培育抗病品种是一种经济有效的手段，成为解决苹果炭疽菌叶枯病的首选。传统的抗病育种主要依赖于植株的表现型选择 （P he-notypical selection），但是由于环境条件、基因间互作、基因型与环境互作等多种因素大大影响表型选择效率。如抗病性的鉴定就受发病的条件、植株生理状况、评价标准等条件的影响。一个优良抗病品种的培育往往需要花费7～8年甚至十几年时间。随着分子生物技术的快速发展，以DNA多态性为基础的分子标记技术以其表现稳定、数量多、多态性高等优点已被广泛的运用于植物遗传图谱的构建、控制重要农艺性状基因的标记遗传定位、种质资源的遗传多样性分析以及品种指纹图谱的绘制等方面，尤其是分子标记辅助选择 （molecular marker-assisted selection，MAS） 育种，相较传统育种能极大地提高育种的选择效率与育种预见性，受到人们的高度重视。简单重复序列 （simple sequence repeats，简称 SSR） 又称微卫星（microsatellite） 广泛地分布于果树基因组的不同位置。SSR位点多态性的形成是基于基本单元重复次数的不同。由于每个SSR位点两侧一般都具有相对保守的单拷贝序列，所以可以根据此特点在SSR两侧序列设计一对特异引物来扩增 SSR 序列。通过对 PCR 产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳或琼脂糖凝胶电泳来显示不同 SSR 标记的分子多态性。由于SSR标记具有大量的等位差异、多态性好、操作简便、稳定等特点，已被广泛应用于作物的遗传图谱构建、指纹图谱绘制、目标性状基因的标记定位、物种起源进化及品种纯度鉴定等 （Hemmat，1994）。本试验利用SSR标记与集团分离分析法BSA （bulk segregant anal-ysis） 相结合，快速有效地寻找与质量性状遗传的目标基因紧密连锁的SSR标记，用于分子标记辅助育种及抗病性的早期鉴定。本试验选择青岛农业大学苹果试验基地 （山东省胶州市） 2009年种植的，经过室内离体接种鉴定的 ‘金冠’ב富士’ 的207 株F1杂交群体实生树为材料，于2015 年4 月底，每株采摘幼叶 5～6 片，用液氮处理后，置于-70℃冰箱保存。参考Doyle和Doyle （1987） 及 Cullings （1992） 提取基因组DNA的CTAB法，并加以改进 （附录一）。（1） 利用1%琼脂糖凝胶电泳检测。取 4μl DNA 样品与 2μl 6×Lodding buffer 混匀，在 1%浓度的琼脂糖凝胶中电泳 （120V，30min），最后在紫外凝胶成像系统中成像并记录保存。若成像为一条整齐、单一、清晰的 DNA 条带，且点样孔没有亮光，则表明所提样品较纯；若条带不清晰、拖尾或出现涂抹带，则表明 DNA 发生了降解，降解严重会看不到条带；若在胶片下部有弥散的荧光区出现，则表明样品中存有 RNA 杂质；若点样孔处有明显的亮光，则说明样品中含蛋白质和大分子杂质。琼脂糖凝胶电泳检测方法见附录二。（2） 分光光度计检测。运用分光光度计NanoDrop 2000 进行 DNA纯度及浓度的量化测定。若 OD260/OD280 值在 1.8～2.0，并且 OD260/OD230 值大于2.0，则表示此样品DNA纯度适宜。将提取、纯化的基因组 DNA，稀释到浓度为10ng/μl。根据该组合群体的离体接种鉴定结果，将杂交后代单株分为抗病和感病两大类型。按照BSA分析方法的要求，选取 10 份高抗单株 （无任何病斑）的DNA，等量混合构建DNA抗池；选取10份高感单株 （病斑个数大于20） 的DNA等量混合构建DNA感池。两个基因池用于筛选与目标基因连锁的分子标记。从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus_x_domestica/下载目标区域的 contig 序列，然后通过网站 http：//archive.gramene.org/db/markers/ssrtool搜索该区域碱基序列中所有的 SSR 位点。搜索参数设置为：碱基重复单位为 2、3、4、5、6 个碱基，相应的重复次数依次为 8 次、6 次、4 次、3 次、3 次。利用 Primer 3.0 P lus软件设计SSR引物，引物设计时应注意：引物与SSR位点间的距离一般大于50 bp 个碱基序列。引物 GC 含量为40%～70%，最适值为50%；引物长度在18～24 bp；退火温度50～65℃，左右引物退火温差小于 5℃；扩增产物片段大小在 150～350 bp。引物的评估利用Oligo软件进行，避免引物二聚体、发夹结构和错配等情况的发生。引物序列 （附表1）。所有引物由生工生物工程 （上海） 股份有限公司合成。SSR反应体系为15 μl，内含10 ng/μl基因组DNA 2 μl，1×Master Mix 7.5 μl，0.2 μmol/L左右引物各0.8 μl。进行初步筛选时的 PCR扩增程序为：94℃预变性 5min，然后按 94℃变性 30 s，55℃退火40 s，72℃延伸30 s的程序进行 10 个循环，每个循环的退火温度降低0.5℃，然后按94℃变性30 s，50℃退火40 s，72℃延伸30s的程度进行25个循环，最后72℃延伸8 min，筛选能扩增出有差异条带的SSR引物。最终筛选的 PCR 扩增程序为：94℃预变性 5min，然后按94℃变性30 s，相应的退火温度40 s，72℃延伸30 s的程序进行35个循环，最后72℃延伸8 min，4℃保存。PCR产物使用3.5%的琼脂糖凝胶电泳，或者聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法见附录三。从 HiDRAS 网站 （http：//www.hidras.unimi.it/） 和 GenBank （http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank） 网站下载了 300 对均匀分布于苹果17条染色体上的已发表的 SSR 引物，在亲本及抗感池中进行初步筛选，选出在抗亲、抗池与感亲、感池中有多态性条带的引物，然后在207个做图群体上进行筛选。最终选出与抗性基因位点连锁的标记，根据所筛选出的SSR标记的已知信息，确定其所在的染色体，然后将 SSR 标记序列与苹果基因组数据库 （http：//www.rosaceae.org） 进行BLAST比对，将其定位在染色体的具体位置上。初步定位后，从网站 https：//www.rosaceae.org/gb/gbrowse/malus x domestica/下载与目标基因位点连锁的 SSR 标记间的 contigs序列，根据SSR标记设计的方法，设计了 276 对新引物。这些引物首先在抗亲、抗池与感亲、感池中进行筛选，将产生多态性条带的引物再进行群体验证。对检测群体中各单株的 SSR 标记基因型分别赋值并记录，与抗池带型相同的记为 “A”，与感池带型相同的记为 “B”。将这些SSR标记在群体上的基因型数据进行孟德尔1R∶1S遗传符合度的卡方检验。并将表型抗性鉴定结果与标记基因型数据相结合，采用 JoinMap 4.0软件，对标记及抗性基因 R gls位点的连锁关系进行分析。利用软件中的Kosambi函数功能将重组率转化为遗传距离，其他参数设置为默认值。将筛选获得的与抗性基因 R gls位点最近的两个 SSR 标记，在两个亲本上进行PCR扩增。将差异片段进行胶回收。回收产物连接到载体pMD-19T simple，然后转化到大肠杆菌进行扩繁。将菌液PCR检测为阳性的克隆送生工生物工程 （上海） 股份有限公司测序。每个样挑取3个单菌落作为测序重复。测序结果用 DNAMAN 软件进行比对分析。具体操作方法见附录四。用CTAB法提取的苹果叶片基因组 DNA经1%的琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，DNA条带清晰，完整无降解 （附图3-1）。可以用于后续的研究。从 HiDRAS 网站 （http：//www.hidras.unimi.it/） 下载的 300 对均匀分布于苹果17条染色体上的已发表的 SSR 引物在亲本及抗感池中进行初步筛选，选出54 对在抗亲、抗池与感亲、感池中有多态性条带的引物。再将这54 对引物用于作图群体的207 个单株以筛选与抗性基因位点连锁的 DNA 标记。最终筛选出2 个可以清晰区分抗感双亲、抗感池和杂交群体抗感单株的 DNA 标记，CH01d08 和CH05g05。引物序列如表3-1中所示，因为这两个标记已被报道位于苹果15号连锁群上 （Liebhard et al.，2002），所以将苹果炭疽菌叶枯病抗性基因 （命名为Rgls） 位点定位于15号连锁群上。连锁分析表明这两个标记分别位于Rgls基因位点两侧，通过 BLAST算法与苹果基因组数据库 （http：//www.rosaceae.org） 进行比对，SSR 标记 CH01d08位于15 号染色体的 Contig MDC021953.346 上，标记 CH05g05 位于MDC016699.237 上，物理位置分别位于染色体的 2343 kb 和13699 kb处，两个标记覆盖了染色体上11.3Mb区域 （表3-1）。根据苹果基因组 CH01d08 和 CH05g05 标记之间的核苷酸序列，自行设计了276对SSR引物。按照上述方法进行筛选，最终筛选出9对引物能够扩增出清晰稳定的多态性条带的引物 （附图3-2、附图3-3），分别为 S0607039、S0607001、S0506206、S0506001、S0506078、S0405195、S0405127、S0304673、S0304011 （表3-1）。连锁分析表明，标记S0405127和S0304673与Rgls基因位点的距离最近，位于该基因两侧，分别存在2个、4个重组个体。通过对这11个SSR标记在做图群体上的基因分型比例分析，符合 1R∶1S 的理论比值， P 值大于0.05 （表3-2）。