木霉菌（Trichoderma spp.）广泛存在于土壤及其他基物中，作为生防菌以其生长速度快，产孢量大、作用谱广、作用机制多样、能在植株、土壤中增殖并形成有效群体等诸多优势而备受关注。我们针对蔬菜上常见病害，从土壤中分离、筛选获得对蔬菜病原菌具有较强抑菌活性的绿色木霉菌株Tr9701，通过对其产几丁质酶活性等对其抗病机理进行了初探，同时试验了其在黄瓜叶片、根部的定殖能力，为今后开发可替代某些化学农药的微生物杀菌剂做了基础性工作，现将初步研究结果记述如下。1.1.1 供试菌株 绿色木霉Tr9701（Trichderma viride），由天津市植物保护研究所生防室筛选、鉴定。供试病原菌立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、番茄灰葡萄孢霉（Botrytis cinerea），由天津市植物保护研究所病害室分离、鉴定。1.2.1 绿色木霉菌制剂几丁质酶检测据Harman等的方法[1]，在胶体几丁质培养基中培养绿色木霉菌，进行产几丁质酶预试验，然后将绿色木霉菌分生孢子液接种到合成诱导液体培养基中诱发几丁质酶产生，以不加胶体几丁质为阳性对照，在28℃，150r/min振荡培养，连续提取培养液制备几丁质酶粗提液。检测采用还原糖法[2]处理，在试管中加入几丁质酶粗提液、10g/L胶态几丁质各1ml，37℃恒温水浴30min，加入DNS10ml，混匀后沸水浴10min，用水冷却至室温，观察颜色变化，以100℃高温灭活处理15min几丁质酶粗提液为对照，试验重复3次。1.2.2 绿色木霉几丁质酶粗提液对病菌的抑菌活性测定 将黄瓜立枯丝核菌、番茄灰葡萄孢霉菌菌丝块转移到平板上，每平皿接种4块，分布于4角，平皿中心放滤纸片并加入100μl几丁质酶粗提液或阳性对照液，重复3次，空白加入等量无菌水，定期观察抑菌圈大小。1.2.3 绿色木霉菌对立枯丝核菌重寄生作用的显微观察 将灭菌赛璐玢膜置于直径90mm的水琼脂培养皿上，在平板两侧各植入经活化培养的绿色木霉和立枯丝核菌菌丝块，25℃下对峙培养，待菌丝接触后置于光学显微镜下观察。1.2.4 绿色木霉菌在黄瓜叶片和根部的定殖 取菜田表层10cm深处土壤，混腐熟的猪粪和蛭石（按3：1：1比例），过筛后，用150倍甲醛液消毒，边喷边混，喷匀后堆起，盖塑料布闷5天，然后晾晒14天，待残药挥发后铺于苗床待用。同时将冰箱保存的绿色木霉菌活化，转接到小麦粉培养基上，在25℃温度下培养7天，培养基上长满菌丝和孢子后，在组织捣碎机中捣碎、过滤，配成绿色木霉菌孢子悬浮液（5×106个孢子/ml）备用。木霉菌叶面定殖：将培养制成的孢子悬浮液用消过毒的手持喷雾器喷雾，均匀喷至黄瓜叶面正反两面，直到叶面上均匀布满一层细微水珠而不流淌为止。喷雾后1h取第一次样，以后每隔一周取一次样，共4次。每次每处理取的叶片剪成0.5cm见方小片，称量取样叶片加入10倍无菌水中振荡（120r/分）15min。取稀释液0.1ml涂布于木霉选择性培养基上，25℃下培养3～4天，5皿重复，计菌落数。以第一次取样所检测到的菌量为接种量，菌量以cfu/g叶表示。木霉菌根际定殖：将培养制成的孢子悬浮液，均匀浇灌至黄瓜根部，直至黄瓜苗根部土壤全部浸润为止。浇灌后1h取第一次样（地下1～2cm处根围土壤），以后每隔3天取一次样，共4次。检查时，分别称取根围土壤1g，加入无菌水20ml中振荡（120rpm）15min。取稀释液0.1ml涂布于木霉选择性培养基上，25℃下培养3～4天，5皿重复，计菌落数。以第一次取样所检测到的菌量为接种量，菌量以cfu/g叶表示。通过预试验，绿色木霉菌Tr9701在胶体几丁质培养基上生长可以形成显著几丁质酶解透明圈，因此进行了绿色木霉菌几丁质酶的诱导试验。诱导条件下几丁质酶粗酶液加入DNS后变为深棕红色，与阳性对照相比有显著差异，说明绿色木霉菌菌株产生几丁质酶，且经诱导处理的绿色木霉菌几丁质酶产生量明显提高，经检测，在培养第5d时达到最大值。绿色木霉菌Tr9701几丁质酶粗提液对立枯丝核菌、灰葡萄孢霉的抑菌活性在平皿接种后2天内，立枯丝核菌、灰葡萄孢霉菌丝生长迅速，但菌丝接近木霉几丁质酶粗提液接种点周围时，生长缓慢，最后停止，从而形成明显抑菌圈。空白对照无抑菌圈，立枯丝核菌菌丝长满平皿，灰葡萄孢霉菌丝长满平皿并形成大量菌核。试验表明，绿色木霉Tr9701的几丁质酶粗提液对立枯丝核菌、灰葡萄孢霉的抑菌圈直径分别为28mm和15mm，比阳性对照的抑菌圈直径大，其差异达到了显著水平。显微观察显示绿色木霉菌对立枯丝核菌具有较强的寄生能力，绿色木霉菌丝与立枯丝核菌菌丝接触后并列生长或缠绕，有时以钩状结构入侵立枯丝核菌菌丝。在接触后期则观察到被寄生的立枯丝核菌菌丝断裂和消解的现象。2.4.1 绿色木霉菌在黄瓜叶面的定殖 绿色木霉菌在叶面上的定殖动态见表1。由结果可知，绿色木霉菌在叶面环境中由于各种条件的影响，第一周内的菌量比初始菌量降低。此后绿色木霉菌适应了叶面环境，菌量逐渐回升，第14天检测菌量为1.02×104cfu/g叶片。21天后菌量持续下降，尤其是第28天菌量降至0.12×104cfu/g叶片。镜检观察绿色木霉菌Tr9701在叶面喷雾后，主要定殖于叶面气孔周围、腺毛基部及叶面凹陷处。这些位点或是分泌物产生处，或是叶面水分分布较多处，能为绿色木霉菌的生长繁殖提供适宜的条件。同时，这些位点也是其他病原菌的竞争位点，通过绿色木霉菌的人工接种，相比病原菌具有种群数量大，出现早的特点。因此，绿色木霉菌对这些位点的抢先占领，不仅有利于本身的生存，而且使黄瓜叶面受到保护，免于病原菌的侵染。重复调查时间1h3天7天14天21天28天11.241.210.941.150.830.1820.960.950.810.920.660.0831.151.080.860.980.790.1441.371.400.951.030.720.10平均1.181.160.891.020.750.12表1 绿色木霉菌孢子在黄瓜叶片上定殖情况（孢子着生量×104个孢子/g）2.4.2 绿色木霉菌在黄瓜根际的定殖 绿色木霉菌在黄瓜根际土壤中定殖结果见表2。由结果可知，第一周内土壤的菌量比初始菌量降低，可能是在根际土壤环境中，由于各种因素的影响，木霉菌受到一定抑制，此后绿色木霉菌适应了土壤环境，菌量逐渐回升，第14天检测菌量为2.64×104cfu/g叶片。21天后菌量持续下降，尤其是第28天菌量降至0.68×104cfu/g叶片。在调查中发现，绿色木霉菌定殖黄瓜根部能力受水分含量和pH值影响明显，水分偏高或偏低都影响绿色木霉菌菌株在黄瓜根部的定殖，pH偏酸性条件下的定殖量明显高于偏碱性条件下的定殖。