托夫勒20世纪70年代在《未来的冲击》中写到：几千年人类经济发展的总历史将表现为三个阶段：即产品经济时代（包括前产品经济时代和后产品经济时代）、服务经济时代和体验经济时代。美国战略地平线LLP顾问公司的创始人帕恩二世和吉尔摩认为，经济价值演变过程可分为四个阶段：商品、货品、服务和体验。他们在《哈佛商业评论》中写到：“随着服务像它以前的货品一样越来越商品化，比如只有价格的长途电话服务，体验逐渐成为所谓的经济价值的下一步……欢迎来到体验式经济时代”。任何时代经济活动的产生和发展，都是生产力发展与人们需求不断升级相互作用的产物。经过了以产品生产为核心的产品经济时代，再经历营销策略核心由产品至上转为服务第一，由生产商和分销商合作完成的高效有序的服务体系为核心竞争力的服务经济时代。体验经济是以客户为中心的经济，它反映人类的消费行为和消费心理正在进入一种新的高级形态。体验经济时代是人类需求层次升华的必然趋势。体验营销与传统营销方式相比，有共性，也有其特殊性。相同点就是它们都是为了满足消费者的需求。它们的区别主要在于提供物、提供方式等不同。体验营销主要有个性化、无形性、延续性、互动性、主观性等特点。个性化：产品营销中强调提供标准化的产品，服务营销强调产品和服务的定制，而在体验营销中，由于个体存在巨大差异性，要吸引个体参与达到互动，在营销活动设计中就必须体现较强的个性化。当然消费者也乐意为所获得的体验价值承受相对高的价格。无形性：服务营销中服务的无形性是以商品为依托，制造商们通常的做法是将商品和服务捆绑销售，以达到更好的服务于消费者，当然许多服务本身也是一种体验。在体验营销中的无形性更强调顾客所能感受到的一种难忘的、身临其境的体验，一种被感知的效果。延续性：消费者所获得的感受并不会因一次体验的完成而马上消失，具有一定的延续性，如消费者对体验的各种回忆等，有时消费者事后甚至会对这种体验重新评价，产生新的感受。因此体验营销的效果是长期性的，一旦消费者对体验满意，他们对公司往往产生高度忠诚。互动性：在产品营销中，消费者是企业的“用户”；在服务营销中，消费者被称为“客户”；而在体验营销中，消费者是企业的“客人”，也是体验活动的“主人”。因为体验活动必须要有消费者的参与，进而在消费者和企业之间发生一种互动行为。体验营销效果是消费者在互动活动中的感知效果。主观性：在产品营销中，企业用价格或其他差异化手段区别于其他企业，在服务营销中企业通过服务价值的让渡使顾客获得更大的利益；而体验营销活动的最终效果是建立在个人主体印象（主要包括时间、空间、技术、真实性、质地、规格等方面的特征）的基础上的，它包含了个体差异的影响，对不同的个体有不同的感受，表现为一种个体的主观性。所有这些体验经济时代的消费需求变化趋势，对于企业而言，既是机遇，又是挑战。针对体验经济时代消费需求的变化趋势，企业如果不能跟上时代的步伐，意识不到营销规则的变化，任你曾经如何辉煌终将走向毁灭。鉴于此，为适应体验经济时代的营销环境新变化，企业营销战略必须做出相应调整，需进行系统的体验营销整合和实施。某制药有限公司推广上市的国际新型儿科止泻药乐度消旋卡多曲颗粒，由负责推广上市的品牌经理负责，从体验营销与品牌互动的角度入手，进行了乐度的体验营销模型的构造及实施。乐度消旋卡多曲颗粒是SFDA批准的四类新药，为肠道脑啡肽酶抑制剂——世界上第一个抗分泌药。1993年由法国Bioprojet Pharma公司开发成功并上市，1995年进入欧盟市场，1999年进入北美市场。2003年被加拿大儿科协会推荐为治疗婴幼儿腹泻常规用药。美国疾病预防控制中心在《急性小儿胃肠道疾病诊治手册》中也将该产品推荐作为临床验证有效的儿科止泻药。现阶段传统营销模式下的新药产品上市是在生产商的配合下，各级分销商经常组织医院药剂科人员及部分主治医师召开产品发布会。但是乐度为国内第二家上市的消旋卡多曲颗粒，竞争对手已占据了国内大部分重点儿童医院，采用传统的新药上市模式，可能无法在短期打开销售局面。而体验营销能带来的营销学上的变革，解决营销的差异化问题。运用体验营销，可以提炼品牌，表现消费个性；可以传播品牌创意与执行，建立消费理解和尊重；可以吸引顾客参与品牌互动，实现品牌认同的忠诚。针对乐度上市背景，采用体验营销，可避免与直接竞争对手的价格战，能在市场份额及销量持续增长方面有所突破。体验就是指人们用一种从本质上说以个人化的方式来度过一段时间，并从中获得过程中呈现出的一系列可回忆的事件。体验营销是满足消费者体验需求的营销模式。体验营销模式构造基础是站在消费者感官、情感、思考、行动、关联5个方面研究消费者购买行为，这种思考方式突破了传统上的“理性”消费者假设。传统营销过分强调产品的功能利益，而忽视了顾客所需要的感受和体验。体验营销的核心观念是，不仅为顾客提供满意的产品和服务，还要为他们创造和提供有价值的体验。体验营销模式的结构体验营销模式措施影响个人的三种模式。第一种是关系干预，这是最佳的干预模式，是在建立贴近于目标人物的关系之后，获得进行引导的优势地位；第二种是利益干预，主要通过利益引导，展示产品的卖点。在商业行为中，要塑造符合消费者功能与情感需要的主题；第三种是规则干预，这种干预是有强制性的，它的利益空间小，但简单易做。夸耀型的和对于对手排斥型的信息通常属于这类。因此，体验营销最接近关系干预与情感利益干预。体验消费行为模式都是由四个环节构成：看（See）→听（Hear）→使用（Use）→参与（Participate），即SHUP模型，这四个环节在时间维度上恰成先后序列，可以先后衔接为持续的多个循环圈。看就是信息受众通过广告和公开场合的传播获得感受。传播方式一种是直接传播主要是通过实物传播，另一种是间接传播，即通过广告来传播。乐度消旋卡多曲颗粒，设计了卡通形象的乐度宝宝，以及经典传播口号“无泻可急，全家开心”两者相配合，贯穿其包装、杂志平面广告、广告宣传片，就医生及患儿家长对腹泻儿童希望快速止泻的需求进行了从用药指导手册，品牌提示物，广告等系统传播。听，也就是由别人之口介绍来的信息，是已经被假定为是实际的使用总结。听来自两方面，一是间接，即多环节的传说；另一种是直接，即实际用户或者消费者的分享。乐度上市伊始，就选择重点儿童医院，进行上市后拓展性研究，请权威专家试用乐度后写出专业临床研究总结报告，在专业杂志上发表，并召开乐度临床经验分享会。另外编写乐度的科普文章，指导患儿父母选择止泻药及进行患儿护理等。使用包括他人使用和自己试用。实际使用效果则影响着重复购买的可能性。他人使用是一种间接的体验，自己试用是卖方向消费者展示产品的售点。乐度在各大药店终端，开展万人大赠药活动，万名患儿及父母共同体验乐度的“30分钟开始起效，平均治愈时间28小时”的快效性的特点。参与包括情景设置和实物展示。情景设置包括路演和展会展示，是卖方设置的一个情景，要消费者参与到设置好的情景中，以带动消费者的购买欲望。乐度开展以直销营销（联谊会营销）为主的系列上市会。在SHUP模型各个环节中，广告的传播度最广，但是信用度是低的，消费者口碑的传播能力与信用都在中高水平；实际使用在消费者中产生的信用度最高，但传播广度有限；试用的信用度较高，且传播的广度较实用为高，他人使用的信用度与传播的广度都属于中等；情景设置的信用度较高的，传播度较低。基于上述分析，乐度的推广框架以直效营销（联谊会营销）、循环服务、数据库营销为主。直效营销就是集中性解决目标群体疑虑、增强目标群体全方位信心。循环服务就是稳定目标群体、建设长期忠诚客户，并坚持“扶上马，送一程”的服务准则，例如把对客户的一对一服务延伸到客户的家庭中（情感建设）。数据库营销内容包括收集客户信息（需求的现实状况、消费能力、消费方向、消费影响力），互动区域市场（渠道的掌握控制、活动效果的反馈与控制），活动实施反馈控制、加强沟通。直效营销为乐度上市初期推广活动的重点，下面就直效营销的意义及乐度具体开展的直效营销进行说明。首先，建设目标群体信任度，集中解决顾客疑虑（对公司、产品、营销方式）。因在传统方式下（一对一）存在一些疑问，比如：一般人认为销售人员对产品功效方面的解释和引导缺乏权威性，即使在接受（开处方）了产品以后也不可能彻底消除；此外，对产品功效偶然性和必然性存在疑虑，这是偶然性服务还是存在一般性的科学原理、具有普遍性的适应性？这些可以通过各种人员、各个方面的结果分享会消除。在联谊活动这种热烈的气氛中，单个顾客的情绪和思维一定会受到群体情绪和思维的影响。其次，解决并消除不信任感。