SSR编号引物序列重复基序产物长度/bp退火温度/℃位点CH01d08aF：5′-CTCCGCCGCTATAACACTTC-3′R：5′-TACTCTGGAGGGTATGTCAAAG-3′ag29056MDC021953.346chr15∶13688903..13699651CH05g05aF：5′-ATGGGTATTTGCCATTCTTGC-3′R：5′-CCTGAAGCAAGGGAAGTCATAC-3′ag14356.5MDC016699.237chr15∶2343805..2349433S0607039F：5′-AACGCACCGACCCATTTC-3′R：5′-CCAGCTCGCATAACCACC-3′ct18654MDC011529.272chr15∶6103161..6122652S0607001F：5′-ATGAAAGCGAGTCGGAGTG-3′R：5′-GGGGAGGGTTGGTGGTTA-3′caggtcaggt26956MDC004171.329chr15∶5986277..6005012S0506206F：5’-GCTGAGATTTCCCCCATT-3′R：5′-GCTGCGGACACTGCTTAG-3′ttggatgtg24354MDC007696.347chr15∶5714203..5748693S0506078F：5’-AGAAAGGCCCTCAAACAG-3′R：5′-CTGCAGAAGGTGGGTATG-3′aaaagc30455MDC002692.183chr15∶5005415..5011924S0506001F：5′-CATGAAAAGGTAGGCAGTGG-3′R：5′-GAGGTTCTTGGGCAAGTGTT-3′acaaccaa30454MDC013564.245chr15∶5006247..5017709S0405195F：5′-AGACGGGCAAATTAGTTGAGAT-3′R：5′-TCCCTTCTATGATGAATGACACC-3′tg25853MDC016041.193chr15∶4672532..4691912S0405127F：5′-GGCACAATGTAGGAGGGATA-3′R：5′-GCTATGAGGAAATTGGCTCT-3′at33055MDC043871.6chr15∶4622388..4626535S0304673F：5′-GTTTGCACATTGTAATGCTG-3′R：5′-CAGTTTTCTAGTGATGTCGTTG-3′tg（ga）33353MDC013859.580chr15∶4121053..4135560表3-1 定位在15号连锁群上与Rgls基因连锁的SSR标记序列及引物SSR编号引物序列重复基序产物长度/bp退火温度/℃位点S0304011F：5′-GCCGAATCTGCGGAATTG-3′R：5′-TCCCACTTCCTCACCGTCTC-3′ag21056MDC015994.315chr15∶3183972..3196801表3-1 定位在15号连锁群上与Rgls基因连锁的SSR标记序列及引物（续）-1SSRmarkerObservedratio(R∶S)Expectedratio(R∶S)x2PS030401184∶123103.5∶103.53.670.06Ch05g0590∶117103.5∶103.51.760.18S030467393∶114103.5∶103.51.070.30S040512791∶116103.5∶103.51.510.22S040519588∶119103.5∶103.52.320.13S050607894∶113103.5∶103.50.870.35S050600192∶115103.5∶103.51.280.26S060700188∶119103.5∶103.52.320.13S060703998∶109103.5∶103.50.290.59S050620695∶112103.5∶103.50.70.40Ch01d08104∶103103.5∶103.500.96表3-2 SSR标记在207株 ‘金冠’ב富士’ F1 群体中的分离将Rgls位点附近的11个SSR标记在 ‘金冠’ב富士’ 杂交组合F1 群体的207个单株上进行连锁分析。将表型抗性鉴定结果与标记基因型数据相结合采用 JoinMap ver.4.0软件计算出重组率和遗传距离如附图3-4 所示。连锁图谱上标记的顺序依次为 S0304011、CH05g05、S0405195、S0304673、S0405127、S0506078、S0506001、S0506206、S0607001、S0607039、CH01d08，重组率分别为：13.0%、8.7%、5.3%、1.9%、1.0%、6.8%、6.8%、7.2%、7.7%、8.7%、24.6%。遗传距离分别为15.4 cM、7.2 cM、3.1 cM、0.9 cM、0.5 cM、3.0 cM、4.8 cM、6.4 cM、8.2 cM、10.7 cM和33.8 cM。 Rgls基因被定位于 S0304673 和S0405127之间。距离目标基因最近的标记为 S0405127，在抗性基因Rgls位点与S0405127标记之间仅发现两个重组个体，遗传距离为0.5 cM。S0304673 的遗传距离为 0.9 cM。在 ‘Fiesta’בTotem’-15 （F×T） （Fernández-Fernández et al.，2008） 的遗传图谱中，SSR标记CH05g05与Ch01d08的遗传距离为33.7 cM，而在本研究中二者之间的遗传距离为41.0 cM （附图3-4）。为了确定抗性基因Rgls位点的物理位置，将11 个标记序列与金冠苹果染色体基因组序列 （http：//www.rosaceae.org） 进行 BLAST 比对，确定这些标记位于15号染色体上的2.3～13.6 Mb。 Rgls被定位于标记S0405127和S0304673之间，跨度为4.1～4.6 Mb，两标记间的物理距离为500 kb （附图3-5）。对S0304673 和 S0405127 进行测序分析。S0304673 标记能够在双亲中扩增出差异条带，而 S0405127 标记只在 ‘金冠’ 上扩增出一条带，所以对S0304673 标记在双亲中的扩增产物进行了测序，而只对S0405127标记在 “金冠” 上的扩增产物进行了测序 （附图 3-6、附图3-7）。测序结果表明，SSR标记 S0304673 和 S0405127 的扩增片段大小分别为333 bp和330 bp。标记S0304673在 ‘富士’ 中的扩增片段比在 ‘金冠’ 中的扩增片段存在三处8～10 bp的碱基缺失，分别是 CT-CAGTGTGT、AGAGAAAG、CTTCTTACTT，另外还存在着一处两个碱基差异和六处单碱基差异。在 ‘金冠’ 中的扩增片段与参考基因组序列比对发现，有两处单碱基的差异，分别为 A/T和 G/A的碱基变化。标记S0405127在 ‘金冠’ 中的扩增片段与参考基因组序列比对发现，除在参考基因组中有两未知碱基以外，其余完全一致。本次测序确定了参考基因组序列的两处未知碱基分别为G和A。集团分离分析法 （BSA法） 是分子标记研究中的最经典的研究方法之一。其最大的贡献在于能够快速、有效地检测到与目的基因相连锁的分子标记，能够在连锁图谱中标记稀疏区或末端寻找到新的标记，并以此作为侧翼标记 （flanking marker），为继续寻找更紧密的连锁标记、构建高分辨率的连锁群、物理图谱和进行基因的图位克隆奠定基础 （廖毅，2009）。其原理简单、操作方便，而且克服了许多物种没有或者难以创建近等基因系的限制，被广泛地应用于作物育种中。同时必须注意到，物种基因组大小对标记与目标基因连锁距离是有影响的，一般来说基因组大，多态性少的物种，获得与目标基因紧密连锁标记的可能性也比较小。BSA法所能检测到的分子标记与目标基因的可信遗传距离一般在 15～25 cM，所以此法并不是在每一物种上都能获得所需要的目的标记 （Mackay and Caligari，2000）。DNA池的质量对BSA法的检测效率也有很大的影响。所以在实验过程中一定要注意，一是保证DNA 的纯度和浓度。杂质会影响紫外光的吸收率，高浓度的 DNA 溶解不均匀。因此混池时，尽可能使用高纯度 DNA，并适当稀释，否则会影响分池的精确性。二是避免 DNA 池污染。DNA 污染的原因有多方面，包括基因重组率、本身的表型效应、性状鉴定误差、DNA 混合误差、PCR 效率不均等。我们可以通过减少PCR 循环次数、减少混池单株数、构建多池、重复实验等方法来降低实验误差，否则这些误差将会导致多态性被覆盖而找不到目标标记。随着分子生物学技术的快速发展，许多分子标记被成功的应用于控制农艺性状的重要基因的遗传定位及遗传图谱的构建。如 RAP D标记、RFLP 标记、SCAR 标记、CAPs 标记、SSR 标记、SNP 标记等。在这些标记中，SSR标记具有重复性好、可靠性高、共显性和适合自动化操作等优点，成为基因定位和遗传图谱构建的首选。而且，SSR标记广泛从布于整个基因组。据统计，大约有163426个 SSR 位点公布在苹果17条染色体上 （关玲等，2011）。苹果基因组序列的公布，使SSR标记的批量开发及相应引物的设计变的更加便捷 （Guan et al.，2011）。人们可以利用已有的 SSR标记对整个基因组进行筛查，快速的将目标基因所在区域进行锁定。然后在该区域查找SSR并设计合成新的引物，进一步缩小基因所在范围。在本研究中，576 个 SSR 标记，包括300对以前发表的标记和276 对新开发的标记被首次应用于抗炭疽菌叶枯病基因位点的定位。从300对已发表并定位的SSR标记中成功的获得了2 个与抗性基因 Rgls位点连锁的 SSR 标记，CH01d08和CH05g05。这两个标记被定位于 ‘Fiesta’בTotem’ 遗传图谱的第15条染色体上的基因组序列 MDC021953.346 和 MDC016699.237上，位于抗性基因 R gls位点的两侧。这一初步定位的结果为后续标记的开发提供了非常重要的信息，明确了 R gls基因所在的染色体及区域范围。随后9个位于CH01d08和CH05g05之间与Rgls位点连锁的新标记被开发出来。最近的标记与抗性基因 R gls位点间的遗传距离为0.5 cM。在前人的研究中，SSR标记 CH01d08 和 CH05g05 被定位在 ‘Fi-esta’בTotem’ 的遗传图谱中，遗传距离为 33.7 cM.而在本研究中，它们间的遗传距离为41.0 cM。这种类似的现象Paolo等 （2013）也报道过。他们在利用四个分离群体构建与柱型基因 Co位点紧密连锁的遗传图谱时发现，特定标记间的遗传距离会因不同群体，甚至同一群体不同群体大小而不同。这有可能是由于采样不同或遗传因素控制的局部的和全基因组的重组频率不同造成的 （Doligez et al.，2006；Vezzulli et al.，2008；Moriya et al.，2009）。理论上，标记在基因组上的遗传位置与物理位置应该是对应的。但是在本研究中发现，部分标记的遗传位置与物理位置并不是一一对应的。