重复调查时间1h3天7天14天21天28天12.432.371.852.521.090.6422.692.592.032.731.240.7232.362.321.892.611.080.6542.842.561.942.701.110.71平均2.582.461.922.641.130.68表2 绿色木霉菌孢子在黄瓜根部定殖情况（孢子着生量×104个孢子/g）木霉菌腐生性强，适应性广，生长和繁殖快，可迅速利用营养和占据空间，是当前微生物菌剂控制病害的研究热点[3]。本试验结果表明，我们所筛选的绿色木霉菌Tr9701有较强的产几丁质酶活性，且经诱导处理酶产量明显提高，其酶粗提液经试验对立枯丝核菌、灰葡萄孢霉有显著抑制作用，通过诱导产生的木霉几丁质酶在对于抑制病原菌的生长具有重要意义。经显微观察发现，绿色木霉Tr9701对于立枯丝核菌是通过趋向生长、识别、接触缠绕和穿透，寄生于病原真菌之上，对立枯丝核菌具有较强的寄生能力。此现象证明，当绿色木霉菌遇到立枯丝核菌等病原菌时，受到刺激和诱导，产生溶菌酶，抑制立枯丝核菌等的生长，并可降解菌丝。生防菌在植物表面的定殖能力反映了生防菌在植物表面与病原菌竞争空间和营养的能力。本研究表明，绿色木霉菌可以在黄瓜叶面和根部定殖。据Darah（1991）报道，根圈微生物的分布与沿根的可溶性碳的分布距离有关，微生物量的积累有赖于根分泌物的释放，因此添加一定的营养可以促进绿色木霉Tr9701的定殖。本研究进一步证明，绿色木霉Tr9701产几丁质酶、寄生、定殖能力强，是较好的生防材料。当前由于生防微生物控制植物病害具无污染、价格低廉的优点，具有广阔的应用前景。因此对绿色木霉菌Tr9701的发酵工艺、田间应用范围等有待进一步研究。

小麦是渑池县的一种主要粮食作物。在小麦腥黑穗病的发生上，渑池县20世纪50～60年代比较普遍，80年代以后大部分地区已基本绝迹。近年来，小麦腥黑穗病在部分地区开始暴发，而且发生面积逐年加大，有大面积漫延之势。在小麦腥黑穗病的发生上，开始大都为零星发生，病株率较低，加上大部分群众对该病害不具备识别能力，早期不易引起群众的足够重视。一般经过2～3年病菌的传播、扩散和病菌的积累后，随着发病面积不断扩大和田间病穗率的提高。小麦腥黑穗病病穗比正常小麦麦穗落黄时间晚3～5天。当正常小麦麦穗已变黄时，小麦腥黑穗病病穗略显暗绿色，颖壳和麦芒稍向外张开，露出部分病粒。病粒比好麦粒粗短，初为暗绿色，以后变为灰黑色或淡灰色，外面包着一层灰白色膜，里面充满鱼腥味的黑粉（病菌的厚垣抱子），所以俗称腥乌麦或臭黑疸。病株一般比健株矮小，分蘖增多。小麦腥黑穗病病原菌有两种，一种是Tilletia caries（DC.）Tul.（小麦网腥黑粉菌），另一种是Tilletia foetida（Wallr.）Liro（称小麦光腥黑粉菌）。有报道Tilletia ntraversa Kühn称小麦矮腥黑粉菌也能引起腥黑穗病发生。两种病原菌均属担子菌亚门真菌。小麦网腥黑粉菌孢子堆生在子房内，外包果皮，与种子同大，内部充满黑紫色粉状孢子，具腥味。孢子球形至近球形，浅灰褐色至深红褐色，大小14～20μm，具网状花纹，网眼宽2～4μm。小麦光腥黑粉菌孢子堆同上。孢子球形或椭圆形，有的长圆形至多角形，浅灰色至暗榄褐色，大小15～25μm，表面平滑，也具腥味。小麦矮腥黑粉菌成群的孢子为暗黄褐色，分散的孢子近球形，浅黄色至浅棕色，大小14～18μm，具网纹，网脊高2～3μm，网目直径3～4.5μm，有的可达9.5～10μm，外面包被厚1.5～5.5μm的透明胶质鞘。主要引致小麦矮腥黑穗病。小麦脱粒时，病粒破裂，病菌孢子飞散，粘附在种子表面，调运带有小麦腥黑穗病病菌的种子是造成小麦腥黑穗病远距离传播的主要途径。群众相互间的种子串换是造成小麦腥黑穗病在一定区域内大面积扩散的主要原因。混有病菌的麦糠、麦秸、淘麦水等沤粪或喂牲口，使粪肥中带有病菌，施入麦地，也可以传病；若多户群众共用一个麦场，在小麦脱粒或晾晒时也可以传病；在个别寒冷干燥的地区，落在土中的病菌孢子存活时间较长，也可传病。病菌以厚垣孢子附在种子外表或混入粪肥、土壤中越冬或越夏。小麦播种后，当种子发芽时，粘附在种子表面或粪肥、土壤中的病菌孢子发芽并侵入小麦幼芽，厚垣孢子也随即萌发，厚垣孢子先产生先菌丝，其顶端生6～8个线状担孢子，不同性别担孢子在先菌丝上呈“H”状结合，然后萌发为较细的双核侵染线。从芽鞘侵入麦苗并到达生长点，后病菌在麦株内以菌丝体形态随小麦而发育，到孕穗期，侵入子房，最后到达花部，破坏花器正常发育，抽穗时在麦粒内形成菌瘿即病原菌的厚垣孢子，即为病粒。小麦腥黑穗病菌的厚垣孢子能在水中萌发，有机肥浸出液对其萌发有刺激作用。萌发适温16～20℃。病菌侵入麦苗温度5～20℃，最适9～12℃。湿润土壤（土壤持水量40%以下）有利于孢子萌发和侵染。一般播种较深，不利于麦苗出土，但增加了病菌侵染机会，病害加重发生。病菌只能侵害未出土的幼芽，而不能侵害小麦的幼苗或植株，小麦一旦出苗后，病菌就不再侵染。所以小麦腥黑穗病防治必须抓好播种期这一关键时期。在小麦腥黑穗病的发生上，一般播种愈深愈晚，出土愈慢，发病愈重。土壤温度在5～12℃、土壤湿度中等时，最容易侵染。因此，冬麦迟播，春麦早播，发病较重。4.1 小麦腥黑穗病传播途径主要是种子传播。4.2 受小麦腥黑穗病侵染的小麦，从播种到抽穗前，田间基本没有明显的症状表现，只是到小麦落黄以后症状才表现出来。4.3 当种子发芽时，病菌孢子一旦侵入小麦幼芽使小麦感病，难以用药剂进行防治。4.4 带有小麦腥黑穗病病菌的小麦有毒，人一旦食用，轻者头晕恶心，重者引起中毒。5.1 违章调运是造成小麦腥黑穗病发生的重要原因。新的种子法实施后，随着种子市场的放开，私拉乱调现象十分严重，加上调种单位检疫意识淡薄，逃漏检现象突出，检疫不严是造成小麦腥黑穗病传播的一个主要途径。5.2 近年来群众对麦播药剂拌种重视不够，白种下地是造成小麦腥黑穗病连年发生的一个主要原因。5.3 群众更换新品种不及时，自留种现象普遍。一般是购买一次种子，连种3～5年，造成病菌积累，小麦腥黑穗病逐年加重。5.4 农户之间相互串换种子是造成小麦腥黑穗病在不同乡、村之间快速扩散和严重发生的一个重要原因。在小麦品种更换上，大部分群众为了节省成本，往往不到正规的种子门店购种，而是相互之间串换，造成小麦腥黑穗病在村、户之间或村、村之大面积传播发病，基本上发病一家，传遍全村。5.5 播种晚出苗时间长是部分年份发病严重的一个重要因素。