不信任来自于对他人充满恐惧；自身利益受到损害、被他人所欺骗、在活动中受到尴尬。真诚、坚持用产品与目标群体对话，坚持群体的自身体验来确定对产品价值的评定、活动的目的是联谊不是推销。再次，提升目标群体的忠诚度。在联谊会营销中，在所有与会人员都充分肯定产品的氛围中，在使用、销售产品者的分享与感激中，目标群体彼此之间的内心会受到进一步的震撼与强化。联谊会营销把与会客户的信任与感激都凝聚到一起，产生一个共同的磁场。在这个磁场中客户始终不会愿意把目光从这种体验营销的企业和系统上挪开，会继续保持忠诚。最后，促进企业美誉度。通过对产品功效、包装、价值、原理等多方面生动详细的分析，让与会人员在心中对它重新定位，容易形成比较全面的印象，形成产品形象的立体化；体验营销服务是多对一的网络式服务和基地服务，它使全方位、全过程、亲情化、家庭化、人性化得到充分体现，消除了纯粹凸现的商业概念；对这种充分人性化的营销模式，通过彼此沟通感受更切身服务。无论是对产品、服务还是营销推广模式的认同，最后都会归结为对企业美誉度的提升。乐度主要针对药剂科人员、主治医师、分销商，以联谊会形式进行。在联谊会中，主要安排简单的专家讲座、使用者分享、文体活动（主）、公司经营理念的简单表述等。在比较有规模或准备良好的联谊会，可以主张适度邀请部分嘉宾。嘉宾可以是产品方面的、营销方面的、健康环保方面的，也可以是行业领导、社区领导。他们的论证会使目标群体确信不移，并在这种基础上能在会场之外形成持续不断、确信不移的口碑。也可以通过热烈真实的会场气氛，突出经验分享，形成对企业、产品良好的印象。此外作为乐度品牌的负责人，还应针对乐度的体验营销进行阶段性评估。体验营销的阶段性评估是一些产品在营销过程中容易忽视的重要环节，也是众多品牌难以做大的原因之一。缺少阶段评估一方面难以认识到不足，更重要的是会渐渐失去改进和增强体验营销的决心和意志而使营销活动流于形式。在体验营销实施的过程中品牌经理应长期对其效果进行阶段性评估，通过事实让营销团队切实看到体验营销的成效，真正感到体验营销的魅力。总而言之，体验营销并不是“空中楼阁”，它是一种更深入分析顾客体验的全新的科学方法。其不仅可以避免大量无效的广告投入，防止陷入无休止的价格战中，而且很容易锁住客户。最重要的是，体验营销对于乐度在上市初期能快速获得市场信息，取得一部分客户的信任和尝试，进而在医院覆盖和销量上有所突破起到了事半功倍的作用。也许体验营销是长期的、渐进的，不会一鸣惊人，但它确实为乐度品牌的长期健康发展打下基础。主要参考文献1.伯恩德·H.施密特.体验式营销.北京：中国三峡出版社，20012.刘凤军.品牌运营论.北京：经济科学出版社，20003.盛琦.新时期“一对一”顾客定制化旅游营销战略.南开管理评论.1999（3）

杨树是杨柳科（Salicaceae）杨属（Populus L.）植物的统称。为落叶乔木，是世界上分布最广、适应性最强的树种之一，分布于北温带。近年随着我国农业产业结构调整，杨树已成为平原重要的经济林木，优良的用材和绿化树种，但同时也造成了其病虫害的严重流行与发生，其中杨树溃疡病已成为为害其生长的重要病害之一。杨树溃疡病又称水疱型溃疡病，是为害杨树枝干的一种常见病害，通常以水渍状病斑为主，圆形或椭圆形，手压病斑有褐色水流出。初为圆形，极小，后水疱变大，直径0.5～2.0cm，疱内充满淡褐色液体，随后水疱破裂，流出淡褐色液体，遇空气变成黑褐色，同时把病斑周围染成黑褐色，最后病斑干缩下陷，中央有一纵裂小缝。该病几乎遍及我国各杨树种植区，其中以华北、西北和东北地区最为普遍、严重，近年来随着全国范围内“杨树热”的不断升温，各类品种层出不穷及种植面积的急剧膨胀，同时由于受经济利益的驱使，试验较少或不加试验，便盲目引进一些抗病性较差或不抗病的品种，加之气候异常，致使该病暴发流行，严重制约了杨树产业的发展。为了有效地防治杨树溃疡病，一方面可以筛选抗病的杨树品种；另一方面可一改善防治方法，加强防治力度。传统的杨树溃疡病防治方法多采用化学药剂（如福美胂、多菌灵）防治，但随着一些高毒药剂（如福美胂）的禁用，以及病原菌产生抗药性，需要不断研发高效、低毒、环境相容型的农药新品种。本文对河北省景县农林复合系统中的杨树溃疡病病原进行了分离和鉴定，同时采用植物提取物对杨树溃疡病菌进行室内活性筛选和室外病害防治的试验，研究结果如下。杨树溃疡病病原为真菌，菌丝在PDA培养基上生长较好，初期菌落白色，有发达的气生菌丝，呈绒毛状至棉絮状。3天后菌落逐渐变为灰白色，最后为黑色，菌落初期有明显的灰黑色轮纹。分生孢子器暗色、球形，生于寄主表皮下，后外露，单生或集生，分生孢子梗短，不分支；分生孢子卵形、纺锤状或梭形，单孢，无色，有隔或无隔，具云纹。通过真菌的ITS序列与GenBank中其他真菌种类的ITS序列进行比对，综合形态和分子检测结果，病原鉴定为茶麃子葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea），属于子囊菌亚门的真菌。分别制备杨树（Populus×euramericana）叶提取物、皂荚（Gleditsia sinensis）刺提取物、黄芩（Scutellaria baicalensis）根状茎提取物、博落回（Macleaya cordata）果实提取物、虎杖（Polygonum cuspidatum）根提取物，采用带毒平板—菌丝生长抑制法，测定了上述5种植物提取物的抗菌活性，其中，黄芩、博落回和虎杖提取物对杨树溃疡病菌均具有很好的抑制活性。当培养基中提取物浓度为2mg/ml时，黄芩、博落回和虎杖提取物对杨树溃疡病菌菌丝生长的抑制率分别为52.94%、78.10%和57.19%。皂荚（刺）提取物和杨树（叶）提取物在浓度为2mg/ml时对杨树溃疡病菌菌丝生长的抑制率分别为37.91%和35.13%。进一步测定了黄芩、博落回和虎杖提取物对杨树溃疡病菌菌丝生长的半抑制浓度（IC50）分别为0.9675mg/ml、0.3125mg/ml和1.0219mg/ml。在5种植物提取物对杨树溃疡病的防治试验中，经两次（前后相隔15天）喷药后，博落回提取物的防治效果最好，浓度为0.40%时的防效为85.92%。虎杖提取物、黄芩提取物和皂荚提取物在浓度为0.40%时，防效分别为84.52%、74.18%和71.74%。杨树提取物在浓度为0.40%时，反而能促进杨树溃疡病病情的发展。以上研究结果将有利于杨树溃疡病的防治，促进杨树产业的快速发展，同时也为用于杨树溃疡病防治的新型杀菌剂研制提供了依据，为植物源农药资源的开发与利用提供线索。

番茄早疫病菌（Alternaria solani）是保护地和露地番茄生产的重要病害之一，为真菌性病害，为害植株后出现慢性枯萎，植株矮小，果实膨大等，可大幅度降低番茄的产量和品质。我国自20世纪80年代开始发生以来，已经成为番茄设施栽培的限制性障碍[1]。在防治上由于长期大量的化学农药使用，使病菌产生了抗药性，防效逐年降低，同时造成了一定的农药污染[2]。随着环境保护呼声的日益高涨，高毒农药的负面影响已引起世界范围的广泛关注，以高效，低毒农药逐步替代传统的高毒农药是农药发展的必然趋势。植物源农药可在环境中迅速分解，对环境无任何影响，是符合环境保护，农业持续发展方向的[3]。细辛（Asarum siebotdii）是多年生草本植物，据中华临床中药学（上卷）记载，根能入药，具有祛风，散寒，风湿弊痛，抗炎等功效，在中药学上有广泛的用途[4]。本实验用中药细辛的根提取物对番茄早疫病菌的菌丝生长及分生孢子萌发的抑制作用进行了室内活性测定，旨在为开发出一种经济、安全、有效的新型杀菌剂提供理论依据。1.1.1 供试样品 试验所用细辛采自山西省历山自然保护区，将采集的植物材料洗净后在室内阴干（约25℃），放入恒温箱内（40～45℃）烘干，磨碎，过60目筛，备用。1.1.2 供试菌种 番茄早疫菌（Alternaria solani），由山西农业大学农学院植物病理实验室提供。1.2.1 细辛提取物的制备 准确取3份细辛根粉50g，分别装入500ml小烧杯内，加入干粉5倍量的有机溶剂甲醇、氯仿、石油醚。室温下（30±2）℃浸泡3～5天后，过滤并浓缩至稠膏状，称取一定量的提取物，加2～3滴吐温80做乳化剂，并依次配成实验所需的浓度，4℃下保存。