从附图3-4和附图3-5中可以看出，共有8个SSR标记的连锁图谱上的位置与在 ‘金冠’ 基因组序列中的物理位置是一致，另外3个标记，S0506078、S0405195 和 S0304011在遗传图谱上的位置与物理图谱上的位置不一致。这有可能是由于当前的苹果基因组重叠群序列产生装配错误，也有可能是苹果基因组中染色体结构的变异造成的。对引物S0405127 和 S0304673在亲本金冠的扩增片段进行测序发现，所测序列中有四处碱基与参考基因组存在差异。这四个差异碱基及上述的三个与理论顺序不符的标记有可能会纠正基因序列组装错误。在本研究中位于抗性基因 Rgls位点两侧的标记 S0405127 和S0304673间遗传距离与物理距离的对应关系显示，1.4 cM 对应着500 kb个碱基 （物理距离/遗传距离=357 kb/cM）。在对苹果抗黑星病基因Vf位点的分子标记遗传定位的研究结果中显示，每cM 的遗传距离对应423～857 kb的物理距离 （Patocchi et al.，1999）。而在对控制苹果柱型基因 Co位点的遗传定位研究中，每 cM 的遗传距离对应702 kb的物理距离 （Paolo B et al.，2013）。这与本研究中所得出的结论不相符。这有可能与研究材料的群体大小、DNA提取的纯度及表型鉴定的准确性有关。本研究中所利用的SSR标记，特别是新设计的276 对引物，有很大比例在亲本间能扩增出多态性条带，而在抗感池间无差异。虽然这部分标记与抗性基因 R gls不存在连锁关系，但仍可用于群体遗传图谱的构建，以及其他性状标记的筛选。在对PCR产物的检测中，使用了3.5%的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种方式。采用3.5%的琼脂糖凝胶电泳条带清晰，分辨率高，可以清楚的显示差异条带，而且操作简单，电泳速度快，但是存在显示的条带少的缺点。而聚丙烯酰胺凝胶电泳产生的条带很多，分辨率极高，甚至能分离1 bp的碱基差别，但是制备和操作复杂。本试验主要采用3.5%的琼脂糖凝胶电泳，所以可能会导致一些引物因产生的多态性条带间差异小，没有显示出来而被淘汰。本研究首次开展了与抗炭疽病叶枯病基因 R gls位点紧密连锁的分子标记的筛选，并构建了第一张与抗性基因 R gls位点紧密连锁的分子标记遗传图谱。通过对207株 ‘金冠’ב富士’ 杂交组合F1 群体的验证，11个与Rgls位点连锁的标记将该基因定位在苹果基因组第15条染色体上，覆盖了49.2 cM的遗传距离，标记S0405127 和 S0304673分别位于抗性基因位点的两侧，遗传距离分别为 0.5 cM 和 0.9 cM，对应于 ‘金冠’ 苹果基因组的物理距离为500 kb。这两个标记可以应用于抗炭疽菌叶枯病分子标记辅助育种，在定植前对幼苗进行抗性筛选。这将会显著的降低苹果抗炭疽菌叶枯病育种的成本，缩短育种时间。本研究结果对深入开展抗炭疽菌叶枯病的遗传机理和分子机制研究有重要的意义，并为进一步的抗性基因的图位克隆和基因功能验证奠定基础。

洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的革兰氏阴性细菌。1949年美国植物病理学家Burkholder首次发现B.cepacia可以引起洋葱酸皮病[1]。随后在20世纪50年代人们从第一例由B.cepacia引起的心内膜炎开始，发现该菌广泛存在于医院，并且可以使人类患上多种疾病，尤其是囊性肺纤维化（Cystic fibrosis，简称CF）病人的易感细菌之一，严重的会因此患“洋葱伯克霍尔德菌综合症”致死。最近研究表明，该菌致人死亡的一个原因要归咎于它含有脂多糖（Lipopolysaccharide）分子[2]。在进行医学研究的同时，发现该菌在工业和农业上有生物降解、生物防治等功效，对农业生产和环境保护起着重要的作用，具有广泛的应用前景。近年来，随着细菌分类技术的发展，洋葱伯克霍尔德菌已不仅只是作为一个种，而是一组基因型不同、表型相近的复合物，称为洋葱伯克霍尔德菌复合型（Burkholderia cepacia complex，简称Bcc）[3]。本文将在农业、分类地位等方面对Bcc的研究进展做一综述，以达到全面了解该菌的目的。人类第一次发现伯克霍尔德菌是由于它导致了洋葱酸皮病，该病菌主要分布在土壤和灌溉水中，在洋葱鳞茎形成后，从其因收割等原因造成的伤口侵入，或者是黏在叶部的菌被水冲刷进入组织内引起鳞茎腐烂。Ulrich在1975年研究表明[1]，该病原菌在低pH值环境下可以产生一种内多聚半乳糖醛酸酶，使洋葱组织软化，利于病原菌的入侵和扩展。后来郭道森等人研究表明，该菌与松材线虫共同侵染黑松和马尾松，导致松林大面积死亡[4]，在后续的研究中发现，松材线虫的分泌物及死虫体均可促进该菌株的生长繁殖和致病作用，且活线虫的促进作用比死虫体更加显著，这可能是由于松材线虫提供给该菌株某些重要的营养物质[5]。2005年，意大利西西里东部地区种植的天堂鸟（Strelitzia reginae Aiton）幼苗（苗龄2～3个月）发生新病害，鉴定发现致病菌为唐菖蒲伯克霍尔德菌（Burkholderia gladioli），这是关于该菌导致天堂鸟叶斑病及枯萎病的首次报道。在植物体上广泛存在着一些细菌，它们都具有诱发植物体内水分结冰的作用，称为冰核细菌。在没有冰核细菌存在的植物能耐-7～-8℃的低温而不发生霜冻，但是在一些B.cepacia 细菌存在的情况下，同样条件的植物在-2～-3℃可诱发多种植物细胞水结冰而发生霜冻。张耀东等从菠菜上分离到一株具有冰核活性的Bcc菌株[6]。1.3.1 对有毒物质的降解 一些工业排放物中含有大量的有害芳香烃类物质，随着工业化进程的加快，残留于自然环境中的芳香烃类物质含量急剧增加，如何解决这类物质造成的危害，成为研究者要解决的问题，而利用微生物降解是消除其危害的重要途径之一。洋葱伯克霍尔德菌可以利用多种物质为唯一碳源，这意味着其能够以土壤和地下水污染的有毒且难降解的物质（邻苯二甲酸盐、除草剂和氯代烃类化合物等）为碳源并将其降解[7]。例如，Bcc的一个菌株G4可通过由苯酚诱导的芳香族途径将三氯乙烯降解，由于苯酚是环境优先污染物之一，因而不宜被推广使用；但该菌株的突变体G45223 PR1可以不利用任何诱导物而直接降解三氯乙烯[8]。另外，许多芳香烃化合物在降解过程中都会形成中间产物邻苯二酚，细菌可以通过邻位裂解和间位裂解两种途径继续降解邻苯二酚[9]。刘涛等[10]从炼油厂废水中分离筛选到一株苯酚高效降解的洋葱伯克霍尔德菌L68，该菌株可产生邻苯二酚2，3-双加氧酶[11]，而邻苯二酚2，3-双加氧酶是降解芳香族化合物的关键酶，在间位降解途径中，该酶可以催化邻苯二酚的苯环裂解，转化为2-羟黏糠酸半醛。因此，洋葱伯克霍尔德菌对消除芳香烃类化合物的污染具有重要作用。另外，洋葱伯克霍尔德菌对化学农药也有很强的降解作用。如，Sarfraz Hussain 等人研究发现，在pH值为8.0，温度为30℃时，该菌对α-硫丹和β-硫丹的降解率达90%以上，从而减少了杀虫剂硫丹（Endosulfan）对土壤和地下水的污染[12]。1.3.2 对油脂的降解 洋葱伯克霍尔德菌降解油脂的特性在国外已有研究，Pooja Rathi，Hustavova等人报道了该菌产脂肪酶应用于催化酯化水解反应等研究[13]，洋葱伯克霍尔德菌能在降解利用油脂的同时还分泌出一定量的胞外脂肪酶，同时通过所产生的脂肪酶等降解酶系作用于油脂，将其分解氧化为低级脂肪酸、甘油、醇类等低分子有机物，最后降解为H2O、CO2等代谢产物[14]。徐保成[15]等人对该菌所需的降解工艺条件进行优化研究，结果表明在优化的油脂降解条件下（pH值7.0，30℃，溶解氧3.0mg/L），处理初始油脂浓度1000mg/L废水，24h后其油脂降解率达到90%以上，COD（Chemical Oxygen Demand）去除达到92%。B.cepacia产生的脂酶可以催化拆分外消旋化学农药，使其变为光学活性农药，从而成倍地提高了药效，而且减轻了生物体内的积累与毒副作用，避免了不必要的环境污染[16]。洋葱伯克霍尔德菌可以防治多种植物病害，如从樱桃果实表面和伤口上分离获得的洋葱伯克霍尔德菌对甜樱桃褐腐病表现出显著的抑制效果[17]；郑维等从堆肥样本中分离的洋葱伯克霍尔德菌株CF-66具有广谱抗菌活性，并初步鉴定该菌属于洋葱伯克霍尔德菌基因型Ⅴ[18]；李纪顺等对伯克霍尔德菌B418进行了研究，表明该菌对小麦纹枯病、小麦全蚀病和番茄南方根结线虫病有很好的防治效果[19]。陈京元等从湿地松苗根际分离得到1株B.cepacia C23菌株，对引起湿地松猝倒病的立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、链格孢菌（Alternaria alternata）有明显的抑制效果。洋葱伯克霍尔德菌的防病机制主要为其能产生多种具有抗菌活性的代谢产物，如铁载体（Pyochenlin、Pyoverdine）、吩嗪、硝吡咯菌素、苯基吡咯、单萜生物碱、Cepaciamide A（B）、Cepacidine A（B）、Cepacin A（B）；菌株H111 能够有效杀死线虫Caenorhabditis elegans，其作用机理主要是由该细菌产生的细胞外毒素所致死[20]。B.cepacia AMMDR1可以抑制由瓜果腐霉病菌（Pythium aphanidermatum）和根腐丝囊菌（Aphanomyces euteiches）引起的豌豆和甜玉米苗猝倒病，作用机理主要是该菌抑制游动芽孢的裂解，阻止孢囊的萌发而影响病原菌的生长[21]。在不断的研究中发现，该菌可以与杀菌剂共同使用，如I.Omar等人发现，在对大豆根腐霉病菌（Fusarium oxysporum）引起的番茄冠根腐病的研究中，B.cepacia菌株C91与低浓度杀菌剂混合使用，相比单独使用高浓度杀菌剂，杀菌效果提高了20%[22]。这不但减少了杀菌剂的使用，同时减少了杀菌剂对环境的污染。美国环保署（EPA）已经批准了两种以洋葱伯克霍尔德菌为主要成分的生防菌剂的生产，其商品名为Deny和Intercept，Deny用于防止Rhizoctonia spp.、Pythium spp.、Fusarium spp.和线虫引起的病害，而Intercept则用于防治Rhizoctonia solani、Fusarium spp.、Pythium spp.引起的病害[23]。具有拮抗作用的细菌往往与植物的生长有很大的关系，这些细菌都可产生一些抑制真菌生长的物质，如：铁载体（Siderophores），细胞溶酶的分泌物，抗生素等。对真菌生长的抑制就可以直接促使植物生长[24]。