由于气候原因，部分年份小麦播种期较晚，地温低，小麦在土壤中发芽出苗时间延长，使小麦腥黑穗病病菌侵染机会增加，来年发病就重。6.1.1 加强检疫执法力度，开展产地检疫和种子抽样室内检验，严把引种、调种和种子外调关。6.1.2 小麦腥黑穗病发病重的地区（病穗率超过0.6%，含0.6%）的小麦必须销毁处理，秸秆必须进行焚烧，严禁沤肥或喂牲口。发病轻的地区（病穗率小于0.6%），要及时拔除，毁灭病株，单打单收，禁止留作种用。6.1.3 广泛宣传，积极引导群众及时更换新品种，严禁群众间相互串种。小麦腥黑穗病主要是通过种子传播，实践证明及时更换品种，是防治小麦腥黑穗病的最有效措施。一般做到年年更换新品种，经过3～5年的品种连续更换，即可将小麦腥黑穗病完全根除；购种时必须到正规的种子部门，选购经过检疫部门检疫合格的种子。6.1.4 轮作倒茬、适时早播。发生小麦腥黑穗病的田块可改种其他作物，或与油料、蔬菜等非禾本科作物进行轮作；在小麦播种时，播种不易过迟、过深，覆土不易过厚，缩短小麦出苗时间。6.2.1 药剂种子处理。用种子重量0.15%的20%的粉锈宁乳油拌种，可防治此病，还可兼防治小麦秋苗期白粉病和锈病。也可用2.5%适乐时悬浮剂按种子量的0.15%拌种，防效均较好。6.2.2 也可用1%石灰水浸种。石灰1kg加水100kg浸小麦，种子60kg，以水淹过种子10～13cm为宜。气温20℃浸3～4天，25℃时浸2天，30℃时浸1天。种子入水后禁止搅动以防破坏水面石灰膜，浸后晒干待播。6.2.3 在粪肥或土壤传染地区，除用药剂拌种外，还需采用以下方法才能收到最好的效果：每亩用纯六氯代苯0.5kg（50%的用1kg）加干细土2.5～7.5kg，拌匀制成毒土，与种子混合均匀，用耧播下；用豆饼、花生饼、芝麻饼、菜籽饼等油饼磨成粉末，每亩园22.5kg，加入10～15倍细土或土粪拌匀，和麦种同时播下；在病粪中加入人粪尿、油饼、青草等有机质，经堆积腐熟，然后施用。适时早播。注意事项：一切参与小麦收割的农事工具及车辆在离开疫情发生地块前，使用50%粉锈宁可湿性粉剂200倍液消毒处理。

水稻条纹叶枯病由灰飞虱传播的发生严重的水稻病毒病。该病2004年在浙江长兴突然发生，全县发病面积为663.3hm2，发病较重的田块丛病率达50%以上，株病率达17.6%，一般丛病率在10%左右，株病率在1%～5%，其中产量损失10%～30%为21.7hm2，损失30%以上为2.79hm2，涉及15个乡镇，个别严重田块颗粒无收。2005年水稻条纹叶枯病以较快的速度蔓延，6月中旬在长兴夹浦、洪桥、虹星桥、雉城等乡镇的单晚秧田和早播直播稻相继发病，部分严重田块株病率超过25%，7月10日左右，出现第二个症状表现高峰，移（抛）栽稻、直播稻不同程度发病，发病面积达1万hm2，其中66.67hm2损失产量20%以上。针对水稻条纹叶枯病流行的严峻形势，为了有效地控制病害暴发流行，确保水稻生产安全，从2005年起，我们对水稻条纹叶枯病及传毒媒介灰飞虱发生动态进行较为系统的监测，开展了防治技术的研究。现将调查试验结果综述如下：在前一年发病较重的田畈，选取有代表性的田块对水稻条纹叶枯的发生情况进行定期跟踪调查，以观察水稻条纹叶枯病的田间消长规律。从田间调查来看，秧田从6月上旬后期开始发病，6月15日出现第一个症状表现高峰；移栽到大田后，6月23日调查，丛病率为6%，株病率为0.89%，病情指数为0.08，至7月10日左右出现第二个症状表现高峰；以后随着发病株的枯死和分蘖的增加，丛病率和株病率都呈下降趋势，株病率下降相对较快，8月20日左右出现第3个症状表现小高峰（见图1、图2）。从田间发病调查情况看，发病程度最重在7月底，见图3。图1 水稻条纹叶枯病丛发病率增长动态（浙江长兴）图2 水稻条纹叶枯病株病发病率增长动态（浙江长兴）图3 水稻条纹叶枯病病情指数增长动态（浙江长兴）2005年灯下监测，5月中旬成虫开始上升，6月中旬出现了第2代成虫高峰，诱虫量大，诱虫量为2936头，7、8月出现了3、4代成虫的小高峰，9月出现了5代成虫高峰，9月中旬和下旬分别诱到成虫1522头和1722头，10月还有大量的成虫出现，见图4。图4 灯下灰飞虱成虫消长情况（浙江长兴，2005）2006年灯下监测，5月上旬灯下始见，下旬成虫开始上升，迁入水稻秧田为害，6月上旬后期至中旬出现了第2代成虫高峰，为全年虫量最高，诱虫达6337头，7月上旬、8月上旬又出现了3、4代成虫的小高峰，8月底至9月初后灯下虫量上升，出现了5代成虫高峰，诱到成虫1520头；10月灯下诱虫量减少，见图5。图5 灯下灰飞虱成虫消长情况（浙江长兴，2006）2005年4月22日麦田调查，越冬代虫量为5.4万头/hm2，6月16日秧田虫量为13.05万头/hm2，6月21日平均卵量480万粒/hm2，6月28日秧田虫量为4.05万头/hm2，7月下旬虫量为1.05万头/hm2，8月上中旬虫量为0.45万头/hm2，9月上旬虫量为1.5万头/hm2，9月15日虫量为4.05万头/hm2，9月20日虫量为7.5万头/hm2，9月26日虫量为16.5万头/hm2，9月30日虫量为25.5万头/hm2，10月5日虫量为33万头/hm2，10月10日虫量为27万头/hm2，10月15日虫量为10.95万头/hm2。2006年4月上旬麦田调查，越冬代虫量为15.9万头/hm2，6月30日秧田虫量为16.95万头/hm2，7月3日秧田虫量为8.55万头/hm2，7月中下旬田间虫量下降，8月1日虫量为8.55万头/hm2，8月14日虫量为19.95万头/hm2，8月25日虫量为17.25万头/hm2，8月28日虫量为20.1万头/hm2，9月8日虫量为24万头/hm2，9月下旬虫量上升，9月25日为153.45万头/hm2，9月29日虫量为28.55万头/hm2，10月虫量还比较高，10月8日虫量为48万头/hm2，10月12日虫量为31.5万头/hm2，10月17日虫量为30万头/hm2。田间灰飞虱消长曲线见图6。图6 田间灰飞虱发生消长情况（浙江长兴，2006）灰飞虱的发生量和带毒率对水稻条纹叶枯病的发生有着密切的关系，近年来，随着灰飞虱发生量增加和带毒率的提高，水稻条纹叶枯病发生面积扩大，发生程度加重。据测定，2005年长兴县灰飞虱带毒率斑点免疫快速测定为11.27%，2007年达18%。水稻灰飞虱生物法测定传毒率，2006年为6.7%，2007年为7.4%。