1.2.2 细辛提取物对番茄早疫病菌菌丝生长的抑制作用 采用生长速率法[5]，用打孔器取6mm菌落边缘生长旺盛的菌种，放在加药的PDA平板上培养，以培养基内加等量无菌水作对照，每次重复3次，置25℃下培养。用十字交叉法测每个菌落的直径，以其平均值代表菌落的直径，以下式求出抑制菌丝生长率：抑制菌丝生长率%=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.6）×100%1.2.3 细辛提取物对孢子萌发的抑制作用 分别将3种有机溶剂的细辛提取物制成最终浓度为1mg/ml的细辛提取液的PDA培养基。待培养基冷却后，取预先配置好的孢子悬浮液10μl，接种到直径为9cm的培养皿中央，用涂布器涂抹均匀，在25℃培养箱中培养48h，观查记录孢子萌发数量。每处理设5个重复，取平均值。计算孢子萌发率和抑制率。孢子萌发率（%）=已萌发孢子数/镜检孢子总数×100%抑制率（%）=（对照萌发率-处理萌发率）/对照萌发率×100%1.2.4 细辛氯仿提取物对番茄早疫病菌菌丝抑制中浓度（MIC）的测试 将细辛氯仿提取物稀释成5个浓度（4mg/ml，2mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml），测试不同浓度的提取物对番茄早疫病的病原菌菌丝生长的抑制作用，计算毒力回归方程及抑制中浓度（MIC）。细辛提取物对番茄早疫病菌菌丝生长的抑制作用实验结果如表1。在48h时，石油醚提取物的抑菌率为28%，氯仿提取物的抑菌率为66.67%，而甲醇提取物的抑菌率达到了50%。并且随着时间的推移，3种溶剂提取物的抑菌率都有所下降。同时与对照相比，处理的菌丝在培养皿中出现气生菌丝减少，变粗，向上生长现象。这一结果说明，3种不同溶剂的细辛提取物在浓度为2mg/ml时对番茄早疫病的病原菌均有不同程度的抑制作用。溶剂menstruum菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate48h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate144h抑制率Inhabitingrate甲醇methanol1.8550.002.9051.584.5748.82氯仿chloroform1.4366.672.5060.002.7359.57石油醚Petroleumether2.428.004.2024.216.918.71CK3.10—5.35—8.35—表1 细辛提取物对番茄早疫病菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhibitory effect of Asarum siebotdii extract against mycelia Growth of Alternaria solani细辛提取物对番茄早疫病菌孢子萌发的影响见表2。48h后，石油醚和氯仿提取物表现出了显著的抑制率，对分生孢子萌发抑制率分别为91.48%和88.79%，甲醇提取物表现出了较强的抑菌率，达到53.81%。实验过程中发现，对照皿在接种后32～48h即开始陆续萌发，而提取物各处理均不同程度地表现出萌发推迟的现象。溶剂menstruum孢子萌发率（%）Rateofgerminationofconidia萌发抑制率（%）Percentageofinhibition甲醇methanol42.8253.81氯仿chloroform10.4288.79石油醚Petroleumether7.9291.48CK92.92—表2 细辛提取物对番茄早疫病菌孢子萌发的抑制作用Table 2 Inhabiting effect of the different menstruum of Asarum siebotdii extract against conidiao production of Alternaria solani由表1可见，3种不同溶剂的提取物中氯仿提取物的抑菌效果最好，为了进一步确定其生物活性，求出MIC，将细辛氯仿提取物稀释成5个不同浓度，对病原菌进行测定。结果见表3、表4，6天后，浓度在4mg/ml时，氯仿提取物表现出了显著的抑菌率，达到77.14%，而浓度为0.25mg/ml时，抑菌率显著下降，只有9.5%。这一结果说明，细辛氯仿提取物对番茄早疫病菌菌丝的抑制作用与浓度成正相关，随着浓度的下降，抑菌效果也随之下降。同时在96h时求得毒力方程和氯仿提取物的抑制中浓度（MIC）为1.57mg/ml。病原菌Pathogen浓度（mg/ml）concentration菌落直径（mm）与抑制率（%）ColonyRadiusandInhabitingrate48h抑制率Inhabitingrate96h抑制率Inhabitingrate144h抑制率Inhabitingrate番茄早疫病菌Botrytiscinerea4.00001001.9573.622.2577.142.0001.2364.682.9354.404.1251.271.0001.6243.303.4344.634.7342.730.5001.8530.304.2329.045.7229.130.2502.0419.505.307.507.139.50CK2.39—5.72—7.82—表3 不同浓度的细辛提取物对番茄早疫病菌菌丝生长的抑制作用Table 3 Inhibitory effect of the different concentration of Asarum siebotdii extract against mycelia Growth of Alternaria solani处理Treatment毒力方程?RegressiveequationMIC??相关系数r番茄早疫病菌AlternariasolaniY=2.0910+1.6950x1.570.9707表4 细辛提取物对番茄早疫病的毒力Table 4 Virulence of the extracts of Asarum siebotdii seeds against Alternaria solani植物源农药活性物质主要来源于植物体内产生的次生代谢产物，据Swain于1977年报道，次生代谢产物已超过400000种，如有机酸、萜烯类、生物碱、类黄酮、甾体、酚类、蛋白质、单宁和多糖等[6]。据文献报道，苦参中含有苦参碱（Matrine）和氧化苦参碱（Oxymat-rine）等17种化学结构相似生物碱，其中以苦参碱为其最主要的活性成分，对病原菌有较强抑制作用[7]。另外，毛蒿植物中的毛蒿素，南欧丹参中的硬尾醇，苜蓿根部的苜蓿酸以及海红豆中的紫檀素，黄连体内的小孽碱等均具有很强的抗真菌作用[8]。本实验研究表明，3种溶剂的细辛提取物对番茄早疫病菌菌丝和分生孢子萌发都有不同程度的抑制作用，但它们之间的抑制作用存在差异，在抑制菌丝生长方面，氯仿提取物效果最好，甲醇提取物次之，石油醚提取物效果最差。在抑制分生孢子萌发方面，石油醚提取物效果最好，氯仿提取物次之，甲醇提取物效果较差。由于3种溶剂的极性不同，从以上实验结果初步推断细辛体内抑制番茄早疫病菌的活性物质不止一种，而且极性大小在石油醚和氯仿之间。今后的研究方向是探索分离细辛提取物中的活性成分，为进一步产品开发奠定基础。至于细辛提取物是否对其他病菌有抑制作用，有待在以后的实验中证明。