B.cepacia可以产生铁载体，一方面根际促生菌铁载体的产生很快耗尽了病原菌生存所需要的铁，从而使病原菌的繁衍和侵染能力大大下降；另一方面根际促生菌通过铁载体向植物提供铁营养，从而使植物获益[25]；另外，B.cepacia还可以产生抗生素有效地抑制周围其他微生物的繁衍。同时，B.cepacia的一些菌株具有固氮和产生吲哚乙酸（IAA）的作用，有助于植物对营养物质的吸收[26]。Bcc菌株具有较强的溶解磷酸盐的能力，推动植物对释放的磷的吸收，促进植物生长，Babu-Khan等克隆到其溶解磷酸盐的基因[27]。另一方面其通过对病原微生物的生物防治，减轻或抑制有害的根围微生物，从而间接的促进植物生长。例如，玉米种子被Bcc菌株MCI7包衣后，其植株感染病原镰刀菌的几率大大降低，且植株鲜重和株高均显著增加[28]。B.cepacia 原名Pseudomonas cepacia，1950 年首次被Burkholder报道可引起洋葱酸皮病[29]。该菌的其他名字还包括eugonic oxidizers group 1，Pseudomonas kingii和Pseudomonasmultivorans[30]，但是相关研究明确指出这些命名是P.cepacia的同义词，而且P.cepacia具有命名的优先权[31]。因此，这些命名没有被写入细菌手册，直到1981年，Palleroni 和Holmes才重新找到依据区分这些命名的不同[32]。1992年Yabuuchi 等正式将该菌及其他6个属于rRNAⅡ群的假单胞菌（P.solanacearum，P.pickettii，P.gladioli，P.mallei，P.pseudomallei 和P.caryophylli）归为一个新属，即伯克霍尔德菌属（Burkholderia）。与Pseudomonas属不同的是，该属被归为变形菌门（Proteobacteria）[33]。当Burkholderia属的分类地位被确定以后，该属已包括超过30个不同的种：B.cepacia（典型种），B.caryophylli，B.mallei，B.pseudomallei，B.gladioli，B.plantarii，B.glumae，B.vietnamiensis，B.andropogonis，B.multivorans，B.glathei，B.pyrrocinia，B.thailandensis，B.graminis，B.phenazinium，B.caribensis，B.kururiensis，B.ubonensis，B.caledonica，B.fungorum，B.stabilis，B.ambifaria，B.hospital，B.terricola，B.sacchari，B.tropicalis，B.brasilensis，B.anthina，B.dolosa，B.cenocepacia，B.xenovorans，B.tuberum，B.phymatum。通过研究得知B.caryophylli，B plantarii，B.glumae，B.andropogonis是植物的致病病原菌，能够使不同种属的植物患上根腐、叶斑、条斑等病害。在不同植物中分离得到的B.vietnamiensis，B.kururiensis，B.tropicalis，B.brasilensis，B.tuberum，B.phymatum，B.caribensis有促进根瘤形成，增强固氮的能力，同时促进植物根的生长。B.mallei和 B.pseudomallei则能够引起人和动物的鼻疽病。对于B.glathei，B.graminis，B.phenazinium，B.caribensis，B.caledonica，B.hospital，B.terricola，B.sacchari在环境、生态中所起的作用还不是很清楚。同时，还有一些具有多重作用，可以是植物致病菌，植物有益菌或是人类的机会致病菌，例如：Burkholderia cepacia complex，Burkholderia gladioli 和 Burkholderia fungorum[34]。从20世纪90年代中期开始，一些研究者发现来源于各种环境的Bcc分离物具有明显的遗传异质性，1996年，有报道说利用分子鉴定和临床观察，发现伯克霍尔德菌至少有3个不同的基因型是CF病症的致病菌[35]。直到1997年，Vandamme等运用多相分类研究方法对从CF病人中分离到的致病菌进行研究，才发现所设定的B.cepacia种中，至少存在5种不同的基因型[36]。包括B.vietnamiensis（基因型V）、B.multivorans（基因型II）、基因型I，III和 IV。这5种基因型被统称为伯克霍尔德菌复合型（B.cepacia complex）。利用不同的方法从医学和环境微生物的角度对伯克霍尔德菌复合型进行了探索研究，其中包括使用不同的选择性培养基。结果发现，农业研究中利用的培养基，能从土壤和植物根际附近发现大量的伯克霍尔德菌复合型的族群[37]；在医学研究中，几乎无法从自然界中发现伯克霍尔德菌复合型的存在[38]。直到伯克霍尔德菌分类的又一次改变，才使这些固有的不同有机的联系起来，一些研究者发现基因型IV与Bcc中的其他基因型有明显的差异，于是被归类B.stabilis[39]。接着从美国和英国的CF致病菌中分离出基因型VI，它除了与B.multivorans没有差异外，与其他基因型均有差异[40]。从人类致病菌与环境中都能分离B.ambifaria（基因型VII），因此它也具有生防菌的特征。最近，发现B.pyrrocinia（基因型Ⅸ）也属于B.cepacia complex[41]。因此，已报道的洋葱伯克霍尔德菌复合型由9个不同基因型组成，分别是B.cepacia（基因型Ⅰ）、B.multivorans（基因型Ⅱ）、B.cenocepacia（基因型Ⅲ）、B.stabilis（基因型Ⅳ）、B.vietnamiensis（基因型Ⅴ）、B.dolosa（基因型Ⅵ）、B.ambifaria（基因型Ⅶ）、B.anthina（基因型Ⅷ）、B.pyrrocinia（基因型Ⅸ）。后来，Yabuuchi E等人在泰国某地的表层土中分离得到的B.thailandensis的一株，被重新归类为Burkholderia ubonensis，经过鉴定初步断定也归类为B.cepacia complex[42]。各基因型间DNA-DNA同源性为30%～50%，其16S rRNA 和recA 基因序列相似性很高，分别为98%～99%和94%～95%[43]。直到目前，对Bcc的基因型组成仍在研究中，Zhang L等人在玉蜀黍和水稻的根际发现了大量的Bcc菌株，并且通过Bcc recA基因的同源性的分析，发现分离所得的Bcc R456菌株可能属于一种新的基因型[44]。虽然能从不同的环境条件下分离获得大量的Bcc，但却不清楚Bcc株系主要的存活环境。事实上，只有很少的研究涉及环境中Bcc的生态特征，一些研究者也仅仅是对Bcc的一个或几个基因型进行研究[45]。现有的伯克霍尔德菌复合型中有许多有生防效果或是作为植物促生剂，现今生产B.cepacia生物农药的菌株都来源于环境，但问题是，对这些菌株是否是非致病菌也无法区分，因为除了Bcc基因型Ⅵ只能从CF病人中分离到，基因型Ⅸ只从土壤中分离到以外，其他所有基因型的B.cepacia均可从环境和医院中分离[46]。同样，无法很清楚的在菌株基因型或是表现型方面来区分环境菌和人类致病菌。同时，每年都可以从CF的致病菌中获得新的Bcc株系，并且也能够从自然环境中获得这些菌株[47]。因此，如何区分环境菌和人体致病菌以及其是否具有致病性，对应用于农业上的Bcc菌株进行风险评估是必要的，也将是今后的研究难点和热点之一。目前，对细菌的鉴定一般都先选择合适的选择性培养基培养分离出的样本，然后利用生理生化手段检测分离到的菌株，接着利用SDS-PAGE技术，全细胞蛋白电泳，16S rDNA序列分析手段鉴定出分离所得样本的属，最后配合RFLP探针技术或AFLP探针技术以确定菌株的基因型。现有的伯克霍尔德菌复合型由9个不同的基因型构成，各个基因型在形态上非常相近，这就需要非常便利的生物化学的鉴定手段和具有针对性的分子鉴定方法对各个基因型进行精确的区分[48]。利用16S rDNA测序、recA-RFLP分析、recA 基因特异引物PCR检测、DNA-DNA 同源性分析以及全细胞蛋白电泳（PAGE）方法可区分Bcc中的一些种，但还没有一种技术可以针对性的区分出每个基因型。因此，寻找一种简单可行可靠的鉴定技术是今后研究的热点之一[49]。Bcc致病毒力因子包括脂肪酶、蛋白酶、溶血素、脂多糖、过氧化氢酶、内毒素等，以紫花苜蓿作为植物模型研究Bcc的毒力，发现9个基因型中除了B.multivorans 和B.stabilis外，其余都可以从发病的紫花苜蓿上分离获得[50]。但植物与人类病原菌存在着差异，如革兰氏阴性人体条件致病菌绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）和植物病原菌丁香假单胞菌（P.syringae）均存在Ⅲ型蛋白分泌系统，但后者对人和动物不致病，表明致病因子存在并不能充分说明其能致病。为了确定细菌致病性毒力的决定因子，Chung J W等人利用蛋白质组学描述来比较两种B.cenocepacia在老鼠肺上的存在状态，发现临床分离所得的C1394 很快被致死，C1394mp2依然存活。利用Two-dimensional（2D）凝胶电泳发现从易感病寄主上得到的C1394mp2，缺少烷基氢过氧化物还原酶亚基C（AhpC）蛋白位点，反之增加了鞭毛蛋白，这使C1394mp2增强了在高温和低pH值条件下的氧化应激能力。这揭示了B.cenocepacia致病毒力在易感模型上出现不同的表现与应激能力的内在原因[51]。对于使用易感动物作为模型进行研究是一个进步，但是对于动物模型的选择、如何利用等都受到时间、道德等原因的制约，寻找合适的动物模型仍是今后需要解决的问题之一。洋葱伯克霍尔德菌对于人本身来讲，是一种可怕的致病菌，不但污染医院的药品和器具，而且引起可怕的“洋葱伯克霍尔德菌综合征”。对于整个人类来讲，有好也有坏。它是自然界中一些植物的病原菌又是一种重要的生防、环保以及工业用菌，减少了对环境的危害，不少国家把它作为生物农药和环保制剂使用。如何区分哪些是人体致病菌、哪些是植物致病菌、哪些是生防或环保菌，成了一个令人困扰的问题。这有赖于对其生态多样性、致病机制以及分类学的全面了解。只有确定Bcc生防或降解菌株对人体不致病，或者该菌株为单独一个种而不是人体致病菌一员时，才能将其安全的应用于农业生产上，使其为人类造福。现在已经有许多研究者从不同的方面入手来进行研究，但仍有未涉及或很少涉及的领域，如该菌在自然界的分布及多样性研究，其基因型的详细鉴定及针对性的鉴定方法，这些都是需要注意的问题。因此，在今后的研究中，要广泛地参考结合各学科领域的研究进展，充分地认识了解该菌的生物学特性及在不同方面的风险性测试评价，以期更好地使其为人类服务。