田间观察，5月中下旬的1代灰飞虱成虫传毒造成秧田和部分早播直播田（5月下旬播种）发病，至6月中旬左右出现了水稻条纹叶枯病的第一个显症高峰；6月上旬后期至中旬的2代灰飞虱成虫高峰造成了7月中旬左右的水稻条纹叶枯病的第2个显症高峰，由于6月上旬后期至中旬的灰飞虱成虫高峰量较大，因此，7月10日左右水稻条纹叶枯病表现高峰来势凶猛，发病面积大，发病程度重；8月中旬在病情发展上有一个小高峰，如2006年8月7日左右个别失治田块出现了第3个症状表现高峰，株病率达20%以上。以后随着水稻的生长，抗逆能力增强，田间虽有大量的灰飞虱成若虫，但基本不发病。水稻条纹叶枯病的防治应立足于预防，采取“抗、避、断、治”的综合防治措施。在目前水稻对条纹叶枯病防治还没有高抗品种的情况下，重点要切断灰飞虱的传毒途径。为此，我们围绕灰飞虱的防治开展一系列的农业防治措施和药剂防治试验，根据水稻条纹叶枯病的感病期，强化药剂浸种、拌种处理和秧苗期、大田前期灰飞虱的防治，配合使用病毒钝化剂，水稻条纹叶枯病得到了有效地控制。在条纹叶枯病重发区，推广秀水63、秀水09等抗病性好的品种，压缩武运粳7号、加育991等感病品种种植。浙江长兴1代灰飞虱成虫迁移高峰期在5月中下旬，推迟至6月上旬播种的直播稻可避开大部分1代灰飞虱的迁入传毒，减少发病机率。水稻条纹叶枯病的感病期主要在秧苗期，水稻秧田期的灰飞虱防治尤其重要。因此，要及时清除农田周边杂草，5月上旬前冬闲田提前翻耕，减少灰飞虱中间寄主，恶化灰飞虱生存环境，抓好麦田灰飞虱的防治，麦田收割后及时灌水翻耕，并抓好“四边”杂草中灰飞虱的防治。同时抓好药剂浸种、拌种处理的秧田期和大田前期的灰飞虱防治。坚持“治杂草和麦田保秧田、治秧田保大田、治大田前期保大田后期”的策略。经过几年来的试验示范，防治灰飞虱以5%锐劲特45～50ml/667m2、40%毒死蜱100～120ml/667m2、50%稻丰散100ml/667m2，加水50kg喷雾防治为佳。在浸种灵浸种的基础上，催芽露白后每千克种子用35%丁硫克百威（稻拌成、稻伴）种子处理干粉剂5g拌种，混拌均匀后播种，随拌随用。在水稻发病前和发病初期，配合使用病毒钝化剂2%菌克毒克100～150ml/667m2防治1～2次，减轻水稻发病程度，减少水稻产量损失。

核盘菌是普遍存在的坏死性真菌病原，能够侵染75科408种植物。在寄主植物中尚未发现免疫种或单基因抗性，包括十字花科。然而在禾本科等非寄主植物中该病菌是不致病的或弱致病的。为研究非寄主抗性机制，我们用该病菌接种了竹子、小麦、玉米和油菜。接种后24 h，这些植物对病菌的反应是不同的，竹子和玉米上无病斑，小麦上有小的病斑，但不同品种有变化，而油菜上产生了大的病斑。扫描电子显微镜研究表明，接种的竹子叶表面形成了一层膜，但在光学镜下菌丝穿透进入了上表皮细胞。菌丝进入竹子和油菜叶表皮细胞的方式是不同的。在油菜上菌丝很快进入上表皮细胞和细胞间隙，但竹子中菌丝仅限于上表皮和叶肉细胞。我们推定禾本科植物叶表面物质和细胞壁成分可能是阻止菌丝进入细胞的重要障碍。需要进一步分析这些成分。Sclerotinia sclerotiorium(Lib.)de Bary is a ubiquitous necrotrophic fungal pathogen capable of infecting at least 408 plant species of 75 families.No highly resistant varieties or germplasm is found in hosts including Cruciferae plants.On non-host plants such as some Gramineae species,however,the pathogen is avirulent or weak virulent.To understand how these non-hosts resist the pathogen,we inoculated S.sclerotinia mycelium to the leaves of bamboo,wheat,maize and oilseed rape as well.There were different responses in these plants after 24 hpi(hours post inoculation).No lesion was found on bamboo and maize leaves.Small lesions were observed on wheat,but the lesion size varied among different cultivars.Larger lesions were observed on oilseed rape leaves than any other Gramineaes at earlier time after inoculation.The scanning electron microscope(SEM)study showed clearly that inoculated bamboo leaf formed a layer of membrane on the leaf surface,but the slides under a light microscope unveiled hyphae penetration into the epidermal cells.The modes that hyphae grew into the leaves were also different between bamboo and oilseed rape.The hyphal growthfast under the oilseed rape epidermal and in the intercellular space,but in bamboo the growth was limited in the epidermis and mesophyll cells.We assumed that surface substance and cell wall composition are important obstacles of the hyphal penetration in non-host Gramineae plants.Further work needs to be done to analyze these compounds in comparison with oilseed rape.

