（厘米）≥0.3≥0.2≥0.2侧根长度（厘米）≥20≥15≤15侧根分布均匀舒展表3-1 葡萄自根苗标准项目级别一级二级三级枝干成熟度木质化枝干高度（厘米）20枝干粗度（厘米）≥0.8≥0.6≥0.5根皮与枝皮无新损伤芽眼数≥5≥5≥5病虫危害情况无检疫对象表3-1 葡萄自根苗标准（续）-1项目级别一级二级三级品种与砧木纯度≥98%根系侧根数量≥5≥4≥4侧根粗度（厘米）≥0.4≥0.3≥0.2侧根长度（厘米）≥20侧根分布均匀舒展枝干成熟度充分成熟枝干高度（厘米）≥30接口高度（厘米）10～15粗度硬枝嫁接（厘米）≥0.8≥0.6≥0.5绿枝嫁接（厘米）≥0.6≥0.5≥0.4嫁接愈合程度愈合良好根皮与枝皮无新损伤接穗品种芽眼数≥5≥5≥3砧木萌蘖完全清除病虫危害情况无检疫对象表3-2 葡萄嫁接苗标准苗木检疫是防止病虫害传播的有效措施。苗木出圃时要进行消毒。消毒的方法一般用喷洒法和浸泡法，也有用熏蒸法。苗木多用3波美度石硫合剂；也可用2.5波美度石硫合剂或0.1%升汞水浸苗10～20秒，然后用清水冲洗根部。用800倍50%水胺硫磷溶液浸泡接穗2～3秒，对防治粉介壳虫效果良好。用湿沙埋放在荫凉的房屋内，或选避风背阳、不积水的地方挖假植沟，深约30厘米，长、宽视苗木数量而定，苗木约1/3埋入土中，根部用湿沙填充。如埋放时间过长，要勤检查，以防湿度过大，使根部霉烂或沙、土过干而致苗木脱水死亡。严寒天气应采取防冻措施。营养袋苗需用木箱装运。营养袋直径5厘米，苗高15厘米左右，箱子的高度不应低于25～30厘米。每个底面为60厘米×30厘米的箱子，能装70～80株苗。苗木要直立、整齐、紧密地放在箱内。装苗前一天须喷透水。