家教，即为家庭教育。随着各学校严禁办各种名义的补习班的禁令越来越严格地执行，家教在北京的市场越来越大，目前大约有85%的学生家长有过请家教的经历。但目前家教市场却比较乱（家教市场上涉足家教服务的机构非常多，但真正合法经营家教，持有工商行政部门注册颁发的含有家教经营范围的营业执照和教育部门批准的家教机构，数量极少。绝大部分的家教服务机构既未经过教育行政部门批准，也没有经过工商行政部门注册，根本就是不具备经营家教资格），各家教公司更是良莠不齐；但归纳起来，这些公司都有两个共同点和一个不同点。共同点是：这些公司都提供关于教育方面的多为免费的心里咨询服务。这些公司大都通过大量的，以报纸、网站竞价排名、短信群发等形式的广告来获取生源，通过与各学校合作来获取生源的公司比较稀少。不同点是他们的经营模式不同，即以教案为主导的模式和以教师为主导的模式。家教公司通过对某个学科的研究，组织优势教师资源对该学科进行教案编写；然后招聘大学生，并针对所编写的教案进行培训；由经培训并考核合格的大学生充当家教教员。该种模式下，家教公司掌握着家教的核心资源；受教师的制约较小，在整个家教链中处于主导地位；是用大学生作为家教，家教教员成本较低（目前北京市场，大学生家教教员的价格为25～35元/小时）；给学生提供的家教，实际为培训教员的家教公司提供，服务标准比较统一，便于管理；公司最后的核心竞争力为教案，即使是公司最后不做家教业务，还可以在教案上做文章，充分利用其剩余价值。教案的编写需要有优势的教育资源，并且要符合家教的这种教学模式，难度较大，前期投入也比较大，收益较慢。教案编写后要通过实践逐步修改完善，参加教案编写的老师必须投入到家教的实际工作中去，实现起来较为困难，容易使整个教案的编写在完善前前功尽弃。家教公司负责组织家教生源、家教教员，提供家教教室；靠家长给的家教教员的薪水的差价来获取利润。在该种模式下，不同规模的公司，其经营思路又有很大的不同。较大规模的公司经营模式主要以合同家教的形式进行经营。学生经过测试后，通过签约（如：保证在一个学期内，某门课程提高30分）进入家教公司进行学习。学生签约后，需一次性付清家教费用，若经过学习后没有达到签约目标，则之前所缴纳的费用按照一定比例或全额退还。这样，在学期开始前等请家教较为密集的时期，家教公司便能获得大量的现金流，他们可以利用所得到现金流进行其他业务的经营与投资。在该种方式下，家教公司通过两个方面来控制其成本：一方面，家教公司采取的是全封闭式的家教教学模式，学生家长不能和家教教员见面，不能现场监督家教的过程，因此家教公司可以请较差的一线教师，甚至大学生来充当教员，进而降低了教员的薪水标准。另一方面，家教公司给教员实行阶梯制工资，代课累积时间越长，单位时间内给的报酬越高，以此来绑定教员；同时又给每个教员安排较少的课程，来降低代课累积时间，进而降低教员的薪水档次。由于家教公司有大量的现金流，他可以在广告上进行大量的投入，进而满足其生源；因此对该类公司，他们最大的问题不是生源问题，而是如何有效提高学生成绩的问题。该种经营思路，一旦家教公司的教育质量大幅下滑，其资金链便会出现问题，整个公司的经营便会遇到问题。除去大型公司之外，目前北京市场的中小规模的家教公司数量众多，都正处于创立自己的品牌时期，因此面临着大型公司不存在的两个问题。第一个问题是没有大量的资金投入到广告中去，生源问题比较突出。因为每来一个学生，他们都想尽办法提高其成绩，以使他们更为长期地在该公司学习，这就要求他们要聘用较好的教员。为吸引到较好的教员，他们不得不把家长所给的家教费用中更多的部分给教员。为了保证质量，聘用的教员多为一线教师（100～500元/小时），这就降低了他们的利润，提高了他们的经营成本。因此，一方面利润较低，促使没有更多的费用投入来增加生源；另一方面，为维护好已有生源，他们又不敢降低经营成本，提高利润。这样他们就陷入到了一个恶性循环中。第二问题，要想跳出这个恶性循环，要开源节流，开源对于他们可行性太小，那么只能节流，即要降低获得生源的费用。为达到这一目的，他们目前大多通过与一家网站合作方式作为其获得家教生源的主要渠道之一。通过该种形式的合作，家教公司能够有效增加其宣传的针对性和所付宣传费用的使用效率，能够有效降低获得生源的费用，达到节流的目的。该种渠道的劣势是不能够确保打咨询电话的人都是来咨询家教的，也不能避免同一个号码重复拨打该电话的可能性。此外，还有中介公司的经营模式，这里不再赘述。与以教案为主导的模式相比，只需提供家教教室，教学内容由教员决定，操作简单；都有广告的投入，但节省教案制作的投入，因此投入较低；没有家教培训的环节，因此收益较快。家教公司的主动权掌握在家教教员的手中，对教员的约束性较低，没有核心竞争优势；提供的服务标准不统一，不利于公司长远发展；若公司不再经营该项业务，没有剩余价值可利用。以教案为主导模式的经营成本构成情况：教案的制作完善费用、教员的培训费用、协调排课的人员及延伸费用。以教师为主导模式的经营成本构成情况：家教教室的建设费用、家教教室的租金及使用费用、协调排课的人员及其延伸费用。经营成本对比：由于以教案为主导的模式，其教员为大学生，大学生可以到学生家里提供家教服务，因此省了家教教室的相关费用；但是以教师为主导的模式，其教员多为一线教师，由于一线教师不愿意到学生家里提供家教（因为为人师表，教师们到学生家里提供家教，感觉就像学生家里请的保姆一样，得不到尊重），又不愿让学生到自己家里来上课（因为学校严禁教师在外做家教，教师也不愿意学生知道自己所在的学校，和自己的住所），所以增加了家教教室的相关费用。两种模式的三项经营成本，最后一项相同，前两项基本上差不多，因此两种模式的经营总成本基本上相同。以教案为主导的模式收益模拟：每小时收家长费用100元（是一线教师的最低价），给大学生每小时50元（是大学生的最高价，目前市场上还没有这么高的价格，学生将会非常愿意干），每小时差价50元。公司若不再经营家教业务，可以将教案出版发行，获取出版发行收益。以教师为主导的模式收益模拟：每小时收家长费用150元（一线教师的平均价），给教师每小时130元（教师勉强能够接受），每小时差价20元。没有其他附加收益。收益比较：以教案为主导的模式收益明显高于以教师为主导的模式。附：相关说明1.国务院1997年发布的《社会力量办学条例》第十五条规定：“举办实施学历教育和文化补习、学前教育、自学考试助学的教育机构，由县级以上人民政府教育行政部门按照国家规定的审批权限审批”。一般“未经教育、劳动等有关行政管理部门批准，一律不予批准“家教”经营范围，已核准但又不能出具教育行政部门、管理部门同意证明的，一律限期取消该经营范围。”2.目前，工商部门只能给予“教育信息咨询服务”的经营范围，而且注明是“非中介”，该经营范围并不包括“家教”服务，如果要进行家教，还需要教育、劳动部门前置许可。教育信息咨询服务也只局限于单向收费，若进行双向收费，则成为中介服务，到学生家里授课又成为事实上的家教，属于超越经营范围，会受到工商部门的查处。3.目前教委在加大力度为学生减负，规定学校不能利用假期组织办班补课。如果是要申办营利性的教育机构，则需要前往工商部门进行注册登记。但对于设立“家教中介机构”来说，目前还没有相应的法律法规可以参照，教委的态度一般是不支持。

我国城市交通技术政策规定：以公共交通为主，在大城市建立轨道交通为骨干的综合运输体系。城市轨道交通管理系统是一个包括多学科、跨专业的系统工程。在管理方面表现为自动化、信息化，并体现出“与时俱进、以人为本”的理念。信息技术在地铁运营中的应用，突破了人们习以为常的时空障碍，在更大范围内将企业与企业、企业与销售商、企业与政府管理机构以及消费者等都连结起来，构成了一个巨大的虚拟信息空间。信息技术的使用使得企业的基本思考方式和运营方式正在发生变化，这就要求企业管理者必须懂得信息技术如何与企业管理相结合，以及在信息社会中企业的基本特征。信息基础设施是企业信息化的基础。信息基础设施需要大量投资，也需要不断地更新和发展。信息基础设施包括6层技术平台：硬件层、网络层、系统软件层、数据管理层、平台开发层及应用系统层。计算机是信息系统重要的组成部分。微型计算机是最为普及、同时性能价格比提高最快的计算机。网络计算机的功能更为简化，成本低廉，这种机型主要用在局域网上，终端机的功能相对较弱，运行的是网络服务器上的软件，大多数信息处理及存储功能等也是在服务器中进行，从而降低了整体计算机系统的成本，也使得维护成本大大降低。在地铁运营业务中，根据不同业务用途，这两种计算机均适用。服务器泛指在客户机/服务器结构中提供资源的计算机，其作用是存放大量共享数据或公用程序，是构筑管理信息系统最重要的核心计算机设备。工作站型计算机的处理能力通常高于微机，具有多任务、多用户的功能，易于与外界的各种计算机网络互联，容易得到外部的数据，在存取远程计算机站点上的信息、图像等方面，表现出很好的性能，在网络中需要各个结点具有较强的处理功能时，使用工作站比较适合，工作站也可以作为服务器使用。在进行计算机选型时，需要从整体的角度来考虑系统的效益。一个企业的信息系统一般由若干台服务器作主机，用大量微机作为用户终端，所以应在企业整体的IT发展规划下考虑和选择具有合理性能/价格比的机型（表1）部件应考虑的主要事项处理器和主板处理器型号和主频率，是否具备并行处理功能，最大处理器数量内部存储器内存容量，可扩充的最大容量硬磁盘硬盘容量，硬盘数，数据接口类型显示器屏幕尺寸，分辨率，精细度，扫描方式扩张插槽数目，网络接口卡速率多媒体光驱速度，读写格式，声卡，图像解压方式移动计算是否具备移动计算功能安全功能防病毒设备，电源锁、指纹识别或其他安全防范措施售后服务免费维修的时间、部件、技术支持方面的承诺表1 微机选型的考察事项信息系统规划是信息系统实践中的主要问题，它之所以重要，首先在于现在信息系统的应用已越来越为企业战略服务，其次在于现在企业用于信息系统的投资越来越大。信息系统规划的范围，一要分析地铁公司业务发展及其对信息化的需求，分析公司的战略目标、经营方针、发展策略、及主要业务活动、模式、流程，分析地铁公司的组织架构、部门的目标、功能，借鉴以往经验及参照行业最佳方法，并结合本地需求，初步定义每个环节对信息化的需求及其用途、重要性、优先次序、对业务的价值等，形成对信息化需求的整体、高层的需求大纲。二要制定应用系统构架，根据地铁公司的整体业务需求，制定用以描述企业整体的应用系统如何配合业务的信息化需求，并用于对信息化建设的决定作为指导。