中二软占是广东省农业科学院水稻所以粳籼21为母本，长丝占为父本杂交育成的早、晚兼用常规优质稻品种，于2001年通过广东省农作物品种审定。中二软占的丰产性和适应性好，米质良好，但中感稻瘟病。作者等将中二软占品种的种子经密封后送到酒泉卫星发射基地（部分中二软占种子留在地面作为非诱变原种对照），于2003年11月3日随“中国返回式科学试验卫星”升空，经过18天的太空旅行，于11月21日返回地面。2004年早造将中二软占诱变和非诱变原种对照单株种植，采用稻瘟病菌株GD0193接种到3到3片半叶的种苗上，发病7天后调查，792株经过空间诱变的种苗，病级为0～3级的抗病植株有208株，占总数的26.3%；病级为4～5级的植株有368株，占46.5%；病级在6级以上的有216株，占27.3%；80株原种对照种苗的病级均在6级以上。试验结果表明，中二软占的种子经过返回式卫星搭载后，对稻瘟病产生抗性变异，其中抗性明显提高的占26.3%；抗性比原种提高（病级0～5级）的植株数占72.7%。对中二软占空间诱变SP2代材料的抗性分离规律进行研究。从空间诱变中二软占SP1中选取33株抗病和2株感病植株的种子作为SP2的接种材料，原种中二软占作对照，接种稻瘟病菌株采用GD0193菌株。空间诱变中二软占SP1的2个感病植株在SP2抗性没有产生分离，33个抗病植株在SP2抗性产生分离，而且各株系抗感分离的比例也不一样。对33个抗病SP2株系抗感分离的比例进行X2分析，结果表明有21个株系抗感分离比例符合理论比值3：1，说明这21个株系可能受一个位点的抗性基因控制；有8个株系抗感分离比例符合理论比值15：1，说明这8个株系可能受两个位点的抗性基因控制。另外，有4个株系抗感分离比例既不符合3：1也不符合15：1。表明这4个株系的遗传基础比较复杂。由于目前对水稻空间诱变的染色体变异的遗传机理还不是很清楚，诱变除了导致基因的位点突变以外，也可能导致染色体的缺失、重复、倒位、易位等畸变。这些畸变将影响水稻的性状，而且使其在SP2的基因的分离规律变得更复杂。从33个空间诱变中二软占抗病植株的SP3-SP4代株系中连续两造各筛选出5株农艺经济性状较好的单株，考种及抗病性鉴定结果表明，与原种中二软占比较，抗病性有不同程度的提高，而且穗长、总粒数、结实率、粒长、谷粒长宽比、千粒重等性状与原种中二软占的相比，也有不同程度的提高。将33个空间诱变中二软占抗病植株和1个感病植株的SP4代株系进行抗谱测定，采用38个不同致病型代表菌株接种结果，原种中二软占和空间诱变感病株系的抗谱分别为29.0%和34.2%，33个空间诱变抗病株系中，抗谱达到80%以上的诱变株系有32个，其中抗谱在90%以上的诱变株系有24个，抗谱在80%～90%间的诱变株系有8个。中二软占是优质但中感稻瘟病的品种，从其空间诱变后代中有望筛选出对稻瘟病抗性及农艺经济性状比原种好的株系，可为抗稻瘟病育种提供新材料及优良抗源。目前作者等正重点开展有关优质、抗病的中二软占诱变品系的抗性遗传基础分析、抗病基因标记定位、空间诱变抗性变异机理研究等。

正向（经典）遗传学是通过生物的表型来推测其遗传物质的组成、分布和传递规律等，而反向遗传学是在已知基因序列的基础上，利用现代生物理论和技术，通过核苷酸序列的定点突变、缺失和插入等创造突变体并研究突变所造成的表型效应。随着基因组测序技术、侵染性克隆的构建技术、定点突变技术和报告基因的使用等，反向遗传学技术在研究植物病毒基因功能、侵染过程和致病机理等方面的应用越来越广泛。本文报道了该技术在研究马铃薯Y病毒（PVY）HC-Pro和甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）P22功能方面的部分结果。PVY HC-Pro基因由本实验室提供，SPCSV的有关基因由芬兰赫尔辛基大学Valkonen教授提供，PVX201质粒由Baulcombe教授提供。突变试剂盒（Quick Change XL Site-Directed Mutagenesis Kit）购自STRATAGENE公司，大肠杆菌菌株DH5α由本实验室保存，PCR突变引物由赛百盛公司合成。Figure 1 Symptoms of Nicotiana benthamiana plants inoculated with different constructs based on PVX 201将SPCSV P22、P28和RNaseIII等基因克隆到PVX201载体上，根据接种后出现的症状判断哪个基因能增强PVX对本氏烟的致病力。将PVY HC-Pro克隆到PVX201载体上，针对HC-Pro的KITC和IGN等位点设计合适的突变引物，参考突变试剂盒（Quick Change XL Site-Directed Mutagenesis Kit）说明进行突变。通过测序证实所得突变体的准确性。大量提取法提取质粒PVX201、PVXHC或相应的突变体，摩擦法接种本氏烟（Nicotiana benthamiana），观察所致症状的差别。PVX201载体在本氏烟上引起轻微的斑驳和褪绿花叶症状，但不引起植株的死亡。SPCSV P28和RNase III等基因连接到PVX201后对症状无影响，但P22能提高PVX对本氏烟的致病力，导致了接种植株的死亡，说明P22是致病性的增强子。携带P22的PVX（PVX-p22）首先在接种叶上引起坏死斑点。坏死斑点扩展后，沿着叶脉到达茎部，引起上部组织坏死，最终导致本氏烟整株枯死。RNA沉默抑制因子HC-Pro也能提高PVX对本氏烟的致病力。表达HC-Pro的PVX（PVX-HC）在接种后7天出现严重明脉和卷曲，10～14天时首先心叶出现坏死，随后整株萎蔫死亡。但在接种叶上没有坏死斑，看不到明显的扩展迹象。KITC是HC-Pro的一个重要基序，参与病毒的蚜虫传毒、协生和抑制RNA沉默等过程。我们在测定烟草脉带花叶病毒（TVBMV）全基因组序列时发现，TVBMV（YND分离物）HC-Pro KITC基序中的K变成了R，而且也有蚜虫传毒活性。我们把PVY HC-Pro的KITC突变成RITC后，再接种本氏烟，发现该突变仍能引起本氏烟植株的死亡。把K突变为A（突变体1，K52A）后，突变体也能引起本氏烟死亡，说明HC-Pro KITC基序中的K可能不参与和PVX的协生。但把KITC基序中的C缺失后（突变体2，C55Del）就不能引起植株死亡，说明KITC基序中的C对于协生作用是不可缺少的。对于HC-Pro其他突变体的功能分析正在进行中。