Rice stripe(RSV)has been known to distribute in rice areas all over the world,and it is very hard virus,transmitted by insect vectors,small brown planthopper(SBPH),Laodelphax striatellus,Fallen.Once the rice is infested,there is still no very effective measures to control,even the chemicals.The chemicals'effect is not ideal and more or less they could cause some environmental risks,so there is the common opinion in the IPM system that the rice varieties having resistance to rice stripe is one of the basic and effective measures to control this disease.In 2006 and 2007 for finding the resistant rice varieties that could be used for large scale in the field,the evaluation and screening of rice varieties were conducted in Jiaxing,Zhejiang Province.In 2006,there were 40 varieties provided for the experiement,just like Chunjiang 050,Xiushui 63,Y1,Zheda 510,Tai 03126,HZ586 and so on,and Jia 991 was set to be the control.Similar to 2006 studies,in 2007,there were 20 varieties used in 2006,and newly introduced into 17 varieties,just like Leyou 2,Jiaheyou 261,Bing 04～123,Jiashao 3.The control was still Jia 991.In 2006,the experiment was conducted in the yard of Shuangqiao Academic of Agricultural Science,Xiuzhou,Jiaxing.Last year in this plot rice was planted,and in winter no crop was planted.The water and fertilizer condition was good.The rice was seeded in 2th June,and transplanted to the field in 1st July.Randomed blocking design,and the size of every plot is 30m2,with three replications.The field management was as usual,except for no chemicals use for controlling the SBPH and RSV.In 2007,the experimental field was chose to north suburb of Jiaxing,where last year the RSV occurred hard.The experimental field condition and design were familiar with 2006,and total 111plots.Investigated Methods In 2006,after 5d from 1st July when the rice were transplanted,the investigation was conducted every 5d in field,till the diseases was stable,at that time the total rice tiller and the diseased tiller amount were recorded.Num.VarietiesDiseasepercentageinthefield(%)SSRP=0.05P=0.011Jiahe2156.03aA2Y25.33bB3Jiajing36485.24bB4Y33.9cC5Shaojing04-463.49dD6Jia991(CK)3.07eE7Yongjing04683.02efEF8Y62.88fgEFG9Tai04-42.83gFG10Xiushui032.73ghGH11Qianghu9142.73ghGH12Y102.59hiHI1336You7482.52ijHI14Xiushui092.51ijHI15ZH2512.42jkIJ16Xiushui1102.27klJK17Jingzhi202.27klJK18Y42.23lmJKL19Jia04-332.14lmnKLM20Jiahua12.11mnKLM21Xiushui632.04nLM22Jiahe2182nM23Zheda5101.99nM24Bing01-1131.74oN25R41011.69oN26Y51.59oN27Jingzhi270.94pO28Chunjiang0500.91pO29Chunjiang0510.91pO30Bing03-1230.88pO31Jiaheyou28880.87pO32Zheda5320.86pO33Y80.86pO34Y10.81pO35Ning04-450.45qP36Tai031260.44qP37HZ5860rR38Y70rR39Y90rR40JiaheyouTR0rRTable 1In 2007,after 15th May,when the seeds were seminated,the investigation was conducted periodically in seedling stage till 20th June,when the rice was transplanted,the total rice tiller and the diseased tiller amount were recorded.And in field,30th July,when the disease was stable,the same indexes were recorded.By the total rice tiller and the diseased tiller amount,the disease percentage could be got,and by DPS software the resistance of different rice varieties could be made with ANOVA method.From table 1,we could get that in 2006 the RSV occurred softly in the experimental field,the CK,Jia 991'disease percentage was just 3.07%.Shaonuo 04~46,Y3,Jiajing 3648,Y2,Jiahe 215's were higher than CK;but there were four varieties,Jiaheyou TR,Y9,Y7,HZ586,which no typical RSV was found.By ANOVA analysis,the resisstance of rice varieties were obviously different.Jiaheyou TR,Y9,Y7,HZ586,which no typical RSV was found,the resistance were the highest;the Yongjing 0468,Y6 and CK were in the same level and at P=0.01 there were no obvious difference;and Shaonuo 04～46,Y3,Jiajing 3648,Y2,Jiahe 215 resistance were weak.In 2007,in the field the RSV occurred seriously in the experimental field,the CK,Jia 991'disease percentage was 19.12%(Table 2).Disease percentage