三要制定技术架构，为配合整体信息技术策略和信息化建设方向，有需要制定技术架构从而订立一套选购及建立信息基础设施的守则及标准，以满足企业的业务需求及支持信息化建设。四要对目标应用系统架构中系统的主要模块、主要模块功能描述、主要的集成要求、主要的技术要求、主要的业务流程及其信息化需求、主要的信息数据需求进行逐一的简述。经过以上四个步骤后，确立信息化建设的短期、中期及长远目标，短期目标为完善信息化建设的整体规划，完成建设阶段所有需要的重点信息技术设备及系统，建立本地化的团队及信息技术部门组织架构，完成重要信息系统建设。中期目标为完成运营初期急切需要的信息技术设备及系统，包括完善办公自动化设备与功能、实施财务管理系统、实施维修管理系统、实施采购管理及库存管理系统、建设信息技术数据中心、信息技术服务台等，以有效支持地铁公司各项主要业务和管理工作。长期目标为继续优化已建立的信息技术系统及服务，探讨其他信息化建设（图1）。企业的信息系统开发涉及许多方面：企业通常决定如何与开发商合作，由谁来主导开发；开发过程可能涉及企业的组织结构和业务流程的变更，也涉及对企业员工的培训。在许多情况下，信息化还涉及企业的战略问题，必须由企业的高层领导作出相应的决策。企业建设信息系统时，应首先建立信息化组织结构（图2）。图1 信息系统规划战略图2 系统开发信息指导委员会的职责是推进企业的战略，审议企业信息化的发展战略，听取项目小组对信息化工作的报告，同时对信息化中的重大问题进行决策。工程项目组可以由开发商为主构成，或者由企业内技术人员与开发人员混合构成，负责整个系统的开发。系统管理组负责信息系统的运行和维护，信息资源的管理，对用户的使用提供技术支持。在这些小组中，如果牵涉到各个部门的业务活动，最好由各部门的代表参与。在委托外部开发商进行开发的情况下，企业项目组可能是以开发商为主构成的。从技术角度来说，项目开发应当是从提高开发商人员的工作效率以及合理调配资源为出发点，这时企业人员应当积极地参与到项目小组中，配合开发商的要求，提供有关的业务流程资料和信息需求，同时还必须注意工期进度和对质量等方面的要求。开发工程项目小组由项目经理、系统分析师、系统设计师、程序员等角色组成。项目经理是开发队伍中该项目的领导者，一般具有丰富的开发经验，同时又具有与用户决策人物对话的资格，在重要问题上能协调与用户的关系。项目经理负责信息化项目的计划和推进，协调开发中的各种工作的顺利进行。信息管理系统包括编制作业计划、供应链管理、库存管理、设备维护和可靠性、运营数据管理、人力资源管理、运营信息的发布、危害登记、办公自动化等，该系统的建成与投入使用，减少了人力、物力的投入数量，并保证信息及时传递、记录、保存。在编制作业计划时，登录预先建设好的运营维护系统，将作业类别、工时、人数、使用的工具等信息数据输入计算机，维护系统会根据预先设定好的路经，与供应链、库存、维护数据、成本控制中心接口通讯，制定出合乎成本效益的工作时间表，并以电邮方式向维护人员发出工作单，维护人员接到工单后，按其所发布的内容准备工作，库存部门准备物料，为维修部门提供备品备件的供应商及时向库存部门提供不足的货品。运营员工可在任意一台公用计算机上凭本人ID号码登录人力资源管理系统，查看本人各种信息，包括物品领用记录、培训时间及成绩、工作地点等，节省了时间和信息不畅的问题。安全质量专业人员可登录危害登记系统，输入、消除、查看设备的隐患情况，并及时地制定相应的措施。各部门通过办公自动化系统及时传送、接收各种表报，发布运营信息等。所有的应用信息系统模块以模块群的方式组成（图3），各部门根据需求，经授权后登录网络系统，存取所需信息，编辑制定自己的工作内容，及时了解与本部门相关的信息。图3 信息管理系统构成所有子系统搭载在地铁通信网络系统骨干网上，连接地铁所有车站，实现远程信息交换，运营效率大大提高。决策支持系统是为决策者提供数据、信息和分析工具的信息系统。根据决策者在组织中的地位和决策的性质，可以将各种决策活动分为战略性决策、管理性决策及作业性决策三种。战略性决策是指将对组织的整体活动产生较大影响的决策，例如企业购并。作业性决策是指对组织常规业务问题的决策，例如日常的会计业务处理、订单处理、维修车间中的派工等这类决策活动。管理性决策是处于二者之间，其中一部分属于作业性层面上，而大多数活动属于战略性决策层面上，例如企业中管理会计的预算问题。我们把管理决策系统定义为交互式的计算机系统，可以帮助决策者使用数据及模型来解决不太确定的问题。作为一种软件系统，其核心在于各个主要成分以及它们相互之间的关系（图4）。图4 决策系统的核心成分数据管理子系统的主要组成包括数据库、数据字典和数据库管理系统。数据库基于某种统一的数据模型式组织和存在问题的领域中的数据，数据字典对于数据的数据内容、记录形式、格式和约束条件等进行记录。数据库管理系统则提供各种数据管理功能。数据库中的数据通常可分为：事物数据，内部数据，外部数据和个人数据。事物数据记录企业日常发生的活动，内部数据大部分都是事物数据，而外部数据来源于企业外部的经营环境，对于企业的各层次的经营决策具有参考价值。个人数据是为特定的决策者收集和设用的数据，例如仅提供给财务总监的企业财务报表。模型管理子系统包括模型库、模型库管理系统与其他子系统的接口等。模型库中一般应包含在特定的领域中解决问题所需要的常用数学模型，这些数学模型决定了系统可提供的分析能力。模型库管理系统是该子系统的核心部分，所有的模型库中的模型都受模型库管理系统的控制。模型库管理系统也提供与用户会话的渠道，用户通过模型库管理系统可以方便地操作模型。高层主管经过过滤、处理、组织起来的信息，使他们能更为迅速、更为有效地得到一些“关键的”信息，诸如表明企业运作状态的关键绩效指标，与公司的关键成功因素相关的情报，有关重要的竞争对手的活动情况等。这些信息有助于高层主管及时发现企业当前问题所在，找到新的发展机会以及预测未来的发展趋势。

在美国白蛾发生区和监控区，根据美国白蛾不同虫态的发生特点，选择有针对性的监测预报场所。首先，在监测区范围内，靠近美国白蛾发生区周围城乡绿化带和人们日常活动场所的四旁树木。其次，与发生区有货物运输往来的车站、码头、机场、旅游点及货物存放集散地附近的树木。再次，村庄房前屋后，城区机关、单位院内的喜食树种。最后，沿公路、铁路及沿途村庄的树木。美国白蛾在北京及周边地区一年发生三代，越冬代成虫发生在4月上旬至5月下旬；第一代成虫发生在6月下旬至7月中旬；第二代成虫发生在8月中旬至9月上旬。卵调查时间为每代成虫进入羽化期后。幼虫调查时间：第一代幼虫为5月上旬至6月下旬，第二代幼虫为7月中旬至8月下旬，第三代幼虫为8月下旬至10月下旬。越冬、越夏蛹调查时间为各代成虫羽化前进行。美国白蛾的监测调查方法根据不同虫态宜选择相应的方法。在监测区，首先组织专业技术人员进行一次全面的踏查，对重点地区，在踏查的基础上，进行全面、细致的详查。以自然村、居民区、厂矿、机关、部队驻地为调查点，公路以道班、铁路以站段、街道以街区为调查单位。每调查单位要抽查10%～30%的树木，观察树上卵块及网幕。第一代卵块和幼虫网幕集中在树冠中下部外缘。第二、第三代卵块和幼虫网幕多集中在树冠中上部外缘。蛹调查主要在以上地点内及周围的墙缝、砖瓦堆、树皮缝和杂草枯枝落叶等处进行，调查时可选取一定面积进行挖蛹检查。对重点地区的喜食树种要逐株详查。对一般喜食树种可选一定面积的样地进行抽样检查。在监测区，可在美国白蛾成虫发生期用灯诱或性诱方法定期、定时进行动态监测。成虫监测是发生区和监测区常用的美国白蛾监测方法，通过对美国白蛾成虫的监测可了解发生数量，掌握发生动态，确定发生时期，为后期防治打好基础。美国白蛾成虫的监测一是利用美国白蛾有趋光性的特点使用测报灯测报。由于成虫羽化大多集中在18～20时，因此可以在第二天早晨分别记录前一天雌雄成虫羽化的数量（表1）。二是利用美国白蛾性诱剂诱捕美国白蛾雄成虫。人工合成的美国白蛾性信息素具有专一性强、灵敏度高、使用方便、有效期长等特点。美国白蛾性信息素诱捕器诱虫半径最远距离约为400m，100m范围内效果最好。诱捕器的设置高度对诱虫效果亦有很大影响，第一代以距地面2.0～2.5m为宜，第二、第三代以距地面3～4m诱虫效果最佳。成虫羽化期每天早晨检查诱捕雄蛾数量并记录。调查地点：调查时间每灯诱蛾量（头）小计雌雄每灯芯诱蛾量（头）调查人：调查日期：表1 美国白蛾成虫调查表美国白蛾喜欢生活在阳光充足且温暖的地方。雌虫通常将卵产在喜食树种树冠边缘的枝条端部或近端部叶片背面，而且卵块在树冠的西南方向分布较多。美国白蛾每粒卵的直径为0.4～0.5mm，每平方毫米大约有卵4粒。统计每块卵数量时用坐标纸描出每一卵块的轮廓计算出面积，将结果乘以4即可得到卵块的卵数量。卵的孵化期一般为8～10天，通过对卵的孵化情况的监测调查卵的孵化期及孵化率。在美国白蛾发生区首先选择美国白蛾喜食树种，如臭椿、桑树、榆树、法桐、糖槭、白蜡、核桃等。在调查过程中对重点地区的喜食树种要逐一调查。对一般喜食树种要选择一定面积样地进行抽查。美国白蛾幼虫一般可经历7个龄期，其中第一代幼虫经历约36天；第二代幼虫由于食物充足、温度适宜生长发育快可经历29天左右；第三代幼虫经历将近50天才能化蛹。幼虫调查的主要调查幼虫的龄期、有虫株率、虫口密度、发生面积。发生面积的统计以城镇（农村）居民区发现一个疫点（成虫、网幕）为10亩计算，10亩以内发生的疫点均包括在10亩内，不重复统计，10亩以外发生的仍按此方法统计；造林地发现的疫点按小班统计发生面积（表2）。调查单位：单位调查面积（亩）调查株数（株）有虫株数（株）有虫株率（%）平均虫口密度（头/株）发生面积（亩）小计轻中重调查人：调查日期：年月日表2 美国白蛾虫情调查表美国白蛾幼虫老熟后，陆续从树上向下转移寻觅隐蔽处化蛹。第一代蛹主要集中在寄主树干下老皮及树冠下的表皮内，或建筑物及篱笆缝隙中化蛹；第二、第三代幼虫到老龄之后，往往沿树干爬下，四处扩散化蛹。老熟幼虫成蛹期一般经过7～20天（越冬代除外），蛹期长短主要取决于温、湿度等外部条件。在美国白蛾发生区选择美国白蛾喜食树种附近的草垛、砖墙墙缝、砖垛缝隙内、石块下。调查越冬、越夏蛹的密度后可以统计出其成活率、寄生率、死亡率（表3）。调查地点调查总蛹数活蛹数（头）死蛹数（头）小计雌雄小计寄生其他死亡率（%）合计平均死亡率（%）：调查人：表3 美国白蛾蛹调查表美国白蛾虫情系统调查和预测预报，可按照原林业部印发的《美国白蛾预测预报办法》（厅护字[1997]71号）执行。