沃尔巴克氏体（Wolbachia）是自然界中分布非常广泛的胞内共生菌之一，近10余年的研究表明，这类共生菌广泛存在于各类昆虫体内，甚至估计16%的昆虫均含有该菌[1]。对来自33个不同寄主的38个不同Wolbachia株系的ftsZ基因（细胞周期基因）研究表明，Wolbachia 株系间存在着很大的差异，Wolbachia 株系分为A组群和B组群[2]。Zhou等在wsp（编码Wolbachia表面蛋白）基因序列分析的基础上，将沃尔巴克氏体细分为12个亚群（Subgroup），并设计了12个亚群wsp基因诊断的PCR扩增特异引物[2]。昆虫体内是否含有Wolbachia，早期多通过DAPI染色法（用非特异性的DNA-blinding荧光染料DAPI染色，然后在荧光显微镜下观察）[4]和电镜观察[5]来判断，但20世纪90年代以来则主要依赖于对其16S rDNA、23S rDNA、ftsZ 和wsp等基因进行PCR检测与序列分析，其中wsp基因是目前报道的Wolbachia基因中进化最快的基因而被广泛用于Wolbachia的PCR检测与分子鉴别[1，3，6，7]。沃尔巴克氏体通过卵的细胞质传播并参与多种调控其寄主生殖活动的机制，包括诱导孤雌生殖（Parthenogenesis inducing，PI）[8]、雌性化Feminzation）[9]和生殖不亲和[10]，因而它很有希望被用于许多虫媒传播的重大人类疾病的基因工程防治和生物防治。灰飞虱（Laodelphax striatellus Falln）广泛分布于东亚、东南亚、欧洲和北非等地，我国以长江中下游和华北地区发生较多。灰飞虱能取食或为害水稻、小麦、大麦、玉米、高粱、甘蔗、稗草、李氏禾等多种禾本科植物，并且能传播多种病毒病，造成病害的普遍流行。因此，进行灰飞虱种群暴发成灾规律及其有效防治技术的研究，显得尤其重要和紧迫。本文采用PCR方法研究了灰飞虱体内Wolbachia的感染，以期为开辟控制灰飞虱暴发和阻断病毒病传播新途径提供依据。从河北省曲阳和容城小麦田采集灰飞虱成虫，保存在小麦苗上。每只灰飞虱为1个样本，放入离心管中冷冻，而后置于载玻片上，呈直线逐步滴1滴Ringer's solution（昆虫生理盐水），去头，放入装有预冷100μl STE 的管中，匀浆，10%SDS 5μl及蛋白酶K 2.5μl，55℃水浴1h，加酚50μl及50μl氯仿：异戊醇（24：1），剧烈震荡，12000r/min 离心5min。取上清，加入2倍体积无水乙醇及0.1体积3mol/L NaAc，-20℃沉淀过夜，离心，12000r/min。弃上清，加75%乙醇200μl洗涤2遍。55℃烘干，加入30μl无菌水溶解，-20℃冻存，待检。扩增wsp基因片段使用的引物[3]：wsp 81F(5'TGG TCC AAT AAG TGA TGA AGA AAC3')wsp 691R(5'AAA AAT TAA ACG CTA CTC CA 3').在20μl反应体积中进行PCR反应，反应体系为13.5μl ddH2O，2μl 10×Buffer，2μl 25 mmol/L MgCl2，0.5μl dNTPs（每种10mmol/L），0.5μl 20μmol/L的正向和反向引物及一个单位的Taq高温多聚酶。Taq plus及dNTP购自上海生工生物工程公司。PCR反应条件是：首先在94℃下变性3min，然后94℃下1min，55℃下1min，72℃下1min完成1个循环，共进行35次循环。72℃末轮聚合10min。反应结束后取PCR特异性扩增产物5μl，在0.8%的琼脂糖胶上进行电泳（电压40V，50min，电泳缓冲液为0.5×TBE），用BioRad凝胶成像系统检测并拍照。选择有扩增产物的样品进行大量PCR扩增，采用PCR产物回收试剂盒（上海生工生物公司产品）回收PCR扩增产物交上海生工生物工程公司进行测序，利用BLAST工具（NCBI网站）进行DNA序列检索和同源性比较。采用wsp基因通用引物81F和691R对灰飞虱DNA样品进行PCR扩增，电泳检测结果表明从灰飞虱DNA样品中可扩增出600bp大小的wsp目的基因片段，证实河北曲阳和容城田间采集的灰飞虱种群有Wolbachia 的感染（图1）。河北曲阳和容城灰飞虱种群的沃尔巴克氏体感染率分别为85.6%和88.4%，而且雌雄个体感染率无差别。将扩增的wsp基因片段进行基因序列测定，结果表明，从所检测的样品中扩增出的Wolbachia的wsp基因片段长度为601～603bp。用NCBI网站提供的BLAST分析工具进行基因序列同源性分析，表明灰飞虱体内感染的Wolbachia wsp基因与Wolbachia pipientis 的wFur、wStri 2个品系的wsp基因的同源性为100%，与Wolbachia sp.的wJapo、wFur、wStri 3个品系的wsp基因的同源性也达到100%（表1）。图1 灰飞虱体内沃尔巴克氏体wsp基因片段的扩增Wolbachia品系同源性注册号宿主来源WolbachiapipientisisolatewFur100%AF481185.1白背飞虱Kittayapong等，2003WolbachiapipientisisolatewStri100%AF481175.1灰飞虱Kittayapong等，2003Wolbachiasp.Wstri100%AF020080.1灰飞虱Zhou等，1998Wolbachiasp.wJapo100%AB039283.1ElenchusjaponicusNoda等，2001Wolbachiasp.wFur100%AB039043.1白背飞虱Noda等，2001Wolbachiasp.Wstri100%AB039042.1灰飞虱Noda等，2001表1 灰飞虱感染Wolbachia的wsp基因序列的同源性Wolbachia是自然界分布较广的共生菌，在双翅目、膜翅目和鳞翅目等许多昆虫体内均有感染。