of Shi 1 and Yongjing 0468 were 27.8%and 25.65%,respectively;there were 16 varieties,for example Jia 991,the disease percentage were above 10%;and the disease percentage of HZ586,Chunjiang 051,Jiahe 218,Jiaheyou 555 and Y9 were below 2%.By ANOVA analysis,the resistance of these rice varieties were seriously different.Disease percentage of Shi 1 and Yongjing 0468 were obviously higher than CK,their resistance were weak;the disease percentage of HZ586,Chunjiang 051,Jiahe 218,Jiaheyou 555 and Y9 were far below from other variety,their resistance were high;and others resistance were in the middle level.In 2007,in the seedling field the disease percentage of Bing 04～132,Zheda532,Xiushui 09,Xiuishui 110 and Bing 05～15 were all above 5%;the disease percentage of was just 0.07%,and in the Chunjiang 051 there was no RSV found;Other varieties percentage of disease were in the middle of 5%and 0.07%(Table 2).Num.VarietiesDiseasepercentageinthefield(%)SSRP=0.05P=0.01VarietiesDiseasepercentageintheseedlingfield(%)SSRP=0.05P=0.011Shi127.8aABing04-1325.68aA2Yongjing046825.65aAZheda5325.6aA3Bing04-0819.62bBXiushui095.39aAB4Jia991(CK)19.12bBXiushui335.24abAB5Xiushui11018.5bBXiushui1104.85abcABCTable 2 Evaluation of rice varieties resistance to RSV (Jiaxing, 2007)Num.VarietiesDiseasepercentageinthefield（%）SSRP=0.05P=0.01VarietiesDiseasepercentageintheseedlingfield（%）SSRP=0.05P=0.016Bing05-1517.83bBCShi14.34abcdABCD7Bing01-11317.76bcBCJiahua14.34abcdABCD8Y517.33bcBCYongjing04684.24abcdABCDE9Jiahua116.5bcdBCBing05-154.15abcdeABCDEF10Xiushui3316.4bcdBCY53.78abcdefABCDEFG11Ning04-4516.26bcdBCBing04-083.66abcdefgABCDEFGH12Bing04-13215.75bcdBCJia991（CK）2.9bcdefghABCDEFGHI13Zheda53215.69bcdBCY22.88bcdefghABCDEFGHI14Y215.18bcdBCDBing01-1132.81bcdefghiABCDEFGHI15Shi215.06bcdBCDNing04-452.77cdefghijABCDEFGHI16Xiushui0914.99bcdBCDY12.66cdefghijABCDEFGHI17Y112.96cdeBCDEQianghu1712.52cdefghijkABCDEFGHI18Qianghu17112defCDEBing05-1142.48cdefghijkABCDEFGHI19Bing03-019.22efgDEFShi22.26defghijkBCDEFGHI20Bing04-1138.25fghEFGBing03-012.14defghijkBCDEFGHI21Jiaheyou6127.18ghiEFGHBing04-1131.69efghijkCDEFGHI22Bing03-1235.76ghijFGHJiaheyou2611.39fghijkDEFGHI23Leyou25.42ghijFGHJiaheyou6121.23ghijkDEFGHI24Jiaheyou2615.23ghijFGHBing03-1231.11hijkDEFGHI25Jiaheyou16204.76ghijFGHY71hijkEFGHI26Shaonuo04-464.36hijFGHChunjiang0500.99hijkEFGHI27Jiashao34.3hijFGHJiahe2180.94hijkFGHI28Chunjiang0503.22ijFGHLeyou20.9hijkFGHI29Y73.18ijFGHJiaheyou62230.72hijkGHI30Jiaheyou62233.1ijFGHJiaheyou5550.7hijkGHI31台031262.97ijFGHJiaheyou16200.5hijkGHI32Bing05-1142.9ijFGHY90.38hijkHI33HZ5861.83jGHHZ5860.32ijkI34Chunjiang0511.81jGHShaonuo04-460.24jkI35Jiahe2181.78jGHJiashao30.24jkI36Jiaheyou5551.53jHTai031260.07kI37Y90.94jHChunjiang0510kI续表2By ANOVA analysis,the different resistance of these rice varieties also existed.the disease percentage of Bing 04～132,Zheda532 and Xiushui 09 were higher,and their resistance were weak;the disease percentage of six varieties,Chunjiang 051,Tai 03126,HZ586,Shaonuo 04～46,Jiashao 3 and Y9,were lower,and they had comparatively high resistance.Through the rice varieties screening for resistance to rice stripe virus(RSV)in the seedlingstage and in the field in Jiaxing,in 2006 and 2007,the difference of rice varieties resistance to RSV could be found,and the resistance trends between different developmental stage and different year kept in the same trends.Chunjiang 051,Y9,Jiahe218,Jiaheyou 555,Tai 03126 and Bing 03~123,and so on,had the high resistance to RSV.Though most of the results showed that the varieties