5S起源于日本，是指在生产现场中对人、机、料、法、环等生产要素进行有效的管理，这是最初日本企业独特的一种管理方法。第二次世界大战后，在丰田公司的倡导推行下，5S对于塑造企业的形象、降低成本、准时交货、安全生产、高度的标准化、创造令人心旷神怡的工作场所、现场改善等方面发挥了巨大作用，逐渐被世界各国的管理界所认识，同时也被各国所效仿、学习、引进、推广。随着世界经济的发展，5S已经成为工厂管理的一股新潮流。“5S”是指整理（Seiri）、整顿（Seiton）、清扫（Seiso）、清洁（Seiketsu）和素养（Soyoy），简称为“5S”。企业开展以整理、整顿、清扫、清洁和素养为内容的活动，称为“5S”活动。整理就是把要与不要的事、物分开，再将不需要的事、物加以处理，工作的重点在于坚决把现场不需要的东西清理掉。整理的目的是：改善和增加作业面积；现场无杂物，行道通畅，提高工作效率；减少磕碰的机会，保障安全，提高质量；消除管理上的混放、混料等差错事故；有利于减少库存量，节约资金。整顿就是把需要的事、物加以定量、定位。通过前一步整理后，对生产现场需要留下的物品进行科学合理的布置和摆放，以便用最快的速度取得所需之物。整顿活动的要点是：物品摆放要有固定的地点和区域，以便于寻找，消除因混放而造成的差错；物品摆放地点要科学合理。物品摆放目视化，标识要清晰，摆放不同物品的区域采用不同的色彩和标记加以区别。清扫就是把工作场所打扫干净，设备异常时马上修理，使之恢复正常。清扫活动的要点是：自己使用的物品，如设备、工具等，要自己清扫。对设备的清扫，着眼于对设备的维护保养。清扫也是为了改善。当清扫地面发现有飞屑和油水泄漏时，要查明原因，并采取措施加以改进。清洁就是整理、整顿、清扫之后要认真维护，使现场保持完美和最佳状态。清洁，就是对前三项活动的坚持与深入。清洁活动的要点是：车间环境不仅要整齐，而且要做到清洁卫生，提高工人劳动热情；工人不仅要做到仪表、仪容上的清洁，而且要做到精神上的“清洁”，待人要讲礼貌、要尊重别人；要使环境不受污染，进一步消除混浊的空气、粉尘、噪音和污染源。素养即素质，努力提高人员的素质，养成严格遵守规章制度的习惯和作风，这是“5S”活动的核心。推行5S的作用就是要提高企业形象；提高生产效率；提高库存周转率；减少故障，提高质量；加强安全，减少安全隐患；养成节约的习惯，降低生产成本；缩短生产周期，保证交期；改善企业精神面貌，形成良好企业文化。通过规范现场、现物，营造一目了然的工作环境，培养员工良好的工作习惯，其最终目的是提高每位员工的素质。整理的实施要领：自己的工作场所（范围）全面检查，包括看得到和看不到的；制定“要”和“不要”的判别基准；将不要物品清除出工作场所；对需要的物品调查使用频度，决定日常用量及放置位置；制定废弃物处理方法；每日由领导和大家自己检查。整顿的实施要领：前一步骤整理的工作要落实；流程布置，确定放置场所；规定放置方法、明确数量；划线定位；场所、物品标识。整顿的“3要素”：场所、方法、标识。物品的放置场所原则上要100%设定，物品的保管要定点、定容、定量，生产线附近只能放真正需要的物品；放置物品应易取、不超出所规定的范围、在放置方法上多下工夫；在标识方法上，放置场所和物品原则上一对一表示，现物的表示和放置场所的表示，某些表示方法全公司要统一。整顿的“3定”原则：定点（放在哪里合适）、定容（用什么容器、颜色）、定量（规定合适的数量）。清扫的实施要领：建立清扫责任区（室内、外），执行例行扫除，清理脏污，调查污染源，予以杜绝或隔离，把清扫基准作为规范。清洁的实施要领：保持前面3S工作，建立考评方法、奖惩制度，加强执行，主管经常带头巡查，以表重视。素养的实施要领：服装、仪容、识别证标准，共同遵守的有关规则、规定，遵守礼仪守则，训练新进人员强化5S教育、实践，各种精神提升活动（晨会、礼貌活动等）。步骤1：成立推行组织。建议由企业高层领导出任5S活动推行委员会主任职务，以视对此活动之支持，主要包括成立推行委员会或办公室，确定组织职能，委员的主要工作，编组及责任区划分。步骤2：拟定推行方针及目标。推动5S管理时，制定方针是导入的指导原则，要结合企业具体情况，要有号召力。方针一旦制定，要广为宣传。步骤3：拟定工作计划及实施方法。步骤4：教育。每个部门对全员进行教育，说明5S现场管理法的内容及目的、5S现场管理法的实施方法、5S现场管理法的评比方法及新进员工的5S现场管理法训练。步骤5：活动前的宣传造势。5S活动要全员重视、参与才能取得良好的效果。步骤6：实施。主要包括作业准备、“洗澡”运动（全体上下彻底大扫除）、地面划线及物品标识标准、“3定”、“3要素”展开、拍照、“5S日常确认表”的实施与实战。步骤7：检查。包括例行检查、问题点质疑与解答、各种活动及比赛（如征文活动等）。步骤8：评比及奖惩。依5S活动竞赛办法进行评比，公布成绩），实施奖惩。步骤9：总结与修正。各责任部门依缺点项目进行改善，不断提高。在5S活动中，适当地导入QC手法、IE手法是很有必要的，能使5S活动推行得更加顺利、更有成效。步骤10：纳入定期管理活动中。5S是现场管理的基础，是TPM（全员参与的生产性维护）的前提，是TQM（全面品质管理）的第一步，也是ISO9000有效推行的保证。5S现场管理法能够营造一种“人人积极参与，事事遵守标准”的良好氛围。有了这种氛围，推行ISO、TQM及TPM就更容易获得员工的支持和配合，有利于调动员工的积极性，形成强大的推动力。实施ISO、TQM、TPM等活动的效果是隐蔽的、长期性的，一时难以看到显著的效果，而5S活动的效果是立竿见影。如果在推行ISO、TQM、TPM等活动的过程中导入5S，可以通过在短期内获得显著效果来增强企业员工的信心。一般来说，5S水平的高低，代表着管理者对现场管理认识的高低，这又决定了现场管理水平的高低，而现场管理水平的高低，直接制约着ISO、TPM、TQM活动能否顺利、有效地推行。通过5S活动，从现场管理着手改进企业“体质”，则能起到事半功倍的效果。对于那些中小企业来说，一般是重经营而轻管理，在推行5S活动时，决策者不能光追求形式一定要追求效果，按照科学的办法和原则，下定决心稳步的进行，长期坚持下去的话一定会取得很好的效益。

品牌战略管理，已全面进入以资源、知识为基础的核心能力阶段。企业的耐久性已成为评价企业核心能力的主要指标之一，对于竞争性很强的企业来说这一点优为重要。而决定耐久性的主要因素是企业的品牌、商誉等无形资产，集中体现在企业提供给市场的产品质量、科技含量、服务质量的高低上，这就要求现代企业必须以狠抓质量为核心，打好品牌这一仗，才能在激烈的竞争中永立潮头。中国服装业经历30年改革历程，不仅在质和量上有了很大提高，也创造了国内很多品牌，这些都是走向国际化的很好基础，但与国际知名品牌相比，还有差距，还要在多方面努力提高，比如在准确的市场定位上，工艺精度规范上、企业文化品牌等。在企业发展过程中，积极实施品牌战略，并以此战略为中心，全面整合企业的市场发展战略，质量发展战略、科技发展战略、文化发展战略等，一方面因品牌是一个企业技术水平、经营管理水平、企业文化等综合实力的体现，在企业战略中具有纲领性的意义。通过实施品牌战略，可以对企业各种资源进行整合和开发，充分发掘企业的发展潜能，把品牌战略作为企业发展的中心战略是企业发展的形势需要。质量是产品的基石，是企业的生命，今天的质量，就是明天的市场。通过狠抓质量管理，促进市场开发，实现企业滚动发展。产品质理管理是确定质量的具体标准，并保证标准的实现。由于产品贯穿于设计、试制、成品投产、销售和售后服务的全过程，因此，技术、生产、供销、动力、设备等各部门要协同一致，共同抓好产品质量管理。为避免产生人力、物力、财力上不必要的浪费，提高正品率，减少返修率，提高产品技术含量和品牌质量，要把好从原材料进厂到成品出厂的各道质量关，（包括样板、裁剪、缝制、熨烫、检验、锁钉、包装、出厂等）明确责任，层层检验把关。从管结果变为管因素着手，把影响质量的因素找出来，按标准程序方法使生产经营活动的全过程处于受控制状态，教育全体员工树立“质量第一”的思想，把各项工作纳入“精益求精”的管理轨道，用企业文化统一员工的意志产生凝毅力、亲和力、凝固员工的智慧力量为企业做贡献！工序上的管理，应突出对员工树立“下一道工序是用户”的思想意识，这对于相互支持和相互理解是非常重要的，要一环扣一环互相牵制、各自做好自己工序，互相促进，共同来提高，从整体上来解决质量问题。此外，还应重视辅助质量管理，要求对面料、辅料、动力、燃料、工艺、水电、蒸气、设备等要保证质量运转正常，这些能否及时、准确、顺利配合，保障使流水作业连续不能间断，直接关系到产品的质量和产量。生产管理的过程，就是向市场和顾客提供服务的过程。企业在管理中，应全面树立“为企业服务，为顾客着想”的服务理念、尊重企业标准制度和市场运作规范，建立高素质的售后服务队伍和完善的售后服务制度，加大服务力度，定期访问顾客，设计生产更优更好的产品，以满足市场需求和顾客品味要求。首先，产品质量取决于工作质量，它是各部门、各环节工作质量的综合反应，质量管理既要抓产品质量，更要抓工作质量，用企业文化、企业精神培养员工积极思维，使优秀员工凝聚起来为企业贡献智慧才能。其次，人人做好服务，在企业内部要求员工，保证本工序的质量，还要想到下工序的质量，为下工序提供方便。同时下工序要向上工序反映质量上的意见并提出要求，帮助上工序找出问题和存在的原因。让消费者满意，首先让员工满意，为顾客细致周到做好各项服务工作。最后，应强化质量检验，实事求是，增强责任心，坚持原则，落实三检制，即操作工人自检、前后工序互检，专业人员专检，再辅以巡检人员。质量检验项目包括原辅材料入库前、库存原材料的保管状况、领用原辅材料、设备、成品检验、包装过程、出厂检验等，对各项认真仔细、按技术、工艺标准检验，收集各质量检验的有关资料进行加以整理、分析，采取对策及时处理发生问题，从而达到控制、预防工序的质量，使质量管理从事后把关发展到事先预防上来。一个优势企业品牌，必须有名牌产品、优势技术作支撑，必须不断通过产品技术创新来强化服装业的名牌产品、特色产品，积极推动实施品牌战略，进一步建立完善企业自有的技术创新体系，以高效技术和先进工艺为依托，增强企业的技术实力，创建有活力的品牌文化。品牌和信誉是企业的无形资产，是企业重要的战略资源，是企业成长的生命，在重视规模的同时，重视缩小与同行业一流企业的信誉差距，强化品牌意识、品牌精神内涵，品牌文化智慧和道德的力量。品牌发展到一定程度时，将是企业身份地位的象征。先进的企业文化，包括精神文化、制度文化、行为文化、形象文化，企业环境文化、产品文化、企业箴言等。它是企业长远发展的有力保障。企业文化和企业精神是以企业自身发展确定的价值观念和行为为准则，它能起到鼓舞士气，规范行为方式，促进目标实现。