甘波谊等以PCR方法检测了来自不同地域稻田的3种稻飞虱，发现灰飞虱、褐飞虱（Nilaparvata lugens）、白背飞虱（Sogatella furciera）均被Wolbachia所感染，对wsp的RFLP分析证实了这些飞虱为单一沃尔巴克氏体感染[11]。但不同地区灰飞虱体内沃尔巴克氏体的感染率不同，在我国形成了周边地区感染率高（如辽宁、北京、上海和云南），而内陆地区感染率低（如四川），或是未被感染（如宁夏）的格局[11]。在日本采集的9个灰飞虱种群被Wolbachia感染的比率随纬度降低而增加[12]。这些不同可能与不同地区的地形、气候、寄主条件及Wolbachia的传播效率等因素有关，其原因有待研究证实。本文研究结果表明，河北曲阳和容城灰飞虱种群沃尔巴克氏体感染率较高，与前人的报道一致。通过对基因序列的同源性分析表明，河北的2个灰飞虱种群感染的Wolbachia与来自白背飞虱的wFur品系、灰飞虱的wStri品系亲缘关系较近，同属于Wolbachia B大组Con组。这些表明灰飞虱可能会被同一组的Wolbachia感染。灰飞虱是多种病毒的传播介体，灰飞虱的暴发流行常造成玉米粗缩病、水稻条纹叶枯病等病毒病的严重流行。沃尔巴克氏体是灰飞虱的胞内共生菌，能够通过多种机制调控其寄主的生殖活动[13]，但是，近年灰飞虱种群暴发成灾与Wolbachia 感染的关系有待进一步研究证实。同时，沃尔巴克氏体影响灰飞虱传毒能力的作用及利用媒介昆虫—共生菌技术阻断病毒的传播将是今后研究的重点，对于开辟病毒病防治新途径具有重要的意义。

托夫勒20世纪70年代在《未来的冲击》中写到：几千年人类经济发展的总历史将表现为三个阶段：即产品经济时代（包括前产品经济时代和后产品经济时代）、服务经济时代和体验经济时代。美国战略地平线LLP顾问公司的创始人帕恩二世和吉尔摩认为，经济价值演变过程可分为四个阶段：商品、货品、服务和体验。他们在《哈佛商业评论》中写到：“随着服务像它以前的货品一样越来越商品化，比如只有价格的长途电话服务，体验逐渐成为所谓的经济价值的下一步……欢迎来到体验式经济时代”。任何时代经济活动的产生和发展，都是生产力发展与人们需求不断升级相互作用的产物。经过了以产品生产为核心的产品经济时代，再经历营销策略核心由产品至上转为服务第一，由生产商和分销商合作完成的高效有序的服务体系为核心竞争力的服务经济时代。体验经济是以客户为中心的经济，它反映人类的消费行为和消费心理正在进入一种新的高级形态。体验经济时代是人类需求层次升华的必然趋势。体验营销与传统营销方式相比，有共性，也有其特殊性。相同点就是它们都是为了满足消费者的需求。它们的区别主要在于提供物、提供方式等不同。体验营销主要有个性化、无形性、延续性、互动性、主观性等特点。个性化：产品营销中强调提供标准化的产品，服务营销强调产品和服务的定制，而在体验营销中，由于个体存在巨大差异性，要吸引个体参与达到互动，在营销活动设计中就必须体现较强的个性化。当然消费者也乐意为所获得的体验价值承受相对高的价格。无形性：服务营销中服务的无形性是以商品为依托，制造商们通常的做法是将商品和服务捆绑销售，以达到更好的服务于消费者，当然许多服务本身也是一种体验。在体验营销中的无形性更强调顾客所能感受到的一种难忘的、身临其境的体验，一种被感知的效果。延续性：消费者所获得的感受并不会因一次体验的完成而马上消失，具有一定的延续性，如消费者对体验的各种回忆等，有时消费者事后甚至会对这种体验重新评价，产生新的感受。因此体验营销的效果是长期性的，一旦消费者对体验满意，他们对公司往往产生高度忠诚。互动性：在产品营销中，消费者是企业的“用户”；在服务营销中，消费者被称为“客户”；而在体验营销中，消费者是企业的“客人”，也是体验活动的“主人”。因为体验活动必须要有消费者的参与，进而在消费者和企业之间发生一种互动行为。体验营销效果是消费者在互动活动中的感知效果。主观性：在产品营销中，企业用价格或其他差异化手段区别于其他企业，在服务营销中企业通过服务价值的让渡使顾客获得更大的利益；而体验营销活动的最终效果是建立在个人主体印象（主要包括时间、空间、技术、真实性、质地、规格等方面的特征）的基础上的，它包含了个体差异的影响，对不同的个体有不同的感受，表现为一种个体的主观性。所有这些体验经济时代的消费需求变化趋势，对于企业而言，既是机遇，又是挑战。针对体验经济时代消费需求的变化趋势，企业如果不能跟上时代的步伐，意识不到营销规则的变化，任你曾经如何辉煌终将走向毁灭。鉴于此，为适应体验经济时代的营销环境新变化，企业营销战略必须做出相应调整，需进行系统的体验营销整合和实施。某制药有限公司推广上市的国际新型儿科止泻药乐度消旋卡多曲颗粒，由负责推广上市的品牌经理负责，从体验营销与品牌互动的角度入手，进行了乐度的体验营销模型的构造及实施。乐度消旋卡多曲颗粒是SFDA批准的四类新药，为肠道脑啡肽酶抑制剂——世界上第一个抗分泌药。1993年由法国Bioprojet Pharma公司开发成功并上市，1995年进入欧盟市场，1999年进入北美市场。2003年被加拿大儿科协会推荐为治疗婴幼儿腹泻常规用药。美国疾病预防控制中心在《急性小儿胃肠道疾病诊治手册》中也将该产品推荐作为临床验证有效的儿科止泻药。现阶段传统营销模式下的新药产品上市是在生产商的配合下，各级分销商经常组织医院药剂科人员及部分主治医师召开产品发布会。但是乐度为国内第二家上市的消旋卡多曲颗粒，竞争对手已占据了国内大部分重点儿童医院，采用传统的新药上市模式，可能无法在短期打开销售局面。而体验营销能带来的营销学上的变革，解决营销的差异化问题。运用体验营销，可以提炼品牌，表现消费个性；可以传播品牌创意与执行，建立消费理解和尊重；可以吸引顾客参与品牌互动，实现品牌认同的忠诚。针对乐度上市背景，采用体验营销，可避免与直接竞争对手的价格战，能在市场份额及销量持续增长方面有所突破。体验就是指人们用一种从本质上说以个人化的方式来度过一段时间，并从中获得过程中呈现出的一系列可回忆的事件。体验营销是满足消费者体验需求的营销模式。体验营销模式构造基础是站在消费者感官、情感、思考、行动、关联5个方面研究消费者购买行为，这种思考方式突破了传统上的“理性”消费者假设。传统营销过分强调产品的功能利益，而忽视了顾客所需要的感受和体验。体验营销的核心观念是，不仅为顾客提供满意的产品和服务，还要为他们创造和提供有价值的体验。体验营销模式的结构体验营销模式措施影响个人的三种模式。