resistance behave the same in different developmental stage and different year,we also should notice that few varieties did not obey this trends,for example,Shaonuo04～46,in 2006 in the field it showed very weak resistance,but in 2007 in the seedling field it showed high resistance.This perhaps tell us that just use the index of disease percentage is not enough,and at the same time we could ignore that there is still no very clear criterion to evaluate the varieties resistance to RSV.These factors could influence our evaluation.In 2006 the RSV occurred softly in the experimental field,the CK,Jia 991 disease percentage was just 3.07%,but in 2007 the CK,Jia 991's disease percentage was 19.12%,far higher than that in 2006.That is because in 2007 we chose the field where in year before the RSV occurred seriously,and advanced the seeding date and transplanted date accordingly,which the two steps could make the optimal RSV occurring conditions.On other hands,in the same cultivated condition,the disease percentage different varieties could behave 10-folder difference,it could show us clearly that the varieties resistance could exert important role in the RSV IPM system.Research was funded by a grant from Zhejiang province Science and Technology Bureau.

豆瓣菜（Nasturtium officinale R.Br.）又名西洋菜、水蔊菜、水田芥，属十字花科豆瓣菜属植物。枝叶柔嫩青翠，性喜冷凉，较耐霜冻，是深受人们喜爱的冬春上市的水生绿叶蔬菜。有关豆瓣菜菌核病国内尚未有专门报道。该病1999年在武汉旱地栽种的豆瓣菜田中仅见零星发生，到2001年春发病田中的发病面积可达1.61%，甚至到10%左右，表明病害有增重的趋势。豆瓣菜的茎、叶、叶柄均可受害。以中、下部贴近地面匍匐或半匍匐生长的枝叶受害最重。田间病害呈点片状发生，不规则分布。因豆瓣菜分枝多，生长繁茂，茎呈匍匐或半匍匐丛生，故发病初期常需拨开丛生状植株，才能发现感病枝叶，后期因植株枯死而呈现近圆形至不规则形病区。茎部受害，水渍状，淡褐色，边缘不清晰，从病处向两端扩展，空气湿度大时生茂密的绵毛状白霉，继而在植株表面及病茎的空腔中菌丝集结成近球形、扁球形、鼠粪状或不规则的菌核。菌核初白色，成熟后黑色，内部白色。罹病植株病部软腐，但无恶臭，最后失水干枯而呈枯草黄色。叶柄症状与茎部同。病叶受侵处灰褐色或浅黄褐色，湿度大时亦生较稀疏的绵毛状白霉，最后病叶腐烂或干枯。该病一般在12月上中旬出现病株，1月下旬至2月上中旬是大棚中豆瓣菜菌核病的盛发期，大棚和露地均在3月上旬病情趋于稳定。在近几年的调查观察中，一直未见浅水栽植的豆瓣菜有菌核病发生，而旱地栽植的豆瓣菜，不论大棚或露地种植的条件下均可受害，并且大棚中的病情有较露地重的趋势。病茎失水干枯后，菌核极易脱落，而病茎空腔内的菌核则随病株残体遗留在土中。该病的初侵染，来自遗留在土中的菌核产生的子囊孢子。子囊孢子不能侵染健壮的枝叶，而极易侵染中下部贴近地面匍匐或半匍匐生长的衰老叶片，此后才能侵染健壮的枝叶。再侵染主要通过病患组织接触，由病部长出的绵毛状菌丝体完成。豆瓣菜的匍匐或半匍匐生长及分枝多、生长繁茂、枝叶交错的植物学性状和病原菌侵染循环特点，决定了其有利于菌核病菌的接触蔓延，而不利于子囊孢子的气流较远距离的传播，因而造成了植株中、下部枝叶发病的现象，这样就使豆瓣菜菌核病具有一定的“隐蔽性”，也导致田间病害呈点片状发生及不规则分布的特点。菌丝管状、无色，有分枝具隔膜，田间自然情况下菌丝体白色绵毛状，在病茎表面及被害茎的空腔里均可形成菌核。在测量的87个菌核中，其大小（长径）为2.0～7.0mm。菌核无休眠期。将菌核置培养皿中双层浸湿的滤纸上，13.5～16.0℃，室内散射光下培养很易萌发。一个菌核可生出一至数个子囊盘，子囊盘高足杯状，初淡褐色，后为暗褐色。柄长短因环境而异，在黑暗无光条件下，柄长可达6.0 cm以上。子囊盘中生有大量子囊和侧丝，子囊无色棒状，内生8个排列一行的子囊孢子。子囊孢子椭圆形，无色单胞，大小8.7～13.7μm×4.9～8.1μm。子囊孢子成熟后稍受震动（如打开供菌核萌发的培养皿的盖），即可看到状如烟雾的子囊孢子放射现象。据上鉴定，认为豆瓣菜菌核的分离物为Sclerotonia sclerotiorum（Lib.）de Bary。这是我们首次在豆瓣菜上发现有由核盘菌引起的菌核病。进一步研究发现该菌菌丝生长温度范围很广，其中在4～5℃时，菌落在PDA平皿上扩展速度为8.3mm/天、33℃时为2.0 mm/天、当温度达到35℃时，菌落几乎停止生长。病菌菌丝生长最适温度是21℃，在此温度下，菌落扩展速度达32.2 mm/天。

近些年，由于多种原因的影响，小麦黑胚病发生日趋严重，已经成为生产上的重要问题。由于该病危害，导致小麦籽粒质量和等级下降，影响种子出苗和幼苗生长，已成为小麦生产亟待解决的问题之一[1～5]。一些研究报道，黑胚病的主要病原菌链格孢（Alternaria alternata）可以产生致病毒素，甚至能够引起食道癌变，对人类健康有很大的威胁[6]。虽然一些学者对小麦黑胚病的发病规律、品种抗性、防治技术以及黑胚籽粒对小麦出苗和生长的影响做了不少研究工作，但关于黑胚病菌链格孢的致病机制尚不清楚，对该病原菌的致病毒素未见报道[7～9]。对于毒素的致病机理，一些研究认为，是毒素造成了寄主植物某些生理生化方面的异常从而引起了病害症状[10～17]。本研究的目的是弄清小麦黑胚病优势病原菌链格孢所产毒素的生物活性和基本性质，了解病菌的致病机理，为进一步研究工作奠定基础。1.1.1 供试小麦品种 抗病品种：豫麦47、豫优1号、科优1号；感病品种：豫麦18、豫农9901、漯麦4号；种子由国家小麦工程技术中心和河南省农业科学院小麦所提供。1.1.2 供试菌株 小麦黑胚病菌链格孢（Alternaria alternata），由本实验室分离鉴定和保存。1.2.1 粗毒素的制备 转接黑胚病菌菌种于PDA 培养基上培养7d，然后取直径为6.5mm 大小的菌丝块，接种到150ml pH4的PSK液体培养基中（250ml三角瓶），每瓶一块，在25℃、110r/min恒温摇床上培养10～15天，至菌丝变黑。将培养液用滤纸过滤，滤液经高速离心，取上清液用0.45μm 微孔薄膜过滤，得无菌滤液。采用种子萌发和根长抑制法进行毒素生物活性测定。1.2.2 生物学活性测定1.2.2.1 病菌毒素对种子萌发的作用 选取饱满的小麦种子，用0.1%HgCl2进行表面消毒3min，然后用无菌水冲洗干净并用灭菌的滤纸将种子表面的水吸干。取直径9cm的培养皿，放入一张灭菌的滤纸，用5ml无菌滤液、1/4的稀释液、1/2的稀释液和2倍浓缩液的无菌滤液分别浸泡小麦种子，放置在（25±1）℃的培养箱中，3天后记载种子萌发率，以根长超过种子直径者计为萌发，计算种子萌发率和抑制率。