培养有才有德的优秀人才，人才是成就事业的关键，人才资源决定企业的竞争优势，对员工高素质的专业技能培训，使企业向高品质化发展，员工的知识技能是激发创新力和提高企业竞争力的前提，对人力资本的投资，可增强企业的凝聚力，把企业的发展战略、经营理念、管理模式、价值取向、文化氛围等带给每位员工，使员工在工作中体会自身价值和挑战乐趣，为企业提供新的思想、知识、信息、技能，凝聚成为一股强大的力量而勇往直前。企业实现品牌战略，必须把培养、引进优秀人才作为一项重点工作来抓。成功的企业必然有高素质的员工，高素质的员工来源于人才引进和现有人员的培训提高，要为企业经营战略的各个阶段提供各类优秀人才，而员工培训成为人力资源开发的主要途径，以人为本为员工搭建一个快乐成长的平台。合万人之私，以成一人之公，人是无形资产的来源，也是无形资产的载体。在多元化的社会当中，价值观是多元化的，每个人的价值观不同。要激发不同价值观的员工内在动机引发到统一行动的工作中去。管理者应在管理中将员工个人成长发展的需求和愿望融入企业目标并与个人目标达成共识，而使员工在实现企业发展目标的同时实现个人目标。必须有一支规模较大，素质过硬，结构合理的人才队伍作保证，从企业实际出发，加强优秀企业队伍的建设，以内部培训为主，适当引进急需的优秀人才，不断改善人才队伍的结构，为人才成长创造良好的环境，为实施品牌战略奠定坚实的人才保障。在一个企业里，如果每个员工都有一种“这是我们的公司”的意识，如果企业经营者把员工看作是同舟共济的“伙伴”，并以感恩心创造和谐，那么这个企业必定是一个成功的企业，是一个共同创造繁荣和幸福的企业。总之，企业只要坚持不懈地实施品牌战略，并以此战略为中心，继续实施“创新带动、质量立企、科教兴企”的战略，积极推行以人为本，人才强企的战略，用智本管理，更好地协调智力资源与物力资源的管理与开发创新，企业就一定能在激烈的市场竞争当中，高举品牌旗帜，不断创新管理，理性思考，创造出响亮的国际品牌。

营销学泰斗菲利浦·科特勒指出，文化因素（包括文化、亚文化和社会阶层）是影响购买决策的最基本的因素。尤其在当今市场竞争越来越激烈的环境下，文化营销作为一种强有力的营销方式正在被越来越多的企业所运用，文化对消费者的渗透力、对消费者购买心理潜移默化的影响力，在营销过程中显示出惊人的力量，使越来越多的企业正在通过文化营销的方式进行品牌传播、美誉度树立、产品营销，最终达到对消费者的文化影响，促使其在文化的认同与信奉中潜移默化地接受企业或产品的营销攻势，从而毫无抗拒地接受商品。文化营销作为一种新的营销观念是以满足消费者需求的产品同质化为前提，以文化分析为基础，以满足消费者的文化需求为目的，为实现组织的目标而营造、实施、保持的文化渗透过程。文化营销从战略意义上讲是企业为满足差异文化下产生的消费者差异需求而制定的实施强有力文化渗透的战略性营销。文化营销观倡导企业以实现社会价值为组织目标，以此来保持持续的企业源于文化需求的核心竞争力，使之与企业文化的核心价值相一致，并最终形成消费动力。随着社会经济发展水平的提高，满足消费者核心价值需求的产品趋于同质化，产品质的差异化消失，因此，产品除对消费者的功能需求满足外，产品要更加注重表达文化的吸引力，去充当消费者对文化需求的载体，突显出独特的文化价值。文化营销就是将满足消费者核心价值需求的产品作为一种影响文化的载体，满足消费者对文化的深层需求的营销过程。在营销中既要适应已经被广泛认同的目标顾客的意识形态，更要善于发现并利用文化的力量影响和激发深埋于目标顾客内心深处的意识形态，文化营销的核心就是要发现并建立一种品牌与消费者在某一意识形态上能和谐共鸣的契合点，正所谓“高山云雾长，流水叹知音”，通过成功的传播手段，最终给消费者的感受：企业了解我，品牌代表我，产品属于我。文化营销必须根植于品牌和企业文化，是借文化传递和提升品牌的内涵与价值的一种手段，其最高境界就是“随风潜入夜，润物细无声”。寻求差别优势和核心竞争能力是企业竞争中最基本策略选择，然而随着市场竞争的加剧以及企业竞争行为的理性化和消费者的日益成熟，企业之间的差异也越来越小，企业以前具有的战略优势，如自然资源、资金、技术、规模等，由于相互间的差距缩小而不再成为优势；企业在产品、价格、渠道及促销等营销层面上的竞争，也由于信息的畅通和市场机制的完善，而迅速的被模仿和借鉴，唯有根植于品牌的独特文化却无法复制，这便使我们找到了一把能够在激烈的市场竞争中杀出重围、重塑品牌价值的利剑。文化营销的本质目的在于营建企业新型文化价值链，以文化亲和力将各种利益关系群体紧密维系在一起，发挥协同效应，以增强企业整体竞争优势。文化营销是适应消费需求变化，塑造企业竞争优势，弥合文化差异的重要手段。市场营销的核心是以需求为导向，从消费者的需求出发，确定企业生产与销售。随着物质产品的极大丰富，同质产品的无限增多，消费者在多样化选择中认同的不再是产品的使用价值，而是更注重产品独特的文化价值，如产品角色的认同，社会识别等文化需求。营销过程在实物上表现为产品传递以满足需要的过程，而在内层方面，则是一种文化价值的传递和达到满意的过程。现代市场营销是物化营销和文化营销的结合，营销离不开文化。从这一角度来看，文化营销是有意识的发现、甄别、培养或创造某种价值观，激发产品的文化属性，构筑亲和力，把企业营销缔造成为文化沟通，通过与消费者及社会文化的价值共振，将各种利益关系群体紧密维系在一起，从而实现企业经营目标的营销活动。塑造差别优势是企业竞争中最基本的策略选择，在随着企业在技术上差异性的缩小、营销手段趋于雷同的情况下，企业占领市场只有依靠自身品牌所包含的文化差异，通过文化营销来实现。高品位高层次的企业文化，正成为企业生存立足和赢得市场的根本。文化营销以文化之“窗口”扬企业之美名，树企业之形象，使企业文化的价值远远高于其产品自身的价值。中国有句古话：“入境而问禁，入国而问俗，入门而问讳”，恰如其分地表达了进行市场营销前了解文化差异的重要性。地域、民族、宗教、行业等不同都会造成文化差异，对同一商品属性重要程度的评价也由于文化价值观念的差异而不一致。所以，现代企业在营销中必须重视社会文化因素，借助于文化营销，才能适应不同特色的环境，形成自身的独特优势。文化营销的作用在于感情的拉近，即把消费者与产品或企业传达的感受结合起来。比如可以通过组织小规模的经验分享交流会、介绍会，使现代社会人们所感兴趣的关注点被挖掘出来，交流会上大家互通有无，将好思路好方法拿出来与大家分享，营造一种就像大家庭一样的互助互利氛围，在大家的经验中吸取营养，得到快乐，为我所用，从而自然而然的在这种融洽的氛围中传递出对高品质生活的追求，这也正是产品所要表达的价值观念，让你在不经意间产生对产品的认同，接受了产品。第一，企业在制订营销战略目标时，应建立文化子目标，子目标包含扩大企业文化影响力或企业品牌文化的顾客感召力等。在企业细分市场时把文化变量作为一个重要的因素来考虑。第二，在每个有可能与客户接触的链接点上发挥文化营销影响力，将文化的力量渗透进营销全过程。从产品定位、市场细分、产品包装与外观设计、展示与展览、促销策划、服务、CI、VI战略到CS战略、品牌战略、公共关系等方面都注入文化因素，发挥文化影响力。第三，通过积极策划、参与各种具有文化内涵的活动，来聚集目标顾客，传递品牌的内涵与价值。第四，开展文化营销的前提是对文化的深刻领悟和对目标客户群内心世界的精确把握。避免因策划者对文化的领悟不够深入而导致的“肤浅文化”、“另类文化”等，要通过有计划地开展文化营销，既提升品牌的价值，又重新塑造品牌形象，还可以聚焦目标客户。文化环境是企业进行文化营销的前提。从文化营销的角度看，文化环境是文化对消费者欲望与行为所产生影响的具体表现。文化在不同的国家与地区具有不同的特征，并会随着时间的变化而发展。因此，对文化环境的研究要从静态与动态两方面开始，既了解目前的文化需求态势，也应该追踪其发展趋势。文化的变迁标志着人们需求的改变，必将影响企业的营销决策，并会带来新的营销机会。企业必须善于审时度势，提高应变能力，跟上流行趋势顺应文化环境的变化，才能抓住营销机会。美国管理学家戴维·A·利克斯曾说过：“大凡跨文化营销的失败，几乎都是仅仅因为忽略了文化差异基本的或微妙的理解和体会所招致的结果。”不管是国际营销还是国内营销，都要与不同民族、不同文化背景的人打交道，所以必须承认和重视文化差异的影响，通过文化营销，实现跨文化参与及融合，积极影响并引导消费需求，消除偏见，减少盲目性，与顾客、中间商和公众共同构筑沟通的桥梁，确保企业营销沟通活动的顺利进行和营销战略目标的实现。首先，企业异地营销必须重视对当地文化的研究，力求“文化适应”。通过“文化营销”创新，达到相互间的沟通和互融，消除文化障碍，实现消费认同与市场开拓。其次，企业要针对目标市场实施创新型的文化互动。这就要求在进行文化营销时不仅是被动地适应当地文化，而且主动地采用各种文化营销手段，向市场传递企业的经营思想与理念，介绍、传播新的产品与概念，示范、推广新的行为方式，从而迅速有效地将一个社会的文化特征移植到另外一个社会中去，创造新的市场。文化营销是企业对消费者文化需求的反映，其核心在于寻求为顾客所接受的价值信条作为立业之本，从而促进顾客对整个企业包括其产品的认同。因此，企业营销的不仅仅是自己的产品与服务，而且是一种观念，一种消费者需要的为企业所独有的价值理念。只有深刻地领会消费者的文化需求并实施于企业的营销及整个管理活动，才可能获得成功，这就要求企业以消费者文化为前提，构建企业文化，确保文化营销与市场变化相适应。文化营销的核心是消费者利益。文化营销的受体是消费者，最大受益者是消费者，它改变了信息传播、销售渠道、服务的方式，将营销费用降到最低。企业对营销进行引导和管理，为企业赢得更多的资源投入产品核心部分，消费者能够得到更完美的核心部分价值利益。文化营销的实施不是企业直接完成，企业提供的只是产品和企业文化，营销行为由经销商或消费者自己完成，这个过程中消费者既是产品的消费者又是产品的经营者，完成信息传播和销售服务的过程，直接参与企业产生的利润分配。因此，消费文化是“因”，企业文化是“果”，文化营销是“桥梁”，只有在消费者文化的前提下建设企业文化并强化营销，才是文化营销建树和推广的必由之路，反过来文化营销又起到统领与传播企业文化的作用，这样才使企业与内外部环境相互调适，表现出强有力的市场竞争力。消费者是企业赖以生存和发展的养分和基石。企业经营活动的核心是顾客，企业经营能否成功，关键在于企业是否赢得顾客的信任。从企业的角度而言，文化营销是企业向目标市场传递企业形象、企业文化、产品信息并与目标消费者群体建立稳固关系的载体。它通过产品设计、制造、定价、递送、服务、宣传等将自身的文化信息附加于品牌之上，形成品牌信息加以传递，事实上蕴涵着产品品质的担保及职责的承担。企业的诚信将成为文化营销成败的关键要素。可以预见的是，随着消费者对自身利益保护意识的提高，企业对经营发展的需要，国家物质文明与精神文明的不断发展，中国即将迎来一个崭新的文化营销时代。