第一种是关系干预，这是最佳的干预模式，是在建立贴近于目标人物的关系之后，获得进行引导的优势地位；第二种是利益干预，主要通过利益引导，展示产品的卖点。在商业行为中，要塑造符合消费者功能与情感需要的主题；第三种是规则干预，这种干预是有强制性的，它的利益空间小，但简单易做。夸耀型的和对于对手排斥型的信息通常属于这类。因此，体验营销最接近关系干预与情感利益干预。体验消费行为模式都是由四个环节构成：看（See）→听（Hear）→使用（Use）→参与（Participate），即SHUP模型，这四个环节在时间维度上恰成先后序列，可以先后衔接为持续的多个循环圈。看就是信息受众通过广告和公开场合的传播获得感受。传播方式一种是直接传播主要是通过实物传播，另一种是间接传播，即通过广告来传播。乐度消旋卡多曲颗粒，设计了卡通形象的乐度宝宝，以及经典传播口号“无泻可急，全家开心”两者相配合，贯穿其包装、杂志平面广告、广告宣传片，就医生及患儿家长对腹泻儿童希望快速止泻的需求进行了从用药指导手册，品牌提示物，广告等系统传播。听，也就是由别人之口介绍来的信息，是已经被假定为是实际的使用总结。听来自两方面，一是间接，即多环节的传说；另一种是直接，即实际用户或者消费者的分享。乐度上市伊始，就选择重点儿童医院，进行上市后拓展性研究，请权威专家试用乐度后写出专业临床研究总结报告，在专业杂志上发表，并召开乐度临床经验分享会。另外编写乐度的科普文章，指导患儿父母选择止泻药及进行患儿护理等。使用包括他人使用和自己试用。实际使用效果则影响着重复购买的可能性。他人使用是一种间接的体验，自己试用是卖方向消费者展示产品的售点。乐度在各大药店终端，开展万人大赠药活动，万名患儿及父母共同体验乐度的“30分钟开始起效，平均治愈时间28小时”的快效性的特点。参与包括情景设置和实物展示。情景设置包括路演和展会展示，是卖方设置的一个情景，要消费者参与到设置好的情景中，以带动消费者的购买欲望。乐度开展以直销营销（联谊会营销）为主的系列上市会。在SHUP模型各个环节中，广告的传播度最广，但是信用度是低的，消费者口碑的传播能力与信用都在中高水平；实际使用在消费者中产生的信用度最高，但传播广度有限；试用的信用度较高，且传播的广度较实用为高，他人使用的信用度与传播的广度都属于中等；情景设置的信用度较高的，传播度较低。基于上述分析，乐度的推广框架以直效营销（联谊会营销）、循环服务、数据库营销为主。直效营销就是集中性解决目标群体疑虑、增强目标群体全方位信心。循环服务就是稳定目标群体、建设长期忠诚客户，并坚持“扶上马，送一程”的服务准则，例如把对客户的一对一服务延伸到客户的家庭中（情感建设）。数据库营销内容包括收集客户信息（需求的现实状况、消费能力、消费方向、消费影响力），互动区域市场（渠道的掌握控制、活动效果的反馈与控制），活动实施反馈控制、加强沟通。直效营销为乐度上市初期推广活动的重点，下面就直效营销的意义及乐度具体开展的直效营销进行说明。首先，建设目标群体信任度，集中解决顾客疑虑（对公司、产品、营销方式）。因在传统方式下（一对一）存在一些疑问，比如：一般人认为销售人员对产品功效方面的解释和引导缺乏权威性，即使在接受（开处方）了产品以后也不可能彻底消除；此外，对产品功效偶然性和必然性存在疑虑，这是偶然性服务还是存在一般性的科学原理、具有普遍性的适应性？这些可以通过各种人员、各个方面的结果分享会消除。在联谊活动这种热烈的气氛中，单个顾客的情绪和思维一定会受到群体情绪和思维的影响。其次，解决并消除不信任感。不信任来自于对他人充满恐惧；自身利益受到损害、被他人所欺骗、在活动中受到尴尬。真诚、坚持用产品与目标群体对话，坚持群体的自身体验来确定对产品价值的评定、活动的目的是联谊不是推销。再次，提升目标群体的忠诚度。在联谊会营销中，在所有与会人员都充分肯定产品的氛围中，在使用、销售产品者的分享与感激中，目标群体彼此之间的内心会受到进一步的震撼与强化。联谊会营销把与会客户的信任与感激都凝聚到一起，产生一个共同的磁场。在这个磁场中客户始终不会愿意把目光从这种体验营销的企业和系统上挪开，会继续保持忠诚。最后，促进企业美誉度。通过对产品功效、包装、价值、原理等多方面生动详细的分析，让与会人员在心中对它重新定位，容易形成比较全面的印象，形成产品形象的立体化；体验营销服务是多对一的网络式服务和基地服务，它使全方位、全过程、亲情化、家庭化、人性化得到充分体现，消除了纯粹凸现的商业概念；对这种充分人性化的营销模式，通过彼此沟通感受更切身服务。无论是对产品、服务还是营销推广模式的认同，最后都会归结为对企业美誉度的提升。乐度主要针对药剂科人员、主治医师、分销商，以联谊会形式进行。在联谊会中，主要安排简单的专家讲座、使用者分享、文体活动（主）、公司经营理念的简单表述等。在比较有规模或准备良好的联谊会，可以主张适度邀请部分嘉宾。嘉宾可以是产品方面的、营销方面的、健康环保方面的，也可以是行业领导、社区领导。他们的论证会使目标群体确信不移，并在这种基础上能在会场之外形成持续不断、确信不移的口碑。也可以通过热烈真实的会场气氛，突出经验分享，形成对企业、产品良好的印象。此外作为乐度品牌的负责人，还应针对乐度的体验营销进行阶段性评估。体验营销的阶段性评估是一些产品在营销过程中容易忽视的重要环节，也是众多品牌难以做大的原因之一。缺少阶段评估一方面难以认识到不足，更重要的是会渐渐失去改进和增强体验营销的决心和意志而使营销活动流于形式。在体验营销实施的过程中品牌经理应长期对其效果进行阶段性评估，通过事实让营销团队切实看到体验营销的成效，真正感到体验营销的魅力。总而言之，体验营销并不是“空中楼阁”，它是一种更深入分析顾客体验的全新的科学方法。其不仅可以避免大量无效的广告投入，防止陷入无休止的价格战中，而且很容易锁住客户。最重要的是，体验营销对于乐度在上市初期能快速获得市场信息，取得一部分客户的信任和尝试，进而在医院覆盖和销量上有所突破起到了事半功倍的作用。也许体验营销是长期的、渐进的，不会一鸣惊人，但它确实为乐度品牌的长期健康发展打下基础。主要参考文献1.伯恩德·H.施密特.体验式营销.北京：中国三峡出版社，20012.刘凤军.品牌运营论.北京：经济科学出版社，20003.盛琦.新时期“一对一”顾客定制化旅游营销战略.南开管理评论.1999（3）