抑制率（%）=（清水对照种子萌发率—处理种子萌发率）/清水对照种子萌发率×1001.2.2.2 病菌毒素对种子根生长的作用 选取饱满的小麦种子，加水浸泡12～24h时，倒掉水并用无菌水冲洗3遍后再放到25～26℃恒温条件下催芽。待主根长约2mm时，将种子胚向下摆在事先已铺有毒素浸湿的纱布（或滤纸）的培养皿内，再在种子上覆盖二层同样处理的滤纸，置25～26℃黑暗下培养48h，测定主根长度，并计算抑制百分率。1.2.2.3 病菌毒素滤液对小麦籽粒黑胚率和千粒重的影响 制备病菌孢子悬浮液（10×10倍显微镜下，20～30个孢子/视野）和粗毒素滤液，在扬花后5天、10天和15天分别喷洒到扬花前已套袋的小麦穗上，并在接种后再次套袋。选取3个感病品种和3个抗病品种，每品种每次接种20穗。收获后调查籽粒黑胚率及千粒重。1.2.3 病菌毒素的理化性质测定1.2.3.1 毒素粗提物中蛋白与非蛋白部分的活性测定 在培养滤液中加入2倍体积的甲醇，随后将该培养滤液于10℃下3000r/min离心20min，得到含蛋白质的沉淀（即蛋白部分）和不含蛋白质的上清液（即非蛋白部分）。用蒸馏水将蛋白部分稀释至原培养液体积，非蛋白部分用旋转蒸发仪于60℃下减压蒸发充分除去甲醇后，也用蒸馏水稀释至原培养液体积，分别检测其生物活性，每处理3次重复，以未经处理的培养滤液和清水为对照。1.2.3.2 毒素的酸碱稳定性测定 将毒素培养滤液的pH值用1mol/L NaOH和HCl分别调至3、4、5、6、7、8、9、10。于常温下放置24h后，再调回原值，在60℃水浴中浓缩至原体积，进行活性检测。每处理2次重复，以未经处理的培养滤液和清水为对照。1.2.3.3 毒素的热稳定性测定 将无菌滤液分别于60、80和100℃水浴中处理20min、30min、40min、50min和60min，或于121℃高压灭菌处理20min，用无菌蒸馏水补足损失水分后，检测其生物活性。每处理2次重复，以未经处理的无菌滤液和清水为对照。1.2.4 毒素提取物对小麦种子几种酶活性的影响 选取饱满的小麦种子，表面消毒后置于培养皿中，用浓缩2倍后的无菌滤液处理种子，分别在处理前，处理后3h、6h、12h、24h、36h和48h取样进行酶活测定。1.2.4.1 多酚氧化酶（PPO）提取与活性测定 称取材料0.2g，冰浴研磨成匀浆。加入2ml 0.02mol/L的磷酸缓冲液（pH6.8），于4℃下4000r/min离心15min，上清液即为PPO粗提液。取粗提液100μl，加入pH6.8磷酸缓冲液1.5ml，混匀后于30℃水浴中保温10min。然后加入0.02mol/L邻苯二酚1.5ml，立即计时，于分光光度计398nm下测其3min内OD变化值，以每分钟增加0.01个OD值定义为一个酶活性单位（U），对照为3ml的磷酸缓冲溶液。各样品均重复测定3次。1.2.4.2 过氧化物酶（POD）提取与活性测定 取材料0.2g，冰浴研磨成匀浆。加入2ml 0.05mol/L的磷酸缓冲液（pH6.0），于4℃下4000r/min离心15min，上清液即为POD粗提液。采用愈创木酚法，在470nm波长下测定吸光值，然后以每分钟每克鲜重OD值变化1.0所需的酶量为一个酶活单位（U），对照为3ml的磷酸缓冲液。各样品均重复测定3次。1.2.4.3 SOD酶活性测定 取材料0.2g，冰浴研磨成匀浆。取4ml的SOD反应液与小烧杯中，加入50μl酶提取液，在加200μl核黄素，混匀（以pH7.8磷酸缓冲液代替酶液作为对照）。在光下反应10min，黑暗终止反应，与560nm下测吸光值。测定结果表明，病菌培养滤液对种子萌发和小麦根系的生长都有明显的抑制作用。培养滤液原液种子根伸长抑制率高达90.18%，对种子萌发抑制率也达到65.0%。浓缩两倍的培养滤液对种子萌发抑制率高达100%，种子根生长抑制率达到99.27%。随着培养滤液浓度的降低，对种子萌发和根系生长抑制率也逐渐下降（表1）。培养滤液浓度平均种子萌发率（%）平均种子萌发抑制率（%）平均根长（cm）平均根长抑制率（%）培养滤液2倍浓缩液0e100.000.02c99.27培养滤液原液35.00d65.000.27c90.18培养滤液1/2稀释液70.00c30.001.18b57.09培养滤液1/4稀释液87.50b12.502.74a0.27清水对照100.00a—2.75a—表1 链格孢毒素培养滤液对小麦种子萌发和根系生长的影响利用病菌孢子悬浮液和病菌毒素滤液分别接种处理小麦穗部，在收获后统计籽粒黑胚率，结果发现病菌孢子悬浮液和病菌毒素滤液处理籽粒黑胚率均比清水对照显著提高，其中病菌孢子悬浮液接种黑胚率高于毒素滤液处理，且扬花后5天和10天接种病原菌发病较厉害。（表2）。处理处理时间（天）感病品种抗病品种漯麦4号豫农9901豫麦18豫麦47豫优1号科优1号CK（套袋）—2.41f3.77e2.35e2.87f0.78e0.79e毒素滤液扬花后5天3.00e6.28d4.24d6.78e2.13c0.95e扬花后10天4.81c15.61c8.53b10.44c2.71b1.51c扬花后15天3.85d6.63d2.82e9.57cd1.60d1.19d孢子悬浮液扬花后5天10.00a19.71a13.61a16.40b2.76b3.03a扬花后10天3.93d15.33c5.86c8.72d2.88b1.54bc扬花后15天6.69b18.28b7.80b18.42a4.36a1.76b表2 链格孢毒素滤液和孢子悬浮液处理后小麦籽粒黑胚率 （%）利用病原菌孢子悬浮液和毒素培养滤液分别处理6个小麦品种的麦穗，发现有些品种籽粒千粒重明显下降，损失率最高达到32.27%，与清水对照差异十分显著。而且，用毒素处理的小麦籽粒千粒重的影响还要大于接种病原菌孢子悬浮液的影响（表3）。处理处理时间（天）感病品种抗病品种漯麦4号豫农9901豫麦18豫麦47豫优1号科优1号CK（套袋）—48.17a47.85a48.28a48.03a47.57a42.32a毒素滤液扬花后5天46.70b36.65d42.83c32.53e41.33c35.37cd扬花后10天36.53c41.20b42.53c34.23d39.39d36.75c扬花后15天46.39b38.58cd40.55d35.01d33.72e33.83e孢子悬浮液扬花后5天46.79b40.11bc44.74b42.98c43.22b35.37cd扬花后10天47.11ab42.76b42.98c45.50b38.28d40.03b扬花后15天46.40b40.39bc41.39cd45.26b33.73e34.33e表3 链格孢毒素滤液和孢子悬浮液处理后千粒重2.4.1 病菌培养滤液中蛋白与非蛋白部分的活性测定 由实验结果可以看出，培养滤液中蛋白等大分子物质部分对种子萌发没有抑制作用说明该部分无致病活性，而非蛋白部分队种子萌发抑制率则与培养滤液原液相似，说明其保留了病原菌培养滤液的致病活性（表4）。处理滤液蛋白部分滤液非蛋白部分培养滤液原液清水对照平均种子萌发率（%）98.3a47.33b46.67b100.00a平均种子萌发抑制率（%）1.7052.6753.330表4 小麦黑胚链格孢代谢物中蛋白部分和非蛋白部分的活性2.4.2 毒素的酸碱稳定性 测定结果表明，用不同pH值处理链格孢培养滤液24h后，其生物活性几乎不受影响，对种子萌发的抑制率都达到50%以上，与培养滤液原液没有明显差异，说明小麦黑胚病链格孢毒素具有较强的酸碱稳定性（表5）。滤液pH值345678910原液清水对照平均种子萌发率（%）46.67b50.00b48.33b45.00b45.00b48.33b45.00b46.67b46.67b100.00a平均种子萌发抑制率（%）53.3350.0051.6755.0055.0051.6755.0053.3353.33—表5 不同pH处理后链格孢培养滤液对种子萌发的活性2.4.3 毒素的热稳定性 由表6可以看出，小麦黑胚病菌培养滤液于60、80和100℃水浴中处理20min、30min、40min、50min和60min处理后活性与没有处理的对照几乎没有差异，而且在121℃下处理20min仍不失活，说明其热稳定性较强。温度处理（℃）处理时间（min）203040506012158.33a———10050.00a51.67a51.67a51.67a51.67a8051.67a55.00a53.33a53.33a51.67a6050.00a53.33a51.67a50.00a51.67a常温55.00a50.00a51.67a50.00a51.67a表6 不同温度处理后链格孢培养滤液对种子萌发的抑制率 （%）链格孢毒素对小麦种子多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）的影响见表7。测定结果表明，随着时间的延长，不论是感病品种还是抗病品种在毒素滤液处理后PPO、POD和SOD的活性均下降，且抗病品种较感病品种下降慢。从3种酶活性测定结果来看，SOD活性在毒素滤液处理后下降更为明显。时间（h）PPOPODSOD豫优1号豫农9901豫优1号豫农9901豫优1号豫农9901028.0031.8323.5022.17214.04181.61328.8326.1722.0020.67204.10143.82623.0024.0018.8319.33198.70136.381222.0022.8317.6718.67179.67124.482420.1719.3317.3317.67154.9894.263619.0017.6718.0016.33115.4589.734817.1716.5017.0016.83112.1192.06表7 毒素滤液处理对小麦种子酶活性的影响 （单位：U/min·g）初步研究结果表明，小麦黑胚病菌可以产生致病毒素，该毒素能够抑制小麦种子萌发和根的伸长，并能加重黑胚病的发生，而且能够降低籽粒千粒重，初步结果表明病菌的致病作用与其产生的毒素有关，但是其机制有待进一步研究。对毒素基本性质的研究是进行纯化的基础。虽然本实验研究的毒素是未经提存的粗毒素，但是能够揭示其一般的特性。本实验结果表明，小麦黑胚病链格孢毒素为非蛋白类物质，而且是一种热稳定性及酸碱稳定性均较高的物质。这为以后研究和利用毒素提供了理论依据。SOD、POD、PPO这三种酶是存在于膜系统中的一种抵御活性氧伤害的保护酶，寄主在与病原菌或毒素的相互识别斗争过程中，会产生高出正常水平的活性氧，干扰正常的代谢功能，在正常情况下，活性氧都保持在一个动态平衡状态[11～12]。毒素处理小麦种子之后PPO、POD、SOD的活性均降低，可能由于毒素造成了活性氧清除系统中这三种酶系统的破坏，活性氧过量积累，细胞受到伤害，从而也抑制了种子的萌发。小麦黑胚病菌链格孢毒素的致病作用可能是一个比较复杂的过程，除了本实验研究的几种酶的作用外，还需对其他一些相关酶、细胞膜透性、酚类代谢、氧化磷酸化、细胞器结构等很多理化机制和细胞学结构变化等进行深入研究。同时，也要加强对毒素纯化和结构分析等方面的工作，为进一步研究毒素的性质和作用机理奠定基础。

梅树炭疽病是梅树上的主要病害，在武汉地区，从4～10月份都有发生。从梅雨季节开始炭疽病开始大流行。2006～2007年8月调查，武汉地区的梅树炭疽病发病率高达97%以上。笔者从东湖梅园采集炭疽病标本。用常规组织分离法对病组织进行了分离，再进行单孢分离；采用柯赫氏法则给予回接鉴定，确认为炭疽病的病原。所有菌株均在PDA平板上于25℃下培养，并于PDA试管斜面上4 ℃保存。共分离获得22个菌株，研究发现这些菌株在菌落形态、色素分泌、产孢、孢子形态等存在显著的差异。可将这些菌株分成7种类型，其中Ⅰ型菌株：菌丝颜色为白色到灰黄色，菌丝生长较稀疏易产拟菌核和大量橘红色分生孢子团，分生孢子12.5～15μm×4.5～5.5μm；Ⅱ型菌株：菌丝颜色为灰黄色，菌落扩展速度最慢，易产生菌核不易产生分生孢子团，分生孢13.8～16μm×5～7.5μm；Ⅲ型菌株：菌丝颜色为白色较为稀疏，菌落扩展较慢，能产生大量的拟菌核和分生孢子团，菌核较Ⅰ型小且多，分生孢子15～20μm×5～6.3μm；Ⅳ型菌株：菌丝颜色为墨绿色，菌丝生长茂盛，菌落扩展最快，较少产拟菌核和分生孢子团，分生孢子12.5～13.8μm×3.8～5.5μm；Ⅴ型菌株：菌丝颜色为中间墨绿色边缘白色，菌丝生长致密气生菌丝少，菌落扩展较快，易产生大量的拟菌核但不产生分生孢子团，菌核较Ⅲ型菌核小且多，分生孢子10.5～12.5μm×3.8～5μm；Ⅵ型菌株：菌丝颜色为纯白色，菌丝生长茂密厚实，菌落扩展较快，不易产生拟菌核和分生孢子团，分生孢子18.7～22.1μm×7～10.5μm；Ⅶ菌株：菌落颜色为白色，菌丝生长密实，较Ⅵ型气生菌丝少，菌落易扇变，也不易产生拟菌核和分生孢子团，分生孢子13.8～15μm×5～7.5μm。将这7种类型菌株分别在梅树及樱树、桃树、梨树、苹果树、杏树和山楂等蔷薇科果树上的致病力进行了比较。结果表明这7种类型的菌株在这些植物上致病力存在显著的差异。其中：Ⅰ型菌株M17对上述植物的致病力最强，刺伤接种后在这些植物叶片上均能形成典型的病斑，病斑的大小因接种植物不同而略有差异，如在梅花、梨树、桃树、樱树、杏树、山楂和苹果等植物叶片上形成的病斑大小分别为：（2.7±0.2）cm、（2.5±0.2）cm、（2.3±0.2）cm、（2.1±0.2）cm、（1.9±0.2）cm、（1.9±0.2）cm和（1.3±0.2）cm；但在不刺伤的条件下，菌株M17仅能在樱树、梨树、桃树、山楂树等叶片上形成病斑。Ⅲ型菌株M11-1的致病力最弱，仅能在刺伤叶片上形成较小的病斑，如在梅花、桃树、苹果、樱树、杏树、梨树和山楂等植物叶片上形成的病斑大小分别为：（0.73±0.2）cm、（0.36±0.2）cm、（0.32±0.2）cm、（0.30±0.2）cm、（0.65±0.2）cm、（0.5±0.2）cm和（0.45±0.2）cm。所有上述菌株对吉祥草、高粱、大叶黄杨、黄瓜和豇豆等植物均不致病。利用引物对PITS1和PITS4扩增这些菌株的ITS DNA片段，连接至T-载体后，转化E.coli JM109，获得携带ITS DNA的克隆，对克隆进行测序，并在GenBank上进行Blastn序列分析。结果发现上述7个菌株的ITS序列与该数据库中的胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosprioides）的ITS序列等同性在99.0%以上。因此，这些菌株应该同属于胶孢炭疽菌，但是它们在形态和致病力等方面存在显著差异。

褐斑病又称夏枯病，是草坪上最为流行的病害之一，在世界范围内的冷、暖季草坪草中都有发生。高羊茅褐斑病的发病部位主要是叶片和茎部，病斑椭圆形或不规则形，初为水渍状，后变褐至灰白枯死，边缘红褐色。湿度大时，清晨可在病部外缘观察到大量白色菌丝形成的“烟圈”及深褐色颗粒状菌核。感病草坪草的褪色及萎陷可造成大块黄褐色或枯黄色的病斑，多个病斑合并可致使草坪草大面积枯死。从华中农业大学草坪基地高羊茅田块采集发病植株，按照常规组织分离法分离、纯化得到病原菌。致病性测定采用4mm菌丝块接种离体高羊茅叶片，28℃保湿培养2天后，叶片上可形成不规则形水渍状病斑，边缘褐色。再次分离发病叶片的病组织，可得到与接种病原菌菌丝体形态与培养性状一致的病原菌，证实该病原菌为高羊茅褐斑病的致病菌。将得到的病原菌置于PDA培养基28℃培养，生长速度较快，2天可长满直径为9cm的培养皿。菌丝初无色，2天后菌落颜色从白色到浅黄色、浅黄褐色，培养5～6天后，菌落呈褐色。菌丝体长绒毛状，较稀疏，放射分布。菌丝直径3.4～10.5μm，直角或锐角分支，分枝处明显缢缩，距分枝不远处有一分隔。通常5天后菌丝纠结形成白色菌核，颜色从浅白色到灰色、褐色或黑色，近圆形至不规则形，单生或聚生。菌核内外颜色一致。将培养1～2天的菌丝经DAPI（5μg/ml）染色后于荧光显微镜下观察为多核，平均每细胞3～15个细胞核。根据对分离物的培养特征和形态学鉴定，将引起高羊茅褐斑病的病原菌鉴定为立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）。对该菌核糖体DNA的ITS区域进行PCR扩增，测序结果与GenBank中核酸数据库进行同源性比较。该病原菌与Rhizoctonia solani AG 1-IB的序列同源性为99%。其结果与形态学鉴定结果一致。对病原菌寄主范围测定结果表明，该病原菌除侵染高羊茅外，还可为害黑麦草、早熟禾、狗牙根。